alfa fetoprotein

(AFP) Perangkat Tes ELISA

(Nomor Katalog BC1009)

Panduan pengguna

P/N XXXX Rev. A 070108

MINUMAN 1 Juli 2008 15:35

AFP Title.fm
Panomik, Inc.

6519 Dumbarton Circle, Fremont CA 94555 1-877-726-6642

Panduan Pengguna Kit Uji Alpha Fetoprotein ELISA

hak cipta

© Hak Cipta 2008, Panomics, Inc. Semua hak dilindungi undang-undang.

Penolakan

Panomics, Inc. berhak untuk mengubah produk dan layanannya kapan saja untuk menggabungkan perkembangan teknologi. Manual ini dapat berubah tanpa
pemberitahuan.

Meskipun manual ini telah disiapkan dengan segala tindakan pencegahan untuk memastikan keakuratannya, Panomics, Inc. tidak bertanggung jawab atas kesalahan atau kelalaian apa pun, atau atas
kerusakan apa pun yang diakibatkan oleh penerapan atau penggunaan informasi ini.

MINUMAN 1 Juli 2008 15:35

AFP Title.fm
 Penggunaan yang dimaksudkan Untuk penentuan kuantitatif konsentrasi AFP Antigen Kanker pada manusia
serum.

pengantar Alpha-fetoprotein (AFP) adalah glikoprotein dengan berat molekul sekitar

70.000 dalton. AFP biasanya diproduksi selama perkembangan janin dan neonatus oleh hati,
yolksac, dan dalam konsentrasi kecil oleh saluran pencernaan. Setelah lahir, konsentrasi AFP
serum menurun dengan cepat, dan pada tahun kedua kehidupan dan setelahnya hanya
sejumlah kecil yang biasanya terdeteksi dalam serum.

Peningkatan AFP serum ke nilai abnormal tinggi terjadi pada beberapa penyakit ganas,
terutama kanker testis nonseminomatous dan karsinoma hepatoseluler primer. Dalam kasus
kanker testis nonseminomatous, hubungan langsung telah diamati antara kejadian
peningkatan kadar AFP dan stadium penyakit. Peningkatan kadar AFP juga telah diamati pada
pasien yang didiagnosis dengan seminoma dengan elemen nonseminoma, tetapi tidak pada
pasien dengan seminoma murni.

Selain itu, peningkatan konsentrasi AFP serum telah diukur pada pasien dengan penyakit non-
kanker lainnya, termasuk ataksia telangiectasia, tirosinemia herediter, hiperbilirubinemia
neonatal, hepatitis virus akut, hepatitis aktif kronis, dan sirosis. Peningkatan konsentrasi AFP
serum juga diamati pada wanita hamil. Oleh karena itu, pengukuran AFP tidak
direkomendasikan untuk digunakan sebagai prosedur skrining untuk mendeteksi adanya
kanker pada populasi umum.

Prinsip dari Tes AFP ELISA didasarkan pada prinsip fase padat terkait-enzim
Uji pemeriksaan imunosorben. Sistem pengujian menggunakan antibodi anti-AFP kambing yang diarahkan
terhadap AFP utuh untuk imobilisasi fase padat (pada sumur mikrotiter). SEBUAH
antibodi anti-AFP monoklonal terkonjugasi ke horseradish peroxidase (HRP) ada dalam
larutan konjugat antibodi-enzim. Sampel uji dibiarkan bereaksi terlebih dahulu dengan
antibodi kelinci amobil selama 30 menit. Sumur dicuci untuk menghilangkan antigen yang
tidak terikat. Konjugat monoklonal-HRP kemudian direaksikan dengan antigen amobil selama
30 menit pada suhu kamar yang mengakibatkan molekul AFP terjepit di antara fase padat dan
antibodi terkait-enzim. Sumur dicuci dengan air untuk menghilangkan antibodi berlabel yang
tidak terikat.

Larutan Reagen TMB ditambahkan dan diinkubasi selama 20 menit, menghasilkan warna
biru. Pengembangan warna dihentikan dengan penambahan Stop Solution yang mengubah
warna menjadi kuning. Konsentrasi AFP berbanding lurus dengan intensitas warna sampel
uji. Absorbansi diukur secara spektrofotometri pada 450 nm.

Kit ELISA Alfa Fetoprotein halaman 3

 Reagen Simpan pada 2-8 °C.

Bahan yang disediakan dengan kit:

♦ Pelat mikrotiter berlapis anti-AFP kambing dengan 96 sumur. Nol

♦ Penyangga, 13 ml.

