Bioteknologi Dasar Ahyar Ahmad PDF

LAPORAN
HIBAHPENULISAN BUKUAJAR
MATAKULIAH
BIOTEKNOLOGI DASAR
Oleh:
Prof. Dr. Ahyar Ahmad
Dibiayaioleh DanaDIPALayanan Umum

UniversitasHasanuddin Tahun 2014
SesuaidenganSKRektor UnhasNomor:813/UN4.12/PP.12/2014, Tanggal 8April
2014
PROGRAMSTUDIKIMIAJURUSANKIMIA
FAKULTASMATEMATIKADAN ILMU PENGETAHUANALAM
UNIVERSITASHASANUDDIN
TAHUN 2014
KEMENTERIAN PENDIDIKAN DANKEBUDAYAAN
UNIVERSITAS HASANUDDIN
LEMBAGAKAJIANDANPENGEMBANGANPENDIDIKAN
JL.PerintisKemerdekaanKm.10 Makassar90245 (GedungPerpustakaan UnhasLantaiDasar)
Telp.(0411) 586200, Ext.1064 Fax.(0411) 585 188 e-mail:lkpp@unhas.ac.id
HALAMAN PENGESAHAN
HIBAH PENULISAN
BUKUAJAR BAGITENAGA AKADEMIK
UNIVERSITASHASANUDDIN
TAHUN 2014
Judul Buku Ajar : BioteknologiDasar

Nama Lengkap : Prof. Dr. Ahyar Ahmad
NIP/NIDN : 196712311991031020/0031126362
Pangkat/Golongan : Pembina Utama /IVe
Jurusan/Bagian/Program Studi : Jurusan Kimia/Kimia
Fakultas/Universitas : FMIPA/Universitas Hasanuddin
Alamat e-mail : ahyarahmad@gmail.com
Biaya : Rp.5.000.000,- (Limajutarupiah)
Dibiayai oleh : DanaDIPA BOPTNUniversitas Hasanuddin
Tahun2014, Sesuai denganSurat
KeputusanRektor UniversitasHasanuddin
Nomor : 813/UN4.12/PP.12/2014, Tanggal
8April 2014
Makassar, 19 September 2014
Dekan Fakultas MIPA Penulis
Prof. Dr. H. Hanapi Usman, M.S Prof. Dr. Ahyar Ahmad

NIP. 195702281987031001 NIP.196712311991031020
Mengetahui :
Ketua Lembaga Kajian dan Pengembangan Pendidikan (LKPP)
Universitas Hasanuddin,
Prof.Dr. Ir.LellahRahim,M.Sc
NIP.196305011988031004
SURATPERNYATAAN
Sayapenulisbukuini
Nama lengkap : Prof. Dr. Ahyar Ahmad

NIDN : 0031126362
Denganinimenyatakanbahwa:
1. Bukuini benar saya tulis,bukan karya plagiat.Sumber semua gambar,
rumus,atauopinidarioranglainyangada didalamnyatelahdicantumkan
padaDaftarPustaka.
2. Bukuini sayaserahkankepadaLembagaKajiandanPengembangan
Pendidikan(LKPP)Unhas,untukselanjutnyadijadikan koleksiPerpustakaan
PusatUnhasdandalambentuksoftcopydipajangdi www.unhas.ac.idyang
dapatdiaksesolehsemuapengguna,khususnyamahasiswapeserta mata
kuliahBioteknologiProgramStudi S1KimiaUnhas.
Demikianpernyataaninisayabuatdengansungguh-sungguh.
Makassar, 19 September 2014

Penulis,
Prof. Dr. Ahyar Ahmad

NIDN:0031126362
ii
KATAPENGANTAR
Alhamdulillah, puji syukur kami panjatkan ke hadirat Allah SWT karena atas rahmat
dan hidayah-Nya sehingga buku Bioteknologi Dasar ini dapat diselesaikan dengan baik.
Kebutuhan akan tersedianya buku-buku ajar yang berbahasa Indonesia di perguruan tinggi
memang sangat dirasakan hingga saat ini, terutama oleh para mahasiswa dalam
menunjang penerimaan materi kuliah. Buku ajar ini merupakan penunjang utama untuk
perkuliahan Bioteknologi Dasar di Perguruan Tinggi, khususnya di Jurusan Kimia Fakultas
MIPA Universitas Hasanuddin.
Meskipunbukuinidibuatsecara khususuntukmahasiswa kimiaS1semester4 yang

telahmenempuhmatakuliah“Bioteknologi Dasar”, namuntidak menutup
kemungkinanadanyamahasiswadiluar kelompoktersebutyang tertarikuntuk
mempelajarinya.Buku ajar ini telah disusun secara sungguh sungguh yang diambil dari
berbagai sumber-sumber buku teks Bioteknologi baik yang berbahasa asing maupun dari
diktat yang telah kami susun sebelumnya dan telah dilakukan perbaikan semaksimal
mungkin yang isinya disesuaikan dengan perkembangan Bioteknologi pada umumnya,
yang membahas tentang Pengantar Bioteknologi, Proses fermentasi, Bioinsektisida, Sel
Induk (selpunca), dan Bioinformatika.Penulis akan senang menerima kritik yang
membangun dan berguna dari semua pihak, yang kiranya akan dapat menjadi bahan untuk
perbaikan pada penyusunan edisi selanjutnya.
Penulis mengucapkan terima kasih kepada semua pihak yang telah membantu baik
moril maupun dana hingga penulisan buku ajar bioteknologi dasar ini dapat terlaksana dan
semoga dapat bermanfaat bagi para mahasiswa tingkat diploma dan sarjana khususnya
yang mengambil mata kuliah Bioteknologi Dasar.
Penyusunanbukuini tidakterlepasdari campurtanganberbagai pihak,oleh

karenaitupada kesempataninikami mengucapkanbanyakterima kasih kepada
semuapihakyangmembantusehinggapenyusunanbukudapatterselesaikan dengan
baik,khususnyakepadaRektorUniversitas Hasanuddinyangtelahmemberikan
bantuanpendanaan melalui sumber dana DIPA BOPTN tahun 2014.
Makassar, September 2014
Penulis
iii
DAFTAR ISI
HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................ i
SURAT PERNYATAAN .................................................................................. ii
KATA PENGANTAR ....................................................................................... iii
DAFTAR ISI .................................................................................................... iv
BAB 1 PENDAHULUAN
1.1 Visi Program Studi Kimia ........................................................... 1
1.2 Misi Program Studi .................................................................... 1
1.3 Tujuan Program Studi ............................................................... 1
1.4 Profil Lulusan Program Studi ..................................................... 1
1.5 Kompetensi Lulusan .................................................................. 2
1.6 Struktur dan Isi Kurikulum ......................................................... 4
1.7 Analisis Kebutuhan Pembelajaran ............................................. 5
1.8 Rancangan Pembelajaran ......................................................... 8
1.9 Tinjauan Mata Kuliah ................................................................. 12
BAB 2 PENGERTIAN, RUANG LINGKUP, DAN PERKEMBANGAN
BIOTEKNOLOGI
2.1 Pendahuluan ............................................................................. 13
2.2 Batasan dan Pengertian Bioteknologi ....................................... 17
2.3 Peranan Ilmu Biologi, Biokimia, dan Keteknikan dalam
perkembangan Bioteknologi Molekular ..................................... 18
2.4 Teknik-teknik dalam Bioteknologi Molekular.............................. 34
2.5 Ringkasan ................................................................................. 51
Contoh Soal ....................................................................................... 52
iv
Daftar Pustaka ................................................................................... 53
Senarai Istilah dan Artinya ................................................................. 54
BAB 3 BIOTEKNOLOGI PADA PROSES FERMENTASI
3.1 Pendahuluan ............................................................................. 55
3.2 Fermentasi Yoghurt .................................................................. 59
3.3 Fermentasi Nata de Coco.......................................................... 63
3.4. Fermentasi Kecap ..................................................................... 70
3.5 Ringkasan ................................................................................. 76
Contoh Soal ...................................................................................... 77
Daftar Pustaka ................................................................................... 78
BAB 4 BIOINSEKTISIDA MIKROBA DAN VIRUS
4.1 Pendahuluan ............................................................................. 81
4.2 Bioinsektisida dari Mikroba ........................................................ 82
4.3 Bioinsektisida dari Virus ............................................................ 93
4. 4 Ringkasan ................................................................................. 101
Contoh Soal ...................................................................................... 101
Daftar Pustaka ................................................................................... 102
BAB 5 PRODUKSI ANTIGEN SEBAGAI KANDIDAT VAKSIN
5.1 Pendahuluan ............................................................................. 105
5.2 Tinjauan Umum Protein Manusia .............................................. 105
5.3 Tinjauan Umum Rekayasa Genetika ......................................... 107
5.4 Kegunaan Teknologi Rekombinan ............................................ 109
5.5 Tinjauan Umum Vaksin ............................................................. 110
v
5.6 Vaksin Rekombinan untuk Beberapa Penyakit.......................... 113
5.7 Ringkasan ................................................................................. 119
Contoh Soal ...................................................................................... 119
Daftar Pustaka ................................................................................... 120
BAB 6 SEL INDUK DALAM BIOTEKNOLOGI KESEHATAN
6.1 Pendahuluan ............................................................................. 123
6.2 Pengertian Sel Induk ................................................................. 124
6.3 Karakteristik dan Jenis Sel Induk .............................................. 125
6.4 Aplikasi Kultur Sel Induk ............................................................ 129
6.5 Perkembangan Penelitian dan Penerapan Sel Induk di Indonesia 136
6.6 Bioetika dan kontroversi pada Penggunaan Sel Induk
(Stem Cells)............................................................................... 137
6.7 Ringkasan ................................................................................. 139
Contoh Soal ....................................................................................... 140
Daftar Pustaka ................................................................................... 141
BAB 7 PENGGUNAAN ANTIBODI MONOKLONAL PADA BIDANG KESEHATAN
7.1 Pendahuluan ............................................................................. 143
7.2 Sistem Kekebalan Tubuh Antibodi ............................................ 144
7.3 Antibodi Monoklonal .................................................................. 153
7.4 Ringkasan ................................................................................. 167
Contoh Soal ....................................................................................... 168
Daftar Pustaka ................................................................................... 169
vi
RANCANGAN PEMBELAJARAN BERBASIS KBK
NAMA / KODE MATAKULIAH : BIOTEKNOLOGI DASAR/333H3102

KOMPENTENSI UTAMA : Kemampuan memahami konsep dasar bioteknologi dan menerapkan pengetahuan
bioteknologi dalam berbagai bidang ilmu seperti : sains, pertanian, farmasi, dan kedokteran
KOMPENTENSI PENDUKUNG : Memiliki kemampuan dan keterampilan dalam berkomunikasi, presentasi materi tentang
pengetahuan bioteknologi, dan bekerjasama dalam suatu tim (team working skill)
KOMPENTENSI LAINNYA : Memiliki kesadaran, kepedulian dan komitmen terhadap pengembangan dan pemanfaatan
(INSTITUSIONAL) produk bioteknologi dalam peningkatan kualitas hidup manusia.
MINGGU STRATEGI INDIKATOR

SASARAN PEMBELAJARAN MATERI PEMBELAJARAN BOBOT NILAI (%)
KE PEMBELAJARAN PENILAIAN
1 - Menjelaskan ruang lingkup - Deskripsi ruang lingkup - Umpan balik - Persetujuan 0
dan tujuan pembelajaran mata kuliah dan tujuan
Bioteknologi belajar bioteknologi
- Menjelaskan atas kontrak - Kontrak pembelajaran
pembelajaran
2 - Menjelaskan sejarah, batasan - Pengertian, sejarah, dan - Active Learning - Kelengkapan isi, 5
bioteknologi dan aplikasinya aplikasi bioteknologi :Kuliah, penelusuran kejelasan uraian,
- Memprediksi strategi dan arah - perkembangan bioteknologi pustaka dan tugas kerjasama tim dan
perkembangan bioteknologi dimasa depan dan mandiri kreativitas.
dimasa depan dan hubungannya dengan
hubungannya dengan bidang bidang ilmu lainnya
ilmu lainnya
3-4 - Menjelaskan model - Model Fermentasi - Collaborative - Kejelasan uraian, 10

fermentasi dan mampu (Fermentasi sistim tertutup, Learning :Kuliah, sistematis dan
membedakan fermentasi kontinyu, dan fed-batch) presentasi dan kerja ketepatan
sistim tertutup, kontinyu, dan kelompok penerapan
- Parameter lingkungan fisik
fed-batch konsep pada
dan kimiawi
- Menjelaskan parameter
1
lingkungan fisik dan kimiawi - Struktur dan jenis fermentor jawaban
fermentor
- Pencapaian kondisi aseptis
- Menggambarkan struktur dan
dalam fermentor
menyebutkan jenis/macam
fermentor
- Menjelaskan kondisi-kondisi
aseptis yang dibutuhkan
fermentor
5 - Menjelaskan proses - Produk Yoghurt - Active Learning - Kejelasan uraian, 10

Fermentasi Yoghurt - Produk Nata de Coco :Kuliah,tutorial, sistematis dan
- Menjelaskan proses - Produk Kecap Kunjungan industry, ketepatan
Fermentasi Nata de Coco kerja kelompok dan penerapan
- Menjelaskan proses presentasi konsep pada
Fermentasi Kecap
jawaban
-
6-7 - Menjelaskan pengertian dan - Pengertian dan - Problem Base - Kejelasan langkah 10
penggolongan bioinsektisida penggolongan bioinsektisida Learnin, Penelusuran uraian, ketepatan
- Menjelaskan Bioinsektisida - Bioinsektisida dari Mikroba pustaka, Presentasi penerapan dan
dari Mikroba - Bioinsektisida dari Virus konsep pada
- Menjelaskan Bioinsektisida jawaban
dari Virus
9-10 - MenjelaskanTinjauan Umum - Tinjauan Umum Protein - Problem Based - Ketepatan 10

Protein Manusia Manusia Learning, presentasi, penerapan konsep
- Menjelaskan Tinjauan Umum - Tinjauan Umum Rekayasa Kerja individu dan sistematis
Rekayasa Genetika Genetika pada jawaban
- Menjelaskan Kegunaan - Kegunaan Teknologi
Teknologi Rekombinan Rekombinan
- Menjelaskan Tinjauan Umum - Tinjauan Umum Vaksin
Vaksin - Vaksin Rekombinan untuk
- Menjelaskan Vaksin Beberapa Penyakit
Rekombinan untuk Beberapa
2
Penyakit
11 - Menjelaskan Pengertian Sel - Pengertian Sel Induk - Problem Based - Kejelasan langkah 5
Induk - Karakteristik dan Jenis Sel Learning :Penelusuran uraian, ketepatan
- Menjelaskan Karakteristik Induk pustaka, kerja penerapan dan
dan Jenis Sel Induk - Aplikasi Kultur Sel Induk kelompok konsep pada
- Menjelaskan Aplikasi Kultur - Bioetika dan kontroversi jawaban
Sel Induk pada Penggunaan Sel Induk
- Menjelaskan Bioetika dan
kontroversi pada Penggunaan
Sel Induk
12-13 - MenjelaskanSistem - Sistem Kekebalan Tubuh - Problem Based - Kejelasan langkah 10

Kekebalan Tubuh Antibodi Antibodi Learning :Penelusuran uraian, ketepatan
- Menjelaskan Produksi - Produksi Antibodi pustaka, kerja penerapan dan
Antibodi Monoklonal Monoklonal kelompok konsep pada
- MenjelaskanMekanisme kerja - Mekanisme kerja Antibodi jawaban
Antibodi Monoklonal Monoklonal
14-15 - MenjelaskanPengertian, - Pengertian, Batasan dan - Problem Based - Kejelasan langkah 10

Batasan dan Klasifikasi Klasifikasi Bioinformatika Learning :Penelusuran uraian, ketepatan
Bioinformatika - Penerapan Bioinformatika pustaka, kerja penerapan dan
- MenjelaskanPenerapan dalam Bidang Sains, kelompok konsep pada
Bioinformatika dalam Bidang Kedokteran, dan Kesehatan jawaban
Sains, Kedokteran, dan
Kesehatan
-
8 dan 16 - Menjawab soal-soal ujian - Tes tertulis (Problem - Kerja individu - Kejelasan langkah
Solving) sistimatis dalam
30
menyelesaikan soal
ujian
Pustaka:
1. Brown, T. A. (1991) Pengantar Kloning Gene (terjemahan), Editor: Praseno, S. A. M. Penerbit Yayasan Essentia Medica, Yogyakarta.
3
2. Cooper, G. M. (2001). The Cell a molecular approach 2st Edition ASM press, Washington, D.C.
3. Glick Bernard R., and Jack,J. Pasternak, (1994). Molecular Biotechnology : Principles and Application of Recombinant DNA.
4. Lewin, B. (1997) Genes VI, Oxford Univ. Press. UK.
5. Sambrook, J., Fritsch, E. F. and Maniatis, T. 1989. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd edn. ColdSpringHarbor Laboratory Press,Cold Spring
Harbor, NY.
6. Walker, S. (2009) Menyingkap Tabir bioteknologi: Panduan Belajar Mandiri (Terjemahan). Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta.
4
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1 Visi Program Studi Kimia
Pada tahun 2020, Prodi Kimia menjadi pusat unggulan dalam pemanfaatan sumber
daya alam benua maritim yang bermanfaat dan berkesinambungan.
1.2 Misi Program Studi
a. Menghasilkan lulusan yang profesional serta dapat bersaing di pasar kerja

global.
b. Mengembangkan pendidikan dan penelitian yang berkualitas serta
berkesinambungan.
c. Memberikan kontribusi seluas-luasnya dan manfaat sebesar-besarnya bagi
masyarakat.
1.3 Tujuan Program Studi
a. Meningkatkan produktivitas dan kualitas lulusan yang dapat bersaing di pasar

kerja global.
b. Meningkatkan mutu prasarana, sarana, dan teknologi serta mewujudkan atmosfir
akademik yang sehat dan kondusif serta bermanfaat bagi sivitas akademika
untuk mendukung terselenggaranya misi program studi.
c. Mampu berperan sebagai pusat kajian, pengembangan, dan pemanfaatan
sumberdaya alam benua maritim yang berkesinambungan.
d. Memupuk dan mengembangkan kerjasama kemitraan dengan sektor internal dan
eksternal dalam rangka memberikan kontribusi dan manfaat yang seluas-luasnya
bagi masyarakat.
e. Mewujudkan serta menumbuhkembangkan institusi yang sehat dan kuat yang
didukung oleh budaya ilmiah.
1.4 Profil Lulusan Program Studi

a. Memiliki Pengetahuan yang memadai dalam bidang kimia.
b. Terampil mengoperasikan peralatan standar laboratorium kimia.
c. Memiliki wawasan yang luas terhadap sumber daya alam benua maritim dari
aspek kimia.
d. Terampil berkomunikasi ilmiah, baik secara lisan maupun tulisan.
e. Memiliki keterampilan bahasa Inggris dan Teknologi Informasi.
1
f. Mampu beradaptasi dengan berbagai jenis lapangan pekerjaan.
1.5 Kompetensi Lulusan
a. Penguasaan Pengetahuan (PP)

1. Menguasai konsep teoritis tentang struktur, sifat, perubahan energi dan
kinetik, identifikasi, pemisahan, karakterisasi, transformasi, sintesis bahan
kimia dan terapannya.
2. Menguasai pengetahuan tentang fungsi, cara mengoperasikan instrumen
kimia yang umum, dan analisis data dari instrumen tersebut.
3. Menguasai prinsip dasar piranti lunak analisis dan sintesis pada bidang kimia
umum atau lebih spesifik (kimia organik, biokimia, kimia analitik, kimia fisika,
atau kimia anorganik).
b. Kemampuan Kerja (KK)
1. Memiliki keterampilan analisis dan kemampuan untuk menerapkan berbagai

metode, prinsip dasar, dan logika kimia dalam memecahkan masalah kimia.
2. Memiliki kemampuan dan keterampilan dalam pengolahan data dan
informasi secara kimia.
3. Memiliki kemampuan dan keterampilan melakukan penelitian dengan
menerapkan pengetahuan dan teknologi terkait dalam proses identifikasi,
isolasi, transformasi, dan sintesis kimia secara mandiri.
4. Memiliki kemampuan mengelola bahan kimia di lingkungan dan proses
manufaktur pada institusi pemerintah dan swasta.
5. Memiliki kemampuan menerapkan konsep kimia dalam berwirausaha.
6. Memiliki kemampuan mengidentifikasi dan menganalisis permasalahan yang
ada pada masyarakat.
7. Memiliki kemampuan mengikuti perkembangan IPTEKS.
c. Karakter dan Kepribadian (KDK)
1. Bertakwa kepada Tuhan Yang Maha Esa.

2. Memiliki moral, etika, dan kepribadian yang baik dalam menjalankan
tugasnya.
3. Berperan sebagai warga negara yang bangga dan cinta tanah air serta
mendukung perdamaian dunia.
4. Memiliki kesadaran, kepedulian, dan komitmen terhadap pengembangan
dan pemanfaatan sumber daya alam berbasis benua maritim.
2
5. Memiliki pemahaman, kesadaran dan kearifan tentang berbagai aspek
sosial, ekonomi dan budaya akibat dampak laju perkembangan IPTEKS
yang pesat.
6. Menghargai keanekaragaman budaya, pandangan, kepercayaan, dan
agama serta pendapat/temuan original orang lain.
Untukmenghasilkanlulusandenganprofilseperti yang telah disebutkan diatas
makaperluadanya deskripsikompetensi yang seharusnya dimiliki oleh para lulusan prodi
Kimia.Adapun kaitanantaraprofillulusanProdi Kimia FMIPA Unhas dengan kompetensi yang
seharusnya dimiliki oleh para lulusandipaparkan seperti dalam Tabel 1.1.
Tabel 1.1. Matriks hubungan antara Profil dan Kompetensi Lulusan
Kompetensi yang seharusnya dimiliki

Profil
Penguasaan Karakter dan
Lulusan Kemampuan Kerja
pengetahuan Kepribadian
Menguasai konsep teoritis Memiliki keterampilan Bertakwa kepada
tentang struktur, sifat, analisis dan Tuhan Yang Maha Esa
perubahan energi dan kemampuan untuk
kinetik, identifikasi, menerapkan berbagai
pemisahan, karakterisasi, metode, prinsip dasar,
transformasi, sintesis dan logika kimia
bahan kimia dan dalam memecahkan
terapannya masalah kimia.
Memiliki kemampuan Memiliki moral, etika,
Integritas dan keterampilan dan kepribadian yang
dalam pengolahan baik dalam
data dan informasi menjalankan tugasnya.
secara kimia
Berperan sebagai
warga negara yang
bangga dan cinta
tanah air serta
mendukung
perdamaian dunia.
Menguasai pengetahuan Memiliki kemampuan
tentang fungsi, cara dan keterampilan
mengoperasikan melakukan penelitian
instrumen kimia yang dengan menerapkan
umum, dan analisis data pengetahuan dan
dari instrumen tersebut. teknologi terkait
dalam proses
Inovatif identifikasi, isolasi,
transformasi, dan
sintesis kimia secara
mandiri.
Memiliki kemampuan
menerapkan konsep
kimia dalam
berwirausaha
3
Menguasai prinsip dasar Memiliki kemampuan
piranti lunak analisis dan mengikuti
sintesis pada bidang kimia perkembangan
umum atau lebih spesifik IPTEKS
(kimia organik, biokimia,
kimia analitik, kimia fisika,
Katalitik atau kimia anorganik)
Memiliki kemampuan
mengidentifikasi dan
menganalisis
permasalahan yang
ada pada masyarakat.
Memiliki kemampuan Memiliki kesadaran,
mengelola bahan kepedulian, dan
kimia di lingkungan komitmen terhadap
dan proses pengembangan dan
manufaktur pada pemanfaatan sumber
institusi pemerintah daya alam berbasis
dan swasta benua maritim.
Memiliki pemahaman,
kesadaran dan
kearifan tentang
berbagai aspek sosial,
Arif
ekonomi dan budaya
akibat dampak laju
perkembangan
IPTEKS yang pesat.
Menghargai
keanekaragaman
budaya, pandangan,
kepercayaan, dan
agama serta
pendapat/temuan
original orang lain.
1.6 Struktur dan Isi Kurikulum
Setelah semua kompetensi lulusan terumuskan, langkah selanjutnya adalah mengkaji

apakah kompetensi tersebut telah mengandung kelima elemen kompetensi seperti yang
diwajibkan dalam Kepmendiknas No.045/U/2002. Kelima elemen kompetensi tersebut
adalah :
(a) landasan kepribadian,

(b) penguasaan ilmu dan keterampilan,
(c) kemampuan berkarya,
(d) sikap dan perilaku dalam berkarya menurut tingkat keahlian berdasarkan ilmu
dan keterampilan yang dikuasai, dan
(e) pemahaman kaidah berkehidupan bermasyarakat sesuai dengan pilihan keahlian
dalam berkarya.
4
Adabeberapa point dari kompotensitersebut
diatasyangditunjangolehMatakuliahBioteknologi Dasarsebagaimanadipaparkandalam Tabel
1.2.
Tabel1.2.KompetensiLulusanProdi KimiaFMIPA UnhasyangDidukung

olehMataKuliahBioteknologi Dasar.
MK PK KK KDK
1 2 3 1 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4 5 6
BioteknologiDasar
√ √ √√ √ √ √
1.7 AnalisisKebutuhanPembelajaran
Pembelajaran Bioteknologi Dasarmemilikiperan pentingdidalampembelajaranmata

kuliahRekayasa Genetika dan Bioteknologi Molekular pada semester berikutnya dan
sekaligus menunjang pencapaian kompetensi lulusan Prodi Kimia,namun masih dianggap
sulitdimengerti bagi para mahasiswa peserta mata kuliah tersebut.Halinimenjaditantangan
bagipengajaruntukmembuat mata kuliah tersebut menjadi menarikdan mudah
dimengerti.Untukituperludipikirkandengan sungguh-
sungguhtentangnormapedagogisyangakandigunakan didalam
pembelajarannya.Normapedagogisiniakanmengarahkan kepadapemilihan
metodedanmateri ajar untukkepentinganpembelajaran.
Dalamupayauntukmemahami normapedagogisyangsejalandengan
kebutuhanpembelajaran mata kuliahBioteknologi Dasar, makaperluadanya
pembahasantentang:
1) Kondisi awal mahasiswa;
2) Normapedagogispemilihan materi pembelajaran;
3) Pendekatanpembelajaran yangdilakukan; dan
4) Metodepembelajaran yangdigunakan.
1.7.1 Kondisi awal mahasiswapesertamatakuliahBioteknologi Dasar
MahasiswapesertamatakuliahBioteknologi Dasaradalahmahasiswasemester
VIsehinggadapatdiharapkan telahmemilikipengetahuandasartentangbeberapa bidangilmu
kimia.Darisegipsikologi, mereka telahmulaimemasukiranah kedewasaan, sehinggadalam
sistem pembelajaran yang diterapkan kepadanya harus mempertimbangan aspek
pedagogis pelajar dewasa, diantaranya: (1) mereka sudahmampu
menelusurimateripembelajarandibanyakmedia,dan(2) sukamengespresikandirimereka,
mempresentasikansesuatu,dan mengemukakan pendapat. Akan tetapi, kemampuan
5
berpikir secara analisis dan sintesis tidak paraleldengan kedewasan, melainkan
melaluilatihanproblemsolving.Padahal kemampuansemacamitusangat
diperlukandalamduniakerja.
Kondisiawal mahasiswasebagaimana telahdijelaskan diatassangat cocok
denganpenerapan sistempembelajaran dengan metodeStudentCenterLearning (SCL)
yangsecara bertepatan dengan sistem pembelajaran yangdipilihdan ditetapkanoleh
pimpinan Unhas.Disampingdapatmeningkatkanpengetahuan mahasiswa tentangsubstansi
pembelajaran,sistemini juga memberikan peluang kepada setiap mahasiswa untuk
mengekspresikan diri melalui teknik presentasi dan mengemukakanpendapat
tanpamengucilkanpendapatoranglain.
1.7.2 Normapedagogispemilihanmateripembelajaran
Substansipembelajaran Bioteknologi Dasaradalahbagaimanamengkaitkanantara ilmu

Biologi dan Biokimiadengan dengan ilmu keteknikan untuk menghasilkan barang dan jasa
dengan melibatkan sel hidup dan bagian-bagiannya.Halinimelibatkan beberapakonsep
hasilpemikirananalisisdansintesisberbagai fenomenayang diperlihatkanolehsenyawa-
senyawayang ditemukan dalam sel hidup, seperti kabohidrat, lemak, protein, dan asam
nukleat.
Substansi pembelajaran Bioteknologi Dasarmempunyai karakter yang
menuntutmahasiswauntukberpikirsecaraanalisisdansintesissehingga cocok untuk
peningkatan daya berpikir secara analisis dan sintesis mahasiswa. Oleh
karenaitu,normapedagogispembelajarannyasecarasignifikan mengarahkan
pengajardalampemilihanmateriyangsesuaidengan karaktertersebut,serta
memberikanlatihansecaralangsunguntuk menjelaskansecara sistematik peranan sel hidup
untuk menghasilkan produk yang berguna untuk kemaslahatan umat manusia.
1.7.3 PendekatanpembelajaranBioteknologi Dasar
Pendekatan yangdigunakan dalampembelajaran Bioteknologi Dasar dititik beratkan

pada penggunaan konsep-konsep teoritis yang telah adauntuk menjelaskan
karakterdansifat-sifatyangdiperlihatkanoleh senyawa kimia dalam sel hidup.
Sistempembelajaran menggunakanmetode SCLdimana,pengajar atau dosendalam
pembelajaran lebih banyak memfungsikan dirinya sebagai fasilitator dan mitra bagi para
mahasiswa. Dalam halini, pengajaratau dosenmemberikanpenjelasan singkat tentang
GBRP, membuat kontrakkuliah, sertamelakukan pembagian kelompok dan tugas
kelompokdisetiapawalperkuliahan. Hasilpekerjaankelompokakan
dipresentasikanpadapertemuan berikutnya. Pada setiapsegmenakhir
perkuliahan,pengajarmelakukanumpanbaliksebagai koreksiapasaja yang
6
telahdipresentasikan.
1.7.4 MetodepembelajaranBioteknologi Dasar
Untukmenetapkanpilihanmetodepembelajarannsuatumata kuliah,adabeberapahal
yangseharusnyadipertimbangkandiantaranya adalah kondisiawalpeserta kuliah, jumlah
peserta kuliah, fasilitasyangtersedia, dansasaranpembelajaran.
Sebagaimanatelahdijelaskansebelumnyabahwa(1)pesertamata kuliahBioteknologi
DasaradalahmahasiswasemesterVIdenganjumlahpesertarata-
ratadiatas40orangperkelas,dan pembelajaranBioteknologi Dasardititikberatkanpada
penggunaan konsep-konsepteoritisdan praktis yangtelahadauntukmenjelaskan
karakterdan sifat-sifatyangdiperlihatkansuatuspesiesbiomolekul yang meliputi struktur dan
fungsi fisiologinya,makauntukkondisiseperti itucukupidealapabilapengajar atau dosen
menerapkan metodepembelajaran SCL.Adabeberapa metode pembelajaran
yanglazimdigunakandalamsistempembelajaranSCL,di antaranyaadalah:
1. Small GroupDiscussion
2. Role-Play&Simulation
3. CaseStudy
4. DiscoveryLearning(DL)
5. Self-DirectedLearning(SDL)
6. CooperativeLearning(CL)
7. CollaborativeLearning(CbL)
8. ContextualInstruction(CI)
9. ProjectBasedLearning(PBL)
10. ProblemBasedLearningandInquiry(PBL)
Berdasarkan kondisidiatas maka metodeyangdapatditerapkan didalam pembelajaran

Bioteknologi Dasar adalah Collaborative Learning (CbL) dan ProjectBasedLearning(PBL).
Di dalamProjectBasedLearning(PBL), mahasiswadibagi menjadi beberapa
kelompokdandiberitugasuntukdikerjakan, masing-masing kelompokakan
menpresentasikanhasilpekerjaan dalam bentuk makalah ataupun tugas lainnyadidepan
kelasdandilanjutkandiskusiantara kelompokpresenter dengankelompok yangbukan
presenter atau peserta. Pada akhir presentasi,dosen sebagai fasilitatorakanmelakukan
koreksidan membuatkesimpulan.Sedangkan didalam
ProjectBasedLearning(PBL),fasilitatorakanmemberikansoalyang berhubungan
tentangfaktayangdiperolehsenyawa atau produktertentu dari sel hidupuntukdijelaskan oleh
pesertamata kuliahsecarabergilirandenganmenggunakan konsep-konsepyang
7
telahdipelajari.
8
1.8 RANCANGAN PEMBELAJARAN BERBASIS KKNI
NAMA / KODE MATAKULIAH : BIOTEKNOLOGI DASAR/333H3102
KOMPENTENSI UTAMA : Kemampuan memahami konsep dasar bioteknologi dan menerapkan pengetahuan bioteknologi
dalam berbagai bidang ilmu seperti : sains, pertanian, farmasi, dan kedokteran
KOMPENTENSI PENDUKUNG : Memiliki kemampuan dan keterampilan dalam berkomunikasi, presentasi materi tentang
pengetahuan bioteknologi, dan bekerjasama dalam suatu tim (team working skill)
KOMPENTENSI LAINNYA : Memiliki kesadaran, kepedulian dan komitmen terhadap pengembangan dan pemanfaatan produk
(INSTITUSIONAL) bioteknologi dalam peningkatan kualitas hidup manusia.
MINGGU STRATEGI INDIKATOR

SASARAN PEMBELAJARAN MATERI PEMBELAJARAN BOBOT NILAI (%)
KE PEMBELAJARAN PENILAIAN
1 - Menjelaskan ruang lingkup - Deskripsi ruang lingkup - Umpan balik - Persetujuan 0

dan tujuan pembelajaran mata kuliah dan tujuan
Bioteknologi belajar bioteknologi
- Menjelaskan atas kontrak - Kontrak pembelajaran
pembelajaran
2 - Menjelaskan sejarah, batasan - Pengertian, sejarah, dan - Active Learning - Kelengkapan isi, 5
bioteknologi dan aplikasinya aplikasi bioteknologi :Kuliah, penelusuran kejelasan uraian,
9
- Memprediksi strategi dan arah - perkembangan bioteknologi pustaka dan tugas kerjasama tim dan
perkembangan bioteknologi dimasa depan dan mandiri kreativitas.
dimasa depan dan hubungannya dengan
hubungannya dengan bidang bidang ilmu lainnya
ilmu lainnya
3-4 - Menjelaskan model - Model Fermentasi - Collaborative - Kejelasan uraian, 10

fermentasi dan mampu (Fermentasi sistim tertutup, Learning :Kuliah, sistematis dan
membedakan fermentasi kontinyu, dan fed-batch) presentasi dan kerja ketepatan
sistim tertutup, kontinyu, dan kelompok penerapan konsep
- Parameter lingkungan fisik
fed-batch pada jawaban
dan kimiawi
- Menjelaskan parameter
lingkungan fisik dan kimiawi - Struktur dan jenis fermentor
fermentor - Pencapaian kondisi aseptis
- Menggambarkan struktur dan dalam fermentor
menyebutkan jenis/macam
fermentor
- Menjelaskan kondisi-kondisi
aseptis yang dibutuhkan
fermentor
5 - Menjelaskan proses - Produk Yoghurt - Active Learning - Kejelasan uraian, 10

Fermentasi Yoghurt - Produk Nata de Coco :Kuliah,tutorial, sistematis dan
- Menjelaskan proses - Produk Kecap Kunjungan industry, ketepatan
Fermentasi Nata de Coco kerja kelompok dan penerapan konsep
- Menjelaskan proses presentasi pada jawaban
Fermentasi Kecap
6-7 - Menjelaskan pengertian dan - Pengertian dan - Problem Base - Kejelasan langkah 10
penggolongan bioinsektisida penggolongan bioinsektisida Learnin, Penelusuran uraian, ketepatan
- Menjelaskan Bioinsektisida - Bioinsektisida dari Mikroba pustaka, Presentasi penerapan dan
dari Mikroba - Bioinsektisida dari Virus konsep pada
- Menjelaskan Bioinsektisida jawaban
10
dari Virus
9-10 - Menjelaskan Tinjauan Umum - Tinjauan Umum Protein - Problem Based - Ketepatan 10
Protein Manusia Manusia Learning, presentasi, penerapan konsep
- Menjelaskan Tinjauan Umum - Tinjauan Umum Rekayasa Kerja individu dan sistematis pada
Rekayasa Genetika Genetika jawaban
- Menjelaskan Kegunaan - Kegunaan Teknologi
Teknologi Rekombinan Rekombinan
- Menjelaskan Tinjauan Umum - Tinjauan Umum Vaksin
Vaksin - Vaksin Rekombinan untuk
- Menjelaskan Vaksin Beberapa Penyakit
Rekombinan untuk Beberapa
Penyakit
11 - Menjelaskan Pengertian Sel - Pengertian Sel Induk - Problem Based - Kejelasan langkah 5
Induk - Karakteristik dan Jenis Sel Learning :Penelusuran uraian, ketepatan
- Menjelaskan Karakteristik Induk pustaka, kerja penerapan dan
dan Jenis Sel Induk - Aplikasi Kultur Sel Induk kelompok konsep pada
- Menjelaskan Aplikasi Kultur - Bioetika dan kontroversi jawaban
Sel Induk pada Penggunaan Sel Induk
- Menjelaskan Bioetika dan
kontroversi pada Penggunaan
Sel Induk
12-13 - Menjelaskan Sistem - Sistem Kekebalan Tubuh - Problem Based - Kejelasan langkah 10
Kekebalan Tubuh Antibodi Antibodi Learning :Penelusuran uraian, ketepatan
- Menjelaskan Produksi - Produksi Antibodi pustaka, kerja penerapan dan
Antibodi Monoklonal Monoklonal kelompok konsep pada
- Menjelaskan Mekanisme kerja - Mekanisme kerja Antibodi jawaban
Antibodi Monoklonal Monoklonal
11
14 - Menjelaskan Pengertian, - Pengertian, Batasan dan - Problem Based - Kejelasan langkah 10
Batasan dan Klasifikasi Klasifikasi Bioinformatika Learning :Penelusuran uraian, ketepatan
Bioinformatika - Penerapan Bioinformatika pustaka, kerja penerapan dan
- Menjelaskan Penerapan dalam Bidang Sains, kelompok konsep pada
Bioinformatika dalam Bidang Kedokteran, dan Kesehatan jawaban
Sains, Kedokteran, dan
Kesehatan
-
8 dan 15 - Menjawab soal-soal ujian - Tes tertulis (Problem - Kerja individu - Kejelasan langkah
Solving) sistimatis dalam 30
menyelesaikan soal
ujian
16 Remedial
Pustaka:
1. Brown, T. A. (1991) Pengantar Kloning Gene (terjemahan), Editor: Praseno, S. A. M. Penerbit Yayasan Essentia Medica, Yogyakarta.
2. Cooper, G. M. (2001). The Cell a molecular approach 2st Edition ASM press, Washington, D.C.
3. Glick Bernard R., and Jack,J. Pasternak, (1994). Molecular Biotechnology : Principles and Application of Recombinant DNA.
4. Lewin, B. (1997) Genes VI, Oxford Univ. Press. UK.
5. Sambrook, J., Fritsch, E. F. and Maniatis, T. 1989. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd edn. ColdSpringHarbor Laboratory
Press,Cold Spring Harbor, NY.
6. Walker, S. (2009) Menyingkap Tabir bioteknologi: Panduan Belajar Mandiri (Terjemahan). Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta.
12
1.9 Tinjauan MataKuliah
Matakuliah Bioteknologi Dasarmembahastentangpengertian, ruang lingkup, dan

perkembangan bioteknologi,menjelaskan peranan bioteknologi pada proses
fermentasi,menjelaskan bioinsektisida mikroba dan virus, membahas produksi antigen
sebagai kandidat vaksin, membahas sel induk dalam bioteknologi kesehatan, membahas
produksi dan mekanisme kerjaantibodi monoklonal, dan menjelaskan aplikasi
bioinformatika pada perkembangan bioteknologi modern. Prasyarat
MatakuliahBioteknologi Dasar adalah matakuliah Biokimia Dasar dan Biokimia Lanjutan
yangdiajarkan pada dua semestersebelumnya.Pemahaman yangbaik tentangmateri
yangadadalamkeduamata kuliahtersebutakan sangatmembantu mahasiswauntukdapat
mempelajaridan mengerti tentangbahasantopik pada matakuliah Bioteknologi
Dasar.Disampingitu, materi pembelajaranyangmenekankanpadacaraberpikir
secaraanalisisdansintesisakan memberikanmodalyangsangatbaik dan
fleksibelbagimahasiswadalambekerjapada berbagai bidang terutama bidang bioteknologi
industridikemudianhari.
13
BAB 2
PENGERTIAN, RUANG LINGKUP, DAN PERKEMBANGAN BIOTEKNOLOGI
2.1 Pendahuluan
Pada bagian ini yang akan menjadi sasaran pembelajaran adalah (1) menjelaskan
sejarah, batasan bioteknologi dan aplikasinya, dan (2) memprediksi strategi dan arah
perkembangan bioteknologi dimasa depan dan hubungannya dengan bidang ilmu
lainnya.Dalam kurun waktu 20 tahun terakhir ini, bioteknologi telah mengalami
perkembangan sangat pesat. Pesatnya perkembangan ini sejalan dengan tingkat
kebutuhan umat manusia dimuka bumi. Di beberapa negara maju, seperti AS, Cina, dan
Jepang, bioteknologi mendapatkan perhatian serius dan dikembangkan secara intensif
dengan harapan dapat memberi solusi untuk mengatasi berbagai permasalahan yang
dihadapi umat manusia pada saat ini maupun yang akan datang terutama yang
menyangkut; kebutuhan pangan, obat-obatan, penelitian, yang pada gilirannya semuanya
bertujuan untuk meningkatkan kesejahteraan dan kualitas hidup umat manusia.
Istilah bioteknologi pertama kali dikemukakan oleh Karl Ereky, seorang insinyur
Hongaria pada tahun 1917 untuk mendeskripsikan produksi babi dalam skala besar dengan
menggunakan bit gula sebagai sumber pakannya (Suwanto,1998). Beragam batasan dan
pengertian dikemukakan oleh berbagai lembaga untuk menjelaskan tentang
bioteknologi.Bioteknologi berasal dari kata: Bios: hidup; Teuchos: alat; Logos: ilmu;
sehingga bioteknologi dapat diartikan sebagai cabang ilmu yang mempelajari pemanfaatan
makhluk hidup (bakteri, fungi, virus, dan lain-lain) maupun produk dari makhluk hidup
(protein bioaktif, enzim, vitamin, asam basa organik, alkohol, dan lain lain) dalam proses
produksi untuk menghasilkan barang dan jasa. Menurut Smith, JE. (2009), bioteknologi
memiliki beberapa defenisi sebagai berikut:
1. Sebuahkata benda yang mewakili aplikasibiologi,sistem organisme atauproses
untukindustrimanufaktur dan jasa.
2. Penggabungan ilmubiokimia, mikrobiologidan rekayasa terpadudalam rangka
meningkatkan aplikasiteknologi(industri) darimikroorganisme,kultur jaringan sel-seldan
bagian-bagiannya.
3. Sebuah teknologimenggunakan fenomenabiologis untukmenyalindan
membuatberbagai jeniszatatau senyawa yang berguna.
4. Penerapanprinsip-prinsip ilmiahdan rekayasa untukpengolahan bahanoleh
agenbiologiuntuk menyediakanbarang dan jasa.
13
5. Ilmu tentang proses produksi berdasarkan aktifitas mikroorganisme dan komponen
aktifnya dan proses produksi yang melibatkan penggunaan sel dan jaringan dari
organisme yang lebih tinggi.
6. Tidak lebih darinama yang diberikanuntuk sebuah set teknikdan proses-prosesnya.
7. Penggunaan organisme hidup dan komponen-komponennya dalam bidang pertanian,
pangan, dan proses industri lainnya.
8. Penguaraian dan penggunaan pengetahuanbiologi dan kimia.
9. Aplikasi pengetahuan dan pemahaman kita tentang biologi untuk memenuhi kebutuhan
praktis.
Menurut EFB (European Federation of Biotechnology), bioteknologi sebagai
perpaduan dari ilmu pengetahuan alam dan ilmu rekayasa yang bertujuan untuk
meningkatkan aplikasi organisme hidup, sel, bagian dari organisme hidup, dan/atau analog
molekuler untuk menghasilkan barang dan jasa. DefinisiEFBini berlaku untukkedua
bioteknologi 'tradisional atau tua' dan bioteknologi 'baru atau modern'.
Bioteknologitradisionalmengacu padateknikkonvensionalyang telah digunakanselama
berabad-abaduntuk menghasilkanbir, anggur, keju dan makananlainnya sejak zaman
Yunani dan Mesir kuno,sedangkan bioteknologi 'baru atau modern'mencakupsemua
metodemodifikasi genetikoleh DNArekombinandan teknikfusiseldengan perkembangan
proses bioteknologimodern dari bioteknologi'tradisional'.
Menurut But et al, (1982) bioteknologi merupakan penerapan asas-asas sains (ilmu
pengetahuan alam) dan rekayasa (teknologi) untuk pengolahan suatu bahan dengan
melibatkan aktivitas jasad hidup untuk menghasilkan barang dan/atau jasa. Sedangkan
Primrose (1987), bioteknologi merupakan eksploitasi komersial organisme hidup atau
komponennya seperti: sel, enzim dan senyawa organik lainnya.
Organization for Economic Co-operation and Development (OECD)(1982),
mendefinisikan bahwa bioteknologi merupakan penerapan prinsip-prinsip ilmu pengetahuan
dan kerekayasaan untuk penanganan dan pengolahan bahan dengan bantuan agen
biologis untuk menghasilkan bahan dan jasa yang mendukung pertumbuhan ekonomi.
Berdasarkan definisi dan pengertian di atas, maka bioteknologi secara holistik
adalah suatu proses yang unsur-unsurnya sebagai berikut:
1. Input yaitu bahan kasar (raw material) yang akan diolah seperti; beras, anggur, susu,
dan sebagainya.
2. Proses yaitu mekanisme pengolahan yang meliputi; proses penguraian atau
penyusunan oleh agen hayati.
3. Output yaitu produk baik berupa barang dan/atau jasa, seperti; alkohol, enzim,
antibiotika, hormon, dan pengolahan limbah (Nurcahyo, 2011).
14
Banyak batasan yang diberikan oleh para ahli akan tetapi komponen utama proses
bioteknologi terdiri atas tiga bagian pokok, yaitu bagianberkaitan dengankatalis biologis
(enzim)yang terbaikuntuk fungsi tertentuatau proses (agen biologis mikroba; enzim, sel
tanaman, sel hewan), bagian keduamenciptakan(dengan konstruksi dan operasi teknis)
kondisiterbaikuntuk proses katalis (pendayagunaan secara teknologis dan industrial), dan
bagianketiga (pengolahan downstream) berkaitan denganpemisahan
danpemurnianprodukesensialatau produkdariproses fermentasi (produk dan jasa yang
diperoleh).
Dahulu bioteknologi dianalogikan dengan industri mikrobiologi (industri yang
berbasis pada peran agen-agen mikroba). Tetapi perkembangan selanjutnya, tanaman dan
hewan juga dieksploitasi secara komersial seperti; hortikultura dan agrikultura. Dengan
demikian, “payung” bioteknologi sangatlah luas mencakup semua teknik untuk
menghasilkan barang dan jasa dengan memanfaatkan sistem biologi atau sel hidup.
Produk-produk bioteknologi sangat erat dengan perkembangan bioteknologi pada
zamannya. Adapun era bioteknologi dapat dibagi atas (Suharto, 1995):
1. Era Pra Pasteur (sebelum 1865), perbaikan teknik fermentasi oleh mikroorganisme
misalnya minuman beralkohol.
2. Era Pasteur (1865-1940), pengembangan industri fermentasi pembuatan etanol,
butanol dan asam organik, perlakuan air buangan.
3. Era Antibiotika (1940-1960), pembuatan penisilin yang mulai digunakan pada saat
pendaratan tentara Amerika di Normandy selama perang dunia kedua, vaksin virus,
teknologi kultur sel hewan.
4. Era Pasca Antibiotika (1960-1975), asam-asam amino, eluidasi struktur DNA, protein
sel tunggal, enzim untuk deterjen, gasohol, biogas, dan teknologi rekombinan DNA.
5. Era Bioteknologi Modern (1975 - sampai saat ini), rekayasa genetika, zat antibodi
monoklonal, hormon insulin, dan hormon pertumbuhan ikan tuna, dan lain-lain.
Kemajuan dan perkembangan bioteknologi tidak dapat terlepas dari kemajuan dan
dukungan ilmu-ilmu dasar seperti: mikrobiologi, biokimia, biologi molekuler, dan genetika.
Bioteknologi modern lahir pada awal tahun 70-an diawali dengan inovasi para ilmuwan
Amerika Serikat (AS) mengembangkan teknologi DNA rekombinan. Berkat penemuan ini
lahirlah perusahaan bioteknologi pertama di dunia, yaitu Genentech di AS yang berhasil
memproduksi protein hormon insulin recombinant yang dibutuhkan penderita diabetes,
dalam sel bakteri E.coli. Selama ini insulin hanya bisa didapatkan dalam jumlah sangat
terbatas dari organ pankreas sapi atau babi (Witarto, 2003). Perkembangan bioteknologi
modern tidak lepas dari perkembangan bioteknologi molekuler yang didorong oleh
pengetahuan tentang biologi sel dan molekular. Bioteknologi molekular ditujukan untuk
15
memanipulasi suatu organisme pada taraf selular dan molekular (rekayasa genetika dan
biologi molekular). Tahapan perkembangan bioteknologi yang dimulai dari bioteknologi
konvensional sampai bioteknologi modern dapat dilihat pada Tabel 2.1.
Tabel 2.1. Sejarah Perkembangan Bioteknologi
No Tahun Kejadian/Penemuan
01 1917 Karl Ereky memperkenalkan istilah bioteknologi
02 1943 Produksi penisilin dalam skala industri
03 1944 Avery, Mac Leod dan McMarty menemukan DNA sebagai materi genetika
04 1953 Watson dan Crick menemukan struktur ganda heliks DNA
05 1961 Jurnal bioteknologi dan bioengineering pertama diterbitkan
06 1966 Kode genetika berhasil diuraikan
07 1970 Enzim restriksi endonuklease berhasil diisolasi
08 1972 Khorona dkk. mensintesis gen tRNA
09 1973 Boyer dan Cohen memantapkan teknologi DNA rekombinan
10 1975 Kohler dan Milstein memproduksi antibodi monoklonal
11 1976 Buku petunjuk DNA rekombinan diluncurkan pertama kali
12 1978 Perusahaan Genetech memproduksi insulin manusia dalam bakteri E. coli
13 1980 Mahkamah Agung AS memutuskan mikroba transgenik dapat dipatenkan
14 1981 Mesin sintesis DNA otomatis pertama kali dijual secara komersial
15 1981 Antibodi monoklonal berbasis kit diagnostik digunakan pertama kali di AS
16 1982 Vaksin dari hewan transgenik diproduksi pertama kali
17 1982 Hormon insulin rekombinan mulai dijual secara komersial
18 1983 Mesin plasmid Ti digunakan untuk transformasi gen tanaman
19 1983 Metode PCR untuk amplifikasi DNA secara in vitro diperkenalkan oleh Mullis
20 1990 Proyek pemetaan genom manusia mulai dilakukan
21 1997 Kloning sel inti pada mamalia dengan menggunakan sel epitel domba
22 2002 Padi transgenik yang mengandung -karoten mulai diproduksi
23 2003 Proyek pemetaan genom manusia telah rampung
Sumber: Modifikasi dari Glick dan Pasternak (2003).
Bioteknologi memiliki beberapa jenis atau cabang ilmu seperti diantaranya

diasosiasikan dengan beberapa jenis warna, yaitu :
1. Bioteknologi merah (red biotechnology) adalah cabang ilmu bioteknologi yang
mempelajari aplikasi bioteknologi di bidang medis. Cakupannya meliputi seluruh
spektrum pengobatan manusia, mulai dari tahap preventif, diagnosis, dan pengobatan.
Contoh penerapannya adalah pemanfaatan organisme untuk menghasilkan obat dan
vaksin, penggunaan sel induk untuk pengobatan regeneratif, serta terapi gen untuk
mengobati penyakit genetik dengan cara menyisipkan atau menggantikan gen
abnomal dengan gen yang normal.
2. Bioteknologi putih/abu-abu (white/gray biotechnology) adalah bioteknologi yang
diaplikasikan dalam industri seperti pengembangan dan produksi senyawa baru serta
pembuatan sumber energi terbarukan. Dengan memanipulasi mikroorganisme seperti
bakteri dan khamir/ragi, enzim-enzim juga organisme-organisme yang lebih baik telah
tercipta untuk memudahkan proses produksi dan pengolahan limbah industri. Pelindian
16
(bleaching) minyak dan mineral dari tanah untuk meningkatkan efisiensi
pertambangan, dan pembuatan bir dengan khamir.
3. Bioteknologi hijau (green biotechnology) mempelajari aplikasi bioteknologi di
bidang pertanian dan peternakan. Di bidang pertanian, bioteknologi telah berperan
dalam menghasilkan tanaman tahan hama, bahan pangan dengan kandungan gizi
lebih tinggi dan tanaman yang menghasilkan obat atau senyawa yang bermanfaat.
Sementara itu, di bidang peternakan, binatang-binatang telah digunakan sebagai
"bioreaktor" untuk menghasilkan produk penting contohnya kambing, sapi, domba, dan
ayam telah digunakan sebagai penghasil antibodi-protein protektif yang membantu sel
tubuh mengenali dan melawan senyawa asing (antigen).
4. Bioteknologi biru (blue biotechnology) disebut juga bioteknologi akuatik/perairan
yang mengendalikan proses-proses yang terjadi di lingkungan akuatik. Salah satu
contoh yang paling tua adalah akuakultura, menumbuhkan ikan bersirip atau kerang-
kerangan dalam kondisi terkontrol sebagai sumber makanan, (diperkirakan 30% ikan
yang dikonsumsi di seluruh dunia dihasilkan oleh akuakultura). Perkembangan
bioteknologi akuatik termasuk rekayasa genetika untuk menghasilkan tiram tahan
penyakit dan vaksin untuk melawan virus yang menyerang salmon dan ikan lainnya.
Contoh yang lain adalah salmon transgenik yang memiliki hormon pertumbuhan secara
berlebihan sehingga menghasilkan tingkat pertumbuhan sangat tinggi dalam waktu
yang singkat.
2.2 Batasan dan Pengertian Bioteknologi

