Potensi anti-inflamasi Alpha-Linolenic Acid

Dimediasi Melalui Selektif COX Penghambatan: Komputasi

dan Data Eksperimental

Karya ini menyelidiki aktivitas anti-inflamasi asam alpha-linolenic (ALA)

dan asam linoleat (LA) menggunakan analisis komputasi dan eksperimental. Afinitas
pengikatan ALA dan

Lawas dinilai untuk siklooksigenase 1 (COX-1), siklooksigenase 2 (COX-2), dan 5-

lipoxygenase (5-

LOX) menggunakan AutoDock 4.2 dan AutoDock Vina 1.1.2. aktivitas anti-inflamasi
ALA (2 dan 4 ml /

kg, i.p.) (55,65% v / v) dan LA (2 dan 4 ml / kg, i.p.) (55% v / v) selanjutnya diuji
menggunakan kaki tikus

tes edema terhadap berbagai agen phlogistis termasuk karagenan, asam

arakidonat, prostaglandin,

dan leukotrien, masing-masing. ALA (2 dan 4 ml / kg, i.p.) dan LA (2 dan 4 ml / kg,
i.p.) selanjutnya diuji

untuk keberhasilan mereka terhadap bahan pembantu lengkap Freund (CFA)

-diinduksi (0,05 ml) arthritis pada tikus albino.

Berikut arthritis CFA-diinduksi, ALA dan LAwere diuji untuk kemampuan

penghambatan mereka terhadap COX-

1, COX-2, dan 5-LOX in vitro. Penelitian ini memuji bahwa potensi anti-inflamasi

ALA dapat dikaitkan dengan COX penghambatan, khususnya, COX-2.

asam lemak esensial (EFA) adalah asam lemak yang

manusia dan hewan lainnya harus menelan karena tubuh

mengharuskan mereka untuk kesehatan yang baik tetapi tidak dapat mensintesis
mereka.

Kedua asam lemak tersebut, yang dikenal terutama bagi manusia, termasuk

alpha-linolenic acid (ALA) (18: 3, omega-3 (-3)) dan

asam linoleat (LA) (18: 2, omega-6 (-6)) [1]. biologis

efek dari asam -3 dan -6 lemak didamaikan

oleh interaksi timbal balik mereka dan memiliki berbagai peran dalam

sistem fisiologis selain suasana hati, perilaku, dan

peradangan.

asam arakhidonat (AA) (20: 4, -6) adalah 20-karbon

kondisional EFA [2]. AA (20: 4, -6) berasal dari

diet LA (18: 2, -6) dan duduk di atas inflamasi

kaskade dengan lebih dari 20 jalur sinyal yang berbeda

mengendalikan alat tes macam fungsi tubuh yang berkaitan

ke sistem saraf pusat, sistem kardiovaskular,

dan kondisi inflamasi lainnya [3]. LA (18: 2, -6) adalah

dikonversi ke gamma-linolenat (GLA) (18: 3, -6) di

tubuh, yang selanjutnya dipecah ke AA (20: 4, -6).

Dalam perbedaan fakta bahwa GLA adalah salah satu perantara

molekul untuk sintesis AA (20: 4, -6), literatur

menunjukkan bahwa GLA memainkan peran penting dalam mengalokasikan

peradangan di seluruh tubuh [4]. Baru-baru ini, itu

dipastikan bahwa GLA mencegah switching inflamasi

sitokin dengan mengatur faktor nuklir kappa B

(NF-kB) [5]. GLA juga diberikannya efek anti-inflamasi

dengan mengaktifkan Peroksisom meresap proliferator-diaktifkan

reseptor (PPAR) sistem [6]. Selain itu, beberapa bahan kimia baru

keluarga yang diciptakan seperti Resolvins dan protectins

karena, pada hewan, anggota tertentu dari keluarga-keluarga ini

mengontrol durasi dan besarnya inflamasi [7].

