Pengaruh metilasi DNA gen PGR terhadap ekspresi mRNA PGR-A dan
PGR-B pada jaringan endometriosis
Tim Pengusul
Fakultas Kedokteran
Universitas Indonesia
Tahun 2017
LEMBAR PENGESAHAN
HIBAH PUBLIKASI INTERNASIONAL TERINDEKS UNTUK TUGAS AKHIR
MAHASISWA UNIVERSITAS INDONESIA (PITTA)
Judul Riset : Pengaruh metilasi DNA gen PGR terhadap ekspresi mRNA
PGR-A dan PGR-B pada jaringan endometriosis
Nama Rumpun Ilmu : Biomedik
Periset Utama :
a. Nama Lengkap : Dr. rer. nat. Dra. Asmarinah, MS
b. NIP/NUP/NIDN : 0021116502
c. Jabatan Fungsional : Staf Pengajar
d. Fakultas : Kedokteran
e. Program Studi : Magister Ilmu Biomedik
f. Nomor HP : 081381472194
g. Alamat surel (e-mail) : asmarinah.si@gmail.com
Anggota Peneliti (1) Anggota Peneliti (2)
a.Nama : Dr. dr. R Muharam, SpOG(K) a. Nama: Ririn Rahmala Febri, SKM, M.Biomed
b.NIDN : 0315046704 b. Unit Kerja: Indonesian Reproductive
c.Fakultas : Kedokteran Medicine Research and training center
Prof. dr. Pratiwi P. Sudarmono, PhD, SpMK(K) Dr. rer. nat. Dra. Asmarinah, MS
NIP. 195207311978022001 NIP. 196511211991032001
Menyetujui.
Dekan Fakultas Kedokteran
Mengetahui,
Wakil Dekan I Periset Utama
Prof. dr. Pratiwi P. Sudarmono, PhD, SpMK(K) Dr. rer. nat. Dra. Asmarinah, MS
NIP. 195207311978022001 NIP. 196511211991032001
Deskripsi riset untuk setiap mahasiswa yang terlibat
Judul
Ekspresi mRNA gen PGR A dan B pada jaringan eutopik endometrium dan peritoneum
pasien endometriosis
Latar Belakang
Endometriosis adalah kondisi kronis yang ditandai dengan pertumbuhan jaringan hormonal-
responsive endometrium di luar kavitas uterus.1 Endometriosis memiliki patogenesis yang
multi-faktor dengan beberapa teori dan teori implantasi retrogade menstruation yang paling
diterima.2 Beberapa penelitian menyatakan bahwa prevalensi endometriosis sekitar 11% pada
wanita usia reproduksi dan terjadi pada 50% wanita dengan nyeri pelvis dan atau infertility.3
Faktor yang menyebabkan terjadi infertilitas pada pasien endometriosis salah satunya karena
resistensi progesteron yang menggangu reseptivitas endometrium dan mempengaruhi
implantasi.4 Defenisi resistensi progesteron adalah keadaan dimana terjadi gangguan ekspresi
gen-gen progesteron-dependent pada eutopik endometrium pasien endometriosis. Resistensi
progesteron menyebabkan penurunan respon jaringan target terhadap aktivitas biologis
progesteron dan sering dikaitkan dengan rendahnya kadar reseptor hormon tersebut,
progesterone receptor (PGR).5 Walaupun begitu, mekanisme fungsional yang mendasari
penurunan fertilitas pasien endometriosis masih belum dipahami secara keseluruhan.4
Tujuan Riset
Menganalisis perbedaan ekspresi mRNA pada jaringan eutopik endometrium, endometriosis
peritoneum dan endometrium pasien normal
Kebaruan
Penelitian terakhir menyatakan bahwa ditemukan perubahan ekspresi gen PGR-A dan B
menggunakan metode imunohistokimia jaringan euopik endometrium pada pasien
endometriosis (16 sampel) dibandingkan dengan kontrol (10 sampel).6 Pada penelitian kami
kali ini melihat ekspresi gen setingkat mRNA protein PGR A dan B baik pada jaringan euopik
endometrium pasien endometriosis peritoneum (20 sampel) dibandingkan dengan ectopic
endometriosis peritoneum (20 sampel) maupun pada jaringan euopik endometrium pasien
endometriosis (20 sampel) dibandingkan dengan eutopic endometrium pasien sehat
(20sampel).
