SPEKTROSKOPI

FLUORESENSI
KIMIA MAKANAN HALAL

FARMASI VI A

Spektrofluorometer

Page 0

INTRODUCTION
Kepentingan publik dalam kualitas makanan dan produksi telah meningkat dalam
beberapa dekade terakhir, mungkin berhubungan dengan perubahan kebiasaan makan,
perilaku konsumen, dan pengembangan dan peningkatan

pasokan makanan di industri

(Christensen et al., 2006). Permintaan untuk kualitas tinggi dan keselamatan dalam produksi
pangan jelas panggilan untuk standar yang tinggi untuk pengendalian kualitas dan proses,
yang pada gilirannya memerlukan alat-alat analisis yang sesuai untuk menyelidiki
makanan.Spektroskopi Fluoresensi adalah teknik analisis yang teori dan metodologi yang
telah banyak dimanfaatkan untuk studi struktur molekul dan fungsi dalam disiplin kimia dan
biokimia (Strasburg dan Ludescher, 1995). Meskipun fluoresensi adalah salah satu metode
analisis tertua yang digunakan,baru-baru ini menjadi sangat populer sebagai alat dalam ilmu
biologi yang berkaitan dengan teknologi makanan. Sebuah indikasi dari popularitas yang
semakin banyaknya publikasi penelitian tentang fluorescence, serta pengenalan instrumen
yang tersedia secara komersial baru untuk analisis

fluorensence khusunya front face

fluoresence spektrokopi (FFFS). Memang, teknik yang benar-sudut tradisional spektroskopi

fluoresensi tidak dapat diterapkan untuk zat tebal karena absorbansi besar mereka dan
hamburan cahaya, dan ketika absorbansi sampel melebihi 0,1 spektrum emisi dan eksitasi
keduanya menurun dan spektrum eksitasi terdistorsi . Untuk menghindari masalah ini,
pengenceran sampel saat ini sedang dilakukan sehingga absorbansi total kurang dari 0,1.
Namun, hasil yang diperoleh pada larutan sampel makanan tidak dapat diekstrapolasi untuk
sampel terkonsentrasi asli, karena komponen matriks makanan hilang. Untuk menghindari
masalah ini, FFFS dapat digunakan.
Ada banyak keuntungan dalam penggunaan analisis spektroskopi fluoresence, karena
akan menjadi jelas nanti dalam bab ini. Meskipun banyak peneliti menghindar dari teknik ini
karena kurangnya pengetahuan tentang prinsip-prinsip dasar fluoresensi, penerapan
fluoresence dalam analisis makanan telah meningkat selama dua dekade terakhir. Hal ini
dapat dijelaskan oleh penggunaan alat-alat chemometric untuk ekstraksi informasi yang
terkandung dalam spektra.
Bab ini akan memberikan pembaca dengan review dari prinsip-prinsip dasar
fluorensence, termasuk penggunaan teknik ini; khususnya, FFFS paling umum untuk
penilaian kualitas sistem pangan beberapa akan dibahas secara rinci.

Spektrofluorometer

Page 1

SPEKTROSKOPI FLUORESENCE
Definisi
Fluoresensi adalah emisi cahaya setelah penyerapan sinar ultraviolet (UV) atau
cahaya tampak oleh molekul fluoresence atau substruktur disebut fluorophore . Dengan
demikian, fluorophore menyerap energi dalam bentuk cahaya pada panjang gelombang
spesifik dan membebaskan energi dalam bentuk cahaya yang dipancarkan pada panjang
gelombang yang lebih tinggi.
Fluoresensi adalah proses pemancaran radiasi cahaya oleh suatu materi setelah
tereksitasi oleh berkas cahaya berenergi tinggi. Emisi cahaya terjadi karena proses absorbsi
cahaya oleh atom yang mengakibatkan keadaan atom tereksitasi. Keadaan atom yang
tereksitasi akan kembali keadaan semula dengan melepaskan energi yang berupa cahaya (deeksitasi). Fluoresensi merupakan proses perpindahan tingkat energi dari keadaan atom
tereksitasi (S1 atau S2) menuju ke keadaan stabil (ground states). Proses fluoresensi
berlangsung kurang lebih 1 nano detik sedangkan proses fosforesensi berlangung lebih lama,
sekitar 1 sampai dengan 1000 mili detik. (Gunady Haryanto)
Prinsip-prinsip umum dapat diilustrasikan dengan diagram Jablonski (Veberg, 2006),
seperti yang ditunjukkan pada Gambar 7.1. Langkah pertama (i) adalah eksitasi, di mana
cahaya diserap oleh molekul, yang ditransfer ke keadaan tereksitasi secara elektronik - yang
berarti bahwa sebuah elektron bergerak dari keadaan dasar singlet, S 0, ke keadaan singlet
tereksitasi, S1. Ini diikuti dengan relaksasi getaran atau konversi internal (ii), dimana
molekul ini mengalami transisi dari elektronik atas ke yang lebih rendah, S 1, tanpa radiasi
apapun. Akhirnya, emisi terjadi (iii), biasanya 10-8 detik setelah eksitasi, ketika kembali
elektron ke keadaan dasar lebih stabil, S0, memancarkan cahaya pada panjang gelombang
yang sesuai dengan perbedaan energi antara kedua negara elektronik.
Penjelasan ini tentu saja agak disederhanakan. Dalam molekul, masing-masing kondisi
elektronik memiliki beberapa kondisi bagian getaran terkait. Dalam keadaan dasar, hampir
semua molekul menempati tingkat vibrasi terendah. Dengan eksitasi dengan sinar UV atau
terlihat, adalah mungkin untuk mempromosikan molekul yang tertarik ke salah satu tingkat
getaran beberapa tingkat tereksitasi secara elektronik yang diberikan. Ini berarti bahwa emisi
fluorescencel tidak hanya terjadi pada satu panjang gelombang tunggal, melainkan melalui
distribusi panjang gelombang yang sesuai untuk transisi vibrasi beberapa sebagai komponen
Spektrofluorometer

Page 2

dari transisi elektronik tunggal. Inilah sebabnya mengapa eksitasi dan spektrum emisi
diperoleh untuk menggambarkan secara rinci karakteristik molekul fluoresensi .

Fakta bahwa fluorescence ditandai dengan dua parameter panjang gelombang yang
signifikan meningkatkan spesifikasi dari metode ini, dibandingkan dengan teknik
spektroskopi hanya didasarkan pada penyerapan.
Beberapa kondisi fisis yang mempengaruhi fluoresensi pada molekul antara lain
polaritas, ion-ion, potensial listrik, suhu, tekanan, derajat keasaman (pH), jenis ikatan
hidrogen, viskositas dan quencher (penghambat de-eksitasi). Kondisi-kondisi fisis tersebut
mempengaruhi proses absorbsi energi cahaya eksitasi. Hal ini berpengaruh pada proses deeksitasi molekul sehingga menghasilkan karakteristik intensitas dan spektrum emisi
fluoresensi yang berbeda-beda. (Gunady Haryanto)
Bila suhu makin tinggi maka efisiensi kuantum fluoresensi makin berkurang. Hal ini
disebabkan pada suhu yang lebih tinggi tabrakan-tabrakan antar molekul atau tabrakan antar
molekul dengan pelarut menjadi lebih sering yang mana peristiwa tabrakan kelebihan energy
molekul tereksitasi dilepaskan ke molekul pelarut. (Ibnu Ghalib)
pH berpengaruh pada letak keseimbangan antara bentuk terionisasi dan bentuk tak
terionisasi. Sifat fluoresensi dari kedua bentuk itu berbeda. Fluoresensi dapat terjadi dengan
baik jika molekul-molekul memiliki struktur yang kaku (rigid). Adanya gas oksigen akan
memperkecil intensitas fluorosensi. Hal ini disebabkan oleh terjadinya oksidasi senyawa
karena pengaruh cahaya (Ibnu Ghalib)

Spektrofluorometer

Page 3

Quantum yield (efficiency)

Efisiensi kuantum merupakan bilangan yang menyatakan perbandingan antara jumlah
molekul yang berfluoresensi terhadap jumlah total molekul yang tereksitasi. Besarnya
efisiensi kuantum () adalah 0

Diharapkan mendekati 1, yang berarti efisiensi

fluoresensi sangat tinggi. (Ibnu Ghalib)

Setiap molekul menyajikan properti tertentu, yang digambarkan oleh angka, bernama
hasil kuantum efisiensi kuantum ( ) .

= quantum yield

( 7.1 )

Ilustrasi dari persamaan diatas, semakin tinggi nilai dari ,semakin besar fluoresensi
dari senyawa. Sebuah molekul non-fluorescent adalah salah satu yang kuantum efisiensi
adalah nol atau mendekati nol sehingga fluoresensi yang tidak terukur. Semua energi yang
diserap oleh molekul seperti itu dengan cepat hilang oleh penonaktifan tumbukan.
Excitation and emission spectra
Setiap molekul neon memiliki dua spektrum karakteristik; spektrum eksitasi dan emisi.
Spektrum Eksitasi
Spektrum eksitasi adalah didefinisikan sebagai efisiensi relatif dari panjang gelombang
radiasi yang berbeda yang menarik dalam menyebabkan fluoresensi. Bentuk spektrum
eksitasi harus identik dengan yang ada pada spektrum penyerapan molekul, dan independen
dari panjang gelombang di mana fluorescence diukur. Namun, ini jarang terjadi, karena
kepekaan dan bandwidth dari spektrofotometer (spektrum absorbansi) dan spectrofluorimeter
(spektrum eksitasi) yang berbeda. Sebagai aturan adalah bahwa puncak panjang gelombang
terpanjang dalam spektrum eksitasi dipilih untuk eksitasi sampel. Ini meminimalkan
kemungkinan dekomposisi disebabkan oleh radiasi panjang gelombang yang lebih pendek,
energi yang lebih tinggi.
Spektrum Emisi
Spektrofluorometer

Page 4

Spektrum emisi hasil senyawa dari emisi kembali radiasi diserap oleh molekul.
Spektrum emisi adalah intensitas relatif dari radiasi yang dipancarkan pada panjang
gelombang yang berbeda. Kuantum efesiensi dan bentuk dari spektrum emisi yang
independen dari panjang gelombang radiasi eksitasi. Jika radiasi adalah pada panjang
gelombang yang berbeda dari panjang gelombang puncak penyerapan, lebih sedikit energi
radiasi akan diserap dan karena itu sedikit yang akan dipancarkan.
Stoke s shift
Menurut diagram Jablonski (Gambar 7.1), energi emisi lebih rendah dibandingkan
dengan eksitasi. Ini berarti bahwa emisi fluoresensi yang lebih tinggi terjadi pada panjang
gelombang dari penyerapan (eksitasi). Perbedaan antara eksitasi dan panjang gelombang
emisi dikenal sebagai pergeseran Stoke itu, seperti ditunjukkan dengan persamaan pada
Gambar 7.2, menunjukkan perbedaan antara eksitasi dan emisi spektrum dari spektrum
fluoresensi triptofan scan pada susu UHT.

( 7.2 )
di mana ex dan em adalah panjang gelombang maksimum untuk masing-masing eksitasi dan
emisi.
Biasanya, spektrum emisi yang diberikan untuk fluorophore adalah bayangan cermin
spektrum eksitasi, seperti yang terlihat sampai batas tertentu pada Gambar 7.2 untuk
triptofan. Itu umum murni simetris adalah akibat dari transisi yang sama yang terlibat baik
dalam penyerapan dan emisi, dan kesamaan dari tingkat getaran dari S0 dan S1.