Bioteknologi adalah proses transformasi dengan memanfaatkan pengetahuan biologi,
biokimia, mikrobiologi, biologi molekuler, biofarmasi dan kemajuan rekayasa dalam sebuah
penelitian memakai sel hidup yang akan membawa penemuan baru dan penyempurnaan
pemecahan masalah di berbagai bidang kehidupan manusia.Rekayasa genetik mempunyai
dampak terhadap perbaikan dan keamanan produk, dan memberikan pemecahan teknis
dalam penyebarluasan pemakaian obat dengan bahan baku yang terbatas. Prinsip yang
mendasari penggunaan rekayasa genetik adalah bahwa satu atau sejumlah gen patogen
dimasukkan ke dalam vektor untuk kemudian dipindahkan ke dalam pembawa yang cocok.
Penggabungan antara teknologi DNA rekombinan dengan bioteknologi melahirkan
suatu bidang studi yang sangat dinamis dan kompetitif yang disebut Bioteknologi
Molekuler. Dalam arti luas, bioteknologi molekular adalah penggunaan teknik laboratorium
untuk mempelajari dan memodifikasi asam nukleat dan protein untuk aplikasi di berbagai
bidang kehidupan seperti kesehatan manusia dan hewan, pertanian, dan lingkungan.
Bioteknologi molekuler ditujukan memanipulasi suatu organisme pada taraf selular dan
17
molekular (rekayasa genetika dan biologi molekular). Hasil manipulasi dapat diprediksi dan
diarahkan dengan ketepatan yang lebih tinggi, dapat mengkonstruksi galur/varietas baru
dengan bahan genetik tambahan yang tidak pernah ada pada galur asalnya. Sel prokariota
atau eukariota dapat digunakan sebagai “pabrik biologis” untuk porduksi senyawa
metabolit primer maupun metabolit sekunder (www.mb.kumc.edu/whatis.html).
Bioteknologi molekul hasil dari konvergensi dari banyak bidang penelitian, seperti
biologi molekuler, mikrobiologi, biokimia, imunologi, genetika, dan biologi sel. Ini adalah
bidang yang sangat menarik karena didorong oleh kemampuan untuk mentransfer
informasi genetik antara organisme dengan tujuan memahami proses biologi penting atau
menciptakan produk yang bermanfaat. Penyelesaian proyek genom manusia pada tahun
2003 telah membuka banyak peluang untuk menciptakan obat baru dan perawatan, serta
pendekatan untuk meningkatkan aktivitas obat-obatan yang ada.
2.3 Peranan Ilmu Biologi, Biokimia, dan Keteknikan dalam Perkembangan

Bioteknologi Molekular
Perkembangan bioteknologi tidak hanya didasari pada biologi semata, tetapi juga
pada ilmu-ilmu terapan dan murni lain, seperti biologi molekuler, mikrobiologi, biokimia,
imunologi, genetika, dan biologi sel. Dengan kata lain, bioteknologi adalah ilmu terapan
yang menggabungkan berbagai cabang ilmu yang dapat dikelompokkan dalam dua cabang
ilmu, yaitu ilmu biologi, kimia, dan ilmu teknik dalam proses produksi barang dan jasa,
seperti yang ditunjukkan dengan diagram pada Gambar 2.1.
Gambar 2.1: Diagram yang menghubungkan peranan ilmu biologi, ilmu kimia, dan ilmu
teknik untuk mendukung bidang bioteknologi dalam proses produksi barang
dan jasa.
2.3.1 Ilmu Biologi
18
Ilmu biologi merupakan ilmu pengetahuan yang mempelajari makhluk hidup atau
secara terperinci dapat dikatakan sebagai ilmu pengetahuan yang mengkaji secara umum
kehidupan hewan dan tumbuhan termasuk aspek morfologi, fisiologi, asal-usul,
perkembangan, penyebaran, kehidupan hewan dan tumbuhan dalam satu daerah dan
mempelajari fenomena biologik yang berkaitan dengan organisme secara individual atau
dalam suatu kelompok. Dalam perkembangan bioteknologi molekular ada beberapa
cabang ilmu biologi yang memegang peranan penting, seperti biologi molekular, biologi sel,
mikrobiologi, dan ilmu genetika.
a. Biologi Molekular
Biologi molekular dapat didefenisikan sebagai ilmu yang mempelajari fungsi dan
organisasi jasad hidup (organisme) ditinjau dari struktur dan regulasi molekular unsur atau
komponen penyusunnya. Beberapa penulis mendefenisikan biologi molekuler sebagai ilmu
yang mempelajari organisasi, aktivitas dan regulasi gen pada level molekul. Dalam kajian
ini juga termasuk mengenai replikasi DNA, transkripsi, translasi, rekombinasi, dan
translokasi. Aspek biologi yang secara khusus dipelajari dalam biomolekular antara lain
adalah bahan genetik dan proses sintesis protein. Kedua aspek tersebut merupakan satu
kesatuan yang tidak dapat dipisahkan karena proses sintesis protein tergantung pada
informasi yang ada pada bahan genetik. Di lain pihak, replikasi bahan genetik juga
tergantung pada aktivitas bermacam-macam protein. Pembahasan mengenai kedua aspek
tersebut dapat diperluas mulai dari struktur dasarnya sampai proses pengendalian
sintesisnya (Yuwono, 2005).
Asam nukleat dan protein merupakan senyawa polimer utama yang terdapat pada
sel. Asam nukleat berfungsi menyimpan dan mentransmisikan informasi genetik dalam sel.
Sel mempunyai dua jenis molekul asam nukleat yaitu DNA (asam deoksiribonukleat) dan
RNA (asam ribonukleat). DNA menyimpan informasi genetik yang spesifik untuk setiap
individu dan spesies tertentu, yang akan diwariskan ke generasi berikutnya. Semua sel
menggunakan sistem dimana informasi yang terdapat dalam DNA di copy menjadi RNA
dan kemudian diubah menjadi protein oleh mesin molekul yang disebut ribosom. Pada
tingkat molekul, sel-sel memiliki lebih banyak kesamaan daripada perbedaan.
1. Lokasi DNA dan RNA
DNA dan RNA berperan sebagai materi genetik pada sel prokariot dan eukariot,
virus, dan plasmid, masing-masing mempunyai pengaturan dan lokasi yang berbeda. Pada
prokariot, DNA tidak terpisah dari komponen sel lain. Pada eukariot DNA berlokasi dalam
nukleus terpisah dari komponen sel lain oleh selaput inti. DNA eukariot berikatan dengan
protein, membentuk kompleks yang disebut kromatin. Sebelum proses mitosis
19
(pembelahan sel), DNA mengalami replikasi, menghasilkan dua kromosom identik yang
disebut sister kromatid.
Kurang dari 0,1% total DNA dalam sel terdapat dalam mitokondria. Informasi
genetik dalam mitokondrion dikode oleh kurang dari 20.000 pasang basa DNA. Informasi
genetik dalam kromosom haploid manusia (contohnya: sel telur dan sel sperma) dikode
9
oleh kira-kira 3 x 10 (3 milyar) pasang basa yang mengode 30.000-40.000 gen. DNA dan
sistem sintesis protein dalam mitokondria lebih kurang sama dengan sistem bakteri,
dimana tidak terdapat membran yang menutupi organel.
Virus merupakan partikel penginfeksi yang kecil dan terdiri dari genom DNA atau
RNA (tidak keduanya), protein yang diperlukan untuk patogenesis atau replikasi dan mantel
protein. Virus tidak memiliki semua sistem untuk replikasi, transkripsi dan translasi,
sehingga konsekuensinya virus harus menginfeksi sel lain dan menggunakan perangkat
sintesis protein sel inang (host) untuk bereproduksi. Eukariot dan prokariot dapat diinfasi
oleh virus.
Plasmid merupakan molekul DNA sirkular kecil yang dapat masuk ke dalam bakteri
dan bereplikasi sendiri, terpisah dari genom inang. Kebalikan dari virus, plasmid tidak
bersifat menginfeksi, plasmid tidak merubah sel inang menjadi pabrik untuk memproduksi
plasmid. Plasmid biasanya mengkode gen yang memberikan sifat tertentu pada bakteri,
misalnya gen pengkode resistan antibiotik. Ahli rekayasa genetika menggunakan plasmid
sebagai alat untuk mentransfer gen asing ke dalam bakteri karena sepotong DNA dengan
cepat bergabung dengan DNA plasmid.
2. Struktur DNA dan RNA
Asam nukleat yang merupakan polimer dari nukleotida sebagai pendukung dari
DNA dan RNA yang terdiri dari basa-basa heterosiklik purin dan pirimidin, ribosa atau
deoksiribosa dan gugus fosfat. Asam nukleat mempunyai urutan nukleotida yang unik sama
seperti urutan asam amino yang unik dari suatu protein tertentu. Di samping itu juga kita
dapat melihat bahwa nukleotida merupakan biomolekul dengan struktur tiga dimensi,
penggabungan asam-asam nukleat dan protein untuk membentuk struktur-struktur sejenis
ribosom dan virus.
DNA dan RNA merupakan polimer linier (polinukleotida) yang tersusun dari
subunit atau monomer nukleotida. Komponen penyusun nukleotida terdiri dari tiga
jenis molekul, yaitu gula pentosa (deoksiribosa pada DNA atau ribosa pada RNA),
basa nitrogen, dan gugus fosfat (Gambar 2.2). Basa yang ditemukan pada
nukleotida adalah basa purin (adenin = A, guanin = G) dan basa pirimidin (cytosin =
C, tymin = T, urasil = U) (Gambar 2.3). Monomer nukleotida mempunyai gugus hidroksil
pada posisi karbon 3’, gugus fosfat pada posisi karbon 5’ dan basa nitrogen pada posisi
20
karbon 1’ molekul gula pentosa. Nukleotida satu dengan yang lainnya berikatan melalui
ikatan fosfodiester antara gugus 5’fosfat dengan gugus 3’hidroksil.
Gambar 2.2:Struktur Nukleotida pada penyusun RNA
Berdasarkan model DNA dari James Watson dan Francis Crick yang
menunjukkan bahwa DNA memiliki model heliks ganda (double helix). Di bagian luar
terdapat deretan gula-pospat (yang membentuk tulang punggung dari “double helix). Di
bagian dalam dari “double helix” terdapat basa purin dan pirimidin. Maka satu spiral penuh
(360o) mengandung 10 pasangan basa. Sedangkan jarak antara satu basa dengan basa
lainnya ialah 3,4o A. Panjang molekul DNA pada umumnya tersusun dalam ribuan
pasangan basa atau kilobase pavis (kbp). Setiap pasangan basa dipisahkan dari urutan
sebelumnya sekitar 0,34 nm atau sekitar 3,4 x 10-7mm. Polaritas dari rantai DNA
ditunjukkan dengan sebutan ujung 5‛ dan ujung 3‛. Arah pembacaan basa nukleotida dari
ujung-5‛ menuju ujung-3‛. 3‛ membawa gugus –OH bebas pada posisi 3‛ dari cincin gula,
dan ujung 5‛ membawa gugus fosfat bebas pada posisi 5‛ dari cincin gula(Suryo, 1998;
Campbell, 2002; Jawetz, 2005; Fatchiyah, 2006). DNA double heliks dapat dikopi secara
persis karena masing-masing untai mengandung sekuen nukleotida yang persis
berkomplemen dengan sekuen untai pasangannya. Masing-masing untai dapat berperan
sebagai cetakan untuk sintesis dari untai komplemen baru yang identik dengan pasangan
awalnya (Campbell, 2002; Fatchiyah, 2006).
Struktur DNA mirip dengan struktur RNA. Perbedaan diantara keduanya terdapat
pada jenis gula dan basa pada monomernya serta jumlah untai penyusunnya. Pada DNA,
tidak terdapat gugus hidroksil pada posisi karbon 2’ dari molekul gula pentosa (2-
deoksiribosa) sementara pada RNA molekul gula pentosanya adalah ribosa. Basa nitrogen
yang terdapat pada DNA adalah adenin, guanin, sitosin dan timin, sedangkan pada RNA
jenis basanya adalah adenin, sitosin, guanin dan urasil. RNA merupakan polinukleotida
yang membentuk satu rantai/untai sedangkan DNA merupakan polinukleotida yang
membentuk 2 untai (heliks ganda).
21
Gambar 2.3. Struktur basa purin dan pirimidin (Adenin dan Guanin; Cytosin, Tymin dan
Urasil)
3. Nukleosida dan Nukleotida

Bila basa purin dan pyrimidin bergabung dengan gugus gula ribosa atau
deoksiribosa akan menghasilkan senyawa yang disebut nukleosida. Terdapat dua jenis
nukleosida: ribonukleosida dan deoksiribonukleosida. Jadi adenin yang berkondensasi
dengan gula ribosa membentuk senyawa ribonukleosida adenosin, untuk guanin diberi
nama guanosin, sitosin membentuk sitidin dan urasil membentuk uridin. Ribonukleosida
diatas dapat terbentuk pada hidrolisis parsial molekul RNA. Nukleosida turunan gula 2-
deoksiribosa dikenal dengan nama deoksiribonukleosida, yaitu: deoksiadenosin,
deoksiguanosin, deoksisitidin dan deoksitimidin (Tabel 2.1).
Nukleotida merupakan ester dari asam fosfat dan nukleosida. Asam fosfat terikat
pada gugus hidroksil dari salah satu atom karbon dalam cincin pentosa. Nukleotida
terdapat bebas dalam sel, dan dapat terbentuk dari hidrolisis bertahap asam nukleat
dengan enzim nuklease. Seperti halnya nukleosida, nukleotida dibagi menjadi dua
golongan: deoksiribonukleotida dan ribonukleotida.
22
Tabel 2.1: Tata nama nukleosida, nukleotida, dan asam nukleat
4. Struktur Primer Asam Nukleat

Asam nukleat merupakan polimer dari ratusan, ribuan, bahkan jutaan nukleotida
yang bergabung satu sama lainnya melalui ikatan fosfodiester. Ikatan fosfodiester terbentuk
antara gugus OH pada posisi 3’ dengan gugus fosfat pada posisi 5’, sehingga tulang
punggung molekul DNA dan RNA terdiri dari gugus fosfat dan pentosa secara bergantian.
Oleh karena basa purin dan pirimidin dari asam nukleat mengandung gugus fungsional
yang memungkinkan terjadinya ikatan hidrogen, maka pada struktur molekul DNA terdapat
pasangan-pasangan basa purin dan pirimidin dengan ikatan hidrogen yang sangat
menentukan struktur asam nukleat dan fungsi asam-asam amino. Secara keseluruhan
molekul DNA tersusun dari dua rantai polinukleotida yang bergabung sepanjang rantai dan
bergulung menurut suatu sumbu untuk menghasilkan suatu ganda heliks (spiral).
Dua rantai polinukleotida saling berikatan melalui ikatan atom hidrogen antara
basa- basa nitrogen dari rantai yang berbeda. yaitu antara pasangan purin dan pirimidin
tertentu. Adenin hanya dapat berpasangan dengan timin, yang dihubungkan oleh dua atom
H, sedangkan guanine hanya dapat berpasangan dengan sitosin yang dihubungkan oleh
tiga atom H. Jadi dua deretan nukleotida itu komplementer satu dengan lainnya, artinya
urutan nukleotida dalam satu mendikte urutan nukleotida dari deret pasangannya (Suryo,
1998).
23
Gambar 2.4: Struktur primer dari molekul DNA dan RNA
24
5. Struktur Sekunder DNA (Heliks Ganda)
Struktur sekunder DNA pertama kali ditemukan oleh Watson dan Crick pada tahun
1953, dengan menggunakan teknik difraksi sinar X. Struktur molekul DNA merupakan
rantai ganda heliks yang memutar ke kanan (Gambar 2.5). Kedua rantai polinukleotida
memutar pada sumbu yang sama dan bergabung menjadi satu dengan yang lainnya
melalui ikatan hidrogen antara basa-basa nitrogen. Basa guanin berpasangan dengan basa
cytosin, sedangkan basa adenin berpasangan dengan basa tymin. Antara basa guanin dan
basa cytosin terbentuk tiga ikatan hidrogen, sedang antara basa adenin dan tymin
terbentuk dua ikatan hidrogen. Sehingga dalam molekul DNA jumlah basa G akan selalu
sama dengan jumlah basa C, sedangkan jumlah basa A=T. Kemudian jumlah basa purin (A
+ G) akan sama dengan jumlah basa pyrimidin (C + T). Kedua untai DNA saling
berkomplementasi melalui basa penyusunnya dengan arah antiparalel (berlawanan 5’→ 3’
vs 3’→5’), ujung yang mengandung gugus fosfat bebas disebut ujung 5’ sedangkan pada
ujung lainnya yang mengandung gugus hidroksil bebas disebut ujung 3’. Kedua untai
tersebut saling melilit satu sama lain membentuk struktur ganda heliks. Gugus fosfat dan
gula yang tersusun bergantian menjadi tulang punggung (backbone) molekul DNA
sementara pada bagian dalam terdapat basa yang melekat pada molekul gula (pentosa).
Gambar 2.5: Struktur double heliks molekul DNA
Untuk memudahkan pembacaan dan penulisannya, urutan DNA hanya dituliskan

nama-nama basanya dengan menuliskan tanda 5’ dan 3’ pada ujung-ujungnya, karena
urutan DNA selalu diawali gugus pospat yang terikat pada C-5 dari gula pentosa dan
25
diakhiri gugus –OH yang terikat pada C-3 dari gula pentose (Gambar 2-3). Untuk
memudahkan penulisannya, DNA untai ganda biasanya hanya dituliskan satu untai saja
dengan menuliskan tanda 5’ dan 3’ pada ujung-ujungnya atau diawali dari ujung 5’ dan
diakhiri dari ujung 3’.
Rantai RNA berbentuk untai tunggal sehingga tidak membentuk struktur heliks yang
teratur seperti DNA. Walaupun demikian RNA mungkin bisa membentuk struktur sekunder
dan tersier karena pasangan basa bisa terbentuk pada daerah yang membentuk loops.
Terdapat tiga tipe molekul RNA dalam sel, yaitu mRNA, tRNA dan rRNA. Molekul mRNA
mengandung urutan nukleotida yang akan mengkode urutan asam amino dari protein pada
proses translasi. mRNA eukariot terdiri dari urutan leader pada ujung 5’, daerah pengkode,
dan ekor poli A pada ujung 3’. Molekul rRNA dan tRNA merupakan perangkat untuk
sintesis protein, tapi tidak mengkode protein. Struktur rRNA mengandung banyak loops,
dan terdapat pasangan basa diantara loops, sedangkan struktur tRNA berbentuk seperti
daun (cloverleaf). rRNA memiliki pasangan basa internal yang membentuk kompleks
dengan protein membentuk partikel ribonukleoprotein yang disebut ribosom. Semua RNA
dibuat sebagai salinan (copy) dari salah satu rantai polinukleotida DNA. Dengan demikian
maka semua RNA adalah komplementer dengan DNA. Seperti pada DNA maka RNA
disintesiskan dari keempat ribonukleotida trifosfat yang dihubungkan dengan pelepasan
pirofosfat. Sintesis ini berlangsung dalam inti sel, karena DNA terlokalisasi pada organel sel
tersebut. Ada tiga macam RNA yang dapat dibedakan berdasarkan fungsinya, yaitu :
1. RNA –penyampai (m-RNA); berperan memindahkan informasi genetis dari susunan
basa DNA yang telah disalin ke dalam deretannya sendiri ke luar dari inti sel ke
ribosom tempat sintesis protein. Messenger-RNA (m-RNA) yang mempunyai berat
molekul sampai beberapa ratus ribu dan tidak memiliki konformasi ruang tertentu.
2. RNA pemindah (t-RNA); yaitu berperan dalam proses penterjemahan dari susunan
basa m-RNA menjadi susunan asam amino dari protein atau pembawa asam amino
spesifik pada pembentukan polipeptida.
3. RNA-ribosomal (r-RNA); berperan sebagai komponen utama ribosoma sebagai
tempat sintesis protein. r-RNA ini mempunyai susunan basa nukleotida terdiri dari
beberapa ribu, dan memiliki konformasi yang belum diketahui serta banyak
mengandung basa Guanin dan Sitosin.
26
Gambar 2.6: Perbedaan struktur DNA dan RNA
6. Fungsi Asam Nukleat

Asam nukleat DNA berperan penting dalam menjaga kelestarian spesies dari
generasi ke generasi. DNA melalui urutan basanya membawa kode informasi genetik yang
spesifik untuk setiap individu dan untuk spesies tertentu yang diturunkan dari generasi ke
generasi berikutnya. Informasi genetik pada DNA akan ditranskripsi menjadi RNA dan
selanjutnya RNA akan ditranslasikan menjadi protein. Tidak semua informasi genetik
tersimpan dalam bentuk DNA, seperti pada virus tertentu seperti retrovirus materi genetik
tersimpan dalam bentuk RNA.
Dalam biologi molekular dikenal dogma central yang memiliki arti penting dalam
perkembangan bioteknologi molekular.
27
Gambar 2.7: Dogma central biologi molekular (sumber : ncbi.nlm.nih.gov)
Secara umum bioteknologi molekular berkaitan dengan tiga bahan molekul yang
yang menjadi dasar dari aplikasi teknik-teknik biologi molekular, yaitu ; DNA, RNA dan
protein. Perubahan DNA menjadi RNA dapat terjadi adalam proses yang disebut dengan
transkripsi, sedangkan RNA ke protein dapat dihasilkan dengan proses translasi
(ncbi.nlm.nih.gov).
b. Mikrobiologi
Ilmu biologi berikutnya yang sangat berperan dalam bioteknologi molekular adalah
ilmu mikrobiologi. Mikrobiologi merupakan cabang ilmu biologi yang khusus mempelajari
jasad-jasad renik atau mikroorganisme. Mikrobiologi berasal dari bahasa yunani (micros:
kecil, bios: hidup, dan logos: pengetahuan) sehingga secara singkat dapat diartikan bahwa
mikrobiologi adalah ilmu yang mempelajari tentang makhluk-makhluk hidup yang kecil-
kecil. Makhluk-makhluk hidup yang kecil-kecil tersebut disebut juga dengan
mikroorganisma, mikroba, jasad renik atau protista. Ilmuwan menyimpulkan bahwa
mikroorganisme sudah dikenal lebih kurang 4 juta tahun yang lalu dari senyawa organik
kompleks yang terdapat di laut, atau mungkin dari gumpalan awan yang sangat besar yang
mengelilingi bumi. Sebagai makhluk hidup pertama di bumi, mikroorganisme diduga
merupakan nenek moyang dari semua makhluk hidup. Awal perkembangan ilmu
mikrobiologi pada pertengahan abad ke-19 oleh beberapa ilmuwan dan telah membuktikan
bahwa mikroorganisme berasal dari mikroorganisme sebelumnya bukan dari tanaman
ataupun hewan yang membusuk. Selanjutnya ilmuwan membuktikan bahwa
mikroorganisme bukan berasal dari proses fermentasi tetapi merupakan penyebab proses
fermentasi, misalnya buah anggur menjadi minuman yang mengandung alkohol. Ilmuwan
juga menemukan bahwa mikroba tertentu menyebabkan penyakit tertentu. Pengetahuan ini
merupakan awal pengenalan dan pemahaman akan pentingnya mikroorganisme bagi
28
kesehatan dan kesejahteraan manusia. Pada awal abad 20 yang lalu, ahli mikrobiologi
telah meneliti dan membuktikan bahwa mikroorganisme mampu menyebabkan berbagai
macam perubahan kimia baik melalui penguraian maupun sintesis senyawa organik yang
baru. Hal inilah yang disebut dengan biochemical diversity atau keanekaragaman biokimia
yang menjadi ciri khas mikroorganisme. Disamping itu, hal yang penting lainnya adalah
mekanisme perubahan kimia oleh mikroorganisme sangat mirip dengan unity in
biochemistry yang artinya bahwa proses biokimia pada mikroorganisme adalah sama
dengan proses biokimia pada semua makhluk hidup termasuk manusia. Bukti yang lebih
baru menunjukkan bahwa informasi genetik pada semua organisme dari mikroba hingga
manusia adalah DNA. Pengambilan informasi genetika dari mikrorganisme karena sifatnya
sederhana dan perkembangbiakan yang sangat cepat serta adanya berbagai variasi
metabolisme. Saat ini mikroorganisme diteliti secara intensif untuk mengetahui dasar
fenomena biologi. Mikroorganisme juga merupakan sebagai sumber produk dan proses
yang menguntungkan masyarakat, misalnya: alkohol yang dihasilkan melalui proses
fermentasi dapat digunakan sebagai sumber energi. Strain-strain dari mikroorganisme yang
dihasilkan melalui proses rekayasa genetika dapat diterima. Sekarang insulin yang
dibutuhkan manusia dapat diproduksi dalam jumlah tak terhingga oleh bakteri yang telah
direkayasa. Mikroorganisme juga mempunyai potensi yang cukup besar untuk
membersihkan lingkungan, misalnya: dari tumpukan minyak di lautan dipergunakan
sebagai herbisida dan insektisida di bidang pertanian. Hal ini disebabkan karena
mikroorganisme mempunyai kemampuan untuk mendekomposisi/menguraikan senyawa
kimia kompleks. Kemampuan mikroorganisme yang telah direkayasa untuk tujuan tertentu
menjadikan lahan baru dalam mikrobiologi industri yang dikenal dengan bioteknologi. Jika
anda membaca tentang mikroorganisme anda akan menghargai, mengagumi
mikroorganisme seperti bakteri, alga, protozoa dan virus merupakan organisme yang sering
tidak terlihat. Beberapa diantaranya bersifat patogen bagi manusia, hewan maupun
tumbuhan. Beberapa dapat menyebabkan lapuknya kayu dan besi. Tetapi banyak
diantaranya berperan penting dalam lingkungan sebagai dekomposer. Beberapa
diantaranya digunakan dalam menghasilkan (manufacture) substansi yang penting di
bidang kesehatan maupun industri pangan.
Beberapa aspek yang dibahas dalam mikrobiologi, antara lain mengkaji tentang:
a. Karakteristik sel hidup dan bagaimana mereka melakukan kegiatan.
b. Karakteristik mikroorganisme, suatu kelompok organisme penting yang mampu
hidup bebas, khususnya bakteri.
c. Keanekaragaman dan evolusi, membahas perihal bagaimana dan mengapa
muncul macam-macam mikroorganisme.
29
d. Keberadaan mikroorganisme pada tubuh manusia, hewan dan tumbuhan.
e. Peranan mikrobiologi sebagai dasar ilmu pengetahuan biologi.
f. Bagaimana memahami karakteristik mikroorganisme dapat membantu dalam
memahami proses-proses biologi organisme yang lebih besar termasuk
manusia.
Bioteknologi tidak terlepas dari mikroorganisme sebagai subyek (pelaku).
Mikroorganisme yang dimaksud adalah virus, bakteri, cendawan, alga, dan protozoa.
Menurut Siregar 1996, mikroorganisme menjadi subyek pada proses bioteknologi karena
beberapa hal berikut ini:
1) Reproduksinya sangat cepat.
Dalam hitungan menit telah dapat berkembang biak sehinggamerupakan
sumber daya hayati yang sangat potensial.Mikroorganisme dapat memproses
bahan-bahan menjadi suatuproduk dalam waktu yang singkat.
2) Mudah diperoleh dari lingkungan kita.
3) Memiliki sifat tetap, tidak berubah-ubah.
4) Melalui teknik rekayasa genetik dapat dengan cepat memodifikasi/ mengubah
sifat mikroorganisme sehingga dapat menghasilkan produk yang sesuai dengan
yang kita inginkan.
5) Dapat menghasilkan berbagai produk yang dibutuhkan oleh manusia dan tidak
tergantung musim/iklim.
c. Genetika
Genetika (dari bahasa Yunani genno yang berarti "melahirkan") merupakan cabang
biologi yang penting saat ini. Ilmu ini mempelajari berbagai aspek yang menyangkut
pewarisan sifat dan variasi sifat pada organisme maupun suborganisme (seperti virus dan
prion). Ada pula yang dengan singkat mengatakan, genetika adalah ilmu tentang gen.
Nama "genetika" diperkenalkan oleh William Bateson pada suatu surat pribadi kepada
Adam Chadwick dan ia menggunakannya pada Konferensi Internasional tentang Genetika
ke-3 pada tahun 1906. Bidang kajian genetika dimulai dari wilayah molekular hingga
populasi. Secara lebih rinci, genetika berusaha menjelaskan:
1. material pembawa informasi untuk diwariskan (bahan genetik),
2. bagaimana informasi itu diekspresikan (ekspresi genetik), dan
3. bagaimana informasi itu dipindahkan dari satu individu ke individu yang lain
(pewarisan genetik).
Meskipun orang biasanya menetapkan genetika dimulai dengan ditemukannya
kembali naskah artikel yang ditulis Gregor Mendel pada tahun 1900, sebetulnya kajian
genetika sudah dikenal sejak masa prasejarah, seperti domestikasi dan pengembangan
30
trah-trah murni (pemuliaan) ternak dan tanaman. Orang juga sudah mengenal efek
persilangan dan perkawinan sekerabat serta membuat sejumlah prosedur dan peraturan
mengenai hal tersebut sejak sebelum genetika berdiri sebagai ilmu yang mandiri. Silsilah
tentang penyakit pada keluarga, misalnya, sudah dikaji oleh para ahli sebelum itu. Pada
masa itu, kajian semacam ini disebut "ilmu pewarisan" atau hereditas.
Pada dasarnya, semua sifat-sifatorganismetergantung padajumlahgen mereka. Ada
duakategori besar darigen-gen, yaitu genstruktural dan genregulator. Gen-gen
strukturalmenyandikan sekuens asamamino dariprotein, sepertienzim yang
menentukankemampuanbiokimiaorganismedengankatalisisreaksisintetik
ataukataboliktertentu atau, alternatifnya, memainkan peranlebih statissebagai komponen
daristruktur selular. Sebaliknya,gen regulatormengontrol ekspresigen-gen strukturaldengan
menentukantingkatproduksi produkprotein merekasebagai respons terhadap sinyalintra-
atau ekstraselular. Derivasi dariprinsip-prinsip initelah dicapaidengan menggunakan
teknikgenetikterkenal.
Penelitiandari Watsondan Crickdan peneliti lainnya diawal 1950-
anmenemukanmodelganda heliks yang menggambarkanstrukturmolekulDNA, dan
hipotesisberikutnya padaimplikasibagi pemahamanreplikasigen. Sejak itutelah terungkap
secaraspektakuler interaksi senyawa kompleks yang diperlukanuntuk mengungkapkan
kodeinformasi kimiadari molekulDNA ke dalamsel dan ekspresiorganisme. Perubahanpada
molekul DNAyang membentukkomplemengenetik darisuatu organismeadalahsarana
evolusiorganismedanmenyesuaikan diridengan lingkungan baru. Peranyang tepat
dariDNAbertindaksebagai reservoirinformasi genetik. Di alam, perubahan dalam DNAsuatu
organismedapat terjadidalam duacara:
1. Mutasi, yang merupakanpenghapusanataupenambahan satuatau lebihbagian-
bagiankimia darimolekul DNA.
2. Pertukaraninformasi genetikatau DNAantaraorganisme sepertireproduksi
seksual biasanya, dan olehtransfer horisontalpada bakteri.
Pada sel eukariota,reproduksi seksualterjadimelalui proseskonjugasidi mana

adadonor, yang disebutjantan,dan penerima, yang disebut betina. Hal ini ditentukan
secarafisiologis dan bukan secaramorfologis. Konjugasi bakterimelibatkan transferDNA
daridonorke sel resipien. DNAditransfer (biasanyaDNA plasmid) selaludalam bentukuntai
tunggaldanuntai komplementeryang disintesisdalam penerima. Transduksiadalah
transferDNAdimediasioleh virusbakteri(bakteriofag ataufag) dan sel yangtelah
menerimapentransduksiDNAdisebut sebagaitransduktan.
TransformasimelibatkanpenyerapanDNAterisolasiatau DNAhadir di
lingkunganorganismemenjadi penerimasel,yang kemudiandisebut
31
sebagaisuatutransforman. Transfer genetikdengan cara inipada bakterimerupakan
karakteristikalami dariberbagaigenusbakterisepertiCampylobacter,
NeisseriadanStreptomyces. Strainbakteri tidak mampu melakukan transformasi
secaraalamidapat dilakukan denganmengisolasi DNAdengan perlakuankimia
atauolehelektroporasi.
d. Biologi Sel
Bagian ilmu biologi lainnya adalah Biologi sel. Biologi sel (juga disebut sitologi, dari
bahasa Yunani kytos, "wadah") adalah ilmu yang mempelajari sel dan organelnya. Hal
yang dipelajari dalam biologi sel yang mencakup sifat-sifat fisiologis sel seperti struktur dan
organel yang terdapat di dalam sel, lingkungan dan antaraksi sel, daur hidup sel,
pembelahan sel dan fungsi sel (fisiologi), hingga kematian sel. Hal-hal tersebut dipelajari
baik pada skala mikroskopik maupun skala molekular, dan sel biologi meneliti baik
organisme bersel tunggal seperti bakteri maupun sel-sel terspesialisasi di dalam organisme
multisel seperti manusia. Pengetahuan akan komposisi dan cara kerja sel merupakan hal
mendasar bagi semua bidang ilmu biologi. Pengetahuan akan persamaan dan perbedaan
di antara berbagai jenis sel merupakan hal penting khususnya bagi bidang biologi sel dan
biologi molekular.Persamaan dan perbedaan mendasar tersebut menimbulkan tema
pemersatu, yang memungkinkan prinsip-prinsip yang dipelajari dari suatu sel
diekstrapolasikan dan digeneralisasikan pada jenis sel lain. Penelitian biologi sel berkaitan
erat dengan genetika, biokimia, biologi molekular, dan biologi perkembangan.
Yuwono (2005), membedakan jasad hidup dalam dua bentuk, yaitu jasad hidup
seluler dan jasad hidup bukan seluler. Jasad hidup seluler mempunyai satuan (unit) dasar
berupa sel, misalnya bakteri dan tanaman tingkat tinggi. Jasad hidup bukan seluler tidak
tersusun atas sel melainkan satuan yang lain, misalnya virus yang satuan dasarnya virion.
Istilah sel pertama kali digunakan oleh Robert Hooke (1653 – 1703), ilmuwan Inggris yang
menjelaskan struktur potongan tipis gabus dibawah mikroskop. Sel adalah suatu satuan
yang dinamis oleh karena selalu mengalami perubahan, baik pertambahan ukuran dan
volume, karena adanya proses pertumbuhan, maupun perubahan fungsi, misalnya karena
proses diferensiasi. Sel memiliki fungsi utama, yaitu (1) sebagai piranti kimiawi yang
melakukan proses metabolisme, dan (2) sebagai piranti yang menyimpan kode-kode
informasi biologis yang akan diturunkan ke anakannya atau generasi berikutnya.
Dari segi satuan dasar individu, jasad hidup seluler yang ada di alam digolongkan
menjadi organisme uniseluler dan organisme multiseluler. Penggolongan jasad seluler
berdasarkan struktur dan organisasi sel yaitu jasad prokariota dan jasad eukariota. Struktur
sel prokariota terdiri atas struktur utama berupa: dinding sel, membran plasma sel, ribosom,
dan bahan genetik. Sel jasad eukariota mempunyai struktur dan organisasi yang lebih
32
kompleks dibandingkan sel prokariot. Pada jasad eukariota bahan genetiknya (DNA)
berada dalam membran nukleus sehingga memiliki struktur nukleus yang jelas. Membran
nukleus ini terdiri atas dua lapis, yaitu membran dalam dan membran luar. Bahan
genetiknya terdiri atas lebih dari satu kromosom linear yang dikemas sedemikian rupa dan
adanya protein histon pada nukleosome. Dan pada beberapa eukariota tingkat rendah,
memiliki ekstrakromosom yang disebut plasmis. Ciri lain dari eukariota adalah ada
pembagian ruang yang jelas di dalam sel sehingga ada bermacam-macam organel yang
masing-masing mempunyai fungsi khusus. Beberapa organel itu adalah mitokondria
(tempat produksi energi seluler), retikulum endoplasma kasar (berperan dalam proses
sekresi protein dan tempat melekatnya ribosom), retikulum endoplasma halus (tempat
detoksifikasi senyawa-senyawa tertentu dan sintesis lemak), badan golgi (berperan dalam
sekresi dan sortasi protein), kloroplas (tempat berlangsungnya fotosisntesis pada
tumbuhan), vakuola (tempat penyimpanan air serta produk metabolisme), dan organel-
organel sel lain.
e. Biokimia
Biokimia adalah kimia makhluk hidup. Biokimiawan mempelajari molekul dan reaksi
kimia yang dikatalisis oleh enzim yang berlangsung dalam semua organisme hidup.
Biokimia merupakan ilmu yang mempelajari struktur dan fungsi komponen selular, seperti
protein, karbohidrat, lipid, asam nukleat, dan biomolekul lainnya. Saat ini biokimia lebih
terfokus secara khusus pada kimia reaksi termediasi enzim dan sifat-sifat protein.Saat ini,
biokimia metabolisme sel telah banyak dipelajari. Bidang lain dalam biokimia diantaranya
sandi genetik (DNA, RNA), sintesis protein, angkutan membran sel, dan transduksi sinyal.
Kebangkitan biokimia diawali dengan penemuan pertama molekul enzim, diastase, pada
tahun 1833 oleh Anselme Payen. Tahun 1828, Friedrich Wöhler menerbitkan sebuah buku
tentang sintesis urea, yang membuktikan bahwa senyawa organik dapat dibuat secara
mandiri. Penemuan ini bertolak belakang dengan pemahaman umum pada waktu itu yang
meyakini bahwa senyawa organik hanya bisa dibuat oleh organisme. Istilah biokimia
pertama kali dikemukakan pada tahun 1903 oleh Karl Neuber, seorang kimiawan Jerman.
Sejak saat itu, biokimia semakin berkembang, terutama sejak pertengahan abad ke-20,
dengan ditemukannya teknik-teknik baru seperti kromatografi, difraksi sinar X,
elektroforesis, RMI (nuclear magnetic resonance, NMR), pelabelan radioisotop, mikroskop
elektron, dan simulasi dinamika molekular. Teknik-teknik ini memungkinkan penemuan dan
analisis yang lebih mendalam berbagai molekul dan jalur metabolik sel, seperti glikolisis
dan siklus Krebs. Perkembangan ilmu baru seperti bioinformatika yang akan dibahas
secara detail pada BAB 8, juga banyak membantu dalam peramalan dan pemodelan
struktur molekul raksasa. Saat ini, penemuan-penemuan biokimia digunakan di berbagai
33
bidang, mulai dari genetika hingga biologi molekular dan dari pertanian hingga kedokteran.
Penerapan biokimia yang pertama kali adalah dalam pembuatan roti dan anggur
menggunakan khamir, sekitar 5000 tahun yang lalu pada zaman Yunani dan mesir kuno
(Siregar, 2008).
Jasad hidup dapat tumbuh dan berkembang karena adanya ribuan reaksi biokimia
yang berlangsung di dalam sel. Reaksi-reaksi biokimia tersebut pada dasarnya dibedakan
menjadi reaksi biosintetik (anabolik) dan reaksi degradatif (katabolik). Reaksi biosintetik
merupakan reaksi biokimia yang dilakukan oleh sel untuk menyusun komponen-komponen
sel, misalnya asam-asam amino, asam nukleat dan lain-lain. Reaksi degradatif adalah
reaksi biokimia perombakan senyawa kimia untuk diubah menjadi senyawa lain, baik untuk
produksi energi selular maupun sebagai prekursor dalam biosintesis komponen-komponen
sel. Reaksi biosintetik dan degradatif merupakan serangkaian reaksi yang saling berkaitan
satu sama lain dan secara umum dikenal sebagai proses metabolisme jasad hidup.
Reaksi degradatif seringkali diikuti oleh serangkaian reaksi yang berpuncak pada
sintesis senyawa yang mengandung ester fosfat atau ikatan pirofosfat, misalnya adenosin
trifosfat (ATP). ATP adalah nukleotida yang terdiri atas adenin, gugus ribosa, dan satu
satuan trifosfat. ATP merupakan molekul berenergi tinggi karena gugus trifosfatnya
mengandung dua ikatan fosfoanhidrid. Jika ATP dihidrolisis, menjadi ADP dan ortofosfat
(Pi), atau menjadi AMP dan pirofosfat (PPi), maka dibebaskan menjadi energi sebesar 7,3
kkal.
Dalam reaksi biokimia dibutuhkan suatu protein yang mempunyai fungsi khusus
sebagai biokatalis. Protein ini dikenal dengan nama enzim yang merupakan sekelompok
protein yang disintesis oleh sel hidup. Hampir semua reaksi biokimia dalam sel dikatalisis
oleh enzim. Enzim memiliki kemampuan mempercepat reaksi transformasi kimiawi paling
tidak sampai sejuta kali lipat jika dibandingkan dengan transformasi kimia tanpa katalis.
Meskipun demikian, enzim tidak mengubah keseimbangan reaksi, melainkan menurunkan
energi aktivasi suatu reaksi enzimatik. Enzim memiliki karakteristik utama, yaitu
kemampuan katalitik dan spesifitas. Dalam studi molekuler dan rekayasa genetika, peranan
enzim sangat vital. Telah diketahui banyak enzim yang mapu memotong DNA (enzim
endonuklease restriksi) hanya pada urutan nukleotida tertentu. Selain itu ada enzim yang
dapat digunakan untuk menyambung dua potongan DNA (DNA ligase).
2.4 Teknik-Teknik dalam Bioteknologi Molekular

Penerapan dari ilmu biologi dan biokimia sebagai ilmu yang mendasari dan
mendukung perkembangan bioteknologi molekuler dapat dilakukan dengan teknik rekayasa
genetik atau DNA rekombinan.
34
Teknologi DNA rekombinan (recombinant DNA technology) adalah suatu metode
untuk merekayasa genetik dengan cara menyisipkan (insert) gen yang dikehendaki ke
dalam suatu organisme. Teknologi transgenik bertujuan untuk mengubah sifat alami suatu
individu menjadi sifat yang dikehendaki oleh manusia. Teknologi DNA rekombinan atau
sering juga disebut rekayasa genetika merupakan teknologi yang memanfaatkan proses
replikasi, transkripsi dan translasi untuk memanipulasi, mengisolasi dan mengekspresikan
suatu gen dalam organisme yang berbeda. Biasanya gen dari organisme yang lebih tinggi
diekspresikan pada organisme yang lebih rendah. Teknologi ini juga memberikan
kesempatan yang tidak terbatas untuk menciptakan kombinasi baru dari gen yang tidak ada
pada kondisi normal. Melalui rekayasa genetika, akan dihasilkan kombinasi baru dari materi
genetik melalui penyisipan molekul asam nukleat kedalam suatu sistem DNA vektor
(plasmid bakteri, virus dan lain-lain) dan kemudian memasukkan vektor ini kedalam suatu
inang sehingga akan dihasilkan suatu produk gen dalam jumlah banyak Gen mungkin bisa
diibaratkan seperti software biologi yang diprogram untuk menjalankan pertumbuhan,
perkembangan dan fungsi organisme. Dengan merubah software dengan cara yang tepat
dan terkontrol, akan memungkinkan untuk menghasilkan perubahan yang diinginkan dalam
organisme.
DNA dapat di isolasi dari sel tanaman, binatang atau mikroorganisme, dan dapat
dipotong dengan enzim tertentu. Fragmen DNA ini kemudian dapat di gabung dengan
fragmen DNA lain (DNA vektor) dan kemudian dimasukkan ke sel inang, sehingga menjadi
bagian dari komplemen genetik sel inang. Sel inang kemudian dapat diperbanyak dalam
skala besar untuk membentuk sifat genetik yang baru dan kemampuan kimia yang tidak
dapat dicapai dengan cara konvensional.
Kita akan melihat bagaimana informasi genetik dapat dimanipulasi. Gen dapat
dimanipulasi untuk berbagai keperluan, misalnya untuk terapi, meningkatkan hasil
pertanian, menciptakan organisme yang dapat membersihkan limbah, juga untuk
membuktikan tersangka kriminal melalui test DNA. Untuk setiap keperluan di atas, terdapat
beberapa teknik rekayasa genetika yang biasa dilakukan di laboratorium, yaitu : (1) isolasi
DNA, (2) amplifikasi atau perbanyakan fragmen DNA, (3) pemotongan DNA dengan enzim
restriksi, (4) kloning gen, (5) penentuan urutan DNA, (6) hibridisasi, (7) analisis RFLP, dan
(8) produksi protein rekombinan.
2.4.1 Isolasi DNA
Semua organisme disusun oleh sel yang mengandung elemen genetik yang sama
yaitu DNA yang terdapat dalam kromosom. Kromosom eukariot berbentuk linear
sedangkan kromosom prokariot berbentuk sirkular. Selain itu prokariot juga mengandung
35
satu atau lebih plasmid. Plasmid merupakan mulekul DNA sirkular dengan ukuran yang
jauh lebih kecil dibanding kromosom.
a. Isolasi DNA kromosom.

Prinsipnya adalah memisahkan DNA kromosom atau DNA genom dari komponen-
komponen sel lain. Sumber DNA bisa dari tanaman, kultur mikroorganise, atau sel
manusia. Membran sel dilisis dengan menambahkan detergen untuk membebaskan isinya,
kemudian pada ekstrak sel tersebut ditambahkan protease (yang berfungsi mendegradasi
protein) dan RNase (yang berfungsi untuk mendegradasi RNA), sehingga yang tinggal
adalah DNA. Selanjutnya ekstrak tersebut dipanaskan sampai suhu 90°C untuk
menginaktifasi enzim yang mendegradasi DNA (DNase). Larutan DNA kemudian di
presipitasi atau diendapkan dengan etanol dan bisa dilarutkan lagi dengan air.
b. Isolasi DNA plasmid

DNA plasmid merupakan wadah yang digunakan untuk kloning gen, sehingga DNA
plasmid harus di pisahkan dari DNA kromosom. DNA plasmid mempunyai ukuran yang
jauh lebih kecil daripada DNA kromosom. Untuk memisahkan DNA plasmid, maka
memerlukan perlakuan yang sedikit berbeda dengan prosedur di atas. Pertama, membran
sel dilisis dengan penambahan detergen. Proses ini membebaskan DNA kromosom, DNA
plasmid, RNA, protein dan komponen lain. DNA kromosom dan protein diendapkan dengan
penambahan potasium. Kompleks DNA, protein, dan potasium yang mengendap
dipisahkan dengan cara sentrifugasi. Supernatan yang mengandung DNA plasmid, RNA
dan protein yang tersisa dipisahkan. Kemudian ditambahkan RNase dan protease untuk
mendegradasi RNA dan protein. Akhirnya DNA plasmid dapat diendapkan atau dipresipitasi
menggunakan etanol.
c. Isolasi RNA
RNA, terutama mRNA merupakan materi genetik yang mengkode suatu protein.
Jumlah populasi mRNA akan lebih banyak dibading dengan DNA. mRNA eukariot dapat
dipisahkan dari DNA dengan menggunakan oligonukleotida dTatau RNA total juga dapat di
isolasi dari sel dengan menambahkan enzim DNase yang berfungsi untuk mendegradasi
DNA.
2.4.2 PCR (Polymerase Chain Reaction)

PCR (Polymerase Chain Reaction) merupakan suatu teknik perbanyakan
(amplifikasi) potongan DNA secara in vitro pada daerah spesifik yang dibatasi oleh dua
buah primer oligonukleotida. Primer yang digunakan sebagai pembatas daerah yang
diperbanyak adalah DNA untai tunggal yang urutannya komplemen dengan DNA
36
templatnya. Proses tersebut mirip dengan proses replikasi DNA secara in vivo yang bersifat
semi konservatif.
PCR memungkinkan adanya perbanyakan DNA antara dua primer, hanya di dalam tabung
reaksi, tanpa perlu memasukkannya ke dalam sel (in vivo). Pada proses PCR dibutuhkan
DNA untai ganda yang berfungsi sebagai cetakan (templat) yang mengandung DNA-target
(yang akan di amplifikasi) untuk pembentukan molekul DNA baru, enzim DNA polimerase,
deoksinukleosida trifosfat (dNTP), dan sepasang primer oligonukleotida. Pada kondisi
tertentu, kedua primer akan mengenali dan berikatan dengan untaian DNA komplemennya
yang terletak pada awal dan akhir fragmen DNA target, sehingga kedua primer tersebut
akan menyediakan gugus hidroksil bebas pada karbon 3’. Setelah kedua primer menempel
pada DNA templat, DNA polimerase mengkatalisis proses pemanjangan kedua primer
dengan menambahkan nukleotida yang komplemen dengan urutan nukleotida templat.
DNA polimerase mengkatalisis pembentukan ikatan fosfodiester antara OH pada karbon 3’
dengan gugus 5’ fosfat dNTP yang ditambahkan. Sehingga proses penambahan dNTP
yang dikatalisis oleh enzim DNA polimerase ini berlangsung dengan arah 5’→3’ dan
disebut reaksi polimerisasi. Enzim DNA polimerase hanya akan menambahkan dNTP yang
komplemen dengan nukleotida yang terdapat pada rantai DNA cetakan.
PCR melibatkan banyak siklus yang masing-masing terdiri dari tiga tahap berurutan,
yaitu pemisahan (denaturasi) rantai DNA templat, penempelan (annealing) pasangan
primer pada DNA target dan pemanjangan (extension) primer atau reaksi polimerisasi yang
dikaalisis oleh DNA polimerase.
a. Tahapan PCR
1) Denaturasi
Selama proses denaturasi, DNA untai ganda akan membuka menjadi dua untai
tunggal. Hal ini disebabkan karena suhu denaturasi yang tinggi menyebabkan putusnya
ikatan hidrogen diantara basa-basa yang komplemen. Pada tahap ini, seluruh reaksi enzim
tidak berjalan, misalnya reaksi polimerisasi pada siklus yang sebelumnya. Proses
denaturasi biasanya dilakukan antara suhu 90°C – 95°C.
2) Penempelan primer
Pada tahap penempelan primer (annealing), primer akan menuju daerah yang
spesifik yang komplemen dengan urutan primer. Pada proses annealing ini, ikatan hidrogen
akan terbentuk antara primer dengan urutan komplemen pada DNA templat. Proses ini
biasanya dilakukan pada suhu 50 °C – 60 °C. Selanjutnya, DNA polymerase akan
berikatan sehingga ikatan hidrogen tersebut akan menjadi sangat kuat dan tidak akan
37
putus kembali apabila dilakukan reaksi polimerisasi selanjutnya, biasanya pada suhu 72
°C.
3) Reaksi polimerisasi (extension)

o
Umumnya, reaksi polimerisasi atau perpanjangan rantai ini, terjadi pada suhu 72 C.
Primer yang telah menempel tadi akan mengalami perpanjangan pada sisi 3’nya dengan
penambahan dNTP yang komplemen dengan templat oleh DNA polimerase.
Gambar 2.8. Siklus PCR, yang terdiri dari denaturasi, penempelan primer (annealing) dan
polimerisasinya (microfluidics.stanford.edu)
Jika siklus dilakukan berulang-ulang maka daerah yang dibatasi oleh dua primer
akan di amplifikasi secara eksponensial (disebut amplikon yang berupa untai ganda),
sehingga mencapai jumlah copy yang dapat dirumuskan dengan (2n)x. Dimana n adalah
jumlah siklus dan x adalah jumlah awal molekul DNA (template). Jadi, seandainya ada 1
copy DNA sebelum siklus berlangsung, setelah satu siklus, akan menjadi 2 copy, sesudah
2 siklus akan menjadi 4, sesudah 3 siklus akan menjadi 8 kopi dan seterusnya. Sehingga
perubahan ini akan berlangsung secara eksponensial. PCR dengan menggunakan enzim
Taq DNA polimerase pada akhir dari setiap siklus akan menyebabkan penambahan satu
nukleotida A pada ujung 3’ dari potongan DNA yang dihasilkan. Sehingga nantinya produk
PCR ini dapat di kloning dengan menggunakan vektor yang ditambahkan nukleotida T pada
ujung-ujung 5’-nya. Proses PCR dilakukan menggunakan suatu alat yang disebut
thermocycler.
38
Gambar 2.9. Jumlah penggandaan fragmen DNA pada tahapan PCR.
b. Komponen PCR
1) Enzim DNA Polymerase
Dalam sejarahnya, PCR dilakukan dengan menggunakan Klenow fragment DNA

Polimerase I selama reaksi polimerisasinya. Enzim ini ternyata tidak aktif secara termal
selama proses denaturasi, sehingga peneliti harus menambahkan enzim di setiap
siklusnya. Selain itu, enzim ini hanya bisa dipakai untuk perpanjangan 200 bp dan hasilnya
menjadi kurang spesifik. Untuk mengatasi kekurangan tersebut, dalam perkembangannya
kemudian dipakai enzim Taq DNA polymerase yang memiliki aktivitas pada suhu tinggi.
Oleh karenanya, penambahan enzim tidak perlu dilakukan di setiap siklusnya, dan proses
PCR dapat dilakukan dalam satu mesin (thermocycle).
2) Primer
Primer merupakan oligonukleotida pendek rantai tunggal yang mempunyai urutan

komplemen dengan DNA templat yang akan diperbanyak. Panjang primer berkisar antara
20-30 basa. Untuk merancang urutan primer, perlu diketahui urutan nukleotida pada awal
dan akhir DNA target. Primer oligonukleotida di sintesis dengan ukuran seperti yang
disebutkan diatasmenggunakan suatu alat yang disebut DNA synthesizer.
3) Reagen lainnya
Selain enzim dan primer, terdapat juga komponen lain yang ikut menentukan
keberhasilan reaksi PCR. Komponen tersebut adalah dNTP untuk reaksi polimerisasi, dan
buffer yang mengandung MgCl2. Konsentrasi ion Mg2+dalam campuran reaksi merupakan
39
hal yang sangat kritis. Konsentrasi ion Mg2+ini sangat mempengaruhi proses primer
annealing, denaturasi, spesifisitas produk, aktivitas enzim dan fidelitas reaksi.
c. Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction (RT-PCR)
RT-PCR merupakan singkatan Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction.