GLA telah menunjukkan penegasan besar dalam mengelola gejala

kondisi autoimun seperti rheumatoid arthritis

(RA) dan mungkin terbukti menjadi alternatif yang menarik untuk

obat nonsteroidal anti-inflammatory berpotensi beracun

(NSAID) [8]. Dalam respon inflamasi, dua lainnya

EFA diet merupakan kaskade yang berjalan bersama dan

mengemulasi dengan cascade AA: asam eicosapentaenoic

(EPA) (20: 5, -3) dan asam docosahexaenoic (DHA)

(22: 6, -3). EPAprovides themost mencolok bersaing

cascade [9]. EPA dan DHA yang tertelan dari ikan berminyak atau

berasal dari makanan ALA (18: 3, -3) ditemukan di, misalnya,

minyak rami dan rami oil.ALA (18: 3, -3), dengan seri

reaksi desaturasi dan elongasi, adalah diversifikasi ke

DHA dan EPA, masing-masing [10]. Tersebut menyebutkan studi

bahwa EPA cascades melunakkan efek inflamasi dari AA

cascade, maka, muncul sebagai agen anti-inflamasi.

Seperti particularized di atas, GLA dan EPA adalah produk

LA (18: 2, -6) dan ALA (18: 3, -3) metabolisme,

masing-masing, dan menunjukkan aktivitas anti-inflamasi oleh variabel

mekanisme. Perlu dicatat bahwa -6 lemak (prekursor

AA) asam dianggap proinflamasi,

sedangkan -3 asam lemak (prekursor EPA) yang diusulkan

menjadi anti-inflamasi. Oleh karena itu, dilema ilmiah

ada ke arah mendefinisikan potensi anti-inflamasi /

mekanisme untuk -3 dan / atau asam lemak -6 [10, 11].

Selain itu, sampai saat ini, tidak ada literatur mendefinisikan mekanisme yang
mendasari

potensi anti-inflamasi baik ALA

(18: 3, -3) atau LA (18: 2, -6). Ini akan menjadi layak disebut

itu, baru-baru ini, kita telah memberitakan anti-inflamasi

dan potensi anti-rematik dari Linum usitatissimum tetap

minyak, dan sama diusulkan untuk dimediasi oleh ALA

(18: 3, -3) melalui penghambatan ganda AA (20: 4, -6)

metabolisme [12-14]. Minyak itu juga dilaporkan memiliki

Jumlah penting dari LA (18: 2, -6) hadir di dalamnya juga

[15]. Mengingat di atas, penelitian ini dilakukan

untuk mengevaluasi potensi anti-inflamasi dari ALA

(18: 3, -3) dan LA (18: 2, -6). Ruang lingkup saat ini

kerja juga diperpanjang ke arah meneliti kemungkinan

mekanisme yang sama, menggunakan komputasi dan eksperimental

pendekatan.

BAHAN DAN METODE

Dalam Kegiatan Siliko Anti-inflamasi

bahan

Tiga protein, siklooksigenase 1 (COX-1), siklooksigenase

2 (COX-2), dan 5-lipoxygenase (5-LOX), yang

digunakan sebagai target; ALA, LA, dan AA digunakan sebagai ligan

molekul untuk melakukan studi docking molekuler. Antara

dipilih protein sasaran, struktur 3-D dari COX-1 adalah

tidak tersedia di Protein Data Bank (PDB); dengan demikian,

Pendekatan pemodelan homologi telah digunakan untuk menghasilkan

yang struktur 3-D.

Struktur Prediksi tiga-dimensi dari COX-1 Protein

Urutan protein COX-1 (gi | 127.796.425 |) adalah

diambil dari database NCBI [16]. Urutan digunakan

dalam pekerjaan kami adalah sebagai berikut:

> Gi | 127796425 | gb | AAH23322.2 | prostaglandin-endoperoxide

synthase 1 (Mus musculus)

