1 PENGANTAR

1.1 Tujuan Penggunaan

DRG Herpes Simplex Virus Type 1 lgG Enzyme Immunoassay Kit menyediakan bahan untuk
penentuan kualitatif dan semikuantitatif antibodi kelas lgG terhadap Herpes Simplex Virus Type 1
dalam serum.

Pengujian ini dimaksudkan hanya untuk penggunaan diagnostik in vitro.

1.2 Ringkasan dan Penjelasan

Herpes simpleks adalah virus DNA yang diselimuti (berdiameter 150-200 nm) milik
alphaherpesviridae. Berdasarkan perbedaan antigenik, biokimia dan biologis, virus ini dapat dibagi
menjadi dua serotipe, HSV-I dan HSV-2.

Manusia adalah satu-satunya inang alami dan sumber virus yang diketahui. HSV tipe 1 biasanya
menyebabkan herpes oral, sedangkan HSV tipe 2 biasanya mempengaruhi area genital. Sebagian
besar waktu, HSV-I dan HSV-2 tidak aktif, atau "diam", dan tidak menimbulkan gejala, tetapi
beberapa orang yang terinfeksi mengalami "wabah" lepuh dan bisul. Setelah terinfeksi HSV, orang
tetap terinfeksi seumur hidup.

Virus herpes simpleks adalah salah satu agen infeksi yang paling umum pada manusia, dan kedua
jenis HSV tampaknya mampu menginfeksi situs tubuh yang serupa. Persentase yang tinggi dari
populasi orang dewasa adalah seropositif (sekitar 90% HSV-I tergantung pada status sosial ekonomi,
10-30% HSV-2).

Infeksi HSV-I primer biasanya terjadi pada awal masa kanak-kanak (usia 6 sampai 18 bulan). HSV-2
biasanya menimbulkan gejala ringan, dan kebanyakan orang tidak memiliki gejala yang dikenali.

2 PRINSIP TES

Kit ELISA DRG Herpes Simplex Virus Type 1 lgG adalah uji imunosorben terkait enzim fase padat
(ELISA)

Sumur mikrotiter sebagai fase padat dilapisi dengan antigen Herpes Simplex Virus Type 1.

Spesimen pasien yang diencerkan dan kontrol siap pakai dipipet ke dalam sumur ini. Selama
inkubasi, antibodi spesifik Herpes Simplex Virus Tipe 1 dari spesimen positif dan kontrol terikat pada
antigen yang tidak bergerak.

Setelah langkah pencucian untuk menghilangkan sampel yang tidak terikat dan bahan kontrol
antibodi anti-manusia lgG terkonjugasi horseradish peroxidase disalurkan ke dalam sumur. Selama
inkubasi kedua, konjugat anti-lgG ini berikatan secara khusus dengan antibodi lgG yang
menghasilkan pembentukan kompleks imun terkait enzim. Setelah langkah pencucian kedua untuk
menghilangkan konjugat yang tidak terikat, kompleks imun yang terbentuk (dalam kasus hasil
positif) dideteksi dengan inkubasi dengan substrat TMB dan pengembangan warna biru. Warna biru
berubah menjadi kuning dengan menghentikan reaksi indikator enzimatik dengan asam sulfat.

Intensitas warna ini berbanding lurus dengan jumlah antibodi lgG spesifik Herpes Simplex Virus Type
1-spesifik dalam spesimen pasien. Absorbansi pada 450 nm dibaca menggunakan pembaca pelat
mikrotiter ELISA.
4 KOMPONEN KIT

4.1 Isi Kit

1. Microtiterwells, strip 12 x 8 (pisahkan), 96 sumur; Sumur dilapisi dengan antigen Herpes

Simplex Virus Type 1.