Spektrofluorometer

Page 5

Namun, ada beberapa pengecualian, karena beberapa pita penyerapan dapat diamati
pada spektrum eksitasi tetapi hanya puncak terakhir diamati pada spektrum emisi, mewakili
transisi dari S1 ke S0. fluorescence vitamin A, seperti yang terlihat pada Gambar 7.3, adalah
contoh ini, dengan tiga puncak penyerapan dan hanya satu puncak emisi.
Biasanya, hanya spektrum emisi atau eksitasi (yaitu satu panjang gelombang eksitasi
atau emisi) dicatat pada saat menyelidiki sampel fluoresensi. Namun, dapat bermanfaat dan
informatif untuk mendapatkan pemandangan seluruh fluoresensi (juga dikenal sebagai 2D
spektroskopi fluuorescence ) untuk menemukan eksitasi yang tepat dan emisi maximum, serta
struktur yang benar dari puncak. Selain itu, memfasilitasi analisis yang lebih sesuai dari data
fluorescence dari sampel kompleks dengan penampilan fluorophores. Kerusakan kurva
fluoresensi dari fluorophores juga berisi informasi terperinci mengenai lingkungan fisik dan
kimia, seperti ukuran, bentuk dan kelenteruran dari makromolekul (Christensen et al., 2006).
Peralatan untuk pengukuran time-resolved, Namun, biasanya kompleks dan mahal.
Dimensi ekstra lain dari spektroskopi fluoresensi adalah anisotropi fluorescence .
Pengukuran anisotropi didasarkan pada polarisasi cahaya, dan orientasi saat transisi dari
fluorophores (Genot et al., 1992). Mengetahui masa fluoresensi dan anisotropi, waktu rotasi
molekul dapat ditentukan (Dufour et al., 1994). Secara khusus, dalam kombinasi dengan
pengukuran masa, fluoresensi anisotropi secara luas digunakan untuk mempelajari interaksi
makromolekul biologis. Namun, jenis pengukuran fluorescence tidak rinci dalam bab ini.

Spektrofluorometer

Page 6

Factors affecting fluorescence intensity

Beberapa faktor yang berhubungan dengan sifat dan konsentrasi fluorophores dari sampel
makanan mempengaruhi intensitas fluoresensi, seperti digambarkan pada Gambar 7.4.
Quenching (pengurangan intensitas fluoresensi)
Quenching Fluoresensi mewakili setiap proses yang mengarah ke penurunan intensitas
fluoresensi dari sampel (Lakowicz, 1983). Hal ini terkait dengan penonaktifan dari molekul
oleh interaksi intra-atau antarmolekul. Ada dua jenis proses quenching: statistik dan dinamis.
Yang pertama terjadi ketika pembentukan keadaan tereksitasi dihambat karena pembentukan
kompleks groud-state di mana fluorophore membentuk non-fluorescent kompleks dengan
molekul peredam. Pendinginan dinamis atau tumbukan mengacu pada proses ketika
quenchers menonaktifkan perilaku dari keadaan tereksitasi setelah pembentukannya. Molekul
tereksitasi akan dinonaktifkan oleh salah satu interaksi intramolekul (tabrakan) atau kegiatan
antarmolekul (interaksi dengan molekul lain). Salah satu yang paling terkenal quenchers
adalah oksigen. Suhu yang lebih tinggi juga menghasilkan jumlah yang lebih besar dari
pendinginan tumbukan karena kecepatan molekul yang meningkat. Resonansi transfer energi
juga dapat dianggap sebagai quenching dinamis, karena interaksi antara donor dan akseptor
molekul dapat terjadi menginduksi penonaktifan penuh atau parsial dari fluorophore
bersemangat (donor). Transfer energi tidak melibatkan emisi cahaya, tetapi interaksi dipoldipol antara donor dan akseptor molekul.
Concentration and inner filter effect
Persamaan mendefinisikan hubungan intensitas fluoresensi untuk konsentrasi adalah:
Spektrofluorometer

Page 7

Jika If adalah intensitas fluoresensi, adalah hasil kuantum, saya I0 intensitas cahaya insiden,
adalah absorptivitas molar, I adalah kedalaman optik sampel, dan c adalah konsentrasi
molar fluorophore
Menurut

Lakowicz

(1983),

untuk

absorbansi

rendah

(<0,05),

persamaan

dapat

ditulis sebagai:

Dengan demikian, plot dari konsentrasi If harus linier pada konsentrasi rendah dan
mencapai maksimum pada konsentrasi yang lebih tinggi. Pada konsentrasi yang lebih tinggi,
diamati sinyal fluoresensi menurun sehubungan dengan konsentrasi fluorophore. Penurunan
ini di bagian yang disebabkan oleh pelemahan sinar eksitasi di bidang solusi di depan sistem
deteksi, dan oleh penyerapan fluoresensi dipancarkan dalam larutan. Ini adalah penetapan
sebagai efek filter dalam sel atau bagian dalam.
Persamaan mennyatakan intensitas fluoresensi menunjukkan bahwa ada tiga faktor
utama lain dibanding konsentrasi yang dapat mempengaruhi intensitas fluoresensi:
1. Efisiensi kuantum , semakin besar , semakin besar intensitas fluoresensi.
2. Intensitas cahaya insiden I0; sumber yang lebih intens akan menghasilkan fluoresensi
yang lebih besar. Dalam praktiknya, sumber yang sangat intens dapat menyebabkan
photodecomposition pada sampel. Oleh karena itu, satu kompromi merupakan sumber
intensitas sedang (seperti merkuri atau lampu xenon).
3. Absorptivitas molar senyawa tersebut,. Untuk memancarkan radiasi, molekul
harus terlebih dahulu menyerap radiasi. Oleh karena itu, semakin tinggi absorptivitas
molar, semakin baik intensitas fluoresensi dari senyawa akan.
Lingkungan molekul
Lingkungan dari fluorophore memiliki peran penting pada brntuk dari spectrum
fluoresens. Pada lingkungan yang lebih polar, akan dibutuhkkan tingkat energi yang rendah.
Hal ini berarti emisi dari fluorophore yang bersifat polar akan menggeser panjang gelombang
ke tingkat energi lebih rendah pada banyak pelarut polar. Struktur dari makromolekul pun
memiliki efek yang besar pula pada emisi fluoresens.
Spektrofluorometer

Page 8

Temperature, pH dan warna yang kuat memberikan efek pada sinyal fluoresens.
Dengan diturunkannya temperature akan diikut dengan penurunan perpindahan molekul dan
demikian akan terjadi banyak tubrukan dan berakibat pengurangan sinyal fluoresens. Nilai
pH pun memiliki efek dan kebanyakan senyawa hidroksi aromatik berpendar baik pada pH
tinggi. Warna dari sampel dapat memberikan efek terhadap bentuk dan intensitas spectrum.
Senyawa berwarna akan direabsorbsi lebih besar dibanding sampel yang lebih terang.
Scatter (menghamburkan)
Hamburan cahaya merupakan peristiwa yang mempengaruhi sinyal fluoresens. Seperti
yang disebutkan dalam bagian sebelumnya, absorbansi dari sampel diukur memainkan peran
penting dalam pengukuran fluoresen. Terutama dalam larutan keruh dan sampel buram padat
(Seperti kebanyakan makanan), jumlah cahaya yang direfleksi tersebar dan mempengaruhi
pengukuran jauh, sehubungan dengan baik sampling (yaitu kedalaman optik dari sampling)
maupun sinyal (fluorescence) yang diperoleh. Cahaya yang tersebar dapat dibagi menjadi
Rayleigh dan Raman pencar (Gambar 7.5). Pencar Rayleigh mengacu pada hamburan cahaya
oleh partikel dan molekul yang lebih kecil dari panjang gelombang cahaya. Rayleigh adalah
apa yang disebut scatter elastis, yang berarti bahwa tidak ada kehilangan energi yang terlibat,
sehingga panjang gelombang cahaya tersebar adalah sama dengan insiden ringan. Rayleigh
pencar dapat diamati sebagai garis diagonal di fluorescence lanskap untuk panjang
gelombang eksitasi setara panjang gelombang emisi. Sinyal dari fluoresens dengan
pergeseran Stoke kecil itu akan terletak dekat dengan garis hamburan, dan karena itu akan
paling terpengaruh oleh pencar Rayleigh. Karena pembangunan kisi monokromator
digunakan untuk eksitasi. Beberapa cahaya panjang gelombang ganda dari eksitasi dipilih
juga akan melewati ke sampel. Untuk alasan ini sebuah band ekstra pencar Rayleigh, apa
yang disebut orde kedua Rayleigh, biasanya akan muncul dalam pengukuran fluorescence
untuk panjang gelombang emisi pada dua kali diberikan eksitasi panjang gelombang.
Rayleigh pencar dapat diabaikan dengan mengukur dan mempertimbangkan. Sinyal
fluorescence hanya antara tersebarnya terlebih dulu-dan orde kedua Rayleigh.
Pencar Raman menyebarkan inelastis, karena penyerapan dan re-emisi ditambah
cahaya dengan negara-negara getaran. Sebuah kehilangan energi konstan akan muncul untuk
menyebarkan Raman, yang berarti bahwa cahaya tersebar akan memiliki panjang gelombang
lebih tinggi dari eksitasi cahaya, dengan perbedaan konstan dalam wavenumbers. Dalam
sampel cairan pelarut adalah menentukan dalam jumlah dan sifat menyebarkan Raman,
Spektrofluorometer

Page 9

sedangkan untuk sampel padat itu akan biasanya menjadi ekspresi zat massal. Pencar Raman
bisa dalam banyak kasus diabaikan karena kontribusi yang lemah dengan sinyal fluorescence.
Instrumentasi
Dasar set-up untuk sebuah alat untuk mengukur kondisi mapan fluorescence
ditampilkan pada Gambar 7.6. Para uorometer spectrofl terdiri dari sumber cahaya (biasanya
xenon atau merkuri lampu), sebuah monokromator dan / atau filter (s) untuk memilih panjang
gelombang eksitasi; kompartemen sampel, sebuah monokromator dan / atau fi lter (s) untuk
memilih emisi panjang gelombang; detektor, yang mengubah cahaya yang dipancarkan ke
listrik sinyal, dan unit untuk akuisisi data dan analisis.

Geometri sampling bisa berpengaruh besar terhadap sinyal fluoresens diperoleh. Jika
absorbansi kurang dari 0,1, intensitas cahaya yang dipancarkan sebanding dengan konsentrasi
Spektrofluorometer

Page 10

fluorophore, dan eksitasi dan spektrum emisi secara akurat dicatat oleh perangkat sudut
kanan fluorescence klasik. Dalam hal ini, eksitasi perjalanan cahaya masuk sampel dari satu
sisi, dan detektor diposisikan di sebelah kanan sudut ke pusat sampel. Ketika absorbansi
sampel melebihi 0,1, intensitas spektrum emisi berkurang dan eksitasi dan spektrum eksitasi
yang terdistorsi. Untuk menghindari masalah ini, pengenceran sampel saat ini sedang
dilakukan sehingga absorbansi total akan kurang dari 0,1. Namun, hasil yang diperoleh pada
larutan dilusi dari sampel makanan tidak dapat diekstrapolasikan untuk sampel terkonsentrasi
asli sejak organisasi matriks makanan hilang. Selain itu, cairan dapat berubah konsentrasi
spesies lain yang relevan uorescent fl bawah atau dekat dengan deteksi membatasi dari
fluorescence. Untuk menghindari masalah ini, FFFS dapat digunakan (Gambar 7.6). Dengan
cara ini adalah mungkin untuk mengukur sampel yang lebih keruh atau buram, karena sinyal
menjadi lebih independen dari penetrasi cahaya melalui sampel. Namun, ketika front-wajah
sampling yang digunakan, jumlah cahaya yang tersebar terdeteksi akan meningkat karena
semakin tinggi tingkat refleksi dari topologi permukaan sampel dan pemegang sampel. Untuk
meminimalkan efek ini, direkomendasikan bahwa sampel tidak ditempatkan dengan
permukaan yang berorientasi pada sudut 45 ke balok insiden, tetapi lebih pada suhu 30 /
60 ke sumber cahaya dan detektor (Lakowicz, 1983).

