ISOLASI SENYAWA BETALAIN PADA KULIT BUAH

NAGA MERAH

NAMA : WIDYA HARDIYANTI

NIM : N11115507

KELAS : FITOKIMIA

MAKASSAR

2017
 BAB I

PENDAHULUAN

I.1 Latar Belakang

Penggunaan pewarna makanan yang dilarang terutama pada

jajanan pasar membuat konsumen merasa khawatir terhadap aspek

keamanan pangan, oleh sebab itu perlu adanya alternatif penggunaan

pewarna pada makanan. Untuk menggantikan pewarna-pewarna sintetis

yang sudah tidak diizinkan lagi, sebaiknya digunakan pewarna alami atau

yang diizinkan. Pewarna alami seperti buah bit merah, daun suji, daun

pandan, dan kunyit merupakan salah satu alternatif pengganti pewarna

untuk bahan makanan. Pigmen lain yang dapat diekstrak dari sumber

bahan alami adalah antosianin dari kulit buah naga Hylocereus polyrhizus

[5].

Betacyanin adalah kelompok kemerahan untuk pigmen ungu

betalain yang umum di banyak bunga dan buah-buahan. Betacyanin dapat

diklasifikasikan ke dalam empat jenis: betalain, amaranthin, gomphrenin

dan bouginvillein. Mereka adalah pigmen betalain larut air yang diperoleh

glikosilasi dari betanidin, [5], [6]. Mereka memiliki antioksidan, antimikroba,

anti-inflamasi dan properti antikanker yang dapat lebih baik dipelajari

sebagai sumber alami pewarna makanan [7], [8]. [9] melaporkan bahwa

pigmen betalain dapat diterapkan untuk makanan produk seperti di

Indonesia kue, minuman, es krim, jelly, puding, selai dan dodol. Hal ini

diduga betalain bahwa konsentrasi pigmen dalam produk ini cukup

rendah. Itu konsentrasi rendah dari karakteristik betalain yang diterapkan

di produk makanan.

I.2 Maksud dan Tujuan

untuk mengetahui karakterisasi sederhana (stabilitas,

antioksidan dan antibakteri aktivitas) dari betalain dari kulit buah naga

merah (Hylocereus polyrhizus) .

 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

Menurut Panjuantiningrum (2009), kedudukan taksonomi buah

naga merah adalah sebagai berikut :

Kingdom : Plantae

Subkingdom : Tracheobionta

Superdivisi : Spermatophyta

Divisi : Magnoliophyta

Kelas : Magnoliopsida

Subkelas : Hamamelidae

Ordo : Caryophyllales

Famili : Cactaceae

Genus : Hylocereus

Spesies : Hylocereus polyrhizus

Betalain merupakan pigmen berwarna merah-violet dan kuning-

orange yang banyak terdapat pada buah, bunga, dan jaringan vegetatif

(Strack et al., 2003). Betalain adalah pigmen kelompok alkaloid yang larut

air, pigmen bernitrogen, dan merupakan pengganti anthocyanin pada

sebagian besar family tanaman ordo Caryophyllales, termasuk

Amaranthaceae, dan bersifat mutual eksklusif dengan pigmen antosianin

(Cai et al., 2005; Grotewold, 2006). Sifat ini berarti bahwa pigmen betalain

dan antosianin tidak pernah dijumpai bersama-sama pada satu tanaman.

Oleh karena itu pigmen betalain sangat signifikan dalam penentuan

taksonomi tanaman tingkat tinggi.

 Betalain merupakan pewarna alami yang banyak digunakan pada

produk pangan. Pigmen ini banyak dimanfaatkan karena kegunaannya

selain sebagai pewarna juga sebagai antioksidan dan radical savenging

sebagai perlindungan terhadap gangguan akibat stres oksidatif. Sumber

betalain yang paling banyak adalah akar bit (Beta vulgaris).

Perkembangan antosianin sebagai pewarna makanan lebih berkembang

dibandingkan dengan betalain, karena terbatasnya tanaman yang

mengandung betalain (Mareno et al., 2008). Oleh karena itu penelitian

pencarian alternatif sumber betalain penting dilakukan, salah satunya

adalah dari kulit buah naga merah (Hylocereus polyrhizus).

Tanaman buah naga yang sering juga dibuat menjadi tanaman hias,

dalam setahun bisa berbuah tiga kali, dan produksinya bisa terus

meningkat dengan perawatan yang baik. Setiap tahun, tanaman buah

naga meningkat, begitu juga dengan import buah naga ke Indonesia.