Seperti namanya, proses RT-PCR merupakan bagian dari proses PCR biasa. Perbedaanya
dengan PCR yang biasa, pada proses ini berlangsung satu siklus tambahan yaitu adanya
perubahan RNA menjadi cDNA (complementary DNA) dengan menggunakan enzim
Reverse Transkriptase. Reverse Transcriptase adalah suatu enzim yang dapat mensintesis
molekul DNA secara in vitro menggunakan template RNA.
Seperti halnya PCR biasa, pada pengerjaan RT-PCR ini juga diperlukan DNA Polimerase,
primer, buffer, dan dNTP. Namun berbeda dengan PCR, templat yang digunakan pada RT-
PCR adalah RNA murni. Oleh karena primer juga dapat menempel pada DNA selain pada
RNA, maka DNA yang mengkontaminasi proses ini harus dibuang. Untuk proses
amplifikasi mRNA yang mempunyai poly(A) tail pada ujung 3', maka oligo dT, random
heksamer, maupun primer spesifik untuk gen tertentu dapat dimanfaatkan untuk memulai
sintesis cDNA.
d. Metoda Deteksi Produk PCR
Produk PCR adalah segmen DNA (amplikon) yang berada dalam jumlah jutaan
copy, tetapi tidak dapat dilihat dengan mata telanjang. Oleh karena itu PCR perlu diikuti
dengan suatu tahap akhir yang bertujuan untuk memvisualisasikan produk PCR serta
sekaligus bertujuan untuk mengetahui ukuran produk PCR dan mengetahui apakah produk
yang dihasilkan adalah benar seperti yang diinginkan. Salah satu metoda deteksi yang
umum dilakukan adalah elektroforesis pada gel agarosa.
Metoda ini didasarkan pada pergerakan mulekul bermuatan dalam media

penyangga matriks stabil yang direndam ke dalam larutan buffer di bawah pengaruh
medan listrik. Media yang umum digunakan adalah gel agarosa atau poliakrilamid.
Elektroforesis gel agarosa digunakan untuk memisahkan fragmen DNA yang berukuran
lebih besar dari 100 pb dan dijalankan secara horizontal, sedangkan elektroforesis
poliakrilamid dapat memisahkan 1 pb dan dijalankan secara vertikal. Elektroforesis
poliakrilamid biasanya digunakan untuk menentukan urutan DNA (proses sekuensing).
Larutan DNA yang bermuatan negatif dimasukkan ke dalam sumur-sumur yang

terdapat pada gel agarosa dan diletakkan di kutup negatif, apabila dialiri arus listrik dengan
menggunakan larutan buffer yang sesuai maka DNA akan bergerak ke kutup positif. Laju
migrasi DNA dalam medan listrik berbanding terbalik dengan massa DNA. Migrasi DNA
40
terutama ditentukan oleh ukuran panjang dan bentuk DNA. Fragmen DNA yang berukuran
kecil akan bermigrasi lebih cepat dibanding yang berukuran besar, sehingga elektroforesis
mampu memisahkan fragmen DNA berdasarkan ukuran panjangnya. Untuk visualisasi
maka ditambahkan larutan etidium bromida yang akan masuk diantara ikatan hidrogen
pada DNA, sehingga pita fragmen DNA akan kelihatan dibawah lampu UV, seperti yang
divisualisasikan pada Gambar 2.10. Panjang amplikon bisa diperkirakan dengan
membandingkannya dengan pita DNA standar atau marker (M).
Gambar 2.10. Visualisasi produk PCR hasil elektroforesis pada gel agarosa.
2.4.3 Kloning Gen
Sejak ditemukannya enzim restriksi (enzim yang dapat memotong DNA pada
urutan yang spesifik) dan ditemukannya enzim ligase (enzim yang dapat menyambungkan
potongan DNA), maka DNA dari organisme apa saja dapat diisolasi, dipotong-potong,
disambungkan kembali dan dipindahkan ke organisme lain. Proses mengkombinasikan
beberapa DNA dan memperbanyak DNA rekombinan tersebut di dalam sel disebut
kloning (Gambar 2.11). Proses memasukkan DNA ke dalam sel disebut transformasi dan
sel yang dihasilkan disebut transforman. Agar suatu DNA dapat diperbanyak di dalam sel,
maka DNA tersebut harus disisipkan ke dalam suatu plasmid (berfungsi sebagai
vektor/pembawa) yang dapat bereplikasi di dalam sel. Kumpulan sel-sel yang mengandung
plasmid rekombinan yang sama disebut sebagai suatu klon.
Pada kloning gen, suatu fragmen DNA yang mengandung gen yang akan di klon
disisipkan pada molekul DNA vektor untuk menghasilkan molekul DNA rekombinan. DNA
rekombinan ini digunakan untuk mentransformasi sel inang (biasanya bakteri). Di dalam
sel, vektor mengadakan replikasi, menghasilkan banyak copy atau turunan yang identik,
baik vektornya maupun gen yang dibawanya. Ketika sel inang membelah, copy molekul
41
DNA rekombinan diwariskan pada progeni. Setelah terjadi sejumlah besar pembelahan sel,
maka dihasilkan koloni atau klon sel inang yang identik. Tiap-tiap klon mengandung satu
copy atau lebih molekul DNA rekombinan.
Gambar 2.11. Tahapan dan prinsip dasar pada proses kloning gen.
Kloning melibatkan lima komponen utama, yaitu : fragmen DNA (gen) yang akan di
kloning (disebut juga DNA sisipan), DNA vektor (bisa plasmid, bakteriofage atau cosmid),
enzim restriksi, enzim ligase, dan sel inang (bakteri atau ragi).
a. DNA sisipan (Insert).
Tujuan kloning adalah memperbanyak suatu fragmen DNA dari suatu organisme
dalam suatu sel inang. Namun tujuan akhirnya bisa bermacam-macam, diantaranya:
produksi protein penting dengan skala besar, untuk deteksi patogen atau sel abnormal, dan
identifikasi DNA sidik jari pada kasus forensik dan hubungan kekerabatan antara individu.
DNA sisipan bisa diperoleh dengan dua cara, yaitu :
1. Produk PCR.
2. Fragmen DNA hasil pemotongan dengan enzim restriksi yang spesifik.
b. DNA vektor / plasmid
Vektor merupakan suatu mulekul DNA sirkular yang bertindak sebagai wadah untuk
membawa DNA sisipan masuk ke dalam sel inang dan bertanggung jawab atas
replikasinya. Berdasarkan fungsinya vektor dapat dibagi dua, yaitu : vektor kloning dan
vektor ekspresi. Vektor kloning hanya berfungsi untuk memperbanyak fragmen DNA yang
disisipkan, sehingga fragmen DNA tersebut hanya direplikasi, tidak di transkripsi. Biasanya
42
vektor ini digunakan untuk tujuan sekuensing atau untuk perbanyakan DNA yang nantinya
akan di sisipkan ke vektor ekspresi. Sementara vektor ekspresi digunakan untuk
memproduksi protein dari gen yang diklon. Jenis vektor ekspresi tergantung dari sel inang
yang akan digunakan dan ukuran DNA yang akan disisipkan ke dalam vektor tersebut.
Syarat suatu vektor adalah : (1) mampu memasuki sel inang, (2) bereplikasi sendiri
(memiliki ori), (3) menghasilkan jumlah copy yang banyak dan (4) mempunyai ukuran yang
relatif kecil (< 10 kb). Molekul DNA yang memenuhi persyaratan tersebut adalah : plasmid
dan kromosom virus terutama bakteriofage.
Plasmid merupakan DNA rantai ganda yang berbentuk sirkular dan terdapat bebas
di dalam sel. Plasmid dapat bereplikasi sendiri di dalam sel inang karena mempunyai suatu
urutan DNA spesifik yang disebut ori (origin of replication/titik awal replikasi). Plasmid
hampir selalu membawa satu gen atau lebih yang menyebabkan ciri-ciri penting yang
ditunjukkan oleh bakteri inang, misalnya plasmid yangmembawa gen resistan antibiotik
Banyak spesies bakteri mempunyai plasmid, tetapi plasmid yang digunakan dalam
teknologi DNA rekombinan bukan plasmid dalam bentuk alami, melainkan yang sudah
direkayasa. Plasmid tersebut telah diberi sisi pengenalan beberapa enzim restriksi agar
dapat disisipi dengan DNA asing. Plasmid juga telah diberi dua gen marker, satu gen
diperlukan untuk mendeteksi dengan mudah adanya plasmid di dalam sel, dan gen yang
kedua diperlukan untuk mendeteksi adanya DNA asing.
c. Bakteriofage
Bakteriofage merupakan virus yang menginfeksi bakteri. Bakteriofage mempunyai

struktur yang sangat sederhana, hanya terdiri dari satu molekul DNA atau RNA yang
membawa sejumlah gen, dan dikelilingi oleh selubung atau kapsid yang disusun oleh
molekul protein. Pada proses infeksi bakteri oleh faga, partikel faga melekat pada bagian
luar bakteri dan memasukkan DNA kromosomnya ke dalam sel. Molekul DNA faga
kemudian mengadakan replikasi, gen-gen faga mengatur sintesis protein komponen
kapsid. Partikel-partikel fage yang baru kemudian dirakit dan dilepaskan dari bakteri. Sel
bakteri mengalami lisis. Sama seperti plasmid, DNA fage yang digunakan dalam teknologi
DNA rekombinan umumnya sudah dimodifikasi dengan penambahan sisi atau urutan
nukleotida yang dikenal oleh enzim restriksi. Urutan nukleotida yang dikenal oleh enzim
restriksi tersebut dapat disisipkan pada waktu merancang sepasang primer yang akan
digunakan pada proses PCR. Perbedaannya dengan plasmid, bakteriofage dapat
menampung fragmen DNA dengan ukuran yang lebih besar.
d. Vektor ekspresi
43
Vektor ekspresi merupakan vektor yang mana disamping dapat bereplikasi sendiri
juga mengandung sinyal-sinyal ekspresi, sehingga gen yang di klon juga akan ditranskripsi
menjadi mRNA dan kemudian ditranslasi menjadi protein. Vektor ekspresi memungkinkan
untuk produksi protein hewan, manusia atau tanaman di dalam bakteri. Tiga sinyal ekspresi
yang paling penting adalah : (1) Promotor transkripsi, (2) terminator transkripsi, dan (3)
tempat pengikatan ribosom. Selain sistem vektor ekspresi untuk bakteriE. coli, juga
terdapat beberapa sistem vektor ekspresi untuk yeast Saccaromyces cerevisiae dan vektor
ekspresi untuk yeastPichia pastoris. Kedua jenis sistem ekspresi ini terbukti dapat
memproduksi protein eukariot dengan hasil yang tinggi dan berfungsi seperti protein natif
(asli).
e. Tahapan-tahapan kloning.
Tahapan pengerjaan kloning DNA/gen adalah sebagai berikut :
1. Isolasi/ preparasi DNA sisipan dan DNA vektor
2. Pemotongan molekul DNA
3. Penggabungan fragmen DNA sisipan ke DNA vektor (proses ligasi)
4. Transformasi (proses memasukkan molekul DNA plasmid rekombinan ke dalam sel
inang.
5. Identifikasi sel yang mengandung DNA plasmid rekombinan.
6. Isolasi DNA rekombinan.
1) Isolasi/ preparasi DNA
Sebelum disisipkan ke suatu DNA vektor, maka DNA sisipan harus diisolasi terlebih dulu.
Beberapa prinsip isolasi DNA sudah dijelaskan di atas. Selain itu DNA sisipan juga dapat
diperoleh dari produk PCR.
2) Pemotongan DNA dengan enzim restriksi
Molekul plasmid yang digunakan sebagai vektor harus dipotong untuk membuka
DNA lingkaran, sehingga molekul DNA asing bisa disisipkan. Enzim restriksi merupakan
suatu endonuklease yang mengenal urutan spesifik pada molekul DNA dan memotong
pada urutan yang spesifik tersebut. Sisi pengenalan enzim restriksi umumnya merupakan
suatu polindrom, dimana urutan nukleotida rantai atas sama dengan urutan nukleotida
rantai bawah. Misalnya: Enzim restriksi hanya terdapat pada beberapa bakteri, dan
berfungsi untuk mempertahankan diri dari infeksi bakteriofage.
44
Tabel 3. Beberapa enzim restriksi dan sisi pengenalannya (palindrome)
Nama enzim Sumber bakteri Urutan pengenalan

AluI Arthrobacter luteus AG↓CT
BamHI Bacillus G↓GATCC
ClaI Caryophanon latum AT↓GCAT
EcoRI Escherichia coli G↓AATTC
HaeIII Haemophilus aegyptius GG↓CC
HindIII Haemophylus influenzae A↓AGCTT
KpnI Klebsiella pneumonia GGTAC↓C
NotI Nocardia otidiscaviarum GC↓GGCCGC
PstI Providencia stuartii CTGCA↓G
XbaI Xanthomonas bradii T↓CTAGA
XhoI Xanthomonas holcicola C↓TCGAG
3) Penyambungan DNA dengan enzim ligase.
Apabila dua molekul DNA mempunyai ujung rantai tunggal yang komplementer,
maka kedua ujung DNA tersebut dapat berpansangan, kemudian enzim ligase dapat
membentuk ikatan fosfodiester antara kedua molekul DNA tersebut. Reaksi enzimatik ini
memerlukan energi dari ATP.
4) Transformasi sel
Untuk memasukkan DNA ke dalam sel bakteri, sel tersebut harus diberi perlakukan
agar menjadi sel kompeten, yaitu sel yang mampu menerima DNA dari luar. Kemampuan
paling tinggi untuk memasukkan DNA dari luar terjadi pada sel yang berada dalam fase
logaritmik, yaitu pada waktu pertumbuhan sel sedang cepat. Perlakukan dengan
CaCl2menyebabkan dinding sel menjadi lebih permeabel dan bermuatan positif, sehingga
dapat menarik DNA yang bermuatan negatif. Transformasi (pengambilan DNA oleh sel
bakteri) dapat dilakukan dengan dua cara, yaitu : (1) dengan cara heat shock (kejutan
panas) dimana campuran sel dan DNA plasmid rekombinan didinginkan dalam waktu yang
lama, kemudian di panaskan dengan segera pada suhu 42 °C. (2) dengan cara
elektroporasi (kejutan listrik) menggunakan suatu alat yang dialiri arus listrik yang terkontrol
voltase dan waktunya.
5) Seleksi klon rekombinan
Sel inang yang telah ditansformasi kemudian ditumbuhkan pada media padat yang
sesuai pada suhu 37 °C. Setelah inkubasi semalam, maka kita akan mendapatkan koloni-
koloni bakteri yang tumbuh di media padat. Satu koloni bakteri terdiri dari jutaan sel bakteri
yang mempunyai sifat yang sama. Sehingga klon-klon ini perlu dipilih untuk menentukan
mana koloni bakteri yang membawa plasmid rekombinan. Terdapat beberapa cara seleksi
klon rekombinan, diantaranya: (1) Seleksi berdasarkan sifat resistan terhadap antibiotik.
Pada seleksi ini plasmid yang digunakan mempunyai dua gen resistan terhadap antibiotik.
45
Misalnya gen Ampr(gen resistan ampisilin dan gen Tetr(gen resistan terhadap tetraciclin).
Penyisipan DNA asing dilakukan di dalam gen Tetr, sehingga bila mengandung sisipan
DNA asing gen Tetrtidak akan aktif. Bakteri transforman pertama ditumbuhkan pada media
yang mengandung Ampicilin, sehingga koloni yang tumbuh adalah koloni yang membawa
plasmid. Kemudian koloni-koloni ini dipindahkan ke media yang mengandung tetrasiklin,
sehingga koloni yang mengandung DNA sisipan (dimana gen Tetr-nya sudah tidak aktif)
tidak akan tumbuh. Maka kita akan tahu koloni maka yang mengandung DNA sisipan. (2)
Seleksi dengan melibatkan gen LacZ. Pada seleksi ini plasmid yang digunakan mempunyai
gen Amprdan gen LacZ. Gen LacZ mengkode enzim β-galakotosidase yang mengkatalisis
pemecahan laktosa menjadi glukosa dan galaktosa. Penyisipan DNA dilakukan di dalam
gen LacZ ini, sehingga bila mengandung DNA sisipan maka gen LacZ akan inaktif. Seleksi
dilakukan dengan menambahkan substrat analog laktosa yaitu X-gal yang akan dipecah
oleh enzim β-galakotosidase menjadi senyawa yang berwarna biru (5-bromo-4 kloro-3-
indigo). IPTG (isopropil tiogalaktopiranosida) digunakan sebagai inducer. Bakteri
transforman ditumbuhkan pada media yang mengandung Ampicilin, X-gal dan IPTG. Koloni
yang tumbuh adalah koloni yang membawa plasmid. Akan tetapi terdapat dua jenis koloni,
yaitu yang berwarna putih dan biru. Koloni yang berwarna biru menandakan terdapat
senyawa 5-bromo-4 kloro-3-indigo (hasil penguraian X-gal oleh β-galaktosidase), artinya
gen LacZnya aktif sehingga tidak ada DNA sisipan. Sedangkan koloni yang berwarna putih,
adalah koloni yang tidak menghasilkan senyawa berwarna, gen LacZ inaktif dan
mengandung DNA sisipan diantara gen LacZ. Visualisasi koloni putih biru pada medium
agar yang mengandung ampicilin, X-gal dan IPTG dapat dilihat pada Gambar 2.12.
Gambar 2.12.Visualisasi koloni putih biru pada medium LB agar mengandung

Ampicilin, X-gal dan IPTG
46
6) Isolasi DNA plasmid rekombinan.
DNA plasmid rekombinan, kemudian dapat diisolasi untuk kepentingan pengerjaan
berkutnya dengan menggunakan metoda yang sudah dijelaskan di atas. DNA ini
selanjutnya dapat di karakterisasi, misalnya disekuensing untuk menentukan urutan
nukleotidanya atau dapat juga di potong dengan enzim restriksiyang sesuai kemudian di
kloning ke vektor ekspresi sesuai dengan jenis sel inang yang dipakai.
2.4.4 Sekuensing DNA
Sekuensing DNA merupakan suatu metode yang digunakan untuk mengetahui

urutan nukleotida atau basa dalam suatu fragmen DNA. DNA menyimpan informasi genetik
dalam bentuk urutan nukleotida. Dengan mengetahui urutan nukleotida suatu gen, maka
dapat ditentukan urutan asam amino protein yang dikodenya. Sebaliknya, urutan asam
amino protein tidak dapat memberikan informasi lengkap tentang urutan nukleotida gen
yang mengkodenya. Karena alasan tersebut, selain karena mahalnya sekuensing protein,
maka sekuensing DNA jauh lebih banyak digunakan.
Metode sekuensing DNA yang paling banyak digunakan adalah metode dideoksi
Sanger. Reaksi sekuensing dimulai dengan reaksi PCR untuk memperbanyak fragmen
DNA dan diikuti dengan elektroforesis gel poliakrilamida untuk memisahkan basa-basa
DNA. Seperti proses PCR, reaksi sekuensing juga meniru proses pembentukan leading
strand pada replikasi DNA di alam.
Ada tiga tahapan penting yang harus dilakukan pada sekuensing atau pembacaan
urutan nukleotida pada molekul DNA, yaitu:
1. Pembentukan fragmen-fragmen DNA untai tunggal dengan berbagai ukuran melalui
proses PCR .
2. Pemisahan fragmen-fragmen DNA dengan gel elektroforesis poliakrilamida
3. Pembacaan hasil elektroforesis.
Tahap pertama reaksi sekuensing serupa dengan teknik PCR yang memerlukan
siklus suhu berulang. Sekuensing dilakukan dengan menggunakan enzim DNA polimerase
untuk memperpanjang primer sepanjang templat DNA untai tunggal dengan adanya empat
deoksinukleotida trifosfat (dNTP: dATP, dTTP, dGTP, dCTP). Berbeda dengan PCR, DNA
yang akan disekuensing dapat berupa untai tunggal maupun untai ganda dan primer yang
diperlukan hanya satu.
Komponen kunci dalam reaksi sekuensing adalah analog dNTP yaitu
dideoksinukleotida trifosfat (ddNTP) yang tidak memiliki gugus 3’-OH. Reaksi sekuensing
diterminasi secara acak dengan masuknya ddNTP. Dengan menggunakan sejumlah kecil
ddNTP (dibandingkan dengan dNTP), maka setelah 20-30 siklus suhu akan diperoleh
47
fragmen-fragmen DNA yang panjangnya berbeda-beda dengan selisih satu nukleotida yang
semuanya memiliki ddNTP pada ujung 3’-nya.
Pada tahap kedua, fragmen-fragmen DNA ini dipisahkan dengan elektroforesis gel
poliakrilamid. DNA bermuatan negataif, jadi akan bergerak dari kutub negatif ke kutub
positif. Gel harus memiliki kemampuan yang cukup tinggi untuk memisahkan fragmen-
fragmen yang ukurannya hanya berbeda satu nukleotida. Fragmen DNA yang lebih kecil
akan bergerak lebih cepat daripada fragmen yang lebih besar. Fragmen yang pertama
mencapai ujung bawah gel merupakan fragmen terkecil.
Pembacaan hasil elektroforesis dapat dilakukan bila ada label pada fragmen-fragmen DNA
yang terbentuk. Label dapat berbentuk isotop radioaktif atau fluoresen. Pelabelan dapat
dilakukan terhadap primer maupun pada ddNTP yang digunakan.
1) Pelabelan dengan Radioisotop

Pada awal perkembangan teknik DNA sekuensing, pelabelan fragmen DNA
32
dilakukan dengan menggunakan radioisotop, seperti P. Komponen reaksi yang dilabel
adalah primer atau ddNTP. Dengan menggunakan pelabelan radioisotop, reaksi
pembentukan fragmen DNA harus dilakukan dalam empat tabung terpisah, masing-
masing mengandung ddNTP yang berbeda. Keempat hasil reaksi sekuensing tersebut
selanjutnya harus di-run di empat lajur yang berbeda pada elektroforesis gel poliakrilamid.
2) Pelabelan dengan Pewarnaan Fluoresen
Pelabelan fluoresen dilakukan dalam satu tabung, sehingga memungkinkan
pemisahan fragmen-fragmen hasil reaksi sekuensing dilakukan hanya pada satu lajur gel
poliakrilamid karena fragmen dengan nukleotida terakhir yang berbeda akan memberikan
warna yang berbeda. Terdapat dua cara pelabelan, yaitu menggunakan dye primer dan dye
terminator.
a. Dye primer
Jika pewarnaan fluoresensi dilakukan pada primer, reaksi pembentukan fragmen
DNA harus dilakukan dalam empat tabung terpisah, masing-masing mengandung
ddNTP yang berbeda dan primer yang dilabel dengan empat warna yang berbeda.
Keempat hasil reaksi sekuensing tersebut selanjutnya di-run di satu lajur pada
elektroforesis gel poliakrilamid.
b. Dye terminator
Pelabelan fluoresensi yang dilakukan pada ddNTP (dye terminator labeling)
memberikan kemudahan karena reaksi sekuensing dapat dilakukan hanya dalam
satu tabung, dan tentu saja di-run di satu lajur pada elektroforesis gel
poliakrilamid.
48
Mesin sekuensing otomatis dilengkapi dengan laser penginduksi fluoresensi yang
bergerak bolak-balik horisontal sepanjang gel poliakrilamid. Jika ada DNA pada
lokasi tersebut maka laser akan mengeksitasi dye yang terikat pada primer atau
ddNTP. Sebuah kamera atau tabung fotomultiplier akan menangkap sinar yang
diemisikan. Keempat jenis dye mengemisi sinar dengan warna (panjang
gelombang) yang berbeda-beda.
2.4.5 Teknik Hibridisasi
Teknik ini berdasarkan kemampuan urutan asam nukleat yang kompelmen untuk
berikatan satu sama lain. Dengan hibridisasi fragmen DNA tertentu dapat diidentifikasi dan
dipisahkan dari fragmen lain. Untuk melakukan hibridisasi, maka terlebih dahulu kita harus
mengetahui urutan gen yang dicari.
Teknik hibridisasi dapat digunakan untuk mengidentifikasi klon yang mengandung

DNA sisipan. Pertama, kita harus membuat replika menggunakan master plate (plate/petri
yang mengandung koloni bakteri pada permukaanya). Replika ini dibuat menggunakan filter
nitroselulosa. Sel bakteri yang menempel pada replika di lisis dengan menambahkan
detergen, dan DNAnya dibebas ke filter. DNA untai ganda akan didenaturasi oleh nantrium
hidroksida, DNA untai tunggal yang dihasilkan akan tetap menempel pada filter pada posisi
yang sama dengan koloni asalnya. Sehingga pola koloni pada master plate akan sama
dengan pola DNA yang menempel pada filter.
Selanjutnya ditambahkan probe radioaktif. Probe adalah oligonukleotida untai

tunggal yang komplemen dengan urutan DNA yang kita cari. Probe di label sehingga dapat
divisualisasi. Bila probe ditambahkan, maka akan berikatan dengan urutan yang
komplemen, membentuk hibrida untai ganda. Setelah itu filter dicuci, sehingga probe yang
tidak berikatan akan terbuang, dan divisualisasikan dengan sinar X. DNA yang berikatan
dengan probe akan kelihatan seperti spot hitam. Spot ini dibandingkan posisinya dengan
koloni pada master plate, sehingga koloni yang mengandung fragmen DNA yang diklon
dapat diketahui posisinya.
Hibridisasi merupakan teknik yang sangat bermanfaat. Teknik ini sangat sensitif:
sejumlah kecil probe yang berikatan ke membran dapat dideteksi, dan selektif: karena
berdasarkan komplementari urutan DNA sehingga urutan spesifik dapat diidentifikasi.
Hibridisasi dapat dilakukan terhadap DNA dan RNA, dari koloni atau dari gel. Bila kita tidak
memiliki informasi tentang urutan DNA untuk merancang probe, maka kita bisa juga
memperkirakan dari urutan asam amino dari protein. Dengan adanya kode genetik, maka
kita dapat menerjemahkan urutan nukleotida dari urutan asam amino. Masalahnya adalah
49
terdapat degenerasi pada kode genetik, terdapat beberapa asam amino yang memiliki lebih
dari satu kodon. Untuk mengatasi masalah ini maka kita dapat merancang berbagai urutan
probe yang mungkin, dan mensintesisnya dengan DNA syntetizer.
Aplikasi utama dari hibridisasi adalah penelitian tentang regulasi gen. Regulasi
ekspresi gen sangat vital pada sel-sel tertentu. Peneltian yang intensif telah dilakukan
untuk menentukan bagaimana gen-gen tertentu diregulasi untuk menyediakan tipe sel
tertentu, atau untuk memungkinkan sel merespon perubahan lingkungan. Karena regulasi
berhubungan dengan tingkat transkripsi, maka penelitian tentang produksi mRNA dari gen
tertentu sangatlah penting.
Sebagai contoh, mari kita lihat satu tipe sel dengan dua kondisi lingkungan yang
berbeda. Sel-sel pada kulit kita terpapar terhadap semua kondisi lingkungan: dingin, panas,
angin, air, cahaya, dan gelap. Dalam merespon kondisi ini, sel mensintesis protein yang
dapat membantu memproteksi sel terhadap lingkungan. Sebagai contoh, kebanyakan sel
merespon sinar UV dosis tinggi dengan mensintesis sejumlah enzim yang terlibat pada
perbaikan mutasi DNA. Sinar UV merupakan mutagen yang potensial. Tanpa enzim untuk
repair (perbaikan), mutasi akan terakumulasi dan mungkin dapat menyebabkan kanker.
Namun, pada kondisi normal enzim repair tidak akan diproduksi, sehingga gennya inaktif.
Jadi ekspresi dari gen ini di induksi oleh sinar UV.
Induksi ekspresi gen dapat di deteksi dengan metoda hibridisasi. Pertama, bila perlu
gen tersebut dikloning, Pelacak atau probenya dirancang, selanjutnya hibridisasi. Sel-sel
kulit dapat diambil dan dikulturkan dilaboratorium. Setelah waktu pemaparan yang berbeda-
beda, mRNA diisolasi dari sel, dipisahkan dengan gel elektroforesis, dan kemudian
ditransfer ke membran nitroselulosa dan dihibridisasi dengan probe. Ketebalan atau
densitas pita yang terlihat setelah autoradiografi menggambarkan jumlah mRNA tertentu
dalam sel.
2.4.6 Analisis RFLP
Teknik lain yang berdasarkan elektroforesis dan hibridisasi adalah analisis

Restriction fragment length polymorphism (RFLP). Sebagian besar DNA eukariot tidak
mengkode protein. Dalam daerah noncoding lebih banyak terdapat mutasi dibandingkan di
dalam gen, karena mutasi ini tidak berpengaruh terhadap sel, jaringan, organ dan
organisme. Karena mutasi pada daerah noncoding tidak menghasilkan perubahan fenotip,
sehingga tidak menunjukkan perbedaan diantara individu.
Jika dua individu X dan Y, masing-masing mengandung gen A dan B yang

dipisahkan oleh daerah noncoding pada kromosom. Dalam gen A dan B pada kedua
50
individu tersebut terdapat sisi restriksi enzim HindIII. Sisi ini sama pada kedua individu
tersebut, karena tidak ada mutasi pada gen A dan B. Namun terdapat juga sisi restriksi di
antara gen A dan B. Pada sisi restriksi ini, kedua individu tersebut berbeda, individu X
memiliki dua sisi pemotongan, dan individu Y hanya memiliki satu sisi pemotongan. Mutasi
pada individu Y telah merubah satu basa pada salah satu sisi pengenalan enzim HindIII,
sehingga tidak bisa memotong pada sisi tersebut. Keberadaan mutasi ini dapat dideteksi
dengan mengisolasi DNA dari kedua individu tersebut, kemudian dilakukan pemotongan
dengan enzim HindIII. Fragmen DNA dipisahkan dengan gel elektroforesis, kemudian
ditransfer ke membran nitroselulosa dan dilakukan hibridisasi dengan menggunakan probe
spesifik seperti yang sudah dijelaskan diatas.
RFLP sama seperti mutasi lain, merupakan marker genetik yang diturunkan dari
satu generasi ke generasi berikutnya. Namun tidak terdapat fenotip yang berhubungan
dengannya, hanya menghasilkan variasi panjang fragmen restriksi. Banyaknya penemuan
mutasi gen yang berhubungan dengan penyakit manusia, kemampuan untuk mengkloning
gen ini dan mempelajarinya, menjadi bermanfaat. Lebih banyak informasi yang diketahui
tentang gen ini, semakin mudah mengkloningnya. Marker genetik berguna untuk
memetakan gen. Peta gen lebih mudah dibuat menggunakan RFLP sebagai marker.
2.5 Ringkasan
Bioteknologi molekuler adalah penggunaan teknik laboratorium untuk mempelajari

dan memodifikasi asam nukleat dan protein untuk aplikasi di berbagai bidang seperti
kesehatan manusia dan hewan, pertanian, dan lingkungan. Bioteknologi molekuler
ditujukan memanipulasi suatu organisme pada taraf selular dan molekular (rekayasa
genetika dan biologi molekular). Bioteknologi molekul hasil dari konvergensi dari banyak
bidang penelitian, seperti biologi molekuler, mikrobiologi, biokimia, imunologi, genetika, dan
biologi sel. Biologi molekuler meupakan ilmu yang mempelajari fungsi dan organisasi jasad
hidup (organisme) ditinjau dari struktur dan regulasi molekuler unsur atau komponen
penyusunnya. Aspek biologi yang dikaji adalah bahan genetik dan sisntesis ptrotein.
Bioteknologi tidak terlepas dari mikroorganisme sebagai subyek (pelaku) dalam hal ini
adalah mikroorganisme berupa virus, bakteri, cendawan, alga, protozoa yang dikaji dalam
ilmu mikrobiologi. Ilmu pendukung bioteknologi lain adalaha genatika yang didefenisikan
sebagai ilmu yang mempelajari berbagai aspek yang menyangkut pewarisan sifat dan
variasi sifat pada organisme maupun sub-organisme (seperti virus dan prion) atau ilmu
tentang gen. Bagian ilmu yang menjadi penyokong bioteknologi adalah biologi sel,
biokimia,dan ilmu teknik. Hal yang dipelajari dalam biologi sel mencakup sifat-sifat fisiologis
51
sel seperti struktur dan organel yang terdapat di dalam sel, lingkungan dan interaksi sel,
daur hidup sel, pembelahan sel dan fungsi sel (fisiologi), hingga kematian sel. Biokimia
merupakan ilmu yang mempelajari struktur dan fungsi komponen selular, seperti protein,
karbohidrat, lipid, asam nukleat, dan biomolekul lainnya dan lebih terfokus secara khusus
pada kimia reaksi termediasi enzim dan sifat-sifat protein. Multidisiplin ilmu ini dapat
diterapkan dalam teknik DNA rekombinan atau rekayasa genetika. Dimana Teknologi DNA
rekombinan (recombinant DNA technology) adalah suatu metode untuk merekayasa
genetik dengan cara menyisipkan (insert) gen yang dikehendaki ke dalam suatu organisme.
Teknologi transgenik bertujuan untuk mengubah sifat alami suatu individu menjadi sifat
yang dikehendaki oleh manusia dan memanfaatkan proses replikasi, transkripsi dan
translasi untuk memanipulasi, mengisolasi dan mengekspresikan suatu gen dalam
organisme yang berbeda. Teknologi DNA rekombinan ini memberikan banyak manfaat
dibeberapa sektor, seperti pada bidang kesehatan, pangan, lingkungan, energi, dan lain-
lain.
Contoh Soal:
1. Jelaskan secara singkat tapi jelas apa yang dimaksud dengan:
a. Bioteknologi b. Bioinformatika c. Biotransformasi d. Kloning gen
e. Enzim restriksi f. Antimikroba g. Fermentasi h. RT- PCR
2. Sebutkan dan jelaskan era perkembangan bidang bioteknologi dari awal
perkembangannya hingga dewasa ini.
3. Sebutkan kelebihan dan kekurangan masing-masing dari kultur sel bakteri, kultur
sel khamir, dan kultur sel mamalia dalam kaitannya dengan proses produksi protein
rekombinant serta contoh protein yang berhasil diproduksi dengan teknik rekayasa
genetika.
4. Sebutkan dan jelaskan era perkembangan bidang bioteknologi dari awal
perkembangannya hingga dewasa ini (bioteknologi konvensional hingga
bioteknologi modern).
5. Apa perbedaan antara green biotechnology dengan blue biotechnology.
52
DAFTAR PUSTAKA
Glick B.R., and Pasternak, J.J. (1994). Molecular Biotechnology : Principles and
Application of Recombinant DNA.
Gaffar, S. 2007. Buku Ajar Bioteknologi Molekul. Jurusan Kimia Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Padjadjaran. Bandung.
Nurcahyo, H. 2011. Diktat Bioteknologi. Jurusan Pendidikan Biologi Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Negeri Yogyakarta. Yogyakarta.
Sajidan. 2009. Tentang Bioteknologi. http://sajidan.staff.fkip.uns.ac.id/2011/02/18/
tentang-bioteknologi/.
Siregar, AZ., 2008. Biologi Pertanian. Departemen Pendidikan Nasional. Jakarta.
Smith, JE. 2009. Biotechnology. CAMBRIDGE UNIVERSITY PRESS.
Subowo, Peranan Biologi molekuler dalam Perkembangan Ilmu Kedokteran dan
Disiplin Lain yang Terkait. Universitas Padjajaran Bandung.
Yuwono, T. 2005. Biologi Molekuler. Penerbit Erlangga. Jakarta.
53
Senarai IstilahdanArtinya
Istilah Arti
Bioteknologi Penerapan asas-asas sains dan rekayasa untuk
pengolahan suatu bahan dengan melibatkan aktivitas jasad
hidup untuk menghasilkan barang dan/atau jasa.
Plasmid atau Vektor Molekul DNA sirkular kecil yang dapat masuk ke dalam
bakteri dan bereplikasi sendiri, terpisah dari genom inang.
Transduksi Transfer DNA dimediasi oleh virus bakteri (bakteriofag atau
fag) dan sel yang telah menerima pentransduksi DNA
disebut sebagai transduktan.
Reaksi degradatif Reaksi biokimia perombakan senyawa kimia untuk
dirubah menjadi senyawa lain, baik untuk produksi energi
selular maupun sebagai prekursor dalam biosintesis
komponen-komponen sel.
Teknologi DNA rekombinan Metode untuk merekayasa genetik dengan cara
menyisipkan (insert) gen yang dikehendaki ke dalam suatu
organisme.
Polymerase Chain Reaction Teknik perbanyakan (amplifikasi) potongan DNA secara in
vitro pada daerah spesifik yang dibatasi oleh dua buah
primer oligonukleotida.
Enzim Restriksi enzim yang dapat memotong DNA pada urutan yang
spesifik.
Transformasi Proses memasukkan DNA ke dalam sel.
Klon Sekumpulan sel-sel yang mengandung plasmid

rekombinan yang sama.
Sekuensing DNA Metode yang digunakan untuk mengetahui urutan atau

susunan nukleotida atau basa dalam suatu fragmen DNA.
Origin of replication (Ori) Urutan DNA spesifik pada DNA plasmid yang dapat
bereplikasi sendiri di dalam sel inang/host.
54
BAB 3
BIOTEKNOLOGI PADA PROSES FERMENTASI
3.1 Pendahuluan
model fermentasi dan mampu membedakan fermentasi sistim tertutup, kontinyu, dan fed-
batch, (2) menjelaskan parameter lingkungan fisik dan kimiawi fermentor, (3)
menggambarkan struktur dan menyebutkan jenis/macam fermentor, (4) menjelaskan
kondisi-kondisi aseptis yang dibutuhkan fermentor, (5) menjelaskan proses fermentasi
yoghurt, (6) menjelaskan proses fermentasi nata de coco, dan (7) menjelaskan proses
fermentasi kecap.Seperti yang telah diuraikan pada bagian sebelumnya, bioteknologi
adalah suatu cara manusia untuk menghasilkan suatu produk atau jasa menggunakan
makhluk hidup secara utuh atau bagiannya. Meskipun bioteknologi tampak seperti ilmu
yang sangat pesat kemajuannya, beberapa contoh penerapannya telah lama dilakukan
oleh manusia pada era peradaban Yunani dan Mesir kuno. Pemanfaatan mikroorganisme
untuk merubah bahan baku menjadi suatu produk atau jasa merupakan salah satu contoh
penerapan bioteknologi. Mikroorganisme atau mikroba adalah makhluk hidup satu sel yang
tidak dapat dilihat secara kasat mata, dapat berupa bakteri, jamur, atau alga bersel satu.
Peranan bioteknologi, di antaranya dalam bidang pangan, kesehatan, pertanian,
peternakan, lingkungan, dan pertambangan (Firman, 2008).
Bioteknologi secara sederhana sudah dikenal oleh manusia sejak ribuan tahun yang
lalu. Sebagai contoh, di bidang teknologi pangan adalah pembuatan bir, roti, maupun keju
yang sudah dikenal sejak abad ke-19, pemuliaan tanaman untuk menghasilkan varietas-
varietas baru di bidang pertanian, serta pemuliaan dan reproduksi hewan. Di bidang medis,
penerapan bioteknologi di masa lalu dibuktikan antara lain dengan penemuan vaksin,
antibiotik, dan insulin walaupun masih dalam jumlah yang terbatas akibat proses
fermentasi yang tidak sempurna. Perubahan signifikan terjadi setelah penemuan
bioreaktor oleh Louis Pasteur. Dengan alat ini, produksi antibiotik maupun vaksin dapat
dilakukan secara massal pada waktu yang relatif singkat (Anonim a, 2010).
Pada masa kini, bioteknologi berkembang sangat pesat, terutama di negara negara
maju. Kemajuan ini ditandai dengan ditemukannya berbagai macam teknologi seperti
rekayasa genetika, kultur jaringan, rekombinan DNA, pengembangbiakan sel induk,
kloning, dan lain-lain. Teknologi ini memungkinkan kita untuk memperoleh penyembuhan
penyakit-penyakit genetik maupun kronis yang belum dapat disembuhkan secara
55
konvensional, seperti penyakit kanker dan AIDS. Penelitian di bidang pengembangan sel
induk juga memungkinkan para penderita stroke ataupun penyakit lain yang mengakibatkan
kehilangan atau kerusakan pada jaringan tubuh dapat sembuh seperti sediakala.
Pembahasan tentang sel induk secara detail akan diberikan pada bagian berikutnya. Di
bidang pangan, dengan menggunakan teknologi rekayasa genetika, kultur jaringan dan
rekombinan DNA, dapat menghasilkan tanaman dengan sifat dan produk unggul karena
mengandung zat gizi yang lebih jika dibandingkan tanaman biasa (tanaman nontransgenik
atau wild type), serta juga lebih tahan terhadap hama maupun tekanan lingkungan.
Penerapan bioteknologi di masa kini juga dapat dijumpai pada pelestarian lingkungan hidup
dari polusi. Sebagai contoh, pada penguraian minyak bumi yang tertumpah ke laut oleh
bakteri pengurai hidrokarbon, dan penguraian zat-zat yang bersifat toksik (racun) di sungai
atau laut dengan menggunakan bakteri jenis baru (Anonim a, 2010).
Bioteknologi adalah penggunaan organisme atau sistem hidup untuk memecahkan

suatu masalah atau untuk menghasilkan produk atau jasa yang berguna. Jadi bioteknologi
bukanlah merupakan terobosan teknologi yang revolusioner, karena sebetulnya teknologi
ini sudah ada sejak adanya peradaban manusia (Sofa, 2008).
Pada umumnya bioteknologi menggunakan mikroorganisme karena dapat tumbuh

dengan cepat yang dapat dikontrol pertumbuhannya, mengandung protein yang cukup
tinggi, dapat menggunakan produk-produk sisa sebagai substratnya misalnya dari limbah
dapat menghasilkan produk yang tidak toksik dan reaksi biokimianya dapat dikontrol oleh
enzim organisme itu sendiri. Bioteknologi dengan menggunakan mikroorganisme dapat
menghasilkan produk makanan dan minuman, penghasil obat, pembasmi hama tanaman,
pengolah limbah, pemisah logam dari bijih logam, dan lain sebagainya (Ahmadi, 2010).
Fermentasi merupakan kegiatan mikroba pada bahan pangan sehingga dihasilkan

produk yang dikehendaki. Mikroba yang umumnya terlibat dalam fermentasi adalah bakteri,
khamir dan kapang. Contoh bakteri yang digunakan dalam fermentasi adalah Acetobacter
xylinum pada pembuatan nata decoco, Acetobacter aceti pada pembuatan asam asetat.
Contoh khamir dalam fermentasi adalah Saccharomyces cerevisiae dalam pembuatan
alkohol sedang contoh kapang adalah Rhizopus sp. pada pembuatan tempe, Monascus
purpureus pada pembuatan angkak dan sebagainya. Fermentasi dapat dilakukan
menggunakan kultur murni ataupun alami serta dengan kultur tunggal ataupun kultur
campuran. Fermentasi menggunakan kultur alami umumnya dilakukan pada proses
fermentasi tradisional yang memanfaatkan mikroorganisme yang ada di lingkungan. Salah
satu contoh produk pangan yang dihasilkan dengan fermentasi alami adalah gatot dan
growol yang dibuat dari singkong. Tape merupakan produk fermentasi tradisional yang
56
diinokulasi dengan kultur campuran dengan jumlah dan jenis yang tidak diketahui sehingga
hasilnya sering tidak stabil. Ragi tape yang bagus harus dikembangkan dari kultur murni.
Kultur murni adalah mikroorganisme yang akan digunakan dalam fermentasi dengan sifat-
dan karaktersitik yang diketahui dengan pasti sehingga produk yang dihasilkan memiliki
stabilitas kualitas yang jelas. Dalam proses fermentasi kultur murni dapat digunakan secara
tunggal ataupun secara campuran. Contoh penggunaan kultur murni tunggal adalah
Lactobacillus casei pada fermentasi susu sedang contoh campuran kultur murni adalah
pada fermentasi kecap, yang menggunakan Aspergillus oryzaepada saat fermentasi
kapang dan saat fermentasi garam digunakan bakteri Pediococcus sp dan khamir
Saccharomyces rouxii (Nurhidayat, 2007).
Proses fermentasi dari suatu organisme dapat mengubah suatu makanan dan
minuman. Proses fermentasi merupakan perubahan enzimatik secara anaerob dari suatu
senyawa organik dan menjadi produk organik yang lebih sederhana. Senyawa organik
dapat dijadikan sebagai sumber makanan bagi mikroorganisme karena mereka dapat
tumbuh menjadi dua kali lipat (doubling time) dan juga massa mikroba minimal
mengandung 40% protein dan memiliki kandungan vitamin dan mineral yang tinggi
(Ahmadi, 2010).
Peranan mikroorganisme dalam berbagai kehidupan manusia, di antaranya dalam

bidang kesehatan, pangan dan pertanian. Kemajuan dalam teknologi fermentasi dan
rekayasa genetika sangat membantu dan mendukung bioteknologi, sehingga pemanfaatan
mikroba sekarang ini jauh lebih maju dibanding yang telah lalu yang masih memakai cara-
cara tradisional dan skala kecil. Produksi makanan seperti keju, roti, susu asam, kecap,
minuman bir, anggur, asam cuka, asam sitrat, dan produksi biomassa seperti insektisida,
Protein sel tunggal (PST) dan vaksin sudah diproduksi dalam skala industri secara besar-
besaran sehingga manfaatnya telah dirasakan dan sedikit banyak meringankan beban
manusia. Mikroba sangat ideal digunakan dalam memproduksi senyawa-senyawa yang
sangat berguna bagi kehidupan manusia (Sofa, 2008).
Fermentasi dapat terjadi karena adanya aktivitas mikroba penyebab fermentasi

pada substrat organik yang sesuai. Terjadinya fermentasi ini dapat menyebabkan
perubahan sifat bahan, sebagai akibat dari pemecahan kandungan makromolekul,
khususnya karbohidrat dari bahan tersebut. Bakteri laktat (lactobacillus) merupakan
kelompok mikroba dengan habitat dan lingkungan hidup sangat luas, baik di perairan (air
tawar ataupun laut), tanah, lumpur, maupun batuan. Bakteri ini juga menempel pada jasad
hidup lain seperti tanaman, hewan, serta manusia (Sumantri, 2004). Yoghurt merupakan
salah satu produk hasil fermentasi susu yang paling tua dan cukup populer di seluruh
57
dunia. Yoghurt bentuk dan tampilannya mirip bubur atau es krim tetapi dengan rasa agak
asam. Selain dibuat dari susu segar, yoghurt juga dapat dibuat dari susu skim (susu tanpa
lemak) yang dilarutkan dalam air dengan perbandingan tertentu bergantung pada
kekentalan produk yang diinginkan. Selain dari susu hewani, belakangan ini yoghurt juga
dapat dibuat dari campuran susu skim dengan susu nabati (susu kacang-kacangan)
(Sumantri, 2004). Teknik pembuatan yoghurt menggunakan bahan baku susu sapi segar
dengan menggunakan starter yang berbeda, yaitu Yakult™ dengan bahan susu sapi segar.
Fermentasi ialah proses baik secara aerob maupun anaerob yang menghasilkan berbagai
produk yang melibatkan aktivitas mikroba atau ekstraknya dengan aktivitas mikroba
terkontrol (Ganesha, 2007).
Mikroba dalam industri fermentasi merupakan faktor utama, sehingga harus

memenuhi syarat-syarat tertentu yaitu (Nurhidayat, 2007):
1. Murni, dalam proses-proses tertentu harus menggunakan biakan murni (dari satu
strain tertentu) yang telah diketahui sifat-sifatnya. Untuk menjaga agar biakan tetap
murni dalam proses maka kondisi lingkungan harus dijaga tetap steril. Penggunaan
kultur tunggal mempunyai resiko yang tinggi karena kondisi harus optimum. Untuk
mengurangi kegagalan dapat digunakan biakan campuran. Keuntungan penggunaan
biakan campuran adalah mengurangi resiko apabila mikrobia yang lain tidak aktif
melakukan fermentasi. Dalam bidang pangan penggunaan biakan campuran dapat
menghasilkan aroma yang spesifik.
Pengembangan inokulum yang terdiri campuran biakan murni belum berkembang di
Indonesia. Sebagai contoh, inokulum tempe yang dibuat LIPI masih merupakan
inokulum kultur tunggal sehingga produsen tempe sering mencampur inokulum murni
dengan inokulum tradisional dengan maksud memperoleh hasil yang baik.
Inokulum tape (ragi tape) juga belum berkembang. Di Malaysia, telah dikembangkan
campuran kultur murni untuk membuat tape rendah alkohol. Ini merupakan upaya
untuk memenuhi tuntutan masyarakat yang sebagian besar muslim. Isolatnya sendiri
diperoleh dari ragi yang telah ada di pasaran.
Penggunaan inokulum campuran harus memperhatikan kebutuhan nutrisi
mikroorganismenya. Kultur campuran yang baik adalah model suksesi sehingga antar
organisme tidak bersaing namun saling mendukung untuk pembentukan produk.
2. Unggul,pada kondisi fermentasi yang diberikan, mikrobia harus mampu menghasilkan
perubahan-perubahan yang dikehendaki secara cepat dan hasil yang besar. Sifat
unggul yang ada harus dapat dipertahankan. Hal ini berkaitan dengan kondisi proses
yang diharapkan. Proses rekayasa genetik dapat dilakukan untuk memperbaiki sifat
58
jasad dengan maksud mempertinggi produk yang diharapkan dan mengurangi produk-
produk ikutan.
3. Stabil,pada kondisi yang diberikan, mikroba harus mempunyai sifat-sifat yang tetap,
tidak mengalami perubahan karena mutasi atau pengaruh lingkungan.
4. Bukan Patogen,mikroba yang digunakan adalah bukan patogen bagi manusia
maupun hewan, kecuali untuk produksi bahan kimia tertentu. Jika digunakan mikroba
patogen harus dijaga, agar tidak menimbulkan akibat samping pada lingkungan.
Reaksi dalam fermentasi berbeda-beda tergantung pada jenis gula yang digunakan
dan produk yang dihasilkan. Secara singkat, glukosa (C6H12O6) yang merupakan gula
paling sederhana , melalui fermentasi akan menghasilkan etanol (2 C2H5OH). Reaksi
fermentasi ini dilakukan oleh ragi, dan digunakan pada produksi makanan. Persamaan
reaksi kimia (Anonim c, 2010):
C6H12O6 → 2 C2H5OH + 2CO2 + 2 ATP (Energi 118 kJ per mol)………………. (1)
Pembuatan tempedan tape (baik tape ketan maupun tape singkong) adalah proses
fermentasi yang sangat dikenal sejak lama di Indonesia. Proses fermentasi menghasilkan
senyawa-senyawa yang sangat berguna, mulai dari makanan sampai obat-obatan. Proses
fermentasi pada makanan yang sering dilakukan adalah proses pembuatan yoghurt, nata,
dan kecap.
3.2 Fermentasi Yoghurt
Kata diambil dari bahasa Turki yoğurt diambil dari kata sifat „yoğun‟, yang berarti
“padat” dan “tebal”, atau dari kata kerja yoğurmak, yang berarti “memijat” dan kemungkinan
berarti “membuat padat” aslinya bagaimana yoghurt dibuat (Anonim d, 2010).
Yoghurt sebenarnya sudah lama dikenal sebagai minuman tradisional masyarakat