MSRRSLSLWFPLLLLLLLPPTPSVLLADPGVPSPVN

PCCYYPCQNQGVCVRFGLDNYQCDCTRTGY

SGPN

CTIPEIWTWLRNSLRPSPSFTHFLLTHGYWLW

EFVNATFIREVLMRLVLTVRSNLIPSPPTYNSAH

DYIS

WESFSNVSYYTRILPSVPKDCPTPMGTKGKKQLPD

VQLLAQQLLLRREFIPAPQGTNILFAFFAQH

FTHQ

FFKTSGKMGPGFTKALGHGVDLGHIYGDNLERQY

HLRLFKDGKLKYQVLDGEVYPPSVEQASVLMR

YPPG

VPPERQMAVGQEVFGLLPGLMLFSTIWLREHNRV

CDLLKEEHPTWDDEQLFQTTRLILIGETIKIVIEEY

VQHLSGYFLQLKFDPELLFRAQFQYRNRIAMEFN

HLYHWHPLMPNSFQVGSQEYSYEQFLFNTSM

LVDYG

VEALVDAFSRQRAGRIGGGRNFDYHVLHVAVDVIK

ESREMRLQPFNEYRKRFGLKPYTSFQELTGEK

EMA

AELEELYGDIDALEFYPGLLLEKCQPNSIFGESM

IEMGAPFSLKGLLGNPICSPEYWKPSTFGGDVG
FNL

VNTASLKKLVCLNTKTCPYVSFRVPDYPGDDGSV

LVRRSTEL.

Protein struktur prediksi Server (PS2) [17], 3DJIGSAW

[18, 19], dan Protinfo CM [20] digunakan untuk

menghasilkan model protein. Modeler 9.10 digunakan untuk

menghasilkan model dengan mendekati model multi-template

untuk target tikus COX-1. BLASTP (Tambahan

Gambar I) dilakukan untuk memperoleh template untuk

pemodelan homologi. Berdasarkan hasil BLAST, template

dipilih yang 1CQE, 1HT5, 3N8Y, dan 3QCW dengan

Identitas 87, 89, 89, dan 49%, masing-masing. Dihasilkan

model protein dievaluasi berdasarkan Ramachandran

plot, Verify3D, dan ERRAT nilai yang diperoleh oleh

Struktur Analisis dan Verifikasi Server (MENGHEMAT)

disediakan oleh University of California, Los Angeles

(UCLA) [21] (Tambahan Tabel I). Berdasarkan energi,

Model PS2 dengan energi terendah dijemput untuk

Proses minimisasi energi menggunakan Swiss-PDB Viewer

4.0.4. [22]. Setelah minimisasi energi, model PS2 terbaik

(Model 12) dipilih dan dievaluasi menggunakan UCLA

Server, dan plot Ramachandran dihasilkan

(Tambahan Gambar II). Setelah validasi, model 12 adalah

digunakan untuk studi docking (Tambahan Tabel II).

Docking molekular

Pendekatan docking berbasis struktur telah dilaksanakan

sebagai docking komputasi dalam pekerjaan kita. Mengikat

situs COX-2 (PDB id: 4E1G), 5-LOX (PDB id: 3V99),

dan PS2 model 12 (COX-1) dianalisis dengan LigPlot.

Struktur Mol2 dari LA itu diambil dari ZINC

database [23], dengan SENG id: ZINC04474613. file SDF dari

ALA-download dari PDB dan kemudian diubah

ke dalam file Mol2. AutoDock 4.2 dan AutoDock Vina 1.1.2

[24] digunakan untuk docking molekul berdasarkan Lamarkian

Algoritma genetika. Hasil docking COX-1, COX-2,

dan 5-LOX dengan ALA, LA, dan AA yang disebutkan di

Buah ara. 1, 2, dan 3 dan Tabel 1, masing-masing.

hewan

tikus albino strain Wistar (100-150 g) yang

diperoleh dari Central Animal House, Babasaheb

Bhimrao Ambedkar University, Lucknow. binatang

ditempatkan di bawah kondisi standar suhu (25

1 C) dengan 12-h cahaya / siklus gelap dan memiliki akses bebas ke

diet pelet komersial dan air. Hewan-hewan diberi

waktu seminggu untuk mendapatkan menyesuaikan diri dengan kondisi

laboratorium,

sebelum eksperimen. Semua percobaan dilakukan

menurut Komite untuk Tujuan

Kontrol dan Pengawasan Percobaan pada Hewan

(CPCSEA) pedoman untuk hewan laboratorium dan

etika, Departemen Kesejahteraan Hewan, Pemerintah

India.

Obat dan Bahan Kimia

ALA (L-0217) (55,65% v / v) dan LA (L-0783) (55%

v / v) yang diperoleh dari Rolex Chemical Industries, Mumbai.

