Pentingnya termasuk Blomia tropicalis dalam diagnosis rutin pasien Venezuela dengan gejala

alergik persisten

Latar belakang: Blomia tropicalis adalah tungau yang umum ditemukan di debu rumah banyak
negara tropis termasuk Venezuela. Prevalensi tes kulit dan imunoglobulin serum spesifik (Ig) E
reaktivitas terhadap B. tropicalis di Venezuela belum pernah dievaluasi sebelumnya.

Metode: Dalam penelitian ini kami mengevaluasi reaktivitas kulit dengan tes tusukan kulit dan
IgE spesifik dengan uji antigen blot ganda, melawan B. tropicalis dan Dermatophagoides
pteronyssinus, dalam kelompok yang terdiri dari 115 subjek yang menghadiri theAllergy Clinic
dari Institute of Biomedicine, Caracas, Venezuela, dan kami mempelajari kemungkinan reaksi
silang antara protein serupa dari dua tungau ini.

Hasil: Seratus enam pasien dengan gejala alergi alergik persisten menunjukkan tes tusukan
kulit positif setidaknya pada salah satu ekstrak tungau, dengan frekuensi reaksi positif terhadap
B. tropicalis yang setinggi D. pteronyssinus. Dua belas pasien hanya bereaksi terhadap D.
pteronyssinus dan 13 berbeda pasien hanya untuk B. tropicalis. IgE spesifik untuk masing-
masing ekstrak tungau ditemukan dengan frekuensi yang sama, dan hasilnya bertepatan
dengan reaktivitas tes kulit.

Kesimpulan: Penelitian ini menunjukkan pentingnya memasukkan B. tropicalis dalam pengujian

diagnostik rutin dalam situasi tropis dan sub-tropis.

Sudah jelas bahwa tungau debu rumah adalah penyebab penting dari penyakit alergi persisten,
seperti asma dan rinitis. Penelitian sebelumnya telah menunjukkan bahwa Dermatophagoides
pteronyssinus, Dermatophagoides farinae dan Blomia tropicalis adalah tungau yang paling
umum di debu rumah daerah tropis dan subtropis. Blomia tropicalis adalah tungau domestik
keluarga Glyciphagidae yang, berbeda dengan Dermatophagoides, lebih sering ditemukan di
daerah tropis dibandingkan dengan iklim sedang.

Blomia tropicalis telah ditemukan dalam debu dari rumah berlokasi di banyak negara, termasuk
Spanyol, India, Taiwan, Brasil, Kolombia, Filipina dan Indonesia. Di Venezuela, Hurtado dan
Parini menunjukkan bahwa B.tropicalis dan D. pteronyssinus adalah tungau yang paling sering
dalam sampel debu rumah. Namun, untuk diagnosis rutin klinis pasien alergi, B. tropicalis
biasanya tidak digunakan. Peran penting dari tungau ini sebagai alergen yang dapat
menyebabkan penyakit alergi telah dijelaskan sebelumnya. Adanya tes kulit positif dan / atau
antibodi serum immunoglobulin (Ig) E terhadap B.tropicalis telah ditunjukkan pada pasien alergi.
Selain itu banyak penulis menemukan bahwa ada reaktivitas silang yang signifikan antara D.
pteronyssinus dan B.tropicalis, dan bahwa ini terutama terkait dengan kelompok 5 alergen dari
tungau ini, meskipun banyak alergen B. tropicalis lainnya juga dapat menghadirkan reaktivitas
silang dengan tungau lainnya. Oleh karena itu, sangat penting untuk menentukan apakah
sensitisasi terhadap B. tropicalis terutama diarahkan pada alergen spesifik spesies.

Karena reaktivitas pasien alergi Venezuela terhadap D.pteronyssinus dan B. tropicalis sama
dan spesifik spesies, penting untuk memasukkan B. tropicalis dalam tes diagnostik rutin. Dalam
penelitian ini kami mengevaluasi reaktivitas tes kulit dan IgE spesifik dalam kelompok pasien
Venezuela dengan gejala alergik persisten terhadap ekstrak B. tropicalis dan D. pteronyssinus,
serta kemungkinan reaktivitas silang antara dua tungau ini.