daerah Balkan dan Timur Tengah. Namun manfaat yoghurt bagi kesehatan baru mulai
populer ketika tahun 1908 seorang peneliti bernama E. Metchnikoff membuat hipotesis
yang mengatakan bahwa ada hubungan erat antara umur panjang masyarakat
pegunungan di Bulgaria dengan kebiasaan mereka mengonsumsi susu fermentasi. Kendati
data empiris yang ada masih terbatas, hipotesis tersebut dianggap menarik untuk dikaji dan
diungkap lebih lanjut. Metchnikoff sendiri akhirnya mendapat penghargaan Nobel dan sejak
saat itu produk susu fermentasi terus dikembangkan dan diteliti. Di beberapa negara
59
yoghurt dikenal dengan nama berbeda-beda. Semisal Jugurt (Turki), Zabady (Mesir,
Sudan), Dahee (India), Cieddu (Italia), dan Filmjolk (Skandinavia) (Nikita, 2006).
Yoghurt atau yogurt adalah sebuah produk susu yang dihasilkan oleh bakteri
fermentasi susu. Fermentasi dari laktosa menghasilkan asam laktat yang bekerja pada
protein susu sehingga membuat yoghurt lebih padat serta memiliki tekstur dan aroma yang
khas. Umumnya yoghurt dibuat menggunakan susu sapi, namun ada beberapa yoghurt
juga menggunakan susu kedelai (Anonim e, 2010).
Gambar 3.1. Yoghurt yang dipasarkan untuk kebutuhan sehari-hari
Bakteri yang digunakan dalam pembuatan yoghurt ada 2, yaitu Streptococcus

thermopilus dan Lactobacillus bulgaricus. Cita rasa khas yoghurt ditentukan dari
terbentuknya asam laktat, asetaldehid, asam asetat dan asetil. Keberadaan kedua bakteri
tersebut sangat penting. Bakteri Streptococcus thermopilus membantu menciptakan kondisi
lingkungan yang lebih baik bagi bakteri Lactobacillusbulgaricus untuk menghasilkan
enzimnya. Sementara itu bakteri Lactobacillus bulgaricus menghasilkan asetaldehid
sehingga cita rasa yang khas pada yoghurt dapat tercapai (Wahyu, 2009).
A. Jenis yoghurt
Berdasarkan daerah asalnya, yoghurt dibedakan atas beberapa jenis, yaitu (Anonim
d, 2010):
1. Yoghurt Dahi, yoghurt Dahi dari subkontinen India dikenal dengan rasanya yang unik.
Istilah Inggris untuk yoghurt spesifik di Bangladesh, India, dan Pakistan adalah curd.
2. Dadiah atau dadih adalah yoghurt tradisional dari Sumatera Barat yang dibuat dari
susu kerbau. Dadiah difermentasi dalam tabung bambu.
3. Labneh atau LabanehYoghurt Labneh dari Lebanon adalah yoghurt yang telah
dipadatkan yang digunakan untuk sandwich. Minyak olive, potongan mentimun, olive,
dan berbagai macam herba hijau terkadang ditambahkan. Labneh dapat ditebalkan
lagi dan digulung membentuk bola, lalu diawetkan dalam minyak olive, dan
60
difermentasi untuk beberapa minggu. Terkadang digunakan beserta bawang bombay,
daging, dan kacang untuk Lebanese pie atau Kebbeh balls.
4. Bulgarian Yoghurt Bulgaria, umumnya dikonsumsi apa adanya, populer karena rasa,
aroma dan kualitasnya. Kualitas muncul dari Lactobacillus bulgaricus dan
Streptococcus thermophilus strain yang digunakan di Bulgaria dan Macedonia.
Produsen yoghurt Bulgaria mengambil langkah untuk melindungi trademark yoghurt
Bulgaria di Eropa dan untuk membedakannya dengan produk lain yang tidak
mengandung bakteri hidup. Yoghurt Bulgaria dan Macedonia seringkali disaring
dengan cara menggantungnya pada pakaian untuk beberapa jam untuk mengurangi
kadar air. Hasil yoghurtnya lebih creamy, kaya dan lembut pada rasanya karena
peningkatan lemak. Dengan cara menggantungnya semalaman menghasilkan
yoghurt yang terkonsentrasi mirip dengan keju krim. Yoghurt juga digunakan untuk
menyiapkan salad susu Bulgaria. Sup dingin populer yang dibuat di Bulgaria (Yoghurt
Bulgaria), umumnya dikonsumsi apa adanya, populer karena rasa, aroma dan
kualitasnya. Kualitas muncul dari strain Lactobacillus bulgaricus dan Streptococcus
thermophilus yang digunakan dalam produksi yoghurt pada musim panas di Bulgaria,
Macedonia, dan Turki.
5. Lassi, adalah semacam minuman berbasis yoghurt yang asal mulanya dari
subkontinen India (seperti India, Pakistan, dan Bangladesh), biasanya dibuat asin
atau manis. Lassi asin biasanya diberi rasa cumin yang dibakar dalam tanah dan cile
pepper; sedangkan rasa manis dengan rosewater, lemon, mangga atau jus buah
lainnya. Minuman berbasis yoghurt lainnya, minuman asin yang disebut ayran,
populer di Azerbaijan, Turki, Bulgaria, Macedonia, Kazakhstan dan Kyrgystan. Dibuat
dengan cara mencampur yoghurt dengan air dan menambah garam. Minuman sama
yang dikenal tan di Armenia dan "Laban Ayran" di Syria. Minuman yang mirip, Doogh,
populer di Timur Tengah antara Lebanon dan Iran; berbeda dari ayran karena
menambah herbal, biasanya mint, dan dikarbonisasi, biasanya dengan air seltzer. Di
AS, minuman berbasis yoghurt seringkali dijual dalam nama seperi "yoghurt
smoothie" atau "drinkable yoghurt".
a. Minuman yoghurt yang populer di Kanada, Inggris, dan Irlandia, disebut Yop
yang dijual di supermarket dan toko-toko tertentu.
b. Kefir,adalah minuman susu fermentasi berasal di Kaukasus. Beberapa
peternakan Amerika menawarkan minuman yang disebut "kefir" untuk beberapa
tahun dengan rasa buah tapi tanpa karbonisasi atau alkohol. Hingga 2002,
bernama seperti "drinkable yoghurt" dan "yoghurt smoothie" telah
diperkenalkan.
61
Berdasarkan teksturnya, yoghurt dibagi lagi menjadi beberapa jenis, yaitu (Anonim
f, 2010) :
1. Set Yoghurt, merupakan yoghurt dengan tekstur sangat kental. Umumnya merupakan
plain yoghurt yaitu yoghurt tanpa penambahan gula, rasa, atau aroma. Warnanya
putih dan terasa sangat asam.
2. Stir Yoghurt, teksturnya lebih encer dibandingkan set yoghurt tetapi masih terasa
kental mirip dengan ice cream. Stir yoghurt sudah mengalami penambahan pemanis,
perasa atau buah-buahan pelengkap. Untuk menikmati stir yoghurt, kita
membutuhkan sendok.
3. Drink yoghurt, yoghurt bentuk ini dapat langsung diminum. Bentuknya cair sama
seperti susu cair.
B. Teknik Pembuatan Yoghurt
Bagi orang yang menggemari yoghurt atau ingin merasakan khasiat yoghurt, kita
dapat pula membuatnya sendiri di rumah. Bahan dasar yang diperlukan adalah susu cair,
susu bubuk, gula pasir dan yoghurt tawar yang berfungsi sebagai bibit (Anonim f, 2010).
Proses pembuatan yoghurt secara sederhana adalah sebagai berikut: Masukkan

susu cair dalam panci, dicampur dengan susu bubuk dan gula pasir. Panaskan diatas
kompor dengan api kecil sampai mencapai suhu 75 – 80 oC. Diamkan selama 15 menit
kemudian angkat dan biarkan sampai mencapai suhu 35 oC. Bila ingin menghasilkan
yoghurt rendah lemak, maka gunakan susu rendah lemak dalam pembuatannya (Anonim f,
2010).
Kemudian masukkan yoghurt tawar (yoghurt tanpa penambah rasa, tanpa gula,
tanpa penambah aroma) atau atau bibit yoghurt yang dijual di pasaran dan aduk rata.
Pastikan bahwa yoghurt telah mencapai suhu 35 oC sebelum memasukkannya agar bakteri
pada bibit atau starter ini tidak mati. Tutup rapat panci agar susu mengalami proses
fermentasi. Biarkan selama 24 jam (Anonim f, 2010).
Setelah terbentuk yoghurt, Anda dapat menambahkan buah-buahan atau

tambahkan sirup atau gula bila yoghurt terasa kurang manis (Anonim f, 2010).
C. Penyimpanan Yoghurt
Setelah yoghurt terbentuk, cara terbaik penyimpanannya adalah dengan

menaruhnya dalam lemari es. Simpan dalam suhu 4-7 oC. Sebaiknya yoghurt diletakkan
dalam wadah yang tertutup rapat (Anonim f, 2010).
62
D. Manfaat Yoghurt
Berikut ini beberapa manfaat dari yoghurt untuk kesehatan manusia, antara lain:
1. Menyehatkan pencernaan, berdasarkan hasil penelitian, yoghurt dapat mengatasi
berbagai masalah pencernaan seperti diare, radang usus, kanker usus atau
intoleransi laktosa.
2. Mengurangi risiko terjadinya infeksi pada vagina, wanita yang mengkonsumsi
yoghurt dapat mengurangi tingkat keasaman (pH) sehingga dapat mengurangi
perkembangan infeksi jamur.
3. Menurunkan risiko darah tinggi, dengan mengkonsumsi yoghurt 2-3 porsi sehari,
dapat mengurangi risiko tekanan darah tinggi.
4. Mencegah osteoporosis, karena berbahan dasar susu, maka dalam yoghurt
mengandung kalsium dan vitamin D. Kedua senyawa ini dapat membantu seseorang
terhindar dari osteoporosis.
5. Membantu kita lebih kenyang, kandungan kalori yang terdapat dalam yoghurt
menjadikan yoghurt makanan yang dapat membantu seseorang merasa lebih
kenyang.
3.3 Fermentasi Nata De Coco
Nata De Coco merupakan jenis komponen minuman yang terdiri dari senyawa
selulosa (dietry fiber), yang dihasilkan dari air kelapa melalui proses fermentasi, yang
melibatkan jasad renik (mikroba), yang selanjutnya dikenal sebagai bibit nata. Pada
prinsipnya untuk menghasilkan nata de coco yang bermutu baik, maka perlu disediakan
media yang dapat mendukung aktivitas Acetobacter xylinum untuk memproduksi selulosa
ekstraseluler atau yang kemudian di sebut nata de coco.
Berbagai penelitian ilmiah mencoba menggantikan air buah kelapa dengan bahan
lain seperti whey tahu, sari buah nenas, sari buah pisang dll. Kegiatan ilmiah ini
menghasilkan produk yang akrab disebut nata de soya, nata de pina dll. Sebagian peneliti
mencoba menggantikan air buah kelapa dengan bahan baku yang lain dan tidak berasal
dari kelapa.
Ternyata selain air buah kelapa, skim santan juga dapat dipergunakan sebagai
bahan baku utama pembuatan nata de coco. Aktivitas dari bakteri Acetobacter xylinum
dalam memproduksi nata de coco. Proses terbentuknya nata adalah sebagai berikut: sel-
sel Acetobacter xylinum mengambil glukosa dari larutan gula, kemudian digabungkan
dengan asam lemak membentuk prekursor pada membran sel, kemudian keluar bersama-
63
sama enzim yang mempolimerisasikan glukosa menjadi selulosa diluar sel. Prekursor dari
polisakarida tersebut adalah GDP glukosa.
Pembentukan prekursor ini distimulir oleh adanya katalisator seperti Ca2+dan Mg2+.
Prekursor ini kemudian mengalami polimerisasi dan berikatan dengan aseptor membentuk
selulosa. Bibit nata sebenarnya merupakan golongan bakteri dengan nama Acetobacter
xylinum. Dalam kehidupan jasad renik, bakteri dapat digolongkan ke dalam tiga kelompok
yaitu bakteri yang membahayakan, bakteri yang merugikan dan bakteri yang
menguntungkan. Adapun yang termasuk dalam kelompok bakteri yang membahayakan
antara lain adalah bakteri yang menghasilkan racun atau menyebabkan infeksi, sedangkan
ternasuk dalam kelompok bakteri yang merugikan adalah bakteri pembusuk makanan.
Sementara yang termasuk dalam kelompok bakteri yang menguntungkan adalah jenis
bakteri yang dapat dimanfaatkan oleh manusia hingga menghasilkan produk yang berguna.
Acetobacter xylinum merupakan salah satu contoh bakteri yang menguntungkan bagi
manusia seperti halnya bakteri asam laktat pembentuk yoghurt, asinan dan lainnya.
Bakteri Acetobacter xylinum dapat membentuk nata jika ditumbuhkan dalam air
kelapa yang sudah diperkaya dengan unsur hara Karbon (C) dan Nitrogen (N), melalui
proses yang terkontrol. Dalam kondisi demikian, bakteri tersebut akan menghasilkan enzim
akstraseluler yang dapat menyusun zat gula menjadi ribuan rantai serat atau selulosa. Dari
jutaan renik yang tumbuh pada air kelapa tersbeut, akan dihasilkan jutaan lembar benang-
benang selulosa yang akhirnya nampak padat berwarna putih hingga transparan, yang
disebut sebagai nata.
Nata yang dihasilkan tentunya bisa beragam kualitasnya. Kualitas yang baik akan
terpenuhi apabila air kelapa yang digunakan memenuhi standar kualitas bahan nata, dan
prosesnya dikendalikan dengan cara yang benar berdasarkan pada faktor-faktor yang
mempengaruhi pertumbuhan dan aktivitas Acetobacter xylinum yang digunakan. Apabila
rasio antara karbon dan nitrogen diatur secara optimal, dan prosesnya terkontrol dengan
baik, maka semua cairan akan berubah menjadi nata tanpa meninggalkan residu
sedikitpun.
Air kelapa yang digunakan dalam pembuatan nata harus berasal dari kelapa yang
masak optimal, tidak terlalu tua atau terlalu muda. Bahan tambahan yang diperlukan oleh
bakteri antara lain karbohidrat sederhana, sumber nitrogen, dan asam asetat. Pada
umumnya senyawa karbohidrat sederhana dapat digunakan sebagai suplemen pembuatan
nata de coco, diantaranya adalah senyawa-senyawa maltosa, sukrosa, laktosa, fruktosa
dan manosa. Dari beberapa senyawa karbohidrat sederhana itu sukrosa merupakan
64
senyawa yang paling ekonomis digunakan dan paling baik bagi pertumbuhan dan
perkembangan bibit nata. Adapun dari segi warna yang paling baik digunakan adalah
sukrosa putih. Sukrosa coklat akan mempengaruhi kenampakan nata sehingga kurang
menarik. Sumber nitrogen yang dapat digunakan untuk mendukung pertumbuhan aktivitas
bakteri nata dapat berasal dari nitrogen organik, seperti misalnya protein dan ekstrak yeast,
maupun Nitrogen an organik seperti misalnya ammonium fosfat, urea, dan ammonium slfat.
Namun, sumber nitrogen anorganik sangat murah dan fungsinya tidak kalah jika
dibandingkan dengan sumber nitrogen organik. Bahkan diantara sumber nitrogen
anorganik ada yang mempunyai sifat lebih yaitu amonium sulfat. Kelebihan yang dimaksud
adalah murah, mudah larut, dan selektif bagi mikroorganisme lain.
Asam asetat atau asam cuka digunakan untuk menurunkan pH atau meningkatkan
keasaman air kelapa. Asam asetat yang baik adalah asam asetat glasial (99,8%). Asam
asetat dengan konsentrasi rendah dapat digunakan, namun untuk mencapai tingkat
keasaman yang diinginkan yaitu pH 4,5 – 5,5 dibutuhkan dalam jumlah banyak. Selain
asam asetat, asam-asam organik dan anorganik lain bisa digunakan.
Seperti halnya pembuatan beberapa makanan atau minuman hasil fermentasi,

pembuatan nata juga memerlukan bibit. Bibit tape biasa disebut ragi, bibit tempe disebut
usar, dan bibit nata de coco disebut starter. Bibit nata de coco merupakan suspensi sel A.
xylinum. Untuk dapat membuat bibit nata de coco seseorang perlu mengetahui sifat-sifat
dari bakteri ini.
Acetobacter xylinum merupakan bakteri berbentuk batang pendek, yang

mempunyai permukaan dinding yang berlendir. Bakteri ini bisa membentuk rantai pendek
dengan satuan 6-8 sel. Bakteri ini bersifat nonmotil dan dengan pewarnaan Gram
menunjukkan Gram negatif. Bakteri ini juga tidak membentuk endospora maupun pigmen.
Pada kultur sel yang masih muda, individu sel berada sendiri-sendiri dan transparan. Koloni
yang sudah tua membentuk lapisan menyerupai gelatin yang kokoh menutupi sel
koloninya. Pertumbuhan koloni pada medium cair setelah 48 jam inokulasi akan
membentuk lapisan pelikel dan dapat dengan mudah diambil dengan jarum ose.
Bakteri ini dapat membentuk asam dari glukosa, etil alkohol, dan propil alkohol,
tidak membentuk indol dan mempunyai kemampuan mengoksidasi asam asetat menjadi
CO2 dan H2O. sifat yang paling menonjol dari bakteri itu adalah memiliki kemampuan untuk
mempolimerisasi glukosa sehingga menjadi selulosa. Selanjutnya selulosa tersebut
membentuk matriks yang dikenal sebagai nata. Faktor lain yang dominan mempengaruhi
65
sifat fisiologi dalam pembentukan nata adalah ketersediaan nutrisi, derajat keasaman,
temperatur, dan ketersediaan oksigen.
Bakteri Acetobacter xylinum mengalami pertumbuhan sel. Pertumbuhan sel

didefinisikan sebagai pertumbuhan secara teratur semua komponen di dalam sel hidup.
Bakteri Acetobacter xylinum mengalami beberapa fase pertumbuhan sel yaitu fase
adaptasi, fase pertumbuhan awal, fase pertumbuhan eksponensial, fase pertumbuhan
lambat, fase pertumbuhan tetap, fase menuju kematian, dan fase kematian.
Apabila bakteri dipindah ke media baru maka bakteri tidak langsung tumbuh
melainkan beradaptasi terlebih dahulu. Pada fase ini terjadi aktivitas metabolisme dan
pembesaran sel, meskipun belum mengalami pertumbuhan. Fase pertumbuhan adaptasi
dicapai pada 0-24 jam sejak inokulasi. Fase pertumbuhan awal dimulai dengan
pembelahan sel dengan kecepatan rendah. Fase ini berlangsung beberapa jam saja. Fase
eksponensial dicapai antara 1-5 hari. Pada fase ini bakteri mengeluarkan enzim
ektraseluler polimerase sebanyak-banyaknya untuk menyusun polimer glukosa menjadi
selulosa (matriks nata). Fase ini sangat menentukan kecepatan suatu strain Acetobacter
xylinum dalam membentuk nata. Fase pertumbuhan lambat terjadi karena nutrisi telah
berkurang, terdapat metabolik yang bersifat racun yang menghambat pertumbuhan bakteri
dan umur sel sudah tua. Pada fase ini pertumbuhan tidak stabil, tetapi jumlah sel yang
tumbuh masih lebih banyak dibanding jumlah sel mati.
Fase pertumbuhan tetap terjadi keseimbangan antara sel yang tumbuh dan yang
mati. Matriks nata lebih banyak diproduksi pada fase ini. Fase menuju kematian terjadi
akibat nutrisi dalam media sudah hamper habis. Setelah nutrisi habis, maka bakteri akan
mengalami fase kematian. Pada fase kematian sel dengan cepat mengalami kematian.
Bakteri hasil dari fase ini tidak baik untuk strain nata. Faktor-faktor yang mempengaruhi
Acetobacter xylinum mengalami pertumbuhan adalah nutrisi, sumber karbon, sumber
nitrogen, serta tingkat keasaman media temperatur, dan udara (oksigen). Senyawa karbon
yang dibutuhkan dalam fermentasi nata berasal dari monosakarida dan disakarida. Sumber
dari karbon ini yang paling banyak digunakan adalah gula. Sumber nitrogen bisa berasal
dari bahan organik seperti ZA, urea. Meskipun bakteri Acetobacter xylinum dapat tumbuh
pada pH 3,5 – 7,5, namun akan tumbuh optimal bila pH nya 4,3, sedangkan suhu ideal bagi
pertumbuhan bakteri Acetobacter xylinumyaitu pada suhu 28 – 31°C. Bakteri ini sangat
memerlukan oksigen (aerob),sehingga dalam fermentasi tidak perlu ditutup rapat namun
hanya ditutup dengan aluminium foil atau kapas steril untuk mencegah kotoran masuk
kedalam media yang dapat mengakibatkan kontaminasi pada kultur fermentasi.
66
Air kelapa dalam jumlah besar hasil samping industri pembuatan kopra dan
desiccated coconut yang dibuang begitu saja ke lingkungan akan terbentuk asam yang
akan menurunkan pH tanah ataupun air, yang akhirnya menggangu pertumbuhan tanaman
sekitar dan menimbulkan bau. Dalam air kelapa cukup banyak mengandung zat–zat gizi
yang dapat dimanfaatkan oleh makhluk hidup. Komposisi air kelapa antara lain karbohidrat
(sukrosa, glukosa, fruktosa dan sorbitol) mineral (K, Na, Mg, P, Cl, Fe dan Cu), protein
(asam–asam amino essencial) dan vitamin B dan C. Air kelapa dapat dimanfaatkan untuk
pembuatan “nata de coco “, yaitu jenis makanan berbentuk seperti gelatin yang dihasilkan
oleh bakteri Acetobacter xylinum.
Nata de coco dihidangkan setelah dimasak dalam sirup kental, sering disajikan
bersama campuran es buah. Komposisi nata de coco sebagian besar terdiri dari
polisakarida, kemungkinan dekstrosa atau selulosa, tetapi struktur sebenarnya belum
diketahui. Keberhasilan dalam pembuatan nata de coco dipengaruhi oleh viabilitas
(kemampuan hidup) bakteri, kandungan nutrisi media air kelapa dan lingkungannya.
Viabilitas bakteri yang baik akan menghasilkan nata yang baik dan cepat. Kandungan
nutrisi yang cukup terutama gula sebagai sumber karbon untuk bahan baku pembentukan
nata sangat diperlukan. Demikian pula ketersediaan sumber nitrogen dan mineral,
walaupun tidak digunakan langsung pembentuk nata, sangat diperlukan untuk
pertumbuhan bakteri Acetobacter xylinum. Pemberian Amonium sulfat (NH4)2SO4 atau ZA
(Zink amonium sulfat) sebagai sumber nitrogen (N) akan membantu pertumbuhan bakteri
dan merangsang terbentuknya struktur nata yang tebal kompak. Penambahan KH2PO4
(Kalium dihidropospat) berfungsi sebagai buffer pada medium, sehingga pH akan konstan
yaitu sekitar 3-4. Penstabilan pH optimum sangatlah penting bagi pertumbuhan bakteri
Acetobacter xylinum agar diperoleh nata yang baik. Acetobacter xylinum dapat tumbuh
dengan baik pada kondisi aerob, yaitu perlu adanya oksigen bebas dari udara dan dalam
suasana asam (pH 3 – 4). Untuk membuat suasana aerob biasanya wadah untuk
fermentasi memiliki permukaan yang luas dan penutupan dengan penutup yang masih bisa
ditembus oleh udara, misalnya dengan kertas yang berpori–pori. Penutup dapat digunakan
kertas koran, karena harganya relatif lebih murah dan mudah dalam penggunaannya.
Sedangkan untuk membuat suasana asam yang sesuai bagi pertumbuhan bakteri perlu
ditambahkan asam–asam organik, misalnya asam asetat. Suhu optimum yang dikehendaki
sekitar 28-32ºC, sedangkan pada suhu rendah aktivitas pertumbuhannya lambat. Suhu
inokulasi tidak boleh terlalu tinggi atau lebih 40 ºC, karena bisa menginaktifkan bakteri.
Reaksi yang terjadi pada proses fermentasi Nata de coco ini yakni reaksi
polimerisasi dimana glukosa diubah menjadi selulosa. Selulosa disini berfungsi sebagai
67
serat, olehnya itu, nata de coco menjadi makanan yang sehat dan tidak menggemukkan,
cukup gizi dan seimbang. Sedangkan untuk kandungan Nitrogen dan juga karbon yang
cukup pada kelapa dapat dimaksimalkan dengan menambahkan senyawa ZA seperti yang
telah dijelaskan sebelumnya.
A. Bahan baku pada pembuatan Nata de coco
Nata dapat dibuat dari limbah air kelapa, limbah kulit nenas dari industri
pengalengan, tetes tebu (molases), filtrat kecambah kacang hijau, santan air kelapa, limbah
cair pembuatan tahu (whey), air pencucian beras dan lain-lain. Nata yang dibuat dari air
kelapa dikenal dengan nama nata de coco, nata dari nenas disebut nata de pina , nata dari
tetes tebu disebut nata de molases, sedangkan nata yang dibuat dari limbah air tahu di
sebut nata de soya. Ketersediaan dan kemudahaan mendapatkan bahan baku secara
kontinyu, murah, tidak memerlukan perlakuan lain, dan nata yang dihasilkan memenuhi
standar pasar adalah kriteria yang harus diperhatikan untuk menentukan bahan baku mana
yang cocok digunakan memproduksi nata. Salah satu bahan baku yang banyak digunakan
oleh industri pengolahan nata adalah limbah air kelapa. Limbah ini relatif mudah didapat
dan umumnya terbuang dari hasil pengolahan kopra, kelapa parut kering (desiccated
coconut), industri kecil pengolahan simping, dodol dan jasa pemarutan kelapa di pasar.
Bogor, Cianjur dan Sukabumi adalah sentra industri nata de coco di Jawa Barat. Air kelapa
bukan lagi limbah yang mudah didapat dan murah. Tengkulak air kelapa dapat mematok
harga dua ratus sampai tiga ratus rupiah setiap liternya. Air kelapa adalah primadona yang
diperebutkan. Dengan demikian bisnis ini tidak lagi menjanjikan keuntungan yang besar
karena bahan utamanya adalah limbah yang mahal. Kemampuan untuk terus
mengembangkan bahan baku selain air kelapa adalah langkah yang baik, agar usaha nata
dapat langgeng dan tidak tergantung dari satu macam bahan baku. Selain air kelapa,
bahan peramu yang digunakan untuk membuat nata adalah gula, ZA (Zink amonium sulfat)
dan asam asetat glasial. Gula yang digunakan adalah gula pasir, ZA dan asam asetat
(CH3COOH) atau asam cuka. Penggunaan asam asetat pekat dimaksudkan untuk
menurunkan pH sampai 3- 4 tanpa banyak menambah volume. Menggunakan asam asetat
pekat harus hati-hati, karena dapat mengeluarkan bau yang menyengat, bahaya kalau
tertelan, menetes dikulit dan terpercik di mata. Formula untuk pengembangan bibit dan
pembuatan nata lempeng berkembang sejalan dengan kemajuan hasil penelitian dan
pengalaman.
B. Bahan pendukung pada pembuatan Nata de coco
68
Bahan pembantu yang digunakan dalam pembuatan nata terdiri dari koran, karet
gelang, karet ban dan sabun colek. Koran yang dibutuhkan adalah koran bekas yang
bersih, tidak bolong, rapuh, tidak tercemar kotoran seperti minyak, pestisida, tepung dan
lain-lain. Koran berfungsi untuk menutup botol dan penutup loyang selama fermentasi.
Untuk menutup botol bibit digunakan potongan koran 7 x 7 cm, sedangkan untuk menutup
loyang selama fermentasi dibutuhkan koran agak lebar, kira-kira satu lembar koran dibagi
dua. Koran tersebut dapat digunakan berulang-ulang, asalkan tidak sobek dan berlubang.
Selama pemanenan nata, koran dipisahkan tersendiri dan diusahakan tidak basah karena
sisa cairan nata yang tumpah, dan sobek sewaktu membuka karet. Koran selanjutnya
dijemur sampai kering. Koran yang kusut dirapikan, dan digulung untuk digunakan kembali.
Perlu diingat koran juga sebagai sumber kontaminasi. Untuk itu lakukan sortasi koran yang
tercemar jamur. Koran sebelum dipakai dipanaskan dulu diatas kompor atau disetrika
(sekaligus merapikan) sebelum koran digunakan untuk menutup loyang dan botol bibit.
Karet gelang berbeda dengan karet ban. Biasanya karet gelang sering digunakan untuk
mengikat bungkusan dan banyak digunakan untuk mainan anak. Karet ban lebih panjang
dan sering dipakai untuk karet ketapel. Karet ban dapat dibuat sendiri dengan memotong
karet ban dalam sepeda dengan lebar 1 cm dan panjang disesuaikan ukuran loyang yang
akan digunakan. Karet gelang digunakan untuk mengikat koran di botol bibit dan loyang
fermentasi.Setiap loyang diikat dengan dua karet gelang, yang berfungsi untuk menahan
agar permukaan koran penutup tidak kendor dan menghindari menempelnya cairan di
Gambar 3.2. Diagram alir proses penyiapan dan pengembangan bibit nata
69
Gambar 3.3. Diagram alir proses penyiapan dan pembuatan nata lempeng
koran selama fermentasi. Karet ban harus dipotong sesuai ukuran panjang dan lebar
loyang. Karet ini digunakan setelah loyang yang telah diberi cairan media ditutup dengan
koran, kemudian sekeliling bibir loyang diikat dengan karet tersebut. Secara singkat proses
penyiapan bibit nata dan penyiapan dan pembuatan nata lempeng dapat dilihat pada
Gambar 3.2 dan 3.3.
3.4 Fermentasi Kecap
Secara umum, kecap dapat dibuat atau diproduksi dalam usaha skala kecil atau
menengah bahkan rumah tangga. Namun demikian masing masing industri kecap memiliki
"bumbu rahasia" atau resep khusus sehingga rasa kecap yang dihasilkannya memiliki nilai
lebih ("lebih enak") dibandingkan dengan yang lain.
Kecap merupakan jenis makanan cair hasil fermentasi kedelai. Meskipun bahan
baku pembuatan kecap adalah kedelai hitam, tetapi tidak menutup kemungkinan kecap
dibuat dari kedelai kuning. Kecap dapat dibuat melalui 3 cara, yaitu fermentasi, hidrolisis
asam, dan kombinasi fermentasi dan hidrolisis asam. Kecap yang dibuat secara fermentasi
biasanya mempunyai cita rasa dan aroma yang lebih disukai konsumen. Pada prinsipnya
70
pembuatan kecap secara fermentasi berkaitan dengan penguraian protein, lemak, dan
karbohidrat menjadi asam amino, asam lemak, dan monosakarida (Koswara, 1997).
Telah lama diketahui bahwa kedelai mengandung senyawa isoflavon. Isoflavon

dalam kedelai terdapat dalam 4 bentuk, yaitu malonil-glikosida, asetil-glikosida, glikosida,
dan aglukon (Kudou dkk, 1991; Lee dan Chou, 2006). Perendaman kedelai dapat
mengubah semua isoflavon malonil-glikosida dan asetil-glikosida menjadi isoflavon
glikosida. Selanjutnya, isoflavon glikosida dapat berubah menjadi isoflavon aglukon selama
perendaman kedelai. Perendaman pada suhu 60°C selama 6 jam mampu menghasilkan
isoflavon aglukon paling optimal (Ha dkk, 1992). Perubahan isoflavon glikosida menjadi
isoflavon aglukon diakibatkan oleh aktivitas enzim glukosidase yang dijumpai di sekitar biji
kedelai (Ha dkk, 1992; Coward dkk, 1993). Rhizopus mampu mentransformasi isoflavon
glikosida menjadi isoflavon aglikon selama fermentasitempe (Purwoko dkk, 2001). Isoflavon
aglukon diketahui memiliki aktivitas antioksidatif. Mekanisme antioksidasi isoflavon aglukon
adalah memangsa radikal bebas oleh adanya gugus fenolat. Radikal bebas di dalam sel
dapat merusak membran sel dan membran inti, sehingga material genetik mudah diserang
oleh berbagai agen mutagenik (Jacob, 1994). Akibatnya sel dapat bermutasi menjadi sel
tumor dan bahkan dapat berubah menjadi kanker. Menurut Coward dkk (1993) tempe dan
miso mengandung isoflavon aglukon tertinggi dibandingkan derivat fermentasi kedelai
lainnya. Hal ini karena aktivitas kapang Rhizopus dan Aspergillus dalam mengubah
isoflavon glikosida menjadi aglukon lebih kuat daripada mikroba lainnya. Menurut Lee dan
Chou (2006) aktivitas transformasi isoflavon glikosida menjadi aglukon selama fermentasi
koji/tempe oleh Rhizopus sp. lebih kuat daripada Aspergillus awamori, A. oryzae dan A.
sojae.
Bahan kedelai mula-mula difermentasi oleh kapangAspergillus sp. dan Rhizopus sp.
menjadi semacam tempe kedelai. Kemudian "tempe" ini dikeringkan dan direndam di dalam
larutan garam. Garam merupakan senyawa yang selektif terhadap pertumbuhan mikroba.
Hanya mikroba tahan garam saja yang tumbuh pada rendaman kedelai tersebut. Mikroba
yang tumbuh pada rendaman kedelai pada umumnya dari jenis khamir dan bakteritahan
garam, seperti khamir Zygosaccharomyces dan bakteri susu Lactobacillus. Mikroba ini
merombak protein menjadi asam-asam amino dan komponen rasa dan aroma, serta
menghasilkan asam. Fermentasi dapat berlangsung dengan baik jika kadar garam cukup
tinggi, yaitu antara 15 sampai 20%.
Proses fermentasi kecap terdiri dari 2 tahap, yaitu fermentasi padat (fermentasi
koji/tempe) dan fermentasi cair (fermentasi moromi). Kapang yang digunakan dalam
fermentasi padat, adalah Aspergillus sp. dan Rhizopus sp. (Rahayu dkk., 1993).
71
Fermentasi padat memerlukan waktu selama 3-5 hari. Hasil fermentasi padat disebut
koji/tempe, jika menggunakan Aspergillus sp. dan disebut tempe, jika menggunakan
Rhizopus sp. Selanjutnya, koji/tempe dikeringkan, kemudian direndam dalam air garam 20-
30%. Proses perendaman koji/tempe dalam air garam disebut fermentasi moromi. Mikroba
yang berperan dalam fermentasi moromi, adalah mikroba tahan garam seperti Hansenula
sp., Zygosaccharomeces sp., dan Lactobacillus sp. (Rahayu, 1985). Fermentasi moromi
memerlukan waktu selama 14-28 hari. Cairan hasil fermentasi moromi disebut moromi.
Selanjutnya moromi ditambah dengan rempah rempah dan dikentalkan sehingga diperoleh
kecap. Ampas dari fermentasi moromi dapat digunakan sebagai pakan ternak. Kandungan
protein merupakan parameter kualitas kecap manis (Direktorat Gizi Depkes RI, 1996).
Menurut Standar Industri Indonesia (SII) kecap manis berkualitas baik (I) harus
mengandung protein minimal 6%. Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa kecap tanpa
bumbu tanpa fermentasi moromi mengandung protein lebih tinggi dibandingkan kecap
tanpa bumbu dengan fermentasi moromi (Septiani, 2004).
Mikroba yang diintroduksi secara langsung adalah pada saat fermentasi padat,
sedangkan fermentasi moromi merupakan fermentasi yang terjadi secara spontan (tanpa
introduksi). Karakteristik nilai nutrisi sangat ditentukan oleh jenis kapang pada saat
fermentasi padat (Septiani, 2004). Oleh karena itu, pemilihan kapang untuk fermentasi
padat sangat menentukan komposisi nutrisi kecap.
3.4.1 Pembuatan Kecap
Dua sampel bubuk tempe kering (500 g) yang masing-masing diinokulasi R. oryzae
dan R. oligosporus, direndam dalam 1 L air garam 20% dan dibiarkan selama 2 minggu
(dengan fermentasi moromi). Sedangkan, dua sampel lainnya direndam dalam 1 L air
hangat bersuhu 50°C selama 24 jam (tanpa fermentasi moromi). Semua sampel kemudian
disaring dan diambil filtratnya saja. Filtrat kecap ditambah bumbu-bumbu, yaitu 20 g jahe,
20 g lengkuas, 10 g kayu manis, 10 g bawang putih, 10 g kunyit, 10 g kemiri, dan 10 g
ketumbar (Warintek 2003). Kecap tanpa fermentasi moromi ditambah 150 g gula kelapa,
sedangkan kecap dengan fermentasi moromi ditambah 250 g gula kelapa. Filtrat kecap
berbumbu direbus sampai volume filtrat menjadi 500 mL (kental), kemudian dimasukkan
dalam botol dan disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121 °C selama 15 menit. Kecap
steril disimpan di suhu kamar sebelum dianalisis.
3.4.2 Analisis Protein
Analisis protein kecap manis terdiri dari 2 metode, yaitu metode Kjeldahl untuk
protein (N) total (Sudarmaji dkk., 1984) dan metode Lowry-Folin untuk protein terlarut
72
pendek (Alexander dan Griffiths, 1992). Secara rinci metode Kjeldahl adalah sebagai
berikut. Sampel kecap manis (5 g) dimasukkan dalam labu Kjeldahl dan ditambah 3 g
campuran CuSO4 dan K2SO4 (1:9; b/b) dan 20 mL H2SO4 pekat. Labu Kjedahl dipanaskan
sampai warna larutan menjadi putih, kemudian didinginkan. Larutan sampel ditambah 3
tetes indikator fenolftalen dan didestilasi. Destilat ditambah 50 mL larutan asam borat 2%
dan 5 tetes indikator Tashiro dan ditambah NaOH sampai larutan sampel menjadi alkalis.
Sampel dititrasi dengan HCl 0,1 N sampai larutan sampel menjadi merah muda. Metode
Lowry-Folin adalah sebagai berikut. Sampel kecap manis (5 g) ditambah 5 mL akuades,
kemudian disentrifugasi pada kecepatan 5.000 rpm selama 5 menit. Bagian cair
(supernatan) diambil dan ditambah akuades sampai mencapai volume 100 mL. Sampel
diambil 1 mL dan ditambah 1 mL reagen Lowry D (campuran reagen Lowry A, B, dan C;
20:1:1 v/v), kemudian dikocok dengan vortex dan dibiarkan pada suhu kamar selama 15
menit. Larutan sampel ditambah 3 mL reagen Lowry E, kemudian dikocok dan dibiarkan
pada suhu kamar selama 45 menit. Larutan sampel diambil 1 mL dan diukur nilai
penyerapan cahaya (OD) pada panjang gelombang 590 nm dengan UV-VIS
spektrofotometer. Nilai OD590 dikonversi ke kadar protein terlarut berdasarkan kurva
standar protein BSA (Bovine Serum Albumin).
3.4.3 Kandungan Protein
Kandungan protein yang diukur dalam produk kecap adalah protein terlarut dan
protein total. Protein terlarut merupakan oligopeptida dan mudah diserap oleh sistem
pencernaan. Protein total merupakan pengukuran kandungan nitrogen (N) dalam sampel.
Oleh karena itu, terdapat senyawa non-protein yang ikut terdeteksi dan terkalkulasi dengan
metode Kjeldahl. Namun interferensi ini relatif kecil dan dapat diabaikan. Metode Lowry-
Folin hanya dapat mengukur molekul peptida pendek dan tidak dapat mengukur molekul
peptida panjang (Alexander dan Griffiths, 1992). Prinsip kerja metode Lowry adalah reduksi
Cu2+ (reagen Lowry B) menjadi Cu+ oleh tirosin, triptofan, dan sistein yang terdapat dalam
protein. Ion Cu+ bersama dengan fosfotungstat dan fosfomolibdat (reagen Lowry E)
membentuk warna biru, sehingga dapat menyerap cahaya. Protein merupakan polimer
heterogen molekul-molekul asam amino. Protein yang terkandung dalam kedelai
merupakan protein globuler. Dalam protein globuler, rantairantai samping hidrofil dan polar
berada di bagian luar dan rantai samping hidrofob dan nonpolar berada di bagian dalam.
Kandungan protein total pada kecap manis hasil fermentasi R. oligosporus tanpa
fermentasi moromi (17,433%) lebih tinggi daripada kecap manis hasil fermentasi R. oryzae
(11,987%). Kandungan protein terlarut kecap manis hasil fermentasi R.oligosporus lebih
tinggi daripada kecap manis hasil fermentasi R. oryzae. Hasil ini sesuai dengan hasil yang
73
diperoleh Septiani (2004). Hal ini menunjukkan aktivitas proteolitik R. oligosporus lebih
rendah daripada R. oryzae. Hasil aktivitas proteolitik adalah protein terlarut dan asam
amino. Protein terlarut rantai pendek dan asam amino dikonsumsi oleh kapang Rhizopus.
Rendahnya kandungan protein terlarut pada R. oryzae merupakan indikasi kuat aktivitas
konsumsi protein oleh R. Oryzae untuk pertumbuhannya. Pada beberapa hasil penelitian
menunjukkan waktu sporulasi R. oryzae lebih cepat daripada R. oligosporus. Kemungkinan
besar protein dikonsumsi secara cepat untuk proses sporulasi.
Meskipun kandungan protein total kecap manis hasil fermentasi R. oligosporus

dengan fermentasi moromi lebih besar daripada kecap manis hasil fermentasi R. Oryzae
dengan fermentasi moromi, tetapi karena jumlah awal kandungan protein total kecap manis
hasil fermentasi R.oligosporus dengan fermentasi moromi juga lebih besar daripada kecap
manis hasil fermentasi R. oryzae dengan fermentasi moromi. Oleh karena itu aktivitas
proteolitik mikroba halotoleran selama fermentasi moromi pada kecap manis hasil
fermentasi R. oligosporus relatif seimbang pada kecap manis hasil fermentasi R. oryzae.
Terdapat aktivitas konsumsi protein terlarut (1,818%) signifikan selama fermentasi moromi
oleh mikroba halotoleran pada kecap manis hasil fermentasi R.Oligosporus.Sedangkan
aktivitas konsumsi protein terlarut (0,594%) tidak signifikan oleh mikroba halotoleran pada
kecap manis hasil fermentasi R. oryzae. SII tidak merujuk secara detail jenis protein yang
digunakan sebagai standar dalam menentukan kualitas kecap. Secara umum SII
menentukan bahwa kualitas kecap manis terdiri atas 3 yaitu kualitas baik (I), menengah (II),
dan rendah (III). Kecap manis berkualitas baik (I) memiliki kandungan protein minimal 6%,
sedangkan kecap manis berkualitas menengah (II) memiliki kandungan protein minimal 4%
dan kecap manis berkualitas rendah (III) memiliki kandungan protein minimal 2%. Oleh
karena itu dalam penelitian ini yang dipakai sebagai patokan dalam menentukan kualitas
kecap adalah kandungan protein terlarut.
Kandungan protein terlarut kecap manis hasil fermentasi R. oligosporus dengan dan
tanpa fermentasi moromi masing-masing adalah 6,389 dan 8,207%. Dengan demikian
kecap manis hasil fermentasi R. oligosporus dengan dan tanpa fermentasi moromi
memenuhi kualitas baik kecap manis di Indonesia. Sedangkan kandungan protein terlarut
kecap manis hasil fermentasi R. oryzae dengan dan tanpa fermentasi moromi masing-
masing adalah 3,461 dan 4,055%. Dengan demikian kecap manis hasil fermentasi R.
oryzae tanpa fermentasi moromi termasuk kecap berkualitas menengah (II). Pemilihan
kapang tempe/koji sangat menentukan kualitas kecap. Dari 2 jenis Rhizopus yang
digunakan dalam pembuatan kecap tanpa fermentasi moromi, menunjukkan bahwa R.
oligosporus baik untuk pembuatan kecap berkualitas baik (I). Kapang yang baik dipakai
74
untuk menghasilkan makanan terfermentasi berprotein tinggi, adalah kapang yang memiliki
aktivitas proteolitik rendah, tetapi mampu menghasilkan protein terlarut rantai pendek dan
asam amino esensial tinggi. Kedua parameter tersebut bersifat kontradiktif. Kecap dapat
memiliki nilai tambah jika mengandung substansi yang bermenfaat bagi kesehatan
manusia. Menurut Wang dkk (2007), kecap hitam mengandung antioksidan lain, yaitu 3-
hydroxy-2-methyl-4H-pyran-4-one (maltol). Cairan moromi kecap (dengan kadar garam
kurang dari 8%) mengandung amina non-volatil, yaitu tyramine, histamine, phenethylamine,
putrescine, cadaverine, spermidine, dan spermine (Ibe dkk, 2003). Lebih lanjut dilaporkan
juga bahwa tyramine dihasilkan oleh aktivitas enzim yang dihasilkan oleh bakteri kokus
gram positif.
3.4.4 Tingkat Kesukaan Konsumen pada produk kecap
Tingkat kesukaan konsumen diukur berdasarkan kesukaan konsumen terhadap

aroma dan cita rasa kecap manis tanpa fermentasi moromi dan membandingkannya
dengan kecap komersial. Berdasarkan pengamatan di lapangan terdapat satu produk
kecap manis, yaitu Lombok Gandaria yang disukai konsumen di daerah solo dan
sekitarnya. Produk kecap manis lainnya adalah kecap manis Bango yang diproduksi oleh
perusahaan multinasional dan beredar luas di seluruh Indonesia. Responden untuk
penentuan skor aroma berbeda dengan cita rasa. Lubang hidung responden untuk
penentuan skor cita rasa ditutup. Hal ini untuk menghilangkan pengaruh aroma terhadap
penentuan cita rasa, karena cita rasa suatu makanan sangat dipengaruhi oleh aroma. Skor
tingkat kesukaan konsumen terhadap aroma kecap manis hasil fermentasi R. oligosporus
dan R. oryzae tanpa fermentasi moromi masing-masing adalah 3,57 dan 3,77. Sedangkan
skor tingkat kesukaan konsumen terhadap aroma kecap manis komersial Lombok Gandaria
dan Bango masing-masing adalah 4,40 dan 4,60. Hal ini menunjukkan konsumen lebih
menyukai aroma yang dihasilkan oleh kecap manis komersial.
Kecap manis tanpa fermentasi moromi memiliki aroma langu khas kedelai. Aroma
tersebut tidak disukai oleh konsumen. Penambahan bumbu tidak mampu menghilangkan
aroma langu tersebut, tetapi hanya mengurangi aroma langu. Hasil analisis statistik
menunjukkan bahwa tingkat kesukaan konsumen terhadap aroma keempat kecap manis
beda signifikan (p<0.05). Kecap manis yang berbeda signifikan, yaitu kelompok kecap
manis tanpa fermentasi moromi dan kelompok kecap manis komersial. Dengan demikian
aroma kecap manis tanpa fermentasi moromi tidak disukai konsumen. Skor cita rasa kecap
manis tanpa fermentasi moromi hasil fermentasi R. oligosporus dan R. oryzae
masingmasing adalah 4,37 dan 4,33. Sedangkan skor cita rasa kecap manis komersial
Lombok Gandaria dan Bango adalah 4,10.
75
Hal ini menunjukkan bahwa konsumen sedikit lebih menyukai cita rasa kecap manis
tanpa fementasi moromi daripada kecap manis komersial. Penambahan bumbu-bumbu
selama proses fermentasi dapat meningkatkan cita rasa kecap manis. Rempah atau bumbu
dalam pembuatan kecap manis ada dua jenis, yaitu bumbu sederhana dan lengkap. Bumbu
sederhana hanya menambahkan gula, jahe, lengkuas, dan kayu manis, sedangkan bumbu
lengkap ialah bumbu sederhana ditambah bawang putih, kunyit, kemiri, dan ketumbar.
Kecap manis dengan bumbu lengkap lebih disukai konsumen daripada kecap manis
dengan bumbu sederhana. Penambahan gula kelapa dapat meningkatkan kadar
karbohidrat, khususnya kadar gula reduksi. Beberapa responden yang berhasil
diwawancarai menunjukkan bahwa cita rasa kecap manis yang disukai adalah yang bercita
rasa kedelai dan cukup manis. Menurut mereka kecap komersial lebih manis daripada
kecap manis tanpa fermentasi moromi, tetapi kurang bercita rasa kedelai.
Hasil analisis statistik menunjukkan bahwa tingkat kesukaan konsumen terhadap

cita rasa keempat kecap manis tidak berbeda signifikan. Dengan demikian tingkat
kesukaan konsumen (berdasarkan cita rasa) terhadap kecap manis tanpa fermentasi
moromi sama dengan terhadap kecap manis komersial. Kecap manis tanpa fermentasi
moromi memiliki keunggulan secara ekonomis, jika dibandingkan kecap manis dengan
fermentasi moromi. Keunggulan tersebut adalah proses pembuatan kecap lebih singkat
dan mampu mengurangi pemakaian gula sebagai pemanis. Selain itu, kandungan isoflavon
aglukon dalam koji/tempe dapat dipertahankan, sehingga memberi nilai tambah pada
kecap.
3.5 Ringkasan
Aplikasi bioteknologi dalam kehidupan sehari-hari sangatlah beragam, baik dalam

pertanian, kesehatan, pakan, dan lain sebagainya. Salah satu aplikasi bioteknologi modern
yaitu teknologi fermentasi, dimana fermentasi terbagi dalam beberapa macam, baik dari
hasil maupun proses atau bakteri yang digunakan. Fermentasi nata de coco, sangat mudah
untuk dikerjakan, tanpa mengacuhkan banyaknya manfaat yang didapatkan dari nata de
coco tersebut, khususnya pada banyaknya selulosa yang berfungsi sebagai pelengkap
serat yang dibutuhkan oleh tubuh.
Kecap adalah bumbu dapur atau penyedap makanan yang berupa cairan berwarna
hitam yang rasanya manis atau asin. Bahan dasar pembuatan kecap umumnya adalah
kedelai atau kedelai hitam. Namun adapula kecap yang dibuat dari bahan dasar air kelapa
yang umumnya berasa asin. Kecap manis biasanya kental dan terbuat dari kedelai,
76
sementara kecap asin lebih cair dan terbuat dari kedelai dengan komposisi garam yang
lebih banyak, atau bahkan ikan laut. Selain berbahan dasar kedelai atau kedelai hitam
bahkan air kelapa, kecap juga dapat dibuat dari ampas padat dari pembuatan tahu.
Kecap manis tanpa fermentasi moromi mampu menghasilkan kandungan protein

terlarut dan protein total lebih tinggi daripada kecap manis dengan fermentasi moromi.
Kecap manis hasil fermentasi R. oligosporus mengandung kadar protein terlarut dan
protein total lebih tinggi daripada kecap manis hasil fermentasi R. oryzae. Kandungan
protein terlarut kecap manis hasil fermentasi R. oligosporus tanpa fermentasi moromi
adalah 8,2%, sehingga memenuhi kualitas kecap manis baik (I) menurut SII. Sedangkan
kandungan protein terlarut kecap manis hasil fermentasi R. oryzae tanpa fermentasi
moromi adalah 4,1%, sehingga memenuhi kualitas kecap manis menengah (II) menurut SII.
Cita rasa kecap manis tanpa fermentasi moromi dapat diterima konsumen dan tingkat
kesukaan cita rasa kecap manis tanpa fermentasi moromi sama seperti kecap komersial.
Contoh Soal:
1. Sebutkan dan jelaskan tahap-tahap proses fermentasi secara umum serta sebutkan
jenis dan kegunaan dari produk fermentasi tersebut untuk kehidupan umat
manusia.
2. Sebutkan dan jelaskan jenis-jenis proses fermentasi berdasarkan perbedaan
substrat yang digunakan sebagai media fermentasi.
3. Sebutkan syarat-syarat yang harus dipenuhi oleh mikroorganisme sehingga dapat
digunakan sebagai starter dalam proses fermentasi.
4. Sebutkan tahapan dan reaksi biokimia yang terjadi pada proses fermentasi
kecapdan nata de coco.
5. Sebutkan dan jelaskan tahap-tahap pembuatan yoghurt dan manfaatnya untuk
kesehatan manusia.
6. Sebutkan dan jelaskan karakteristik beberapa jenis mikroorganisme yang dapat
digunakan untuk proses pembuatan kecap, yoghurt, dan nata de coco.
77
DAFTAR PUSTAKA
Ahmadi, S. A., 2010, Bioteknologi Dengan Menggunakan Mikroorganisme,
Alexander R.R. dan J.M. Griffiths, 1992, ed ke-2, Basic Biochemical Methods, Wiley-Liss,
New York.
Anonim, 2008, Indonesian Nata De Coco, (online) http://inacofood.files.wordpress.com,
diakses tanggal 29 April 2010.
Anonim, 2010, Bioteknologi Fermentasi, (online) http://wartawarga.gunadarma.ac.id,
Anonym a, 2010, Bioteknologi, Pusat Studi Bioteknologi UGM, http://www
biotech@ugm.ac.id., diakses pada Selasa, 20 April 2010, pukul 22.00 WITA.
Coward, L., N.C. Barnes, K.D.R. Setchell, dan S. Barnes, 1993, Genistein, daidzein and
other β-glycoside conjugates: antitumor isoflavones in soybean foods from
American and Asian diets. Journal of Agricultureand Food Chemistry, 41: 1961-
1967.
Direktorat Gizi Depkes RI, 1996, Daftar komposisi bahan makanan, Bharata,
Jakarta.Sudarmadji, S., B. Haryono dan Suhandi, 1984, ed ke-2, Analisis untuk
bahan makanan dan pertanian, Alumni, Bandung.
Firman, 2007, Bioteknologi, www.GrameenFoundation.org, diakses pada Rabu, 28 April
2010, pukul 17.37 WITA.
Ganesha, 2007, Yoghurt,
Ha, E.Y.W., C.V. Morr, dan A. Seo, 1992, Isoflavone aglucones and volatile organic
compounds in soybean; effect of soaking treatment, Jornal ofFood Science, 57:
414-417.
Ibe A., S. Tabata, Y. Sadamasu, A. Yasui, T. Shimoi, M. Endoh, dan K. Saito, 2003,
Production of tyramine in "moromi" mash during soy sauce fermentation [artikel asli
dalam bahasa Jepang], Shokuhin EiseigakuZasshi, 44: 220-226.
Jacob, R.A., 1994, Nutrition, health, and antioxidant, INFORM, 5: 1271-1273; 1275.
Koswara, S., 1997, Mengenal makanan tradisional: hasil olahan kedelai, Buletin Teknologi
dan Industri Pangan 8(2):75-76.
Kudou, S., Y. Fleury, D. Welti, D. Magnolato, T. Uchida, K. Kitamura, dan K. Okubo, 1991.
Malonyl isoflavone glycosides in soybean seeds (Glycinemax, Merill). Agriculture
and Biological Chemistry, 55: 2227-2233.
Lee I.H. dan C.C. Chou, 2006, Distribution profiles of isoflavone isomers in black bean kojis
prepared with various filamentous fungi, Journal ofAgriculture and Food Chemistry,
54:1309-1314.
Nalley, W. M., 2007, Tinjauan Filosofis Biotek
Nikita, 2006, Beda Yoghurt dan Minuman Lactobacillus
Nurhidayat, 2007, Fermentasi
Purwoko, T., S. Pawiroharsono, dan I. Gandjar, 2001. Biotransfermasi isoflavon oleh