Karagenan dibeli fromCentral Obat House

New Delhi. Lengkap Freund adjuvant (CFA), prostaglandin

E2 (PGE2), dan leukotrien (LTB4 metil ester)

yang disediakan oleh Sigma-Aldrich, USA. AA diperoleh

dari Acros Kimia, USA. Semua bahan kimia lainnya yang dari

kelas analitis.

Dalam Kegiatan Vivo Anti-inflamasi

Inflamasi Mediator-Induced Paw Edema

Aktivitas anti-inflamasi ALA (18: 3, -3)

dan LA (18: 2, -6) itu dinilai melawan berbeda inflamasi

mediator / agen phlogistis [13]. masing-masing

kekuatan edemogens, volume disuntikkan, dan waktu

untuk penentuan edema ditunjukkan dalam kurung: 1%

karagenan (1% dalam saline normal, 0,1 ml, 3 h), PGE2

(10-8 g / ml, 0, l ml, 30 menit), AA [0,5% di 0,2 M karbonat

penyangga (pH 8,43-8,56), 0,1 ml, 30 min], dan LTB4 (1

10-6 g / ml, 0,1 ml, 30 menit). The edemogens disuntik

di kaki belakang tikus setelah 2 jam pemberian ALA

(18: 3, -3) (2 dan 4 ml / kg) atau LA (18: 2, -6) (2 dan

4 ml / kg) atau obat-obatan standar atau kontrol (air suling,

3 ml / kg) intraperitoneal ke kelompok tikus berpuasa. Itu

obat standar yang digunakan dalam model edema yang berbeda

disebutkan dalam Tabel 2 [25].

CFA-Induced Arthritis
arthritis imunologi eksperimental diinduksi di

tikus menurut metode Newbould [26]. Kiri

perampok masing-masing tikus disuntik subkutan dengan

0,05 ml (0,5% b / v) dari CFA. berbagai kelompok

hewan (n = 6) menerima kontrol kendaraan (saline normal,

3 ml / kg) atau ALA (18: 3, -3) (2 dan 4 ml / kg, i.p.) atau LA

(18: 2, -6) (2 dan 4ml / kg, i.p.) atau obat standar (aspirin,

100 mg / kg, i.p.) 1 hari sebelum injeksi CFA, dan harian

pengobatan dilanjutkan selama 21 hari. Edema kiri dan

cakar belakang kanan dievaluasi pada 7, 14, dan 21 hari postinjection

dari CFA menggunakan alat ukur mikrometer sekrup [25]. Itu

sampel darah dikumpulkan pada hari ke-21 dan dikenakan

estimasi interleukin-1 (IL-1) (K0331212P),

interleukin-2 (IL-2) (K033122P), dan TNF-

(K0331196P) menggunakan radioimmunoassay kit (Koma Biotech,

Seoul, Korea Selatan).

Dalam Kegiatan Vitro Anti-inflamasi

In Vitro COX dan LOX Penghambatan Uji

Untuk lebih menjelaskan kemungkinan anti-inflamasi

Mekanisme, ALA (18: 3, -3) dan LA (18: 2, -6) yang

diuji untuk COX-1, COX-2, dan 5-LOX aktivitas penghambatan

menggunakan COX- (ovin) -inhibitor skrining kit (Katalog No.

760.111, 760.700; Cayman Kimia, USA) menurut

instruksi produsen. Solusi stok ALA (18: 3, -3) dan LA (18: 2, -6) disiapkan di

dimetil sulfoksida, dan pengenceran lebih lanjut yang dibuat untuk

konsentrasi 50 ug / ml. Persen penghambatan dihitung

dengan membandingkan intensitas absorbansi diukur

spektrofotometri dengan 96-baik pembaca plat (Biotek

Lempeng Reader, ELX 800) di 590 dan 490 nm untuk COX

dan LOX, masing-masing. Setiap assay dilakukan dalam rangkap tiga.

Aspirin dan celecoxib digunakan sebagai referensi

standar.