Bahan dan metode

Subyek

Kami mempelajari sekelompok 115 subjek yang menghadiri Klinik Alergi, Institut Biomedik,
Caracas, Venezuela. Penelitian ini dilakukan sebagai bagian dari evaluasi rutin pasien yang
menghadiri Institute of Biomedicine setelah disetujui oleh komite etik Institut, diratifikasi oleh
Dewan Akademik dari Fakultas Kedokteran Universitas Tengah Venezuela. Para pasien
diklasifikasikan menurut kriteria Laporan Konsensus Internasional sebagai hanya menderita
rinitis, pasien dengan gejala asma tanpa rinitis yang signifikan sebagaimana didefinisikan oleh
pedoman WHO / NIH Global Initiative for Asma (GINA) dan pasien dengan asma gabungan dan
rinitis.

Usia rata-rata dari mata pelajaran ini adalah 25 tahun dan 67% adalah perempuan. Kami
melakukan pengujian kulit dengan B. tropicalis dan D. pteronyssinus ekstrak dan deteksi IgE
serum tertentu dengan multi antas blot assay (MABA). Kami mengevaluasi 30 subjek yang
melaporkan tidak ada riwayat penyakit alergi sebagai kelompok kontrol.

Persiapan ekstrak tungau Cultured D. pteronyssinus (Laboratorium Commonwealth Serum,

Parkeville, Australia dan Biopol Inc, Spokane, Wash, USA) adalah dihilangkan lemaknya
dengan ekstraksi Soxhlet dengan dietil eter, diekstraksi selama 48 jam pada 4C dengan 0,05 M
NH4HCO3 jenuh dengan kloroform dan kemudian dipekatkan / didialisis menggunakan filter
serat berongga dengan pemotongan berat molekul nominal 5 Kd (Amicon Corp, Lexington, MA,
AMERIKA SERIKAT). Konsentrasi total protein ditentukan oleh metode Bradford, kemudian
ekstrak disaring membran dan sterilitas diuji dengan metode bakteriologis rutin. Ekstrak Blomia
tropicalis disiapkan seperti yang dijelaskan sebelumnya (8) dan bahan terliofilisasi dibentuk
kembali pada konsentrasi 50 lg / ml dalam buffer karbonatebikarbonat, pH 9,5 untuk MABA atau
50% gliserol, 0,4% fenol untuk tes kulit.

Tes tusukan kulit

Skin prick tests dilakukan dengan ekstrak D. pteronyssinus dan B. tropicalis pada 0,1 mg / ml
dalam larutan garam yang mengandung 50% gliserol dan 0,4% fenol. Tes kontrol dilakukan
dengan pengencer saja dan dengan 1% w / v histamin dihidroklorida. Diameter wheal diukur
setelah 20 menit, dan diameter ‡ 3 mm dianggap positif. Obat anti-alergi ditangguhkan selama
5 hari sebelum tes.

Hasil

Studi pasien dan uji kulit reaktivitas Dari total 115 individu yang dievaluasi, 107 memiliki gejala
alergi alergik persisten pada paparan debu rumah. Rhinitis dilaporkan pada 37% pasien, dan
asma dilaporkan pada 18%, dengan prevalensi gabungan penyakit menjadi 45%.

Seratus enam pasien uji tusuk kulit positif untuk setidaknya satu dari ekstrak tungau; 81 positif
terhadap kedua ekstrak tungau, 12 bereaksi hanya untuk D.pteronyssinus dan 13 subyek yang
berbeda hanya untuk B. tropicalis. Prevalensi reaksi uji tusuk kulit pada kedua tungau lebih
tinggi pada kelompok pasien dengan kombinasi rhinitis dan asma. Sembilan subjek tidak
memiliki gejala alergi pada paparan debu rumah, dan uji tusukan kulit negatif pada kedua
ekstrak tungau. 30 subyek normal negatif untuk tes kulit.

