PEMERIKSAAN KADAR

LDL

Metode: Tes Kolometrik enzimatik dengan gliserol 3 fosfat oksidase (GPO)

PRINSIP
Merupakan protein pengangkut kolesterol dari organ hati ke jaringan tepi. Kadar LDL yang tinggi
meningkatkan risiko asterosklerosis.
Prinsip :
Menetukan trigliserid setelah pemecahan enzimatis oleh LPL. Indikatornya adalah quinoneimin yang dibentuki
dari 4-aminoantipirin dan 4 klorofenol oleh hidrogen proksida di katalisis oleh peroksidase

ALAT DAN BAHAN

- Sampel : Serum, Heparin plasma, atau EDTA plasma
Stabilitas sampel: 7 hari pada suhu 20-25’C, 7 hari pada suhu 4-8’C, 3 bulan pada suhu
-20’C
- Alat :
- Sentrifus
- Vorteks
- Tabung reaksi 1x12 cm
- Rak tabung reaksi
- Pipet
- Spektrofotometer
- Tabung ependof 1,5 ml
- Yellow tip dan blue tip
- Mikropipet
- Kuvet
- Bahan :
- Serum dari darah segar 5 ml
- Reagen kolesterol dan Reagen standar
- Reagen kolesterol LDL
- Buffer (pH 7,2) 50 mmol/L
- 4-klorofenol 4 mmol/L
- ATP 2 mmol/L
2+
- Mg 15 mmol/L
- Glicerokinase (GK) ≥ 0,4 kU/L
- Peroksidase (POD) ≥ 2 kU/L
- Lipoprotein lipase (LPL) ≥ 2 kU/L
- 4-aminoantipirin 0,5 mmol/L
- Gliserol-3-fosfat-aksidase ≥ 5 kU/L
- Standar 200 mg/dl (2,3 mmol/L)

CARA KERJA
1. Presipitasi
a. Siapkan 3 buah tabung ependof dan isi masing-masing tabung tersebut dengan seperti pada tabel dibawah ini:
Komponen Blanko Sampel Standar
Sampel/Standar - 50µL 50µL
Aquabides 50µL - -
Reagen 500µL 500µL 500µL
b. Gojog sampai larutan homogen.
c. Inkubasi selama 15 menit pada suhu 20-25’C.
d. Sentrifugasi dengan kecepatan 2500rpm selama 20 menit.
2. Pemeriksaan
a. Siapkan 3 buah tabung ependof dan isi masing-masing tabung tersebut dengan seperti pada tabel dibawah ini:
Komponen Blanko Sampel Standar*
Supernatan dari masing-masing tabung 100µL 100µL 100µL
NaCl 0,9% - - 1ml
Reagen Kolesterol 500µL 500µL 500µL
* Khusus untuk tabung standar: dari 100µL supernatan + 1ml NaCl diambil 100µL saja kemudian ditambahkan
500µL reagen kolesterol
b. Vortex selama 10 detik.
c. Inkubasi selama 10 menit pada suhu 20-25’C.
d. Baca absorbansi dalam waktu 60 menit dan bandingkan dengan blanko.