Molekul-molekul yang mampu berfluoresensi (Ibnu Ghalib)

Sistem ikatan rangkap terkonjugasi memiliki struktur yang planar dan kaku sehingga
akan mampu menyerap secara kuat di daerah 200-800 nm pada radiasi elektromagnetik.
Senyawa-senyawa yang memiliki ikatan rangkap terkonjugai ini merupakan kandidat
senyawa yang mampu berfluoresensi. Mdifikasi struktur dapat meningkatkan maupun
menurunkan intensitas fluoresensi, tergantung pada sifat dan letak gugus subsituen.
Gugus-gugus yang memberikan electron seperti gugus, hidroksi, amin atau metoksi
yang terikat secara langsung pada system ikatan dapat memfasilitasi terjadinya proses
fluoresensi. Gugus-gugus yang menarik electron seperti nitro, bromo, iodo, siano ata
ukarboksil cenderung mengurangi intensitas fluoresensi.
Aplikasi fluorescence dalam makanan dan minuman
Baru-baru ini, penerapan spektroskopi fluorescence

dalam kombinasi dengan

multidimensi teknik statistik untuk evaluasi kualitas makanan telah meningkat. Di sebagian
Spektrofluorometer

Page 11

besar makalah penelitian, sinyal fluorescence merupakan penanda spesifik fluorophores

setelah penentuan eksitasi atau panjang gelombang emisi.
Produk susu
Produk-produk susu mengandung beberapa fluorophores

intrinsik, yang mewakili

paling penting bidang spektroskopi fluorescence. Mereka termasuk asam amino aromatic dan
asam nukleat (AAA NA), triptofan, tirosin dan fenilalanin dalam protein;vitamin A dan B 2;
nikotinamida adenin dinukleotida (NADH) dan klorofil, danberbagai senyawa lainnya yang
dapat ditemukan pada konsentrasi rendah atau sangat rendah di produk makanan.
FFFS untuk otentikasi susu
Dufour dan Riaublanc (1997) meneliti potensi FFFS untuk membedakan antara baku,
air panas (suhu 70 C selama 20 menit), homogen, dan homogen-andheated susu. Berikut
analisis komponen utama (PCA) diterapkan pada triptofandan vitamin A fluorescence
spektrum, diskriminasi yang baik antara sampel sebagai fungsi dari homogenisasi dan
perlakuan panas diterapkan pada sampel susu telah diamati. Mereka menyimpulkan bahwa
perawatan diterapkan untuk susu diinduksi modifikasi secara spesifik

dalam bentuk

spektrum fluorescence. Dalam suatu penelitian, penyelidikan intrinsic terhadap perbedaan

emisi dan eksitasi spektrum (yaitu AAA+ NA, NADH dan FADH) digunakan untuk
mengevaluasi perubahan dalam susu setelah perawatan termal di kisaran 57-72 C selama
0,5-30 menit. PCA diterapkan pada spektrum normalisasi diperbolehkan diskriminasi baik
sampel susu mengalami suhu yang berbeda dan waktu. Namun, peneliti hanya menerapkan
suhu relatif rendah untuk sampel susu, tidak memungkinkan pemantauan perkembangan
reaksi pencoklatan Maillard, yang

ditunjukkan oleh Schamberger dan Labuza (2006);

spektrum fluorescence dari susu yang diproses untuk detik 5, 15, 20, 25 dan 30 di 5 C
kenaikan dari 110 C sampai 140 C yang ditemukan berkorelasi dengan
hydroxylmethylfurfural (HMF).
Nilai R 2 > 0,95 ditemukan terus-menerus sepanjang emisi rentang panjang gelombang
dari 394-447 nm. Selain itu, tingkat fluorescence meningkat lebih tinggi dengan waktu-suhu
kombinasi. Schamberger dan Labuza (2006) menyimpulkan FFFS yang dapat dianggap
sebagai metode yang sangat menjanjikan untuk mengukur Maillard browning dalam susu,
dan juga dapat digunakan sebagai alat on-line untuk pemantauan

dan pengendalian

pengolahan termal susu. Hasil ini dikonfirmasi oleh Liu dan Metzger (2007), yang diterapkan
Spektrofluorometer

Page 12

FFFS memantau berbagai perubahan dalam susu kering tanpa lemak (n=9) yang dikumpulkan
dari tiga produsen yang berbeda dan disimpan pada empat berbeda suhu (4, 22, 35 dan 50
C) selama 8 minggu. Berbeda intrinsik pemeriksaan (Fluorescent produk reaksi Maillard
(FMRP), ribofl Avin, triptofan dan vitamin) Diselidiki, dan masing-masing data spektral
dianggap set diperbolehkan diskriminasi baik dari sampel susu disimpan pada suhu 50 C
dari yang lain. Selain itu, baik diskriminasi sampel susu sebagai fungsi dari waktu
penyimpanan terlihat. Dalam mirip pendekatan, Feinberg dan rekan kerja (2006) juga
digunakan spektroskopi fluorescence untuk mengidentifikasi lima jenis perawatan panas
(pasteurisasi, pasteurisasi tinggi, langsung UHT, UHT tidak langsung dan sterilisasi) dari 200
sampel susu komersial yang disimpan di 25 dan 35 C selama 90 hari. Dengan menerapkan
analisis diskriminan faktorial (FDA), Feinberg dan rekan kerja (2006) menemukan bahwa
triptofan fluorescence spektrum dapat dianggap beradaptasi dengan baik untuk membedakan
susu steril dan susu pasteurisasi mungkin dari sampel susu lainnya. Namun, penyelidikan
intrinsik gagal membedakan jenis-jenis susu. Penjelasan dapat bahwa spektrum fluorescence
dicatat dalam fraksi 4,6 pH larut dari sampel susu, menginduksi kehilangan informasi.
Dalam pendekatan lain, Herbert et al. (1999) digunakan untuk memantau FFFS
koagulasi susu pada tingkat molekuler. Tiga proses koagulasi yang berbeda telah dipelajari:
yang glucono-

-Lakton (GDL), sistem koagulasi rennet diinduksi, dan campuran GDL+

rennet akibat koagulasi sistem. Emisi fluorescence spektrum dari protein residu tryptophanyl
direkam untuk setiap sistem selama koagulasi susu kinetika. Dengan menerapkan PCA untuk
pengumpulan fluorescence normalisasi spektral data dari tiga sistem, deteksi perubahan
struktural dalam kasein misel selama pembekuan dan diskriminasi dinamika yang berbeda
dari koagulasi tiga

sistem tercapai. Herbert et al. (1999) menyimpulkan bahwa FFFS

memungkinkan penyelidikan struktur jaringan dan interaksi molekul selama koagulasi susu
Sebagian besar yang disebutkan di atas studi tentang diskriminasi susu dilakukan pada skala
laboratorium pada sampel yang ekstrim dan terkendali. Namun, produk susu dari daerah
pegunungan yang dikenal memiliki spesifik organoleptik dan kualitas gizi (Bosset et al,
1999;. Coulon dan Priolo, 2002;. Renou et al, 2004), dan penelusuran susu produksi situs itu
penting untuk menghindari penipuan. Dengan demikian, akan menarik untuk menilai potensi
FFFS untuk membedakan antara susu menurut asal geografis mereka. Baru-baru ini,
sebanyak 40 sampel susu - 8 diproduksi di daerah dataran rendah (430-480 m), 16 diproduksi

Spektrofluorometer

Page 13

di tingkat menengah daerah (720-860 m) dan 16 diproduksi di daerah pegunungan (1.0701.150 m) - dari Haute-Loire di departemen
Telah dianalisis (Karoui et al., 2005a). Triptofan fluorescence spektrum, AAA+ NA
spektrum dan spektrum riboflavin adalah direkam langsung pada susu, dengan panjang
gelombang eksitasi 290 nm ditetapkan sebesar, 250 nm dan 380 nm, masing-masing.
Spektrum eksitasi vitamin A juga dicatat, dengan panjang gelombang emisi 410 nm
ditetapkan. Dengan menerapkan FDA untuk koleksi spektral, sebuah kecenderungan untuk
pemisahan yang baik antara susu sebagai fungsi dari ketinggian mereka diamati.
Hasil terbaik diperoleh dengan AAA+ NA spectrum fluorescence , karena 81,5% dan
76,9% dari spektrum kalibrasi dan validasi. Namun, beberapa kation salh dalam klasifikasi
antara susu yang diproduksi di tingkat menengah daerah dan sampel susu lainnya diamati.
FFFS untuk memantau kualitas keju selama pematangan
Memahami struktur keju, khususnya protein dan lemak struktur, dan interaksi
komponen keju selama pemasakan akan memberikan informasi yang berguna dalam
menentukan apa yang merupakan produk yang berkualitas. Dufour dkk. (2000) dan
Mazerolles dkk. (2001) digunakan untuk memantau FFFS 16 semi-keras keju diproduksi dan
matang di bawah skala terkendali. Dengan menerapkan PCA ke

triptofan normalisasi

fuorescence spektrum, diskriminasi baik dari keju menyajikan waktu pemasakan 21, 51 dan
81 hari diamati, sementara tumpang tindih diamati antara keju berusia 1 hari dan mereka
yang berusia 21 hari. Pola spektral yang berhubungan dengan PC memberikan panjang
gelombang karakteristik yang dapat digunakan untuk membedakan antara spektrum. Pola
spektral mirip dengan spektrum, dan dapat digunakan untuk memperoleh informasi struktural
pada tingkat molekul. Pada mempelajari pola spektral, pergeseran merah dari keju tua
diamati, menunjukkan bahwa lingkungan keju tua lebih hidrofilik dibandingkan dengan muda
(1-hari-tua) keju. Fenomena ini telah dijelaskan oleh proteolisis sebagian kasein sebagai serta
fenomena penggaraman, yang dapat menyebabkan beberapa perubahan dalam tersier dan
kuaterner struktur misel kasein. Mengenai spektrum uorescence fl vitamin A, dua bahu
terletak pada 295 dan 305 nm dan maksimum terletak di 322 nm diamati (Dufour et al.,
2000). Selain itu, bentuk spektrum berubah dengan waktu pematangan (Gambar 7,7). Dengan
menerapkan PCA untuk vitamin A normalisasi spektrum, diskriminasi yang lebih baik dari
keju berusia 21, 51 dan 81 hari dari mereka yang berusia 1 hari tercapai.
Spektrofluorometer

Page 14

Untuk menentukan hubungan antara pertengahan inframerah (MIR) dan fl spectrum

fluorescence, penulis diterapkan analisis korelasi kanonik (CCA) di satu sisi ke 1700-1500
cm-1 spektral daerah dan triptofan spektrum fluorescence, dan pada lainnya ke 3000-2800
cm-

spektral daerah dan vitamin A spektrum. Sebuah relatif tingkat korelasi yang tinggi

ditemukan, karena fi rst dua varietas kanonik memiliki kuadrat kanonik korelasi koefisien
sien lebih tinggi dari 0,58. Para penulis menyimpulkan bahwa MIR dan spektrum
fluorescence memberikan gambaran umum dari sampel keju. Karoui dkk. (2006a) terus
pekerjaan ini dengan merekam triptofan, vitamin A dan riboflavin spektra dari 12 semi-keras
keju (Raclette) dari 4 merek yang berbeda, yang diproduksi selama periode musim panas di
tingkat industri. Dengan menerapkan umum komponen dan spesifik analisis beban (CCSWA)
ke set data spektral dan data fisikokimia, diskriminasi baik dari empat merek diamati.
Penelitian kelompok yang sama (Karoui dan Dufour, 2006) dievaluasi potensi FFFS untuk
memprediksi parameter rheologi dari 20 semi-keras keju pada akhir pematangan mereka
tahap (60 hari) dari spektra uorescence fl tercatat pada tahap yang lebih muda (2 hari tua).
Dengan menggunakan triptofan fl spektrum uorescence scan pada keju berusia 2 hari dan
pada 20 C, penyimpanan modulus (G?), kehilangan modulus (G?), saring, tan (?) dan
kompleks viskositas (*) diperkirakan dengan menggunakan kuadrat terkecil parsial (PLS)
regresi dengan memanfaatkan koreksi dengan R dari 0,98, 0,97 0,98, 0,98 dan 0,97, masingmasing. Riboflavin fluorescence spektrum memberikan R sedikit lebih rendah dari 0,88, 0,88
0,92, 0,87 dan 0,88, masing-masing. Salah satu kesimpulan utama dari penelitian ini adalah
bahwa FFFS mungkin berguna untuk cepat secara online penentuan tekstur keju.
FFFS untuk otentikasi keju pada tahap ritel
Untuk mempelajari berbagai varietas keju lunak, semi-keras, dan sulit selama
pematangan dan pada tahap ritel, Dufour dan rekan kerja menggunakan pendekatan yang
serupa (Herbert, 1999, 2000; Karoui dan Dufour, 2003; Karoui dkk. 2003, 2004b, 2005b,
Spektrofluorometer