Rhizopus sryzae UICC 524, Biosmart, 3(2): 7-12.
78
Rahayu, E.S., 1985, Hidrolisis protein kedelai oleh Aspergillus oryzae, A. soyae, dan
Rhizopus oligosporus, Tesis Fakultas Pascasarjana UGM, Yogyakarta.
Rahayu, E.S., R. Indrati, T. Utami, E. Harmayani, dan M.N. Cahyanto, 1993, Bahan pangan
hasil fermentasi. PAU Pangan & Gizi, Yogyakarta.
Saputra, Y., E., 2009, Daya Tarik Nata De Coco, (online) http://www.chem-is-try.org.com,
Septiani, Y., 2004, Studi kadar karbohidrat, lemak, dan protein pada kecap dari tempe,
Skripsi Fakultas MIPA UNS, Surakarta.
Sofa, P., 2008, Bioteknologi
Sudarmadji, S., B. Haryono, dan Suhandi, 1984, Analisis untuk Bahan Makanan dan
Pertanian, Penerbit Alumni, Bandung
Wahyu, M. K., 2009, Dua Bakteri Dalam Pembuatan Yoghurt
Wahyudi, 2003, Memproduksi Nata De Coco. Direktorat Pendidikan Menengah Kejuruan

Direktorat Jenderal Pendidikan Dasar dan Menengah Departemen Pendidikan
Nasional.
Wang H., A.M. Jenner, C.Y. Lee, G. Shui, S.Y. Tang, M. Whiteman, M.R. Wenk, dan B.
Halliwell, 2007, The identification of antioxidants in dark soy sauce, Free Radicals
Research, 41: 479-488.
Warintek, 2003, Kecap, http://warintek.progressio.or.id/ttg/pangan/kecap.htm, [19 Agustus
2006].
79
Istilah Arti
Mikroorganisme Makhluk hidup bersel satu yang tidak dapat dilihat secara kasat
mata, dapat berupa bakteri, jamur, atau alga bersel satu.
Kecap Bumbu dapur atau penyedap makanan dari hasil fermentasi
kedelai yang berupa cairan berwarna hitam yang rasanya
manis atau asin.
Fermentasi Perubahan enzimatik secara anaerob dengan bantuan mikroba
dari suatu senyawa organik kompleks menjadi produk organik
yang lebih sederhana.
Nata De Coco Komponen pangan yang terdiri dari senyawa selulosa (dietry
fiber), yang dihasilkan dari air kelapa melalui proses
fermentasiyang melibatkan jasad renik (mikroba)
Kultur murni Mikroorganisme yang akan digunakan dalam proses fermentasi
dengan sifatdan karaktersitik yang diketahui dengan pasti
sehingga produk yang dihasilkan memiliki stabilitas kualitas yang
jelas
80
BAB 4
BIOINSEKTISIDA MIKROBA DAN VIRUS
4.1 Pendahuluan
pengertian dan penggolongan bioinsektisida, (2) menjelaskan bioinsektisida dari mikroba,
dan (3) menjelaskan bioinsektisida dari virus.Seperti yang telah diketahui bersama,
serangan hama merupakan salah satu penyebab kerusakan yang dapat mengganggu
pertumbuhan tanaman atau pepohonan, bahkan dapat menimbulkan kerugian dalam
bentuk kematian, menurunkan produktivitas dan atau kualitas kayu sehingga secara
ekonomis pohon yang ditanam tidak akan memberikan hasil yang diharapkan. Penggunaan
insektisida kimia sering menimbulkan dampak negatif berupa resistensi, resurjensi,
terbunuhnya serangga atau organisme yang berguna, dan dapat membahayakan bagi
manusia dan ternak serta dapat menimbulkan pencemaran lingkungan.
Salah satu pemecahannya adalah usaha alternatif pengendalian yang lebih aman
dan efektivitasnya minimal sama dengan insektisida kimia. Bioinsektisida atau insektisida
hayati pada saat ini semakin banyak dimanfaatkan dalam pengendalian hama karena
memiliki beberapa kelebihan, antara lain tidak membunuh organisme non target karena
memiliki spesifikasi infeksi, tidak berbahaya bagi manusia, mamalia dan ikan serta tidak
meninggalkan residu terhadap lingkungan. Dukungan dari para peneliti terhadap
bioinsektisida ini juga sangat besar, terbukti dengan banyaknya hasil penelitian mengenai
pemanfaatan bioinsektisida sebagai agen pengendali hayati yang ramah lingkungan.
Adanya kekhawatiran akan pengaruh negatif tentang pemakaian agrochemical atau bahan
insektisida kimia telah meningkatkan perhatian masyarakat kepada bioinsektisida sebagai
teknologi alternatif untuk menurunkan populasi hama.
Dengan memperhatikan semua kekurangan dari penggunaan insektisida kimia,

insektisida alternatif untuk mengendalikan insekta yang berbahaya telah dicari selama lebih
dari 20 tahun. Insektisida yang dihasilkan secara alami oleh mikroorganisme atau tanaman
merupakan pilihan yang tepat. Bakteri Bacillus thuringiensis merupakan pilihan yang aman,
spesifik, efektif dan biodegradable. Kebaikan insektisida alami adalah sangat spesifik
terhadap spesies insekta target. Namun, kelemahannya adalah daya bunuhnya rendah dan
biaya produksinya tinggi. Sisi negatif ini dapat diatasi dengan teknologi DNA rekombinan.
Para peneliti telah memanipulai gen yang mengkode toksin insektisida mikroba untuk
meningkatkan efektivitas dari insektisida tersebut.
81
Bioinsektisida adalah mikroorganisme yang dapat digunakan sebagai agen
pengendalian serangga hama. Pemanfaatan bioinsektisida sebagai agen hayati pada
pengendalian hama merupakan salah satu komponen pengendalian hama terpadu (PHT).
Hama serangga juga peka terhadap virus, sehingga virus sebagai dasar bioinsektisida
bermanfaat untuk mengendalikan penyebaran hama. Contoh virus yang telah diujicobakan
adalah kelompok Baculovirus. Baculovirus mempengaruhi hama serangga seperti hama
penggerek jagung, hama penggerek kentang, kutu penggerek, dan kumbang penghisap.
Bioinsektisida pun memiliki siklus hidup yang pendek dan efektif di jumlah kecil, aman bagi
manusia dan hewan, jika dibandingkan dengan pestisida sintetik, seringnya berpengaruh
hanya pada satu spesies serangga. Walaupun demikian, bioinsektisida juga memiliki
kekurangan, yaitu cara kerjanya lamban dan cara pengaplikasiannya relatif rumit. Namun
begitu banyaknya agen bioinsektisida ini sebagai organisme hidup, keberhasilan sumber
dasar bioinsektisida pun dipengaruhi oleh faktor lain seperti temperatur, pH, pengembunan,
sinar ultraviolet, kondisi tanah, dan mikroba kompetitor lainnya yang ada di lingkungan.
Kelompok mikroorganisme yang dapat dimanfaatkan sebagai bioinsektisida, antara lain
yaitu cendawan, bakteri, virus, nematoda, protozoa, dan ricketsia. Pada bagian ini akan
difokuskan pembahasannya pada penggunaan bioinsektisida dari kelompok mikroba dan
virus.
4.2 Bioinsektisida dari mikroba
Bioinsektisida adalah bahan-bahan alami yang bersifat racun serta dapat

menghambat pertumbuhan dan perkembangan, tingkah laku, perkembangbiakan,
kesehatan, mempengaruhi hormon, penghambat makan, membuat mandul, sebagai
pemikat, penolak, dan aktivitas lainnya yang dapat mempengaruhi organisme pengganggu
tanaman (Agrios, 1998).
Menurut Sastrosiswojo (2002) bioinsektisida atau insektisida hayati adalah suatu

jenis insektisida yang berasal dari bahan alami, misalnya binatang, tanaman, bakteri, dan
mineral tertentu. Bioinsektisida terdiri dari tiga kelompok sebagai berikut :
1. Insektisida Mikrobial
Insektisida mikrobial mengandung mikroorganisme sebagai bahan aktif (contohnya
bakteri, fungi, virus, dan protozoa). Jenis insektisida mikrobial yang paling banyak
digunakan adalah bakteri Bacillus thuringiensis, virus, dan fungi karena banyak
menyerang serangga dengan tingkat penyebaran dan serangan lebih intensif
dibanding kelompok mikroorganisme lain.
82
2. Protektan-Bagian Integral-Tanaman (PBIT)
PBIT adalah bahan insektisida yang telah ditambahkan (dimasukkan) ke dalam
tanaman. Kelompok ini sering disebut sebagai tanaman transgenik.
3. Insektisida Biokimia
Insektisida biokimia adalah bahan yang terjadi secara alami yang dapat
mengendalikan hama dengan mekanisme non-toksik. Insektisida biokimia mencakup
bahan-bahan seperti feromon seks dan berbagai ekstrak tanaman yang memikat
serangga hama kepada perangkap. Insektisida hayati tumbuhan atau insektisida
nabati dimasukkan ke dalam kelompok insektisida biokimia karena mengandung
biotoksin.
4. Insektisida Hayati Tumbuhan
Penggunaan insektisida hayati tumbuhan merupakan salah satu alternative pilihan.
Secara alamiah nenek moyang telah mengembangkan insektisida hayati tumbuhan
yang ada di lingkungan pemukiman. Nenek moyang memakai insektisida hayati atas
dasar kebutuhan praktis dan disiapkan secara tradisional. Tradisi ini akhirnya hilang
karena desakan teknologi yang tidak ramah lingkungan.
A. Penggunaan Bioinsektisida Mikroba
Pemanfaatan bioinsektisida mikroba dapat menggunakan berbagai organisme,

misalnya parasitoid, predator maupun mikroorganisme patogen seperti jamur, bakteri
bahkan virus.
Insektisida mikroba adalah senyawa toksik yang dihasilkan oleh mikroba yang
berfungsi untuk membunuh spesies insekta atau mempunyai kemampuan menginfeksi
insekta target spesifik. Insektisida mikroba yang paling efektif dan paling sering digunakan
adalah toksin yang disintesis oleh Bacillus thuringiensis.
Bacillus thuringiensis (Bt), merupakan famili bakteri yang memproduksi kristal

protein di inclusion body-nya pada saat ia bersporulasi. Bioinsektisida Bt merupakan 90-
95% dari bioinsektisida yang dikomersialkan untuk dipakai oleh petani di berbagai negara.
Dengan kemajuan teknologi, gen insektisidal Bt ini telah dapat diisolasi dan diklon sehingga
membuka kemungkinan untuk diintroduksikan ke dalam tanaman.
B. thuringiensis adalah bakteri yang menghasilkan kristal protein yang bersifat

membunuh serangga (insektisidal) sewaktu mengalami proses sporulasinya (Hofte dan
Whiteley, 1989).
83
Bakteri ini terdiri dari sejumlah strain yang berbeda (subspecies disingkat
subsp.),dimana masing-masing subspecies menghasilkan toksin yang berbeda yang
membunuh insekta yang berbeda pula. B. thuringiensissubsp. kurstaki, misalnya,
menghasilkan toksin yang membunuh larva lepidopteran meliputi moth, butterfly, skipper,
cabbage worm, dan spruce budworm.B. thuringiensissubsp. israelensis membunuh diptera
seperti, mosquito dan black fly. B. thuringiensissubsp. tenebrionis (juga dikenal sebagai san
diego) efektif membunuh beetle, seperti potato beetle dan boll weevil. Ada banyak strain B.
thuringiensis yang lain dan masing-masing menghasilkan senyawa yang bersifat toksik
terhadap insekta yang berbeda.
Kerja toksin insektisida B. thuringiensis mengalami hambatan dalam aplikasinya.

Untuk membunuh hama insekta, B. thuringiensis harus dicerna oleh insekta. Kontak bakteri
atau toksin insektisida dengan permukaan insekta tidak mempunyai pengaruh terhadap
insekta target. Bakteri B. thuringiensis umumnya diterapkan dengan penyemprotan,
sehingga bakteri ini selalu dicampurkan dengan zat penarik insekta untuk meningkatkan
kemungkinan insekta mencerna toksin. Akan tetapi, insekta yang terdapat di dalam
tanaman atau insekta yang menyerang akar tanaman tidak dapat dijangkau oleh toksin
insektisida B. thuringiensis dengan penyemprotan, sehingga strategi yang lain harus dipilih
untuk mengendalikan hama insekta tersebut. Salah satu kemungkinannya adalah membuat
tanaman transgenik yang membawa dan mengekspresikan gen toksin B. thuringiensis.
Faktor pembatas kedua dari kerja toksin insektisida B. thuringiensis adalah toksin ini hanya
membunuh insekta pada tahap perkembangan spesifik. Dengan demikian, toksin harus
diterapkan ketika populasi hama pada tahap tertentu dalam siklus hidupnya.
B. thuringiensissubsp. kurstaki pertama kali ditemukan pada tahun 1902. Sampai

dengan tahun 1951, bakteri ini belum diketahui mempunyai kemampuan membunuh
insekta. Mulai tahun 1950-an, B. thuringiensissubsp. kurstaki sangat penting artinya dan
telah digunakan untuk mengontrol spruce budworm di Canada. Pada tahun 1979, kira-kira
1% atau kira-kira 2 juta hektar hutan di Canada disemprot dengan B. thuringiensis subsp.
kurstaki untuk melawan spruce budworm. Pada tahun 1986, penggunaan B. thuringiensis
subsp. kurstaki meningkat drastis. Bakteri ini digunakan untuk menangani kira-kira 74%
hutan di Kanada yang diserang oleh spruce budworm. Di negara lain, B.
thuringiensissubsp. kurstaki digunakan untuk membasmi caterpillars, gypsy moth, cabbage
worm, cabbage looper, dan tobacco hornworm. Kendala utama aplikasi B.
thuringiensissubsp. kurstaki adalah harganya 1,5 sampai 3 kali lebih mahal dari insektisida
kimia.
84
Aktivitas insektisida dari B. thuringiensis subsp. kurstaki dan strain yang lain
terdapat dalam struktur yang sangat besar yang disebut dengan kristal paraspora,
disintesis pada tahap sporulasi bakteri. Kristal paraspora terdiri dari 20-30% massa kering
dari kultur sporulasi dan penyusun utama adalah protein (>95%) dan sisanya adalah
sejumlah kecil karbohidrat (<5%). Kristal merupakan agregasi satu jenis protein yang dapat
didisosiasi oleh suasana basa menjadi subunitnya, masing-masing dengan massa molekul
kira-kira 250 kDa. Kira-kira 20 residu glukosa dan 10 residu manosa diasosiasikan pada
masing-masing subunit polipeptida. Subunit dapat didisosiasikan secara in vitro oleh β-
merkaptoetanol (yang mereduksi ikatan disulfida) menjadi dua rantai polipeptida identik,
masing-masing dengan massa molekul kira-kira 130 kDa (Gambar 4.1).
Kristal paraspora bukan merupakan bentuk aktif dari insektisida mikroba, melainkan
merupakan protoksin, yaitu prekursor dari toksin aktif. Jika kristal paraspora dicerna oleh
insekta target, protoksin diaktivasi di dalam usus insekta oleh basa dengan pH 7,5 – 8,0
dan protease pencernaan spesifik, dan merubah protoksin menjadi toksin aktif dengan
massa molekul kira-kira 68 kDa (Gambar 4.1). Dalam bentuk aktif, protein toksin terinsersi
ke dalam membran dari sel epitel usus dan selanjutnya membentuk saluran ion sehingga
terjadi kehilangan ATP seluler (Gambar 4.2). Setelah kira-kira 15 menit setelah saluran ion
terbentuk, metabolisme sel berhenti, insekta berhenti makan akan mengalami dehidrasi
dan pada akhirnya akan mengalami kematian. Perubahan protoksin menjadi toksin aktif
memerlukan suasana basa dan enzim protease spesifik, dimana proses tersebut tidak akan
mempengaruhi non target seperti manusia dan hewan pertanian, seperti burung.
Gambar 4.1 Representasi skema dari kristal paraspora B. thuringiensis. Masing-masing

subunit protein 250 kDa dari kristal paraspora mengandung dua polipeptida
85
130 kDa. Pengubahan protoksin 130 kDa menjadi toksin aktif 68 kDa
memerlukan kombinasi basa (pH 7,5 – 8,0) dan kerja protease spesifik,
keduanya ditemukan dalam usus insekta.
Gambar 4.2 Insersi toksin B. thuringiensis ke dalam membran sel epitel usus insekta.
Toksin membentuk saluran ion antara sitoplasma sel dan lingkungan luar.
Untuk pengendalian hama insekta secara biologi, B. thuringiensis subsp. kurstaki

diterapkan dengan penyemprotan kira-kira 1,3 sampai 2,6x108 spora per kaki pada areal
target. Waktu hidup kristal paraspora sangat pendek di lingkungan karena kristal paraspora
sangat sensitif terhadap sinar matahari. Sinar matahari dapat mendegradasi lebih dari 60%
residu triptofan dari kristal paraspora selama 24 jam. Kristal paraspora mungkin tahan di
lingkungan selama satu hari atau bahkan selama sebulan tergantung pada adanya sinar
matahari.
86
Gambar 4.3: Proses infeksi B. thuringiensis subsp. kurstaki sebagai bioinsektisida pada
ulat.
Adapun proses dan mekanisme keracunan dan kematian ulat yang disebabkan oleh
bioinsektisida B. thuringiensis ditunjukkan pada Gambar 4.3 adalah berturut turut sebagai
berikut:
1. Larva ulat memakan tanaman yang telah mengandung spora dan kristal protein Bt.K
2. Dalam beberapa menit, kristal protein berikatan dengan reseptor spesifik pada
dinding usus dan ulat berhenti makan.
3. Beberapa menit kemudian, dinding usus pecah sehingga spora dan bakteri
memasuki jaringan tubuh, toksin pun larut dalam darah.
4. Dalam waktu 1-2 hari ulat akan mati.
Protein insektisida B. thuringiensis subsp. israelensis sangat toksik jika dicerna oleh larva
nyamuk. Akan tetapi, krista paraspora dari spesies ini tenggelam dengan cepat setelah
disemprotkan di atas air sehingga efektivitasnya terhadap larva nyamuk dan daya
bunuhnya berkurang. Untuk mengatasi masalah ini, gen toksin insektisida dapat
dimasukkan ke dalam organisme yang merupakan sumber makanan bagi larva nyamuk.
Proses toksifikasi kristal protein Bt. terhadap larva nyamuk dapat dilihat pada Gambar 4.4.
87
Gambar 4.4: Proses toksifikasi kristal protein Bt. terhadap larva nyamuk.
Calon organisme yang cocok untuk tujuan ini adalah Synechocystis dan
Synechcoccus spp. serta sianobacteri fotosintesis yang merupakan sumber makanan
utama bagi larva nyamuk. Organisme lain yang potensial dijadikan induk untuk ekspresi
gen toksin insektisida asing adalah Caulobacter crescentus, suatu bakteri air yang
umumnya ditemukan tersebar secara luas dalam lingkungan air, di mana larva nyamuk
makan. Gen toksin dari B. thuringiensis subsp. israelensis dimasukkan dan diekspresikan
dalam organisme ini. Pada percobaan lain, toksin insektisida dihasilkan oleh sianobakteri
yang ditransformasi sangat toksik terhadap larva nyamuk.
B. Isolasi bakteri B. thuringiensis
Isolat Bt dapat diisolasi dari tanah, bagian tumbuhan, kotoran hewan, serangga dan
bangkainya dan sumber lain. Salah satu cara isolasi yang cukup efektif adalah dengan
seleksi asetat. Beberapa gram sumber isolat disuspensikan ke dalam media pertumbuhan
bakteri (misalLB) yang mengandung natrium asetat kemudian dikocok. Media asetat
tersebut menghambat pertumbuhan spora Bt. menjadi sel vegetatif. Setelah beberapa jam
media tersebut dipanaskan pada suhu 80°C selama beberapa menit. Pemanasan ini akan
membunuh sel-sel bakteri atau mikroorganisme yang sedang tumbuh termasuk spora-
spora bakteri lain yang tumbuh. Kemudian sebagian kecil dari suspensi yang telah
dipanaskan diratakan pada media padat. Koloni-koloni yang tumbuh kemudian dipindahkan
ke media sporulasi Bt. Koloni yang tumbuh pada media ini dikonfirmasi keberadaan spora
atau protein kristalnya untuk menentukan apakah koloni tersebut termasuk isolat Bt.
88
C. Isolasi Gen Toksin B. thuringiensis
Hasil panen dapat diserang oleh lebih dari satu jenis spesies insekta. Oleh karena
itu, perlu untuk membuat toksin insektisida yang efektif melawan insekta target pada
spektrum yang luas. Toksin insektisida yang mempunyai spesifisitas yang luas dapat
diperoleh melalui :
1. Mentransfer gen toksin tertentu (misalnya toksin terhadap diptera) ke dalam strain B.
thuringiensis yang normalnya mensintesis toksin spesifik terhadap spesies yang
berbeda (misalnya toksin terhadap coleoptera), atau
2. Menggabungkan dua gen toksik spesifik terhadap spesies yang berbeda sehingga
dihasilkan toksin yang bekerja ganda (toksin hybrid).
Tidak semua isolat Bt. beracun terhadap serangga. Untuk itu perlu dilakukan
penapisan daya racun dari isolat-isolat yang telah diisolasi. Ada dua pendekatan yang
dapat dilakukan untuk hal ini yaitu,pertama dengan pendekatan molekular dan kedua
dengan bioasay.
Pendekatan molekular dilakukan dengan teknik PCR menggunakan primer-primer

yang dapat menggandakan bagian-bagian tertentu dari gen-gen penyandi protein kristal
(gen cry). Hasil PCR ini dapat dipakai untuk memprediksi potensi racun dari suatu isolat
tanpa terlebih dulu melakukan bioasay terhadap serangga target. Dengan demikian
penapisan banyak isolat untuk kandungan gen-gen cry tertentu dapat dilakukan dengan
cepat dan terarah.
Untuk menguji lebih lanjut daya toksisitas dari suatu isolat maka perlu dilakukan
bioasay dengan mengumpankan isolat atau kristal protein dari isolat tersebut kepada
serangga target. Dari bioasay ini dapat dibandingkan daya toksisitas antar isolat. Dengan
pendekatan seperti ini perusahaan BB-Biogen telah mengidentifikasi beberapa isolat Bt.
lokal yang mengandung gen cry1 dan beracun terhadap beberapa serangga dari ordo
Lepidoptera seperti Ostrinia furnacalis (penggerek jagung), Plutella xylostella (hama kubis),
Spodoptera litura (ulat grayak), S. exigua (hama bawang merah) dan Etiella zinckenella
(penggerek kedelai).
Untuk mengembangkan bioinsektisida B. thuringiensis yang mempunyai

kemampuan membunuh lebih besar dan lebih luas terhadap sejumlah spesies insekta, gen
protoksin yang dihasilkan oleh B. thuringiensis perlu diisolasi dan dikarakterisasi. Sebelum
mengisolasi dan mengkarakterisasi gen protoksin, perlu ditentukan apakah gen protoksin
terletak dalam DNA plasmid atau DNA kromosom. Untuk menguji gen protoksin yang
terdapat dalam DNA plasmid, sumber strain B. thuringiensis dapat dikonjugasikan dengan
89
strain yang tidak mempunyai aktivitas insektisida. Jika strain yang tidak mempunyai
aktivitas insektisida sekarang mendapat kemampuan mensintesis toksin insektisida, maka
gen protoksin tersebut terdapat dalam DNA plasmid karena pemindahan DNA kromosom
selama konjugasi jarang terjadi.
Prosedur untuk mengisolasi DNA pengkode protoksin sama dengan prosedur

umum yang biasa dilakukan untuk mengisolasi dan mengkloning DNA rekombinan. Sel B.
thuringiensis ditumbuhkan dalam kultur dan dilisis. DNA dari sel total diisolasi dan
dipisahkan menjadi fraksi DNA plasmid dan DNA kromosom dengan sentrifugasi gradien
CsCl2. Jika gen protoksin merupakan bagian dari genom (kromosom), pustaka genom
harus dibentuk dari DNA kromosom. Sebaliknya, jika gen protoksin dikode oleh DNA
plasmid, DNA plasmid dapat difraksionasikan lebih lanjut menggunakan sentrifugasi
gradien sukrosa, yang memisahkan plasmid berdasarkan ukuran basanya.
B. thuringiensis subsp. kurstaki mengandung gen protoksin insektisida yang

terdapat pada salah satu dari tujuh plasmid yang berbeda, masing-masing dengan ukuran
2,0; 7,4; 7,8; 8,2; 14,4; 45; dan 71 kb. Untuk menentukan DNA plasmid B.
thuringiensissubsp. kurstaki yang membawa gen protoksin, sentrifugasi gradien sukrosa
diterapkan untuk memisahkan ke tujuh DNA plasmid menjadi menjadi tiga fraksi, yaitu
plasmid dengan ukuran kecil (2,0 kb), sedang (7,4; 7,8; 8,2; dan 14,4 kb), dan besar (45
dan 71 kb). Fraksi yang mengandung plasmid ukuran kecil (2,0 kb) dibuang karena plasmid
ini terlalu kecil untuk mengkode protein yang equivalen dengan protoksin 130 kDa.
Protoksin insektisida paling sedikit dikode oleh DNA dengan ukuran 4,0 kb. Fraksi plasmid
dengan ukuran sedang dan besar selanjutnya dipotong dengan enzim restriksi Sau3AI dan
kemudian diligasi ke dalam sisi BamHI dari plasmid pBR322 dengan bantuan enzim DNA
ligase.
D. Rekayasa Genetika Strain B. thuringiensis
Pada kondisi normal, protein protoksin B. thuringiensis hanya disintesis selama fase
pertumbuhan sporulasi. Ini sangat menguntungkan di mana gen toksin ditranskripsi dan
ditranslasi selama pertumbuhan vegetatif. Produksi toksin insektisida selama pertumbuhan
vegetatif akan memungkinkan toksin disintesis melalui proses fermentasi kontinyu,
sehingga biaya produksi toksin dapat ditekan. Pada proses fermentasi kontinyu
diselenggarakan pada skala lebih kecil dan lebih murah dalam bioreaktor daripada
fermentasi bath konvensional.
90
Gambar 4.5.Prosedur untuk subkloning gen toksin Bt dari B. thuringiensis subsp. kurstaki
sehingga gen ini diekspresikan secara kontinyu di bawah pengendalian
promoter gen resisten tetrasiklin (pTet). Gen toksin B. thuringiensis yang
diisolasi dihilangkan promoternya dengan menggunakan enzim restriksi 1
dan 2 (RE1 dan RE2). Gen toksin digabungkan oleh DNA T4 ligase ke dalam
vektor plasmid sehingga terletak di bagian downstream dari pTet
menggantikan posisi gen resisten tetrasiklin yang telah dihilangkan
sebelumnya oleh RE1 dan RE2.
Selama sporulasi B. thuringiensis, faktor inisiasi spesifik (faktor sigma) berinteraksi

dengan promoter dari gen yang aktif hanya dalam bagian siklus hidup bakteri. Faktor ini
mengaktivasi transkripsi pada fase sporulasi. Jika gen toksin B. thuringiensis dengan
promoter spesifik diklon dan diekspresikan dalam sel Bacillus subtilis atau B. megaterium,
transkripsi gen hanya terjadi selama fase sporulasi. Dengan demikian, untuk
mengekspresikan toksin insektisida B. thuringiensis selama pertumbuhan vegetatif, perlu
menempatkan gen penginduksi toksin di bawah pengendalian promoter yang aktif selama
pertumbuhan vegetatif.
Jika fragmen DNA mengandung gen toksin yang tidak mengandung promoter
aslinya diklon dalam plasmid di bawah pengendalian promoter konstitutif dari gen resisten
tertasiklin yang diisolasi dari plasmid Bacillus cereus, kemudian dimasukkan ke dalam B.
thuringiensis, protein aktif akan dihasilkan secara terus-menerus selama siklus hidup sel. Di
samping itu, jika konstruksi ini digunakan untuk mentransform mutan defektif sporulasi dari
B. thuringiensis, sintesis toksin terjadi tanpa harus mengalami fase sporulasi. Pada kondisi
ini, sintesis toksin lebih efisien daripada sel wild type; yaitu jumlah protein toksin yang
diperoleh lebih besar dalam sel yang ditransformasi, dan waktu serta substrat yang
diperlukan lebih sedikit. Gen toksin yang telah dimodifikasi ini dapat diintegrasikan ke
dalam DNA kromosom dari B. thuringiensis yang defektif sporulasi. Manipulasi ini akan
91
menjamin bahwa gen insektisida toksin tidak akan hilang selama ketidakstabilan plasmid
pada proses fermentasi kontinyu.
E. Aplikasi Penggunaan Bioinsektisida Mikroba
Dari beberapa penelitian dapat disimpulkan beberapa aplikasi penggunaan

bioinsektisida mikroba baik itu dalam skala laboratorium ataupun dalam skala lapangan.
1. Skala Laboratorium
Pengujian pada skala laboratorium menunjukkan beberapa insektisida mikroba B.
thuringiensis (B.t) dan insektisida nabati mimba efektif menyebabkan kematian larva
Clouges glauculalis, hama daun pulai Alstonia spp. (Asmaliyah dan Ismail, 1998; Asmaliyah
et al., 2005). Aplikasi insektisida mikroba ini juga efektif menyebabkan kematian larva
Eurema sp., hama daun sengon (Paraserianthes falcataria); larva Lamprosema charesalis,
hama daun sungkai (Peronema canescens), dan larva Hypsipyla robusta, hama penggerek
pucuk mahoni (Swietenia macrophylla) (Asmaliyah, 2001).
Larva yang masih bertahan hidup sampai hari ketujuh, pada hari berikutnyaada
yang mati sebelum menjadi pupa tapi ada yang dapat berkembang menjadipupa. Pupa
yang terbentuk sebagian besar bentuknya normal, tetapi ukurannya relatif lebih kecil dari
ukuran pupa normal. Pupa ini seluruhnya berkembang menjadi imago dengan ukuran
abdomen dan sayap yang lebih kecil. Dari hasil penelitian ini hanya ada satu pupa yang
terbentuk tidak normal, agak mengkerut dan apabila dipegang tidak bereaksi. Pupa ini tidak
akan berkembang menjadi imago.
Pengujian bioinsektisida mikroba B. thuringiensis yang dibungkus

Pseudomonasflourescens terhadap larva Lymantria sp. (hama daun mangrove Bruguiera
sp.) pada berbagai konsentrasi efektif menyebabkan kematian larva Lymantria sp. (Hardi
dan Siringo-ringo, 2000). Pemberian ekstrak mimba pada daun mahoni dengan berbagai
konsentrasi dapat mengurangi luas daun mahoni yang dimakan oleh H. robusta dan dapat
menyebabkan kematian larva Xystrocera festiva (hama penggerek batang sengon) sebesar
100 %, baik yang diaplikasikan langsung ke tubuh larva maupun ke makanan buatan
(Suharti et al., 1995).
Aplikasi fungi B. bassiana pada larva X. festiva yang disemprotkan langsung ke

tubuh larva, makanan buatan, dan tempat pemeliharaan efektif menyebabkan kematian
larva X. festiva.
2. Skala Lapangan
92
Aplikasi berbagai jenis insektisida mikroba B. thuringiensis terhadap serangan hama
H. robusta dan belalang Valanga nigricornis pada tanaman mahoni diLampung, efektif
menekan luas serangan H. robusta dan V. nigricornis sertatingkat kerusakan tanaman
akibat serangan V. nigricornis (Asmaliyah, 2001).Aplikasi insektisida mikroba B.
thuringiensis (Florbac FC) terhadap hama kutu sisik (Chionapsis sp.) yang menyerang
daun dan ranting tanaman mangrove diBali, memberikan hasil yang lebih baik dalam
menekan serangan hama kutu sisikdibandingkan perlakuan insektisida kimia (Intari, 1997).
Smitley dan Davis (1993) membuktikan bahwa penyemprotan insektisida mikroba B.

thuringiensis (Foray 48B dan Dipel 8AF) dengan dosis 74 BIU/ha, volume semprot 5,6 liter
lebih baik dalam melindungi daun dari penggundulan oleh Lymantria dispar (21,1 % dan
26,7 % penggundulan) dibandingkan dengan tanpa perlakuan penyemprotan (80,9 %
penggundulan).
Penyemprotan yang dilakukan pada saat populasi L. dispar (hama pemakan daun
Quercus spp.) berada pada puncaknya, B. thuringiensis yang diaplikasikan pada 74 BIU/ha
memberikan perlindungan daun yang terbaik (21,1 % penggundulan) daripada
diaplikasikan pada 30 BIU/ha (dosis standar) (46,3 % penggundulan).
Aplikasi bioinsektisida mikroba B. thuringiensis secara individual dan kombinasi

serta bioinsektisida nabati mimba efektif dalam menekan tingkat kerusakan tanaman pulai
akibat serangan hama C. glauculalis.
F. Prospek Penggunaan B. thuringiensis
Dengan diperbaikinya sistem perbanyakan dan formulasi bioinsektisidaBt. maka

microbialspraytetapmerupakan komponen yangpentingdalam programpengendalianhama
di luarnegeri.Pencarianstrain baru di Indonesiamerupakanlangkah penting untuk
mendapatkan strain Bt yang tinggi virulensinya serta mempunyai potensi untuk digunakan
di lapangan. Perbaikan sistem fermentasi dan formulasi merupakan bidang penelitian yang
seharusnya mendapat perhatian. Hal ini memungkinkan Indonesia dapat memproduksi dan
menggunakan bioinsektisida Bt lokal yang lebih murah harganya dibandingkan dengan
mikrobial Bt impor. Penelitian tentang tanaman transgenik Bt baik di luar negeri maupun di
Indonesia telah berkembang pesat. Tanaman transgenik Bt di luar negeri telah
dikomersialkan dan permintaan benihnya meningkat karena dapat menurunkan biaya
produksi akibat penggunaan pestisida yang menurun secara drastis. Seiring dengan
perakitan tanaman transgenik Bt lainnya, penelitian mengenai dampak negatif tanaman
transgenik Bt dan managemen resistensi terhadap Bt juga telah berkembang di luar negeri.
Hal ini membantu kita untuk merancang penelitian yang bertujuan sama untuk kondisi
93
Indonesia. Dengan berkembangnya penelitian tersebut, diharapkan dapat menghasilkan
suatu paket teknologi yang menggunakan tanaman transgenik Bt sebagai salah satu
komponennya menjadi lebih ramah terhadap lingkungan dibandingkan dengan teknologi
yang umum digunakan saat ini.
4.3 Bioinsektisida dari virus
Virus adalah parasit berukuran mikroskopik yang menginfeksisel organik biologis.

Virus hanya dapat bereproduksi di dalam material hidup dengan menginvasi dan
memanfaatkan sel makhluk hidup karena virus tidak memiliki perlengkapan selular untuk
bereproduksi sendiri. Dalam sel inang, virus merupakan parasit obligat dan di luar inangnya
menjadi tak berdaya. Virus biasanya mengandung sejumlah kecil asam nukleat (DNA atau
RNA, tetapi tidak kombinasi keduanya) yang diselubungi semacam bahan pelindung yang
terdiri atas protein, lipid, glikoprotein, atau kombinasi ketiganya. Genom virus menyandi
baik protein yang digunakan untuk memuat bahan genetik maupun protein yang dibutuhkan
dalam daur hidupnya. Istilah virus biasanya merujuk pada partikel-partikel yang
menginfeksi sel-sel eukariota (organisme multisel dan banyak jenis organisme sel tunggal),
sementara istilah bakteriofag atau fag digunakan untuk jenis yang menyerang jenis-jenis
sel prokariota (bakteri dan organisme lain yang tidak berinti sel). Virus sering diperdebatkan
statusnya sebagai makhluk hidup karena ia tidak dapat menjalankan fungsi biologisnya
secara bebas. Karena karakteristik khasnya ini virus selalu terasosiasi dengan penyakit
tertentu, baik pada manusia (misalnya virus influenza dan HIV), hewan (misalnya virus flu
burung), atau tanaman (misalnya virus mosaik tembakau/TMV) (Anonim, 2010a).
Virus dibagi berdasarkan komposisi asam nuleat, struktur genom dan morfologi
eksternal dari pembungkus. Ukuran virus dapat dari kecil ke besar sehingga dapt dilihat
dengan mikroskop cahaya . Virus terbesar adalah pox virus, mempunyai ukuran virion
mencapai 470 nanometer. Morfologi virus harus diinvestigasi menggunakan mikroskop
electron dan menggunakan teknik biologi molecular. Struktur dasar virus adalah viral DNA
atau RNA yang dikelilingi oleh kapsul protein dan ini dikenal sebagai virion (Anonim,
2010b).
Penyakit pada serangga yang diakibatkan oleh virus telah ditemukan pada hampir
13 ordo serangga. Virus adalah organisme yang sederhana yang terdiri asam nukleat dan
protein yang dikenal sebagai kapsid. Nukleokapsid mungkin saja dilapisi oleh lapisan lipid
yang dikenal sebagai virion. Beberapa virus occluded dalam matrik protein. Matrik ini
dikenal sebagai tubuh Occlusion. Tubuh Occlusion ini ditemukan pada 3 famili virus. Virus
serangga mungkin saja double stranded atau single stranded DNA (dsDNA dan ssDNA)
94
atau juga double atau single stranded RNA (dsRNA dan ssRNA), atau enveloped atau
unenveloped dan mungkin juga occluded atau nonoccluded dalam matriks protein. Diantara
virus yang menyerang serangga, ada 3 famili yang mempunyai struktur yang spesial untuk
beradaptasi dan survival di lingkungan. Baculoviridae, Poxviridae dan Reoviridae
memproduksi tubuh oklusi, struktur yang melindungi partikel virus atau virion. Tubuh oklusi
resisten terhadap lingkungan yang tidak menguntungkan. Tubuh oklusi dari 3 famili ini
terbentuk dari matrik protein yang mengandung satu atau lebih virion. Virion yang tidak
terlindungi akan rentan dan mati cepat karena desikasi dan sinar langsung matahari. Matrik
protein dari tubuh oklusi melindungi virion dari lingkungan sebelum menginfeksi inang,
sehingga meningkatkan tingkat survival virus. Tubuh oklusi bervariasi dalam bentuk dan
ukuran. Diantara Baculoviridae, NPV mempunyai banyak bentuk tubuh oklusi (0.5-15 μm)
yang megandung banyak virion. Granulosis virus (GVs) mempunyai mempunyai bentuk
kapsul berukuran (200 x 600 nm) yang mengandung satu virion setiap tubuh oklusion
(Anonim, 2010b).
Salah satu agen hayati yang berperan penting sebagai pengendali hama secara
alamiah adalah Nuclear Polyhedrosis Virus (NPV) yang berstatus sebagai musuh alami
bagi ulat grayak. Virus ini memiliki sifat menguntungkan antara lain (Widyariska, Tanpa
Tahun) :
1. Memiliki inang spesifik.

2. Tidak mempengaruhi parasitoid dan predator.
3. Dapat mengatasi masalah resistensi akibat penggunaan insektisida serta ramah
lingkungan.
Klasifikasi virus serangga berdasarkan International Committee on Taxonomy
Viruses (1991) adalah sebagai berikut (Anonim, 2010b) :
A. Virus DNA
1. Baculoviruses
a. Nuclear polyhedrosis viruses (NPV)
b. Granuloviruses (GV)
2. DNA Virus lain
a. Ascoviruses
b. Iridoviruses
c. Parvoviruses
d. Polydnaviruses
e. Poxviruses
B. Virus RNA
95
1. Reoviruses
a. Cytoplasmic polyhedrosis viruses
2. RNA Virus
a. Nodaviruses
b. Picorna-like viruses
c. Tetraviruses pathogen serangga
Gambar 4.6 Penyakit yang ditimbulkan akibat infeksi baculoviridae
Famili Baculoviridae terdiri atas nuclear polyhedrosis virus (NPV) dan granulosis
virus (GV). Virus ini dsDNa dengan rod-shape nukleocapsid. Partikel virus infektif atau
virion adalah occluded dalam tubuh protein dikenal sebagai polyhedra (NPV) atau granula
(GV). NPV polyhedra lebih besar dibandingkan dengan virion (1-15 μm) dan mengandung
beberapa virion. Infeksi Baculovirus akan terjadi ketika Polyhedra atau granula tertelan oleh
serangga inang yang peka, yang selanjutnya akan terlarut dalam isi saluran pencernakan.
Virion akan dikeluarkan ketika polyhedra pecah. Virion akan memasuki sel midgut seperti
pada tubuh lemak, epidermis dan sel darah. Infeksi baculovirus sering dikenal sebagai
wilting diseases, karena jaringan tubuh inang menjadi liquid dan infeksi pada epidermis
menyebabkan tubuh inang melting melepas partikel virus di alam. Famili Baculoviridae
sangat penting di dalam program pengendalian hayati, oleh sebab itu studi tentang
patogenisitas dan host spesifik dari baculoviridae sangat intensif. Famili ini sering
menyerang Lepidoptera, Sawfly dan larva nyamuk (Anonim, 2010b).
96
Gambar 4.7:Siklus hidup virus NPV dalam tubuh serangga patogen serangga.
Nuclear Polyhedrosis Viruses (NPV) banyak menginfeksi serangga dan setiap
spesies mempunyai spesifik spesies . NPV menginfeksi lebih dari 500 spesies, Lepidoptera
adalah inang yang penting dari NPV. Partikel infektif dari virus atau virion ini dapat
terbungkus oleh single SNPV atau multiple MNPV. Polyhedra dari NPV mengandung
beberapa sampai banyak virion. Sesudah tertelan oleh inang dan akan berreproduksi di
dalam sel midgut, atau jaringan lain dan organ serangga menjadi terinfeksi terutama tubuh
lemak, epidermis dan sel darah. Serangga yang terinfeksi umumnya akan mati setelah 5-12
hari sesudah infeksi tergantung pada dosis virus, temperatur dan stadia larva instar ketika
terjadi infeksi. Seperti pada serangan cendawan, perilaku seperti summit diseases terjadi
pada serangga yang terserang NPV. Serangga yang akan mati akan naik ke atas tanaman
di mana mereka mati dan. Jutaan polyhedra yang terkandung pada cairan tubuh serangga
yang mati dan pecah akan jatuh ke bawah dalam feeding zone (daun, sisa-sisa daun) yang
mungkin akan termakan oleh ulat sehat yang lain (Anonim, 2010b).
4.3.1 Nuclear Polyhedrosis Virus (NPV)
Nuclear Polyhedrosis Virus (NPV) merupakan suatu agen pengendali bagi hama,
statusnya sebagai musuh alami bagi ulat grayak. Keunggulan dari penggunaan NPV efektif
membunuh hama ulat yang menyerang tanaman.Ulat yang telah terinfeksi virus ini akan
mati, kemudian dapat dijadikan pengendali hama berikutnya bagi ulat yang sehat.
Bahan aktif virus Sl NPV berasal dari patogen serangga Spodoptera litura Nuclear
Polyhedrosis Virus. Secara spesifik hanya digunakan sebagai pengendali ulat grayak
Spodoptera exigua dan Spodoptera litura yang menyerang tanaman. Bahan itu tidak
berbahaya bagi musuh alami ulat, tidak berbau dan tidak berbahaya, atau beracun bagi
manusia dan hewan peliharaan/ternak.
NPV adalah virus yang berbentuk segi banyak dan terdapat di dalam inclusion
bodies yang disebut polihedra dan bereplikasi di dalam inti sel (nukleus). NPV memiliki
badan inklusi berbentuk polihedral yang merupakan kristal protein pembungkus virion
97
dengan diameter 0.2 – 20 mm. Kristal protein ini disebut dengan protein polihedrin yang
berukuran kurang lebih 29.000 sampai 31.000 Dalton. Kristal protein ini berfungsi sebagai
pelindung infektifitas partikel virus dan menjaga viabilitasnya di alam serta melindungi DNA
virus dari degradasi akibat sinar ultra violet matahari.
NPV telah ditemukan pada 523 spesies serangga, sebagian besar NPV bersifat
spesifik inang, yaitu hanya dapat menginfeksi dan mematikan spesies inang alaminya.
Sehingga pada mulanya penamaan NPV disesuaikan dengan nama inang asli dimana dia
pertama kali diisolasi sebagai contoh NPV yang menginfeksi ulat Spodoptera litura dinamai
Spodoptera litura Nucleopolyhedrovirus (SlNPV)dan yang menginfeksi ulat Spodoptera
exigua dinamai Spodoptera exigua Nucleopolyhedrovirus (SeNPV).
Gambar 4.8 Ulat Spodoptera litura Ulat Spodoptera exigua
Melihat besarnya manfaat SlNPV dan SeNPV sebagai agensia hayati pada ulat
grayak yang biasanya menyerang tanaman kacang-kacangan, tembakau dan sayuran,
maka NPV berpeluang besar untuk dikembangkan sebagai bio-pestisida yang memiliki
prospek komersial, tidak berdampak negatif bagi pengguna (user) serta ramah lingkungan.
Bio-insektisida VIR-X (VIREXI) secara spesifik hanya digunakan sebagai

pengendali ulat grayak Spodoptera exigua yang menyerang tanaman bawang merah,
bawang putih, bawang daun dan kucai. Sedangkan VIR-L (VITURA) hanya untuk
mengendalikan ulat grayak Spodoptera litura yang biasanya menyerangtanaman cabe,
kedelai/kacang-kacangan, dan tembakau. Namun tidak menutup kemungkinan juga
menyerang tanaman sayuran daun/buah yang lain, karena ulat Spodoptera litura tergolong
polifag (memiliki banyak inang).
4.3.2 Pemanfaatan NPV sebagai Bioinsektisida
Potensi pemanfaatan NPV untuk mengendalikan hama pertama kali diketahui pada
awal tahun 1900-an. Saat ini di luar negeri, beberapa jenis NPV telah diperjualbelikan
98
sebagai produk bio-insektisida, misalnya : Elcar (berbahan aktif HzNPV) digunakan untuk
mengendalikan Helicoverpa zea pada tanaman kapas di Amerika Serikat, Helicoverpa
armigera NPV digunakan pada tanaman kapas, tomat dan tembakau di Cina, SAN 404
(berbahan aktif AcMNPV) dan Diprion (berbahan aktif NsSNPV) telah dipasarkan secara
bebas.
Di Indonesia pemanfaatan NPV sebelumnya hanya terbatas pada tingkat petani-

petani pemandu PHT yang jumlahnya sangat kecil, dan belum diproduksi secara komersial
di dalam negeri. Pada tahun 1999, Laboratorium Pertanian Sehat (LPS) Dompet Dhuafa,
melakukan uji coba bio-pestisida NPV secara massal di Kab. Brebes pada tanaman
bawang merah dan kedelai sebagai bagian dari program pengembangan PHT. Mulai tahun
2002, LPS-DD mengembangkan SeNPV dan SlNPV tersebut dalam bentuk produk bio-
pestisida dengan merk VITURA (VIR-L) dan VIREXI (VIR-X) yang memiliki efektivitas
tinggi, ekonomis dan mudah diaplikasikan oleh petani.
4.3.3 Mekanisme dan Siklus Hidup NPV di Alam
Di alam, NPV biasanya ditemukan pada permukaan tanaman dan tanah. Manakala
termakan oleh serangga inang (ulat) dan masuk ke dalam saluran pencernaan yang
memiliki pH tinggi (> 10), maka polihedra akan pecah melepaskan virion infektif. Virion
yang terlepas dari matrik protein (pembungkus) akan memulai infeksi ke dalam sel-sel
saluran pencernaan ulat yang kemudian DNA akan mengadakan reflikasi di inti sel.
Proses infeksi SlNPV atau SeNPV dimulai dari tertelannya polihedra (berisi virus)
bersama pakan. Di dalam saluran pencernaan yang bersuasana alkalis, polihedra larut
sehingga membebaskan virus (virion). Selanjutnya virus menginfeksi sel-sel yang rentan.
Dalam waktu 1 – 2 hari setelah polihedra tertelan, ulat yang terinfeksi akan mengalami
gejala abnormal secara morfologis, fisiologis dan perilakunya.
Secara morfologis, hemolimfa ulat yang semula jernih berubah keruh dan secara
fisiologis, ulat tampak berminyak dan perubahan warna tubuh menjadi pucat kemerahan,
terutama bagian perut. Sedangkan secara perilaku, ulat cenderung merayap ke pucuk
tanaman, yang kemudian mati dalam keadaan menggantung dengan kaki semunya pada
bagian tanaman.
Permukaan kulit ulat akan mengalami perubahan warna dari pucat mengkilap pada
awal terinfeksi kemudian akan menghitam dan hancur. Apabila tersentuh, tubuh ulat akan
mengeluarkan cairan kental berbau seperti nanah yang berisi partikel virus. Ulat mati dalam
99
waktu 3 – 7 hari setelah polihedra VIR (berisi virus) tertelan. Sebelum mati ulat masih dapat
merusak tanaman, namun kerusakan yang diakibatkan ulat yang sudah terinfeksi sangat
rendah, karena terjadi penurunan kemampuan makan dari ulat grayak sampai 84 %.
4.3.4 Aplikasi dan Efektivitas Pemakaian Bioinsektisida
VIR-L dan VIR-X yang berbahan aktif SeNPV dan SlNPV diaplikasikan dengan alat
semprot, sama seperti yang digunakan untuk menyemprot pestisida (knapsack sprayer).
Aplikasi sebaiknya ditujukan untuk mengendalikan ulat instar 1–3. Penyemprotan
sebaiknya diarahkan ke permukaan daun bagian bawah dan dilakukan pada sore atau
malam hari agar tidak langsung terkena pengaruh sinar matahari, disamping itu ulat grayak
Spodopteramemiliki sifat nocturnal yaitu mencari makan pada malam hari(instar : fase antar
2 ganti kulit larva/ulat)
Cara penyimpanan, letakkan dus VIR ditempat yang tidak terkena langsung sinar
matahari dan VIR dapat disimpan pada suhu kamar selama lebih kurang 4 bulan. Untuk
penggunaan VIR dalam waktu yang cukup lama, sebaiknya simpan dus VIR tersebut dalam
lemari es (virus akan bertahan hidup pada suhu dingin).
Sinar ultra violet matahari penyebab utama menurunnya efektivitas NPV di

lapangan. Selain itu NPV juga peka terhadap suhu. Pada suhu 40 °C efektivitasnya masih
stabil, tetapi dengan meningkatnya suhu efektivitasnya cepat berkurang. Untuk mengurangi
kepekaan terhadap sinar matahari, maka virus ini diberi bahan pelindung berupa talk dan
molase. Persistensi/ketahanan NPV di lapangan setelah disemprotkan, mampu bertahan
sampai dengan 7 hari.
4.3.5 Keuntungan NPV