Metodologi
Pemeriksaan ekspresi mRNA dilakukan dengan RT-PCR pada masing-masing sampel
jaringan endometriosis peritoneum dan eutopic endometriumnya serta jaringan endometrium
sehat.
Luaran Publikasi
6th Asian Conference on Endometriosis, September 2017, Shiraz, Iran
Pustaka
1. Taylor R, Lebovic DI. Endometriosis. In: Stauss JF, Barbieri RL, editors. Yen & Jaffe’s
Reproductive endocrinology. 7th ed. Philadelpia: Elsevier Saunders; 2014. p.565-84.
2. Gupta S, Harlev A, Agarwal A, Pandithurai E. Theories on endometriosis. In: Gupta S,
Harlev A, Agarwal A, editors. Endometriosis A comprehensive update. New York:
Springer; 2015. p.17-20.
3. Buck Louis GM, Hediger ML, Peterson CM, Croughan M, Sundaram R, Standford J, et al.
Incidence of endometriosis by study population and diagnostic method: the ENDO study.
Fertil Steril. 2011; 96: p.360-5.
4. Altmae S, Aghajanova J. What do we know about endometrial receptivity in women with
endometriosis? A molecular prespective. Reprod Biomed Online. 2015; 31. p.581-583.
5. Brosens I, Brosens JJ, Benagiano G. The eutopic endometrium in endometriosis: are the
changes of clinical significance?. Reprod Biomed online. 2012; 24. p.496-502.
6. Wolfler MM, Kuppers M, Rath W, Buck VU, Meinhold-Heerlein I, Classen-Linke I.
Altered expression of progesterone receptor isoforms A and B in human eutopic
endometrium in endometriosis patients. Annals of Anatomy. 2016; 206. p.1-6.
Deskripsi riset untuk setiap mahasiswa yang terlibat
Judul
Analisis Metilasi DNA Gen Progesterone Receptor (PGR) pada Peritonium Endometriosis
Latar Belakang
Endometriosis merupakan suatu gangguan kompleks yang disebabkan oleh interaksi
beberapa faktor seperti genetik, imunologi dan epigenetik.1 Beberapa penelitian
menunjukkan bahwa adanya keterlibatan epigenetik, terutama metilasi DNA pada sejumlah
gen, dalam perkembangan penyakit endometriosis, salah satunya gen PGR.2 Resistensi
progesteron banyak ditemukan pada endometriosis yang diakibatkan oleh rendahnya kadar
PGR pada jaringan tersebut.3 Wu et al, menunjukkan bahwa PGRB mengalami
hipermetilasi pada daerah promoter di cell line endometriosis yang bisa menyebabkan
penurunan ekspresi dari PGR.4 Resistensi progesteron mengakibatkan penurunan respon
jaringan target terhadap bioavailabilitas progesteron yang terlihat pada wanita dengan
endometriosis dan dicurigai memberikan kontribusi pada patogenesis penyakit ini.5
Tujuan Riset
Menganalisis perbedaan derajat metilasi DNA pada promoter gen PGR di peritoneum
endometriosis dan kontrol.
Kebaruan
Metodologi
Pemeriksaan metilasi DNA dilakukan dengan metode methylated-specific PCR (MSP).
Luaran Publikasi
2nd International Conference and Exhibition IMERI
Pustaka
1. Aznourova YB, Zhumataev MB, Roberts TK, Aliper AM, AA Z. Molecular aspect of
development and regulation endometriosis. Reproductive and endocrinology. 2014:12.
2. Guo SW. Epigenetics of endometriosis. Mol Hum Reprod. 2009; 15: 587-607.
3. Bulun SE, Cheng YH, Yin P, Imir G, Utsunomiya H, Attar E, Innes J, Kim JJ. P:
Progesterone resistance in endometriosis: Link to failure to metabolize estradiol. Mol
Cell Endocrinol. 2006; 248:94–103.