Page 15

2005c). Potensi FFFS untuk membedakan antara delapan kelompok keju lunak adalah
dievaluasi oleh Herbert et al. (2000). Dalam penelitian mereka, triptofan dan vitamin A
spektrum digunakan sebagai pengujian intrinsik untuk membedakan antara keju lunak
diselidiki sebagai fungsi dari waktu pematangan dan / atau keju pembuatan prosedur.
Lingkungan residu triptofan ditemukan menjadi relatif lebih hidrofilik untuk keju tua
daripada mereka pada tahap muda. Fenomena ini disebabkan proteolisis sebagian kasein
selama pematangan, mengakibatkan peningkatan triptofan paparan pelarut. Untuk menguji
keakuratan FFFS dalam membedakan antara delapan keju lunak, penulis diterapkan FDA
untuk PC yang paling relevan. Hasil diperoleh menunjukkan diskriminasi baik dari keju,
dengan hasil yang lebih baik diperoleh dengan vitamin A spektra (96% dan 93% untuk
sampel kalibrasi dan validasi, masing-masing) dibandingkan dengan spektrum triptofan (95%
dan 92% untuk kalibrasi dan validasi sampel, masing-masing). Namun, dalam penyelidikan
mereka hanya sampel yang diambil dari pusat keju dianalisis, yang mungkin telah mendorong
beberapa interpretasi terbatas dalam kasus keju lunak. Memang, protein rusak, lipolisis, pH,
dll berbeda signifikan antara permukaan dan bagian tengah keju matang lunak. Dengan
demikian, matriks struktur tiga keju lunak retail (M1, M2 dan M3), masing-masing berbeda
proses manufaktur, dipelajari dari permukaan ke pusat keju menggunakan FFFS, antara
teknik lain (Karoui dan Dufour, 2003). Keju irisan, 5-mm, dipotong dari permukaan ke pusat
sampel. PCA diterapkan untuk triptofan spektrum fluorescence dicatat untuk masing-masing
varietas keju menunjukkan baik diskriminasi sampel keju sebagai fungsi dari lokasi mereka.
Lingkungan tryptophan residu ditemukan menjadi lebih heterogen dalam sampel permukaan
daripada di pusat sampel, hal ini disebabkan perubahan dalam tingkat dan jenis dari interaksi
protein-protein dalam jaringan protein tergantung pada sampling zona. Salah satu poin
membatasi penelitian ini adalah rendahnya jumlah keju. Selain itu, hanya triptofan dan
vitamin A fluorescence spektrum direkam untuk ini keju varietas. Oleh karena itu, akan
menarik untuk memvalidasi relevansi ini teknik untuk membedakan keju lunak menurut zona
sampling dengan menggunakan sejumlah besar sampel, dan untuk menguji pengujian
intrinsik lainnya (seperti riboflavin) yang memberikan indikasi pada tingkat oksidasi dalam
keju. Karoui dkk. (2007a) telah dengan demikian baru digunakan FFFS untuk menyelidiki
perubahan pada tingkat molekuler dari kedua eksternal (E) dan tengah (C) zona dari 15 keju
lunak matang diproduksi sesuai dengan tradisional dan stabil keju pembuatan prosedur.
Untuk mengekstrak semua informasi yang terkandung dalam spektrum uorescence fl,
CCSWA diaplikasikan triptofan, vitamin A dan Avin ribofl data spektral set. Pesawat defi ned
Spektrofluorometer

Page 16

oleh komponen umum 1 (Q1) dan 3 (q3) menunjukkan diskriminasi yang jelas antara varietas
keju dan sampling zona (Gambar 7.8a). Mengingat q1, C-M1 dan C-M3 sampel keju
mempunyai nilai skor negatif, sedangkan sampel keju lainnya (E-M1, E-M2, C-M2 dan EM3) menunjukkan nilai sebagian besar positif. Selain diskriminasi, baik dari E dan C zona
keju M1 dan M3 diamati menurut q1 ini. Namun, E-M2 dan C-M2 sampel keju tidak baik
dibedakan, meskipun mereka benar terpisah dari keju varietas lainnya. Gambar 7.8a juga
menunjukkan diskriminasi baik antara keju stabil (E-M3, C-M3) dan keju tradisional (E-M1,
C-M1, E-M2 dan C-M2) secara independen dari zona sampling. Spektral pola triptofan, ribofl
Avin dan vitamin A spektrum uorescence fl terkait dengan q1 yang ditunjukkan pada Gambar
7.8b, 7.8c dan 7.8d, masing-masing. Gambar 7.8b menunjukkan oposisi antara puncak negatif
terletak di 334 nm dan puncak positif pada 387 nm, indicatingas fungsi dari waktu
pematangan dan / atau keju pembuatan prosedur. Lingkungan residu triptofan ditemukan
menjadi relatif lebih hidrofilik untuk keju tua daripada mereka pada tahap muda. Fenomena
ini disebabkan proteolisis sebagian kasein selama pematangan, mengakibatkan peningkatan
triptofan paparan pelarut. Untuk menguji keakuratan FFFS dalam membedakan antara
delapan keju lunak, penulis diterapkan FDA untuk PC yang paling relevan. Hasil diperoleh
menunjukkan diskriminasi baik dari keju, dengan hasil yang lebih baik diperoleh dengan
vitamin A spektra (96% dan 93% untuk sampel kalibrasi dan validasi, masing-masing)
dibandingkan dengan spektrum triptofan (95% dan 92% untuk kalibrasi dan validasi sampel,
masing-masing). Namun, dalam penyelidikan mereka hanya sampel yang diambil dari pusat
keju dianalisis, yang mungkin telah mendorong beberapa interpretasi terbatas dalam kasus
keju lunak. Memang, protein rusak, lipolisis, pH, dll berbeda signifikan antara permukaan
dan bagian tengah keju matang lunak. Dengan demikian,matriks struktur tiga keju lunak retail
(M1, M2 dan M3), masing-masing berbeda proses manufaktur, dipelajari dari permukaan ke
pusat keju menggunakan FFFS, antara teknik lain (Karoui dan Dufour, 2003). Keju irisan, 5mm, dipotong dari permukaan ke pusat sampel. PCA diterapkan untuk triptofan spektrum
fluorescence dicatat untuk masing-masing varietas keju menunjukkan baik diskriminasi
sampel keju sebagai fungsi dari lokasi mereka. Lingkungan tryptophan residu ditemukan
menjadi lebih heterogen dalam sampel permukaan daripada di pusat sampel, hal ini
disebabkan perubahan dalam tingkat dan jenisdari interaksi protein-protein dalam jaringan
protein tergantung pada sampling zona. Salah satu poin membatasi penelitian ini adalah
rendahnya jumlah keju. Selain itu, hanya triptofan dan vitamin A fluorescence spektrum
direkam untuk ini keju varietas. Oleh karena itu, akan menarik untuk memvalidasi relevansi
Spektrofluorometer

Page 17

ini teknik untuk membedakan keju lunak menurut zona sampling dengan menggunakan
sejumlah besar sampel, dan untuk menguji probe intrinsik lainnya (seperti riboflavin) yang
memberikan indikasi pada tingkat oksidasi dalam keju. Karoui dkk. (2007a) telah dengan
demikian baru digunakan FFFS untuk menyelidiki perubahan pada tingkat molekuler dari
kedua eksternal (E) dan tengah (C) zona dari 15 keju lunak matang diproduksi sesuai dengan
tradisional dan stabil keju pembuatan prosedur. Untuk mengekstrak semua informasi yang
terkandung dalam spektrum uorescence fl, CCSWA diaplikasikan triptofan, vitamin A dan
riboflavin data spektral set. komponen umum 1 (Q1) dan 3 (q3) menunjukkan diskriminasi
yang jelas antara varietas keju dan sampling zona (Gambar 7.8a). Mengingat q1, C-M1 dan
C-M3 sampel keju mempunyai nilai skor negatif, sedangkan sampel keju lainnya (E-M1, EM2, C-M2 dan E-M3) menunjukkan nilai sebagian besar positif. Selain diskriminasi, baik
dari E dan C zona keju M1 dan M3 diamati menurut q1 ini. Namun, E-M2 dan C-M2 sampel
keju tidak baik dibedakan, meskipun mereka benar terpisah dari keju varietas lainnya.
Gambar 7.8a juga menunjukkan diskriminasi baik antara keju stabil (E-M3, C-M3) dan keju
tradisional (E-M1, C-M1, E-M2 dan C-M2) secara independen dari zona sampling. Spektral
pola triptofan, riboflavin dan vitamin A spektrum fluorescence terkait dengan q1 yang
ditunjukkan pada Gambar 7.8b, 7.8c dan 7.8d, masing-masing. Gambar 7.8b menunjukkan
oposisi antara puncak negatif terletak di 334 nm dan puncak positif pada 387 nm,
menunjukkan bahwa E-M1, C-M2, E-M2 dan E-M3 sampel keju berada di lingkungan
hidrofilik. Mengenai pola spektral dari Avin ribofl, pertentangan antara dua puncak terletak
sekitar 460 dan 495 nm dan yang terletak di 533 nm diamati (Gambar 7.8c), menunjukkan
bahwa C-M1 dan C-M3 sampel keju yang kurang teroksidasi dari lainnya keju sampel.
Akhirnya, pola spektral dari vitamin A (Gambar 7.8d) adalah ditandai dengan dua puncak
positif pada 313 dan 330 nm dan puncak negatif pada 285 nm. Dari hasil yang diperoleh,
dilaporkan bahwa CCSWA diperbolehkan sangat efesiensi.

Spektrofluorometer

Page 18

Telor dan Produk telor

Industri peternakan ayam modern bukan dipuaskan dengan sistem tradisional dari
penanganan dan proses telor, yaitu berlandaskan menimang dan inspeksi visual. Sekarang ini,
operator alat pengangkutan tidak dapat memeriksa 120 000 telor per jam dan menentukan
kesegaran,berat, infeksi bakteri, buat-buatan dari produksi cacat teknis dan seberang kulit
telur tanpa penyingkiran yang subyektif, fatigability dan kerusakan. Itulah kenapa masalah
dari otomasi dari mutu telor sangat sulit. Agar memastikan tinggi dan mutu telor konsisten,
satu strategi tarik dan alternatif untuk penentu status dari kesegaran telor dapat dicapai oleh
teknologi sensor. Ilmu pengetahuan tentang teknik ini (seperti NIR, MIR, spektroskopi
fluorescence, dsb.) terlihat seperti sangat janji untuk nondestructively menentukan kesegaran
telor, sejak mereka secara relatif murah. Cara demikian tidak dapat menghilangkan kebutuhan
untuk fisiko-kimia lebih terperinci analyses, tapi mungkin mereka tolong untuk menyaring
untuk mencontoh yang memerlukan pengujian selanjutnya.
Kesegaran buat satu kontribusi utama ke mutu dari produk telor dan telor. Salah satu
keprihatinan utama dari industri telor adalah penentuan sistematis dari kesegaran telor, karena
konsumen mungkin merasa variabilitas di kesegaran seperti kekurangan dari mutu. Telur
putih dan kuning telur secara ekstensif dimanfaatkan seperti ramuan karena akibat unik
mereka hak milik fungsional, seperti itu gelling dan berbusa. Berbusa dipergunakan pada
Spektrofluorometer