(termasuk 1 strip holder dan 1 foil penutup)

2. Sampel Pengencer 1 vial, 100 mL, siap pakai, berwarna kuning; pH 7,2 ± 0,2.

3. Pos. Kontrol *, 1 vial, 1,0 mL, siap digunakan; berwarna kuning, tutup merah.

4. Neg. Kontrol *, 1 vial, 2,0 mL, siap digunakan; berwarna kuning, tutup kuning.

5. Cut-off Control *, 1 vial, 2,0 mL, siap digunakan; berwarna kuning, tutup hitam.

6. Enzim Konjugat 1 vial, 20 ml-, siap digunakan, berwarna merah, antibodi terhadap lgG
manusia yang terkonjugasi dengan horseradish peroxidase.

7. Larutan Substrat, 1 vial, 14 mL, siap pakai, Tetramethylbenzidine (TMB).

8. Stop Solution, 1 vial, 14 mL, siap digunakan, mengandung 0,2 mol/L H2S04

Hindari kontak dengan larutan penghenti. Ini dapat menyebabkan iritasi kulit dan luka bakar.

9. Larutan Pencuci *, 1 vial, 30 ml- (20X pekat untuk 600 mL), pH 6,5 ± 0,1 lihat "Persiapan
Reagen".

mengandung pengawet non-merkuri

4.1.1 Bahan yang diperlukan tetapi tidak disediakan

- Pembaca terkalibrasi pelat mikrotiter (450/620nm ±IO nm)

(misalnya Pembaca Pelat Mikrotiter Instrumen DRG)

- Mikropipet presisi variabel yang dikalibrasi

- Inkubator 37 oc

- Peralatan manual atau otomatis untuk membilas sumur

- Mixer tabung vortex

- Air suling yang dideionisasi atau (baru) disuling

- Pengatur waktu

- Kertas penyerap

4.2 Kondisi Penyimpanan dan stabilitas Kit

Ketika disimpan pada suhu 2 oc hingga 8 oc reagen yang belum dibuka akan mempertahankan
reaktivitas hingga tanggal kedaluwarsa. Jangan gunakan reagen melebihi tanggal ini.
Reagen yang telah dibuka harus disimpan pada suhu 2 oC hingga 8 oC. Sumur mikrotiter harus
disimpan pada suhu 2 oC hingga 8 oC. Setelah kantong foil dibuka, harus berhati-hati untuk
menutupnya kembali dengan rapat. Kit yang dibuka mempertahankan aktivitas selama dua bulan
jika disimpan seperti dijelaskan di atas.

4.3 Persiapan Reagen

Biarkan reagen ali dan jumlah strip yang diperlukan mencapai suhu kamar sebelum digunakan.

Larutan Pencuci

Encerkan Larutan Pencuci 1 + 19 (misalnya 10 mL + 190 mL) dengan air redistilasi segar dan bebas
kuman. Larutan pencuci yang diencerkan ini memiliki nilai pH 7,2 ± 0,2.

Konsumsi: 5 ml- per penentuan.

Kristal dalam larutan hilang dengan pemanasan hingga 37 oc dalam penangas air. Pastikan bahwa
kristal benar-benar larut sebelum digunakan.

Larutan Pencuci yang diencerkan stabil selama 4 minggu pada suhu 2 oc hingga 8 oc

.4 Pembuangan Kit

Pembuangan kit harus dilakukan sesuai dengan peraturan nasional. Informasi khusus untuk produk
ini diberikan dalam Lembar Data Keselamatan Bahan (lihat bab 13 lembar data ini).

4.5 Kit Uji yang Rusak

Jika terjadi kerusakan parah pada kit uji atau komponen, DRG harus diinformasikan secara tertulis,
selambat-lambatnya satu minggu setelah menerima kit. Komponen tunggal yang rusak parah tidak
boleh digunakan untuk uji coba. Komponen-komponen tersebut harus disimpan sampai solusi akhir
ditemukan. Setelah itu, komponen-komponen ini harus dibuang sesuai dengan peraturan resmi.

5 SPESIMEN

Serum dapat digunakan dalam pengujian ini.

Jangan gunakan spesimen haemoiytic, icteric atau lipaemic.

Harap dicatat: Sampel yang mengandung natrium azida tidak boleh digunakan dalam pengujian.

