PITOKIMIA

FAKHRUR ROJI
27717413
Program study S1-FARMASI
Identifikasi penentuan struktur kimia

Cara fisika Cara kimia

UV-Vis 1. Pereaksi kromatografi
IR lapis tipis (KLT)
MS 2. Kromatografi cair
konsentrasi tinggi
 kromatografi

Kromatografi merupkan pemisahan campuran organik

berdasarkan fase gerak dan diam, senyawa pada lapisan tipis
absorben dilapisis pada lembaran kaca, plastic atau almunium.

Teknik kromatografi Sifat kelarutan,

Keatsirian senyawa

Harbone,R.J.,1987. Metode fitokimia, terbitan ke-2, penerbit ITB ; bandung

 Jenis jenis komatografi
1. Kromatografi kertas
2. Kromatografi lapis tipis
3. Kromatografi gas cair
4. Kromatografi cair
konsentrasi tinggi
Kromatografi lapis tipis
Metode pemilihan untuk pemisahan semua kandungan yang larut dalam
 lipid,
 steroid,

 karatenoid,
 kuinon sederhana, dan klorofil.
Harbone,R.J.,1987. Metode fitokimia, terbitan ke-2, penerbit ITB ; bandung
 Prinsip Dasar kromatografi lapis tipis

 . Pemisahan dengan TLC dipengaruhi oleh aplikasi campuran

atau ekstrak sebagai titik atau garis tipis pada sorben yang
telah diterapkan pada dukungan piring. Pelat TLC analitik
(ketebalan 0,1-0,2mm) tersedia secara komersial dari pemasok
seperti Merck (mis., gel silika analitik yang paling umum piring
adalah 20 20 cm, plastik atau plat Kiesel gel 60 F254 yang
didukung aluminium memiliki ketebalan sorbent silika 0,2mm

Sarke, D.S,. Latif, Z. Gray, A.I. 2006. Natural products isolation. Secound
edition.
 Prinsip Dasar kromatografi (TLC)

pemisahan komponen-komponen campuran suatu senyawa yang melibatkan partisi

suatu senyawa di antara padatan penyerap (adsorbent, fasa diam) yang dilapiskan pada
pelat kaca atau aluminium dengan suatu pelarut (fasa gerak) yang mengalir melewati
adsorbent (padatan penyerap).
analisis dengan KLT, sampel dalam jumlah yang sangat kecil ditotolkan menggunakan
pipa kapiler di atas permukaan pelat tipis fasa diam (adsorbent), kemudian pelat
diletakkan dengan tegak dalam bejana pengembang yang berisi, sedikit pelarrut
pengembang oleh aksi kapiler pelarut mengembang naik sepanjang permukaan lapisan
pelat dan membawa komponen-komponen yang terdapat dalam sampel.

Sarke, D.S,. Latif, Z. Gray, A.I. 2006. Natural products isolation. Secound
edition.
 Kekulatan pelarut(elusi)

Pengaliran pelarut dikenal sebagai proses pengembangan oleh pelarut

(elusi). urutan kekuatan elusi beberapa pelarut yaitu air > metanol >
etanol > aseton > etil asetat > kloroform > dietil eter > metilen diklorida
> benzena > toluena > karbon tetraklorida > heksan > petreulem eter.
Identifikasi senyawa yang telah terpisah pada lapisan tipis dapat
dilakukan dengan menggunakan reaksi penampak noda maupun dideteksi
menggunakan lampu UV (254 atau 356 nm) untuk senyawa-senyawa
yang dapat menyerap warna.

Atun,S,. 2014. metode isolasi dan identifikasi senyawa organik bahan alam.
Jurnal cagar alam bodobudur. Vol 8(2) : 53-61,
Sarke, D.S,. Latif, Z. Gray, A.I. 2006. Natural products isolation. Secound edition.
 Deteksi kromatografi lapis tipis

Pada deteksi yang efektif sangat penting untuk mendapatkan

senyawa murni, dan deteksi yang buruk juga akan menghasilkan
pemulihan produk yang rendah dari sorben. Deteksi biasanya tidak
rusak, di mana senyawa dapat diperoleh kembali dari sorben
(deteksi ultraviolet [UV]), atau destruktif, di mana senyawa
terkontaminasi oleh pereaksi deteksi dan tidak dapat dipulihkan dari
sorben (deteksi semprotan).

Sarke, D.S,. Latif, Z. Gray, A.I. 2006. Natural products isolation. Secound edition.
 deteksi ultraviolet [UV]),

