Perbanyakan Tanaman Double Haploid

1. Kultur Ovari
2. Penyelamatan embrio hasil polinasi dengan iradiasi
bunga jantan
3. Kultur Mikrospora
Kultur Ovari
 Tahapan Kultur Ovari

• Pra-Semai
• Semai Persiapan
• Penanaman eksplan dan Kultur in vitro
• Pengairan sterilisasi • iris ovary menjadi 3-5
• Pemangkasan iris/ovary
• Perambatan • Panen ovary • Penanaman pada media
• Pencabutan bunga mekar • Pemberian perlakuan
• Monitoring hama dan
• Sterilisasi
penyakit

Kultur In Vitro
Persiapan
tanaman donor
Keterangan : A) Pra-Semai
B) Semai
C) Penanaman dan pemeliharaan dalam Screen House
D) Kriteria bunga betina untuk kultur ovari
E) Ukuran bunga betina untuk kultur ovari
F) Persiapan dan sterilisasi ovari
G) Hasil kultur ovari
 Perkembangan Eksplan Dari Ovul Melon

1 2 3 4 5 6 7 8

9 10 11 12 13 14 15 16

17 18 19 20 21 22 23 24
Penyelamatan EMBRIO Hasil polinasi dengan iradiasi bunga
jantan
Tahapan Penyelamatan EMBRIO Hasil polinasi dengan iradiasi
bunga jantan

Pemeliharaan
• Pra-semai Perkecambahan
tanaman donor • Panen buah
• Semai Iradiasi in vitro
• Penanaman • Pengairan
• Emaskulasi → • Ekstraksi • Doubling
bunga betina • Sterilisasi • aklimatisasi
• Pemasangan ajir • Sortasi benih • Kultur embrio
• Pemanenan bunga
• Pemangkasan → bunga jantan
• Dosis 50, 75, 100, berembrio pada media F : MS
125, 150, 175 Gy • Ekstraksi benih + Suk 3% + Gel
• Perambatan • Polinasi 0,23%
Persiapan berembrio Cek Ploidi
• Monitoring hama Iradiasi Pollen
Persiapan dan penyakit
tanaman donor Panen
Keterangan : A) Pra-Semai
B) Semai
C) Emaskulasi
D) Isolasi setelah emaskulasi
E) Polinasi dengan iradiasi bunga jantan
F) Isolasi setelah polinasi dan pelabelan,
Buah siap panen setelah 3-4 MSP
G) Proses Ekstraksi
Keterangan : H) Sortasi benih berembrio, I) Ekstraksi embrio, J) Kultur
embrio, K) Tanaman siap cek ploid, L) Sampling tanaman, M) Penggerusan
tanaman dan pemberian buffer, N) & O) Penyaringan , P) & Q) Hasil cek ploidi
Kultur Mikrospora
 Tahapan Kultur Mikrospora
Persiapan Pemeliharaan Tanaman Perlakuan
Tanaman Donor Donor Persiapan
• Media Induksi
• Pra-Semai • Eksplan Dan
Pengairan • Pemberian
• Pemangkasan
Sterilisasi perlakuan 1-2 hari
• Semai
• Perambatan • Panen bunga pada suhu 4ºC
• Penanaman
• Pencabutan bunga mekar • Sterilisasi
• Monitoring hama dan penyakit

Perlakuan
• Inkubasi gelap 1-2
Sentrifugasi
Ekstraksi hari
Penentuan Plating • 1. Tanpa
• Maserasi • Kecepatan Kerapatan Sel perlakuan
• Filter 660rpm • Penggunaan • Penuangan larutan • 2. Suhu 32,5ºC
• Penambahan • Suhu 4ºC → 4 haemocytometer mikrospora • 3. Suhu 35ºC
min • Penambahan media
media • Resuspend 3X • Keadaan terang
induksi
suhu 25ºC (14
hari)
Keterangan : A) Pra-Semai D) Kriteria bunga jantan
B) Semai E) Sterilisasi
C) Penanaman dan Pemeliharaan dalam Screen House F) Pra-perlakuan
Keterangan : G) Penggerusan K), L) & M) Penentuan kerapatan sel dengan haemocytometer
H) Penyaringan kedalam tube N) Penuangan larutan mikrospora dan pemberian arang aktif
I) Sentrifugasi
J) Pelet hasil sentrifugasi