Pendahuluan

Acquired Immune Deficiency Syndrome (AIDS) adalah

kumpulan gejala yang dihasilkan dari ketidakmampuan sistem
kekebalan tubuh manusia yang disebabkan oleh virus HIV
(Human Immonodeficiency Virus). Infeksi HIV dapat berlanjut ke
fase gejala yang ditandai dengan infeksi oportunistik dan
dapat menyebabkan kematian.
Agen penyebab AIDS, HIV, menargetkan tipe spesifik sel-T
yang menyebabkan Limfopenia dan mempengaruhi kekebalan
yang dimediasi sel-T. HIV merupakan anggota famili retrovirus
dengan 2 sub-famili : HIV-1 dan HIV-2. HIV-1 lebih ganas dan
menular daripada HIV-2. HIV-1 adalah penyebab infeksi HIV
secara global, sedangkan HIV-2 ditemukan terutama di
negara – negara Afrika Barat.
Lanjutan...

Karena reaksi silang serologis antara HIV-1 dan HIV-2

sangat bervariasi dan tergantung pada sampel yang diuji,
antigen untuk deteksi spesifik HIV-1 dan HIV-2 dimasukkan
dalam pengujian.

HIV ditularkan melalui kontak seksual dengan orang yang

telah terinfeksi, berbagi jarum dan jarum suntik dengan orang
yang terinfeksi serta transfusi darah yang terkontaminasi.
ELISA direkomendasikan untuk skrining darah manusia dan
plasma untuk keberadaan antibodi anti-HIV dan antigen HIV-1
p24.
Prinsip
Vironostika HIV Uni-Form II Ag / Ab adalah ELISA
berdasarkan prinsip "sandwich" satu langkah. Campuran antigen
HIV dan antibodi HIV digabungkan dengan horseradish
peroxidase (HRP) berfungsi sebagai konjugat dengan
tetramethylbenzidine (TMB) dan peroksida sebagai substrat.
Setelah menyelesaikan pengujian, pengembangan warna
menunjukkan adanya antibodi HIV atau antigen HIV, sementara
tidak ada atau perkembangan warna yang rendah menunjukkan
tidak adanya antibodi atau antigen HIV.
Secara khusus, sumur mikroelisa dilapisi dengan HIV-1 gp160
(2), HIV-1 ANT70 peptida (3,4), HIV-2 env pepide (asam amino
592-603) (5) dan anti-HIV-1 p24 . Setiap sumur mikroelisa
mengandung bola konjugat berlabel HRP dari campuran
antibodi/antigen HIV yang sama. Pengencer spesimen, yang
ditambahkan ke sumur pertama, akan melarutkan bola konjugat.
Kemudian sampel uji atau kontrol yang sesuai yang
mengandung antibodi atau antigen HIV diinkubasi dalam sumur
mikroelisa. Jika antibodi HIV-1 dan / atau HIV-2 ada dalam
sampel, terbentuk antigen fase padat / anti-HIV / enzim berlabel
antigen kompleks.
Jika antigen HIV-1 hadir dalam sampel, kompleks antibodi
berlabel antibodi padat / antigen HIV / enzim berlabel
terbentuk. Setelah prosedur pencucian dan inkubasi
dengan substrat TMB, warna berkembang yang berubah
menjadi kuning ketika reaksi dihentikan dengan asam
sulfat. Jika anti-HIV-1, anti-HIV-2, anti-HIV-1 kelompok O
dan / atau antigen HIV ada dalam sampel, warna yang kuat
muncul. Namun, ketika sampel bebas dari anti-HIV dan
antigen HIV, tidak ada warna atau bentuk warna rendah
dengan penambahan substrat.
Isi Kit
Komponen

Plat strip mikroelisa 12 strip per plat, masing-masing

dengan 8 sumur dilapisi dengan campuran HIV-1 gp160,
HIV-1 ANT70, HIV-2 env (aa 592-603) dan anti-HIV-1 p24.
Setiap sumur berisi bola berbentuk mutiara, mengandung
HIV-1 gp160 berlabel HRP yang diliofilisasi, HIV-1 ANT70
dan HIV-2 env (aa 592-603) konjugat dan anti-HIV 1 p24
(murine monoclonal).
Persiapkan untuk digunakan seperti yang dijelaskan di
bagian 8.
Catatan : Strip dapat dipatahkan di tengah untuk digunakan
sebagai 4-well-strip. Label foil berisi 4 label identifikasi plat
strip dalam format kode batang. Label baru harus
ditempelkan pada penahan strip untuk setiap uji coba
terpisah.

