EKSPERIMEN Avery, MacLeod, dan McCarty

EKSPERIMEN Avery, MacLeod, dan McCarty

download file
Unit fungsional materi genetik adalah gen, berasal dari kata genos, artinya asal-usul. Sedangkan unit struktural atau unit kimiawi gen adalah DNA
(deoxyribo nucleic acid). Gen atau DNA itu berderet secara linier pada kromatin atau kromosom. Satu benang kromatin terdiri atas nukleoprotein,
yaitu gabungan asam nukleat (DNA) dan protein. DNA membentuk super lilitan sepanjang kromatin, sedangkan protein bertindak sebagai tempat
melilit. Protein tempat melilit DNA disebut histon. Protein lain dalam kromatin ada yang berfungsi sebagai penyekat, penyalut, unsur regulator,
atau sebagai enzim bagi aktivitas DNA, mereka disebut protein nonhiston. (Mustahib, 2009)
Gen merupakan unit pewaris sifat yang keberadaannya dapat diketahui terhadap sifat fenotipenya. Gen adalah substansi hereditas yang terletak
di dalam kromosom. Gen disusun oleh suatu substansi yang disebut dengan deoxyribo nucleat acid (DNA) (Mustahib, 2009).
1. Percobaan Frederick Griffith
Usaha untuk mengidentifikasi bahan genetik dimulai sejak tahun 1928 yang dilakukan oleh Frederick Griffith. Dia menggunakan D. pneumoniae
untuk percobaannya. Ada dua galur (strain) yang digunakannya, yaitu galur virulen yang menyebabkan penyakit pneumonia pada beberapa
vertebrata seperti manusia dan tikus, dan galur avirulen yang tidak dapat menyebabkan penyakit. Virulensi dari bakteri tersebut disebabkan oleh
adanya kapsul polisakarida yang menyelimuti bakteri. Bakteri virulen mempunyai kapsul, sedangkan yang avirulen tidak mempunyai kapsul.
Bakteri yang tidak mempunyai kapsul mudah dihancurkan oleh sistem pertahanan tubuh sel inangnya, sedangkan yang mempunyai kapsul tidak
mudah dihancurkan oleh sistem pertahanan tubuh. Bakteri yang diselaputi oleh kapsul membentuk permukaan yang halus sehingga disebut galur
S (S = smooth) dan yang tidak diselaputi oleh kapsul mempunyai permukaan kasar sehingga disebut galur R (R = rough). Dengan adanya tanda
ini, maka virulensi dari bakteri ini mudah untuk diamati. Fenomena percobaan dari Frederick Griffith disebut dengan transformasi. Dia
menyimpulkan bahwa terdapat bahan yang utama untuk terjadinya proses transformasi (transforming principle) yang berperan dalam konversi
tersebut yang mungkin merupakan beberapa bagian dari kapsul polisakarida atau beberapa senyawa yang dibutuhkan untuk sintesis kapsul
meskipun kapsul itu sendiri tidak dapat menyebabkan pnemonia (Mustahib, 2009).
Kedua bentuk bakteri S dan bakteri R memiliki sifat yang berbeda. Dimana bakteri R tidak berbahaya, sedangkan bakteri S bersifat mematikan
ketika disuntikkan ke dalam tubuh tikus. Hal ini dapat diketahui melalui percobaan dengan menyuntikkan kedua bakteri tersebut ke dalam tubuh
tikus. Bakteri S yang mati bila dicampur dengan bakteri R yang hidup kemudian disuntikkan ke dalam tubuh tikus, menunjukkan bakteri R
tersebut telah berubah menjadi bakteri S. Fenomena ini diperkirakan akibat adanya proses transformasi materi genetik dari bakteri S yang mati
ke dalam bakteri R yang hidup. Namun, proses transformasi tersebut masih disanksikan kebenarannya karena belum ada alasan yang bisa
menjelaskan mengapa proses transformasi tersebut dapat terjadi (Rubin, 2009).
Griffith juga melakukan eksperimen dengan menyuntikkan bakteri S ke tubuh tikus, maka tikus akan mati dan tikus tetap hidup bila disuntikkan
dengan bakteri R. Jika bakteri S dipanaskan dan disuntikkan pada tikus, maka akan tetap hidup dan jika bakteri S yang dipanaskan dicampur
dengan bakteri R, maka tikus akan mati. Griffith membuktikan bahwa segala sesuatu dapat berpindah dari bakteri S yang mati ke dalam Bakteri
R dan merubah penampilan bakteri R. Griffith menyebut material yang dapat berpindah tersebut sebagai prinsip perpindahan (transformation
principle) (Eisenman, 1998).