Page 19

industri makanan pada pembuat dari roti, kue, biskuit kering, eskrim, dsb. kuning telur Ayam
Betina punya baik menjadikan emulsi hak milik. Berbusa dan menjadikan emulsi hak milik
dari albumen dan kuning telur, berturut-turut, terpengaruh konsentrasi protein, pH dan
kekuatan bersifat ion. Perubahan yang terjadi di telor semasa penyimpanan adalah banyak
dan kompleks, dan pengaruhi hak milik fungsional dari albumen kuning telur dan telor.
Perubahan ini meliputi pengenceran dari albumen, peningkatan dari pH, memperlemah dan
regang dari membran vitelline, dan bertambah di air isi suatu kuning telur. Kesegaran dapat
dijelaskan ke beberapa luas oleh perasaan yang obyektif, (bio) kimia, parameter mikrobia dan
fisik, dan dapat oleh karenanya jadi terdefinisi sebagai satu atribut obyektif. Pengetahuan dari
berbagai descriptors dari hak milik yang dihadapi di telor dengan seketika setelah peletakan
harus diketahui, seperti halnya perubahan di hak milik yang mengambil tempat berlalu waktu.
Keterangan ini dapat diperoleh oleh pelaksanaan mengontrol penyimpanan mengadakan
percobaan yang meluas dari waktu setelah meletakkan; rugi di kesegaran dan produksi cacat
dapat jadi dengan demikian monitor.
Posudin (1998) dikaji potensial dari FFFS untuk menentukan kesegaran dari telor dengan
mempergunakan radiasi ultraungu untuk evaluasi berkualitas dari telor dengan taraf berbeda
dari pewarnaan. Pemancaran spectra dengan telor berbeda showed dua maxima menempatkan
pada 635 dan 672 nm setelah eksitasi pada 405, 510, 540 dan 557 nm. Panjang gelombang
eksitasi ini telah berhubungan ke pigmen dari porphyrin dan porphyrin turunan dari florin dan
oxofl orin. Memperoleh hasil showed bahwa intensitas pada 672 nm bergantung kepada
kesegaran telor. Bahwasanya, satu kulit telur memancarkan fluorescence hidup mobil merah
oleh radiasi ultraungu, karena akibat buat-buatan dari porphyrin. Fluorescence otomatis dari
satu telor segar adalah lebih kuat dibandingkan tersebut satu sesuatu tua, sejak intensitas dari
autofluorescence bergantung kepada sejumlah porphyrin pada permukaan kulit. Dari hasil
persiapan ini, pengarang yang menyimpulkan bahwa spektroskopi fl uorescence dapat
menjadi satu pendekatan janji untuk estimasi kwantitatif dari porphyrin di telor dan dengan
demikian untuk menentukan kesegaran telor. Baru-baru ini, dan untuk waktu fi rst, FFFS
biasanya memonitor kesegaran telor selama penyimpanan( Karoui et al. , 2006d, 2006e).
Pengarang yang melaporkan bahwa FMRP (eksitasi, 360 nm; pemancaran, nm 380580)
direkam pada tebal dan albumen tipis dan vitamin satu diteliti pada kuning telur (pemancaran,
410 nm; eksitasi, nm 270350) dapat dipertimbangkan sebagai alat kuat untuk evaluasi dari
kesegaran telor disimpan di suhu-kamar, sementara fluorescence spectrum tryptophan

Spektrofluorometer

Page 20

direkam pada tebal dan albumen tipis dan kuning telur menggagal untuk membedakan di
antara telor segar dan umur.
Mempergunakan eksitasi pada 360 nm, spectrum pemancaran direkam pada albumen
telor tebal segar exhibited dua maximum menempatkan pada 410 dan 440 nm, berturutturut( Figur 7.12). Hasil serupa diperoleh pada albumen tipis dari telor segar. Sangat spectrum
fluorescence karakteristik dari tebal dan albumen tipis dari telor menyimpan dalam jangka
waktu panjang (yaitu. 18 hari atau lebih) di suhu-kamar showed satu bahu menempatkan pada
414 nm dan maksimum di kira-kira 438 nm. Sebagai tambahan, sebagai spectrum showed
perbedaan besar di antara segar tipis / albumen telor tebal dan itu penyimpanan dalam jangka
waktu panjang (29 hari), pengarang yang pertimbangkan spectrum seperti sidik jari untuk
kesegaran kation identifi. Bahwasanya, tebal dan albumen tipis dari telor segar diantara hari
23 dari peletakan yang punya intensitas paling tinggi pada 410 nm, sementara itu dengan
telor umur punya paling rendah. Pengarang yang menyimpulkan bahwa bentuk dari FMRP
dihubungkan dengan waktu penyimpanan: albumen tebal dari telor segar mempunyai rasio
paling rendah dari intensitas fluorescence F.I.440 Nm / F.I.410 Nm

sementara telor tersebut penyimpanan untuk 29 hari yang punya paling tinggi (yaitu. 1. 30).
Perubahan pada rasio F.I.440 Nm / F.I.410 Nm telah dianggap berasal dari ke perubahan pada
kekentalan dari keduanya tebal dan albumen telor tipis, dan formasi dari furosine selama
penyimpanan( Birlouez Aragon et al. , 1998; Kulmyrzaev dan Dufour, 2002). Bahwasanya,
ini telah terkabar yang selama telor penyimpanan, satu penyusutan pada kekentalan dari
albumen tebal diamati( Lucisano et al. , 1996). Fenomena ini telah ditujukan ke pemisahan
dari_fraksi dari ovomucin, kaya di karbohidrat dari ovomucinlysozyme kompleks.
Bagaimanapun, pada pembahasan oleh Karoui et al. (2006d, 2006e) telor disimpan di suhuSpektrofluorometer

Page 21

kamar, dan sedikit perhatian telah diberikan ke infl uence dari variasi suhu dan kelembaban
relatif pada pengukuran fl uorescence, walau Stadelman et al.

(1954) diamati satu

penyusutan linear dari_1.15 unit Haugh per 10C bertambah di suhu test. Sebagai tambahan,
hanyalah satu relatif angka kecil dari telor (n_79) telah diselidiki dan satu relatif kependekan
waktu (29 hari). Oleh sebab itu, Karoui dan coworkers yang telah berlanjut pekerjaan ini
dengan menyelidiki perubahan pada taraf molekular dari 126 telor menyimpan di 12.2C dan
87% RH untuk 1, 6, 8, 12, 15, 20, 22, 26, 29, 33, 40, Hari 47 dan 55( Karoui et al. , 2007c).
Dari hakiki fluorophores menguji, hanyalah PCA berlaku bagi vitamin satu spectrum fl
uorescence ijinkan satu identifikasi bajik dari telor sebagai satu fungsi dari waktu
penyimpanan mereka. Dengan menerapkan FDA ke spectrum AAA NA, membenarkan
kecepatan-angka klasifikasi dari 69.4% dan 63.9% diamati untuk setelan kalibrasi dan
pengesahan, berturut-turut. Sangat hasil serupa diperoleh dengan AAA NA meneliti pada
kuning telur. Hasil terbaik diperoleh dengan vitamin satu spectrum fluorescence, dimana
membenarkan kation kecepatan-angka classifi dari 97.7% dan 85.7% pada setelan kalibrasi
dan pengesahan diperoleh, berturut-turut. Pengarang menyimpulkan vitamin itu satu
spectrum fluorescence menyediakan sidik jari berguna, sebagian besar mengijinkan
identifikasi telor selama penyimpanan di temperatur rendah, dan dapat dipertimbangkan
sebagai satu pembuktian kuat hakiki untuk evaluasi dari kesegaran telor.
Mempertimbangkan bahwa penyimpanan telor di bawah kondisi atmosfer modifi ed
adalah penting untuk memelihara mutu diinginkan mereka, Karoui dan coworkers yang telah
berlanjut pekerjaan ini dengan menguji kemampuan vitamin satu spectrum fl uorescence
untuk memonitor perubahan pada taraf molekular dari 225 telor menyimpan di 12.2C dan
87% RH pada satu atmosfer mengandung 2% (n_108) dan 4.6% (n_99) dari CO 2 untuk 55
hari( Karoui et al. , 2007d). Lagi, vitamin satu spectrum fl uorescence diijinkan diskriminasi
baik dari telor menyetujui terhadap keduanya waktu penyimpanan dan kondisi, sementara
lebih tumpang-tindih di antara telor contoh diamati ketika pembuktian hakiki yang lain
diselidiki. Peta persamaan didefinisikan oleh komponen terpenting 1 (PC1) dan 3 (PC3) dari
telor menggenggam pada satu atmosfer mengandung 2% CO 2 diperlihatkan di Figur 7.13.
Sesuai dengan PC1, bertanggungjawab 90.5% total perbedaan, umur telor 22 hari atau kurang
tayang score negatif menghargai sementara itu dengan 26 hari atau lebih punyai nilai positif.
Sebagai tambahan, telor persehat terpisah untuk masing-masing waktu penyimpanan, kecuali
untuk umur contoh itu hari 20 dan 22 dan umur itu hari 26 dan 29, dimana beberapa
Spektrofluorometer

Page 22

tumpang-tindih diamati. Pengarang menyimpulkan vitamin itu satu spectrum fluorescence

dapat dipertimbangkan satu indikator bajik dari kesegaran telor.

Minyak yang dapat dimakan

Minyak zaitun adalah satu secara ekonomis produk penting dari negara Mediterania.
Ini mempunyai satu bau denda dan rasa senangkan, dengan kesehatan sempurna benefi ts.
Mutu minyak zaitun terbentang dari berkwalitas tinggi minyak zaitun dara ekstra (EVOO) ke
mutu rendah olivepomace minyaki. EVOO diperoleh dari buah dari pohon zaitun oleh
tekanan mekanik dan tanpa proses suling. Kadar keasaman ini tidak dapat lebih besar
dibandingkan 1%. Berhutang ke berkwalitas tinggi ini, ini adalah jenis yang paling mahal
dari minyak zaitun. Untuk alasan ini, ini mungkin berlabel salah atau tercemar untuk alasanalasan ekonomi. Mislabeling sering melibatkan keterangan salah mempengaruhi asal ilmu
bumi atau keanekaragaman minyak( Aparicio et al.

, 1997). Pencemaran melibatkan

penambahan dengan minyak lebih murah; alat pemalsu paling umum dirikan di minyak
zaitun dara adalah minyak zaitun refi ned, minyak sisa, buah zaitun buatan produk oil
glycerol, bibiti minyak (seperti itu sunfl ower, kedelai, jagung dan rapeseed) dan minyak biji
kacang (buah hazelnut seperti itu dan minyak kacang tanah) ( Baeten et al. , 1996; Downey
et al. , 2002; Sayago et al. , 2004). Berhutang ke murah buah zaitun pomace minyaki, ini
sering menjadi dipergunakan untuk EVOO tercemar. Untuk alasan ini, satu cara cepat untuk
mendeteksi praktek seperti itu adalah penting untuk penggunaan gugus kendali mutu dan
pelabelan.

Spektrofluorometer

Page 23

Beberapa ilmu pengetahuan tentang teknik biasanya mendeteksi pencemaran minyak

zaitun, meliputi reaksi colorimetric, dan penentuan dari nilai iodin, kation nilai saponifi,
kepadatan, sifat merekat, absorbansi indeks bias dan ultra lembayung( Gracian, 1968).
Bagaimanapun, cara ini mungkin pemakan waktu, dan perlukan manipulasi contoh. Untuk
mengatasi kesulitan ini, ilmu pengetahuan tentang teknik lain telah diterapkan. Yang paling
penting adalah ilmu pengetahuan tentang teknik spectroscopic seperti NIR, MIR, resonansi
magnetik nuklir (NMR) dan spektroskopi fluorescence.
Zandomeneghi et al.