Konsentrat penyangga fosfat Encerkan 25 kali lipat dalam

air suling atau deionisasi seperti yang dijelaskan dalam
bagian 8. Isi: 100 ml.
Lanjutan...

Solusi TMB Tetramethylbenzidine dalam asam

sitrat Pengawet: 1 g / l 2-kloroasetamid.
Gabungkan dengan larutan urea peroksida seperti
dijelaskan di bagian 8. Isi: 11 ml.

Larutan urea peroksida Pengawet: 1 g / l 2-kloroasetamid. Gabungkan dengan

larutan TMB seperti yang dijelaskan dalam bagian 8. Isi: 11 ml
Hasil

 Perhitungan Manual
Perhitungan dilakukan secara terpisah untuk setiap
strip holder.
NC = Abs. kontrol negatif
PC1 = Abs. kontrol positif anti-HIV-1
PC2 = Abs. kontrol positif anti-HIV-2
PC3 = Abs. kontrol positif antigen HIV-1


Contoh perhitungan
NC = 0,089; 0,096;0,088 NCx = 0,091 PC1 = 1,549
PC2 = 1,523
PC3 = 1,398
Hilangkan segala kontrol yang menyimpang:
NC ≥ 0,250 Tidak ada yang
dihilangkan
NC > 1,4 NCx 1,4 (0,091) = 0,127 Tidak ada yang
dihilangkan
NC < 0,6 NCx 0,6 (0,091) = 0,055 Tidak ada yang
dihilangkan
Pastikan yang berikut ini dalam kriteria penerimaan yang
ditentukan :
PC1 – NCx ≥ 0,600 1,549 – 0,091 = 1,458 Lulus
PC2 – NCx ≥ 0,600 1,523 – 0,091 = 1,432 Lulus
PC3 – NCx ≥ 0,400 1,398 – 0,091 = 1,307 Lulus
Hitung nilai cut – off :
Cut-Off = NCx + 0,100 = 0,091 + 0,100 = 0,191
Interpretasi Hasil
 Hasil yang tidak reaktif menunjukkan bahwa
sampel yang diuji tidak mengandung antigen anti-
HIV-1, anti-HIV-2, anti-HIV-1 kelompok O atau
HIV-1 atau sampel yang diuji mengandung satu
atau lebih dari ini tetapi di bawah deteksi batas uji
Vironostika HIV Uni-Form II Ag / Ab.
 Hasil reaktif menunjukkan bahwa sampel yang
diuji mengandung antigen anti-HIV-1, anti-HIV-2,
anti-HIV-1 kelompok O dan / atau HIV-1 atau yang
mengandung faktor reaksi yang tidak spesifik.
Lanjutan...
 Spesimen yang menunjukkan hasil awalnya
reaktif harus diuji ulang dalam rangkap dua
(pengujian duplo). Spesimen yang reaktif
dalam tes pertama dan tes ulang kedua harus
dianggap reaktif untuk anti-HIV-1, anti-HIV-2,
anti-HIV-1 kelompok O dan / atau antigen HIV-
1 karena semua sistem immunoassay yang
sangat sensitif memiliki potensi untuk reaksi
spesifik, hasil spesimen yang reaktif berulang
kali harus diverifikasi menggunakan metode
pengujian yang sesuai /pengujian konfirmasi
yang tepat.
Lanjutan...

 Spesimen yang awalnya reaktif tetapi pada pengujian

yang kedua tidak reaktif, hasil akhir pengujian harus
dianggap tidak reaktif. Hasil reaktif yang tidak berulang
dapat disebabkan oleh satu atau lebih masalah teknis
berikut:
1. Carry-over dari sampel yang sangat reaktif karena
kontaminasi peralatan atau tip pipet.
2. Kontaminasi substrat dengan ion logam
Lanjutan..

3. Kontaminasi silang dari tetesan air atau reagen.

4. Pencucian atau aspirasi yang tidak memadai selama
prosedur pencucian.
5. Kesalahan membaca; misalnya karena tetesan
cairan di bawah sumur atau gelembung udara di
dalam sumur.
TERIMA KASIH ^^