1. Memiliki inang spesifik dalam genus/famili yang sama, sehingga aman terhadap
organisme bukan sasaran.
2. Tidak mempengaruhi parasitoid, predator dan serangga berguna lainnya.
3. Dapat mengatasi masalah resistensi ulat grayak terhadap insektisida kimia.
4. Kompatibel dengan insektisida kimiawi yang tidak bersifat basa kuat.
5. Efektif membunuh hama/ulat sasaran yang menyerang pada tanaman bawang
merah, bawang putih, bawang daun, kacang-kacangan, tembakau, tomat dan cabe.
6. Ulat yang telah terinfeksi akan mati, kemudian dapat dijadikan pengendali hama
berikutnya bagi ulat yang sehat.
7. Tidak berbahaya bagi musuh alami ulat tersebut
100
8. Tidak berbau dan tidak berbahaya atau beracun bagi manusia dan hewan
perliharaan/ternak.
9. Dapat dicampur dengan perekat atau pupuk organik cair
10. Ramah lingkungan
11. Spesifik selektif (hanya dapat menginfeksi ulat dari spesies atau genus dimana dia
diisolasi)
12. Efektif untuk hama-hama yang sudah resisten terhadap pestisida
13. Dapat dipadukan dengan teknologi pengendalian yang lainnya
4.4 Ringkasan
Dari hasil-hasil penelitian yang telah dilakukan, bioinsektisida yang berbahan aktif
bakteri B. thuringiensis, fungi B. bassiana, dan ekstrak tumbuhan cukup prospektif untuk
dimanfaatkan sebagai alternatif dalam pengendalian hama pada hutan tanaman karena
efektif, selektif, dan aman terhadap lingkungan. Penggunaan B. thuringiensis dalam dua
bentuk, yaitu sebagai microbial spray biopesticide dan tanaman transgenik Bt. Cara kerja
Bt adalah sebagai racun pencernaan di mana dendotoksin (protein) yang telah mengalami
proteolisis dari nonaktif menjadi aktif menempel di sel pada epithelial, yang menyebabkan
keseimbangan osmosis sel terganggu, dan menyebabkan sel pecah dan disertai matinya
serangga.
NPV adalah virus yang berbentuk segi banyak dan terdapat di dalam inclusion
bodies yang disebut polihedra dan bereplikasi di dalam inti sel (nukleus). NPV telah
ditemukan pada 523 spesies serangga, sebagian besar NPV bersifat spesifik inang, yaitu
hanya dapat menginfeksi dan mematikan spesies inang alaminya. Virus NPV merupakan
virus yang dapat dimanfaatkan sebagai musuh alami terutama dalam menurunkan populasi
hama. Oleh karena itu, daripada memberantas hama menggunakan insektisida yang
dimana tidak aman bagi lingkungan dan manusia sebaiknya menggunakan virus NPV yang
aman terhadap lingkungan dan sebagai agen hayati.
Contoh Soal:
1. Sebutkan dan jelaskan apa yang dimaksud dengan bioinsektisida dan

pengelompokkan bioinsektisida berdasarkan karakteristik bahan kimianya.
2. Jelaskan secara singkat disertai gambar dari proses toksifikasi kristal protein Bt.
terhadap larva nyamuk atau insekta lainnya.
3. Sebutkan dan jelaskan kelebihan dan kekurangan bioinsektisida dibadingkan
denganinsektisida kimiawi.
101
4. Sebutkan dan jelaskan pengelompokan virus yang biasa digunakan sebagai
bioinsektisida dan kelebihan serta kekurangan penggunaan bioinsektisida yang
berasal dari material virus.
5. Jelaskan secara singkat mengapa paparan sinar UV dapat menurunkan sensitivitas
dari bioinsektisida Nuclear Polyhedrosis Virus (NPV).
6. Sebutkan dan jelaskan peranan bidang rekayasa genetika dalam pengembangan
bioinsektisida mikroba serta kelebihan dan kekurangan dari penggunaan
bioinsektisida mikroba hasil rekayasa genetika.
102
DAFTAR PUSTAKA
Agrios. 1998. Plant Pathologi.Hlmn : 262. ISBN 0120445654. New York: Academic Press.
Anonim, 2010a, Virus (Online), www.wikipedia.com, diakses tanggal 9 Mei 2010 pukul
12.36 wita
Anonim, 2010b, Patogen Serangga, diakses tanggal 9 Mei 2010 pukul 13.17 wita
Anonim, 2011, Bioinsektisida (online), http://id.wikipedia.org/wiki/Bioinsektisida, diakses
tanggal 10 September 2011, Makassar.
Asmaliyah dan B. Ismail. 1998. Uji Pengendalian Hama Pemakan Daun (Clouges
glauculalis pada Tanaman Pulai (Alstonia scholaris) dengan InsektisidaBiologi
secara In-Vitro. Buletin Teknologi Reboisasi 08. Palembang.
Asmaliyah, 2005, Prospek Pemanfaatan Bioinsektisida Sebagai Alternatif Dalam
Pengendalian Hama Pada Hutan Tanaman, 115-124.
Asmaliyah, E. Martin dan F.W. Sari. 2005. Karakteristik Serangan Hama Clouges
glauculalis pada Hutan Tanaman Pulai (Alstonia spp.) dan
UpayaPengendaliannyaMakalah Disampaikan pada Ekspose Hasil PenelitianHutan
Tanaman”Optimalisasi Peran IPTEK dalam Mendukung PeningkatanProduktivitas
Hutan dan Lahan, Baturaja 7 Desember 2005.
Asmaliyah. 2001. Pengujian Efektivitas Insektisida Mikroba Bacillus thuringiensis
Terhadap Penggerek Pucuk Mahoni Hypsipyla robusta. Buletin Teknologi Reboisasi
11(1). Palembang
Bahagiawati, 2002, Buletin AgroBio, Penggunaan Bacillus thuringiensis sebagai
Bioinsektisida, 5(1):21-28.
Firn, R.C., 2005, The Implications of the Screening Hypothesis, The Pharmaceutical
Industry and Bioprospecting, Biology Module 867. 3 pp.
Hardi, T.W dan H.H. Siringoringo. 2000. Identifikasi Mangrove dan Pengendalian dengan
Bakteri. Bul.Pen.Hut. 621:55-64. Puslitbang Hutan dan Konservasi Alam, Bogor.
Hofte, H. and H.R. Whiteley. 1989.Insecticidal crystal proteins of Bacillusthuringiensis.
Microbiol. Rev. 53:42-255.
Intari, S.E. 1997. Pengendalian Hama Kutu Sisik (Chionapsis sp.) yang Menyerang
Tanaman Mangrove di Bali. Bul.Pen.Hut. 605:19-26. Puslitbang Hutan dan
Konservasi Alam, Bogor.
News Room, 2010, Mengendalikan Hama dan Penyakit Tanaman dengan Bioinsektisida
(Online), diakses tanggal 9 Mei 2010 pukul 12.28 wita
103
Redana, I. W., 2011, Insektisida Mikroba (online), http://elangbiru3004.blogspot.com/,
diakses tanggal 10 September 2011, Makassar.
Sastrosiswojo, S. 2002. Kajian Ekonomi dan Budaya Penggunaan Biopestisida di
Indonesia. Kumpulan Makalah Lokakarya Keanekaragaman Hayati Untuk
Perlindungan Tanaman, Yogyakarta 7 Agustus 2002.
Smitley, D.R dan T.W. Davis. 1993. Aerial Application Bacillus thuringiensis for
Suppression of Gypsy Moth (Lepidoptera; Lymantridae) pada Populus, Quercus
Forest. Forest Entomology.
Suharti, M, Asmaliyah dan P. Hawiati. 1995. Tanaman Mimba (Azadirachta indica)
Sebagai Sumber Insektisida Nabati dalam Pengendalian HamaTanaman Hutan.
Bul.Pen.Hut. 589. Puslitbang Hutan dan Konservasi Alam,Bogor.
Sunarlim, N., dan Sutrisno, 2003, Perkembangan Penelitian Bioteknologi di Indonesia.
Buletin AgroBio 6(1): 1−7.
Widyariska, tanpa tahun, Teknologi Produksi Tanaman (Online), diakses tanggal 9 mei
2010 pukul 10.48 wita.
104
Istilah Arti
Bioinsektisida Bahan-bahan alami yang bersifat racun serta dapat
menghambat pertumbuhan dan perkembangan, tingkah laku,
perkembangbiakan, kesehatan, mempengaruhi kesetimbangan
hormon, penghambat makan, membuat mandul, sebagai
pemikat, penolak, dan aktivitas lainnya yang dapat
mempengaruhi organisme pengganggu tanaman
Insektisida biokimia Bahan yang terjadi secara alami yang dapat mengendalikan
hama dengan mekanisme non-toksik
Virion Occluded dalam tubuh protein dikenal sebagai polyhedra (NPV)
atau granula (GV)
B. thuringiensis Bakteri yang menghasilkan kristal protein yang bersifat
membunuh serangga (insektisidal) sewaktu mengalami proses
sporulasi
NPV Virus yang berbentuk segi banyak dan terdapat di dalam
inclusion bodies yang disebut polihedral dan mampu bereplikasi
sendiri di dalam inti sel (nukleus).
105
BAB 5
PRODUKSI ANTIGEN REKOMBINAN

SEBAGAI KANDIDAT VAKSIN
5.1 Pendahuluan
tinjauan umum protein manusia, (2) menjelaskan tinjauan umum rekayasa genetika, (3)
menjelaskan kegunaan teknologi rekombinan, (4) menjelaskan tinjauan umum vaksin, dan
(5) menjelaskan vaksin rekombinan untuk beberapa penyakit. Dalam perkembangannya,
teknologi bergerak dalam tiga tahap yaitu penelitian, pengembangan dan pemasyarakatan.
Diawali dengan penelitian dasar yang kurang memperhatikan kegunaan dari hasil
penelitian, dilanjutkan dengan penelitian terapan yang bertujuan mencari keterangan
lanjutan untuk program pengembangan, dan akhirnya dikembangkan dengan rancangan
rekayasa, baik terhadap produk maupun cara pengolahan dalam menciptakan barang-
barang baru untuk dimasyarakatkan atau dipasarkan. Hal yang paling baru dan ramai
dibicarakan dewasa ini adalah revolusi industri bioteknologi, sebagai hasil dari penemuan
dan meluasnya pengetahuan dasar tentang proses kehidupan pada tingkat molekul, sel
dan genetik.
Melalui bioteknologi, banyak permasalahan bersifat biologik yang pada masa

lampau belum diketahui oleh para ahli, sekarang telah dapat dipecahkan. Bioteknologi dan
rekayasa genetik yang menyajikan pemecahan baru terhadap masalah yang bersifat
biologik telah dapat menantang para ahli untuk lebih menaruh perhatian yang besar dalam
bidang ini. Berangkat dari dataran pemikiran yang membatasi bioteknologi sebagai sebuah
sistem pendekatan baru dalam mengubah bahan mentah melalui pengubahan yang
bersifat biologik menjadi produk yang berguna, maka paduan ilmu di bidang biologi,
biokimia dan rekayasa genetik ini diharapkan menghasilkan penemuan baru atau
penyempurnaan dalam pemecahan masalah kesehatan, pertanian dan lingkungan. Dengan
tidak mengenyampingkan dua masalah yang disebutkan terakhir, pada bagian ini mencoba
membatasi diri menatap perkembangan pengaruh bioteknologi dalam bidang kesehatan,
yaitu sejauh mana penerapan pemikiran dan cara bioteknologi untuk pemecahan masalah
kesehatan dewasa ini, khususnya produksi protein antigen rekombinan dengan
menggunakan teknik rekayasa genetika sebagai kandidat vaksin.
5. 2 Tinjauan Umum Protein Manusia
105
Walaupun telah dapat dipastikan bahwainformasi genetika berlokasi dalam
kromosom. Namun, dimana didalam kromosom itu masih banyak hal yang tidak diketahui.
Ini merupakan pertanyaan yang sulit, karena kromosom disusun oleh dua substansi yang
berlainan, protein dan asam nukleat. Dimana persenyawaan organik karena substansi-
substansi ini ditemukan dalam organisme hidup dan mengandung elemen karbon dan
hidrogen. Kita harus dapat menetapkan yang mana dari persenyawaan itu, protein atau
asam nukleat yang sebenarnya gen itu. Protein adalah makromolekul, molekul besar yang
kompleks, yang terdapat dalam semua sel. Protein memainkan peran penting dalam
struktur sel tubuh kita, semua membran seluler mengandung protein. Tingkatan struktur
suatu molekul protein dapat ditunjukkan melalui Gambar 5.1.
Gambar 5.1. Struktur dasar suatu protein dan berbagai tingkat struktur dan kompleksitas.
Seperti halnya protein dan karbohidrat, asam nukleat merupakan makromolekul

juga. Asam nukleat mengandung unit-unit yang disebut nukleotida yang dihubungkan oleh
ikatan fosfodiester. Tiap nukleotida mengandung gula, asam fosfat dan suatu basa yang
mengandung nitrogen. Gambar 5.2 memperlihatkan dari ketiga substansi ini. Bila
berpautan satu dengan yang lain melalui ikatan fosfodiester, nukleotida membentuk suatu
rantai yang disebut polinukleotida. Rantai polinukleotida disebut juga asam nukleat. Karena
jenis gula yang terdapat dalam asam nukleat dari kromosom organisme kompleks adalah
deoksiribosa, maka asam nukleat yang terdapat dalam kromosom kita disebut asam
deoksiribonukleat (DNA). Untuk keperluan vaksin DNA inilah yang akan diklon untuk
memproduksi protein-protein spesifik yang diinginkan (Pai, 1987).
106
Gambar 5.2.Subunit-subunit yang membentuk asam nukleat
5.3 Tinjauan Umum Rekayasa Genetika
Genetika berasal dari kata gen, yaitu suatu unit pembawa faktor keturunan yang
terdapat pada kromosom dalam inti setiap sel hidup. Sekarang diketahui bahwa inti
tersebut adalah DNA yang sangat berperan dalam biosintesis protein atau polipeptida.
Pada abad XX, ilmu genetika mengalami perkembangan yang pesat. Banyak
eksperimen dilakukan untuk mengetahui lebih dalam tentang faktor keturunan itu.
Kebanyakan eksperimen menggunakan bakteri Escherichia coli. Oleh karena biosintesis
protein ditentukan oleh struktur DNA yang terdapat dalam sel, maka apabila struktur DNA
diubah, struktur polipeptida yang terbentuk juga berubah. Eksperimen untuk mengubah
DNA ini merupakan awal dari rekayasa genetika yaitu usaha untuk mengatur polipeptida
yang terbentuk agar sesuai yang dikehendaki. Dalam sel bakteri Eschericha coli terdapat
DNA yang bentuknya melingkar disebut plasmid. Dengan menggunakan enzim
endonuklease plasmid dapat dipotong (digestion) dan diisolasi lalu DNA asing dicampur
dengan plasmid tersebut hingga terbentuk DNA baru yang merupakan gabungan DNA
bakteri dan DNA dari luar, kemudian dimasukkan ke dalam bakteri lagi. DNA rekombinan
ini akan membentuk protein atau polipeptida yang lain dari polipeptida yang biasanya
dibentuk oleh bakteri tersebut. Demikianlah garis besar pembentukan DNA rekombinan
yang selanjutnya menghasilkan polipeptida sebagaimana dikehendaki. Teknik ini sangat
berguna untuk memproduksi protein yang terdapat dalam tubuh manusia. Pembentukan
DNA rekombinan dapat dilihat pada Gambar 5.3 (Poedjadi, 1994).
107
Gambar 5.3 Pembentukan DNA Rekombinan
Bioteknologi modern ditandai dengan kemampuan pada manipulasi DNA.

Rantai/sekuen NA yang mengkode protein disebut gen. Gen ditranskripsikan menjadi
mRNA, kemudian mRNA ditranslasikan menjadi protein. Protein sebagai produk akhir
bertugas menunjang seluruh proses kehidupan, antara lain sebagai katalis reaksi biokimia
dalam tubuh (disebut enzim), berperan serta dalam sistem pertahanan tubuh melawan
virus, parasit dan lain-lain (disebut antibodi), menyusun struktur tubuh dari ujung kaki (otot
terbentuk dari protein actin, myosin, dan sebagainya) sampai ujung rambut (rambut
tersusun dari protein keratin), dan lain-lain. Beberapa hasil kloning gen manusia
ditunjukkan pada Tabel 5.1.
Tabel 5.1. Beberapa protein sebagai hasil kloning gen ( Brown, 1991)
Protein Penggunaan
Insulin Manusia Mengatur kadar glokosa darah
Somatostatin Manusia Mengatur pertumbuhan
Somatotropin manusia Hormon pertumbuhan
Interferon Manusia Senyawa antivirus
Mulut dan Kuku (VP1 dan VP2) Vaksin terhadap virus
Antigen Inti Hepatitis B Diagnosa hepatitis B
108
Dalam memanipulasi DNA, enzim-enzim yang berperan dapat berupa : (1) enzim
nuklease yang berfungsi memotong, memendekkan dan mendegradasi asam nukleat; (2)
enzim ligase yang menyambung asam nukleat menjadi satu; (3) enzim polimerase yang
membuat kopi dari molekul; (4) enzim modifikasi yang menghilangkan atau menambah
gugus kimiawi dan (5) enzim topoisomerase yang mengubah DNA berlilitan dari DNA
sirkular yang tertutup secara kovalen (brown, 1991).
5.4 Kegunaan Teknologi Rekombinan
Sumbangan utama teknologi DNA rekombinan adalah terhadap bidang biologi

molekul sendiri dan dalam penentuan proses asas biologi. Teknologi ini telah
membolehkan kita melakukan analisis struktur gen dengan terperinci terutamanya terhadap
gen eukariot. Kajian terhadap gen eukariot, terutamanya gen manusia ialah bidang yang
penting kerana genomnya yang besar. Pengklonan telah digunakan untuk mendiagnosis
penyakit yang diwarisi. Contoh beberapa penyakit adalah anemia sel bulan sabit, distrofi
otot dan fibrosis bersista. Beberapa penyakit lain diberikan dalam Tabel 5.2. Pengklonan
gen juga telah membolehkan kromosom manusia dipetakan dan banyak penyakit yang
diwarisi telah pun dapat ditempatkan pada kromosom tertentu termasuk juga onkogen-
onkogen manusia. Dengan menggunakan kaedah penghibridan in situ radioaktif, gen-gen
ini dapat ditempatkan pada tapak spesifik di kromosom. Kaedah ini melibatkan penggunaan
DNA terion yang radioaktif. Teknologi ini juga digunakan bagi penghasilan vaksin dan
protein yang penting dalam bidang pengobatan. Teknologi rekombinan DNA telah juga
digunakan dalam industri yang menggunakan bakteria sebagai kilang untuk penghasilan
protein yang penting. Tujuannya adalah supaya protein boleh dihasilkan dengan lebih cepat
dan dengan harga yang lebih murah. Contohnya ialah produksi insulin manusia pada sel
bakteri, interferon, pengaktif plasminogen, faktor VIII dan hormon pertumbuhan.
Tabel 5.2.Beberapa penyakit genetik yang telah terdiagnosis dengan teknik rekayasa
genetika.
Penyakit metabolisme lipid Penyakit Tay-Sachs

Penyakit Grauchers
Penyakit metabolisme karbohidrat Galaktosemia
Penyakit hemoglobin Anemia sel sabit
Talasemia
Hemofilia
Penyakit metabolisme lain Sindrom Lesch-Nyhan
Xeroderma pigmentosum
109
Produk lain yang dapat dikembangkan melalui rekayasa genetika adalah vaksin
untuk manusia dan ternak. Vaksin biasanya mengandung virus atau mikroorganisme yang
dilemahkan atau telah dimatikan, yang apabila diberikan kepada hewan atau manusia akan
menyebabkan antibodi, tetapi tidak menyebabkan penyakit yang bersangkutan menjadi
lebih parah. Bila kemudian dijumpai virus atau mikroorganisme yang benar-benar dapat
menimbulkan penyakit, manusia dan hewan yang telah diberi vaksin akan mampu
menanggulangi infeksi virus atau melawan mikroorganisme tadi dengan antibodi yang telah
ditimbulkan oleh vaksin (Sardjiko, 1991).
5.5 Tinjauan Umum Vaksin
Vaksin secara potensial dapat mencegah dan mengobati penyakit manusia.

Kemajuan baru di bidang vaksin seperti conjugated pneumococcal vaccines untuk orang
dewasa, nasal spray vaccines influenza, dan acellular pertussis vaccines untuk orang
dewasa, merupakan cara yang efisien untuk menghasilkan proteksi imun yang bertahan
lama. Penelitian sedang dilakukan pada vaksin yang banyak digunakan untuk penyakit-
penyakit di negara berkembang seperti malaria, hookworm, dengue, enterotoxigenic E. coli,
shigella, tuberkulosis. Vaksin terhadap penyakit non infeksi (seperti kanker, diabetes, dan
penyakit Alzheimer) dan ketergantungan nikotin dan kokain masih merupakan pengobatan
alternatif. Vaksin terhadap senjata biologi akan dimungkinkan dengan kemajuan pada
vaksin DNA.
Satu pendekatan yang sangat diminati ialah merangsang respon imun protektif yang
dikehendaki dengan cara menyuntikkan DNA yang direkayasa dari organisme infeksius
(enginereed DNA sequences). Jika antigen dapat diidentifikasi, rangkaian DNA yang
disandi untuk antigen protein sangat mungkin untuk disisipkan ke dalam pembawa/carrier
genom (seperti beberapa poxvirus atau alphavirus). Bila diberikan ke dalam host,
organisme ini (karena disisipi DNA) mengalami replikasi terbatas, protein yang dikehendaki
diproduksi, dan di dalam host berkembang respon imun terhadap protein tersebut. Dengan
strategi yang sama, naked DNA disuntik langsung ke dalam host untuk memproduksi
respon imun. Naked DNA adalah rangkaian sederhana (simple sequences) dari DNA yang
disisipkan ke dalam plasmid bakteri (extra-chromosomal rings of DNA) dan disuntikkan ke
dalam host (Isbagio, 2005).
110
Menurut (Brown, 1991), ada tiga cara yang dikembangkan untuk produk vaksin
rekombinan yaitu :
1. Kloning Dalam Vektor ekspresi

Jika gen yang mengkode protein antigen virus tertentu dapat diidentifikasi dan
diinsersikan ke dalam vektor ekspresi, maka cara-cara seperti yang diuraikan untuk sintesis
protein hewan dapat digunakan untuk produksi vaksin rekombinan. Stretegi ini telah
berhasil pada virus untuk penyakit mulut dan kuku serta hepatitis B.
a. Penyakit mulut dan kuku
Gen untuk protein mulut dan kuku yaitu VP1 dan VP3, telah diekspresikan dalam E.
coli. Pada keduanya dapat diperoleh beberapa juta molekul protein per sel, tetapi sayang
hanya VP3 yang terutama digunakan sebagai vaksin.
b. Penyakit Hepatitis B
Virus ini terdiri dari dua macam protein yaitu protein inti yang berhubungan dengan
genom virus dan protein selubung atau antigen permukaan yang utama. Protein inti
berhasil diproduksi dalam jumlah besar dalam E.coli rekombinan, sayang protein ini tidak
berguna sebagai vaksin, walaupun berperan penting dalam diagnosa penyakit. Antigen
permukaan utama yang akan merupakan vaksin yang berguna, tidak disintesis dalam
jumlah besar dalam E.coli. walaupun baru-baru ini telah dicapai sukses yang lebih besar
dengan gen untuk antigen permukaan yang diklon ke dalam ragi ( menggunakan vektor
ekspresi berasal dari YEp) dan sel hewan (menggunakan vektor SV40). Prinsip
penggunaan preparasi protein selubung virus yang diisolasi untuk dipakai sebagai vaksin
diperlihatkan pada Gambar 5.4.
Gambar 5. 4. Prinsip penggunaan preparasi protein selubung virus yang diisolasi untuk
dipakai sebagai vaksin
111
2. Virus Vaksinia Rekombinan
Penggunaan virus vaksinia hidup sebagai vaksin untuk cacar (variola) dilakukan
pada tahun 1796, ketika Jerner pertama kali menyadari bahwa virus yang tidak
membahayakan manusia ini dapat merangsang timbulnya kekebalan terhadap virus cacar
yang jauh kebih berbahaya. Istilah vaksin berasal dari vaksinia dan penggunaan vaksin ini
mengakibatkan lenyapnya penyakit cacar secara resmi pada tahun 1980.
Gagasan yang lebih baru bahwa virus vaksinia rekombinan dapat dipakai sebagai
vaksin hidup terhadap penyakit-penyakit lain. Jika misalnya gen yang mengkode protein
selubung virus, misalnya antigen permukaan virus hepatitis B disambung pada genom
vaksinian di bawah kontrol promotor vaksinia, maka gen tersebut akan diekspresikan
(gambar 5). Setelah diinjeksi ke dalam peredaran darah, replikasi virus rekombinan akan
menghasilkan tidak hanya partikel vaksinia baru, tetapi juga antigen permukaan utama
dalam jumlah yang berarti. Oleh karena itu akan timbul kekebalan terhadap penyakit cacar
maupun hepatitis B.
Gambar 5.5 Penalaran dibalik penggunaan virus vaksinia rekombinan yang potensial
112
Teknik di atas mempunyai potensi yang besar. Virus vaksinia rekombinan yang
mengekspresikan antigen permukaan utama virus hepatitis B (memberi kekebalan pada
simpanse), gen hemaglutinin influenza dan gen herpes telah dikonstruksi. Suatu gen yang
mengkode salah satu antigen permukaan pada protizoa yang menyebabkan malaria juga
telah diinsersikan pada genom vaksinia. Tetapi yang paling menarik adalah kemungkinan
produksi vaksin berspektrum lebar, yaitu vaksinia rekombinan yang mengekspresikan
berbagai macam antigen virus, sehingga akan didapat ketahanan terhadap penyakit-
penyakit hanya satu rangkaian inokulasi.
3. Peptida Antigenik
Komponen antigenik partikel virus dapat dikurangi bahkan di bawah protein

selubung yang dimurnikan. Segmen pendek protein selubung ini yang diisolasi juga dapat
menstimulasi sintesis antibodi yang memberikan perlindungan terhadap virus hidup
(Gambar 5.6). Pada virus mulut dan kuku, peptidedengan panjang 8 sampai 41 asam
amino yang berasal dari VP1, bersifat antigenik. Segmen pendek protein selubung
poliovirus juga dapat memberikan kekebalan. Sampai saat ini kebanyakan peptida
digunakan untuk penelitian tersebut disintesis dalam tabung percobaan dari subunit asam
amino, tetapi produksi peptida skala besar untuk digunakan dalam program vaksinasi dapat
dicapai dengan cara sintesis gen yang sesuai, diikuti dengan insersi ke dalam vektor
ekspresi yang diproduksi pada sel bakteri atau khamir.
Antibodi yang spesifik terhadap peptida dapat

melekat pada partikel virus
Partikel virus utuh
Gambar 5.6. Penalaran penggunaan peptida untuk vaksin terhadap virus
5.6 Vaksin Rekombinan Untuk Beberapa Penyakit
Salah satu perkembangan yang mendapat perhatian sangat tinggi dalam

pengobatan infeksi virus adalah pengobatan genetik. Dalam hal ini diharapkan dengan
memasukkan gen yang secara spesifik menghambat atau menghalangi ekspresi atau
113
fungsi produk gen viral tertentu akan menyebabkan replikasi virus di dalam sel terhalang
atau dibatasi. Selain itu mungkin pula sel direkayasa agar mampu mensekresi senyawa
yang menghambat infektivitas virus yang berada ekstra seluler. Teoretis keberhasilan terapi
genetik ini akan tergantung pada :(i) ketetapan seleksi sel atau jaringan, (ii) efisiensi
delivery system, (iii) ketepatan ekspresi, regulasi dan stabilitas produk gen dan (iv) efisiensi
penghambatan replikasi virus oleh produk gen tersebut. (Sjahrurachman, 2001).
1. Vaksin Cacar
Pemberantasan cacar didasarkan pada pemberian vaksinasi dengan virus vaccinia.

Jika menemukan penderita yang menyerupai cacar dan bukan cacar air: segera laporkan
hal ini kepada dinas kesehatan setempat. Di Amerika Serikat vaksin cacar (vaccinia virus)
dan Human Vaccinia Immune globulin untuk mengobati efek samping vaksinasi cacar
tersedia di CDC. Virus vaccinia, adalah virus vaksin yang digunakan untuk memberantas
variola (cacar), merupakan hasil rekayasa genetika menjadi vaksin rekombinan beberapa
masih dalam taraf uji klinik) dengan risiko terendah terjadi penularan terhadap kontak non
imun. “Immunization Practices Advisory Committee” (ACIP) merekomendasikan vaksinasi
cacar untuk semua petugas laboratorium yang mempunyai risiko tinggi terkena infeksi yaitu
mereka yang secara langsung menangani bahan atau binatang yang di infeksi dengan
virus vaccinia atau orthopoxvirus lainnya yang dapat menginfeksi manusia. Vaksinasi juga
perlu dipertimbangkan terhadap petugas kesehatan lain walaupun berisiko rendah
terinfeksi virus seperti dokter dan perawat. Vaksinasi merupakan kontraindikasi bagi
seseorang yang menderita defisiensi sistem imun (contoh: penderita AIDS dan kanker)
mereka yang menerima transplantasi, dermatitis tertentu, wanita hamil, penderita eczema.
Vaksin yang diberikan sudah dilengkapi dengan instruksi yang jelas (cara vaksinasi,
kontraindikasi, reaksi, dan komplikasi) yang harus diikuti dengan tepat. Vaksin harus
diulang kecuali muncul reaksi (salah satu reaksi adalah muncul indurasi eritematosa 7 hari
setelah vaksinasi) Booster diberikan dalam waktu 10 tahun kepada mereka yang masuk
kategori harus divaksinasi. WHO selalu menyimpan dan menyediakan vaccine seedlot
(virus vaccine strain Lister Elstree) dipakai untuk keadaan darurat. Vaksin tersebut ada di
Pusat kerjasama WHO (WHO Collaborating Center) untuk vaksin cacar di National Institute
of Public and Environment Protection di Bilthoven, The Netherlands (Chin, 2000).
2. Vaksin Influenza
Virus influensa adalah partikel berselubung berbentuk bundar atau bulat panjang,
merupakan genom RNA rangkaian tunggal dengan jumlah lipatan tersegmentasi sampai
114
mencapai delapan lipatan, dan berpolaritas negatif. Virus influensa merupakan nama
generik dalam keluarga Orthomyxoviridae dan diklasifikasikan dalam tipe A, B atau C
berdasarkan perbedaan sifat antigenik dari nucleoprotein dan matrix proteinnya. Virus
influensa unggas (Avian Influenza Viruses, AIV) termasuk tipe A. Telaah yang sangat
bagus mengenai struktur dan pola replikasi virus-virus influensa sudah dipublikasikan baru-
baru ini (Sidoronko dan Reichi, 2005). Determinan antigenik utama dari virus influensa A
dan B adalah glikoprotein transmembran hemaglutinin (H atau HA) dan neuroaminidase (N
atau NA), yang mampu memicu terjadinya respons imun dan respons yang spesifik
terhadap subtipe virus. Respons ini sepenuhnya bersifat protektif di dalam, tetapi bersifat
protektif parsial pada lintas, subtipe yang berbeda. Berdasarkan sifat antigenisitas dari
glikoprotein-glikoprotein tersebut, saat ini virus influensa dikelompokkan ke dalam
enambelas subtipe H (H1-H16) dan sembilan N (N1-N9). Kelompok-kelompok tersebut
ditetapkan ketika dilakukan analisis filogenetik terhadap nukleotida dan penetapan urutan
(sequences) gen-gen HA dan NA melalui cara deduksi asam amino (Fouchier, 2005). Cara
pemberian nama yang sesuai nomenklatur konvensional untuk isolat virus influensa harus
mengesankan tipe virus influensa tersebut, spesies penjamu (tidak perlu disebut kalau
berasal dari manusia), lokasi geografis, nomor seri, dan tahun isolasi. Untuk virus influensa
tipe A, subtipe hemaglutinin dan neuroamidasenya ditulis dalam kurung. Salah satu induk
strain virus influenza unggas dalam wabah H5N1 garis Asia yang terjadi akhir-akhir ini,
berhasil diisolasikan dari seekor angsa dari provinsi Guangdong, China. Oleh karena itu ia
diberi nama A/angsa/Guangdong/1/96 (H5N1) (Xu, 1999). Sedangkan isolat yang berasal
dari kasus infeksi H5N1 garis Asia pada manusia yang pertama kali terdokumentasikan
terjadi di Hong Kong (Claas, 1998), dan dengan demikian disebut sebagai A/HK/156/97
(H5N1).
Hemaglutinin, sebuah protein yang mengalami glikosilasi dan asilasi (glycosylated

and acylated protein) terdiri dari 562-566 asam amino yang terikat dalam sampul virus.
Kepala membran distalnya yang berbentuk bulat, daerah eskternal yang berbentuk seperti
tombol dan berkaitan dengan kemampuannya melekat pada reseptor sel, terdiri dari
oligosakharida yang menyalurkan derivat asam neuroaminic (Watowich, 1994). Daerah
eksternal (exodomain) dari glikoprotein transmembran yang kedua, neuroamidase (NA),
melakukan aktivitas enzimatik sialolitik (sialolytic ensymatic activity) dan melepaskan
progeni virus yang terjebak di permukaan sel yang terinfeksi sewaktu dilepaskan. Fungsi ini
mencegah tertumpuknya virus dan mungkin juga memudahkan gerakan virus dalam
selaput lendir dari jaringan epitel yang menjadi sasaran. Selanjutnya virus pun akan
menempel ke sasaran (Matrosivich, 2004). Hal ini membuat neoroamidase merupakan
115
sasaran yang menarik bagi obat antivirus (Garman and Laver, 2004). Kegiatan yang
terpadu dan terkoordinasi dapat menjadikan spesies glikoprotein antagonistik HA dan NA
dari strain virus tertentu merupakan hal yang penting bagi proses pelekatan dan pelepasan
virion (Wagner, 2002). Pelekatan ke protein permukaan sel dari virion-virion virus influensa
A tercapai melalui glikoprotein HA virus tertrimerisasi yang matang (mature trimerised viral
HA glycoprotein). Stratifikasi pelekatan tersebut didasarkan pada pengenalan spesies
asam sialik (N-asetil- atau N-asam glikollineuraminat) ujung akhir yang jelas, tipe hubungan
glikosidik ke galaktosa paling ujung (2-3 atau 2- 6) dan susunan fragmen yang terletak lebih
dalam dari sialil-oligosakharida yang terdapat di permukaan sel (Herrier 1995, Gambaryan
2005). Sebuah varietas dari sialil-oligosakharida yang lain diekspresikan dengan
pembatasan (restriksi) ke jaringan dan asal spesies di dalam penjamu lain dari virus
influensa.
Penyesuaian (adaptasi) glikoprotein HA maupun NA virus ke jenis reseptor yang

khas (spesifik) dari spesies penjamu tertentu merupakan prasyarat bagi terjadinya replikasi
DNA virus yang efisien (Ito 1999, Banks 2001, Mastrovich 2001, Suzuki 2000, Gambaryan
2004). Ini berarti terjadi perubahan bentuk unit pengikat dari protein HA setelah terjadi
penularan antar spesies (Gambaryan, 2006). Bagan mekanistik dari berbagai tipe reseptor
disajikan dalam Gambar 5.7. Virus influensa unggas biasanya menunjukkan afinitas tinggi
terhadap asam sialik yang terkaitkan dengan á 2-3 karena unsur ini merupakan tipe
reseptor yang paling dominan di jaringan epitel endodermik (usus, paru-paru) pada unggas
yang menjadi sasaran virus-virus tersebut (Gambaryan 2005a, Kim 2005). Sebaliknya,
virus influensa yang beradaptasi pada manusia terutama mencapai residu terkait 2-6 (2-6
linked residues) yang mendominasi sel-sel epitel tanpa silia (non-cilliated) dalam saluran
pernafasan manusia. Sifat-sifat dasar reseptor seperti ini menjelaskan sebagian dari sistem
pertahanan suatu spesies, yang membuat penularan influensa unggas ke manusia tidak
mudah terjadi (Suzuki 2000, Suzuki 2005). Tetapi akhir-akhir ini ditemukan ada sejumlah
sel epitel berbulu detar (cilliated cells) dalam trakhea manusia yang juga memiliki konjugat
glikoprotein serupa reseptor unggas dengan densitas yang rendah (Matrosovich 2004b),
dan juga dijumpai adanya sel-sel ayam yang membawa reseptor sialil yang serupa dengan
yang ada pada manusia dengan konsentrasi yang rendah. Hal ini mungkin dapat
menjelaskan mengapa manusia tidak sepenuhnya kebal terhadap infeksi virus influensa
unggas strain tertentu (Beare and Webster 1991). Pada babi dan juga burung balam, kedua
jenis reseptor tersebut dijumpai dalam densitas yang lebih tinggi yang membuat kedua
hewan ini mempunyai potensi untuk menjadi tempat pencampuran bagi strain virus unggas
116
dan manusia (Kida 1994, Ito 1998, Scholtissek 1998, Peiris 2001, Perez 2003, Wan and
Perez 2005).
Gambar 5.7.Bagan sifat-sifat dasar reseptor virus influensa A

(Sumber: Gambaryan 2005)
Ada sejumlah vaksin yang dikembangkan. Sebagian besar masih didasarkan pada
penggunaan virus utuh yang dibuat tidak aktif yang pemberiannya dilakukan dengan
menyuntikkan pada unggas satu persatu. Vaksin homolog yang sudah dilemahkan,
menggunakan strain HPAI yang sesungguhnya, memicu perlindungan secara baik tetapi
tidak memungkinkan pembedaan serologik baik pada vaksinnya maupun unggas yang
terinfeksi. Sebaliknya vaksin heterolog yang dilemahkan dapat digunakan sebagai vaksin
penanda ketika virus vaksin mengekspresikan subtipe HA yang sama tetapi subtipe NA
yang berbeda dibandingkan dengan virus liar (mis. vaksin H5N9 vs. HPAI H5N2). Dengan
mendeteksi antibodi yang spesifik terhadap subtipe NA, ciri serologik vaksin dan unggas
yang terinfeksi dapat dibedakan (Cattoli 2003). Tetapi metoda ini dapat sangat rumit dan
vaksin ini pun kurang sensitif. Meskipun demikian vaksin seperti itu dapat disimpan di bank
vaksin yang mempunyai beberapa subtipe H5 dan H7 dengan subtipe NA yang tidak
bersesuaian.
Proses genetik berbalik (reverse genetics) akan sangat membantu pembuatan

vaksin baik untuk kedokteran hewan maupun keperluan kedokteran manusia dengan
117
kombinasi HxNy yang diinginkan dalam lingkungan genetik yang mendukung (Liu 2003,
Neumann 2003, Subbarao 2003, Lee 2004, Chen 2005, Stech 2005). Pada saat ini vaksin
heterolog yang dilemahkan digunakan di lapangan di daerah wabah H5N1 di Asia
Tenggara dan juga Meksiko, Pakistan dan Italia Utara (mis. Garcia 1998, Swayne 2001).
Sebagai pengganti dari penggunaan sistem DIVA untuk vaksin dari virus yang dilemahkan,
diusulkan untuk menggunakan pendeteksian adanya antibodi yang spesifik NS-1 (Tumpey
2005). Antibodi-antibodi ini terbentuk dengan titer yang tinggi pada unggas yang terinfeksi,
tetapi rendah pada yang sudah divaksinasi dengan vaksin yang dilemahkan. Vaksin yang
terbentuk melalui rekombinan dalam vektor hidup menampilkan gen HA jenis H5 atau H7
yang terdapat dalam kerangka virus atau bakteri yang dapat menginfeksi spesies unggas.
Di satu sisi vaksin ini memungkinkan pembedaan cara DIVA secara jelas, di sisi lain
imunitas terhadap virus vektor akan yang sudah ada sebelumnya akan mempengaruhi
keberhasilan vaksinasi. Suatu pengujian dengan menggunakan vaksin rekombinan cacar
unggas di lapangan sedang dilakukan di Meksiko dan AS. Pada akhirnya, keberhasilan
vaksinasi dengan protein rekombinan HA dan DNA menggunakan plasmid penampil HA
telah dibuktikan dalam suatu percobaan (Crawford 1999, Kodihall 1997). Kini sedang
direncanakan vaksinasi yang dilakukan secara luas di negara-negara Asia Tenggara
(Notmile 2005).
3. Vaksin Hepatitis B
Pada mulanya vaksin hepatitis B berasal dari plasma-derived antigen yaitu antigen diisolasi
dan dipurifikasi dari darah orang yang pernah terinfeksi virus hepatitis B. selama ini PT.
Biofarma Persero (perusahaan farmasi pembuat vaksin) mengambil dari darah-darah di
PMI (Palang Merah Indonesia) yang tercemar hepatitis B. Hal ini sangat berguna pada
waktu awal vaksinasi hepatitis B, karena belum ada vaksin rekombinan, namun akhir-akhir
ini sudah berhasil dikembangkan vaksin hepatitis B rekombinan yang diproduksi pada sel
Saccaromyces cerevisiae. Biofarma paham bahwa pembuatan vaksin dari plasma-derived
antigen ini hanya tahap sementara, karena untuk itu tergantung dari tersedianya darah
yang tecemar hepatitis B. Kalau proses imunisasi massal berhasil, jumlah darah yang
tercemar hepatitis B makin sedikit. Di samping itu makin lama kita makin prihatin dengan
adanya potensi kontaminasi virus lain yang ada di darah misalnya HIV.
Oleh karena itu, di banyak negara, bukan hanya di Indonesia, dengan munculnya
teknologi rekayasa genetika, maka vaksin hepatitis B yang dipakai sudah berpindah ke
vaksin hepatitis B rekombinan. Dalam vaksin rekombinan kita tidak perlu menumbuhkan
bakteri/virus yang berbahaya untuk membuat vaksin, melainkan kita bisa ambil informasi
118
genetik dari bakteri/virus yang akan dipakai untuk imunisasi dan menklon informasi genetik
ini ke dalam organisme industri.
Jadi untuk vaksin hepatitis B kita bisa mengambil hanya informasi genetik yang kita
perlukan untuk membuat vaksin hepatitis B. Kita bisa tanamkan informasi genetik itu ke
dalam bakteri seperti E. coli, bisa kita masukkan ke sel ragi, chinese hamster ovary, atau
sel serangga. Produksi vaksin rekombinan hepatitis B melalui proses fermentasi karena
ragi yang sudah kita masukkan informasi genetik ke bentuk gen yang diperlukan hanya
perlu ditumbuhkan di dalam fermentol dan produknya kemudian kita purifikasi. Sehingga,
lanjutnya, kita tidak perlu lagi orgasnisme yang patogen. Ia mengatakan yang dipakai untuk
generasi pertama dari vaksin rekombinan hepatitis B, baik di luar negeri maupun oleh
Biofarma hanya small protein (Anonim, 2002).
5.7 Ringkasan
Penerapan bioteknologi dalam bidang kesehatan meliputi diagnosis, pengobatan

dan pencegahan penyakit. Bioteknologi baik dari segi manipulasi gen ataupun rekayasa,
keduanyadapat dimanfaatkan untuk menyempurnakan cara-cara diagnosis, pengobatan
dan pencegahan penyakit. Dari teknik rekayasa genetika diperoleh bahwa protein manusia
dapat diklon untuk memproduksi senyawa-senyawa yang sangat berguna termasuk
keperluan vaksinasi terhadap penyakit tertentu. Senyawa vaksin ini dapat meningkatkan
kekebalan tubuh terhadap serangan kuman penyakit yang disebut sebagai antibodi.
Contoh Soal:
1. Sebutkan dan jelaskan disertai gambar atau diagram tahap-tahap kloning gene vaksin
hepatitis B serta bahan/material yang diperlukan pada setiap tahap produksi protein
rekombinant tersebut.
2. Sebutkan dan jelaskan dua tujuan utama dari kloning gene dan mengapa teknik kloning
sangat menunjang pengembangan bioteknologi modern.
3. Sebutkan kelebihan dan kekurangan masing-masing dari kultur sel bakteri dan kultur sel
mamalia dalam kaitannya dengan proses produksi protein rekombinant untuk keperluan
vaksin recombinant subunit serta contoh protein vaksin yang berhasil diproduksi dengan
teknik rekayasa genetika.
4. Sebutkan dan jelaskan aplikasi DNA rekombinant atau bioteknologi molekular dalam
bidang Pengobatan dan Kesehatan pada manusia.
119
DAFTAR PUSTAKA
Andi (2003), Peranan Bioinformatika dalam Dunia Kedokteran,

ttp://ikc.vlsm.org/populer/andi-bioinformatika.php per 1 Januari 2004.
Anonim, 2002, Vaksin Rekombinan Hepatitis B dengan Galur Indonesia, Repuplika Online.
Biotechnol Bioeng, 88, 1-14.
Brown, T. A., 1991, Pengantar Kloning Gen, Yayasan Essentia Medica, Yogyakarta.
Chin, J., 2000, Manual Pemberantasan Penyakit Menular
Claas EC, Osterhaus AD, van Beek R, et al, 1998 Human influenza A H5N1 virus related
to a highly pathogenic avian influenza virus. Lancet; 351: 472-7.
Fouchier RA, Munster V, Wallensten A, et al, Characterization of a novel influenza A virus

hemagglutinin subtype (H16) obtained from black-headed gulls. J Virol 2005; 79:
2814-22.
Gambaryan A, Tuzikov A, Pazynina G, Bovin N, Balish A, Klimov A., 2006, Volution of the
receptor binding phenotype of influenza A (H5) viruses. Virology, 344: 432 8.
Garman E, Laver G., 2004, Controlling influenza by inhibiting the virus's neuraminidase.
Curr Drug Targets; 5: 119-36.
Herrler G, Hausmann J, Klenk H. D., 1995, Sialic acid as receptor determinant of ortho-
and paramyxoviruses. In: Rosenberg A (ed), Biology of the Sialic Acids, Plenum Press
NY,. 315-336
Isbagio, D. W., 2005, Masa Depan Pengembangan Vaksin Baru, Cermin Dunia
Kedokteran, (148), Jakarta, 12.
Ito T, Kawaoka Y, Nomura A, Otsuki K., 1999, Receptor specificity of influenza A viruses
from sea mammals correlates with lung sialyloligosaccharides in these animals. J Vet
Med Sci; 61, (8), 955.
Kim JA, Ryu SY, Seo S. H., 2005, Cells in the respiratory and intestinal tracts of chicken
have different proportions of both human and avian influenza virus receptors. J
Microbiol; 43: 366-9.
120
Matrosovich MN, Matrosovich TY, Gray T, Roberts NA, Klenk HD., 2004, Neuraminidase is
important for the initiation of influenza virus infection in human airway epithelium. J
Virol, 78 (7), 1266.
Poedjiadi, A., 1994, Dasar-dasar Biokimia, UI-Press, Jakarta.
Sardjoko, 1991, Bioteknologi, PT Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.
Shah, F. H., ______, Asas Teknologi DNA Rekombinan
Sidorenko Y, Reichl U., 2004, Structured model of influenza virus replication in MDCK cells.
Sjahrurachman, A, 2001, Fakta dan Tantangan dalam Virologi Kedokteran penekanan pada
vaksinasi dan pengobatan, Cerminan Dunia Kedokteran, (130), 43.
Sugiharto, B., Ermawati, N., Sakikibara, H, 2003, Pembuatan Antibodi Poliklonal Secara
Cepat Untuk Deteksi Protein Drought-Inducible Pada TanamanTebu, Jurnal ILMU
DASAR, 4 (2), 108-115.
Wagner R, Matrosovich M, Klenk H. D., 2002, Functional balance between haemagglutinin

and neuraminidase in influenza virus infections. Rev Med Virol, 12, 159-66.
Watowich SJ, Skehel JJ, Wiley D. C., 1994, Crystal structures of influenza virus
hemagglutinin in complex with high-affinity receptor analogs. Structure, 2, 719-31.
Xu X, Subbarao, Cox NJ, Guo Y., 1999, Genetic characterization of the pathogenic
influenza A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1) virus: similarity of its hemagglutinin gene
to those of H5N1 viruses from the 1997 outbreaks in Hong Kong. Virology, 261: 15-9.
121
Istilah Arti
Protein Makromolekul yang kompleks tersusun atas residu asam
amino yang terdapat dalam semua sel hidup.
Gene Unit pembawa faktor keturunan yang tersusun atas

molekul DNA terdapat pada kromosom dalam inti setiap
sel hidup.
Virus influensa Partikel berselubung berbentuk bundar atau bulat panjang,

merupakan genom RNA rangkaian tunggal dengan jumlah
lipatan tersegmentasi sampai mencapai delapan lipatan,
dan berpolaritas negatif.
Endonuklease Kelompok enzim restriksi yang mampu memotong molekul
DNA
Palindrome Susunan spesifik urutan nukleotida yang mampu dikenali

oleh enzim restriksi untuk melakukan proses pemotongan.
Vektor ekspresi Urutan DNA sirkuler untuk menyisipkan DNA asing

sehingga dapat diekspresi menjadi protein recombinant.
122
BAB 6
SEL INDUK DALAM BIOTEKNOLOGI KESEHATAN
6. 1 Pendahuluan
pengertian sel induk, (2)menjelaskan karakteristik dan jenis sel induk, (3)menjelaskan
aplikasi kultur sel induk, dan (3) menjelaskan perkembangan penelitian sel induk di
Indonesia, dan (4) menjelaskan bioetika dan kontroversi pada penggunaan sel
induk.Penanganan kesehatan yang berhubungan dengan penyakit kelainan fungsi organ
semakin penting. Hal ini nampak pada data menyangkut kegiatan, permintaan transplantasi
organ, dan ketersediaan organ transplan. Dari data tersebut, terdapat perbedaan yang
sangat jauh antara permintaan organ dengan jumlah organ yang tersedia.Berbagai upaya
telah dilakukan untuk memenuhi kebutuhan akan penyediaan organ tersebut, namun
belumlah mencukupi mengingat jumlah permintaan yang meningkat tiap tahunnya. Pada
dekade terakhir perhatian dan penelitian dalam bidang selinduk(stem cell) mengalami
kemajuan yang amat pesat. Hal ini tidak terlepas dari upaya manusia untuk mengobati
penyakit-penyakit yang sudah tidak mungkin untuk diobati lagi baik secara konservatif
maupun operatif.
Para ahli saat ini telah mulai menengok dan meneliti kemungkinan penggunaan
selindukuntuk mengobati penyakit-penyakit atau kelainan-kelainan yang tak mungkin lagi
untuk diobati dengan obat-obatan atau tindakan operatif, khususnya penyakit degeneratif
maupun kelainan lainnya seperti trauma, keganasan dan sebagainya. Selain itu sel induk
juga digunakan dalam penelitian untuk mencari obat-obat baru pada tingkat laboratorium
maupun untuk mempelajari patogenesis penyakit. Perkembangan penelitian tentang
penggunaan dan penerapan sel induk ini tidak terlepas dari potensi nilai ekonomi dan
bisnis yang akan diraih manakala sel induk ini sudah dapat digunakan untuk mengobati
penyakit atau kelainan pada penderita dan ditemukannya obat-obatan baru.
Dalam perkembangannya semenjak tahun 1959 tentang keberhasilan pembuahan

in vitro pada kelinci sampai saat ini telah mengalami banyak perkembangan yaitu
keberhasilan dalam membiakkan jaringan manusia seperti sel islet pankreas, neuron, sel
otot cardiac yang kesemuanya itu berasal dari sel induk(Stem Cell). Penelitian dan
pemanfaatan sel induk sangat menarik perhatian masyarakat dunia karena potensinya
dalam menunjang kesehatan manusia. Jaringan yang telah berhasil ditumbuhkan tersebut
kemudian dapat ditransplantasikan atau dicangkokkan pada manusia sebagai suatu solusi
atas berbagai permasalahan kesehatan, terutama penyakit keturunan secara genetis.
123
Terapi ESC cukup memberikan harapan bagi para penderita penyakit keturunan secara
genetis yang relatif permanen seperti Alzheimer, Diabetes melitus, kerusakan permanen
pada jaringan atau organ. Dalam bagian ini kita akan membahas masalah sel induk dan
aplikasinya dalam bidang bioteknologi kesehatan.
6.2 Pengertian Sel Induk
Dalam biologi klasik, sel digolongkan sebagai sel somatik atau sel benih. Sel ini
mengisi jaringan-jaringan dalam tubuh, mengandung dua salinan dari masing-masing
kromosom, dan bersifat diploid. Sel somatik umumnya sangat terdiferensiasi atau matang.
Sel terdiferensiasi biasanya berupa sel yang sangat terspesialisasi dan sudah sangat
berkembang. Beberapa waktu yang lalu, para peneliti menemukan bahwa sel tak
terdiferensiasi (sel dewasa) hidupdiantara sel somatik didalam organ tubuh. Kelompok sel
ini memiliki kemampuan khusus, seperti dapat memilih tugas masing-masing. Sel semacam
ini disebut sel induk. Secara definisi sederhana, sel induk (Stem cell) atau sel induk adalah
sel yang dalam perkembangan embrio manusia menjadi sel awal yang tumbuh menjadi
berbagai organ manusia. Sel ini belum terspesialisasi dan mampu berdeferensiasi menjadi
berbagai sel matang dan mampu meregenerasi diri sendiri. Sel induk merupakan sel yang
dapat bereplikasi menjadi mature cell dengan karakteristik dan bentuk khas (1,2).
Stem cell adalah sel yang tidak atau belum terspesialisasi yang mempunyai 2 sifat
yaitu pertama mempunyai kemampuan untuk berdiferensiasi menjadi sel lain. Dalam hal ini
stem cell mampu berkembang menjadi berbagai jenis sel matang, misalnya sel saraf, sel
otot jantung, sel otot rangka, sel pankreas, dan lain-lain. Kedua mempunyai kemampuan
untuk memperbaharui atau meregenerasi dirinya sendiri (self-regenerate/self-renew).
Dalam hal ini stem cell dapat membuat salinan sel yang persis sama dengan dirinya
melalui pembelahan sel.9
Stem cell memiliki kemampuan klonogenik dan memperbaiki diri, serta

berdiferensiasi menjadi berbagai jenis sel (totipoten). Stem cell embrionik berasal dari
sekumpulan sel di bagian dalam dari embrio mamalia pada awal konsepsi (stadium
blastosist). Dalam pembiakan, sebagian sel ini tumbuh menjadi prekursor. Prekursor yang
ditransplantasikan pada hewan percobaan yang mengalami degenerasi apoptotik, akan
bermigrasi ke daerah yang mengalami degenerasi. Selanjutnya, sel tersebut akan
berdiferensiasi menggantikan fungsi sel yang mengalami degenerasi.
Sel induk pertama kali dikenal dan digunakan dalam pengobatan yang diisolasi dari
bagian sumsum tulang belakang. Sel ini dapat berupa sel monosit, limfosit, neutrofil,
124
basofil, dan eritrosit. Sel-sel tersebut menyatu membentuk sel darah. Sel yang menjadi
cikal bakal sel darah manusia disebut sel hematopoietik, sehingga sel induk yang
ditemukan dalam sumsum tulang belakang disebut sel indukhematopoietikatau
hematopoietic steam cell (HSC).
6.3 Karakteristik dan Jenis Sel induk (Stem cell)
Sel induk mempunyai dua sifat yang khas yaitu:
1. Differensiasi (Differentiate) yaitu kemampuan untuk berkembang menjadi sel lain.

