Oleh : Jason Avizkan 2016060253/12016001637

Ringkasan Jurnal Imunofluoresen Patologi Anatomi Kulit

Blok Organ Indera (MAC 306)
Oleh : Jason Avizkan 2016060253/12016001637

Direct immunofluorescence (DIF) adalah teknik yang digunakan di laboratorium untuk

mendiagnosis penyakit kulit, ginjal, dan sistem organ lainnya. Ini juga disebut tes fluoresen
imun langsung atau imunofluoresensi primer.

DIF melibatkan aplikasi molekul konjugat antibodi-fluorofor pada sampel jaringan pasien
yang diperoleh dari biopsi. Konjugat antibodi-fluorofor ini menargetkan pengendapan protein
yang abnormal dalam jaringan pasien. Ketika terkena cahaya, fluorophore memancarkan
frekuensi cahayanya sendiri, terlihat dengan mikroskop. Pola pewarnaan tertentu dan jenis
endapan protein abnormal yang terlihat dalam sampel jaringan membantu mendiagnosis
penyakit.

DIF berguna dalam diagnosis dugaan penyakit autoimun, penyakit jaringan ikat dan
vaskulitis. Pola pewarnaan terlihat dalam sampel jaringan mungkin spesifik untuk entitas
penyakit atau mereka mungkin perlu ditafsirkan dengan temuan klinis dan histologis.

Situs biopsi dan lokasi optimal untuk mengambil biopsi kulit tergantung pada penyakit yang
dicurigai. Penyakit bulosa autoimun diambil di kulit perilesional yang tampak normal kurang
dari 1 cm dari bula. Karena hasil negatif palsu dapat muncul dari sampel dari ekstremitas
bawah, hindari situs ini jika memungkinkan. Penyakit jaringan ikat harus diambil dari lesi
yang sudah mapan (sering di daerah yang terpapar sinar matahari), idealnya berumur lebih
dari 6 bulan tetapi masih aktif. Spesimen tambahan sering diambil di tempat yang terlindung
dari sinar matahari. Vaskulitis untuk hasil terbaik, lakukan biopsi tinju atau biopsi bercukur
dalam pada lesi yang berumur kurang dari 24 jam. Biopsi lain biasanya dilakukan untuk
histologi hematoksilin-eosin (H&E) rutin. Perhatikan bahwa situs biopsi optimal dan
kerangka waktu yang diperlukan berbeda untuk contoh-contoh berikut seperti Penyakit
bulosa autoimun: lepaskan seluruh vesikel atau biopsi tepi bula. Vaskulitis dipilih lesi
purpura dengan durasi kurang dari 72 jam.

Pola pewarnaan dapat digolongkan ke dalam lima kelompok, yaitu Pola pewarnaan antar sel
(ICS), Pola Linear basement membrane zone (BMZ), Pola BMZ granular, Pola BMZ shaggy,
Pola pembuluh darah dan lainnya.

DIF melibatkan aplikasi molekul konjugat antibodi-fluorofor pada sampel jaringan pasien
yang diperoleh dari biopsi. Konjugat antibodi-fluorofor ini menargetkan pengendapan protein
yang abnormal dalam jaringan pasien. Ketika terkena cahaya, fluorophore memancarkan
frekuensi cahayanya sendiri, terlihat dengan mikroskop. Pola pewarnaan tertentu dan jenis
endapan protein abnormal yang terlihat dalam sampel jaringan membantu mendiagnosis
penyakit. Tes direct immunofluorescence (DIF) untuk autoantibodi yang terikat jaringan,
telah terbukti bermanfaat dalam diagnosis beberapa gangguan dermatologis. Lokasi dan pola

Oleh : Jason Avizkan 2016060253/12016001637

 Oleh : Jason Avizkan 2016060253/12016001637

deposisi imunoreaktan membantu dalam mengklasifikasikan berbagai penyakit yang

dimediasi kekebalan.

Dalam penelitian terbaru, ada kesesuaian yang sangat baik antara hasil klinis, histologis dan
DIF. Hasil keseluruhan DIF pada gangguan kulit yang diperantarai kekebalan sangat baik
dengan hanya dua kasus (satu pemfigus vulgaris dan satu pemfigoid bulosa) yang
menunjukkan hasil yang sumbang. DIF sangat membantu dalam membuat diagnosis yang
akurat ketika fitur klinis / histologi tidak khas, dan untuk konfirmasi diagnosis dalam semua
kasus di mana fitur klinis dan histologi khas. Dalam banyak situasi, hasil DIF negatif juga
penting karena membantu mengeluarkan basis kekebalan untuk penyakit, meskipun tidak
dapat memberikan diagnosis yang tepat. Tidak ada hasil DIF positif palsu.