(2005) direkam spectrum fl uorescence dari EVOO

mempergunakan sudut siku-siku dan FFFS. Mantan cara perkakas peradaban kuno pantas
dipertimbangkan showed dan cacatnya bentuk, sementara belakangan menyediakan spectrum
yang adalah banyak kurang iba oleh swaserapan. Pengarang menujukan ini ke gejala
swaserapan ketika mempergunakan fl uorescence sudut siku-siku, bahkan ketika spectrum
dibenarkan untuk bagian dalam fi lter pengaruhi. Pada pembahasan lain, Sayago et al. (2004)
spektroskopi fl uorescence teraplikasi untuk buah hazelnut pelacak meminyaki pencemaran di
minyak zaitun dara. Buah zaitun gadis, buah hazelnut gadis dan buah hazelnut minyak refi
ned contoh dan satu campuran dari mereka pada 5, 10, 15, 20, Pencemaran 25 dan 30%
diteliti setelah eksitasi pada 350 nm. Dengan melaksanakan linear analisa discriminant
(LDA), 100% kation classifi benar dicapai. Pada satu pendekatan serupa, Kyriakidis dan
Skarkalis (2000) dipergunakan satu panjang gelombang eksitasi dari 360 nm untuk
membedakan di antara umum minyak nabati, meliputi minyak zaitun, sisa meminyaki bersifat
zaitun, minyak zaitun refi ned, minyak jagung, minyak kacan kedelai, sunfl ower meminyaki
dan minyak kapas. Semua minyak yang mempelajari showed satu fluorescence kuat satukan
di nm 430450, kecuali untuk minyak zaitun dara, yang exhibited satu intensitas rendah pada
berdua 440 dan 455 nm, satu sarana menyatukan di sekitar 681 nm dan satu band kuat pada
525 nm.
Belakangan dua band telah dianggap berasal dari ke butir hijau daun dan vitamin e
senyawa, berturut-turut. Sangat rendah intensitas dari puncak pada 445 dan 475 nm
sehubungan dengan ketinggian isi suatu phenolic antioxidants, sediakan yang lebih
kemantapan melawan oksidasi. Semua minyak disuling showed hanya puncak keras sesuatu
pada 445 nm, yaitu sehubungan dengan produk oksidasi asam yang mengandung lemak

Spektrofluorometer

Page 24

membentuk sebagai hasil persentase besar dari asam yang mengandung lemak hadiah
polyunsaturated di minyak ini.
Pada tahun terbaru, peningkatan peralatan dan availabilitas dari perangkat lunak
secara khusus didisain ke ekstrak keterangan yang dikandung di yang spectrum telah
menyokong ke pembangunan dari spektroskopi fluorescence. Karenanya, ini kemungkinan
untuk merekam satu fluorescence acuan excitationemission untuk masing-masing contoh
yaitu seperangkat spectrum pemancaran direkam pada beberapa panjang gelombang eksitasi.
Sikorska et al. (2004a, 2005) dipergunakan spektroskopi fluorescence synchronous dengan
panjang gelombang eksitasi dari 250 ke 450 nm dan spectrum pemancaran pada jangkauan
290 ke 700 nm. Puncak menempatkan pada 320 nm setelah eksitasi pada 290 nm telah
ditujukan ke tocopherols, sementara band menempatkan pada 670 nm di emisi dan 405 nm di
eksitasi milik pigmen dari group butir hijau daun. Agar membandingkan setelan spectrum
fluorescence synchronous dengan minyak berbeda Sikorska et al.

(2005) diterapkan k

tetangga paling dekat (k NN) kiat, dan diskriminasi baik di antara minyaki contoh dengan
satu sangat rendah kation kesalahan classifi membunyikan di antara 1 dan rendah 2% dan
satu nilai simpangan baku diperoleh.
Pada satu pendekatan berbeda, Guimet et al. (2004) teraplikasi PARAFAC dan tidak
lipat PCA agar mengaji potensial dari FFFS untuk membedakan di antara dara dan minyak
zaitun murni; jangkauan mempelajari ada di panjang gelombang eksitasi (bekas) nm 300
400, panjang gelombang pemancaran (emisi) nm 400695, dan

bekas_nm 300400, em

nm 400600. Jangkauan fi rst ditemukan untuk mengandung butir hijau daun, sedangkan
jangkauan detik mengandung hanyalah f spectrum uorescence dari senyawa sisa (produk
oksidasi dan vitamin e). Pada 2005, Guimet dan coworkers menerapkan PARAFAC untuk
mendeteksi pencemaran dari EVOO dengan zaitun pomace minyaki di taraf rendah (5%).
Diskriminasi di antara kedua-duanya jenis dari minyak dicapai dengan menerapkan berdua
LDA dan discriminant multi cara PLS regresi; belakangan berikan 100% kation classifi benar.
Pada pembahasan lain, Poulli et al. (2005) dipergunakan synchronous fl uorescence
untuk meneliti 73 contoh, meliputi 41 yang dapat dimakan dan 32 minyak zaitun gadis
lampante, dikumpulkan di Oktober dan Bulan November 2002. Spectrum pemancaran pada
jangkauan 350720 nm di panjang gelombang eksitasi membedakan dari 320 ke 535 nm
Spektrofluorometer

Page 25

direkam. Dengan menerapkan PCA dan analisa gugus hirarkis, klasigfikasi kation baik
memisahkan kedua-duanya jenis dari minyak diperoleh. Baru-baru ini, penelitian yang sama
menggolongkan kaji potensial fluorescence synchronous penjumlahan spectrum untuk
mendeteksi pencemaran dari VOO (minyak zaitun gadis) dengan minyak lain ( Poulli et al. ,
2007). Dengan menerapkan PLS regresi ke spectrum eksitasi direkam pada 250720 nm
dengan satu interval panjang gelombang dari 20 nm, tunjangan pengarang yang FFFS adalah
berguna untuk pelacakan dari pomace buah zaitun, jagung, sunfl ower, kacang kedelai,
rapeseed dan minyak kemiri di VOO di taraf dari 2.6%, 3. 8%, 4. 3%, 4. 2%, 3. 6% dan
13.8%, berturut-turut.
Potensial spektroskopi fluorescence untuk memonitor pembusukan minyak goreng
telah dipertunjukkan oleh penggunaan lima memilih panjang gelombang eksitasi
membedakan dari 395 nm ke 530 nm( Engelsen, 1997). Dengan menerapkan PLS regresi,
pengarang korelasi baik showed di antara spectrum fluorescence dan parameter mutu
mendeskripsikan pembusukan (misalnya anisidine hargai, nilai iodin, oligomers dan vitamin
E).
Produk gandum dan gandum
Potensial spektroskopi fluorescence untuk gandum monitoring telah tingkat berlalu
masa lalu beberapa tahun dengan menyebarkan aplikasi dari alat chemometric dan dengan
teknis dan pembangunan optis dari spectrofluorometer. Zandomeneghi (1999) FFFS terpakai
(eksitasi, 275 nm; pemancaran, nm 280575) untuk membedakan di antara tepung gandum
berbeda (beras, creso, jagung, panda). Penelitian yang sama menggolongkan juga eksitasi
tampak yang dimanfaatkan memada 445 nm (pemancaran, nm 460600) untuk membedakan
di antara tepung dari keanekaragaman gandum berbeda fi ve, dan diskriminasi baik diamati.
Pada pembahasan lain, panjang gelombang eksitasi memada 275, 350 dan 450 nm
menyajikan fluorescence emisi maximum pada 335, 420 dan 520 nm, berturut-turut,
dimanfaatkan untuk menggolongkan komponen tisu tumbuhan dari gandum kompleks fl kita
dan tepung gandum hitam; band ditujukan ke AAA, asam ferulic dan komponen ribofl avin,
berturut-turut. Komponen berpijar terakhir dikonfirmasikan oleh Zandomeneghi dan
coworkers (2003), siapa ditujukan band mengamati pada 520 nm ke ribofl avin, dimana satu
solusi standar pada konsentrasi berbeda dipergunakan, sementara band di antara 430 dan 530
nm ditemukan sebanding ke lutein isi suatu fl kita( Zandomeneghi et al. , 2000).
Spektrofluorometer

Page 26

Asam Ferulic dan spectrum riboflavin telah dilaporkan untuk mempunyai keakuratan
baik ketika memonitor gandum fl refi nement kita dan giling effi ciency dengan
mempergunakan

fluorescence

menggambar,dan

kation

classifi

sukses

diperoleh,

menyarankan bahwa FFFS biasanya menggolongkan perbaikan mutu tanah gandum( Symons
dan Dexter, 1991, 1992, 1993, 1996). Hasil ini baru-baru ini telah adalah confi rmed oleh
Karoui et al. (2006f) . Pada pembahasan kita, fluorescence spectrum tryptophan dari 59
contoh (20 KamutR lengkap, setengah lengkap KamutR dan tepung terigu lunak, 28 pasta
dan 11 semolinas membuat dari melengkapi KamutR, setengah lengkap KamutR dan gandum
sulit fl milik kita) diteliti setelah eksitasi pada 290 nm. PCA melaksanakan pada fl milik kita
spectrum dengan jelas lengkap yang dibedakan KamutR dan setengah melengkapi KamutR
mencontoh dari itu dihasilkan dari lengkap dan tepung terigu lunak semicomplete, sementara
diskriminasi bajik dari contoh pasta membuat dari melengkapi KamutR dan melengkapi
gandum sulit fl milik kita dari itu terbuat dengan semicomplete KamutR dan setengah
melengkapi tepung terigu keras dicapai. Diskriminasi terbaik diperoleh dari spectrum
tryptophan direkam pada semolinas, sejak empat group persehat bedakan. Bahwasanya,
dengan menerapkan FDA ke koleksi spektral, 86. 7% dan 87.9% kecepatan-angka benar
kation classifi diperoleh untuk contoh kalibrasi dan pengesahan, berturut-turut. Pada satu
pendekatan serupa, RAM et al. (2004) dikaji potensial dari FFFS untuk membedakan di
antara merah dan daging buah gandum putih. Spectrum pemancaran (nm 370570) direkam
setelah eksitasi pada 350 nm, dan satu perbedaan bersih diamati di antara kedua-duanya
group contoh; perbedaan ini telah ditujukan ke variasi analisa pada pericarp, dan organisasi
nuklir dari kedua-duanya keanekaragaman dari gandum. Pengarang menyimpulkan bahwa
FFFS YANG punya potensial satu cepat, lowcost dan effi cient kiat untuk pengesahan dari
produk gandum.
Bir dan anggur
Bir adalah satu campuran kompleks terdiri sebagian besar dari air dan ethanol dengan
kesana-sini 0.5% padat terlarut. Oleh sebab itu, analisa bir adalah penting untuk evaluasi dari
organoleptic karakteristik, berkualitas, aspek perihal nutrisi dan keselamatan. Apperson et al.
(2002) dilaporkan fluorescence itu spectrum dari bir bangun dari komponen berbeda seperti
amino asam, polyphenols dan ISO_asam. Bahwasanya, spectrum fluorescence direkam pada
Spektrofluorometer