2. Percobaan Avery, MacLeod, dan McCarty

Setelah selama sepuluh tahun melakukan penelitian, Avery, MacLeod, dan McCarty pada tahun 1944 mempublikasikan hasil penelitiannya.
Avery, MacLeod, dan McCarty melakukan eksperimen dengan meninjau ulang eksperimen yang telah dilakukan oleh Griffith dengan melakukan
eksperimen yang lebih definitif. Mereka mengekstrak nukleoid bakteri S dari Streptococcus pneumoniae yang mengandung DNA, protein dan
material lain. Material-material tersebut dicampurkan dengan material yang berbeda pada bakteri R dan hanya DNA yang dapat berpindah ke
dalam bakteri S. Dalam eksperimen ini, Avery, MacLeod, dan McCarty tidak menggunakan tikus sebagai bahan uji coba, tetapi menggunakan alat
tes berupa tabung (Rubin, 2009). Mereka menyimpulkan bahwa faktor yang bertanggung jawab dalam proses transformasi adalah DNA. Avery,
MacLeod, dan McCarty melakukan penelitian berlandaskan pada hasil yang dicapai oleh Frederick Griffith, dengan menggunakan galur IIIS dan
IIR dari D. pneumoniae (Mustahib, 2009).
Avery O, Macleod C, McCarty M melaporkan bahwa asam nukleat bertanggung-jawab mentransformasi Pneumococci R menjadi Pneumococci S.
Mereka membuktikan bahwa substansi yang diisolasi dan mengakibatkan transformasi dari tipe R ke tipe S memiliki ciri-ciri kimia sesuai dengan
ciri-ciri DNA. Ditunjukkan bahwa baik sifat optis, endapan sentrifuge (Centrifugal properties), sifat difusi, dan sifat elektroforetik menunjukan
bahwa substansi penyebab transformasi Pneumococci R ke S adalah seperti yang dimiliki DNA. Ekstrak murnian sel Pneumococci tipe S, setelah
protein dan lemak dipisahkan, tidak mengakibatkan hilangnya kemampuan transformasi. Selanjutnya, perlakukan tripsin dan kemotripsin tidak
mempengaruhi aktifitas transformasi yang berarti bahwa agen transforman bukanlah protein. Dalam penelitian pengaruh Ribonuclease, yaitu
enzim yang diketahui memotong-motong asam ribonukleat (RNA), diperoleh bahwa ia tidak mempengaruhi kemampuan transformasi;
Sebaliknya, kemampuan mentransformasi ekstrak yang dimurnikan dari Pneumococci hilang segera setelah perlakuan deoxyribonuclease (yaitu
enzim yang berkemampuan mencetak DNA). Hasil penelitian ini memberikan asumsi yang berbeda pada waktu itu yang menghargai protein dan
bukan DNA sebagai bahan pembawa informasi genetika (Mustahib, 2009).
Avery, MacLeod, dan McCarty membuktikan DNA sebagai prinsip transformasi dari eksperimen Griffith dengan mengambil ekstrak (dari bakteri S
yang dipanaskan) dan mereaksikan dengan DNAase (enzim yang menghidrolisis DNA), kemudian mencampurkan dengan bakteri R dan
menyuntikkan ke tubuh tikus. Hasilnya tikus tetap hidup. Eksperimen yang lainnya adalah dengan mereaksikan ekstrak bakteri S yang
dipanaskan dengan protease (enzim yang menghidrolisis protein), kemudian mencampurkan dengan bakteri R dan menyuntikkan ke tubuh tikus.
Hasilnya tikus tersebut mati. Eksperimen ini menunjukkan bahwa DNA bukan protein yang berkemampuan untuk mentransformasi sel
(Eisenman, 1998).
Bersama-sama dengan Colin MacLeod dan Maclyn McCarty, Avery berusaha untuk memurnikan sekitar dua puluh galon bakteri yang disebut
faktor transformasi. Pada awal 1936, Avery mencatat bahwa sepertinya tidak menjadi protein atau karbohidrat, tetapi asam nukleat. Analisis lebih
lanjut menunjukkan bahwa itu adalah DNA. Percobaan oleh Oswald T. Avery menunjukkan bahwa asam nukleat, asam deoksiribonukleat (DNA),
yang dimiliki oleh setiap organisme, adalah dasar kimia spesifik dan diwariskan melalui transformasi pada bakteri. Hal ini disebabkan karena
asam deoksiribonukleat (DNA) memainkan peran sentral dalam menentukan karakteristik tertentu dalam proses reproduksi (Venter, 2004).
Prosedur pemurnian diawali dengan proses mematikan bakteri dengan panas dan menyaring komponen yang larut. Selanjutnya, komponen

