Bab

Biru-Light Tanggapan:

18
Gerakan stomata dan
Morphogenesis

PALING DARI AS yang akrab dengan pengamatan bahwa tanaman rumah ditempatkan di
dekat jendela memiliki cabang yang tumbuh ke arah cahaya yang masuk. Tanggapan ini,
disebut fototropisme, adalah contoh bagaimana tanaman mengubah pola pertumbuhan
mereka dalam menanggapi arah radiasi insiden. Tanggapan ini terhadap cahaya secara
intrinsik berbeda dari perangkap cahaya oleh fotosintesis. Dalam fotosintesis, tanaman
memanfaatkan cahaya dan mengubahnya menjadi energi kimia (lihat Bab 7 dan 8).
Sebaliknya, fototropisme adalah contoh penggunaan cahaya sebagai sinyal lingkungan. Ada
dua keluarga besar respon tanaman sinyal cahaya: tanggapan fitokrom, yang tercakup
dalam Bab 17, dan tanggapan biru cahaya.

Beberapa tanggapan biru cahaya diperkenalkan dalam Bab 9-misalnya, gerakan

kloroplas dalam sel dalam menanggapi fluks insiden foton, dan pelacakan matahari dengan
daun. Seperti dengan keluarga tanggapan fitokrom, ada banyak respon tanaman terhadap
cahaya biru. Selain fototropisme, mereka termasuk penghambatan hipokotil elongasi,
stimulasi klorofil dan karotenoid sintesis, aktivasi ekspresi gen, gerakan stomata, fototaksis
(pergerakan organisme uniseluler motil seperti ganggang dan bakteri menuju atau jauh dari
cahaya), peningkatan respirasi, dan serapan anion di ganggang (Senger

1984). tanggapan biru-cahaya telah dilaporkan pada tumbuhan tingkat tinggi, alga, pakis, jamur,
dan prokariota.
Beberapa tanggapan, seperti acara-acara listrik di membran plasma, dapat dideteksi
dalam hitungan detik iradiasi oleh cahaya biru. metabolik atau morphogenetic tanggapan
yang lebih kompleks, seperti biosintesis pigmen cahaya dirangsang biru jamur Neurospora atau
bercabang di alga
alga keemasan, mungkin memerlukan menit, jam, atau bahkan berhari-hari (Horwitz 1994).