Page 27

21 contoh gelap dan bir cahaya exhibited dua puncak dengan eksitasi / maximum pemancaran
ditempatkan pada 290 / 340 nm dan 340 / 430 nm( Christensen et al. , 2005). Yang pertama
puncak ditujukan ke protein dan belakangan ke kompleks polyphenol dan ISO_asam. Dengan
membandingkan spectrum merekam pada bir cahaya menyajikan tiga taraf berbeda dari
kepahitan (8. 8, 16. Internasional 1 dan 28.5 unit Pahit (IBU)), bir mencontoh menyajikan
taraf paling tinggi dari pahit tidak membedakan signifi cantly dari yang lain dua,
menyarankan pahit itu asam bukan penyokong utama ke fl uorescence isyaratkan. Regresi
PLS sesudah itu berlaku bagi spectrum fluorescence agar mengaji potensial dari ilmu
pengetahuan tentang teknik ini untuk menentukan warna dan kepahitan dalam kaitan dengan
IBU. Hasil terbaik diperoleh oleh penggunaan tiga panjang gelombang eksitasi, pada 260,
270 dan 290 nm,sejak satu akar pegawai rendahan memaksudkan kesalahan persegi dari
pengesahan salib (RMSECV) dari 2.77 IBU dibandingkan dengan spektrum penuh (3. 56)
diamati.
Pada pembahasan lain, Sikorska et al. (2004b) terpakai fluorescence untuk menandai
pembuktian hakiki dari delapan bir Semir berbeda. Spectrum tiga dimensi diperoleh dengan
mengukur spectrum pemancaran pada terbentang dari 290 ke 700 nm di panjang gelombang
eksitasi terbentang dari 250 ke 500 nm. Spectrum fluorescence showed satu secara relatif
band keras dengan eksitasi pada tentang 250 nm dan pemancaran pada 350 nm, lain dengan
eksitasi pada 350 nm dan pemancaran pada 420 nm, dan satu final satu, menyajikan
pemancaran paling sedikit keras satukan, dengan eksitasi pada 450 nm dan pemancaran pada
520 nm. Puncak ini dianggap berasal dari ke amino asam berbau harum, NADH, B2 vitamin,
B6

dan

B12,

dan

ini

dikonfirmasikan

kemudian

oleh

penelitian

yang

sama

golongkan( Sikorska et al. , 2006; Sikorska, 2007). Dengan menerapkan PLS regresi ke
spectrum yang merekam setelah eksitasi memada 450 nm dan konten riboflavin menentukan
berdasarkan referensi ilmu pengetahuan tentang teknik, korelasi baik diamati sebagai satu r
0.97 ditemukan. Memperoleh hasil confi rmed bahwa FFFS dapat biasanya mengukur
vitamin b 2 di bir. Bagaimanapun, berhutang ke angka rendah dari contoh, penelitian lebih
perlu sebelum mengakui potensial dari ilmu pengetahuan tentang teknik ini, dan ini akan
tertarik untuk menghubungkan karakteristik spektral dari bir untuk tahu klasifikasi bir, seperti
halnya specific hak milik bir ke kemampuan dari FFFS untuk mengukur AAA NA.
Baru-baru ini, isi phenolic dari buah anggur jenis beri telah menjadi perhatian suatu
parameter penting dalam penentuan mutu anggur, terutama dalam hal warna, cita rasa dan
Spektrofluorometer

Page 28

struktur anggur. Campuran Phenolic dan anthocyanins pada varitas buah anggur merah,
biasanya dievaluasi secara spectrophotometric pada ekstraksi buah anggur merah. Cara ini
memerlukan waktu, dan kemungkinan meninggalkan bekas karena ketidakstabilan pigmen
dan hilangnya materi. Lagipula, komposisi dan evolusi senyawa phenol buah beri yang masak
bergantung kepada varitas buah anggur, praktek viticultural dan faktor lingkungan. Oleh
sebab itu, senyawa anthocyanin telah dipilih sebagai marker dalam pematangan senyawa
phenolic karena proses evolusinya saat pematangan serupa dengan kulit senyawa tannin.
Agati et al. (2007) menggunakan FFFS untuk membedakan antara dua varitas buah anggur
pada dua waktu yang berbeda. Spektrum eksitasi terekam pada kisaran 280650 nm untuk
penentuan emisi pada tingkat 685 nm, sedangkan spectrum emisi discan antara 630 dan 800
nm dengan eksitasi pada tingkat 436 nm. Spectrum eksitasi memperlihatkan dua lokasi
maksimum pada 440 dan 480 nm, sesuai dengan puncak serapan utama dari klorofil adan b
dan serta carotenoid. Suatu pengurangan intensitas fluoresensi dengan tingkat kematangan
buah harus dicatat. Dengan demikian, kematangan senyawa phenolic di kebun anggur dapat
ditentukan dengan menggunakan media portabel yang tepat dengan memperhatikan
fluoresensi spektroskopi. Pada penelitian lainnya, Dufour et al.

(2006) mengkaji EFFS

potensial untuk membedakan 120 sampel anggur dihasilkan di Perancis dan Jerman.
Spektrum emisi (275450 nm) dan spectrum eksitasi (250350 nm) terekam secara langsung
pada sampel anggur. Spektrum emisi ditandai hingga pada tingkat maksimum 376 nm dan
sebuah bahu pada tingkat 315 nm, sementara spectrum eksitasi menunjukkan dua puncak
yang terletak di sekitar 260 dan 320 nm. Melalui penggunaan metode PCA pada kumpulan
spektrum eksitasi, diskriminasi yang jelas antara anggur Perancis dan anggur Jerman dapat
diamati. Klasifikasi yang tepat tentang jenis dan bukan jenis Beaujolais mencapai 95% telah
diamati untuk fluoresensi emisi data yang telah ditentukan. Penulis menyimpulkan bahwa
FFFS dimungkinkan untuk menggunnakan manfaat sidik jari dan memperbolehkan
identifikasi anggur sesuai dengan keanekaragaman (varitas) dan jenisnya.
Gula
Pada kombinasi analisa statistik multivarian, spektroskopi fluoresensi telah terbukti
menjadi metode skrining yang menjanjikan untuk menyimpulkan kualitas parameter pada
sampel gula bit ar contoh( Munck et al. , 1998). Bahwasanya, ini telah terlihat bahwa gula
komersil menunjukkan karakteristik fluorescence , yang biasanya memperoleh keterangan
yang berhubungan dengan konstituen kecil pada gula. Spectrofluorometry diterapkan proses
Spektrofluorometer

Page 29

pembuatan gula beet bagi pabrikasi manis gula umbi berjalan dengan penggunaan dari analisa
data multivariate( Munck et al. , 1998). Pendekatan yang sama dengan banyak eksitasi dan
emisi panjang gelombang pemancaran digunakan oleh Tukang Kayu dan Tembok (1972)
telah dikerjakan, tetapi evaluasi chemometric dari pemandangan excitationemission
biasanya digunakan keterangan relevan ekstrak dari data. Pada materi dari sampel gula beet ,
ini memungkinkan klasifikasi untuk menggolongkan contoh gula putih sesuai dengan kilang
dan untuk memprediksi parameter mutu seperti nitrogen amino, warna dan abu dari data
sampel fluorescence ( Norgaard,1995). Data fluorescence dari sampel jus tebal
memperlihatkan hasil yang rancu dengan komposisi sampel lebih rumit. Pembahasan lain dari
sampel gula beet dimanfaatkan struktur tiga dimensi dari komponen gambaran excitation
emission untuk memecahkan spektral eksitasi dan profil emisi dari fluorophores dalam gula
dengan banyak cara model chemometric, PARAFAC( Bro, 1999).
Empat komponen berpijar ditemukan untuk menangkap variasi pada data fluorescence
dari 268 sampel gula dikumpulkan dari satu kilang manis gula umbi di kampanye tunggal,
dan dua diantara mereka showed spectra dengan satu persamaan tutup ke fluorescence murni
spectra dari amino asam tyrosine dan tryptophan. Konsentrasi dari empat komponen menaksir
dari contoh gula dapat dihubungkan dengan beberapa parameter mutu dan proses, dan mereka
ditandai sebagai unsur indikator potensial dari ilmu kimia pada proses gula, yang yang telah
confi rmed oleh penggunaan dari analisa HPLC mengombinasikan dengan pelacakan
fluorescence pada contoh jus tebal dan evaluasi oleh PARAFAC( Baunsgaard et al. , 2000a).
Tujuh fluorophores dipecahkan dari jus tebal. Terpisah dari tyrosine dan tryptophan, empat
dari fluorophores diidentifikasi sebagai bobot molekul tinggi kombinasikan, yaitu
berhubungan ke bahan-warna menyerap pada 420 nm. Tiga bobot molekul tinggi senyawa
ditemukan polimer kemungkinan reaksi Maillard. Terakhir dari tujuh fluorophores menandai
satu senyawa dengan polyphenolic karakteristik. Pada satu pembahasan fluorescence dari 47
gula rotan mentah yang dikumpulkan dari banyak lokasi berbeda dan tahun kampanye, tiga
individu fl uorophores ditemukan; salah satu mereka, mewakili eksitasi maksimum dan
pemancaran pada 275 dan 350 nm, berturut-turut, ditandai sebagai satu pendahuluan warna
ultra lembayung yang berpartisipasi di pembangunan warna selama penyimpanan. Yang lain
dua (340, 420 nm dan 390, 460 eksitasi nm / pemancaran pada panjang gelombang tampak
area), dipertimbangkan bahan-warna potensial, yang pertunjukan suatu hubungan dengan
perilaku fluorescence mereka( Baunsgaard et al. , 2000b).

Spektrofluorometer

Page 30

Baru-baru ini, FFFS biasanya memonitor pencemaran dari madu dengan sirop gula
rotan( Ghosh et al. , 2005). Lima contoh madu mengekstrak dari Apis fl orae sarang dan
sepuluh contoh gula rotan komersil diselidiki. Mempergunakan satu panjang gelombang
eksitasi dari 340 nm, contoh madu murni ditandai oleh dua fitur terkemuka satu bahu
menempatkan di di sekitar 440 nm dan maksimum terlokasi pada 510 nm, yang yang telah
dianggap berasal dari ke flavins yang mencambuk contoh sirop gula exhibited maksimum
menempatkan di sekitar 430 nm. Terlokasi yang mencapai puncak pada 440 dan 430 nm pada
madu murni dan contoh sirop gula telah ditujukan ke NADH. Synchronous sekarang
kemudian berlaku bagi membedakan di antara madu murni dan contoh sirop gula, dan
diskriminasi baik di antara kedua-duanya group diamati. spectra untuk mencambuk sirop gula
ditandai oleh satu bahu di sekitar 305 nm dan satu band terkemuka sekitar 365 nm, sementara
memadui contoh yang punya satu puncak kuat sekitar 460 nm dan satu banyak puncak lebih
lemah sekitar 365 nm. Pengarang yang amati satu peningkatan di intensitas pada 365 dan 425
nm, seperti halnya rasio dari intensitas fluorescence (FI), FI 365 / FI 425, dengan peningkatan
dari konsentrasi sirop gula rotan; dengan demikian rasio dari intensitas dari synchronous fl
uorescence dari spectrum pada 365 nm ke tersebut 425 nm telah disarankan sebagai satu cara
potensial untuk memonitor pencemaran dari madu dengan sirop gula rotan. Pada pembahasan
lain, FFFS adalah juga dipergunakan untuk tentukan asal tumbuhan dari madu( Ruoff et al. ,
2005; Karoui et al. , 2007e). Spectrum fluorescence diteliti pada 62 contoh madu kepunyaan
tujuh asal berhubungan dengan bunga setelah eksitasi pada 250 nm (pemancaran, nm 280
480), 290 nm (pemancaran, nm 305500) dan 373 nm (pemancaran, nm 380600), dan
pemancaran memada 450 nm (eksitasi, nm 290440). Dengan menerapkan FDA ke empat
kumpulan data (penggabungan), membenarkan kecepatan-angka klasifikasi dari 100% dan
90% diamati untuk contoh kalibrasi dan pengesahan, berturut-turut. Sebagai tambahan tujuh
jenis madu persehat bedakan, menandai bahwa alam lingkungan molekular, dan dengan
demikian hak milik fisiko-kimia, dari menyelidiki madu adalah berbeda. Salah satu
penemuan utama dari pembahasan ini adalah bahwa FFFS mungkin satu ilmu pengetahuan
tentang teknik pantas dan alternatif untuk menggolongkan contoh madu sesuai dengan asal
tumbuhan mereka; ini dikonfirmasikan baru-baru ini oleh Ruoff et al.

(2006) , siapa

dipelajari 371 contoh madu memulai dari Switzerland, Jerman, Italia, Spanyol, Perancis,
Slovenia dan Denmark. Dengan mempergunakan alat chemometric, laju kesalahan dari
discriminant memodelkan terbentang dari 0.1% ke 7.5%.