5.1 Serum Pengumpulan Spesimen:

Kumpulkan darah dengan venipuncture (misalnya Sarstedt Monovette # 02.1388.001), biarkan

menggumpal, dan pisahkan serum dengan sentrifugasi pada suhu kamar. Jangan melakukan
sentrifugasi sebelum pembekuan total terjadi. Pasien yang menerima terapi antikoagulan mungkin
memerlukan peningkatan waktu pembekuan.

5.2 Penyimpanan Spesimen

Spesimen harus ditutup dan dapat disimpan hingga 24 jam pada suhu 2 oc hingga 8 oc sebelum
pengujian. Spesimen yang disimpan untuk waktu yang lebih lama harus dibekukan hanya sekali pada
-20 o c sebelum pengujian. Sampel yang dicairkan harus dibalik beberapa kali sebelum pengujian.

5.3 Pengenceran Spesimen

Sebelum pengujian, encerkan setiap spesimen pasien 1 + 100 dengan Pengencer Sampel, misalnya
10 gl- spesimen + 1 ml- Pengencer Sampel, aduk rata, diamkan selama 15 menit, aduk kembali
dengan lembut.

Harap dicatat: Kontrol sudah siap untuk digunakan dan tidak boleh diencerkan!

6 PROSEDUR PENGUJIAN

6.1 Keterangan Umum

- Sangat penting untuk membawa semua reagen, sampel, dan kontrol ke suhu kamar sebelum
memulai uji coba!

- Setelah pengujian dimulai, semua langkah harus diselesaikan tanpa gangguan.

- Gunakan ujung pipet plastik pembuangan baru untuk setiap standar, kontrol atau sampel untuk
menghindari kontaminasi silang

- Absorbansi adalah fungsi dari waktu inkubasi dan suhu. Sebelum memulai pengujian, disarankan
agar reagen ali siap, tutup dilepas, semua sumur yang dibutuhkan diamankan di dudukan, dll. Ini
akan memastikan waktu yang sama untuk setiap langkah pemipetan tanpa gangguan.

- Sebagai aturan umum reaksi enzimatik berbanding lurus dengan waktu dan suhu.

- Tutup botol reagen dengan rapat segera setelah digunakan untuk menghindari penguapan dan
kontaminasi mikroba.

- Untuk menghindari kontaminasi silang dan hasil yang salah, pipet sampel pasien dan keluarkan
konjugat tanpa percikan secara akurat ke dasar sumur.

- Selama inkubasi, tutup strip mikrotiter dengan foil untuk menghindari penguapan.

Jika - karena alasan teknis - pembaca ELISA tidak dapat disesuaikan dengan nol menggunakan
substrat kosong di sumur Al, kurangi nilai absorbansi ofuell Al dari semua nilai absorbansi lainnya
yang diukur untuk mendapatkan hasil yang dapat diandalkan!

Ukur absorbansi semua sumur pada 450 nm dan catat nilai absorbansi untuk setiap kontrol dan
sampel pasien dalam rencana distribusi dan identifikasi.

Disarankan untuk membaca panjang gelombang ganda menggunakan 620 nm sebagai panjang
gelombang referensi.

Jika berlaku hitung nilai absorbansi rata-rata dari semua duplikat.

7 HASIL

7.1 Validasi Uji Coba

Uji coba dapat dianggap valid asalkan kriteria berikut terpenuhi:

Substrat kosong di Al: Nilai absorbansi lebih rendah dari 0,100

Neg. Kontrol dalam Bl: Nilai absorbansi lebih rendah dari 0,200

Kontrol Cut-off di CllD1: Nilai absorbansi antara 0,350 - 0,850

Pos. Kontrol di El: Nilai absorbansi antara 0,650 - 3,000

Nilai absorbansi dari Pos. Kontrol harus lebih besar dari nilai absorbansi Kontrol Cut-off!