Lima sampel serum yang bereaksi terhadap kedua ekstrak tungau (1, 2, 7, 10, 12), empat yang
bereaksi hanya untuk D.pteronyssinus (4, 6, 8, 11) dan tiga yang bereaksi hanya untuk B.
tropicalis (3, 5, 9) telah diinkubasi dengan ekstrak larut D. pteronyssinus atau B. tropicalis
seperti yang dijelaskan sebelumnya. Pada pasien yang memiliki IgE spesifik hanya untuk D.
pteronyssinus, B. tropis yang larut tidak menghambat pengikatan D. pteronyssinus dan pada
pasien yang hanya bereaksi terhadap B. tropicalis, bentuk larut dari D. pteronyssinus tidak
menghambat pengikatan ke B. tropicalis. Sebaliknya, dalam dua dari lima sera yang bereaksi
terhadap kedua ekstrak tungau, soluble D. pteronyssinus menghambat pengikatan ke B.
tropicalis dan B. tropicalis juga menghambat pengikatan ke D. pteronyssinus. Hasil ini
menunjukkan bahwa ada tingkat reaktivitas silang yang moderat antara dua tungau ini.

Diskusi
Di Venezuela prevalensi reaktivitas tes kulit B. tropicalis belum dievaluasi sebelumnya. Telah
ditunjukkan bahwa pasien alergi sangat reaktif terhadap tungau debu rumah keluarga
pyrogliphid, yang termasuk D. pteronyssinus dan D. farinae. Terlepas dari kenyataan bahwa
berbagai penelitian telah menunjukkan bahwa B. tropicalis umumnya ditemukan di rumah-
rumah di banyak negara tropis, termasuk Venezuela, kepekaan terhadap tungau ini jarang
dievaluasi di negara ini. Di Venezuela D. pteronissynus telah digunakan sering sebagai alergen
utama untuk evaluasi reaktivitas alergi. Bahkan, dalam kuesioner baru-baru ini bahwa Puccio
dan Di Prisco disirkulasikan ke 30 ahli alergi di Caracas, hanya satu yang melaporkan B.
tropicalis ekstrak sebagai komponen biasa baterai mereka ekstrak alergen inhalan (data tidak
dipublikasikan).

Kami menunjukkan bahwa 107 pasien menunjukkan riwayat penyakit pernapasan alergi yang
jelas setelah terpapar debu rumah dan 106 menunjukkan tes tusukan kulit positif terhadap
setidaknya satu dari ekstrak tungau, dengan frekuensi reaksi positif terhadap B. tropicalis yang
setinggi D. pteronyssinus. Seluruh kelompok pasien yang memiliki uji tusuk kulit positif
setidaknya salah satu ekstrak tungau juga memiliki IgE spesifik untuk salah satu tungau ini,
berbeda dengan tidak ada kelompok kontrol nonalergik. IgE spesifik untuk masing-masing
ekstrak tungau ditemukan dengan frekuensi yang sama, dan hasilnya bertepatan dengan
reaktivitas tes kulit.

Reaktivitas yang tinggi terhadap B. tropicalis juga telah ditunjukkan di negara-negara tropis
lainnya. Laporan dari Taiwan menunjukkan bahwa pasien penderita asma memiliki tes kulit
positif terhadap B. tropicalis, dan disimpulkan bahwa B. tropicalis memainkan peran penting
dalam patogenesis asma di negara tersebut. Di Kolombia pentingnya B. tropicalis sebagai
pemicu asma dan rinitis alergi juga telah dilaporkan.

Yang menarik dalam hasil kami adalah bahwa pasien dengan rhinitis dan asma gabungan
bereaksi dengan frekuensi yang lebih tinggi untuk kedua tungau, di samping itu, beberapa
pasien alergi dengan rinitis dan asma bereaksi terhadap B. tropicalis tetapi tidak untuk D.
pteronyssinus. Oleh karena itu pasien yang memiliki gejala alergi yang tidak dapat dijelaskan
dan tes tusukan kulit negatif untuk D. pteronyssinus mungkin sensitif terhadap B. tropicalis,
sehingga menunjukkan pentingnya memasukkan tungau nonpyrogliphid ini dalam pengujian
diagnostik rutin dalam situasi tropis dan sub-tropis. Juga untuk imunoterapi, penggabungan
ekstrak B. tropicalis dapat menjadi langkah yang efektif untuk mengobati gejala pernapasan
alergi pada orang yang peka untuk debu rumah.
Hasil keseluruhan diperoleh dalam perbandingan antara Tes MABA dan tusukan kulit,
menunjukkan persentase spesifisitas dan sensitivitas yang tinggi, hasil yang sama diperoleh
ketika MABA dibandingkan dengan ELISA. Kami sebelumnya telah menggunakan teknik ELISA
untuk mendeteksi IgE serum spesifik, karena telah dilaporkan sebagai metodologi yang dapat
diatur oleh penulis lain. Tes MABA memungkinkan screening serum secara simultan dengan
beberapa alergen dan itu akan mewakili metode penting untuk mendeteksi IgE spesifik yang
cepat untuk beberapa alergen pada pasien alergi.