4. Wu Y, Starzinski-Powitz A, Guo S-W. Prolonged stimulation with tumor necrosis
faktor-alpha induced partial methylation at PR-B promoter in immortalized epithelial-
like endometriotic cells. Fertil Steril. 2008; 90:234–7.
5. Bulun SE. Progesterone resistance and endometrial disease. Preface. Semin Reprod
Med. 2010; 28:3.
Deskripsi riset untuk setiap mahasiswa yang terlibat
Judul
Analisis Metilasi DNA Gen Progesterone Receptor (PGR) pada Eutopik Endometriosis
Latar Belakang
Endometriosis adalah suatu kelainan ginekologis kronis yang dimanifestasikan dengan adanya
jaringan mirip endometrium dan stromal yang tumbuh serta berkembang pada daerah
peritoneum pelvik dan ekstra uterus.1 Etiologi dan patofisiologi endometrisis belum
sepenuhnya dipahami, namun dari beberapa laporan dijelaskan bahwa endometriosis
merupakan penyakit dengan etiologi multifaktorial yang kompleks dimana faktor hormonal,
genetik dan modifikasi lingkungan terlibat dalam perkembangan endometriosis.2 Beberapa
penelitian menunjukkan bahwa adanya keterlibatan epigenetik, terutama metilasi DNA pada
sejumlah gen, dalam perkembangan penyakit endometriosis, salah satunya gen PGR. 3
Resistensi progesteron banyak ditemukan pada endometriosis yang diakibatkan oleh
rendahnya kadar PGR pada jaringan tersebut.4 Wu et al, menunjukkan bahwa PGRB
mengalami hipermetilasi pada daerah promoter di cell line endometriosis yang bisa
menyebabkan penurunan ekspresi dari PGR.5 Resistensi progesteron mengakibatkan
penurunan respon jaringan target terhadap bioavailabilitas progesteron yang terlihat pada
wanita dengan endometriosis dan dicurigai memberikan kontribusi pada patogenesis penyakit
ini.6
Tujuan Riset
Menganalisis perbedaan derajat metilasi DNA pada promoter gen PGR di eutopik
endometriosis dan kontrol.
Kebaruan
Metodologi
Pemeriksaan metilasi DNA dilakukan dengan metode methylated-specific PCR (MSP).
Luaran Publikasi
2nd International Conference and Exhibition IMERI
Pustaka
1. Aznourova YB, Zhumataev MB, Roberts TK, Aliper AM, AA Z. Molecular aspect of
development and regulation endometriosis. Reproductive and endocrinology. 2014:12.
2. Figtree GA, Noonan JE, Bhindi R, PC. Estrogen receptor polymorphism: significant
human physiology, disease and therapy. Recent Patents. 2009; 3: 164-71.
3. Guo SW. Epigenetics of endometriosis. Mol Hum Reprod. 2009; 15: 587-607.
4. Bulun SE, Cheng YH, Yin P, Imir G, Utsunomiya H, Attar E, Innes J, Kim JJ. P:
Progesterone resistance in endometriosis: Link to failure to metabolize estradiol. Mol
Cell Endocrinol. 2006; 248:94–103.
5. Wu Y, Starzinski-Powitz A, Guo S-W. Prolonged stimulation with tumor necrosis faktor-
alpha induced partial methylation at PR-B promoter in immortalized epithelial-like
endometriotic cells. Fertil Steril. 2008; 90:234–7.
6. Bulun SE. Progesterone resistance and endometrial disease. Preface. Semin Reprod Med.
2010; 28:3.
Rencana Anggaran Belanja (RAB)
Total 89.990.000
Anggaran (Rp)
CV Periset Utama
A. Identitas Diri
1 Nama Lengkap (dengan gelar) Dr. rer. nat. Dra. Asmarinah, MS
2 Jenis Kelamin Perempuan
3 Jabatan Fungsional Lektor
4 NIP/NUP 196511211991032001
5 Tempat dan Tanggal Lahir Jakarta, 21 November 1965
6 E-mail Asmarinah.si@gmail.com
7 Nomor Telepon/HP 081381472194
8 Fakultas/Prodi Kedokteran
Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat
dipertanggungjawabkan untuk memenuhi salah satu persyaratan dalam pengajuan hibah
PITTA.