Analisis statistik

Semua data disajikan sebagai mean standard error dari

mean (SEM) dan dianalisis dengan ANOVA satu arah diikuti

oleh beberapa tes perbandingan Student's-Newman-Keul ini

untuk memungkinkan identifikasi signifikansi antara berbagai

kelompok. P <0,05 dianggap signifikan secara statistik.

Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan GraphPad Prism 3.0

(GraphPad Software, San Diego, CA, USA).

HASIL

Analisis Docking menegaskan docking yang lebih baik dan mengikat

afinitas ALA untuk COX-1 dan COX-2 dari LA (18: 2,

-6). Sebaliknya, kedua ALA (18: 3, -3) dan LA (18: 2,

-6) pameran hampir sekitar kelimpahan ligan yang sama terhadap

5-LOX, sedangkan AA menunjukkan lebih baik mengikat

afinitas terhadap COX-1 dan 5-LOX dibandingkan dengan ALA

(Tabel 1). ALA (18: 3, -3) (2 and4ml / kg) disebutkan 39,98 dan 81,36%
penghambatan di kaki edema terhadap carrageenan-

diinduksi edema kaki, masing-masing. Berikut karagenan,

ALA (18: 3, -3) kemudian dievaluasi untuk nya

aktivitas anti-inflamasi terhadap AA (20: 4, -6), lebih

mediator inflamasi tertentu. Dalam AA (20: 4, -6) imbas

edema, penghambatan edema signifikan diamati dengan

ALA (18: 3, -3) (4 ml / kg) (84,51%), brompheniramine

(59,15%), siproheptadin (63,38%), dan ketoconazole

(32,39%), masing-masing. Setelah kecukupan anti-inflamasi

terhadap karagenan dan AA (20: 4, -6), anti-inflamasi

efek ALA (18: 3, -3) dan LA (18: 2,

-6) akibatnya dievaluasi terhadap LTB4- dan

inflamasi PGE2-diinduksi (Tabel 2).

ALA (18: 3, -3) (4 ml / kg) PGE2- juga terhambat

inflamasi yang diinduksi (80,59%) jauh. dalam LTB4-

edema diinduksi, ALA (18: 3, -3) diwujudkan 66,67%

penghambatan edema sepadan untuk ketoconazole (a

leukotrien antagonis) (37,04%). Dengan demikian, ALA (18: 3, -3)

secara signifikan menghambat peradangan PGE2- andLTB4-diinduksi

Reaksi (Tabel 2). Hasil penelitian menunjukkan bahwa ALA

(18: 3, -3) memiliki efek anti-inflamasi dikenakan

untuk anti-prostaglandin dan aktivitas anti-leukotrien.

Tabel 3 menunjukkan perjalanan waktu edema karena CFA

dan tingkat penghambatan setelah pemberian ALA

(18: 3, -3) dan LA (18: 2, -6). Setelah pemberian CFA,

yang belakang kaki kanan juga ditambah edema, selain

meninggalkan perampok, menegaskan sifat imunologi ini

lesi. ALA (18: 3, -3) menunjukkan aktivitas anti-rematik,

yang diabadikan sampai percobaan ditunda

pada hari 21. Berarti perubahan diameter kaki adalah 2.92

0.10 mm pada kelompok kontrol, dan ALA (18: 3, -3) secara signifikan
mengurangi diameter kaki pada hari ke-21 dalam

tergantung dengan dosis dengan persentase perlindungan

61.99 dan 67,46% pada tingkat dosis 2 dan 4 ml / kg, masing-masing.

Namun, aspirin (standar obat) dipamerkan 60,96%

perlindungan, yang lebih rendah dari LA (18: 2, -6) (4 ml / kg).

Pengobatan dengan ALA dipamerkan penghambatan penting

produksi sitokin pada hari 21, sedangkan LA (18: 2,

-6) tidak mewujudkan perlindungan terhadap CFA diinduksi

radang sendi. ALA (18: 3, -3) dibuktikan 78,17,

26,19, dan 59,90% penghambatan IL-1, IL-2, dan TNF

produksi, masing-masing, dibandingkan dengan kontrol. Itu

Hasil penelitian menunjukkan aktivitas anti-inflamasi abeyant dari

ALA (18: 3, -3) terhadap jangka pendek dan jangka panjang inflamasi

situasi seperti dalam arthritis CFA-diinduksi, yang

lebih mirip dengan kondisi peradangan klinis. Dalam pandangan

potensi anti-inflamasi ALA (18: 3, -3), yang

efek penghambatan pada enzim COX dan LOX in vitro adalah

dianggap layak menilai untuk lebih menjelaskan

mungkin link yang mekanistik.