Pembaca mungkin bingung dengan pendekatan yang berbeda untuk penamaan fitokrom
dan biru cahaya tanggapan. Mantan diidentifikasi oleh fotoreseptor tertentu (fitokrom), yang
terakhir oleh daerah biru cahaya dari spektrum yang terlihat. Dalam kasus fitokrom,
beberapa spektroskopi dan sifat biokimia, khususnya merah / reversibil- jauh-merah
404 Bab 18
ity, dimungkinkan identifikasi awal, dan ratusan tanggapan Photobiological
tanaman dapat dengan jelas dikaitkan dengan fotoreseptor fitokrom (lihat
Bab 17).
Sebaliknya, spektroskopi tanggapan biru-cahaya yang kompleks. Kedua
klorofil dan fitokrom menyerap cahaya biru (400-500 nm) dari spektrum yang
terlihat, dan kromofor lain dan beberapa asam amino, seperti tryptophan,
menyerap cahaya ultraviolet (250-400 nm) wilayah. Bagaimana, kemudian,
dapat kita kemudian membedakan tanggapan khusus terhadap cahaya biru?
Salah satu kriteria identifikasi penting adalah bahwa dalam respon
biru-cahaya tertentu, cahaya biru tidak bisa digantikan oleh perawatan lampu
merah, dan tidak ada reversibilitas merah / jauh-merah. lampu merah atau
jauh-merah akan efektif jika fotosintesis atau fitokrom terlibat.
Perbedaan utama lain adalah bahwa banyak tanggapan biru-cahaya
tanaman lebih tinggi berbagi spektrum tindakan yang khas. Anda akan ingat
dari Bab 7 yang spektrum aksi adalah grafik dari besarnya respon cahaya
diamati sebagai fungsi dari panjang gelombang (lihat Web Topik 7.1 untuk
pembahasan rinci tentang spektroskopi dan tindakan spektrum). Spektrum
aksi respon dapat dibandingkan dengan spektrum serapan
dari fotoreseptor calon. Sebuah korespondensi dekat antara aksi dan
spektrum penyerapan memberikan indikasi kuat bahwa pigmen dalam
pertimbangan adalah fotoreseptor mediasi respon cahaya yang diteliti (lihat
Gambar 7.8).
Aksi spektrum untuk fototropisme biru muda-dirangsang, gerakan
stomata, penghambatan hipokotil elongasi, dan kunci tanggapan
biru-cahaya lain berbagi “tiga-jari” struktur karakteristik baik dalam 400
sampai 500 wilayah nm (Gambar 18.1) yang tidak diamati dalam spektrum
tanggapan
1,40
daerah biru dari spektrum
1.20
1.00
Curvature per photon, relative to 436 nm
0.80
0.60
0.40
0,20
0
320 340 360 300 380 400 420 440 460 480 500
Panjang gelombang (nm)
GAMBAR 18.1 spektrum aksi untuk fototropisme cahaya dirangsang biru
dalam koleoptil oat. Spektrum aksi menunjukkan hubungan antara respon
biologis dan panjang gelombang cahaya yang diserap. “Tiga-jari” pola dalam
400 sampai 500 nm daerah adalah karakteristik dari respon cahaya tertentu
biru. (Setelah Thimann dan Curry 1960.)
cahaya yang dimediasi oleh fotosintesis, fitokrom, atau fotoreseptor lainnya
(Cosgrove 1994).
Dalam bab ini kita akan menjelaskan tanggapan perwakilan biru cahaya
pada tanaman: fototropisme, penghambatan pemanjangan batang, dan
gerakan stomata. Tanggapan stomata terhadap cahaya biru dibahas secara
rinci karena pentingnya stomata pertukaran gas daun (lihat Bab 9) dan di
aklimatisasi tanaman dan adaptasi dengan lingkungan mereka. Kami juga
akan membahas fotoreseptor biru-cahaya dan sinyal kaskade transduksi yang
menghubungkan persepsi cahaya dengan ekspresi akhir dari penginderaan
biru-cahaya dalam organisme.
THE PHOTOPHYSIOLOGY
JAWABAN BIRU-LIGHT
sinyal cahaya biru dimanfaatkan oleh tanaman dalam banyak tanggapan,
yang memungkinkan tanaman untuk merasakan kehadiran cahaya dan
arahnya. Bagian ini menjelaskan perubahan morfologi, fisiologi, dan
biokimia utama yang terkait dengan tanggapan biru cahaya khas.
Blue Light Merangsang Asymmetric Pertumbuhan dan Bending
Pertumbuhan Directional arah (atau dalam keadaan khusus jauh dari)
cahaya, disebut fototropisme. Hal ini dapat diamati pada jamur, pakis, dan
tanaman lebih tinggi. Fototropisme adalah photomorphogenetic respon
yang sangat dramatis dalam bibit gelap tumbuh dari kedua monokotil dan
dikotil. cahaya unilateral umumnya digunakan dalam studi eksperimental,
namun fototropisme juga dapat diamati ketika bibit terkena dua sumber
merata cahaya terang (Gambar 18.2), suatu kondisi yang dapat terjadi di
alam.
Karena tumbuh melalui tanah, tunas rumput dilindungi oleh daun
dimodifikasi yang menutupnya, disebut koleoptil
(Gambar 18.3; lihat juga Gambar 19.1). Seperti dibahas secara rinci dalam Bab
19, persepsi cahaya yang tidak sama dalam hasil koleoptil dalam konsentrasi
yang tidak sama auksin di sisi menyala dan berbayang dari koleoptil,
pertumbuhan yang tidak merata, dan lentur.
Perlu diingat bahwa phototropic lentur hanya terjadi di
pertumbuhan organ, dan bahwa koleoptil dan tunas yang telah berhenti
memanjangkan tidak akan membungkuk saat terkena cahaya sepihak. Dalam
bibit rumput yang tumbuh di tanah di bawah sinar matahari, koleoptil berhenti
tumbuh secepat menembak telah muncul dari tanah dan daun sejati pertama
telah menembus ujung koleoptil.
Di sisi lain, gelap-tumbuh, etiolated koleoptil terus memanjang pada
tingkat tinggi selama beberapa hari dan, tergantung pada spesies, dapat
mencapai beberapa sentimeter panjangnya. Tanggapan phototropic besar
ini koleoptil etiolated (lihat Gambar 18.3) telah membuat mereka model
klasik untuk studi dari fototropisme (Firn 1994).
Spektrum aksi yang ditunjukkan pada Gambar 18.1 diperoleh melalui
pengukuran sudut kelengkungan dari koleoptil oat yang disinari dengan
sinar yang berbeda
 Biru-Light Tanggapan: Gerakan stomata dan Morphogenesis 405

pertumbuhan
panjang gelombang. spektrum menunjukkan puncak pada sekitar 370 nm
Sumber cahaya dan “tiga-jari” pola di wilayah 400 sampai 500 nm dibahas sebelumnya.
Kotiledon Arah Spektrum aksi untuk fototropisme di alfalfa dikotil ( Medicago sativa) ditemukan
sangat mirip dengan koleoptil oat, menunjukkan bahwa fotoreseptor umum
memediasi fototropisme dalam dua spesies.

Fototropisme di sporangiospora cetakan Phycomyces telah dipelajari

cahaya unilateral pencahayaan bilateral yang tidak sama
untuk mengidentifikasi gen yang terlibat dalam respons phototropic.
sporangiophore terdiri dari sporangium (spora-bantalan struktur bola) yang
berkembang pada tangkai yang terdiri dari, sel tunggal yang panjang.
Pertumbuhan sporangiophore dibatasi ke zona tumbuh tepat di bawah
sporangium tersebut.

Ketika disinari dengan cahaya biru unilateral, sporangiophore

membungkuk ke arah cahaya dengan spektrum tindakan yang mirip
dengan koleoptil fototropisme (Cerda-Olmedo dan Lipson 1987). Studi ini
dari Phycomyces telah menyebabkan isolasi banyak mutan dengan
tanggapan phototropic diubah dan identifikasi beberapa gen yang
Dua lampu yang sama dari Dua lampu yang tidak sama dari
diperlukan untuk fototropisme normal.
samping samping

GAMBAR 18.2 Hubungan antara arah pertumbuhan dan cahaya insiden yang
tidak setara. Kotiledon dari bibit muda ditampilkan sebagai dilihat dari atas.
Tanda panah menunjukkan arah kelengkungan phototropic. Diagram
menggambarkan bagaimana arah pertumbuhan bervariasi dengan lokasi dan
intensitas sumber cahaya, namun pertumbuhan selalu menuju cahaya.
(Setelah Firn 1994.)
Dalam beberapa tahun terakhir, fototropisme batang dari dikotil kecil Arabidopsis
( Gambar 18.4) telah menarik banyak perhatian karena kemudahan yang
canggih teknik molekuler dapat diterapkan untuk Arabidopsis mutan.
Genetika dan biologi molekuler dari fototropisme di Arabidopsis
dibahas kemudian dalam bab ini.