Selindukmampu berkembang menjadi berbagai jenis sel yang khas (spesifik)
misalnya sel saraf, sel otot jantung, sel otot rangka, sel pankreas dan lain-lain
2. Regenerasi (Self regenerate/self renew) yaitu kemampuan untuk memperbaharui
atau meregenerasi dirinya sendiri. Sel induk mampu membuat salinan sel yang persis
sama dengan dirinya melalui pembelahan sel.
Berdasarkan kemampuannya untuk berdifferensiasi sel induk dibagi menjadiempat

jenis yaitu:
1. Totipotent yaitu sel induk yang dapat berdifferensiasi menjadi semua jenis sel. Yang
termasuk dalam sel induk totipotent adalah zigot. Sel ini merupakan sel embrionik
awal yang mempunyai kemampuan untuk membentuk berbagai jenis sel termasuk
membentuk satu individu yang utuh. Disamping mempunyai kemampuan untuk
membentuk berbagai sel pada embrio sel totipotent juga dapat membentuk sel-sel
yang menyusun plasenta. Sel ini berasal dari sel telur yang mempunyai kemampuan
menjadi sel dan jaringan embrio serta jaringan yang mendukung pertumbuhan embrio
itu sendiri. Mamalia mempunyai 200 jenis sel yang meliputi sel saraf (neuron), sel otot
(miosit), sel kulit (epitelial), sel darah (eritrosit, monosit,linfosit dll), sel tulang
(osteosit) dan sel kartilago (kondrosit). Sel yang juga berperan pada pertumbuhan
embrio meliputi jaringan ekstraembrional, plasenta dan tali pusat.
2. Pluripoten yaitu Sel berasal dari 3 lapisan germinal embrio yang berasal dari inner
cell blastokis sebelum menempel pada dinding uterus. Ketiga lapisan tersebut terdiri
dari; mesoderm, endoderm dan ektoderm yang merupakan cikal dari semua sel
dalam tubuh.
Mesoderm merupakan cikal dari sumsum tulang, korteks adrenal, jaringan limfe, otot
polos, otot jantung, otot rangka, jaringan ikat, sistem urogenital dan sistim vaskular.
Entoderm merupakan cikal dari timus, tiroid, paratiroid, laring, trakhea, paru, vesika
125
urinaria, vagina, uretra, GIT. Sedangkan lapisan terakhir, ektoderm merupakan cikal
dari kulit, jaringan saraf, medula adrenal, hipofisis, jaringan ikat kepala dan wajah,
mata dan telinga. tetapi tidak dapat menjadi jaringan ekstraembrionik seperti plasenta
dan tali pusat. Yang termasuk stem cells pluripotent adalah embryonic stem cells.
3. Multipotent yaitu stem cell yang dapat berdifferensiasi menjadi banyak jenis sel
misalnya hemopoetic stem cells yang terdapat pada sumsum tulang yang mempunyai
kemampuan untuk berdifferensiasi menjadi berbagai jenis sel yang terdapat dalam
darah seperti eritrosit, lekosit dan trombosit. Contoh lainnya adalah neural stem cells
yang mempunyai kemampuan berdifferensiasi menjadi sel saraf dan sel glia.
4. Unipotent yaitu stem cells yang hanya dapat menghasilkan satu jenis sel. Berbeda
dengan non stem cells, stem cells mempunyai sifat masih dapat memperbaharui atau
meregenerasi diri (self-regenerate/self renew). Contohnya erythroid progenitor cells
hanya mampu berdifferensiasi menjadi sel darah merah.
Gambar 6.1 Proses diferensiasi berbagai jenis sel pada jaringan tubuh manusia
Berdasarkan sumbernya 1,3,4 stem cell dapat dibagi menjadi lima jenis yaitu:
1. Zigot yaitu pada tahap sesaat setelah sperma bertemu ovum (fertilisasi)
2. Embryonic stem cells yaitu sel-sel stem yang diperoleh dari inner cell mass dari
suatu blastocyst (embrio yang terdiri atas 50-150 sel, kira-kira hari ke-5 pasca
126
pembuahan). Embryonic stem cells biasanya didapatkan dari sisa embrio yang tidak
dipakai dari IVF (in vitro fertilization). Penggunaan embryonic stem cells ini hingga
kini masih menjadi isu etik yang kontroversial. Sel stem ini mempunyai sifat dapat
berkembang biak secara terus menerus dalam media kultur optimal pada kondisi
tertentu dan dapat diarahkan untuk berdifferensiasi menjadi berbagai sel yang
terdifferensiasi seperti sel jantung, sel kulit, neuron, hepatosit dan sebagainya.
3. Fetus yang dapat diperoleh dari klinik aborsi.
4. Stem cell darah tali pusat yaitu stem cell yang diambil dari darah plasenta dan tali
pusat segera setelah bayi lahir. Stem cells dari darah tali pusat merupakan jenis
hematopoetic stem cells dan ada yang menggolongkan kedalam adult stem cells.
Gambar 6.3.Proses fertilisasi sel telur dan sperma zigot, morula, blastosit, dan sel induk
yang diekstrak dari bagian dalam sel yang dibiakan secara in vitro sel
menjadi sel jaringan lain yang tergantung dari media pertumbuhannya.
127
Sampai saat ini ada 2 tipe stem cells yang telah ditemukan dalam darah tali pusat
yaitu hematopoetic stem cells, dan mesenchymal stem cells. Selain kedua jenis stem
cells tersebut di dalam darah tali pusat masih ada beberapa tipe lain yang telah
ditemukan seperti neuron like stem cells, tetapi hal ini masih memerlukan penelitian
lebih lanjut5. Darah tali pusat mempunyai immunogenicity yang lebih rendah6,
isolasinya tidak membutuhkan prosedur yang invasif dan untuk transplantasi tidak
membutuhkan 100% ketepatan HLA (human leucocyte antigen)7.
5. Adult stem cells yaitu stem cells yang diambil dari jaringan dewasa, misalnya
a. Sumsum tulang
Ada 2 jenis stem cells pada sumsum tulang yaitu
1) hematopoetic stem cells yaitu stem cells yang akan berkembang menjadi
berbagai jenis sel darah.
2) stromal stem cells atau disebut juga mesenchymal stem cell
b. Jaringan lain pada dewasa seperti pada susunan saraf pusat, adiposa (jaringan
lemak), otot rangka, dan pankreas.
Gambar 6.4Proses differensiasi jaringan sel dewasa (adult stem cell) menjadi sel jaringan
lain
128
Adult stem cell mempunyai sifat plastis artinya selain berdifferensiasi menjadi sel
yang sesuai dengan jaringan asalnya adult stem cells juga dapat berdifferensiasi menjadi
sel jaringan lain, misalnya neural stem cells dapat berubah menjadi sel darah, stromal stem
cell dari sumsum tulang dapat berubah menjadi sel otot jantung dan sebagainya.
6.4 Aplikasi Kultur Sel Induk
Stem cells dapat digunakan untuk keperluan baik dalam bidang riset maupun
pengobatan. Adapun penggunaan kultur stem cells adalah sebagai berikut:
1. Terapi gen
Stem cells khususnya hematopoetic stem cells digunakan sebagai pembawa
transgen kedalam tubuh pasien dan selanjutnya dilacak apakah jejaknya apakah
stem cells ini berhasil mengekspresikan gen tertentu dalam tubuh pasien. Adanya
sifat self renewing pada stem cell menyebabkan pemberian stem cells yang
mengandung transgen tidak perlu dilakukan berulang-ulang. Selain itu hematopoetic
stem cells juga dapat berdifferensiasi menjadi bermacam-macam sel sehingga
transgen tersebut dapat menetap diberbagai macam sel.
2. Penelitian untuk mempelajari proses-proses biologis yang terjadi pada organisma
termasuk perkembangan organisma dan perkembangan kanker
3. Penelitian untuk menemukan dan mengembangkan obat-obat baru terutama untuk
mengetahui efek obat terhadap berbagai jaringan
4. Terapi sel (cell based therapy)
Stem cell dapat hidup diluar tubuh manusia, misalnya di cawan petri. Sifat ini dapat
digunakan untuk melakukan manipulasi pada stem cells yang akan ditransplantasikan
ke dalam organ tubuh untuk menangani penyakit-penyakit tertentu tanpa
mengganggu organ tubuh.
6.4.1 Penggunaan Stem cell Dalam Pengobatan Penyakit
Para ahli saat ini sedang giat melakukan berbagai penelitian untuk menggunakan
stem cell dalam mengobati berbagai penyakit. Penggunaan stem cells untuk mengobati
penyakit dikenal sebagai Cell Based Therapy. Prinsip terapi adalah dengan melakukan
transplantasi stem cells pada organ yang rusak. Tujuan dari transplantasi stem cells ini
adalah
1. Mendapatkan pertumbuhan dan perkembangan sel-sel baru yang sehat pada

jaringan atau organ tubuh pasien
129
2. Menggantikan sel-sel spesifik yang rusak akibat penyakit atau cidera tertentu dengan
sel-sel baru yang ditranspalantasikan.
Sel stem embryonic sangat plastik dan mempunyai kemampuan untuk

dikembangkan menjadi berbagai macam jaringan sel seperti neuron, kardiomiosit,
osteoblast, fibroblast, sel-sel darah dan sebagainya, sehingga dapat dipakai untuk
menggantikan jaringan yang rusak. Sel stem dewasa juga dapat digunakan untuk
mengobati berbagai penyakit degeneratif, tetapi kemampuan plastisitasnya sudah
berkurang. Keuntungan dari penggunaan sel stem dewasa yaitu tidak atau kurang
menimbulkan masalah dan kontroversi etika. Darah tali pusat (umbilical cord blood) saat ini
sedang gencar diteliti manfaatnya untuk mengatasi berbagai penyakit degeneratif karena
lebih mudah didapat, banyak mengandung stem cells, immunogenecity rendah,
plastisitasnya cukup baik dan tidak membutuhkan 100% kecocokan HLA.
Dengan memberikan nutrisi yang cocok stem cell dapat memperbanyak diri pada
media spesifik di laboratorium tanpa mengalami proses differensiasi, sehingga
menghasilkan turunan stem cells dengan materi genetik yang sama yang berguna untuk
riset.
Ada beberapa alasan penggunaan stem cell dalam cell based therapy:
1. stem cell dapat diperoleh dari pasien sendiri, artinya transplantasi dapat bersifat
autolog sehingga menghindari potensi rejeksi. Berbeda dengan transplantasi organ
yang membutuhkan organ donor yang harus cocok (match), transplantasi stem cells
dapat dilakukan tanpa organ donor yang sesuai.
2. mempunyai kemampuan untuk berproliferasi yang besar sehingga dapat diperoleh
sel dalam jumlah besar dari sumber yang terbatas. Pada luka bakar yang luas
jaringan kulit yang tersisa tidak cukup untuk menutupi lesi luka baker tersebut. Hal ini
dapat diatasi dengan menggunakan terapi stem cell.
3. mudah dimanipulasi untuk mengganti gen yang sudah tidak berfungsi lagi melalui
metoda transfer gen.
4. mempunyai kemampuan untuk bermigrasi kejaringan target misalnya ke otak.
5. mempunyai kemampuan untuk berintegrasi dengan jaringan host dan berinteraksi
dengan jaringan sekitarnya.
Keuntungan penggunaan transplantasi stem cells untuk mengobati penyakit adalah:
1. tidak perlu adanya kecocokan donor.
130
2. transplantasi autologous lebih baik untuk digunakan.
3. untuk mencegah terjadinya reaksi penolakan jaringan dapat digunakan metoda
somatic cell nuclear transfer) atau terapi kloning. Therapeutic cloning atau disebut
Somatic Cell Nuclear Transfer (SCNT)2,5 adalah suatu teknik yang bertujuan untuk
menghindari resiko penolakan atau rejeksi. Pada teknik ini inti sel telur donor
dikeluarkan dan diganti dengan inti sel resipien.
Sel yang telah dimanipulasi ini kemudian akan membelah diri dan setelah menjadi
blastokista maka inner cell massnya akan diambil sebagai embryonic stem cells. Stem cells
ini kemudian akan dimasukkan kembali kedalam tubuh resipien dan stem cells ini kemudian
akan berdifferensiasi menjadi sel organ (sel beta pankreas, sel otot jantung dan lain-lain).
Tanpa reaksi penolakan karena sel tersebut mengandung materi genetik resipien.
Gambar 6.5. Transplatasi Sel induk yang telah dimanipulasi menjadi blastokista yang
dimasukkan kembali kedalam tubuh resipien dan berdifferensiasi menjadi sel
organ.
Embryonic stem cells dulu dipikirkan dapat memperbanyak diri sendiri secara tak
terbatas, tetapi kini diketahui bahwa usia dan perbanyakan diri sendiri sel-sel stem juga ada
batasnya. Hal ini disebabkan karena terjadinya mutasi pada gen-gen pada sel stem yang
131
diakibatkan karena pengaruh nutrisi dalam medium kultur. Penggunaan Embryonic stem
cells pada Cell Based Therapymempunyai kelebihan dan kekurangan.
Kelebihan penggunaan embryonic stem cells adalah:
1. mudah didapatkan, biasanya diperoleh dari klinik fertilitas

2. bersifat pluripotent artinya mempunyai kemampuan untuk berdifferensiasi
menjadi berbagai macam sel yang merupakan turunan dari ke 3 lapis germinal
(ektoder, mesoderm dan endoderm), tetapi tidak dapat membentuk selubung
embrio.
3. immortal artinya dapat berumur panjang sehingga dapat memperbanyak diri
ratusan kali pada media kultur.
4. reaksi penolakan rendah
Kekurangan penggunaan embryonic stem cells adalah sebagai berikut:
1. dapat bersifat tumorigenik artinya setiap kontaminasi dengan sel yang tak
berdifferensiasi dapat menimbulkan kanker.
2. selalu bersifat allogenik sehingga berpotensi menimbulkan terjadinya rejeksi
imunitas
3. secara etik masih kontroversial.
Adult stem cells lebih sulit untuk diidentifikasi dan diisolasi diantara sel-sel yang
bukan stem cells. Penggunaan adult stem cells mempunyai kelebihan dan juga
kekurangan. Kelebihan penggunaan adult stem cells adalah
1. dapat diperoleh dari sel pasien sendiri sehingga menghindari terjadinya

penolakan imun.
2. sudah terspesialisasi sehingga induksi menjadi lebih sederhana
3. kurang atau tidak menimbulkan problem etika.
Kekurangan dari penggunaan adult stem cells yaitu, antara lain:
1. jumlahnya sedikit dan sangat jarang ditemukan pada jaringan matur sehingga
sulit mendapatkan adult stem cells dalam jumlah banyak.
2. masa hidupnya tidak selama embryonic stem cells
3. bersifat multipotent sehingga differensiasi tidak seluas embryonic stem cells
yang bersifat pluripotent.
132
Stem cells yang diambil dari umbilical cord blood akhir-akhir ini menjadi harapan
untuk cell based therapy. Kelebihan penggunaan stem cells dari umbilical cord blood
adalah
1. mudah didapatkan, bisa diperoleh dari bank darah tali pusat

2. siap dipakai, karena telah melalui proses prescreening, testing dan pembekuan
3. kontaminasi virus sangat minimal dibandingakn dengan stem cells yang berasal dari
sumsum tulang
4. cara pengambilan mudah, tidak beresiko atau menyakiti donor.
5. Resiko Graft Versus Host Disease (GVHD) lebih rendah dibandingkan dengan
menggunakan stem cells yang berasal dari sumsum tulang. Transplantasi tetap
dapat dilakukan walaupun HLA matching tidak sempurna ataun toleransi terhadap
ketidak sesuaian HLA matching lebih besar dibandingakn dengan stem cells dari
sumsum tulang.
Kekurangan penggunaan stem cells dari darah tali pusat yaitu:
1. kemungkinan terkena penyakit genetik. Ada beberapa penyakit genetik yang tidak
terdeteksi saat lahir sehingga diperlukan pengamatan setelah donor meningkat
menjadi dewasa.
2. jumlah stem cells relatif terbatas sehingga ada ketidak sesuaian antara jumlah stem
cells yang diperlukan resipien dengan jumlah yang tersedia dari donor.
Beberapa penyakit yang potensial dapat diterapi dengan menggunakan stem cells
adalah Parkinson dan Alzheimer, cidera medula spinalis, stroke, luka bakar, penyakit
jantung, diabetes, distrofi otot, osteoporosis, sirosis hepatis, leukemia, anemia sel sabit
(sickle cell anemia), osteoarthritis, cancer dan sebagainya.
133
Gambar 6.6. Diagram terapi sel induk menggunakan sistem penataan ulang inti sel
6.4.2 Penggunaan Stem Cells Pada Penyakit Stroke
Pada penyakit stroke dahulu dianggap bahwa kematian sel yang terjadi akan
menyebabkan terjadinya kecacatan permanen akibat sel otak tak mempunyai kemampuan
regenerasi. Anggapan ini berubah setelah para ahli mengetahui adanya plastisitas pada
sel-sel otak dan pengetahuan tentang stem cells. Pada penelitian penyakit stroke9,10
dengan menggunakan stem cells dari darah tali pusat menusia yang diberikan intra vena
kepada tikus yang arteri serebri medianya dioklusi menunjukkan hasil yang
menggembirakan. Pada penelitian ini didapatkan pemulihan kembali fungsi normal otak
sebesar 70% pada kelompok yang mendapatkan transplantasi stem cells dari darah tali
pusat manusia.
Penelitian dengan menggunakan mesenchymal stem cells (MSC)5 dari sumsum

tulang autolog yang diberikan intra vena pada 30 penderita stroke juga memperbaiki
outcome yang dinilai dari parameter Barthel Index dan Modified Rankin Scale. Penelitian ini
didasarkan pada hasil penelitian yang telah dilakukan sebelumnya ditempat lain.
Mesenchymal stem cells pada penelitian ini diperoleh dari aspirasi sumsum tulang 12.
134
Setelah disuntikkan perifer, MSC akan melintas sawar darah otak pada daerah otak yang
rusak13.Pemberian MSC intravenous akan mengurangi terjadinya apoptosis dan
menyebabkan proliferasi sel endogen setelah terjadinya stroke5.
6.4.3 Penggunaan Stem Cells Pada Infark Miokard
Pada infark miokard akut sel stem sumsum tulang (bone marrow) yang beredar
dalam darah perifer dan stem cells yang sudah berada di jantung akan menuju ke daerah
infark, tetapi jumlahnya tidak cukup dapat mengatasi dan menyembuhkan daerah yang
infark tersebut. Sel induk ini akan membentuk sel kardiomiosit dan juga mengadakan
neovaskularisasi. Karena jumlah stem cells endogen sangat terbatas maka asupan sel
stem eksogen yang berasal dari sumsum tulang atau dari sumber lainnya misalnya dari
darah tali pusat akan meningkatkan kesembuhan daerah yang mengalami infark.
Bartinek5 telah melakukan intracoronary infusion bone marrow stem cells otolog
pada 22 pasien dengan AMI dan mendapatkan hasil yang baik. Penelitian terkini
menunjukkan bukti awal bahwa adult stem cells dan embryonic stem cells dapat
menggantikan sel otot jantung yang rusak dan memberikan pembuluh darah baru. Strauer
et al.5 mencangkok mononuclear bone marrow cell autolog ke dalam arteri yang
menimbulkan infark pada saat PTCA 6 hari setelah infark miokard. Sepuluh pasien yang
diberi stem cells area infarknya menjadi lebih kecil dan indeks volume stoke, left ventricular
end systolic volume, kontraktilitas area infark dan perfusi miokard menunjukkan perbaikan
dibandingkan dengan kelompok kontrol.
6.4.4 Penggunaan Stem Cells Pada Skin Replacement
Dengan bertambahnya pengetahuan mengenai stem cells, maka peneliti telah

dapat membuat epidermis dari keratinosit yang diperoleh dari folikel rambut. Pemakaian
skin replacement ini bermanfaat dalam terapi ulkus atau luka bakar. Kulit merupakan
jaringan yang banyak dibutuhkan dan saat ini para ahli telah dapat membuat epidermis
dari keratinosit yang diperoleh dari folikel rambut yang dicabut. Hal ini memungkinkan
transplantasi epidermis autolog, sehingga menghindari masalah penolakan. Pemakaian
skin replacement ini bermanfaat dalam terapi ulkus vena, ulkus diabetik ataupun luka
bakar.
Pada bulan mei 1998 sebuah perusahaan di Amerika Serikat memproduksi jaringan
kulit rekayasa (tissue engineered skin) dengan nama dagang Apligraf dan telah dipasarkan
di USA dan Kanada. Apligraf seperti kulit normal terdiri atas dua lapisan yaitu dermis
135
sebagai dasar dan epidermis sebagai llapisan permukaan. Apligraf dibuat dengan cara
mengumpulkan fibroblast (sel yang membentuk dermis) dan keratinosit dari kulit preputium
bayi-bayi yang disunat. Fibroblast dan keratinosit mempunyai kemampuan proliferasi yang
luar biasa Selanjutnya dibuat gel kolagen dari serat urat sapi dan disterilkan agar tidak
merusak kolagen. Pada gel kolagen ini dapat tumbuh keratosit (sel epidermis). Apligraf diuji
coba pada borok akibat varices dengan memberikan hasil penutupan borok 47% setelah 24
minggu. Apligraf dapat dipesan dalam keadaan segar dan dapat disimpan selama 5 hari
dalam suhu kamar.6,9
6.4.5 Penggunaan Stem Cell pada penyakit keganasan lainnya
Ada 3 golongan penyakit keganasan lainnya yang dapat diatasi oleh stem cell yaitu:
a) Penyakit autoimun. Misalnya pada lupus, artritis rheumatoid dan diabetes tipe 1.
Setelah diinduksi oleh growth factor agar hematopoietic stem cell banyak dilepaskan
darisumsum tulang ke darah tepi, hematopoietic stem celldikeluarkan dari dalam
tubuh untuk dimurnikan dari selimun matur. Lalu tubuh diberi agen sitotoksik atau
terapiradiasi untuk membunuh sel-sel imun matur yang tidakmengenal self antigen
(dianggap sebagai foreign antigen).Setelah itu hematopoietic stem cell dimasukkan
kembali ketubuh, bersirkulasi dan bermigrasi ke sumsum tulang untuk berdiferensiasi
menjadi sel imun matur sehingga sistemimun tubuh kembali seperti semula.
b) Penyakit degeneratif. Pada penyakit degeneratif sepertistroke, penyakit Parkinson,
penyakit Alzheimer, terdapatbeberapa kerusakan atau kematian sel-sel tertentu
sehinggabermanifestasi klinis sebagai suatu penyakit. Pada keadaanini stem cell
setelah dimanipulasi dapat ditransplantasi kedalam tubuh pasien agar stem cell
tersebut dapatberdiferensiasi menjadi sel-sel organ tertentu yangmenggantikan sel-
sel yang telah rusak atau mati akibatpenyakit degeneratif.
c) Penyakit keganasan. Prinsip terapi stem cell padakeganasan sama dengan penyakit
autoimun. Hematopoieticstem cell yang diperoleh baik dari sumsum tulang ataudarah
tali pusat telah lama dipakai dalam terapi leukemiadan penyakit darah lainnya.
6.5 Perkembangan Penelitian dan penerapan Sel Induk di Indonesia
Besarnya potensi sel induk mendorong tumbuh suburnya bank sel induk di sejumlah
negara. Di Singapura, Jepang, Inggris, dan Amerika Serikat, berdiri sejumlah bank sel
induk. Sel-sel induk tidak hanya bisa dipakai keluarga penyimpan tapi juga dapat diberikan
kepada pasien yangmembutuhkan.Di Indonesia, lembaga semacam ini belum ada
sehingga orang-orang Indonesia banyak yang mulai menjadi ''nasabah" bank sel induk di
136
Singapura. Yang terkenal antara lain Stemcord serta Cordlife, keduanya bermarkas di
Singapura. Stemcord kini punya 6.000 anggota, dan 105 di antaranya warga Indonesia.
Sedangkan Cordlife menampung sel induk dari 200 orang Indonesia. Mereka itulah yang
sudah lebih dulu melihat manfaat sel induk ini, terutama yang diambil dari tali pusar.
Para nasabah itu harus menyimpan sel induk di Singapura. Caranya, saat bayi lahir,
darah di tali pusar bayi disedot dan dimasukkan ke dalam kantong darah. Penyedotan bisa
dilakukan di rumah sakit tempat si ibu melahirkan, lalu dikirim. Cordlife, misalnya,
mengenakan biaya pengiriman dari Jakarta ke Singapura sebesar S$ 320, sekitar Rp 1,84
juta. Biaya penyimpanannya per tahun S$ 1.800 dan dikenakan pajak 5%. Kedua
perusahaan itu juga menggaet beberapa rumah sakit swasta, antara lain Rumah Sakit
Pondok Indah, Pantai Indah Kapuk, dan Graha Medika. Terapi sel induk sudah
berkembang di Rumah Sakit Cipto Mangunkusumo dan Rumah Sakit Kanker Dharmais
Jakarta yang bekerja sama dengan para peneliti dari Lembaga Biologi Molekuler Eijkman,
Rumah Sakit Anak dan Bersalin Harapan Kita, serta Palang Merah Indonesia. Terapi sel
induk dari sumsum tulang pernah dirintis oleh RSCM pada tahun 1987-1991.
Para dokter Rumah Sakit Cipto Mangunkusumo memanfaatkan sel induk untuk
kegiatan transplantasi sumsum tulang pasien leukemia. Tahun 1996-1998, giliran Rumah
Sakit Kanker Dharmais yang melakukannya. Kondisi empat pasien yang menjalani
transplantasi dilaporkan membaik. Namun setelah krisis moneter yang terjadi pada tahun
1998 kegiatan tersebut terhenti. Untuk pengadaan bank sel induk masih terbentur masalah
biaya. Proses pengembangannya sangat lambat lantaran biaya pemeliharaannya juga
mahal. Belum lagi mendatangkan mediumnya untuk menyimpan dan membiakkan sel-sel
induk itu. Sehingga diperlukan waktu dan biaya untuk pengembangannya. Terlepas dari
soal biaya, pengembangan teknologi sel induk tergolong sulit dan rumit. Prosesnya, darah
diendapkan untuk memisahkan sel darah dengan sel induk. Kemudian sel induk dibiakkan
dalam medium yang diberi zat pengawet dan disimpan dalam tabung berisi nitrogen cair
untuk mencapai minus 196oC.
Kesulitannya terutama memisahkan sel induk dari campuran berbagai sel. Begitu
juga memelihara sel induk hingga bisa membiakkan diri dan mengalami diferensiasi sesuai
tujuan sang peneliti. Itulah yang dihadapi saat menumbuhkan sel induk menjadi sel bagi
jaringan tertentu, hingga jaringan tersebut kembali sehat dan menempuh hidup baru.Faktor
lainnya adalah lingkungan biokimia dalam media biakan tentu tak persis sama dengan
lingkungan dalam tubuh pasien. Artinya, sel induk hasil biakan bisa saja tak mampu
tumbuh terdiferensiasi seperti yang diharapkan setelah disuntikkan ke tubuh pasien.
6.6 Bioetika dan kontraversi pada penggunaan sel induk (Stem Cells)
137
Berkembangnya penelitian stem cell dan penggunaan stem cell dalam upaya untuk
mengobati penyakit pada manusia akan mengakibatkan timbulnya masalah dalam hal etik.
Hal utama terkait dengan masalah etik adalah sumber stem cell tersebut. Berbagai
masalah etika yang perlu dipikirkan adalah:
1. Apakah penelitian embrio manusia secara moral dapat dipertanggung jawabkan?

2. Apakah penelitian embrio yang menyebabkan kematian embrio merupakan
pelanggaran terhadap hak azasi manusia (HAM) dan berkurangnya penghormatan
terhadap mahluk hidup?
3. Apakah penyalahgunaan dapat diketahui dan dikendalikan?
4. Apakah penggunaan embrio sisa proses bayi tabung pada penelitian diperbolehkan?
5. Apakah penelitian khusus membuat embrio untuk digunakanpada berbagai bidang
kehidupan diperbolehkan?
Isu bioetika utama dalam penelitian dan penggunaan stem cell adalah penggunaan
stem cell embrio terutama tentang sumber sel tersebut yaitu embrio. Sumber embrio dapat
berasal dari hasil abortus, zigot sisa in vitro vertilisasi (IVF), dan hasil pengklonan.
Pengklonan embrio manusia untuk memperoleh stem cell merupakan isu yang
sangat menimbulkan kontroversi. Hal ini terkait dengan isu ”awal kehidupan” dan
penghormatan terhadap kehidupan itu sendiri. Pengklonan embrio manusia untuk
memperoleh stem cell menimbulkan kontroversi karena berhubungan dengan pengklonan
manusia yang ditentang oleh semua agama.
Dalam proses pemanenan stem cell embrio terjadi kerusakan pada embrio dan
menyebabkan embrio tersebut mati. Adanya anggapan bahwa embrio berstatus sama
dengan manusia menyebabkan hal tersebut tidak dapat diterima oleh umat beragama.
Perdebatan yang cukup ramai adalah mengenai status moral embrio, apakah embrio harus
diperlakukan sebagai manusia atau sebagai sesuatu yang berpotensi untuk menjadi
manusia atau sebagai jaringan hidup tubuh lainnya. Lebih jauh lagi apakah embrio yang
berkembang dianggap sebagai mahluk hidup.
Penggunaan stem cell yang berasal dari surplus zigot pembuatan bayi tabung
sendiri, juga menimbulkan kontroversi. Pendapat yang moderat mengatakan ketimbang
surplus zigot itu dibuang, sebaiknya dipakai saja untuk penelitian. Sebaliknya ada juga
yang berpendapat bahwa sisa itu harus dipelihara hingga zigot itu mati. Bagaimanapun
stem Cell merupakan salah satu solusi masa depan bagi kehidupan manusia, khususnya
dibidang kesehatan.
138
6.7 Ringkasan
Sel induk dapat berfungsi sebagai sumber bagi banyak sel yang lebih banyak
terdiferensiasi. Sel induk dewasa telah diisolasi dari berbagai jaringan tubuh manusia dan
bertujuan menyediakan mekanisme pemulihan dan pengobatan bagi organ spesifik pada
tubuh manusia. Sel induk dewasa telah banyak digunakan secara klinis dalam transplatasi
sumsum tulang belakang dan untuk membantu pembentukan organ kulit. Sel induk
embrionik manusia dapat berdiferensiasi menjadi banyak sel yang dapat memotong
beberapa tipe jaringan. Sel ini berasal dari embrio yang terbentuk selama proses IVF.
Keturunan mereka dapat menghasilkan proses penghancuran embrio. Sel induk embrionik
manusia memiliki potensi terapeutik yang sangat baik pada hewan percobaan. Para peneliti
telah banyak melaporkan bahwa cedera tulang punggung, penyakit Parkinson, dan
diabetes melitus dapat diterapi dan memberikan respon yang baik dengan terapi sel induk
embrionik.
Transfer inti sel somatik merupakan suatu serangkaian proses dimana ketika inti sel
embrionik diganti dengan inti sel somatik. Sel embrionik kemudian berubah menjadi sebuah
klon dari sel somatik dan membentuk sel induk embrionik. Proses tersebut adalah teknik
yang digunakan untuk mengklon hewan yang berpotensi untuk memproduksisel induk
embrionik identik secara genetik dengan individu yang mungkin dapat memberikan manfaat
dari pemakaian terapeutik sel-sel tersebut. Kemajuan pesat pada bidang penelitian sel
induk telah mengarah pada perkiraan mengenai masa depan ilmu kedokteran pada
manusia. Potensi utamanya adalah pemahaman mengenai fenomena sel dasar seperti
kontrol diferensiasi sel. Berdasarkan pengetahuan dasar ini, diduga akan muncul jenis
terapi yang lebih revolusioner yang akan sangat menarik bagi publik.
Beberapa hasil terapi yang cukup menjanjikan, seperti potensi untuk

menyembuhkan cedera tulang belakang atau penyakit Parkinson. Pada tikus percobaan,
sel induk otak yang diinjeksikan ke dalam rongga kranial dapat berdiferensiasi dan
melakukan fungsinya sepanjang sel neuron yang ada. Hal ini memberikan indikasi bahwa
hewan yang diobati mengalami peningkatan fungsi otak. Dengan cara yang sama tikus
yang diinjeksi dengan sel otot dapat tumbuh lebih besar dan lebih kuat serta lincah
dibandingkan kelompok lainnya yang tidak mengalami perlakuan tersebut.
139
Contoh Soal:
1. Perbedaan sel induk dengan jenis sel lainnya adalah sebagai berikut:
A. Tidak memiliki struktur anti gen pada permukaan selnya
B. Mampu membelah tanpa batas meskipun tidak berdiferensiasi
C. Hanya memiliki separuh komplemen kromosom (haploid)
D. Jika diinduksi untuk membelah akan membetuk organisme utuh
E. Jawaban a, b, dan d benar.
2. Hal yang dilakukan untuk menghasilkan kultur sel induk embrionik adalah:
A. Satu sel telur terfertilisasi
B. Sebuah donor sel somatik
C. Media yang sesuai untuk pertumbuhan sel
D. Telur terfertilisasi dalam jumlah yang banyak
E. Jawaban a, b, dan d benar.
3. Kontroversi penggunaan sel induk mungkin karena disebabkan oleh hal berikut:
A. Sel embrio harus dihancurkan untuk membuatnya
B. Berpotensi untuk kloning manusia
C. Berpotensi untuk disalahgunakan
D. Dapat digunakan pada terapi penyakit genetik
E. Jawaban a, b, dan c benar.
4. Sel induk telah berhasil digunakan secara klinis pada kasus berikut:
A. Pengobatan kanker sel darah
B. Pengobatan penyakit kardiovaskular
C. Pengobatan cedera tulang belakang
D. Pengobatan penyakit Parkinson
E. Semua jawaban benar.
5. Berdasarkan sumbernya sel induk dibagi menjadi beberapa sumber sebagai berikut:
A. Sel fetus
B. Sel darah tali pusat
C. Sel sumsum tulang belakang
D. Sel embrionik
E. Semua jawaban benar
140
DAFTAR PUSTAKA
1. The Stem cells-stem cell information the official National Institute of Health Resource
for Stem cell Research
2. Anatomy 101: Stem Cells-Reeeve Irvine Research Center-
http://www.reeve.uci.edu/anatomy /stemcells.php di download tgl 2 Desember 2009
3. Stem Cells-Wikipdia- http://en.wikipedia.org/wiki/stem cell di download tgl 2 Desember
2009
4. Stem Cells for Cell Based Therapies, Lauren Pecorino- American Institute of Biological
Science
5. Dasar-Dasar Stem Cell dan Potensi Aplikasinya dalam Ilmu
Kedokteraninfotekmedical.blogspot.com/ di download tgl 2 Desember 2009
6. Boenjamin Setiawan, Aplikasi terapeutik sel stem embrionik pada berbagai penyakit
degeneratif, PT Kalbe Farma, 2007.
7. Djati, M. S. , 2003. Diskursus Teknologi Embryonic Cells dan Kloning Dari Dimensi
Bioetika dan Religiositas. Jurnal Universitas Paramadina.Vol 3 No.1: 102-123.
141
Istilah Arti
Sel induk (sel Punca) Sel embrio manusia menjadi sel awal yang tumbuh
menjadi berbagai organ manusia yang belum
terspesialisasi dan mampu berdeferensiasi menjadi
berbagai sel matang dan mampu meregenerasi diri
sendiri.
Totipotent Sel induk yang dapat berdifferensiasi menjadi semua jenis

sel.
Multipotent Sel induk yang dapat berdifferensiasi menjadi banyak jenis

sel misalnya hemopoetic stem cells yang terdapat pada
sumsum tulang yang mempunyai kemampuan untuk
berdifferensiasi menjadi berbagai jenis sel yang terdapat
dalam darah seperti eritrosit, lekosit, dan trombosit.
Unipotent Sel induk yang hanya dapat menghasilkan satu jenis sel
saja.
Immortal Sel yang dapat berumur panjang sehingga dapat

memperbanyak diri ratusan kali pada media kultur spesifik.
Zigot Sel telur (ovum) yang telah difertilisasi atau dibuahi oleh
sel sperma.
Embryonic stem cells Sel-sel stem yang diperoleh dari innert cell mass dari
suatu blastocyst (embrio yang terdiri atas 50-150 sel, kira-
kira hari ke-5 pasca pembuahan).
Differensiasi Kemampuan suatu sel untuk berkembang menjadi sel lain.
Regenerasi Kemampuan suatu sel untuk memperbaharui atau

meregenerasi dirinya sendiri.
Fibroblast Sel yang mensintesis matriks ekstraseluler, kolagen,

dan kerangka struktural (stroma) jaringanmanusia.
142
143
BAB 7
PENGGUNAAN ANTIBODI MONOKLONAL PADA BIDANG KESEHATAN
7.1 Pendahuluan
Pada bagian ini yang akan menjadi sasaran pembelajaran adalah (1) menjelaskan sistem
kekebalan tubuh antibody, (2) menjelaskan produksi antibodi monoclonal, dan (3)
menjelaskan mekanisme kerja antibodi monoclonal.Dalam dekade terakhir, pengobatan
kanker memasuki era baru yang disebut target terapi (targeted therapy). Pencapaian inilah
jawaban selama lebih dari ratusan tahun penelitian tentang diagnosis dan terapi kanker.
Berbicara target terapi, berarti berbicara sisi lain sel kanker. Perbedaan spesifik
antara sel kanker dan sel normal, menjadi bekal bagi para ilmuwan untuk menciptakan
sebuah “peluru jitu” yang akan menyerang sel-sel kanker tanpa merusak sel-sel normal,
sehingga meminimalkan efek samping. Agen pintar ini memiliki berbagai tipe dengan cara
kerja berbeda. Tetapi semuanya berperan ikut campur atau merusak proses pertumbuhan
dan pembelahan sel kanker serta dalam upaya sel kanker memperbaiki diri atau
berkomunikasi dengan sel lain.
Perbedaan tipe target terapi ditentukan dalam tiga kategori. Beberapa target terapi
menitikberatkan pada komponen internal sel kanker. Terapi ini menggunakan molekul kecil
yang bisa masuk ke dalam sel dan memporak-porandakan fungsi dalam sel dan pada
akhirnya akan membunuh sel tersebut. Ada lagi target terapi yang fokus dengan target
reseptor yang ada di permukaan sel, dikenal sebagai antibodi monoklonal. Sedangkan jenis
target terapi yang lain adalah penggunaan obat-obat anti-angiogenesis, dengan sasaran
“mematikan” pembuluh darah yang menyuplai oksigen ke sel kanker sebagai sumber
kehidupan sel.
Teknologi antibodi monoklonal yaitu teknologi menggunakan sel-sel sistem imunitas

yang membuat protein yang disebut antibodi. Sistem kekebalan kita tersusun dari sejumlah
tipe sel yang bekerja sama untuk melokalisir dan menghancurkan substansi yang dapat
memasuki tubuh kita. Tipa tipe sel mempunyai tugas khusus. Beberapa dari sel tersebut
dapat membedakan dari sel tubuh sendiri (self) dan sel-sel asing (non self). Salah satu dari
sel tersebut adalah sel limfosit B yang mampu menanggapi masuknya substansi asing
denngan spesivitas yang luar biasa.
Antibodi monoklonal adalah antibodi monospesifik yang dapat mengikat satu epitop
saja. Antibodi monoklonal ini dapat dihasilkan dengan teknik hibridoma. Dengan kata lain,
antibodi monoklonal adalah zat yang diproduksi oleh sel gabungan tipe tunggal yang
143
memiliki kekhususan tambahan. Ini adalah komponen penting dari sistem kekebalan tubuh.
Mereka dapat mengenali dan mengikat ke antigen yang spesifik. Hasil penggabungan sel
iniadalah hibridoma, yang akan terus memproduksi antibodi. Antibodi monoklonal
mengenalisetiap determinan yang antigen (bagian dari makromolekul yang dikenali oleh
sistem kekebalan tubuh/epitope). Mereka menyerang molekul targetnya dan mereka bisa
memilahantara epitope yang sama.
Selain sangat spesifik, mereka memberikan landasan untuk perlindungan melawan

patogen. Antibodi monoklonal sekarang telah digunakan untuk banyak masalah diagnostik
seperti: mengidentifikasi agen infeksi, mengidentifikasi tumor, antigen dan antibodi auto,
mengukur protein dan level drug pada serum, mengenali darah danjaringan,
mengidentifikasi sel spesifik yang terlibat dalam respon kekebalan dan mengidentifikasi
serta mengkuantifikasi hormon.
7.2 Sistem Kekebalan Tubuh Antibodi
Antibodi merupakan senjata yang tersusun dari protein dan dibentuk untuk melawan
sel-sel asing yang masuk ke tubuh manusia. Senjata ini diproduksi oleh sel-sel B,
sekelompok prajurit pejuang dalam sistem kekebalan. Antibodi akan menghancurkan
musuh-musuh penyerbu. Antibodi mempunyai dua fungsi, pertama untuk mengikatkan diri
kepada sel-sel musuh, yaitu antigen. Fungsi kedua adalah membusukkan struktur biologi
antigen tersebut lalu menghancurkannya.
Berada dalam aliran darah dan cairan non-seluler, antibodi mengikatkan diri kepada
bakteri dan virus penyebab penyakit. Mereka menandai molekul-molekul asing tempat
mereka mengikatkan diri. Dengan demikian sel prajurit tubuh dapat membedakan sekaligus
melumpuhkannya Antibodi bersesuaian dengan musuhnya (antigen) secara sempurna,
seperti anak kunci dengan lubangnya yang dipasang dalam struktur tiga dimensi.
Tubuh manusia mampu memproduksi masing-masing antibodi yang cocok untuk

hampir setiap musuh yang dihadapinya. Antibodi bukan berjenis tunggal. Sesuai dengan
struktur setiap musuh, maka tubuh menciptakan antibodi khusus yang cukup kuat untuk
menghadapi si musuh. Hal ini karena antibodi yang dihasilkan untuk suatu penyakit belum
tentu mangkus bagi penyakit lainnya.
Membuat antibodi spesifik untuk masing-masing musuh merupakan proses yang

luar biasa, dan pantas dicermati. Proses ini dapat terwujud hanya jika sel-sel B mengenal
struktur musuhnya dengan baik. Dan, kenyataannya di alam ini terdapat jutaan musuh
(antigen).
144
7.2.1 Struktur Antibodi
Sebelumnya telah dikatakan bahwa antibodi termasuk protein. Jadi, pertama-tama

mari kita pelajari struktur protein tersebut.
Protein tersusun dari asam amino. Dua puluh jenis asam amino ber-beda disusun
dalam urutan yang berbeda untuk membentuk protein-protein yang berlainan, umpama
membuat pelbagai kalung menggunakan manik-manik dengan dua puluh warna berbeda.
Perbedaan utama antara protein-protein tersebut adalah urutan asam aminonya.
Perlu diingat, setiap kesalahan dalam urutan asam amino akibat dari proses mutasi
gen menjadikan protein tidak berguna, dan bahkan berbahaya bagi sel hidup. Karena itu,
tidak boleh ada kesalahan sekecil apa pun dalam urutannya.
Jadi, bagaimana penghasil protein dalam sel dapat mengetahui bagaimana urutan
asam amino yang menyusun mereka, dan protein apa yang akan dihasilkan, Instruksi untuk
setiap protein dengan ribuan tipe yang berbeda dilakukan oleh gen yang ditemukan di bank
data genetik pada inti sel. Dengan demikian, gen-gen ini dibutuhkan untuk memproduksi
antibodi.
Ada suatu keajaiban penting disini. Di dalam tubuh manusia hanya ada seratus ribu
gen, padahal antibodi yang dihasilkan 1.920.000. Artinya, sekitar sembilan ratus ribu gen
hilang.
Gambar 7.1. Struktur kompleks antibodi