In vitro aktivitas ALA (18: 3, -3) terhadap COX-

1 dan COX-2 menunjukkan 78,12 dan 85,24% inhibisi,

masing-masing. Perlu dicatat bahwa dalam penghambatan in vitro

COX-2 lebih jelas dibandingkan dengan COX-1. ALA (18: 3, -3) tidak menunjukkan
potensi penghambatan

terhadap 5-LOX. Sebaliknya, LA (18: 2, -6) menunjukkan

hanya 15,11, 10,14, dan 9,25% penghambatan terhadap

COX-1, COX-2, dan 5-LOX, masing-masing (Tabel 4).

DISKUSI

Afinitas pengikatan ligan untuk target sangat diperlukan

untuk asosiasi ketat, menipiskan konsentrasi obat

dan untuk menurunkan risiko efek samping yang ditimbulkan

oleh nonspesifik atau nontarget mengikat selama pengobatan.

energi dermaga adalah jumlah energi antarmolekul dan

energi internal ligan ini. Mengikat energi adalah jumlah dari

energi antarmolekul dan energi bebas torsi

Hukuman [27]. Di sini, energi dermaga, energi yang mengikat,

dan jumlah energi ALA (18: 3, -3) untuk COX-1 dan

COX-2 lebih baik daripada LA (18: 2, -6). ALA

(18: 3, -3) membentuk dua ikatan H dengan residu Arg122

dan Tyr357 dari COX-1 dengan energi ikatan H -1,41 dan

-6,06 Kkal / mol, masing-masing, sedangkan LA (18: 2, -6)

bentuk hanya H ikatan tunggal dengan Arg122 dari COX-1 dengan

energi ikatan H -2,56 kkal / mol. Mengikat dan jumlah

energi ALA (18: 3, -3) untuk 5-LOX yang ditemukan

kurang dari LA (18: 2, -6). Untuk 5-LOX, ALA (18: 3, -3) dan

LA (18: 2, -6) membentuk dua Hbonds dengan His432 dan Gly430

dengan energi ikatan H -1,61 dan -0,59 kkal / mol dan H

ikatan dengan Arg666 (energi H obligasi adalah -1,65 kkal / mol),

masing-masing. Dengan demikian, energi dock, mengikat energi, energi total,

jumlah obligasi H, dan ikatan H energi ALA terus bahwa COX-1 dan COX-2 telah lebih
baik mengikat afinitas dan

efisiensi dibandingkan LA (18: 2, -6).

Dalam kasus 5-LOX, ada perbedaan yang sangat sedikit

energi antara ALA (18: 3, -3) dan LA (18: 2, -6).

Efisiensi ligan dihitung untuk kedua adalah -0,2, menyarankan

afinitas mengikat lemah ALA terhadap 5-LOX.

Namun, AA menunjukkan afinitas pengikatan yang lebih tinggi terhadap

COX-1 dan 5-LOX dibandingkan dengan ALA dan LA. Di

Sebaliknya, ofAA mengikat terhadap COX-2 sedikit

kurang dari ALA dan LA.

Mengingat hasil dari studi docking,

ALA (18: 3, -3) dan LA (18: 2, -6) yang lebih dikenakan

untuk skrining anti-inflamasi terhadap berbagai

agen phlogistis termasuk karagenan, AA (20: 4, -6),

PGE2, dan LTB4.