♦ Set standar referensi, berisi 0, 5, 20, 50, 150, dan 300 ng/ml (WHO, 72/225) AFP,
diliofilisasi.
♦ Reagen Konjugasi Enzim, 18 ml.
♦ Reagen TMB (Satu Langkah), 11 ml.

♦ Stop Solution (1N HCl), 11 ml.

Bahan yang dibutuhkan ♦ Pipet dan tip presisi: 20 l, 100 l, 200 l,, dan 1 ml. Air suling, air
tetapi tidak disediakan: ♦ deionisasi.
♦ Ujung pipet sekali pakai.

♦ Pengaduk pusaran.

♦ Kertas penyerap atau handuk kertas.

♦ Pembaca pelat mikrotiter pada panjang gelombang 450 nm, dengan bandwidth 10 nm atau
kurang dan rentang kerapatan optik 0-2 OD atau lebih besar.

Contoh Serum harus disiapkan dari spesimen darah lengkap yang diperoleh dengan cara yang dapat diterima
Koleksi dan teknik medis. Kit ini untuk digunakan dengan sampel serum tanpa aditif saja
Persiapan

Penyimpanan dari Test Kit Alat uji yang belum dibuka harus disimpan pada suhu 2-8 °C setelah diterima dan pelat mikrotiter
dan harus disimpan dalam kantong tertutup dengan pengering untuk meminimalkan paparan udara lembab.
Peralatan Alat uji yang dibuka akan tetap stabil hingga tanggal kedaluwarsa yang ditunjukkan, asalkan:
disimpan seperti yang dijelaskan di atas. Pembaca pelat mikrotiter dengan bandwidth 10 nm atau
kurang dan rentang kerapatan optik 0-2 OD atau lebih besar pada panjang gelombang 450 nm dapat
diterima untuk digunakan dalam pengukuran absorbansi.

Prosedur Pengujian 1 Semua reagen harus dibawa ke suhu kamar (18-25 °C) sebelum digunakan.
2 Menyusun kembali setiap standar lyophilized dengan 1,0 ml air suling. Biarkan bahan yang
dilarutkan untuk berdiri setidaknya selama 20 menit dan aduk perlahan. Standar yang dilarutkan
akan stabil hingga 30 hari jika disimpan dalam keadaan tertutup rapat pada 2-8 °C

3 Amankan jumlah sumur berlapis yang diinginkan di dudukannya.

4 Buang 20 l standar, spesimen, dan kontrol ke dalam sumur yang sesuai. Tuangkan
5 100 l Zero Buffer ke setiap sumur.
6 Aduk rata selama 30 detik. Sangat penting untuk memiliki pencampuran yang lengkap dalam
pengaturan ini.

halaman 4 Kit ELISA Alfa Fetoprotein

 7 Inkubasi pada suhu kamar (18-25 °C) selama 30 menit.
8 Keluarkan campuran inkubasi dengan menjentikkan isi piring ke dalam wadah limbah.

9 Bilas dan kibaskan sumur mikrotiter 5 kali dengan air suling atau air deionisasi.
10 Pukul sumur dengan tajam ke kertas penyerap atau handuk kertas untuk menghilangkan
semua tetesan air yang tersisa.

11 Masukkan 150 l Enzyme Conjugate Reagent ke dalam masing-masing well. Aduk perlahan selama 10
detik.

12 Inkubasi pada suhu kamar selama 30 menit.

13 Keluarkan campuran inkubasi dengan menjentikkan isi piring ke dalam wadah limbah.
14 Bilas dan kibaskan sumur mikrotiter 5 kali dengan air suling atau air deionisasi.
(Jangan gunakan air keran)

15 Pukul sumur dengan tajam ke kertas penyerap untuk menghilangkan sisa tetesan air.
16 Tuangkan 100 l TMB Reagent ke dalam masing-masing well. Campuran lembut selama 10
17 detik. Inkubasi pada suhu kamar selama 20 menit.
18 Hentikan reaksi dengan menambahkan 100 l Stop Solution ke setiap sumur.
19 Aduk perlahan selama 30 detik. Penting untuk memastikan bahwa semua warna biru
berubah menjadi warna kuning sepenuhnya.

20 Baca kerapatan optik pada 450 nm dengan pembaca mikrotiter dalam waktu 15 menit.

Perhitungan Perhitungan Hasil

1 Hitung nilai absorbansi rata-rata (A450) untuk setiap set standar referensi,
kontrol, dan sampel.
2 Buat kurva standar dengan memplot absorbansi rata-rata yang diperoleh untuk setiap
standar referensi terhadap konsentrasinya dalam ng/mL melalui kuadrat yang paling
sesuai dengan absorbansi pada sumbu vertikal (y) dan konsentrasi pada sumbu
horizontal (x).