Imunofluoresensi langsung adalah suplemen yang berguna untuk diagnosis akurat kelainan
dermatologis yang dimediasi imun, dan membantu mengklasifikasikan berbagai kelainan
bulosa autoimun. Ketika gambaran klinis / histopatologi tidak dapat disimpulkan, diagnosis
seringkali dapat dibuat berdasarkan temuan DIF saja. Kombinasi fitur klinis, histopatologi,
dan DIF biasanya memberikan hasil terbaik.

Empat jenis studi sering digunakan dalam imunodermatologi, IF langsung dan tidak
langsung, fiksasi komplemen, dan mikroskop immunoelectron. Imunofluoresensi Langsung
(DIF) juga merupakan suatu prosedur satu langkah yang melibatkan penerapan antibodi
berfluoresensi ke bagian kulit yang beku. Tes ini menentukan deposisi imunoreaktan dalam
jaringan pasien. Pada Imunofluoresensi tidak langsung (IIF) jaringan normal adalah substrat.
Metode ini membutuhkan dua inkubasi. Serum pasien dilapisi pada substrat diikuti oleh
aplikasi antibodi berfluoresensi. Studi-studi ini mendeteksi antibodi yang bersirkulasi dalam
serum. Keuntungan penting dari metode tidak langsung adalah peningkatan sensitivitasnya
(10-15 kali). Teknik IIF yang dimodifikasi menggunakan kulit pasien sendiri sebagai substrat
yang dikenal sebagai immunomapping (pemetaan antigen) digunakan untuk menentukan
lokasi pembelahan atau kelainan yang tepat dalam distribusi protein struktural yang
bermutasi (normal, berkurang, atau kekurangan ekspresi) dalam berbagai bentuk
epidermolisis bulosa herediter (EB). Fiksasi pelengkap adalah jenis IIF lainnya. Setelah
serum pasien dilapisi pada substrat, sumber komplemen ditambahkan. Antibodi
anticomplement berfluoresensi kemudian digunakan untuk mendeteksi keberadaan
komplemen dalam jaringan. Tes ini dapat mendeteksi sejumlah kecil antibodi penguat
komplemen. Immunoelectron microscopy (IEM) dapat dilakukan secara analog untuk
mendeteksi DIF atau IIF. Alih-alih antibodi berfluoresensi, antibodi diberi label dengan
enzim, seperti horseradish peroxidase atau logam berat, seperti emas koloid. Tes ini
menyediakan lokalisasi subselular atau ultrastruktural dari imunoreaktan. Teknik ini dapat
membantu dalam diagnosis diferensial subtipe EB herediter, di mana pemetaan antigen tidak
signifikan. Ada beberapa keuntungan IF dibandingkan mikroskop immunoelectron. IF adalah
prosedur yang secara teknis lebih sederhana dan lebih pendek dari IEM, dan lebih kuantitatif
dan dapat diandalkan. Hal ini juga lebih murah dalam hal waktu dan reagen teknisi, namun
tes ini kurang permanen daripada yang dilakukan dengan pewarnaan peroksidase. Perbedaan
utama lainnya adalah bahwa biopsi memerlukan pemotongan khusus bagian tipis untuk
mikroskop immunoelectron.

Oleh : Jason Avizkan 2016060253/12016001637

 Oleh : Jason Avizkan 2016060253/12016001637

Tes Immunofluorescence (IF) telah mendefinisikan kembali pemahaman kita tentang banyak
penyakit kulit yang dimediasi imun, terutama penyakit lepuh autoimun (AIBD). Nomenklatur
AIBD tertentu (misalnya, penyakit IgA linier dan pemfigus IgA) telah dilakukan hanya
berdasarkan temuan immunoreaktan yang terikat jaringan seperti yang dideteksi oleh tes IF.
Langsung dan tidak langsung adalah dua jenis utama tes IF. Mereka tidak hanya berguna
dalam diagnosis tetapi juga membimbing dokter dalam pengobatan setidaknya pada AIBD
tertentu, karena titer antibodi yang beredar seperti yang dideteksi oleh IF mencerminkan
aktivitas penyakit.