Untuk mencapai diagnosis dan pengobatan penyakit alergi yang tepat, penting untuk
mengevaluasi jika reaktivitas yang ditemukan pada pasien adalah spesifik alergen. Kami
menemukan bahwa 17 pasien memiliki IgE spesifik yang terdeteksi terhadap B. tropicalis dan
tidak D. pteronyssinus; ini menunjukkan kemungkinan reaksi IgE spesifik. Banyak penulis
menggambarkan tingkat reaktivitas silang tertentu antara D. pteronyssinus dan B. tropicalis (12-
14) dan reaktivitas silang ini terutama terkait dengan alergen kelompok 5: Blot 5 dan Der p 5.

Kami menunjukkan dengan tes penghambatan MABA, bahwa ada pasien yang memiliki IgE
spesifik spesies, tetapi pada pasien lain kami mengkonfirmasi adanya beberapa tingkat
reaktivitas silang antara dua tungau ini.

Hasil kami kompatibel dengan setidaknya dua penjelasan yang mungkin. Beberapa pasien
mungkin bereaksi terhadap alergen umum yang dimiliki oleh kedua tungau, dan reaktivitas
dengan salah satu dapat menghambat reaktivitas berikutnya yang lain dalam tes
penghambatan MABA. Kemungkinan lain adalah bahwa beberapa pasien peka dengan kontak
sebelumnya dengan kedua tungau hadir pada tingkat tinggi di debu rumah Caracas daripada
alergen umum tunggal.
Tungau debu rumah telah dilaporkan sebagai salah satu alergen paling penting di Taiwan
terutama pada pasien penderita asma. Penelitian ini dilakukan untuk menentukan alergenisitas
Blomia tropicalis dan sensitisasi pasien penderita asma di Taiwan. Sampel debu serial
dikumpulkan setiap bulan antara Juli 1993 dan Juni 1994 dari 13 rumah pasien alergi tungau.
Sekitar 1 m2 luas permukaan selimut disedot. Metode mengambang digunakan untuk
mengumpulkan tungau, kemudian identifikasi dan penghitungan dilakukan. Hasilnya
menunjukkan bahwa Dermatophagoides pteronyssinus dan B. tropicalis adalah dua spesies
tungau yang paling umum ditemukan di rumah pasien alergen di Taipei. D. pteronyssinus
menyumbang 52,1% dari total jumlah tungau dan ditemukan di setiap rumah. B. tropicalis,
meskipun tidak ada dalam setiap sampel, menyumbang 44,3% dari total jumlah tungau. Tes
kulit reaksi positif terhadap B. tropicalis, D. pteronyssinus dan Dermatophagoides farinae
adalah 73,3, 88,3 dan 85,0% sebagaimana ditentukan dari 60 pasien alergi yang datang ke
klinik alergi kami. Ekstrak yang dibuat dari B. tropicalis digunakan untuk menentukan
alergenisitas dan mengandung setidaknya 30 komponen protein ketika diwarnai perak. Alergen
yang paling sering terdeteksi adalah protein dengan berat molekul 14,3, 106,5, 94,0, 72,0, 91,9,
63,7, 100,3, 43,6, 27,3, 62,0, 34,7, 18,3, 41,1 dan 21,9 kD. Frekuensi pengikatan IgE serum
pasien terhadap protein tersebut adalah 87,0, 65,2, 56,5, 43,4, 39,1, 39,1, 34,8, 30,4, 30,4,
17,4, 17,4, 17,4, 13,0 dan 8,7%. Hasil dari penghambatan imunoblot menunjukkan bahwa ada
reaktivitas silang IgE di antara B. tropicalis dan D. pteronyssinus. Namun, ada dua komponen
alergen utama B. tropicalis yang tidak dihambat oleh D. pteronyssinus dengan berat molekul
sekitar 14,3 dan 27,3 kD. Penggunaan ekstrak B. tropicalis untuk tujuan diagnostik untuk
mengidentifikasi pasien dengan sensitivitas tertentu harus dipertimbangkan di Taiwan.