(A) tipe liar

Cahaya biru

(B) Mutant
Cahaya biru

GAMBAR 18.3 foto selang waktu dari koleoptil jagung yang berkembang
menuju cahaya biru unilateral diberikan dari kanan. Eksposur berturut-turut
dibuat 30 menit terpisah. Catatan sudut meningkatnya kelengkungan
sebagai menekuk koleoptil. (Courtesy of MA Quiñones.)
GAMBAR 18.4 Fototropisme di tipe liar (A) dan mutan (B)
Arabidopsis bibit. cahaya sepihak diterapkan dari kanan. (Courtesy of Dr.
Eva Huala.)
406 Bab 18
Bagaimana Tanaman Merasakan Arah Cahaya Signal?
gradien cahaya antara menyala dan sisi teduh telah diukur dalam koleoptil
dan hipokotil dari bibit dikotil disinari dengan cahaya biru unilateral. Ketika
koleoptil diterangi dengan 450 cahaya biru nm, rasio antara cahaya yang
kejadian tersebut ke permukaan sisi diterangi dan cahaya yang mencapai
sisi teduh adalah 4: 1 di ujung dan midregion koleoptil, dan 8 : 1 di dasar
(Gambar 18.5).
Di sisi lain, ada efek lensa di sporangiophore cetakan Phycomyces disinari
dengan cahaya biru unilateral, dan sebagai hasilnya, cahaya diukur pada
permukaan sel distal dari sporangiophore adalah sekitar dua kali jumlah
cahaya yang insiden di permukaan sisi diterangi. gradien cahaya dan efek
lensa dapat memainkan peran dalam bagaimana organ lentur indra arah
cahaya unilateral (Vogelmann 1994).
Blue Light Cepat Menghambat Stem Pemanjangan
Batang bibit yang tumbuh di memanjang gelap sangat cepat, dan
penghambatan pemanjangan batang oleh cahaya merupakan respon
morphogenetic kunci dari bibit yang muncul dari permukaan tanah (lihat
Bab 17). Konversi Pr ke PFR (merah- dan bentuk jauh merah menyerap
dari fitokrom, masing-masing) di bibit etiolated menyebabkan, penurunan
tajam fitokrom tergantung tingkat elongasi (lihat Gambar 17.1).
Menyelidiki
1.2 Cahaya
biru
0,8
Light (relative units)
0,4
0 beberapa proses morphogenetic penting. Beberapa gen
0 1.0 0 1.0
Jarak (mm)
GAMBAR 18.5 Distribusi ditransmisikan, 450 nm cahaya biru dalam koleoptil jagung
etiolated. Diagram di kanan atas setiap frame menunjukkan area koleoptil yang
diukur dengan probe optik serat-. Sebuah penampang jaringan muncul di bagian
bawah setiap frame. Jejak di atas menunjukkan jumlah cahaya dirasakan oleh probe
pada setiap titik. Sebuah mekanisme penginderaan yang bergantung pada gradien
cahaya akan merasakan perbedaan jumlah cahaya antara sisi terang dan teduh
koleoptil, dan informasi ini akan tertransduksi menjadi trasi konsentrasi- auksin yang
tidak merata dan lentur. (Setelah Vogelmann dan Haupt 1985.)
Namun, tindakan spektrum untuk penurunan tingkat pemanjangan
acara aktivitas yang kuat di wilayah biru, yang tidak dapat dijelaskan oleh
sifat penyerapan fitokrom (lihat Gambar 17.9). Bahkan, 400 sampai 500
daerah biru nm dari spektrum tindakan untuk menghambat pemanjangan
batang erat menyerupai fototropisme (membandingkan spektra tindakan
dalam Angka 17.10 dan 18.1).
Ada beberapa cara untuk eksperimen memisahkan penurunan tarif
perpanjangan dimediasi oleh fitokrom dari pengurangan dimediasi oleh respon
biru-cahaya tertentu. Jika bibit selada diberikan tingkat fluence rendah cahaya
biru di bawah latar belakang yang kuat dari lampu kuning, tingkat pemanjangan
hipokotil mereka berkurang lebih dari 50%. Latar belakang lampu kuning
menetapkan Pr didefinisikan dengan baik: rasio PFR (lihat Bab 17). Dalam
kondisi seperti itu, tingkat fluence rendah cahaya biru menambahkan terlalu
kecil untuk secara signifikan mengubah rasio ini, mengesampingkan efek
fitokrom pada penurunan tingkat pemanjangan diamati pada penambahan
cahaya biru.
tanggapan hipokotil ringan dan fitokrom-dimediasi biru juga dapat
dibedakan dengan kecepatan respon. Sedangkan perubahan
fitokrom-dimediasi di tingkat pemanjangan dapat dideteksi dalam waktu 8
sampai 90 menit, tergantung pada spesies, respon biru-cahaya yang cepat,
dan dapat diukur dalam waktu 15 sampai 30 detik (Gambar 18.6). Interaksi
antara fitokrom dan biru tergantung cahaya transduksi sensori cascade
dalam regulasi tingkat elongasi akan dijelaskan kemudian dalam bab ini.
respon yang cepat lain yang ditimbulkan oleh sinar biru adalah depo- sebuah
larization dari membran sel hipokotil yang mendahului
penghambatan laju pertumbuhan (lihat Gambar
18,6). Depolarisasi membran disebabkan oleh aktivasi saluran
anion (lihat Bab 6), yang memfasilitasi penghabisan anion seperti
klorida. Penggunaan blocker saluran anion mencegah
Menyelidiki depolarisasi membran tergantung cahaya biru dan mengurangi
efek penghambatan cahaya biru pada hipokotil elongasi (Taman
Cahaya
biru
et al. 1998).
Blue Light Mengatur Gene Expression
Cahaya biru juga mengatur ekspresi gen yang terlibat dalam
cahaya-diaktifkan ini telah dipelajari dalam contoh rinci-untuk, gen
yang kode untuk sintase enzim chalcone, yang mengkatalisis
langkah berkomitmen pertama dalam biosintesis flavonoid, untuk
2.0 subunit kecil Rubisco, dan untuk protein yang mengikat klorofil Sebuah
dan b ( lihat Bab 13, 8, dan 7, masing-masing). Sebagian besar
studi tentang gen cahaya diaktifkan menunjukkan sensitivitas
untuk kedua cahaya biru dan merah, serta reversibilitas merah /
jauh-merah, yang melibatkan baik fitokrom dan tanggapan
Bluelight tertentu.
Penelitian arecent melaporkan bahwa SIG5, salah satu dari enam SIG
gen nuklir di Arabidopsis yang memainkan peran regulasi dalam
transkripsi gen kloroplas
 Biru-Light Tanggapan: Gerakan stomata dan Morphogenesis 407