Berdasarkan catatan dari eksportir buah di Indonesia, buah naga ini

masuk ke tanah air mencapai antara 200 - 400 ton/tahun asal Thailand

dan Vietnam (Anonim, 2013a). Masyarakat semakin menyukai buah naga

karena selain pohon dan buahnya yang indah, buah naga juga

mengandung manfaat bagi kesehatan. Buah naga merah memiliki warna

merah yang sangat menarik yang disebut antosianin. Antosianin

merupakan pewarna yang paling penting dan paling banyak tersebar luas

dalam tumbuhan. Pigmen yang berwarna kuat dan larut dalam air ini

adalah penyebab hampir semua warna merah jambu, merah marak,

merah senduduk, ungu, dan biru dalam bunga, daun, dan buah pada

tumbuhan tingggi.
 BAB III

METODE

III.1 Alat dan Bahan

Buah-buahan diperoleh disimpan selama 5 hari. Pelarut dan reagen

yang digunakan adalah betalain standar (sigma), suling air, sitrat-fosfat,

asam format, asetonitril, DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil), etanol, asam

asetat, dan eritrosin (komersial pewarna sintetis merah).

III.2 Preaparasi Sampel

Preparasi Sampel kulit buah naga yang telah disimpan selama 5

hari dengan pelarut air yang diambil menggunakan rasio pelarut dari 4: 1,

Suhu ekstraksi 36 oC, dan ekstraksi 9 jam. Larutan disaring dan

disentrifugasi solusi dan kemudian disiapkan untuk analisis.

III.3 Penentuan Betalain

Senyawa betalain dalam larutan diidentifikasi Dengan

spektrofotometri pada 200 nm sampai 800 nm dengan UV-

Vis spektrofotometer. Analisis betasianin dilakukan Dengan mengambil

sampel 1 ml, diencerkan dengan sitrat-fosfat Buffer pH 5 dan absorbansi

terukur pada 537 dan 500. Nilai absorbansi dihitung dengan A = 1,095

(537-500).Perhitungan konsentrasi Betalain berdasarkan rumus:

III.4 Analisis HPLC

Analisis HPLC dilakukan pada HPLC (UFLC Shimadzu HPLC-

System). Kolom analisis Shimpack 250 4 RP-18 (5 m) dioperasikan

pada suhu 30C. Pelarutnya 0,2% (v / v) asam format dalam air (A) dan

asetonitril (B). Di Laju alir 1 mL / menit, pemantauan simultan adalah

Tampil di nomor 535 nm.

III.5 Pengukuran Stabilitas

Pengukuran intensitas warna larutan betalain Dilakukan pada

empat perlakuan suhu (30, 50, 70 dan 1000C). Setiap solusi diukur

dengan maksimal Spektrofotometer balok gelombang panjang gelombang

Shimadzu UV-1800 dengan luas pengukuran panjang gelombang antara

200-800 nm

III.6 Penentuan Kapasitas Antioksidan

Kemampuan untuk mengais-ngais DPPH radikal bebas itu

Ditentukan berdasarkan metode Brand Williams dengan Modifikasi kecil.

Secara singkat, campuran reaksi itu Mengandung 20, 40, 60 dan 80 L

larutan dan 2 mL 6,25 Larutan DPPH 10-5 M disiapkan, dicampur, dan

kemudian Bereaksi dalam gelap selama 30 menit. Sampel kontrol yang

mengandung Volume pelarut yang sama dengan larutan yang biasa

digunakan Ukurlah maksimum 2,2-difenil-1-pikrilidrazil (DPPH)

penyerapan. Absorbansi pada 517 nm tercatat Untuk mengetahui

konsentrasi DPPH yang tersisa.

 BAB IV

PEMBAHASAN

Karakterisasi Betalain dengan Spektrofotometer Pengukuran

spektrum UV-Vis dari sampel Solusi yang diperoleh dari puncak rentang

panjang gelombang Cahaya tampak pada panjang gelombang 540 nm

ditunjukkan pada gambar dibawah ini.