pengantar

Sensitisasi terhadap tungau debu rumah merupakan faktor risiko penting untuk pengembangan
asma bronkial. Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa tungau debu rumah sangat lazim di
Taiwan, di mana iklimnya subtropis. Lebih dari 80% pasien asma alergi terhadap
Dermatophagoides pteronyssinus sebagaimana ditentukan oleh skin test dan D. pteronyssinus
specific IgE. Beberapa spesies tungau telah diidentifikasi dari sampel debu rumah, termasuk D.
pteronyssinus, Dermatophagoides farinae dan Blomia tropicalis di Taiwan. Baru-baru ini, B.
tropicalis telah dilaporkan menjadi komponen alergi debu rumah yang penting secara klinis.

Tes kulit positif dan / atau kehadiran antibodi IgE yang bersirkulasi ke B. tropicalis dalam serum
dari individu
telah ditunjukkan setelah terpapar B. tropicalis. Beberapa peneliti, menggunakan tes
radioalergosorben penghambatan dan tes radioimmunoelectrophoresis terlewati pada pasien
yang alergi terhadap D. farinae dan B. tropicalis, hanya menemukan reaktivitas silang antara D.
farinae dan B. tropicalis dan spesifitas dari reaksi alergi in vivo terhadap B. tropicalis telah
dibuktikan. Baru-baru ini, B. tropicalis allergen Blo t 5 telah diidentifikasi oleh teknik kloning
molekul, dan menunjukkan 43% homologi urutan ke D. pteronyssinus alergen Der p 5.

Oleh karena itu, tujuan dari penelitian ini adalah untuk survei prevalensi tungau debu di rumah-
rumah orang dengan asma alergi yang tinggal di Taipei, Taiwan dan untuk memperjelas
signifikansi klinis B. tropicalis dengan cara tes kulit dan analisis imunoblot. Reaktivitas silang
dari B. tropicalis dengan D. pteronyssinus juga diselidiki oleh analisis penghambatan imunoblot.

Diskusi

B. tropicalis adalah lazim di daerah tropis dan subtropics daerah di seluruh dunia dan telah
terdeteksi pada sampel debu rumah di Taiwan. Dalam studi ini, sarana jumlah total B. tropicalis
per gram debu di tiga belas sampel debu yang dikumpulkan pada bulan Agustus di rumah
pasien penderita asma dari kasur, selimut, bantal dan karpet adalah 327 32, 264 31, 179 25
dan 108 32 , masing-masing. Jumlah besar B. tropicalis dalam sampel debu rumah
menunjukkan bahwa Taiwan adalah daerah endemik. Jumlah tungau yang rendah di karpet
mungkin karena fakta bahwa kebanyakan karpet kecil dan bisa dicuci dengan mesin dalam
penelitian ini. Selain itu, tidak semua rumah memiliki karpet. Karena cuacanya hangat dan
lembab di musim dingin, penggunaan karpet di Taiwan tidak umum seperti di negara-negara
barat. Telah diusulkan bahwa sekitar 150 B. tungau / debu tropisis berhubungan dengan
sensitisasi atau gejala pada orang yang peka terhadap B. tropicalis.