(SEBUAH) timbulnya pencahayaan, GSA tingkat mRNA yang 26 kali lipat lebih tinggi
2,5
daripada mereka dalam gelap (Gambar 18.7). Ini light-dimediasi biru mRNA
Biru muda pada
meningkat mendahului peningkatan kadar klorofil, yang menunjukkan
bahwa biosintesis klorofil sedang diatur oleh aktivasi GSA gen.
2.0
Growth rate (mm h –1)

Blue Light Merangsang stomata Pembukaan

Kita sekarang mengalihkan perhatian kita untuk respon stomata terhadap cahaya
1,5
biru. Stomata memiliki peran regulasi utama dalam pertukaran gas di daun (lihat
Bab 9), dan mereka sering dapat mempengaruhi hasil tanaman pertanian (lihat
Bab 25). Beberapa karakteristik gerakan stomata tergantung cahaya biru
1.0
membuat sel penjaga sistem eksperimental yang berharga untuk studi tanggapan
Bluelight:
(B)
0 1 2 3 4

- 60 • The stomata respon terhadap cahaya biru yang cepat dan reversibel,
dan terlokalisir di tipe sel tunggal, sel penjaga.

- 80
Membrane potential difference (mV)

• The stomata respon terhadap cahaya biru mengatur gerakan stomata

- 100 sepanjang kehidupan tanaman. Ini tidak seperti fototropisme atau
hipokotil elongasi, yang secara fungsional penting pada tahap awal
pengembangan.
- 120

• Kaskade transduksi sinyal yang menghubungkan persepsi cahaya biru

- 140
dengan pembukaan stomata dipahami secara rinci. Pada bagian berikut
kita akan membahas dua aspek utama dari respon stomata terhadap
- 160
0 1 2 3 4 cahaya, mekanisme osmoregulatory yang mendorong gerakan stomata,

Waktu (min) dan peran biru muda-diaktifkan H + -ATPase dalam penyerapan ion oleh
sel penjaga.
GAMBAR 18.6 Biru muda-diinduksi (A) perubahan tingkat pemanjangan bibit
mentimun etiolated dan (B) depolarisasi membran sementara sel hipokotil.
Sebagai brane depolarisasi mem- (diukur dengan trodes elektroforesis
intraseluler) mencapai maksimum, laju pertumbuhan (diukur dengan posisi
transduser) menurun tajam. Perbandingan dari dua kurva menunjukkan
bahwa membran mulai depolarize sebelum tingkat pertumbuhan mulai
menurun, menunjukkan hubungan sebab-akibat antara dua fenomena.
(Setelah Spalding dan Cosgrove 1989.)
Relative abundance of GSA mRNA