tersebut dipercepat dengan menggunakan kloroform dan menghidrolisis kapsul polisakarida dengan bantuan enzim. Imunologi disebabkan oleh
bentuk antibodi spesifik yang digunakan untuk mempercepat peluruhan kapsul polisakarida. Analisis kimia menunjukkan bahwa proporsi karbon,
hidrogen, nitrogen, dan fosfor dalam bagian aktif ini adalah konsisten dengan komposisi kimia DNA (Spcoll, 2009).
Untuk menunjukkan bahwa DNA itu bukan jumlah kecil RNA, protein, atau beberapa komponen sel lain yang bertanggung jawab untuk
transformasi, Avery dan rekan-rekannya menggunakan sejumlah tes biokimia. Mereka menemukan bahwa tripsin, kimotripsin dan ribonuklease
(enzim-enzim yang memecah protein atau RNA) tidak mempengaruhi transformasi, tapi persiapan enzim deoxyribonucleodepolymerase
(persiapan yang kasar, yang dapat diperoleh dari sejumlah sumber hewan, yang dapat memecah DNA) dapat menghancurkan kekuatan
transformasi dari ekstrak (Spcoll, 2009).

Mendel
Mendel yang menjadi seorang biarawan dari Gereja Katolik Roma pada tahun 1843, belajar di Universitas
Wina dari mana ia belajar matematika, dan kemudian kemudian melaksanakan banyak eksperimen ilmiah.
Eksperimen terlibat menanam tanaman kacang selama 8 tahun. Dia terpaksa menyerah eksperimen ketika ia
menjadi pemimpin di biara. Ia meninggal pada tahun 1884, tapi percobaan masih membentuk dasar genetika
dan memberikan ide yang adil dari warisan.

Friedrich Miescher dan Richard Altmann

Friedrich Miescher (1844-1895) menemukan suatu zat yang ia disebut "nuclein" pada tahun 1869. Kemudian
dia terisolasi murni contoh bahan yang kini dikenal sebagai DNA dari sperma salmon, dan pada tahun 1889
murid-Nya, Richard Altmann, menamakannya "asam nukleat". Zat ini ditemukan hanya ada dalam kromosom.

Frederick Griffith
Frederick Griffith, seorang ilmuwan, bekerja pada sebuah proyek pada tahun 1928 yang membentuk dasar
bahwa DNA adalah molekul warisan. Griffith ' s percobaan terlibat tikus dan dua jenis radang paru-paru-satu
adalah virulen dan lain bebas-virulen. Ia disuntikkan virulen radang paru-paru ke mouse dan mouse
meninggal. Selanjutnya ia disuntikkan bebas-virulen radang paru-paru ke tikus dan tikus yang selamat.
Setelah ini, dia memanas penyakit virulen untuk membunuh itu dan kemudian disuntikkan ke mouse. Waktu
ini binatang bertahan sebagai diprediksi. Terakhir ia disuntikkan bebas-virulen radang paru-paru dan virulen
radang paru-paru yang telah dipanaskan dan dibunuh, ke mouse. Kali ini mouse meninggal.
Griffith berspekulasi bahwa membunuh bakteri virulen berlalu pada karakteristik yang bebas-virulen untuk
membuatnya virulen. Ia percaya karakteristik ini dalam molekul warisan. Ini lewat pada molekul warisan
adalah apa yang disebut transformasi.