Sumber: http://www.britannica.com/EBchecked/media/17658/The-four-chain-structure-of-
an-antibody-or-immunoglobulin-molecule
Gambar 7.1 menunjukkan struktur dasar antibodi, dimanatempat melekat atau terikatnya
antigen (warna orange) terdapat pada bagian bervariasi di ujung amino dan bagian malar
terdapat pada hujung karboksi (biru). Domain yang dirangkumi ikatan disulfida ditunjukkan
145
sebagai gelang dan bagian engsel berwarna merah. Unit dasar terdiri dari dua rantai lampu
identik (L) dan dua rantai identik berat (H), yang berikatan bersama oleh ikatan disulfida
untuk membentuk bentuk Y fleksibel.Setiap rantai terdiri dari wilayah variabel (V) dan
wilayah konstanta (C).
Lalu bagaimana mungkin sekelompok kecil gen mampu memproduksi antibodi

sebanyak sepuluh kali lipat dari jumlahnya? Di sinilah keajaiban itu tersingkapkan. Sel
menggabungkan seratus ribu gen yang dikandungnya itu dengan kombinasi berbeda untuk
membentuk suatu antibodi baru. Sel tersebut menerima informasi dari beberapa gen dan
menggabungkannya dengan informasi gen lain dan membuat produksi yang diinginkan
berdasarkan kombinasi informasi tersebut.
Jika kita mendesain suatu molekul antibodi, bagaimana cara kita melakukannya?
Pertama-tama, kita harus mengadakan penelitian menyeluruh sebelum menentukan bentuk
molekul tersebut. Tentu Anda tidak dapat membentuknya secara acak tanpa tahu pasti
tugas si molekul. Karena antibodi yang ingin diproduksi akan berkontak dengan antigen,
Kita juga harus sangat menguasai struktur dan spesifikasi antigen tersebut.
Terakhir, antibodi yang dihasilkan harus memiliki pola khusus dan unik pada salah
satu ujungnya. Hanya dengan demikian ia dapat mengikatkan diri dengan antigen. Ujung
yang lainnya harus serupa dengan antibodi lainnya. Inilah satu-satunya cara untuk
menonaktifkan antigen perusak. Kesimpulannya, satu ujung bersifat standar, sedangkan
ujung yang lainnya harus berbeda dengan lainnya (ada lebih dari satu juta tipe yang
berbeda).
Bagaimanapun juga, manusia tidak dapat menciptakan suatu antibodi, apa pun
teknologi yang ada di hadapan mereka. Antibodi yang dihasilkan dari laboratorium tetap
diperoleh dari contoh antibodi yang diambil dari tubuh manusia, atau dari tubuh makhluk
hidup lainnya.
7.2.2 Pengelompokan Antibodi
Sebelumnya telah kita sebutkan bahwa antibodi adalah sejenis protein. Protein-
protein yang berfungsi untuk melindungi tubuh lewat proses kekebalan ini dinamakan
“imunoglobulin”, disingkat “Ig”. Protein paling khas pada sistem pertahanan, molekul
imunoglobulin mengikatkan diri pada antigen untuk menginformasikan kepada sel-sel
kekebalan lainnya tentang keberadaan antigen tersebut atau untuk memulai reaksi berantai
perang penghancuran.
Jika dirangsang oleh suatu antigen, limfosit B akan mengalami pematangan

menjadi sel-sel yang menghasilkan antibodi. Antibodi merupakan protein yang bereaksi
146
dengan antigen yang sebelumnya merangsang limfosit B. Antibodi juga disebut
Immunoglobulin. setiap molekul antibodi memiliki suatu bagian yang unik, yang terikat
kepada suatu antigen khusus dan suatu bagian yang strukturnya menerangkan kelompok
antibodi. Molekul imunoglobulin mempunyai struktur dasar yang terdiri dari 2 rantai ringan
atau rantai L (light chain) yang sama besar dan 2 rantai berat atau rantai H (heavy
chain) yang sama besar. Rantai-rantai ini digabungkan oleh ikatan-ikatan disulfida
(disulfide bonds). Pada ujung amino terdapat 2 tempat penggabungan antigen (antigen
binding site) pada setiap molekul imunoglobulin, kedua-duanya mempunyai kespesifikan
dan akan bergabung dengan epitop yang serupa. Terdapat 2 jenis rantai L yaitu, kappa
() dan lambda (). Terdapat 5 kelas utama antibodi yakniIgM, IgG, IgA, IgE dan IgD
dengan rantai berat masing-masing (dan).
Imunoglobulin G (IgG)
IgG merupakan antibodi yang paling umum. Dihasilkan hanya dalam waktu
beberapa hari, ia memiliki masa hidup berkisar antara beberapa minggu sampai
beberapa tahun. IgG beredar dalam tubuh dan banyak terdapat pada darah, sistem getah
bening, dan usus. Molekul IgG mengikuti aliran darah, langsung menuju musuh dan
menghambatnya begitu terdeteksi. Mereka mempunyai efek kuat anti-bakteri dan
penghancur antigen. Mereka melindungi tubuh terhadap bakteri dan virus, serta
menetralkan asam yang terkandung dalam racun.
Molekul IgG terdiri dari 2 rantai H jenis g dan 2 rantai L (k atau l) yang
digabungkan oleh ikatan disulfida. Berat molekulnya lebih kurang 150 kDa dengan
pengenapan 7S. Dalam manusia terdapat 4 subkelas IgG yaitu IgG1, IgG2, IgG3 dan
IgG4 (Gambar 7.1). Semua imunoglobulin dalam suatu kelas (contoh: IgG1 dan IgG2)
mempunyai lebih kurang 90% homologi asam amino, tetapi hanya lebih kurang 60%
homologi antara imunoglobulin berlainan kelas (contoh: IgG dan IgA). Subkelas antibodi
mempunyai perbedaan aktivitas kimia dan aktivitas biologi.
Selain itu, IgG mampu menyelip di antara sel-sel dan menyingkirkan bakteri serta
musuh mikroorganis yang masuk ke dalam sel-sel dan kulit. Karena kemampuannya
serta ukurannya yang kecil, mereka dapat masuk ke dalam plasenta ibu hamil dan
melindungi janin dari kemungkinan infeksi. Jika antibodi tidak diciptakan dengan
karakteristik yang memung-kinkan mereka untuk masuk ke dalam plasenta, maka janin
dalam rahim tidak akan terlindungi melawan mikroba. Hal ini dapat menyebabkan
kematian sebelum lahir. Karena itu, antibodi sang ibu akan melindungi embrio dari musuh
sampai anak itu lahir.
147
IgG juga merupakan antibodi yang bertindak sebagai antibodi, yang memudahkan
proses fagositosis. Ia bergabung dengan antigen melalui bahagian Fab dan bahagian Fc
menunjukkan ciri opsonin karena permukaan fagosit seperti makrofag dan sel
polimorfonukleus mempunyai reseptor untuk bagian Fc IgG. Antigen yang diselaputi IgG
akan bergabung kepada reseptor tersebut dan difagositosis.
Gambar 7.2.Proses fagositosis partikel yang dibungkusi antibody. Bahagian Fc molekul

antibodi bergabung dengan reseptor Fc pada fagosit.
Molekul IgG boleh mengaktifkan pelengkap. Pengaktifan pelengkap membebaskan

beberapa bahan aktif dan boleh menyebabkan lisis jika antibodi itu tergabung kepada
antigen pada permukaan sel. Setengah komponen pelengkap adalah opsonin dan
sesetengah yang lain adalah kemotaktik (menarik fagosit). IgG juga sangat berkesan
meneutralkan toksin seperti tetanus dan botulinus, serta menyahaktifkan racun ular
(venom) melalui pergabungannya kepada tapak aktif toksin. Ini menjadikan IgG amat
sesuai untuk pengimunan pasif terhadap toksin dan venom. IgG amat berkesan
menghentikan pergerakan bakteria motil melalui tindak balasnya dengan antigen pada
flagela dan silia mikroorganisma. Selain itu IgG juga efisien meneutralkan virus melalui
pergabungannya kepada antigen permukaan virus yang terlibat dengan pergabungan virus
kepada reseptor pada permukaan sel sasaran.
Imunoglobulin M (IgM)
Antibodi ini terdapat pada darah, getah bening, dan pada permukaan sel B. Pada saat
organisme tubuh manusia bertemu dengan antigen, IgM merupakan antibodi pertama yang
dihasilkan tubuh untuk melawan musuh.Berat molekulnya lebih kurang 900 kDa dengan
pekali pengenapan 19S. Rantai Hnya mempunyai satu domain CH lebih berbanding IgG.
IgM adalah molekul pentamer yaitu ia terdiri dari 5 unit imunoglobulin yang setiap satu
terdiri dari 2 rantai L dan 2 rantai H (m). Semua unit-unit ini digabungkan oleh ikatan
dwisulfida pada bahagian Fc, dan satu polipeptid yang dipanggil rantai J. Rantai J disintesis
oleh sel plasma dan mempunyai berat molekul 15 kDa. Janin dalam rahim mampu
memproduksi IgM pada umur kehamilan enam bulan. Jika musuh menyerang janin, jika
148
janin terinfeksi kuman penyakit, produksi IgM janin akan meningkat. Untuk mengetahui
apakah janin telah terinfeksi atau tidak, dapat diketahui dari kadar IgM dalam darah.
Imunoglobulin A (IgA)
Antibodi ini terdapat pada daerah peka tempat tubuh melawan antigen seperti air
mata, air liur, ASI, darah, kantong-kantong udara, lendir, getah lambung, dan sekresi usus.
Kepekaan daerah tersebut berhubungan langsung dengan kecenderungan bakteri dan
virus yang lebih menyukai media lembap seperti itu. Molekul IgA terdiri dari 2 rantai L dan 2
rantai H jenis α. Berat molekul IgA monomer ialah lebih kurang 160 kDa dengan pekali
pengenapan 7S IgA dimer berberat molekul 400 kDa. IgA terdiri dari 2 subkelas, IgA1 dan
IgA2. Secara keseluruhan IgA merupakan antibodi yang paling banyak dalam tubuh.
Secara struktur, IgA mirip satu sama lain. Mereka mendiami bagian tubuh yang paling
mungkin dimasuki mikroba. Mereka menjaga daerah itu dalam pengawasannya layaknya
tentara andal yang ditempatkan untuk melindungi daerah kritis.Antibodi ini melindungi janin
dari berbagai penyakit pada saat dalam kandungan. Setelah kelahiran, mereka tidak akan
meninggalkan sang bayi, melainkan tetap melindunginya.
Gambar 7.3.Proses sintesis dan sekresi IgA dimer oleh sel plasma menuju sel epitel pada
ASI untuk melindungi sel tubuh bayi dari infeksi virus dan bakteri.
Setiap bayi yang baru lahir membutuhkan pertolongan ibunya, karena IgA tidak
terdapat dalam organisme bayi yang baru lahir. Selama periode ini, IgA yang terdapat
dalam ASI akan melindungi sistem pencernaan bayi terhadap mikroba. Seperti IgG, jenis
antibodi ini juga akan hilang setelah mereka melaksanakan semua tugasnya, pada saat
bayi telah berumur beberapa minggu.Gambar 7.3 menunjukkan sintesis dan sekresi IgA
dimer oleh sel plasma. IgA kemudian bergabung dengan reseptor poli-Ig yang mengangkut
IgA melalui sel epitelium. Reseptor ini dipotong oleh enzim dan membentuk komponen
dimer.
Imunoglobulin D (IgD)
149
IgD juga terdapat dalam darah, getah bening, dan pada permukaan sel B. Mereka
tidak mampu untuk bertindak sendiri-sendiri. Dengan menempelkan dirinya pada
permukaan sel-sel T, mereka membantu sel T menangkap antigen. Molekul IgD terdiri dari
2 rantai L dan 2 rantai H jenis d dan wujud sebagai monomer dengan berat molekul 180
kDa. Kepekatannya dalam serum amat rendah mungkin kerana ia tidak diperoleh dari sel
plasma serta amat rentan terhadap aktivitas enzim proteolisis. IgD diekspresi bersama IgM
pada permukaan sel B matang dan berfungsi sebagai reseptor sel B.
Imunoglobulin E (IgE)
IgE merupakan antibodi yang beredar dalam aliran darah. Antibodi ini bertanggung
jawab untuk memanggil para prajurit tempur dan sel darah lainnya untuk berperang.
Antibodi ini kadang juga menimbulkan reaksi alergi pada tubuh. Karena itu, kadar IgE tinggi
pada tubuh orang yang sedang mengalami alergi. IgE terdiri dari 2 rantai L dan 2 rantai h
jenis e. Seperti IgM rantai H IgE mempunyai satu domain CH lebih.
Gambar 7.4.Struktur 5 jenis antibodi menunjukkan rantai L (hijau), H (biru), domain dan
ikatan disulfida. Warna orange menunjukkan tanda glikosilasi. IgM dan IgA polimer
mengandungi rantai J. IgA dimer mempunyai komponen rembesan (merah).
Domain ini membolehkan IgE bergabung dengan afinitas tinggi kepada reseptor
(reseptor Fce) pada permukaan sel mast dan basofil. Apabila antigen bergabung dengan
IgE yang sedia tergabung pada permukaan sel mast atau basofil, ia akan mengaruh
pembebasan bahan aktif yang terlibat dalam gerak balas alergi. IgE dikenali sebagai
antibodi reaginik. Kepekatannya dalam serum adalah paling rendah. Berat molekulnya ialah
200 kDa dengan pekali pengenapan 8S. Waktu paruhnyadalam serum selama 2 hari. IgE
150
tidak mengaglutinat atau mengaktifkan pelengkap tetapi berperanan dalam perlindungan
terhadap parasit seperti helmin.
Tabel 7.1. Ringkasan ciri-ciri immunoglobulin
Waktu
Berat molekul Kepekatan Jumlah Pengaktifan Komponen
Kelas paruh
(kDa) (mg/mL) total (%) pelengkap tambahan
(hari)
IgG 150 12 80 23 ++ -
160
(monomer); Rantai J dan
IgA 1,8 13 5,5 -
400 komponen S
(rembesan)
900
IgM 1 6 5 +++ Rantai J
(pentamer)
IgD 180 0-0,04 0.2 2,8 - -
IgE 200 0,0002 0.002 2 - -
Adapun karakteristik dan mekanisme kerja antibodi pada sel tubuh manusia adalah
sebagai berikut:
1. Antibodi akan mengunci antigen yang memasuki tubuh.
2. Dihasilkan antibodi berbeda untuk masing-masing musuh.
3. Sel mampu menghasilkan ribuan antibodi berbeda untuk ribuan antigen berlainan.
4. Produksi ini dimulai langsung pada saat musuh memasuki tubuh dan teridentifikasi.
5. Terdapat kesesuaian antara antigen dengan antibodi tiga dimensi, yang dihasilkan
khusus untuk antigen itu, persis seperti anak kunci cocok dengan lubangnya.
6. Sel, jika dibutuhkan, dengan sengaja menyusun informasi yang dimilikinya dan
menghasilkan antibodi-antibodi yang berbeda.
7. Sembari melakukan hal itu, sel memperlihatkan kearifan dan perencanaan yang
jauh melampaui batas pemahaman akal manusia.
8. Antibodi tertentu, yang terdapat khusus dalam ASI, memenuhi kebutuhan antibodi
bayi yang belum mampu untuk memproduksi antibodi ini sendiri.
9. Lambung bayi tidak akan mencerna antibodi, melainkan melewatkannya agar dapat
melindungi tubuh bayi.
Di sini kita lihat sistem yang bekerja sempurna. Dalam sel-sel yang memproduksi
antibodi, Allah menempatkan informasi yang berisikan rancangan konstruksi antibodi.
Kesemua informasi itu dapat mengisi penuh ribuan halaman ensiklopedi. Lebih jauh, Allah
mengaruniai sel-sel itu kemampuan untuk membuat kombinasi yang melampaui pemikiran
manusia.
151
Pada awalnya sistem pertahanan tubuh terdiri dari satu gen yang memproduksi satu
tipe imunoglobulin (semacam protein). Akan tetapi gen ini dengan cepat memperbanyak
dirinya sendiri dan mengembangkan kembarannya ini sehingga membentuk molekul
imunoglobulin yang berbeda. Kemudian dikembangkan mekanisme kontrol yang akan
mengawasi pembentukan gen-gen berbeda yang memiliki kemampuan untuk kombinasi
ulang.
Evolusionis mencoba memperlihatkan tahap ini sebagai sesuatu yang tak berarti
dan mengelakkannya. Tetapi, bagaimana gen awal ini bermula harus dijelaskan. Secara
ilmiah mustahil suatu gen membentuk dirinya sendiri. Antibodi saja tidak cukup untuk
melindungi tubuh manusia. Agar sistem kekebalan berfungsi, dan agar tubuh manusia
dapat bertahan hidup, diperlukan kerja sama antara makrofag, sel T penolong, sel T
pembunuh, sel-sel T penekan, sel pengingat, sel B, dan banyak faktor lain.
Gambar 7.5. Penggandaan molekul antibodi dalam sel tubuh
Satu sel B menggandakan antibodi spesifiknya dan mencantolkannya ke

permukaan luar membran selnya. Antibodi memanjang keluar seperti jarum, aerial yang
sudah menyesuaikan diri menunggu berkontak dengan sekeping protein tertentu yang bisa
mereka kenali. Antibodi tersebut terdiri dari dua rantai ringan dan dua rantai berat asam
amino yang bersambungan dalam bentuk Y. Bagian tetap dari rantai itu sama pada
berbagai jenis antibodi. Tetapi bagian bergerak ujung lengan masing-masing mempunyai
rongga berbentuk unik yang tepat sesuai dengan bentuk bagian protein yang “dipilih”
antibodi.
152
Setelah digandakan sampai jutaan, sebagian besar sel B berhenti membelah dan
menjadi sel plasma, jenis sel yang bagian dalamnya berisi alat untuk membuat satu produk
antibodi. Sebagian sel B lain membelah terus tak berhingga, dan menjadi sel memori.
Antibodi bebas yang dibuat oleh sel plasma berkeliling di darah dan cairan limpa. Ketika
antibodi mengikatkan diri pada antigen sasarannya, bentuknya berubah. Perubahan bentuk
inilah yang membuat antibodi “menempel” di bagian luar makrofag.
7.3 Antibodi Monoklonal
7.3.1 Sejarah Antibodi Monoklonal
Pada tahun 1908, Metchnikoff dan Erlich mengemukakan mengenai teori imunologi
yang membawa perubahan besar pada pemanfaatan antibodi untuk mendeteksi adanya
antigen (zat asing) di dalam tubuh. Sebelum ditemukannya teknologi antibodi monoklonal,
antibodi dahulunya diperoleh dengan cara konvensional yakni mengimunisasi hewan
percobaan, mengambil darahnya dan mengisolasi antibodi dalam serum sehingga
menghasilkan antibodi poliklonal. Apabila dibutuhkan antibodi dalam jumlah besar maka
binatang percobaan yang dibutuhkan juga sangat besar jumlahnya. Selain itu bila
diproduksi dalam jumlah besar antibodi poliklonal jumlah antibodi spesifik yang diproduksi
juga sangat sedikit, sangat heterogen dan sangat sulit menghilangkan antibodi lain yang
tidak diinginkan (Radji M. 2010).
Maka dari itu dilakukan serangkaian penelitian untuk membuat antibodi spesifik
secara in vitro, sehingga dapat diproduksi antibodi spesifik dalam jumlah besar, dan tidak
terkontaminasi dengan antibodi lainnya.Tahun 1975, Georges Köhler, César Milstein, and
Niels Kaj Jerne menemukan cara baru dalam membuat antibodi dengan mengimunisasi
hewan percobaan, kemudian sel limfositnya difusikan dengan sel mieloma, sehingga sel
hibrid dapat dibiakkan terus menerus. Sel mieloma adalah sel limfosit B yang abnormal
yang mampu bereplikasi terus-menerus dan menghasilkan sebuah antibodi spesifik berupa
para protein, sel mieloma disebut juga dengan sel B kanker. Mereka juga mampu membuat
antibodi yang homogen yang diproduksi oleh satu klon sel hibrid. Antibodi tersebut lebih
spesifik dibandingkan dengan antibodi poliklonalkarena dapat mengikat 1 epitop antigen
dan dapat dibuat dalam jumlah yang tak terbatas.Definisi epitop sendiri adalah daerah
spesifik pada antigen yang dapat dikenali oleh antibodi (Riechmann, 1992).
Antibodi yang homogen dan spesifik ini disebut antibodi monoklonal. Berkat temuan
antibodi monoklonaloleh Georges Köhler, César Milstein, and Niels Kaj Jerne mendapatkan
hadiah nobel di bidang fisiologi dan kedokteran pada tahun 1985. Antibodi monoklonal
153
dibuat dengan cara penggabungan atau fusi dua jenis sel yaitu limfosit B yang
memproduksi antibodi dengan sel kanker (sel mieloma) yang dapat hidup dan membelah
terus menerus. Hasil fusi antara sel limfosit B dengan sel kanker secara in vitro ini disebut
dengan hibridoma. Apabila sel hibridoma dibiakkan dalam kultur sel, sel yang secara
genetik mempunyai sifat identik akan memproduksi antibodi sesuai dengan antibodi yang
diproduksi oleh sel aslinya yaitu sel limfosit B.
Hal yang penting untuk diperhatikan adalah proses pemilihan sel klon yang identik
yang dapat mensekresi antibodi yang spesifik. Karena antibodi yang diproduksi berasal dari
sel hibridoma tunggal (mono-klon), maka antibodi yang diproduksi disebut dengan antibodi
monoklonal. Sel hibridoma mempunyai kemampuan untuk tumbuh secara tidak terbatas
dalam kultur sel, sehingga mampu memproduksi antibodi homogen yang spesifik
(monoklonal) dalam jumlah yang hampir tak terbatas. Antibodi monoklonal merupakan
senyawa yang homogen, sangat spesifik dan dapat diperoleh dalam jumlah yang besar
sehingga sangat menguntungkan jika digunakan sebagai alat diagnostik. Beberapa jenis kit
antibodi monoklonal telah tersedia di pasaran untuk mendeteksi bakteri patogen dan virus,
serta untuk uji kehamilan.
7.3.2 Hubungan HGPRT dengan Antibodi Monoklonal
Pada dasarnya, sel memiliki dua jalur dalam sintesis nukleotida, yaitu jalur denovo
dan jalur salvage. Sel di kultur jaringan dapat bertahan hidup dengan menggunakan kedua
jalur tersebut. Akan tetapi, mutasi pada enzim untuk sintesis nukleotida mungkin terjadi dan
sekarang menjadi suatu hal yang biasa terjadi dan bahkan sering dimanipulasi untuk
menjadi target mutagenesis pada sel mamalia. Enzim yang umumnya menjadi target
adalah anzimhipoxantin-guanin fosforibosil transferase (HGPRT). Enzim HGPRT
merupakan substansi yang penting dalam jalur salvage. Enzim ini mengkatalisis
pembentukan nukleotida purin (precursor untuk sintesis DNA) dari ribosa dan hipoxantin
serta guanine. Mutasi gen pada HGPRT bisa diseleksi dengan cara menumbuhkan sel
pada media yang mengandung analog purin seperti 8-azoguanin. Enzim HGPRT akan
menganggap 8-azoguanintersebut sebagai suatu substrat dan mengubahnya menjadi
nukleotida monofosfat.8-AG yang mengandung nukleotida ini kemudian diproses lebih
lanjut dan berikatan dengan DNA dan RNA, dimana hal ini merupakan suatu substitusi
yang beracun. Sehingga, sel yang memiliki enzim HGPRT yang tumbuh pada media yang
mengandung 8-AG akan mati.
154
Gambar 7.6. Siklus pembentukan nukleotida
Bagaimanapun juga, karena enzim HGPRT adalah bagian dari jalur pembentukan
nukleotida yang nonessensial (jalur de novo masih ada), sel yang memiliki gen mutan
HGPRT dapat tetap tumbuh. Oleh karena itu, seleksi dengan menggunakan 8-AG akan
membunuh sel yang memiliki HGPRT tetapi tidak akan berefek pada sel mutan HGPRT.
Laju normal dari mutagenesis penting untuk menghilangkan sel dengan 8-AG dan sel yang
tetap hidup adalah sel yang memiliki defisiensi HGPRT. Dalam hubungannya dengan
antibodi monoklonal, sel myeloma yang nantinya akan difusikan dengan sel penghasil
antibodi, tidak mensintesis atau mensekresikan rantai immunoglobulin serta HGPRT. Untuk
menyeleksi hibridoma yang cocok, kita bisa menggunakan medium HAT. Obat-obatan
seperti aminopterin akan memblok sintesis nukleotida jalur de novo karena aminopterin
analog dengan koenzim (f-THFA) yang penting untuk sintesis purin lewat jalur de novo. Hal
ini menyebabkan adanya pemblokan pada jalur de novo karena adanya kompetisi untuk
ikatan enzim dengan f-THFA. Sehingga, sel akan dipaksa untuk menggunakan jalur
salvage untuk mensintesis nukleotida purin. Namun, sel myeloma yang digunakan untuk
pembentukan antibodi monoklonal ini sendiri memiliki defisiensi enzim HGPRT dan akan
mati pada media yang mengandung aminopterin. Splenosit (kebanyakan limfosit) tidak bisa
tumbuh pada medium HAT karena jangkahidupnya yang pendek yakni sekitar 1
155
minggu,sehingga, hanya hibridoma yang merupakan fusi sel dari sel myeloma dengan
splenositlah yang bisa bertahan hidup pada medium HAT. Ini karena induk splenosit akan
menyumbangkan enzim HGPRTnya dan sel myeloma memberikan kemampuan untuk bisa
hidup dan berkembang terus. Dalam jangka waktu 7-10 hari, pada medium akan terdapat
banyak sel-sel mati tetapi juga terdapat beberapa koloni sel hidup yakni koloni dari sel-sel
hibridoma hasil fusi sel myeloma dengan sel B. Hibridoma yang terbentuk ini akan tumbuh
terus secara in vitro dan mensekresikan antibodi monoklonal. Dalam hal ini, penting bagi
kita untuk melakukan skrining awal, karena hybrid yang tidak menghasilkan antibodi akan
tumbuh melebihi hybrid yang bisa menghasilkan antibodi. Untuk skrining ini, kita bisa
memakai metode ELISA. Jadi, dengan kata lain, medium HAT ini bisa membantu kita untuk
mengisolasi hibridoma yang sesuai yang bisa menghasilkan antibodi monoklonal.
Gambar 7.7. Proses seleksi antibodi monoklonal pada medium HAT
156
Gambar 7.8. Proses fusi sel myeloma dan sel B serta sel hibridoma terpilih
7.3.3 Pembuatan Antibodi Monoklonal
Cara pembuatan antibodi monoklonal untuk menghasilkan antibodi yang homogen:

1. Imunisasi mencit
Antigen berupa protein atau polisakarida yang bersal dari bakteri atau virus,
disuntikkan secara subkutan pada beberapa tempat atau secara intra peritoneal.
Setelah 23 minggu disusul dengan suntikan antigen sekali atau beberapa kali
suntikan. Mencit dengan kekebalan terbaik dipilih, 12 hari setelah suntikan terakhir,
antibodi yang terbentuk pada mencit diperiksa dan diukur titer antibodinya, mencit
dimatikan dan limpanya diambil secara aseptis, kemudian dibuat suspensi sel atau
limpa untuk memisahkan sel B yang mengandung antibodi. Cara ini dia anggap
cukup baik dan banyak sekali dipakai, walaupun kadangkala dipengaruhi oleh sifat
antigen atau respon imun binatang yang berbeda-beda.
Cara imunisasi yang lain juga sering dilakukan adalah imunisasi sekali suntik
intralimpa. Pada cara imunisasi konvensional, antigen dipengaruhi bermacam-macam
157
faktor. Bila disuntikkan ke dalam darahsebagian besar akan dieliminasi secara alami,
sedangkan melalui kulit akan tersaringoleh kelenjar limfe, makrofag, dan sel retikuler.
Hanya sebagian kecil antigen yangterlibat dalam proses imun. Oleh sebab itu, untuk
mencegah eliminasi antigen olehtubuh dilakukan suntikan imunisasi langsung pada
limpa dan ternyata hasilnya lebihbaik dari cara konvensional. Menyuntik hewan
laboratorium (mencit) dengan antigendan kemudian, setelah antibodi telah terbentuk,
mengumpulkan antibodi dari serumdarah hewan tersebut (antibodi yang mengandung
serum darah disebut antiserum).
2. Fusi sel limpa kebal dan sel mieloma

Pada kondisi biakan jaringan biasa, sel limpa yang membuat antibodi akan
cepat mati, sedangkan sel mieloma yang dapat dibiakan terus menerus. Fusi sel
dapat menciptakan sel hibrid yang terdiri-dari gabungan sel limpa yang dapat
membuatantibodi dan sel mieloma yang dapat dibiakan terus-menerus, sehingga sel
hibrid dapat memproduksi antibodi secara terus-menerus dalam jumlah yang tidak
terbatas secara in vitro. Fusi sel diawali dengan fusi membran plasma sehingga
menghasilkan sel besar dengan dua atau lebih inti sel, yang berasal dari kedua induk
sel yang berbeda jenis yang disebut heterokarion. Pada waktu tumbuh dan
membelah diri terbentuk satu inti yang nengandung kromosom kedua induk yang
disebut sel hibrid. Frekuensi fusi dipengaruhi beberapa faktor antara lain jenis
medium; perbandingan jumlah sel limpa dengan sel myeloma; jenis sel myeloma
yang digunakan; dan bahan yang mendorong timbulnya fusi (fusogen). Penambahan
polietilen glikol (PEG) dan dimetilsulfoksida(DMSO) dapat menaikkan efisiensi fusi
sel. Mentransfer campuran fusi sel (sel limfosit B dan sel myeloma ke medium kultur
yang disebut medium HAT (karena mengandung Hipoxantin Aminopterin Timidin).
Sel mieloma (sel-sel tumor sum-sum tulang yang akan tumbuh tanpa batas
dilaboratorium dan menghasilkan imunoglobulin) yang tidak mengalami fusi tidak
dapat tumbuh karena kekurangan HGPRT. Sel limfosit B (limpa mencit yang telah
terkena antigen sehingga memproduksi antibodi X) yang tidak mengalami fusi tidak
dapat tumbuh terus karena punyabatas waktu hidup. Sel hibridoma (dihasilkan oleh
fusi yang berhasil) dapat tumbuh tanpa batas karena sel limpa dapat memproduksi
HGPRT dan sel mieloma dapat membantu sel limpa. Fusi ini mengabungkan
kemampuan untuk tumbuh terus menerus dari sel mielomadan kemampuan untuk
menghasilkan sejumlah besar antibodi dari sel limfosit B murni.
158
3. Eliminasi Sel Induk yang Tidak Berfusi
Frekuensi terjadinya hibrid sel limpa-sel mieloma biasanya rendah, karena itu
penting untuk mematikan sel yang tidak fusi yang jumlahnya lebih banyak agar sel
hibrid mempunyai kesempatan untuk tumbuh dengan cara membiakkan sel hibrid
dalam media selektif yang mengandung hypoxanthine, aminopterin, dan
thymidine(HAT). Aminopterin menghambat jalur biosintesis purin dan pirimidin
sehingga memaksa sel menggunakan salvae pathway. Seperti kita ketahui bahwa sel
mieloma mempunyai kelainan untuk mensintesis nukleotida yaitu sel mieloma yang
tidak mempunyai enzim timidin kinase atau hypoxanthine phosphoribosyl transferase,
sehingga sel mieloma yang tidak berfusi, karena tidak mempunyai enzim timidin
kinase atau hypoxanthine phosphonibosyl transferase akan mati, sedangkan sel
hibrid karena mendapatkan enzim tersebut dan sel mamalia yang difusikan dapat
menggunakan salvae pathway, sehingga tetap hidup dan berkembang.
4. Isolasi dan Pemilihan Klon Hibridoma
Sel hibrid dikembangbiakkan sedemikian rupa, sehingga tiap sel hibrid akan
membentuk koloni homogen yang disebut hibridoma. Tiap koloni kemudian dipelihara
terpisah satu sama lain. Hibridoma yang tumbuh diharapkan mensekresi antibodi ke
dalam medium, sehingga antibodi yang terbentuk bisa diisolasi. Umumnya penentuan
antibodi yang diinginkan dilakukan dengan cara enzyme linked immunosorbent assay
(EL1SA) atau radioimmunoassay (RIA).
Gambar 7. 9. Cara memproduksi antibodi monoklonal

(http://www.scribd.com/doc/52527802/antibodi-monoklonal)
159
Gambar 7.10. Cara memproduksi antibodi monoklonal
(http://www.majalah-farmacia.com/rubrik/one_news_print.asp?IDNews=282)
Pemilihan klon hibridoma dilakukan dua kali, pertama adalah dilakukan untuk memperoleh
hibridoma yang dapat menghasilkan antibodi; dan yang kedua adalah memilih sel
hibridoma penghasil antibodi monoklonal yang potensial menghasilkan antibodimonoklonal
yang tinggi dan stabil, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 7.9 dan 7.10.
7.3.4 Mekanisme kerja dan aktivitas antibodi monoklonal
Antibodi monoklonal menggunakan mekanisme kombinasi untuk meningkatkan efek

sitotoksin sel tumor. Mekanisme komponen sistem imun adalah antibody dependent cellular
cytotoxicity (ADCC), complement dependent cytotoxicity (CDC), mengubah signal
transduksi sel tumor atau menghilangkan sel permukaan antigen. Antibodi dapat digunakan
sebagai target muatan (radioisotop, obat atau toksin) untuk membunuh sel tumor atau
mengaktivasi prodrugpada sel tumor, antibody directed enzyme prodrug therapy (ADEPT).
Antibodi monoklonal digunakan secara sinergis melengkapi mekanisme kerja kemoterapi
untuk melawan tumor.
1. Antibody dependent cellular cytotoxicity (ADCC)
Antibody dependent cellular cytotoxicity (ADCC) terjadi jika antibodi mengikat
antigen sel tumor dan Fc antibodi melekat dengan reseptor Fc pada permukaan sel imun
efektor. Interaksi Fc reseptor ini berdasarkan kemanjuran antitumor dan sangat penting
pada pemilihan suatu antibodi monoklonal. Sel efektor yang berperan masih belum jelas
tapi diasumsikan sel fagosit mononuklear dan atau natural killer (NK). Struktur Fc domain di
manipulasi untuk menyesuaikan jarak antibodi dan interaksi dengan Fc reseptor. Antibody
dependent cellular cytotoxity (ADCC) dapat meningkatkan respons klinis secara langsung
160
menginduksi destruksi tumor melalui presentasi anti gen dan menginduksi respons sel T
tumor. Anti body monoklanal berikatan dengan antigen permukaan sel tumor melalui Fc
reseptor permukaan sel NK. Hal ini memicu pelepasan perforin dan granzymes untuk
menghancurkan sel tumor (Gambar 7.11a). Sel-sel yang hancur ditangkap antigen
presenting cell (APC) lalu dipresentasikan pada sel B sehingga memicu penglepasan
antibody kemudian antibody ini akan berikatan dengan target antigen (Gambar 7.11b-d).
Sel cytotoxic T lymphocytes (CTLs) dapat mengenali dan membunuh sel target antigen
(Gambar 7.11d).4,10
Gambar 7.11. Antibody dependen cellular cytotoxicity (ADCC)
2. Complement dependent cytotoxicity (CDC)

Pengikatan antibody monoklonal dengan antigen permukaan sel akan mengawali
kaskade komplement. Complement dependent cytotoxicity (CDC) merupakan suatu metode
pembunuh sel tumor yang lain dari antibody. Imunoglobulim G1 dan G3 sangat efektif pada
CDC melalui jalur klasik aktivasi komplement (Gambar 7.12a).
Gambar 7.12. Complement-dependent cytotoxicity
161
Formasi kompleks antigen antibody merupakan komplemen C1q berikatan dengan lgG
sehingga memicu komplement protein lain untuk mengawali penglepan proteolitik sel
efektor komotaktik/agen aktivasi C3a dan C5a (Gambar 7.12b). Kaskade komplement ini
diakhiri dengan formasi membrane attack complex (MAC) (Gambar 7.12c) sehingga
membentuk suatu lubang pada sel membran. Membrane attack complex (MAC)
memfasilitasi keluar masuknya air dan Na+1 yang akan menyebabkan sel target lisis
(Gambar 7.12d).
3. Perubahan Transduksi Signal
Reseptor growth factor merupakan suatu antigen target tumor, ekspresinya

berlebihan pada keganasan. Aktivasi transduksi signal pada kondisi signal pada kondisi
normal akan menginduksi respons mitogenik dan meningkatkan kelangsungan hidup sel,
hal ini diikuti dengan ekspresi perkembangan sel tumor yang berlebihan yang juga
menyebabkan tumor tidak sensitif terhadap zat kemoterapi. Antibodi monoklonal
menormalkan laju perkembangan sel dan membuat sel sensitif terhadap zat sitotoksik
dengan menghilangkan signal reseptor ini. Target antibody EGFR permukaan sel tumor
atau membersikan ligan seperti VEGF. Pengikatan ligand reseptor growth factor memicu
proses dimerisasi dan aktivasi kaskade signal (Gambar 7.13a) sehingga terjadi proliferasi
sel dan hambatan terhadap zat sitotoksik (Gambar 7.13b). Antibody monoklonal
menghambat signal dengan cara menghambat dimerisasi atau mengganggu ikatan ligand
(Gambar 7.13c).
Gambar 7.13. Perubahan transduksi signal
7.3.5 Antibodi Monoklonal Generasi Baru
162
Beberapa antibodi monoklonal yang digunakan untuk pengobatan berasal dari sel
mencit atau tikus sehingga sering menimbulkan reaksi alergi pada pasien yang menerima
antibodi monoklonal tersebut.
Untuk mengatasi masalah tersebut maka para peneliti melakukan pengembangan
antibodi monoklonal yang memiliki sedikit efek penolakan dari sistem imun pasien.
Perkembangan tersebut menciptakan antibodi monoklonal generasi antara lain :
1. Chimeric monoklonal antibodies

Antibodi chimeric mengambil nama mereka dari Chimera, sebuah binatang mistis
dengan kepala singa, tubuh seekor kambing dan ekor naga. Rituxan atau Rituximab adalah
jenis tertentu obat-obatan yang dikenal sebagai Chimeric. Rituxan merupakan hibrida dari
antibodi dari dua sumber, yaitu manusia dan tikus. Antigen CD20 disuntikkan ke tikus,
mendorong produksi antibodi. Antibodi sel kemudian diisolasi dari limpa hewan kemudian
digabungkan dengan sel myeloma.Hal ini menghasilkan baris sel yang akan terus
memproduksi antibodi tanpa batas.
Rekayasa genetika lebih lanjut menghilangkan unsur-unsur sel tikus yang biasanya
akan menghasilkan reaksi (alergi) kekebalan jika disuntikkan ke manusia.Terapi antibodi
monoklonal basis awal untuk kanker terganggu dengan sejumlah masalah. Pada
eksperimen awal, terdapat reaksi alergi dari bagian asing antibodi eksperimental dari tikus,
yang disebut HAMA (Human Anti Mouse Antibody) yang membatasi kegunaan dan
mencegah digunakan lebih dari sekali. Para pengembang Rituxan mengatasimasalah ini
dengan menghapus bagian antigen dari bagian tikus tersebut dengan antibodichimeric.
2. Humanized MonoklonalAntibodies
Humanized antibodies adalah antibodi dari spesies non-manusia yang sekuens
proteinnya telah dimodifikasi untuk meningkatkan kesamaan mereka pada varian antibodi
yang dihasilkan secara alami pada manusia. Proses "humanisasi" biasanya diterapkan
untuk antibodi monoklonal yang dikembangkan untuk manusia (misalnya, antibodi yang
dikembangkan sebagai obat anti-kanker). Humanisasi ini diperlukan pada saat proses
pengembangan antibodi spesifik yang melibatkan makhluk hidup lain dalam sistem
kekebalan tubuh manusia, seperti pada tikus. Urutan protein antibodi yang diproduksi
dengan cara ini adalah sedikit berbeda dari homolog antibodi yang terjadi secara alami
pada manusia, oleh karenanya berpotensi imunogenik jika diberikan kepada pasien
manusia. Tidak semua antibodi monoklonal dirancang untuk administrasi manusia perlu
dilakukan proses humanized karena banyak yang merupakan terapi intervensi jangka
pendek.
163
Menurut The International Nonproprietary nama akhir antibodi yang telah
dimanusiawikan berakhiran -mab, seperti di omalizumab. Proses ini mempunyai
keuntungan yang dapat dibuktikan dari fakta bahwa produksi antibodi monoklonal dapat
dicapai dengan menggunakan DNA rekombinan untuk membuat konstruksi yang mampu
berekspresi pada kultur sel mamalia. Segmen gen yang mampu memproduksi antibodi
diisolasi dan dikloning ke dalam sel yang dapat tumbuh dalam sebuah tangki fermentor
sehingga protein antibodi yang dihasilkan dari DNA dari gen kloning dapatdipanen secara
massal.
Tidak semua metode untuk menurunkan antibodi dimaksudkan untuk terapi
manusia memerlukan langkah humanisasi (misalnya tampilan fag) tetapi pada dasarnya
semua tergantung pada teknik yang sama memungkinkan "sisipan" bagian dari molekul
antibodi.
3. Fully Human Mono lonal Antibodies
Antibodi ini merupakan antibodi yang paling ideal untuk menghindari terjadinya
respon imun karena protein antibodi yang disuntikkan ke dalam tubuh seluruhnya
merupakan protein yang berasal dari manusia. Salah satu pendekatan yang dilakukan
untuk merancang pembentukan antibodi monoklonal yang seluruhnya mengandung protein
manusia tersebut adalah dengan teknik rekayasa genetika untuk menciptakan mencit
transgenik yang membawa gen yang berasal dari manusia, sehingga mampu memproduksi
antibodi yang diinginkan. Pendekatan lainnya adalah merekayasa suatu binatang
transgenik yang dapat mensekresikan antibodi manusia dalam air susu yang dikeluarkan
oleh binatang tersebut. Salah satu contoh fully human monoclonal antibodies adalah
Panitumumab. Panitumumab ini sebelumnya memiliki nama ABX-EGF, merupakan fully
humanmonoclonal antibodies pertama yang spesifik untuk reseptor faktor pertumbuhan
epidermal(juga dikenal sebagai reseptor EGF, EGFR, ErbB-1 dan HER1 pada manusia).
Panitumumab ini disetujui oleh lembaga obat dan makanan di Amerika pada September
2006 untuk terapi untuk metastasis kanker usus besar yang diekspresikan oleh EGFR.
EGFR ini merupakan protein transmembran. Panitumumab bekerja dengan cara mengikat
pada bagian ekstraseluler membran EGFR untuk mencegah aktivasinya. Sehingga sinyal
intraseluler yang terkait dengan reseptor ini akan terputus atau terhambat. Panitumumab ini
dikembangkan dengan cara imunisasi mencit transgenik yang disebut dengan XenoMouse
yang mampu menghasilkan immunoglobulin manusia rantai berat dan ringan. Setelah
dilakukan imunisasi, klon spesifik sel B yang memproduksi antibodi untuk melawan EGFR
dipilih dan diawetkan pada sel CHO (Chinese hamster ovary). Sel ini kemudian digunakan
pada produksi skala besar. Panitumumab ini diproduksi oleh Amgen dan diperjualbelikan
dengan nama dagang Vectibix.
164
7.3.6 Tipe Antibodi Monoklonal yang Digunakan untuk Terapi Kanker
Dua tipe antibodi monoklonal yang digunakan untuk terapi kanker, adalah :
1. Nakedmonoclonal antibodies
Naked monoclonal antibodies atau antibodi monoklonal murni adalah antibodi yang
penggunaanya tanpa dikombinasikan dengan obat lain atau material radioaktif. Antibodi
murni mengikatkan diri mereka pada antigen spesifik milik sel-sel kanker dengan berbagai
cara. Misalnya, memberi tanda pada sel kanker agar bisa dikenali dan dirusak oleh sistem
imun tubuh. Cara lain dengan mengikatkan diri pada antigen tertentu yang disebut reseptor,
tempat di mana molekul-molekul yang berfungsi menstimulasi pertumbuhan sel kanker juga
akan mengikatkan diri.
Dengan menghambat molekul-molekul pertumbuhan untuk tidak mengikatkan diri,

maka antibodi monoklonal ini sama saja mencegah sel kanker untuk tumbuh dengan cepat.
Trastuzumab (Herceptin), yang merupakan MAb murni dan digunakan untuk kanker
payudara stadium lanjut, adalah contoh antibodi monoklonal yang bekerja dengan cara ini.
Beberapa MAbs murni yang sudah disetujui FDA antara lain :
a. Rituximab (Rituxan): Rituximab digunakan untuk terapi sel B pada non-Hodgkin

lymphoma. Agen ini merupakan antibodi monoklonal dengan sasaran antigen CD20,
yang ditemukan pada sel B.
b. Trastuzumab (Herceptin): Trastuzumab adalah antibodi yang menyerang protein
HER2. Protein ini terlihat dalam jumlah besar pada sel-sel beberapa kasus kanker
payudara. Agen ini disetujui untuk pengobatan tahap lanjut kanker payudara.
c. Alemtuzumab (Campath): Alemtuzumab merupakan antibodi yang menyerang
antigen CD52, yang terlihat pada sel B maupun sel T. Agen ini digunakan untuk
terapi B celllymphocytic leukemia (B-CLL) kronik yang sudah mendapat kemoterapi.
d. Cetuximab (Erbitux): Cetuximab, antibodi dengan sasaran protein EGFR (epidermal
growth factor receptors). EFGR nampak dalam jumlah besar pada beberapa sel
kanker. Agen ini digunakan berbarengan dengan obat kemoterapi irinotecan untuk
kanker kolorektal stadium lanjut. Selain itu juga digunakan untuk terapi kanker leher
dan kepala yang tidak bisa diselesaikan dengan bedah.
e. Bevacizumab (Avastin): Bevacizumab bekerja melawan protein VEGF (Vascular
Endhotelial Growth Factor) yang normalnya membantu tumor membangun jaringan
pembuluh darah baru (proses angiogenesis) sebagai satu cara mendapatkan oksigen
dan nutrisi. Terapi anti-angiogenesis ini digunakan bersama-sama dengan
kemoterapi untuk terapi kanker kolorektal metastatik.
165
Kemajuan pengobatan dengan antibodi melalui serangkaian uji klinis sungguh suatu
langkah yang berani. Antibodi ini bisa membantu pasien kanker yang tidak mengalami
kemajuan dengan terapi standar. Berbagai uji klinis menunjukkan obat ini efektif, dan
kemungkinan bisa digunakan sebagai terapi standart (awal) atau sebagai terapi tambahan
pada kemoterapi.
Antibodi monoklonal diberikan intravena. Dibandingkan dengan efek samping

kemoterapi, efek samping naked MAbs atau MAbs murni biasanya lebih ringan dan sering
dikaitkan dengan reaksi “alergi”. Efek ini terlihat biasanya di awal terapi, misalnya demam,
menggigil, lemah, nyeri kepala, mual, muntah, diare, tekanan darah turun, dan rashes.
Beberapa MAbs juga bisa berimbas pada sumsum tulang seperti halnya pada pemberian
obat kemoterapi. Hal ini sebagai akibat rendahnya kadar sel darah. Efek samping ini bisa
memicu peningkatan risiko pendarahan dan infeksi pada pasien.
2. Conjugated Monoclonal Antibodies
Conjugatedmonoclonal antibodies adalah antibodi yang dikombinasikan dengan

berbagai jenis obat, toksin, dan materi-materi radioaktif. Obat ini hanya berperan sebagai
“kendaraan” yang akan mengantarkan substansi-substansi obat, racun, dan materi
radioaktif, menuju langsung ke sasaran yakni sel-sel kanker. Antibodi monoklonal jenis ini
akan berkeliling ke seluruh bagian tubuh sampai ia berhasil menemukan sel kanker yang
cocok dengan antigen yang ia bawa. Agen ini kemudian akan menghantarkan racun di
tempat paling krusial, namun hebatnya, ia bisa meminimalkan dosis pada sel normal untuk
menghindari kerusakan di seluruh bagian tubuh. Sayangnya, antibodi gabungan ini secara
umum masih menimbulkan efek samping lebih banyak dibandingkan antibodi monoklonal
yang murni. Efek yang ditimbulkan tergantung pada tipe substansi yang ikut serta atau
menempel padanya. Conjugated MAbs kadang dikenal juga sebagai "tagged”, "labeled",
atau "loaded" antibodies. Perbedaannya sebagai berikut:
MAbs yang dikombinasikan dengan obat-obat kemoterapi disebut chemolabeled.

Saat ini agen ini hanya tersedia di Amerika Serikat, itupun hanya dalam rangka uji
klinis.MAbs yang dikombinasikan dengan partikel radioaktif disebut radiolabeled, dan tipe
terapi ini sering juga disebut radioimmunotherapy (RIT). Pada 2002, FDA menyetujui
radiolabeled pertama yang boleh digunakan untuk terapi kanker (tak hanya untuk uji klinis)
yakni Ibritumomab tiuxetan (Zevalin). Obat ini digunakan untuk terapi kanker B
lymphocytes. Kini obat ini juga digunakan untuk terapi B cell non-Hodgkin lymphoma yang
tidak efektif dengan terapi standar.
166
Radiolabeled kedua yang disetujui FDA adalah tositumomab (Bexxar), pada 2003.
Obat ini digunakan untuk tipe tertentu non-Hodgkin lymphoma yang juga tidak
menunjukkan respon dengan rituximab (Rituxan) atau kemoterapi.
Di samping untuk kanker, antibodi radiolabeled juga digunakan bersamaan dengan

kamera khusus untuk mendeteksi penyebaran sel kanker dalam tubuh. Penggunaannya
sudah disetujui FDA yakni OncoScint (untuk deteksi kanker kolorektal dan kanker ovarium)
serta ProstaScint (deteksi kanker prostat).
MAbs yang melekat dengan racun disebut immunotoxins. Imunotoksin dibuat

dengan menempelkan racun-racun (berasal dari tanaman maupun bakteri) ke antibodi
monoklonal. Berbagai racun dibuat untuk ditempelkan pada antibosi monoklonal seperti
diphtherial toxin (DT), pseudomonal exotoxin (PE40), atau yang dibuat dari tanaman yakni
ricin A atau saporin.
Studi awal menunjukkan imunotoksin cukup menjanjikan untuk menyusutkan

sebagian kecil kanker, khususnya limfoma. Namun masalah besar masih menunggu
dipecahkan sebelum bentuk baru terapi kanker ini bisa digunakan secara luas.
Satu-satunya imunotoksin yang mendapat persetujuan FDA untuk terapi kanker

adalah gemtuzumab ozogamicin (Mylotarg). Obat ini mengandung racun calicheamicin.
Racun ini melekat pada antibodi yang langsung menuju sasaran antigen CD33, yang
nampak pada sebagian besar sel leukemia. Saat ini Gemtuzumab digunakan untuk terapi
myelogenous leukemia (AML) akut yang sudah menjalani kemoterapi atau tidak memenuhi
syarat untuk kemoterapi.
Imunotoksin lain yakni BL22, juga cukup menjanjikan melalui studi awal untuk terapi
hairy cell leukemia, bahkan pada pasien yang tidak menunjukkan respon sama sekali
dengan kemoterapi. Pada uji klinis awal, lebih dari dua pertiga pasien menunjukkan respon
komplit terhadap pengobatan yang berlangsung 2 tahun. Uji klinis imunotoksin juga tengah
berlangsung untuk jenis leukemia tertentu, limfoma, kanker otak, dan kanker lainnya.
7.4 Ringkasan
Antibodi Monoklonal adalah Antibodi yang diproduksi berasal dari sel hibridoma tunggal
(mono-klon) sebagai hasil penggabungan limfosit B (memproduksi antibodi) dan sel kanker
(hidup dan membelah terus menerus) secara in vitro. Senyawa homogen dari hasil
penggabungan diperoleh bersifat sangat spesifik hanya mengikat 1 epitop antigen dan
diperoleh dalam jumlah yang sangat besar.
167
Tahap pembentukan dan produksi antibodi monoklonal adalah berturut turut
sebagai berikut:
1. Imunisasi mencit dengan antigen yang akan dibuat antibody monoklonalnya.

2. Limpa mencit diambil dan dibuat suspensi termasuk sel B yang mengandung
antibody terhadapantigen yang disuntikan.
3. Fusi sel limpa dengan sel myeloma.
4. Seleksi sel dengan membiakkan sel dalam media selektif, dimana hanya sel
hybrid saja yang bisa tumbuh.
5. Sel hybrid berproliferasi membentuk klon yang disebut hibridoma
6. Seleksi sel hybrid ma unggul yg menghasilkan antibody monoklonal.
7. Penentuan analisis antibodi dengan cara enzyme linked immunosorbent assay
(ELISA) atau radioimmunoassay (RIA).
Antibodi monoklonal telah banyakdimanfaatkan dalam bidang kesehatan, baik diagnostik

(mis: test urin kehamilan) maupun pengobatan (mis: pengobatan kanker).Para peneliti telah
mengembangkan pembuatan antibodi monoklonal generasi baru, yaitu suatu monoklonal
antibodi yang sebagian atau seluruhnya terdiri dari protein yang berasal dari manusia.
Beberapa jenis antibodi monoklonal generasi baru adalah Chimaric Monoclonal Antibodies,
Humanized Monoclonal Antibodies, dan Fully Human Monoklonal Antibodies.
Contoh Soal:
1. Sebutkan dan jelaskan penggolongan antibodi dan fungsinya masing-masing.

2. Jelaskan tahapan proses pembuatan antibodi monoklonal.
3. Jelaskan mekanisme kerja antibodi monoklonal pada proses diagnostik dan dan
terapi penyakit pada manusia.
4. Sebutkan dan jelaskan proses fagositosis kuman penyakit/antigen.
5. Sebutkan dan Jelaskan beberapa jenis antibodi monoklonal generasi baru dan
aplikasinya pada terapi penyakit.
6. Sebutkan dan jelaskan jenis-jenis antibodi pada manusia dan fungsinya masing-
masing secara spesifik.
168
DAFTAR PUSTAKA
Radji, Maksum. Imunologi &Virologi. Penerbitan PT ISFI; Jakarta.2010. Hal 84-89.
Riechmann L, Clark M, Waldmann H, Winter G. Reshapin human antibodies for

therapy. Nature; 1988. Hal 332.vivalapharmacy.blogspot.com (9 November 2011)
Ali Demirsoy, Kalitim ve Evrim (Inheritance and Evolution), Ankara: Meteksan Yayinlari.
Michael J. Behe, Darwin's Black Box, New York: Free Press, 1996,
Sjahrurachman A. 1995. Perkembangan teknik hibridoma. Cermin Dunia Kedokteran.
http://biologigonz.blogspot.com/2010/02/membuat-antibody-monoklonal.html
diakses pada 10 desember 2011
http://www.scribd.com/doc/52527802/antibodi-monoklonal. diakses pada 10 desember

2011
http://www.majalah-farmacia.com/rubrik/one_news_print.asp?IDNews=282. diakses pada
10 desember 2011.
http://www.britannica.com/EBchecked/media/17658/The-four-chain-structure-of-an-
antibody-or-immunoglobulin-molecule. diakses pada 10 desember 2011.
169
Istilah Arti
Antibodi Monoklonal Antibodi yang diproduksi berasal dari sel hibridoma tunggal
(monoklon) sebagai hasil penggabungan limfosit B
(memproduksi antibodi) dan sel kanker (hidup dan membelah
terus menerus) secara in vitro.
Epitop Daerah spesifik pada antigen yang dapat dikenali oleh antibodi.
Conjugated Antibodi yang dikombinasikan dengan berbagai jenis obat,
monoclonal antibodies
toksin, dan materi-materi radioaktif untuk keperluan diagnosis
dan terapi kanker.
Naked monoclonal Antibodi monoklonal murni yang penggunaanya tanpa
antibodies
dikombinasikan dengan obat lain atau material radioaktif.
170

Bioteknologi Dasar Ahyar Ahmad PDF

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Bioteknologi Dasar Ahyar Ahmad PDF

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

LAPORAN

Prof. Dr. Ahyar Ahmad

Dibiayaioleh DanaDIPALayanan Umum

Judul Buku Ajar : BioteknologiDasar

Makassar, 19 September 2014

Dekan Fakultas MIPA Penulis

Prof. Dr. H. Hanapi Usman, M.S Prof. Dr. Ahyar Ahmad

Nama lengkap : Prof. Dr. Ahyar Ahmad

Makassar, 19 September 2014

Prof. Dr. Ahyar Ahmad

Meskipunbukuinidibuatsecara khususuntukmahasiswa kimiaS1semester4 yang

Penyusunanbukuini tidakterlepasdari campurtanganberbagai pihak,oleh

Makassar, September 2014

HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................ i

SURAT PERNYATAAN .................................................................................. ii

KATA PENGANTAR ....................................................................................... iii

DAFTAR ISI .................................................................................................... iv

1.1 Visi Program Studi Kimia ........................................................... 1

1.2 Misi Program Studi .................................................................... 1

1.3 Tujuan Program Studi ............................................................... 1

1.4 Profil Lulusan Program Studi ..................................................... 1

1.5 Kompetensi Lulusan .................................................................. 2

1.6 Struktur dan Isi Kurikulum ......................................................... 4

1.7 Analisis Kebutuhan Pembelajaran ............................................. 5

1.8 Rancangan Pembelajaran ......................................................... 8

1.9 Tinjauan Mata Kuliah ................................................................. 12

BAB 2 PENGERTIAN, RUANG LINGKUP, DAN PERKEMBANGAN

2.1 Pendahuluan ............................................................................. 13

2.2 Batasan dan Pengertian Bioteknologi ....................................... 17

2.3 Peranan Ilmu Biologi, Biokimia, dan Keteknikan dalam

perkembangan Bioteknologi Molekular ..................................... 18

2.4 Teknik-teknik dalam Bioteknologi Molekular.............................. 34

2.5 Ringkasan ................................................................................. 51

Contoh Soal ....................................................................................... 52

Senarai Istilah dan Artinya ................................................................. 54

BAB 3 BIOTEKNOLOGI PADA PROSES FERMENTASI

3.1 Pendahuluan ............................................................................. 55

3.2 Fermentasi Yoghurt .................................................................. 59

3.3 Fermentasi Nata de Coco.......................................................... 63

3.4. Fermentasi Kecap ..................................................................... 70

3.5 Ringkasan ................................................................................. 76

Contoh Soal ...................................................................................... 77

Daftar Pustaka ................................................................................... 78

Senarai Istilah dan Artinya ................................................................. 80

BAB 4 BIOINSEKTISIDA MIKROBA DAN VIRUS

4.1 Pendahuluan ............................................................................. 81

4.2 Bioinsektisida dari Mikroba ........................................................ 82

4.3 Bioinsektisida dari Virus ............................................................ 93

4. 4 Ringkasan ................................................................................. 101

Contoh Soal ...................................................................................... 101

Daftar Pustaka ................................................................................... 102

Senarai Istilah dan Artinya ................................................................. 104

BAB 5 PRODUKSI ANTIGEN SEBAGAI KANDIDAT VAKSIN

5.1 Pendahuluan ............................................................................. 105

5.2 Tinjauan Umum Protein Manusia .............................................. 105

5.3 Tinjauan Umum Rekayasa Genetika ......................................... 107

5.4 Kegunaan Teknologi Rekombinan ............................................ 109

5.5 Tinjauan Umum Vaksin ............................................................. 110

5.7 Ringkasan ................................................................................. 119

Contoh Soal ...................................................................................... 119

Daftar Pustaka ................................................................................... 120

Senarai Istilah dan Artinya ................................................................. 122

BAB 6 SEL INDUK DALAM BIOTEKNOLOGI KESEHATAN