psbD, yang mengkode D2 subunit dari pusat reaksi PSII (lihat Bab 7),
secara khusus diaktifkan oleh cahaya biru (Tsunoyama et al. 2002).
Sebaliknya, lima lainnya SIG
gen diaktifkan oleh kedua cahaya biru dan merah.
Lain misalnya terdokumentasi dengan baik ekspresi gen yang dimediasi
semata-mata oleh sistem cahaya biru-penginderaan melibatkan GSA gen
dalam alga uniseluler fotosintesis Chlamydomonas reinhardtii ( Hal-hal dan
Beale 1995). Gen ini mengkode enzim glutamat-1-semialdehid
pada
aminotransferase (GSA), enzim kunci dalam jalur biosintesis klorofil (lihat -2 0 2 4 6 8 10 12
Bab 7). Tidak adanya fitokrom di C. reinhardtii menyederhanakan analisis Saat pengobatan biru-light (h) biru cahaya
respon Bluelight dalam sistem eksperimental ini.
GAMBAR 18,7 Tentu saja waktu ekspresi gen tergantung cahaya biru di Chlamydomonas
reinhardtii. Itu GSA gen mengkodekan enzim glutamat-1-semialdehid
amino transferase, yang mengatur langkah awal dalam biosintesis
Dalam budaya disinkronkan dari C. reinhardtii, tingkat GSA klorofil. (Setelah Matters dan Beale 1995.)
mRNAare diatur secara ketat oleh cahaya biru, dan 2 jam setelah
408 Bab 18

(SEBUAH) (B)
kacang luas ( Vicia faba), gerakan stomata erat melacak
insiden radiasi matahari di permukaan daun (Gambar 18.9).

Kloroplas Pori
Studi awal dari respon stomata terhadap cahaya
menunjukkan bahwa DCMU (dichlorophenyldimethylurea),
penghambat transpor elektron fotosintesis (lihat Gambar
7.31), menyebabkan penghambatan parsial pembukaan
stomata cahaya dirangsang. Hasil ini menunjukkan bahwa
fotosintesis di kloroplas penjaga sel berperan dalam
pembukaan stomata tergantung cahaya, tapi pengamatan
bahwa penghambatan itu hanya parsial menunjuk ke
komponen non-fotosintetik dari respon stomata terhadap
cahaya. studi rinci respon cahaya stomata telah
menunjukkan bahwa cahaya mengaktifkan dua tanggapan
yang berbeda dari sel penjaga: fotosintesis dalam kloroplas
penjaga sel (lihat Web Essay 18.1 ),
sel penjaga

20 μ m dan respon biru-cahaya tertentu.

GAMBAR 18,8 pembukaan stomata Light-dirangsang di epidermis terpisah dari Vicia faba. Terbuka,
Respon stomata khusus untuk cahaya biru tidak bisa
stoma cahaya diperlakukan (A), ditampilkan dalam gelap diobati, ditutup negara dalam (B). diselesaikan dengan baik di bawah pencahayaan biru terang
pembukaan stomata yang diukur dengan pengukuran scopic mikro dari lebar pori stomata. karena cahaya biru secara bersamaan merangsang kedua
(Courtesy of respon dan penjaga fotosintesis sel biru cahaya khusus
E. Raveh.)
(untuk respon fotosintesis terhadap cahaya biru, melihat aksi

Cahaya adalah sinyal lingkungan yang dominan mengendalikan gerakan
stomata pada daun tanaman yang disiram tumbuh di lingkungan alam. Stomata
terbuka sebagai tingkat cahaya yang mencapai kenaikan permukaan daun, dan
dekat karena mereka menurunkan (Gambar 18,8). Dalam daun kaca-tumbuh
dari
(A)
radiation (400–700 nm) ( µ mol m –2
spektrum untuk fotosintesis pada Gambar 7.8). Aclear-cut pemisahan
tanggapan dari dua tanggapan cahaya dapat diperoleh dalam eksperimen
dual-beam. tingkat fluence tinggi lampu merah digunakan untuk jenuh respon
fotosintesis, dan fluks foton rendah cahaya biru ditambahkan setelah
respon terhadap lampu merah menjenuhkan telah selesai (Gambar 18.10).
Penambahan cahaya biru menyebabkan pembukaan stomata lanjut
substansial yang tidak dapat dijelaskan sebagai stimulasi lebih lanjut dari
fotosintesis penjaga sel karena fotosintesis jenuh dengan latar belakang
lampu merah.

1250
Spektrum aksi untuk respon stomata terhadap cahaya biru di bawah
Photosynthetically active

1000 latar belakang pencahayaan merah menunjukkan pola threefinger dibahas

sebelumnya (Gambar 18.11). spektrum tindakan ini, khas tanggapan biru
750 terang dan jelas berbeda dari spektrum aksi untuk fotosintesis, lebih lanjut
menunjukkan bahwa, selain fotosintesis, sel penjaga merespon secara
500
khusus untuk cahaya biru.
s –1)

0
Ketika sel penjaga diperlakukan dengan enzim selulolitik yang mencerna
(B) 250
dinding sel, protoplas penjaga sel dilepaskan. protoplas sel penjaga membengkak
14 ketika diterangi dengan cahaya biru (Gambar 18,12), menunjukkan bahwa
cahaya biru dirasakan dalam sel penjaga yang tepat. Pembengkakan sel
Stomatal aperture (pore

12
penjaga
10
width, µ m)

68
GAMBAR 18.9 pembukaan stomata melacak radiasi aktif fotosintesis di permukaan daun.
04 pembukaan stomata di permukaan bawah daun Vicia faba ditanam di rumah kaca, diukur
sebagai lebar pori stomata (A), erat mengikuti tingkat radiasi aktif photosynthetically (400-700
2
nm) kejadian tersebut ke daun (B), menunjukkan bahwa respon terhadap cahaya adalah
respon mengatur dominan pembukaan stomata. (Setelah Srivastava dan Zeiger 1995a.)
5:00 9:00 13:00 17:00 21:00
Waktu hari
 Biru-Light Tanggapan: Gerakan stomata dan Morphogenesis 409

