PEMERIKSAAN VIRUS

COVID-19 METODE PCR

NAMA : PUSVITA VALENCIA DYAH PARWITA

KELAS : 3B
 PRA-ANALITIK

Alat dan bahan :

• Alat PCR
• Sampel
• Mikro pipet
• Tip
• Reagen
• Cup
Prosedur pengambilan sampel usap nasofaring :
1. Gunakan APD sesuai standar
2. Persiapkan cryotube yang berisi 1,5 ml media transport virus
3. Gunakan swab yang terbuat dari Dacron/rayon steril dengan tangkai p;astik.
4. Lakukan usap pada belakang tonsil dan hindarkan swab menyentuh bagian
lidah
2
 PRA-ANALITIK

5. Kemudian masukan swab orofaring sesegera mungkin ke dalam cryotube

yang berisi virus transport medium
6. Putuskan tangkai plaastik di daerah mulut crytube agar crytube dapat ditutup
dengan rapat
7. Crytube kemudian dililit parafilm
8. Crytube yang sudah berisi swab dibungkus dalam tisu bersih lalu dimasukan
ke dalam plastic klip
9. Simpan dalam suhu 4-8 oC sebelum dikirim. Jangan dibekukan dalam freezer

3
 ANALITIK

Prosedur pemeriksaan :

1. Ambil sampel dalam tabubg menggunakan mikropipet dan pindahkan

ke dalam cup
2. Tambahkan lysis buffer yang mengandung fenol dan guanidine
ishotyocanat
3. Homogenkan menggunakan vortex
4. Pada tahap ini, terdapat untaian RNA yang tersisa
5. Siapkan spin coloum, dan masukan sampel tadi kedalam spin colloum
6. Sentrifugasi, maka untaian RNA akam melekat di dinding tabung,
sedangkan komponen lain akan luruh
7. Letakan spin colloum ke dalam cup, lalu tambahkan elution buffer
4
 ANALITIK

8. Sentrifugasi lagi, untuk melarutkan RNA yang ada

9. Siapkan master mix, lalu pipet sampel tadi dan maasukan dalam master mix
lalu homogenkan di vorteks
10. Masukan dalam well lalu tutup
11. Masukan ke mesin PCR
12. Pada tahap pertama dalam pemeriksaan PCR terdapat proses reverse
transcription, yaitu mengambil 1 untaian kecil rantai RNA
13. Lakukan pada suhu 37 oC
14. Tahap selanjutnya adakah denaturasi awal pada suhu 95oC.
15. Pada tahap ini, DNA dan reverse transcription diaktivkan. Tahap ini
berlangsunng delama 15 menit

5
 ANALITIK

16. Tahap terakhir yaitu ekstension pada suhu 58 oC. pada tahap ini, rantai DNA
pun mulai berpasangan
17. Pada cycle kedua, kembali lagi ke tahap awal yaitu denaturasi pada suhu 95oC,
rantai terbelah
18. Tahap annelling, stran DNA masuk melengkapi strain DNA yang terpecah
19. Tahap ekstention, DNA itu bergabung kembali dan membentuk 2 DNA baru
20. Total terdapat 40 cycle dengan DNA target yang tercopy adalah
549.755.813.900 selama 2 jam
21. Periksa di dalam alat PCR, dengan cahaya dan di rekam di kamera CCD
22. Baca hasil di layar

6
 PASCA-ANALITIK

Interpretasi
+ = Terdapat grafik yang meningkat

7
TERIMA KASIH 