DIF adalah teknik yang paling umum digunakan dalam praktik untuk mendiagnosis AIBD.
Dalam DIF, antigen target adalah autoantibodi pasien. Kulit 5 mm dari lokasi blister
diperoleh dan ditempatkan dalam media transportasi seperti buffer Michel. Bagian beku dari
kulit perilesional ini disiapkan, dan setiap bagian diinkubasi dengan antibodi primer tunggal,
seperti anti-IgG, anti-IgM, atau anti-C3. Antibodi primer ini terkait dengan fluorescein
isothiocyanate (FITC), sebuah fluorofor yang divisualisasikan oleh ahli patologi
menggunakan mikroskop fluorescent. Ada atau tidak adanya epifluoresensi kemudian
dilaporkan dan dapat diukur secara relatif dan subyektif.

Dalam IIF, antigen target hadir dalam substrat yang dikenal dan tersedia. Substrat ini
diinkubasi dengan serum encer pasien yang mengandung antibodi primer. Antibodi sekunder
berlabel FITC kemudian ditambahkan dan mengikat ke antibodi primer. Epifluoresensi
divisualisasikan dengan mikroskop fluoresens dan dapat dikuantifikasi dengan titrasi serum
pasien yang berurutan.

Dalam ELISA, target antigen yang menarik (seperti domain NC16a dari BP180) diimobilisasi
dengan adsorpsi fisik atau dengan penangkapan antibodi. Ketika penangkapan antibodi
digunakan, ini disebut sebagai "sandwich ELISA" karena antigen target terikat antara
antibodi immobilisasi dan antibodi primer. Antibodi primer ada dalam serum pasien.
Antibodi sekunder yang terhubung dengan enzim kemudian ditambahkan yang mengikat
wilayah Fc dari antibodi primer. Substrat ditambahkan dan diubah oleh enzim menjadi sinyal.
Perubahan warna, fluoresensi, atau sinyal elektrokimia yang dihasilkan diukur secara
kuantitatif dan dilaporkan.

Western blot identik dengan imunoblot. Untuk metode ini, sel-sel yang mengekspresikan
antigen target atau antigen yang menarik dikultur dan kemudian dilisiskan untuk melepaskan
protein. Protein-protein ini didenaturasi dan kemudian dipisahkan oleh elektroforesis gel
berdasarkan berat molekulnya, diukur dalam kilodalton (kDa). Electroblotting kemudian
mentransfer protein ini ke media membran. Setelah situs non-spesifik pada membran
tersumbat, diinkubasi dengan antibodi primer (serum pasien). Antibodi sekunder yang
dihubungkan dengan enzim reporter, seringkali peroksidase lobak, berikatan dengan antibodi
primer. Reaksi enzimatik menghasilkan sinyal luminescent yang ditangkap oleh kamera dan
kemudian diukur. Imunopresipitasi adalah varian imunoblot yang dapat digunakan untuk
mengidentifikasi, mengisolasi, dan memusatkan banyak antigen target (potensial). Larutan
lisat diinkubasi dengan serum pasien, dan kompleks terbentuk antara antigen target dan
autoantibodi primer. Kompleks antigen-antibodi ini kemudian diimobilisasi pada manik-
manik, diendapkan dari larutan, dan kemudian dianalisis dengan teknik imunoblot standar.

Oleh : Jason Avizkan 2016060253/12016001637

 Oleh : Jason Avizkan 2016060253/12016001637

Daftar Pustaka

1. Mysorekar V, Shyam Prasad A, Sumathy T. Role of direct immunofluorescence in

dermatological disorders. Indian Dermatology Online Journal. 2015;6(3):172.
2. Chhabra S, Minz R, Saikia B. Immunofluorescence in dermatology. Indian Journal of
Dermatology, Venereology, and Leprology. 2012;78(6):677.
3. Rao R, Shetty V, Subramaniam K. Utility of immunofluorescence in dermatology.
Indian Dermatology Online Journal. 2017;8(1):1.
4. Ali S, Lauren S, Olayemi S, Kiran M. Comparison of histopathology,
immunofluorescence, and serology for the diagnosis of autoimmune bullous
disorders: an update. 2016.

Oleh : Jason Avizkan 2016060253/12016001637