(SEBUAH)

12
Stomatal aperture ( µ m)

Cahaya biru

10

8 cahaya biru

lampu merah Tercerna pori

426
stomata

0 1 2 3 4
Waktu (h)

Protoplas dalam gelap Protoplas membengkak dalam

GAMBAR 18,10 Respon stomata terhadap cahaya biru di bawah latar belakang
cahaya biru
lampu merah. Stomata dari epidermis terpisah dari
Commelina communis ( dayflower umum) diobati dengan menjenuhkan fluks (B)
foton cahaya merah (jejak merah). Perawatan paralel, stomata diterangi dengan 55
cahaya merah juga diterangi dengan cahaya biru, seperti yang ditunjukkan oleh merah di
panah (biru jejak). Peningkatan pembukaan stomata atas tingkat mencapai di Biru muda lampu
hadapan menjenuhkan Cates puncak-lampu merah bahwa sistem fotoreseptor
50
Guard cell protoplast volume ( µ m 3 × 10 –2)
yang berbeda, dirangsang oleh cahaya biru, yang menengahi meningkat Kontrol
tambahan dalam pembukaan. (Dari Schwartz dan Zeiger 1984)

45 500 μ M
Vanadate

40

protoplas juga menggambarkan bagaimana sel penjaga utuh berfungsi. 30

Penyerapan cahaya dirangsang ion dan akumulasi zat terlarut organik 35

menurunkan potensial osmotik sel (meningkatkan tekanan osmotik). Air

mengalir sebagai hasilnya, yang mengarah ke peningkatan turgor bahwa
dalam sel penjaga dengan dinding utuh mekanis tertransduksi ke
peningkatan lubang stomata (lihat Bab 4). Dengan tidak adanya dinding sel,
peningkatan cahaya dimediasi biru tekanan osmotik menyebabkan sel
penjaga protoplas membengkak.
Relative effectiveness
0 20 40 60
Waktu (min)
GAMBAR 18,12 Biru pembengkakan cahaya dirangsang protoplas penjaga sel. (A)
Dengan tidak adanya dinding sel yang kaku, menjaga protoplas sel bawang ( Allium
cepa) membengkak. (B) cahaya biru merangsang pembengkakan protoplas
penjaga sel kacang luas ( Vicia faba), dan vanadat, penghambat H + - ATPase,
menghambat pembengkakan ini. cahaya biru merangsang ion dan air serapan
dalam protoplas penjaga sel, yang dalam sel penjaga utuh menyediakan kekuatan
mekanik yang mendorong kenaikan lubang stomata. (A dari Zeiger dan Hepler
1977;. B setelah Amodeo et al 1992.)

Blue Light Mengaktifkan Proton Pump di Garda Sel Plasma

350
GAMBAR 18.11 Tindakan spektrum cahaya-stimu- pembukaan stomata lated
biru (bawah latar belakang lampu merah). (Setelah Karlsson 1986.)
Membran
Ketika protoplas penjaga sel dari kacang luas ( Vicia faba)
disinari dengan cahaya biru di bawah latar belakang lampu merah
pencahayaan, pH medium suspensi menjadi lebih asam (Gambar 18,13).
400 450 500 pengasaman light-induced biru ini diblokir oleh inhibitor yang menghilang
Panjang gelombang (nm)
gradien pH, seperti CCCP (dibahas segera), dan dengan inhibitor H
proton-memompa + -ATPase, seperti vanadat (lihat Gambar
18.12C; lihat juga Bab 6).
410 Bab 18

lebih basa

CCCP proton Ionofor

Awal di bawah Biru-pulsa

menjenuhkan lampu cahaya

Electric current
merah
fluks biru foton ( μ mol
pH of suspension medium

m -2 s -1):

Fusicoccin mengaktifkan H +
-ATPase

2 pA
50 cahaya (A)
500
10 1 menit

(B)
10 0 20 30 40 50 60 5
lebih
asam Waktu (min)

GAMBAR 18,13 Pengasaman media suspensi protoplas penjaga sel Vicia

faba dirangsang oleh pulsa 30 s cahaya biru. Pengasaman hasil dari lation

2 pA Electric current
stimu- dari H + -ATPase pada membran plasma oleh cahaya biru, dan hal
ini terkait dengan protoplas pembengkakan (lihat Gambar 18.12). (Setelah
Shimazaki et al. 1986.)
Biru-pulsa