Spektrofluorometer

Page 31

Buah dan sayur

Butir hijau daun fluorescence telah dipergunakan sebagai satu pembuktian hakiki untuk
menentukan status fisiologis dari pabrik utuh dan organ tanaman( Lagu et al. , 1997).
Komponen ini telah dipertimbangkan satu effi cient memeriksa untuk memonitor apel selama
pematangan, jadi masak dan senescence( Lagu et al. , 1997). Baru-baru ini, spektroskopi
fluorescence telah dipertimbangkan untuk mempunyai potensial untuk mengaji mealiness
dari apel( Moshou et al ; 2005), sejak secara relatif korelasi baik diperoleh di antara
mealiness dan spectra fluorescence. Pengarang lain mempunyai terpakai fluorescence butir
hijau daun dari apel sebagai satu peramal potensial dari superfi cial membakar dengan cairan
panas pembangunan selama penyimpanan ( DeEll et al. , 1996), dan untuk estimasi dari
anthocyanins dan penjumlahan fl avonoids di apel( Hagen et al. , 2006). Pada pembahasan
lain, Lotze et al.

(2006) mempergunakan fluorescence menggambar sebagai satu

nondestructive kiat untuk pra panen pelacakan dari lubang pahit di apel; ilmu pengetahuan
tentang teknik yang sama telah dimanfaatkan untuk menentukan mutu apel ( Seiden et al. ,
1996; Noh dan Lu, 2007). Dua panjang gelombang eksitasi, pada 265 dan 315 nm, dipilih,
saat mereka menghasilkan spectrum richest dari dua keanekaragaman apel jus (Jonagold dan
Elstar). Spectrum showed dua maxima excitationemission (315 / 440 dan 265 / 350 nm)
yang belum ditujukan ke apapun komponen di apel sari buah buah( Seiden et al. , 1996).
Menerapkan PCA untuk kedua-duanya jus keanekaragaman apel, diskriminasi baik diamati
yang mana bukan dicapai dengan kadar keasaman titrable atau data padat yang dapat larut.
Pengarang yang menunjukkan bahwa satu peningkatan pada proses jadi masak dari apel
melibatkan satu peningkatan pada senyawa berpijar yang dapat larut. Korelasi baik di antara
padat yang dapat larut dan spectrum fluorescence diamati dengan mandiri dari
keanekaragaman apel, menandai kemungkinan dari model kemajuan di kedewasaan dengan
keterangan

memperoleh

dari

spectrum,

sementara

fluorescence

ditemukan

untuk

menghubungkan dengan kurang baik ke sejumlah titrable asam di jus.

Identifikasi dari bakteri dari daya tarik makanan agro
Identifikasi dari jasad renik dari daya tarik makanan agro di makanan dan makanan
produk oleh konvensional phenotypic memprosedur berlandaskan bentuk kata dan biokimia

Spektrofluorometer

Page 32

test melibatkan sejumlah besar bahan reaksi, dan dalam beberapa hal yang tidak dapat untuk
bedakan jasad renik pada taraf regangan. Di hubungan kalimat ini, Leblanc dan Dufour
(2002) dikaji potensial dari pembuktian hakiki yang berbeda (yaitu. tryptophan, AAA NA,
dan NADH) untuk membedakan di antara 25 regangan bakteri pada pemecatan sementara
encer. Hasil terbaik diperoleh oleh AAA NA Spectra penggunaan, dimana membenarkan
kecepatan-angka klasifikasi dari 100% dan 81% diamati untuk contoh kalibrasi dan
pengesahan,berturut-turut. Pengarang yang mencatat fluorescence itu spektroskopi mampu
untuk discriminateand mengidentifikasi bakteri di jenis, taraf jenis dan regangan. Mereka
menyimpulkan bahwa ilmu pengetahuan tentang teknik fluorescence juga dapat punya
aplikasi pada fi eld dari perkembangan hasil bakteri monitoring. Dugaan ini adalah
kemudiannya dipertunjukkan oleh penelitian yang sama golongkan( Leblanc dan Dufour,
2004). Pada pembahasan mereka, spectrum dari tiga regangan bakteri( L. lactis, S. carnosus
dan E. coli ) direkam pada perkembangan berbeda tahapkan. Dengan menerapkan PCA ke
spectrum yang diteliti pada masing-masing bakteri, tiga group sesuai dengan tiga tahap utama
dari perkembangan adalah identifi ed (tahap keter, tahap bersifat exponen dan tahap
keperluan). Pengarang maka mengumpulkan spectrum yang direkam pada tiga bakteri ke
dalam acuan sesuatu, dan acuan baru ini diteliti oleh PCA. Memperoleh hasil diskriminasi
baik showed dari spectrum sesuai dengan bakteri dan profil metabolic. Baru-baru ini, Dufour
dan coworkers memanfaatkan ilmu pengetahuan tentang teknik yang sama untuk identifikasi
dari bakteri asam susu mengisolasikan dari satu fasilitas kecil-kecilan menghasilkan sosis
kering tradisional( Ammor et al. , 2004). Lagi, spektroskopi fluorescence mempertunjukkan
kemampuan ini untuk membedakan di antara Lactobacillus sakei subsp.

carnosus dan

Lactobacillus sakei subsp. sakei . Pada pendekatan lain, Leriche et al. (2004) diisolasikan
30 Pseudomonas spp. regangan dari perah susu, air, keju memusat dan permukaan keju dari
dua susu mentah tradisional pabrikasi bengkel Orang Suci keju Nectaire. Dengan menerapkan
FDA untuk kedua-duanya kumpulan data, jelas pertalian di antara group dari mengisolasikan
dicatat. Di yang pertama bengkel, susu dicakup menjadi sebagai sumber sendiri dari
pencemaran keju, sedangkan pada bengkel detik pusat susu dan keju mengisolasikan
ditemukan serupa, tapi berbeda dari keju permukaan isolasikan. Pengarang yang menujukan
pencemaran ini pada permukaan keju ke air yang mempergunakan selama proses jadi masak
(cuci dari permukaan keju). Dari hasil yang peroleh, ini dinyatakan bahwa ini kemungkinan
untuk tandai, bedakan dan lacak Pseudomonas spp. regangan mempergunakan ilmu
pengetahuan tentang teknik fluorescence. findings ini dikuatkan oleh korelasi tinggi
Spektrofluorometer

Page 33

(mempergunakan CCA) diamati di antara kumpulan data yang memperoleh dari metabolic
profi ling dan spektroskopi fluorescence.
Mempengaruhi field ini, Kunnil et al.

(2005, 2006) dipergunakan panjang

gelombang eksitasi berbeda (280, 310, 340, 370 dan 400 nm) untuk kation identifi dari tiga
berbeda Baksil spora mencampur dengan salah satu tiga contoh berbeda dari debu domestik.
Dengan menerapkan
benar identifikas

PCA, spektroskopi fl uorescence showed satu janji kuat di dengan

spora hasil bakteri. Lebih dari itu, pengarang yang disuksesi di dengan

benar seikat bersama-sama contoh berbeda dari Baksil spora sebelum dan setelah spora telah
dicuci dan ulang dikeringkan.
Keuntungan dan kerugian dari Spektroskopi fluorescence
Keuntungan
Spektroskopi fluorescence adalah satu ilmu pengetahuan tentang teknik relevan
analitis karena akibat kepekaan ekstrim ini dan kota specifi sempurna. Bahwasanya, cara
spectrofluorometric dapat mendeteksi konsentrasi dari komponen serendah sesuatu pisahkan
pada 10, dengan satu kepekaan 1000 times lebih besar dibandingkan tersebut paling
spectrophotometric kiat. Alasan utama untuk kepekaan ditingkatkan ini dapat dijelaskan oleh
fakta itu di fluorescence memancarkan pancaran dapat ditingkatkan atau penurunan oleh
perubahan intensitas dari energi radiasi rangsang.
Mempengaruhi kota specifi dari fluorescence, ini dapat dijelaskan oleh dua faktor;
yang pertama adalah itu lebih sedikit fluorescent mengombinasikan berada bandingkan
dengan sesuatu sangat menarik, sejak semua senyawa berpijar harus menyerap pancaran
tetapi bukan semua senyawa yang pancaran penyerap pancarkan; detik adalah itu dua panjang
gelombang dipergunakan di fluoremetry, sedangkan hanya satu dipergunakan di
spectrophotometry. Sebagai tambahan, dua unsur yang pancaran penyerap pada panjang
gelombang yang sama akan mungkin tidak memancarkan pada panjang gelombang yang
sama. Perbedaan di antara eksitasi dan puncak pemancaran terbentang dari sedikit ke
beberapa panjang gelombang. Ini adalah berharga mencatat bahwa spektrum emisi adalah
sangat dependen pada panjang gelombang eksitasi; eksitasi berdua dan pemancaran spectra
Spektrofluorometer

Page 34

dapat diperoleh. Dengan demikian, keuntungan dari spektroskopi fluorescence adalah absensi
dari campur tangan, dan itu data order lebih tinggi dapat diperoleh dari ini.
Kerugian
Kerugian yang paling menjengkelkan dari spektroskopi fluorescence adalah
ketergantungan kuat dari sebar cahaya, dan tidak ada berarti untuk koreksi matematis
pembuatan, karena tidak ada keterangan mempengaruhi sejumlah sebar dikandung pada
spektrum.
Kerugian lain adalah ketergantungan ini pada faktor lingkungan seperti suhu, pH,
kekuatan bersifat ion, sifat merekat, suhu, dsb., punyai yang defi ned dan terkontrol semasa
analyses agar memperoleh pengukuran yang dapat direproduksi. Radiasi ultraungu yang
dipergunakan untuk eksitasi mungkin menyebabkan photochemical berganti dan / atau
hancurnya fluorescent kombinasikan, yang yang akan mempengaruhi satu penyusutan pada
intensitas fluorescence. Untuk alasan ini, jaga-jaga harus diambil oleh (aku ) penggunaan
panjang gelombang terpanjang pancaran, (ii.) meneliti spektrum eksitasi dan pemancaran
dengan seketika setelah memperbaiki pemancaran atau panjang gelombang eksitasi, (iii.)
tidak mengijinkan pancaran untuk membentur contoh dalam jangka waktu panjang, dan (iv.)
melindungi solusi tidak stabil photochemically (kina seperti itu sulfate) dari laboratori cahaya
matahari dan ultra lembayung cahaya dengan menyimpan mereka pada botol hitam.
Kerugian lain dari cara adalah fenomena pemuduran, yaitu pengurangan dari
fluorescence oleh satu bersaing menonaktifkan proses akibat oleh interaksi di antara satu
fluorophore dan unsur lain tayang pada sistem. Mekanisme umum dari pemuduran dapat
ditandakan sebagai berikut:
M _ h _ M* (Light absorption)
M* M _ h _ (Fluorescence emission)
M* _ Q Q* _ M (Quenching)
Q* Q _ energy
M_h_? M* (Batas serapan cahaya)
M*? M_h_ (Pemancaran fluorescence)
M*_Q? Q*_M (Pemuduran)
Spektrofluorometer

Page 35

Q*? Q_daya
Kesimpulan
Seperti digambarkan di bab ini, hakiki fluorophores merekam pada sistem makanan
tetap utuh mengandung keterangan berharga berhubungan dengan gubahan dan nilai perihal
nutrisi dari produk makanan. Potensial sangat besar untuk aplikasi dari spektroskopi
fluorescence mengombinasikan dengan analysis statistik multivariate untuk evaluasi dari
mutu makanan telah dipertunjukkan. Cara adalah pantas sebagai satu alat penelitian efektif,
dan dapat satu bagian dari evaluasi memprosedur untuk mutu makanan. Sementara parameter
kimia dan phisik mungkin indikator baik dari mutu makanan, penilaian mereka adalah kurang
tertentu,dan perlukan jauh lebih akumulasi pengetahuan tepat dari biokimia dari produk
makanan; spektroskopi fluorescence adalah satu berarti kuat dan sensitip dari gugus kendali
mutu makanan cepat. Oleh sebab itu, sukses dari cara disajikan betul-betul menyarankan
aplikasi dari on-line ilmu pengetahuan tentang teknik ini pada industri makanan.

DAFTAR PUSTAKA

Spektrofluorometer

Page 36

Ghalib, ibnu. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar: Yogyakarta

Ed. Da Wen Sun. 2008. Modern Technic for Food Autentication. Elsevier: New York

Spektrofluorometer

Page 37