Data spektrofotometri dari larutan berair merah Kulit payau dikenal

dengan menyerap sampel Larutan, dari data itu bisa dihitung kandungan

betalain di solusinya. Ditemukan bahwa tingkat larutan berair

Kulit kupaya merah 7,72 mg / 100 g. Konsentrasi diperoleh Sangat kecil

karena jumlah kecil konten betalain Dalam solusinya Kehadiran puncak

penyerapan yang dominan pada Panjang gelombang spektrum terlihat

diperoleh dari solusi Sampel menunjukkan adanya senyawa betalain. Ini

Konfirmasikan perbedaan antara senyawa betalain dan Senyawa

antosianin.

Munculnya puncak yang dominan Menunjukkan bahwa ada kelas

senyawa betalain yang mana Bukan kelompok antosianin. Satu puncak

yang muncul adalah Diberikan oleh serentetan ikatan rangkap

terkonjugasi yang terkandung di dalamnya Struktur betalain, sedangkan

antosianin yang memiliki lebih banyak Struktur kompleks yang

mengandung benzoil dan Kerangka cinnamoyl itu akan memberikan dua

pengamatan utama Puncak penyerapan dalam rentang panjang

gelombang UV dan terlihat cahaya.

Anthocyanin memiliki dua karakteristik penyerapan pada Wilayah

panjang gelombang, UV (260-280 nm) dan terlihat (490-550 Nm).

Pengamatan spektrum terhadap larutan sampel ditemukan Penyerapan

sebagai bahu pada 310-340 nm, menunjukkan Kemungkinan senyawa

yang terkandung dalam larutan betalain Telah aslilasi asam organik

aromatik atau glikosilasi dengan gula Molekul. Betalain kelompok yang

ada terdiri dari beberapa Senyawa yang mengikat molekul gula.

Berdasarkan Pengamatan spektrum UV-Vis dari kemungkinan yang

mana Hanya terdeteksi senyawa betalain total. Jika Komposisi senyawa

betalain dalam larutan sampel Tidak dominan atau relatif sebanyak itu

akan sulit diprediksi Jenis betalain berdasarkan pengamatan UV. Untuk

perbandingan data spektral yang didapat Dari pengukuran

spektrofotometer dengan data dari Literatur untuk penentuan senyawa

dalam sampel Larutan menunjukkan betalain tidak cukup baik. Lalu ke

Meminimalkan kebingungan Anda harus menggunakan bahan baku, tapi

karena banyak variaties dari senyawa betalain yang ada begitu Sedikit

juga kemungkinan bisa mendapatkan standar betalain di Sesuai dengan

senyawa betalain yang ada di Larutan sampel yang diuji, berdasarkan hal
ini diperlukan Analisis yang lebih mendalam Ulasan seperti analisis oleh

HPLC.

Karakterisasi Betalain dengan Analisis HPLC Berdasarkan hasil

analisis HPLC, bisa dilihat Pemisahan betalain pada kromatogram HPLC

diperoleh dari Larutan sampel dibandingkan dengan betalain standar

Kromatogram. Pada puncak kromatogram Diduga mengidentifikasi

beberapa kelas senyawa betalain. Dibandingkan dengan standar puncak

betalain yang merupakan puncak pertama Muncul pada waktu retensi

8.459 menit, yang kedua Puncaknya muncul pada 10.707 menit dan

puncak ketiga muncul Di 11,725. Setiap puncak memiliki waktu retensi

yang sama Berasal dari standar, ini menunjukkan bahwa yang kedua

Kromatogram adalah betanin, isobetanin dan betanidin [13].

Berdasarkan waktu retensi puncak kemunculan betalain,

Hanya beberapa senyawa betalain yang memiliki polaritas berbeda

Dibandingkan dengan betalain sebelumnya, hal ini mungkin disebabkan

oleh Perbedaan gula atau asil terikat pada agetone betalain

Senyawa.