30 s
Hal ini menunjukkan bahwa hasil pengasaman dari aktivasi dengan
cahaya biru dari ATPase proton-memompa di penjaga membran plasma sel GAMBAR 18,14 Aktivasi H + -ATPase pada membran plasma protoplas
penjaga sel dengan fusiccocin dan cahaya biru dapat diukur sebagai arus
yang extrudes proton ke dalam media protoplas suspensi dan menurunkan
listrik dalam percobaan menjepit. (A) saat Outward listrik (diukur dalam
pH-nya. Dalam daun utuh, ini stimulasi biru-cahaya proton memompa
picoamps, pA) di membran plasma dari toplast pro penjaga sel dirangsang
menurunkan pH ruang apoplastic mengelilingi sel penjaga. ATPase oleh fusicoccin racun jamur, sebuah tor activa- dari H + ATPase. saat ini
membran plasma dari sel penjaga telah diisolasi dan secara luas ditandai dihapuskan oleh CCCP pro ton Ionofor (karbonil sianida m- drazone
(Kinoshita et al. chlorophenylhy-). (B) arus listrik Outward di brane mem- plasma dari
protoplas penjaga sel dirangsang oleh pulsa cahaya biru. Hasil ini
menunjukkan bahwa cahaya biru merangsang H + ATPase. (A setelah
2001).
Serrano et al 1988;.. B setelah Assmann et al 1985.)
Aktivasi pompa electrogenic seperti ATPase protonpumping dapat
diukur dalam eksperimen patch-klem sebagai arus listrik luar di membran
plasma (lihat Web Topik 6.2 untuk penjelasan patch penjepitan). Apatch
rekaman penjepit dari protoplas penjaga sel diperlakukan dengan
fusicoccin racun jamur, aktivator baik ditandai dari ATPase membran
plasma, ditunjukkan pada Gambar 18.14A. Paparan fusicoccin merangsang
arus listrik luar, yang dihapuskan oleh proton Ionofor karbonil sianida m- chlorophenylhydrazone
Hubungan erat antara jumlah insiden foton cahaya biru, proton
(CCCP). Ionofor proton ini membuat membran plasma yang sangat memompa di membran plasma penjaga sel, dan stomata membuka lebih
permeabel untuk proton, sehingga menghalangi pembentukan gradien lanjut menunjukkan bahwa respon biru-cahaya stomata mungkin berfungsi
proton melintasi membran dan menghapuskan bersih proton penghabisan. sebagai sensor fluks foton mencapai sel penjaga.