Karagenan memediasi peradangan nonspesifik digambarkan

oleh tiga tahap yang berbeda dari rilis mediator termasuk

histamin dan serotonin pada tahap pertama, kinin dalam

Tahap kedua, dan prostaglandin di fase ketiga; ALA

(18: 3, -3) menunjukkan efek mencolok ini,

menunjukkan potensi anti-inflamasi yang mungkin dari

sama. Berikut karagenan, ALA (18: 3, -3) itu dinilai

terhadap AA (20: 4, -6) inflamasi imbas di

tikus. Peradangan dimulai dari AA (20: 4, -6), yang

dimetabolisme melalui jalur COX dan LOX. Pengaktifan

jalur COX dan LOX menghasilkan prostaglandin dan

leukotrien, masing-masing, yang proinflamasi. ALA

(18: 3, -3) diwujudkan penghambatan meyakinkan dari kaki edema

terhadap AA (20: 4, -6) uji imbas, menunjukkan penghambatan

baik COX atau LOX atau kedua jalur dari AA (20: 4,

-6) kaskade. Jelaslah bahwa LA (18: 2, -6) tidak

mewujudkan potensi inflamasi baik terhadap karagenan

atau AA (20: 4, -6). Untuk lebih mengeksplorasi, ALA (18: 3,

-3) dievaluasi terhadap PGE2- dan peradangan LTB4 diinduksi.

ALA (18: 3, -3) dipamerkan signifikan

penghambatan PGE2- dan LTB4 diinduksi kaki edema yang

analog dengan LA (18: 2, -6).

Peradangan ditandai dengan kemerahan, bengkak,

dan nyeri. Ini terjadi karena vasodilatasi lokal, peningkatan

permeabilitas kapiler, dan infiltrasi leukosit [28].

mediator inflamasi dilepaskan terutama dari

leukosit diaktifkan. Mediator inflamasi kunci

n-6 eikosanoid, PGE2, dan LTB4 berasal dari AA

(20: 4, n-6) [29] metabolisme oleh aksi COX dan

enzim LOX. mediator lainnya adalah sitokin, yaitu,

TNF-, IL-1, IL-6, dan IL-8, yang telah ditemukan di

konsentrasi tinggi pada sinovium pasien RA [30].

Selain itu, PGE2, vasodilator kuat, bersinergi

dengan vasodilator inflamasi lainnya seperti histamin dan

bradikinin, dan tindakan dilator kumulatif pada prekapiler

arteriol kesepakatan untuk kemerahan dan peningkatan aliran darah di

daerah peradangan akut. PGE2, sendiri, tidak

meningkatkan permeabilitas venula postcapillary tetapi mempotensiasi

efek histamin dan bradikinin untuk menambah

permeabilitas. PGE2 juga mempotensiasi efek bradikinin

oleh kepekaan serat aferen C untuk meningkatkan rasa sakit. LTB4 adalah
agen kemotaktik kuat untuk kedua neutrofil dan makrofag

[31]. LTB4 mempromosikan adhesi neutrofil

sel endotel vaskular dan migrasi transendothelial mereka

ke situs inflamasi. PGE2 dan LTB4, bertindak bersama-sama,

dapat menyebabkan kebocoran pembuluh darah dan ekstravasasi cairan

[29]. Dengan demikian, para mediator lipid yang terlibat dalam kemerahan,

pembengkakan, dan nyeri yang mengikuti peradangan akut.

Hasil penelitian menunjukkan bahwa ALA (18: 3, -3) memiliki kapasitas

untuk menghambat peradangan yang ditimbulkan oleh AA (20: 4, -6),

prostaglandin, dan leukotrien, yang mungkin bisa dimediasi

melalui penghambatan baik COX atau LOX jalur

atau keduanya. Dengan kata lain, ALA (18: 3, -3) tampaknya menjadi

ganda inhibitor dari AA (20: 4, -6) metabolisme. Perlu dicatat

bahwa penghambatan leukotrien diinduksi kaki edema oleh ALA (18: 3, -3) adalah
sedikit kurang dari AA-diinduksi (20: 4, -

6) dan PG-induced kaki edema. Hasil sedikit menyarankan

khasiat kurang dari ALA (18: 3, -3) terhadap LOX penghambatan di

dibandingkan dengan COX, seperti yang digambarkan dalam studi docking.