Pengukuran Stabilitas Solusi Betalain dari Suhu Larutan air putih

pitaya merah diolah dengan panas pada berbagai macam Suhu seperti 30

(sebagai kontrol), 50, 70 dan 100oC. Perlakuan panas dilakukan selama

15 menit di oven, satu titik Untuk melihat kerusakan atau kerusakan

betalain dengan perawatan Diberi suhu Alasan mengambil alih suhu

Variasi aplikasi sebagai zat warna untuk makanan dan minuman

Pengolahan, karena pada umumnya makanan dan minuman Pengolahan

menggunakan sistem air yang menggunakan suhu Titik didih air adalah

100C. Pengamatan pada Perlakuan yang diberikan terhadap efek suhu di

Larutan yang telah diencerkan dengan pelarut air, dimana Air adalah

dasar pelarut yang biasa digunakan dalam makanan

pengolahan.
 Suhu perlakuan dalam larutan sampel bisa jadi Dilihat dari data

yang dilekatkan pada tabel bahwa Suhu perlakuan mempengaruhi

spektrum yang ada Senyawa betalain Dari data tersebut dapat diamati

bahwa Suhu perlakuan dari larutan sampel memberikan Absorbansi

gangguan pengamatan larutan sampel Tidak diberi perlakuan suhu. Pada

panjang gelombang Maksimum 530 nm telah ditingkatkan tingkat

degradasi betalain Akibat kenaikan suhu, ini didasarkan pada

Penelitian melaporkan bahwa betacyanin Pigmentasi menurun pada 40,

50, 60OC namun meningkat pada 0, 10, 20OC.

Absorbansi pada panjang gelombang maksimum Senyawa betalain

dalam larutan sampel mengalami penurunan sebesar Kenaikan suhu Hal

ini menunjukkan adanya betalaian Degradasi senyawa yang terkandung

dalam larutan sampel. Tapi Ada hal menarik yang bisa dilihat dari data

Spektrum yang ada, dengan penurunan nilai pada panjang gelombang

Absorbansi maksimal pada 530 nm betalain, meningkat pada Nilai

absorbansi pada panjang gelombang 400 nm. Ini Ditunjukkan dengan

adanya degradasi bentuk betalain lainnya Senyawa dengan panjang

gelombang maksimum sekitar 400 nm Yang merupakan wilayah

spektrum warna kuning. Ini bisa Diperiksa lebih dalam dengan analisis

HPLC-MS.

Aktivitas antioksidan dari larutan sampel Ditentukan secara

kuantitatif oleh DPPH (1,1-difenil-2- Picrylhydrazyl), betalain dalam

mengurangi atau menangkap DPPH radikal. Kemampuan ini bisa dilihat

dari penurunan Intensitas warna ungu dari larutan DPPH adalah

Ditambahkan ke sampel. Mengurangi intensitas warna DPPH Larutan

dapat mengindikasikan bahwa reaksi bahan uji dengan Molekul radikal

DPPH membentuk senyawa 1,1-difenil-2- Pikrilhidrazin kuning Semakin

besar konsentrasi Bahan uji, warna kuning akan lebih kuat.

Pengurangan Intensitas warna ungu secara kuantitatif adalah

larutan DPPH Dapat dihitung dari penurunan absorbansi larutan. Semakin

besar konsentrasi zat uji Absorbansi terbaca lebih kecil, yang berarti

aktivitas dari Bahan uji dalam menangkap radikal DPPH yang lebih besar.

Itu Absorbansi yang diukur dari suspensi absorber DPPH yang tidak

Bereaksi dengan larutan uji. Aktivitas pemulungan radikal bebas DPPH

dari larutan Sampel dapat dinyatakan dengan parameter EC50 (efektif

Konsentrasi) adalah konsentrasi senyawa uji yang dipimpin Untuk

menangkap radikal bebas sebesar 50%.

Nilai EC50 Ditentukan dari persamaan regresi linier antara

Konsentrasi bahan uji dengan radikal bebas Perburuan persentase rata-

rata masing-masing konsentrasi. Secara khusus, senyawa tersebut bisa

dikatakan sangat Antioksidan kuat jika nilai EC50 kurang dari 50 ug / ml,
Kuat untuk EC50 seharga 50-100 ug / ml dan medium untuk EC50

seharga 151-200 ug / ml (Widyaningsih, 2010). Itu Aktivitas antioksidan

dari sampel larutan, nilai EC50 adalah Lebih dari 200 ug / ml, ini

menunjukkan bahwa sampel memiliki Aktivitas antioksidan lemah. Hal ini

mungkin disebabkan oleh Konsentrasi zat aktif dalam larutan rendah

sebagai Proses pelarut pelarut solusi belum dilakukan, Karena solusinya

dilakukan dengan menggunakan pelarut air sehingga Proses pelepasan

pelarut cukup sulit dilepas Karena titik didih air yang tinggi.
 BAB V

PENUTUP

IV. Kesimpulan

Senyawa yang terkandung dalam larutan kulit kupaya merah

Kelompok betalain memastikan penyerapannya maksimal Panjang

gelombang 540 nm. Larutan kulit kupaya merah mengandung Senyawa

utamanya adalah betanin, isobetanin dan betanidin. Stabilitas larutan

pada kulit pitaya merah semakin meningkat Tingkat degradasi betalain

akibat kenaikan suhu. Aktivitas antioksidan larutan berwarna merah

Kulit payau, nilai EC50 lebih dari 200 ug / ml, ini Menunjukkan bahwa

sampel memiliki aktivitas antioksidan yang lemah.