Deteksi UV melibatkan penggunaan senyawa aktif-UV (indikator) yang dimasukkan

ke dalam sorben pelat TLC contoh plat Merck: Alumina, tebal 0,2mm, 20 20 cm,
dengan indikator UV 254-nm (Merck no. 5550). Di bawah sinar UV gelombang
pendek (254 nm), indikator, yang biasanya merupakan seng silikat yang diaktifkan
mangan, akan memancarkan cahaya hijau pucat. Di bawah sinar UV gelombang
panjang (366 nm), indikator lebih lanjut akan memancarkan cahaya ungu pucat.
Senyawa yang menyerap cahaya pada 254 atau 366nm akan muncul sebagai bintik-
bintik gelap dengan latar belakang cahaya saat sinar UV disinari ke piring. Banyak
senyawa seperti furocoumarin juga akan memancarkan floresensi biru atau kuning di
bawah sinar UV.
Sarke, D.S,. Latif, Z. Gray, A.I. 2006. Natural products isolation. Secound edition.
 menyerap sinar UV pada 254 atau 366nm tidak
Kerugian
akan terlihsenyawa yang tidakat dan akan
deteksi uv membutuhkan deteksi semprotan

tidak rusak, dan deteksi senyawa dapat diamati

Keuntugan dengan mudah melalui proses pemisahan. Lampu UV
deteksi uv banyak tersedia secara komersial dari pemasok seperti
CAMAG (Camag Ref. 022.9230). Perawatan harus
diambil untuk tidak memfokuskan cahaya dari lampu
ini pada mata atau pada kulit, karena sinar UV bersifat
mutagenik.

Sarke, D.S,. Latif, Z. Gray, A.I. 2006. Natural products isolation. Secound edition.
 (deteksi semprotan).

bergantung pada reaksi warna antara senyawa pada pelat TLC

dan pereaksi semprot (pewarnaan) yang dimasukkan ke piring
sebagai kabut halus dari tabung semprot. Sepuluh reagen semprot
yang paling umum tercantum dalam Tabel 3. Sebagian besar
adalah reagen universal dan akan bereaksi dengan banyak kelas

Sarke, D.S,. Latif, Z. Gray, A.I. 2006. Natural products isolation. Secound edition.
Sarke, D.S,. Latif, Z. Gray, A.I. 2006. Natural products isolation. Secound edition.
Sarke, D.S,. Latif, Z. Gray, A.I. 2006. Natural products isolation. Secound edition.
 Kromatografi cair konsentrasi tinggi (KCKT)

Kckt memiliki ciri pada penggunaaan tekanan tinggi

umtuk fase gerak dalam kolom, dengan
memeberikan tekanan tinggi dan, laju dan efisiensi
pemisaan dapat ditingkatkan dengan besar,
kromatografi penukaran ion telah berhasil
digunakaaaan untuk analisis katiion, anion, dan ion
organic.

Ardianingsih, R. 2009. penggunaan high performance liquid chromatography (HPLC) dalam analisis
deteksi ion. Berita digrantara. Vol 10(4) : 101-104
 kelebihan penggunaan KCKT

• 1. kecepatan ,
• 2. sensitifitas
• 3. selektifitas
• 4.Pendeteksian serempak
• 5. Kestabilan pada kolom pemisah

Ardianingsih, R. 2009. penggunaan high performance liquid chromatography (HPLC) dalam analisis
deteksi ion. Berita digrantara. Vol 10(4) : 101-104
 kecepatan

Kecepatan dalam analisis suatu sempel menjadi

aspek, minsalnya asasalisis ion yang berfungsi untuk
mengurangi biaya, menghasilkan data analisis yang
akkurat dn bisa mengurangi lmbah

Sensitivitas (sensitivity)
Perkembangan teknologi mikro prosessor yang dikombinasikan dengan
efisiensi kolom pemisah, mulai ukuran diameter dalam milimeter sampai
skala mikro yang biasa juga disebut microcolumn, membuat pendeteksian ion
dalam sampel menjadi lebih baik, meskipun jumlah sampel yang diinjeksikan
ke dalam kolom pemisah sangat sedikit.
 Selektivitas (selectivity)
Dengan sistem ini, pemisahan berdasarkan keinginan, misalnya
kation/ anion organik saja atau kation/anion anorganik yang
ingin dipisahkan. Itu dapat dilakukan dengan memilih kolom
pemisah yang tepat.

Pendeteksian yang serempak (simultaneous detection)

Teknik pendeteksian sekali injeksi untuk sebuah sampel. beberapa

kelebihan di antaranya dapat menekan biaya operasional,
memperkecil jumlah limbah saat analisis berlangsung,
memperpendek waktu analisis (short time analysis) serta dapat
memaksimalkan hasil yang diinginkan.
 Eluent, yang berfungsi sebagai fase gerak yang akan membawa sampel
tersebut masuk ke dalam kolom pemisah;
 Pompa, yang berfungsi untuk mendorong eluent dan sampel tersebut
masuk ke dalam kolom. Kecepatan alir ini dapat dikontrol dan perbedaan
kecepatan bisa mengakibatkan perbedaan hasil;
Injektor, tempat memasukkan sampel dan kemudian sampel dapat
didistribusikan masuk ke dalam kolom;
Kolom pemisah ion, berfungsi untuk memisahkan ion-ion yang ada dalam
sampel. Keterpaduan antara kolom dan eluent bisa memberikan hasil/puncak
yang maksimal, begitu pun sebaliknya, jika tidak ada “kecocokan”, maka
tidak akan memunculkan puncak;
Detektor, yang berfungsi membaca ion yang lewat ke dalam detektor;
Rekorder data, berfungsi untuk merekam dan mengolah data yang masuk.
(Weiss. J, 1995