Konsentrasi yang lebih besar dari 150 tungau / g debu di daerah Taipei menunjukkan bahwa
pasien asma ini mungkin peka terhadap B. tropicalis. Jumlah yang sama dari B. tropicalis juga
telah dilaporkan di daerah Tampa Bay Florida dari Amerika Serikat dan di Cartagena, Kolombia.
Evaluasi peran B. tropicalis pada asma telah diperumit oleh fakta bahwa sensitisasi bersamaan
terjadi di rumah-rumah di mana baik B. tropicalis dan D. pteronyssinus hadir. Namun, pada
tahun 1996, Stanaland dkk. mengamati bahwa hanya tes kulit-positif terhadap B. tropicalis
menunjukkan respon tantangan nasal positif meskipun fakta bahwa semua mata-mata alergi
rhinitis sensitif terhadap D. pteronyssinus. Dalam penelitian ini, persentase yang tinggi (73,3%)
dari pasien penderita asma yang menunjukkan reaksi tes kulit positif terhadap B. tropicalis
mungkin menunjukkan bahwa B. tropicalis memainkan peran dalam patogenesis asma di
Taiwan. Dalam penelitian ini, ada lebih dari 30 antigen dalam ekstrak B. tropicalis sebagaimana
ditentukan oleh pewarnaan perak. Profil alergenik yang dianalisis dengan imunoblot SDS-PAGE
menggunakan serum dari pasien uji kulit positif menunjukkan bahwa ada lebih dari 14 protein
pengikat IgE yang berbeda dengan berat molekul yang berbeda mulai dari 10 hingga 100 kD.
Telah dilaporkan bahwa B. tropicalis memiliki 21 antigen pengikatan IgE berbeda yang dideteksi
oleh radioimmunoelectrophoresis yang disilang, dan 25 antigen yang terdeteksi oleh
immunoblotting dan analisis autoradiografi.

Perbedaan ini mungkin karena kurang sensitive sifat dari metode immunoblotting nonisotope
yang kami gunakan. Lebih dari 80% serum pasien bereaksi dengan alergen 14,3-kD, yang
mungkin dianggap sebagai alergen utama. Hasil serupa baru-baru ini melaporkan bahwa B.
tropicalis memiliki komponen alergen utama dengan berat molekul sekitar 11-13 kD. Alergen
utama ini harus dianalisis lebih lanjut. Tingginya jumlah antibodi IgE spesifik-tungau pada
sebagian besar serum pasien dapat lebih jauh menunjukkan bahwa terdapat tingkat paparan
yang tinggi pada pasien asma kami terhadap B. tropicalis.

Hasil dari penghambatan imunoblot menunjukkan bahwa ada IgE cross-reaktivitas antara B.
tropicalis dan D. pteronyssinus. Namun, dua komponen alergen utama B. tropicalis tidak dapat
dihambat oleh D. pteronyssinus dengan berat molekul sekitar 14,3 dan 27,3 kD. Arruda et al.
telah menunjukkan bahwa 33% penghambatan dicapai oleh D. pteronyssinus ketika B. tropicalis
digunakan dalam fase padat. Baru-baru ini, Blo t 5 dan Der p 5 telah dianalisis dan diurutkan
untuk menunjukkan bahwa ada 43% homologi asam amino. Reaktivitas silang sebesar 33%
dari B. tropicalis dengan D. pteronyssinus dan 43% homologi urutan Blo t 5 dan Der p 5
menunjukkan bahwa beberapa protein pengikat IgE dari B. tropicalis dapat dihambat sebagian
oleh D. pteronyssinus. Namun, komponen non-cross-reaktif B. tropicalis dan D. pteronyssinus
menunjukkan bahwa B. tropicalis memiliki alergen spesifik yang spesifik yang perlu
dideskripsikan lebih detail.

Kesimpulannya, B. tropicalis sangat lazim dan bisa secara umum terdeteksi pada sampel debu
rumah di Taiwan. Frekuensi sensitisasi yang tinggi terhadap B. tropicalis juga dapat
ditunjukkan. Immunoblotting mengindikasikan bahwa B. tropicalis memiliki banyak alergen yang
mengikat IgE. Beberapa protein pengikat IgE adalah alergen spesifik spesies berdasarkan uji
penghambatan imunobloting. Penggunaan ekstrak B. tropicalis untuk tujuan diagnostik untuk
mengidentifikasi pasien dengan sensitivitas tertentu terhadap B. tropicalis dengan atau tanpa
sensitivitas bersamaan dengan Dermatophagoides spp. harus dipertimbangkan di Taiwan.