 DAFTAR PUSTAKA

1. Stintzing FC, and Carle R, Functional properties of anthocyanins and

betalains in plants, food, and in human nutrition, Trends Food Sci

Techn, vol. 15, pp. 19-38, 2004.

2. Francis FJ, Food colorants: Anthocyanins, Critical Rev Food Sci Nutr,

vol. 28, pp. 273314, 1989.

3.Henriette MC, and Azeredo, Betalains: properties, sources,

applications, and stability a review, International J Food Sci Technol ,

vol. 44, pp. 23652376, 2009.

4. Mazza G, and Miniati E. Introduction, In: Anthocyanins in Fruits,

Vegetables, and Grains. Chap 1. Boca Raton, FL: CRC Press; 1993.

pp. 128.

5. Strack D, Busch E, and Klein E, Anthocyanin patterns in European

orchids and their taxo nomic and phylogenetic relevance,

Phytochemistry, vol. 28, pp. 21272139, 1989

6. Strack D, Vogt T, and Schliemann W, Recent advances in betalain

research, Phytochemistry, vol.62, pp. 247-269, 2003.

7. Kanner, K., Harel, S., and Granit, R., Betalains A new class of dietary

cationized antioxidants, Journal of Agricultural and Food Chemistry,

vol. 49, pp. 51785185, 2001.

8. Khalida Y, A comparative study on the extraction of betacyanin in the

peel and flesh of dragon fruit, degree of Bachelor, Faculty of Chemical

and Natural Resources Engineering Universiti Malasyia Pahang,

Malasyia, 2010.

9.Faridah A, Holinesti R and Andromeda. (2014) Extraction,

characterization, purification, and identification of betalain from red

pitaya (Hylocereus polyrhizus) peel. (online)..

10. Khuluq A D, S B Widjanarko, and Erni Sofia Murtini, Ekstraksi dan

stabilitas betasianin daun darah (alternanthera dentata) (kajian

perbandingan pelarut air : etanol dan suhu ekstraksi), Jurnal Teknologi

Pertanian, vol 8 (3), pp. 172-181, 2007.

11. Brand-Williams W, Cuvelier ME, and Berset C, Use of a free radical

method to evaluate antioxidant activity, Lwt-Food Sci. Technol, vol. 28,

pp. 25-30, 1995.

12. Carson, C.F. and T.V. Riley, Antimicrobial activity of the major

components of the essential oil of Melaleuca alternifolia, J. Of Applied

Bacteriology vol. 78, pp. 264- 269, 1995.

13. Kavitha Ravichandran, Nay Min Min Thaw Saw, Adel A.A. Mohdaly,

Ahmed M.M. Gabr, Anja Kastell, Heidi Riedel, Zhenzhen Cai, Dietrich

Knorr, and Iryna Smetanska, Impact of processing of red beet on

betalain content and antioxidant activity, Food Research International,

vol. 50, pp. 670675, 2013.

14. Adlis Santoni, Djaswir Darwis,dan Sukmaning Syahri,2013, Isolasi

Antosianin dari Buah Pucuk Merah (syzygium campanulatum korth.

Serta Pengujian Antioksidan dan Aplikasi sebagai Pewarna Alam, in

Prosiding Semirata FMIPA Universitas Lampung.

15. Garca Barrera FA, Reynoso CR, Gonz lez de Meja E, Estabilidad

de las betala nas extra das del garambullo Myrtillocactus

geometrizans), Food Sci Technol Int, vol 4, pp. 115120, 1998.

16. Herbach, K. M., Stintzing, F. C., & Carle, R. (2004a). Thermal

degradation of betacyanins in juices from purple pitaya (Hylocereus

polyrhizus [Weber] Britton & Rose) monitored by high-performance

liquid chromatography-tandem mass spectrometric analyses,

European Food Research and Technology, vol. 219, pp. 377385,

2014.

17. Reshmi S.K, K. M. Aravindhan and P. Suganya Devi, The effect of

light, temperature, pH on stability of betacyanin pigments in basella alba

fruit, Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research, vol. 5,

pp. 107-110, 2012.