Depok, 17 Februari 2017
Pengusul,
1 A study of BMI and menstrual cycle in Book of Abstract, the 5th April 2014
adolescents, Jakarta, Indonesia. Congress of the Asia
Pacific Initiative on
Reproduction,
2 Body Mass Index (BMI) as a predictive factor for Book of Abstract, the 5th April 2014
menarche in Indonesian female students. Congress of the Asia
Pacific Initiative on
Reproduction,
3 Correlation between levels of high-density Book of Abstract, the 5th April 2014
lipoprotein level in serum and follicular fluid with Congress of the Asia
oocyte quality in PCOS patients undergoing IVF Pacific Initiative on
Reproduction,
4 Correlation between obesity, dysmenorrhea and Book of Abstract, the 5th April 2014
premenstrual syndrome among indonesian Congress of the Asia
adolescence. Pacific Initiative on
Reproduction,
5 Does sperm quality affect blastocyst formation in Book of Abstract, the 5th April 2014
IVF ? Congress of the Asia
Pacific Initiative on
Reproduction,
6 Female factors associated with blastocyst Book of Abstract, the 5th April 2014
formation in women undergoing IVF. Congress of the Asia
Pacific Initiative on
Reproduction,
7 Frozen embryo cycle HAD Comparable outcome Book of Abstract, the 5th April 2014
with fresh cycle in IVF. Congress of the Asia
Pacific Initiative on
Reproduction,
8 Post-menopausal women : the tip of an iceberg Majalah Obstetri & Vol. 2, No.1
Ginekologi Indonesia. Januari 2014
9 Pentoxifylline as a therapy for thin endometrial Indonesian Journal of Vol.3, No.3
lining in infertility Obstetrics and July 2015
Gynecology
10 PPARγ expression in eutopic and ectopic Indonesian Journal of Vol.3, No.4
endometrium of reproductive age women with Obstetrics and Oktober 2015
endometriosis Gynecology
1 Pengaruh Leptin Serum Terhadap Gejolak Panas pada Agustus RSCM, Jakarta
Wanita Perimenopause dan Menopause di Rumah Sakit 2014
Umum Pusat Nasional Cipto Mangunkusumo Jakarta
2 Audit klinis rancangan panduan praktik klinis (PPK) kasus 2016 RSCM, Jakarta
prolapsus organ panggul, kanker serviks dan endometriosis
dalam menilai kendali mutu dan kendali biaya di RSCM
3
Dst
Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat
dipertanggungjawabkan untuk memenuhi salah satu persyaratan dalam pengajuan hibah
PITTA.
Depok, 17 Februari 2017
Pengusul,
A. Identitas Diri
1 Nama Lengkap (dengan gelar) Ririn Rahmala Febri, SKM, M.Biomed
2 Jenis Kelamin Perempuan
3 Tempat dan Tanggal Lahir Payakumbuh, 20 Februari 1990
4 E-mail ririnrahmalafebri@gmail.com
5 Nomor Telepon/HP 081213065155
6 Unit Kerja Indonesian Reproductive Medicine Research and
training center
Waktu
No Deskrips Tahun dan
. i Tempat
1 Profil Metilasi Gen HOXA10 pada Endometriosis 2015 FK UI
2 Hipermetilasi Promotor Gen dan Ekspresi mRNA Reseptor 2015-2016 FK UI
Progesteron A dan B pada Jaringan Endometriosis
3 Polimorfisme rs10895068 dan rs1042838 Gen Reseptor 2016 FK UI
Progesteron pada Jaringan Endometriosis
4 Metilasi Gen HOXA11 pada endometriosis 2016 FK UI
Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat
dipertanggungjawabkan untuk memenuhi salah satu persyaratan dalam pengajuan hibah
PITTA.
Dengan ini menyatakan sejujurnya bahwa proposal penelitian saya dengan judul:
Pengaruh metilasi DNA gen PGR terhadap ekspresi mRNA PGR-A dan PGR-B pada
jaringan endometriosis
yang diusulkan dalam skema Hibah Publikasi Internasional Terindeks Untuk Tugas
Akhir Mahasiswa UI bersifat original dan belum pernah dibiayai oleh lembaga/instansi
lain.