Memperhatikan aktivitas anti-inflamasi

ALA (18: 3, -3) dan untuk mengevaluasi jangka panjang anti-inflamasi

efek, ALA (18: 3, -3) selanjutnya dikenakan untuk

uji terhadap peradangan kronis imunologi, yang

lebih analog dengan situasi klinis, yaitu, CFA diinduksi

radang sendi. Tak lama setelah pemberian CFA ke

belakang kaki, pembengkakan diucapkan muncul di kaki belakang,

yang berlangsung selama minggu (reaksi primer). Setelah beberapa

hari, kaki kontralateral, serta kaki depan, juga

menjadi bengkak, dan nodul rematik muncul di telinga

dan ekor (tertunda respon sistemik). ALA (18: 3, -3)

sangat berkurang respon imun humoral, rupanya

karena kemampuannya untuk menghambat peradangan akut oleh

mengurangi permeabilitas pembuluh darah dan menghambat mediator lainnya

seperti PGE2. Respon inflamasi sekunder

diamati dari hari ke-11 juga dihambat oleh ALA

(18: 3, -3) seefektif aspirin. Lesi sekunder

telah terbukti mungkin karena hipersensitivitas tertunda

reaksi (22), dan ALA menghasilkan bukti

efek pada ini juga, menunjukkan bahwa ALA (18: 3, -3) mungkin

efektif dalam pengobatan RA.

proinflamasi sitokin TNF-, IL-1, dan IL-2

telah terbukti memainkan peran mencolok di patofisiologi

arthritis pematangan pada model hewan dan

manusia. Itu menyatakan bahwa peningkatan ekspresi

sitokin inflamasi, termasuk TNF-, IL-2, dan IL-1,

diamati di wilayah tulang sendi lutut atau di serum

sampel dari osteoarthritis manusia atau pasien RA [32].

TNF- dan IL-1 membesar-besarkan proliferasi fibroblas,

menggembirakan produksi PGE2 [33], dan meningkatkan

ekspresi sitokin lain dan sintesis kolagen oleh

sel sinovial, memberikan kontribusi untuk tulang rawan dan kerusakan tulang

[34]. Dengan demikian, berbagai strategi untuk memblokir aktivitas mereka

sekarang

yang secara klinis diterapkan dan telah terbukti efektif

dalam pengobatan arthritis eksperimental [35]. Pada saat ini

Penelitian, tindakan anti-inflamasi ALA (18: 3, -3) adalah

tak terbandingkan berkurang dalam IL-1 dan TNF- tingkat di

sera dari AA (20: 4, -6) tikus. Meskipun produksi menurun

sitokin inflamasi tidak dapat didefinisikan secara jelas di

ini, menjadi jelas bahwa ALA (18: 3, -3) menggeser

keseimbangan sitokin proinflamasi menuju normal dan

dengan demikian menegaskan utilitas dalam kondisi inflamasi kronis

seperti RA.

Hasil dari analisis komputasi dan eksperimental

Studi sampai sekarang jelas menganjurkan anti-inflamasi

potensi ALA (18: 3, -3), mungkin Mediated

melalui perubahan di AA (20: 4, -6) jalur, yang

kami mengusulkan untuk dimediasi melalui penghambatan COX /

jalur LOX atau keduanya.

Untuk mengkonfirmasi sama, ALA yang (18: 3, -3) adalah lebih

dievaluasi untuk COX dan LOX penghambatan uji in vitro.

Hasil penelitian menunjukkan aktivitas penghambatan ALA (18: 3, -3)

menuju COX; Namun, tidak ada hambatan yang signifikan dari LOX

diamati in vitro.

Hasil penelitian menunjukkan bahwa ALA (18: 3, -3) bertindak sebagai

inhibitor enzim COX dengan selektivitas sedikit lebih tinggi

menuju COX-2. Untuk selanjutnya, kita anggap bahwa

potensi anti-inflamasi dari ALA (18: 3, -3) diamati

dalam laporan ini bisa menjadi konsekuensi dari

penghambatan COX jalur dari AA (20: 4, -6)

riam. Hasil dari pendekatan komputasi yang

juga mendukung data eksperimen.

Dengan demikian, dapat disimpulkan bahwa ALA (18: 3, -3)

menunjukkan efek anti-inflamasi yang signifikan dimediasi

melalui penghambatan AA (20: 4, -6) jalur.

penghambatan selektif dari jalur COX dengan dilihat

penghambatan COX-2 bisa menjadi mekanisme yang mendasari

untuk efek anti-inflamasi yang diamati.