3 Dengan menggunakan nilai absorbansi rata-rata untuk setiap sampel,

tentukan konsentrasi AFP yang sesuai dalam ng/ml dari kurva standar.

Kit ELISA Alfa Fetoprotein halaman 5

 Contoh Hasil lari standar tipikal dengan pembacaan densitas optik pada 450 nm yang ditunjukkan pada
Kurva Standar Sumbu Y terhadap konsentrasi AFP ditunjukkan pada sumbu X. Kurva standar ini untuk
tujuan ilustrasi saja, dan tidak boleh digunakan untuk menghitung yang tidak diketahui. Setiap pengguna
harus mendapatkan data dan kurva standarnya sendiri.

AFP (ng/ml) Absorbansi (450 nm)

0 0,012
5 0,127
20 0,455
50 0,952
150 2.150
300 2.932

3.5
3
Absorbansi (450 nm)

2.5
2
1.5
1
0,5
0
0 100 200 300 400
Konsentrasi (ng/ml)

Nilai yang Diharapkan Pada pasien berisiko tinggi, nilai AFP antara 100 dan 350 ng/ml menunjukkan diagnosis
dan Sensitivitas karsinoma hepatoseluler, dan kadar di atas 350 ng/ml biasanya menunjukkan penyakit tersebut.
Sekitar 97% dari subyek sehat memiliki kadar AFP kurang dari 8,5 ng/ml. ini
merekomendasikan agar setiap laboratorium menetapkan kisaran normalnya sendiri.
Konsentrasi AFP minimum yang dapat dideteksi dengan uji ini diperkirakan 2,0 ng/ml.

Keterbatasan ♦ Hasil yang andal dan dapat direproduksi akan diperoleh ketika prosedur pengujian dilakukan
Prosedur dengan pemahaman yang lengkap tentang instruksi penyisipan paket dan dengan kepatuhan
terhadap praktik laboratorium yang baik.

♦ Prosedur pencucian sangat penting. Pencucian yang tidak memadai akan menghasilkan presisi
yang buruk dan pembacaan absorbansi yang salah.

♦ Sampel serum yang menunjukkan lipemia kotor, hemolisis kotor, atau kekeruhan tidak
boleh digunakan dengan tes ini.

♦ Hasil yang diperoleh dari penggunaan kit ini harus digunakan hanya sebagai tambahan
untuk prosedur diagnostik lain dan informasi yang tersedia untuk dokter.

halaman 6 Kit ELISA Alfa Fetoprotein

 Referensi 1 Engall, E., Metode dalam Enzymology, Volume 70, Van Vunakis, H. dan Langone,
JJ (eds.), Academic Press, New York, 419-492 (1980).
2 Uotila, M., Ruoslahti, E. dan Engvall, E., J. lmmunol. Metode, 42, 11-15
(1981).

3 Abelev G I. Alpha-fetoprotein sebagai penanda diferensiasi spesifik embrio pada

jaringan normal dan manusia. Transplantasi Rev 1974;20:3-37.
4 Hirai H. Alpha fetoprotein. Dalam: Chu TM, ed. Penanda biokimia untuk kanker. New
York: Marcel Dekker, 1982:23-59.
5 Chan DW, Miao Y C. Pemisahan kromatografi afinitas varian alfa-fetoprotein:
Pengembangan prosedur kolom mini dan aplikasi untuk pasien kanker. Clin Chem
1986;32:2143-2146.

6 Hirai H, Nishi S, Watabe H dkk. Beberapa investigasi kimia, eksperimental dan

klinis pada fetoprotein alfa. Dalam: Hirai H, Miyaji T, eds. Alfa-fetoprotein dan
hepatoma. Gann Monogr 1973:14:19-34.

Bantuan Teknis Untuk pertanyaan teknis, hubungi grup dukungan teknis kami melalui telepon di
1-877-726-6642 opsi 3 atau melalui email di techsupport@panomics.com (AS dan
Kanada) techsupport_europe@panomics.com (Eropa), atau kunjungi situs web kami
www.panomics.com untuk daftar terbaru FAQ dan dukungan produk literatur.

Untuk Tambahan Untuk informasi tentang produk Panomics atau untuk informasi pemesanan, hubungi
Jasa Manajer Penjualan Regional, atau kunjungi situs web kami di www.panomics.com.

Kit ELISA Alfa Fetoprotein halaman 7

halaman 8 Kit ELISA Alfa Fetoprotein