Bilamana di kemudian hari ditemukan ketidaksesuaian dengan pernyataan ini, maka saya
bersedia dituntut dan diproses sesuai dengan ketentuan yang berlaku dan mengembalikan
seluruh biaya penelitian yang sudah diterima ke kas Universitas Indonesia.
Dibuat di : Jakarta
Pada Tanggal : 17 Februari 2017
Mengetahui,
Wakil Dekan I Yang Membuat Pernyataan,
Prof. dr. Pratiwi P. Sudarmono, PhD, SpMK(K) Dr. rer. nat. Dra. Asmarinah, MS
NIP. 195207311978022001 NIP. 196511211991032001
PERNYATAAN KESEDIAAN IKUT SERTA DALAM RISET
Dengan ini menyatakan kesediaan untuk ikut serta sebagai periset anggota dan meluangkan
waktu untuk berkontribusi dalam riset yang diusulkan oleh Dr. rer. nat. Dra. Asmarinah,
MS dengan judul Pengaruh metilasi DNA gen PGR terhadap ekspresi mRNA PGR-A
dan PGR-B pada jaringan endometriosis. Apabila saya ternyata dikemudian hari tidak
memenuhi kesediaan yang telah disebutkan di atas, maka saya bersedia diberhentikan
keikutsertaannya dari riset tersebut.
Demikian pernyataan ini dibuat dalam keadaan sadar dan tanpa ada unsur paksaan dari
siapapun.
Dengan ini menyatakan kesediaan untuk ikut serta sebagai periset anggota dan meluangkan
waktu untuk berkontribusi dalam riset yang diusulkan oleh Dr. rer. nat. Dra. Asmarinah,
MS dengan judul Pengaruh metilasi DNA gen PGR terhadap ekspresi mRNA PGR-A
dan PGR-B pada jaringan endometriosis. Apabila saya ternyata dikemudian hari tidak
memenuhi kesediaan yang telah disebutkan di atas, maka saya bersedia diberhentikan
keikutsertaannya dari riset tersebut.
Demikian pernyataan ini dibuat dalam keadaan sadar dan tanpa ada unsur paksaan dari
siapapun.
Dengan ini menyatakan kesediaan untuk ikut serta sebagai periset anggota dan meluangkan
waktu untuk berkontribusi dalam riset yang diusulkan oleh Dr. rer. nat. Dra. Asmarinah,
MS dengan judul Pengaruh metilasi DNA gen PGR terhadap ekspresi mRNA PGR-A
dan PGR-B pada jaringan endometriosis. Apabila saya ternyata dikemudian hari tidak
memenuhi kesediaan yang telah disebutkan di atas, maka saya bersedia diberhentikan
keikutsertaannya dari riset tersebut.
Demikian pernyataan ini dibuat dalam keadaan sadar dan tanpa ada unsur paksaan dari
siapapun.
Darmawi
Lampiran 1. Surat Lulus Kaji Etik
Lampiran 2. Bioinformatika Gen PGR
1. Gen PGR (homo sapiens) pada kromosom 11
2. Primer PGR-AB
BLAST Primer
a. Forward: ACATGGTAGCTGTGGGAAGG
b. Reverse: GGCATAACTAACAAGGGACTGG
BLAST Primer
a. Forward: TCCCTCTGCCCCTATATTCC
b. Reverse: ACTGGACTCCCCTTTTCTCC
ACATGGTAGCTGTGGGAAGGAGGTTTCTTTCTCCAGGTCCTCACTGGCCATACACCAGTCCCTTGTTAGTTATGC
C
5. Produk PCR PGR-B: 87 bp
Homo sapiens progesterone receptor (PGR), RefSeqGene on chromosome 11
NCBI Reference Sequence: NG_016475.1
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NG_016475.1?from=5001&to=105190&report=fasta
TCCCTCTGCCCCTATATTCCCGAAACCCCCTCCTCCTTCCCTTTTCCCTCCTCCTGGAGACGGGGGAGGAGAAAA
GGGGAGTCCAGT