Oswald Avery
Oswald Avery dilanjutkan dengan percobaan Griffith di sekitar satu dekade kemudian untuk melihat apa
molekul warisan. Dalam percobaan ini, ia menghancurkan lipid, asam ribonukleat, karbohidrat, dan protein
virulen radang paru-paru. Transformasi masih terjadi setelah ini. Selanjutnya ia menghancurkan Asam
deoksiribonukleat. Transformasi tidak terjadi. Dia telah menemukan dasar warisan.

Phoebus Levene
Pada tahun 1929 Phoebus Levene di Rockefeller Institute diidentifikasi komponen yang membentuk molekul
DNA. Komponen-komponen adalah:
1.

Empat basa
1.

Adenina (A)

2.

Sitosina (C)

3.

Guanina (G)

4.
2.

Gula

3.

Fosfat

Timina (T)

Dia menunjukkan bahwa komponen DNA terkait dalam urutan fosfat-gula-basis. Dia mengatakan bahwa
masing-masing unit adalah sebuah nukleotida dan menyatakan molekul DNA terdiri dari serangkaian unit
nukleotida yang dihubungkan bersama-sama melalui gugus fosfat. Ia menyarankan bahwa ini membentuk '
tulang punggung ' molekul.
Namun, Levene berpikir rantai pendek dan dasar diulang dalam urutan tetap sama. Itu Torbjorn Caspersson
dan Einar Hammersten yang menunjukkan bahwa DNA adalah polimer.

Erwin Chargaff dan Chargaff's aturan

Untuk memahami lebih baik molekul DNA, ilmuwan berusaha untuk membuat model untuk memahami cara
kerjanya dan apa yang dilakukannya. Pada 1940 ilmuwan lainnya yang bernama Erwin Chargaff menemukan
pola dalam jumlah dari empat basa: adenina, guanina, sitosina, dan timina.
Ia mengambil sampel DNA dari sel yang berbeda dan menemukan bahwa jumlah adenina adalah hampir
sama dengan jumlah timina, dan bahwa jumlah guanina adalah hampir sama dengan jumlah sitosina.
Dengan demikian Anda bisa mengatakan: A = T, dan G = C. Penemuan ini kemudian menjadi Chargaff's
aturan.

Rosalind Franklin dan Maurice Wilkins

Kemudian dua peneliti Rosalind Franklin dan Maurice Wilkins mencoba membuat kristal molekul DNA. Mereka
ingin mengambil gambar X ray DNA untuk memahami bagaimana DNA bekerja. Ini dua ilmuwan yang sukses
dan memperoleh pola x-ray.
Pola yang muncul untuk mengandung janjang, seperti orang-orang di tangga antara ke helai yang
berdampingan. Mereka menemukan bahwa DNA memiliki bentuk helix.

Watson dan Crick

Pada tahun 1953, dua ilmuwan, James d. Watson dan Francis Crick, mencoba untuk menempatkan bersamasama sebuah model DNA. Mereka mengambil melihat Franklin dan Wilkin ' s gambar X-ray dan membuat
model mereka.
Mereka menciptakan model yang tidak berubah banyak sejak itu. Model mereka menunjukkan heliks ganda
dengan sedikit janjang menghubungkan strands dua. Janjang ini adalah Basa nukleotida.
Mereka juga menemukan bahwa jika mereka dipasangkan timina dengan adenina dan guanina dengan DNA
sitosina akan terlihat seragam. Pasangan ini adalah juga sesuai dengan Chargaff ' s aturan.
Mereka juga menemukan bahwa ikatan hidrogen yang dapat terbentuk antara dua pasangan basa. Selain itu,
setiap sisi adalah pelengkap yang lengkap yang lain.

Alec Jeffreys
Pemrofilan DNA dikembangkan beberapa tahun kemudian pada tahun 1984 oleh genetikawan Inggris Alec
Jeffreys dari Universitas Leicester, dan pertama kali digunakan untuk mendakwa Colin Pitchfork pada 1988
dalam kasus pembunuhan Enderby di Leicestershire, Inggris. Jadi mulai perjalanan penelitian DNA