7.2 Perhitungan

Nilai absorbansi rata-rata dari Kontrol Cut-off [CO]

Hitung nilai absorbansi rata-rata dari dua (2) penentuan Kontrol Cut-off (misalnya dalam CI/DI).
Contoh: (0,44 + 0,46) : 2 = 0,45 = CO

7.3 Interpretasi

POSITIF

ZONA HIJAU

NEGATIF Nilai absorbansi pasien (rata-rata) lebih dari 10% di atas CO (Rata-rata OD pasien > 1,1 x
CO)

Pasien (rata-rata) nilai absorbansi dari 10% di atas hingga 10% di bawah CO tes ulang 2 - 4 minggu
kemudian - dengan sampel pasien baru (0,9 XCO Mean OD pasien 1,1 xC0)

Hasil pada tes kedua lagi di zona abu-abu NEGATIF

Nilai absorbansi pasien (rata-rata) lebih dari 10% di bawah CO (Rata-rata OD pasien < 0,9 x CO)

7.3.1 Hasil dalam Unit ORG [DU]

Nilai absorbansi pasien (rata-rata) x 10 = [Unit DRG = DU]

CO

Contoh: 1,580 x 10 = 35 DU

0.45

Interpretasi Hasil

Nilai batas:

Zona abu-abu:

Negatif:DU Positif: > 11 DU

8 KONTROL KUALITAS

Dianjurkan untuk menggunakan sampel kontrol sesuai dengan peraturan negara bagian dan federal.
Penggunaan sampel kontrol disarankan untuk memastikan validitas hasil dari hari ke hari. Gunakan
kontrol pada tingkat normal dan patologis.

Juga disarankan untuk menggunakan program Penilaian Kualitas nasional atau internasional untuk
memastikan keakuratan hasil.

Jika hasil pengujian tidak sesuai dengan rentang yang dapat diterima yang telah ditetapkan dari
bahan kontrol hasil pasien harus dianggap tidak valid.

Dalam hal ini, silakan periksa area teknis berikut: Perangkat pemipetan dan pengaturan waktu;
fotometer, tanggal kedaluwarsa reagen, kondisi penyimpanan dan inkubasi, metode aspirasi dan
pencucian.

Setelah memeriksa item yang disebutkan di atas tanpa menemukan kesalahan, hubungi distributor
Anda atau DRG secara langsung.

9 KARAKTERISTIK PENGUJIAN

9.1 Kekhususan Diagnostik

Kekhususan diagnostik didefinisikan sebagai probabilitas pengujian dengan skor negatif tanpa
adanya analit spesifik. Ini adalah 97%.

9.2 Sensitivitas Diagnostik

Sensitivitas diagnostik didefinisikan sebagai probabilitas pengujian skor positif dengan adanya analit
spesifik. Ini adalah 98%.

10 KETERBATASAN PENGGUNAAN

Kontaminasi bakteri atau siklus pembekuan-pencairan berulang dari spesimen dapat mempengaruhi
nilai absorbansi. Pada pasien immunocompromised dan bayi baru lahir, data serologis hanya
memiliki nilai terbatas.

10.1 Catatan penting untuk interpretasi hasil DRG Herpes Simplex Virus Tipe 1 lgG ELISA

Karena virus Herpes simpleks tipe 1 dan 2 adalah serotipe yang sangat mirip, mereka secara alami
menunjukkan tingkat reaktivitas silang yang tinggi. Oleh karena itu, infeksi dengan satu serotipe HSV
menyebabkan peningkatan titer antibodi dari serotipe heteroiogous lainnya.

Untuk alasan ini, hasil HSV-I lgG positif saja bukanlah deteksi pasti dari infeksi HSV-I!

Untuk menentukan serotipe yang sebelumnya telah terpapar pada pasien, spesimen pasien harus
dianalisis secara paralel dengan menggunakan testkit DRG HERPES SIMPLEX VIRUS TYPE 1 dan TYPE 2
lgG ELISA.

Konsentrasi antibodi yang lebih tinggi menunjukkan antibodi yang dominan dan menentukan
serotipe HSV yang sesuai.