Hubungan antara proton memompa pada pembukaan penjaga sel
membran plasma dan stomata ini terbukti dari pengamatan bahwa fusicoccin
menstimulasi kedua ekstrusi proton dari protoplas penjaga sel dan
pembukaan stomata, dan bahwa CCCP menghambat pembukaan
fusiccocin-dirangsang. Kenaikan tarif proton-memompa sebagai fungsi dari
tingkat Fluence cahaya biru (lihat Gambar 18.13) menunjukkan bahwa tingkat
peningkatan foton biru di radiasi matahari yang mencapai daun
menyebabkan pembukaan stomata yang lebih besar.
Pulsa cahaya biru yang diberikan di bawah latar belakang lampu merah
jenuh juga merangsang arus listrik ke luar dari protoplas penjaga sel (lihat
Gambar 18.14B). Pengasaman pengukuran ditunjukkan pada Gambar
18,13 menunjukkan bahwa arus listrik luar diukur dalam percobaan penjepit
patch dibawa oleh proton.
Tanggapan biru-Light Memiliki Kinetics Karakteristik
dan Lag Waktu
Beberapa karakteristik dari tanggapan terhadap pulsa cahaya biru
menggarisbawahi beberapa sifat penting dari tanggapan biru-cahaya:
kegigihan respon setelah sig- cahaya
 Biru-Light Tanggapan: Gerakan stomata dan Morphogenesis
nal telah dimatikan, dan jeda waktu yang signifikan memisahkan timbulnya
sinyal cahaya dan awal respon.
Berbeda dengan tanggapan fotosintesis yang khas, yang diaktifkan
dengan sangat cepat setelah “cahaya pada” sinyal, dan berhenti ketika
lampu padam (lihat, misalnya, Gambar 7.13), respon biru-cahaya
melanjutkan pada tingkat maksimal selama beberapa menit setelah aplikasi
pulsa (lihat Gambar 18.14B). Properti ini dapat dijelaskan oleh bentuk
fisiologis tidak aktif dari fotoreseptor biru-cahaya yang diubah menjadi
bentuk aktif oleh cahaya biru, dengan bentuk aktif mengembalikan perlahan
ke bentuk fisiologis tidak aktif dalam ketiadaan cahaya biru (Iino et al. 1985
). Tingkat respon terhadap pulsa cahaya biru dengan demikian akan
tergantung pada perjalanan waktu dari pengembalian bentuk aktif ke tidak
aktif satu.
Properti lain dari respon terhadap pulsa biru-cahaya adalah jeda waktu,
yang berlangsung sekitar 25 s baik respon pengasaman dan arus listrik luar
dirangsang oleh cahaya biru (lihat Gambar 18.13 dan 18.14). Jumlah ini
waktu mungkin diperlukan untuk kaskade transduksi sinyal untuk
melanjutkan dari situs fotoreseptor ke ATPase protonpumping dan untuk
gradien proton untuk membentuk. kali lag serupa telah diukur untuk
penghambatan tergantung cahaya biru dari hipokotil elongasi, yang telah
dibahas sebelumnya.
Blue Light Mengatur osmotik Hubungan Guard
Sel
cahaya biru memodulasi osmoregulasi sel penjaga melalui aktivasi dari
proton memompa (dijelaskan sebelumnya) dan melalui stimulasi sintesis zat
terlarut organik. Sebelum membahas tanggapan biru-cahaya ini, mari kita
jelaskan secara singkat zat terlarut osmotik aktif utama dalam sel penjaga.
Ahli botani Hugo von Mohl diusulkan pada tahun 1856 bahwa
perubahan turgor pada sel penjaga memberikan kekuatan mekanik untuk
perubahan lubang stomata. Pabrik fisiologi FE Lloyd hipotesis pada tahun
1908 yang turgor penjaga sel diatur oleh perubahan osmotik yang
dihasilkan dari interconversions pati gula, sebuah konsep yang
menyebabkan hipotesis pati gula gerakan stomata. Penemuan perubahan
konsentrasi kalium dalam sel penjaga pada tahun 1960 menyebabkan teori
modern osmoregulasi penjaga sel dengan kalium dan ion lawan nya.
Konsentrasi kalium dalam sel penjaga meningkat beberapa kali lipat
ketika stomata terbuka, dari 100 m M dalam keadaan tertutup 400 800 m M dalam
keadaan terbuka, tergantung pada spesies tanaman dan kondisi Sukrosa Apakah sebuah Solute osmotik aktif di Garda
eksperimental. Perubahan konsentrasi ini besar di ion kalium bermuatan
positif seimbang elektrik dengan anion Cl - dan malat 2- ( Gambar 18.15A).
Dalam spesies dari genus Allium,
seperti bawang merah ( Allium cepa), K + ion seimbang semata-mata oleh Cl -. Dalam
kebanyakan spesies, bagaimanapun, fluks kalium seimbang dengan jumlah yang
bervariasi dari Cl - dan anion malat organik 2- ( Talbott et al. 1996).
411
Cl - ion diambil ke dalam sel penjaga pada saat pembukaan stomata dan
diekstrusi selama penutupan stomata. Malat, di sisi lain, disintesis di sitosol
penjaga sel, di jalur metabolisme yang menggunakan kerangka karbon
yang dihasilkan oleh hidrolisis pati (lihat Gambar 18.15B). Isi malat dari sel
penjaga menurun selama penutupan stomata, tetapi masih harus
ditetapkan apakah malat yang catabolized dalam respirasi mitokondria atau
diekstrusi ke apoplast.
Kalium dan klorida diangkat ke sel penjaga melalui mekanisme
transport sekunder didorong oleh gradien potensial elektrokimia untuk H +, Δ
m H +, yang dihasilkan oleh pompa proton (lihat Bab 6) dibahas sebelumnya
dalam bab ini. Proton ekstrusi membuat perbedaan listrik potensial
melintasi membran penjaga sel plasma lebih negatif; hyperpolarizations
tergantung cahaya setinggi 50 mV telah diukur. Selain itu, proton
memompa menghasilkan gradien pH unit sekitar 0,5-1 pH.
Komponen listrik dari gradien proton menyediakan kekuatan pendorong
untuk penyerapan pasif ion kalium melalui saluran kalium tegangan-diatur
(lihat Bab 6) (Schroeder et al. 2001). Klorida diduga diambil melalui saluran
anion. Dengan demikian, biru stimulasi tergantung cahaya dari proton
memompa memainkan peran kunci dalam osmoregulasi sel penjaga saat
buang stomata tergantung cahaya
kloroplas sel penjaga (lihat Gambar 18.8) mengandung butir pati yang
besar, dan kadar pati mereka menurun saat pembukaan stomata dan
meningkat selama penutupan. Pati, sebuah larut, polimer tinggi-berat
molekul glukosa, tidak memberikan kontribusi potensial osmotik sel, tetapi
hidrolisis pati menjadi gula larut menyebabkan penurunan potensi osmotik
(atau meningkatkan tekanan osmotik) dari sel penjaga. Dalam proses
sebaliknya, sintesis pati mengurangi konsentrasi gula, mengakibatkan
peningkatan potensi osmotik sel, yang hipotesis pati-gula diprediksi terkait
dengan penutupan stomata.
Dengan ditemukannya peran utama kalium dan ion lawan dalam
osmoregulasi penjaga sel, hipotesis pati gula-tidak lagi dianggap penting
(Outlaw 1983). Studi terbaru, bagaimanapun, dijelaskan di bagian
selanjutnya, telah ditandai fase osmoregulatory utama sel penjaga di mana
sukrosa adalah dominan zat terlarut osmotik aktif.
Sel
Studi kursus harian gerakan stomata daun utuh telah menunjukkan bahwa
kandungan kalium dalam sel penjaga meningkat secara paralel dengan
pembukaan pagi, tetapi menurun pada sore hari di bawah kondisi di mana
lubang terus meningkat. Isi sukrosa dari sel penjaga meningkat perlahan di
pagi hari, tapi setelah kalium penghabisan, sukrosa menjadi osmoti-
dominan
412 Bab 18

(SEBUAH)
sitoplasma
KLOROPLAS

Ribulosa-1,5- Fruktosa-6-fosfat Glukosa-6-fosfat Pati

bifosfat

Fruktosa-1,6-bifosfat
siklus
Glukosa maltosa
Calvin

Dihidroksiaseton 3-fosfat
3 phosphoglycerate CO 2

Cl - Cl -
BERSAMA 2

H+ H+
Glukosa-1-fosfat Dihidroksiaseton 3-fosfat Malate

K+ K+

Phosphoenol- vakuola
?
Sukrosa Sukrosa Sukrosa piruvat Malate Cl -
K+

(B)
sitoplasma
KLOROPLAS

Ribulosa-1,5- Fruktosa-6-fosfat Glukosa-6-fosfat Pati

bifosfat

Fruktosa-1,6-bifosfat
siklus
Glukosa maltosa
Calvin

Dihidroksiaseton 3-fosfat
3 phosphoglycerate CO 2

Cl - Cl -
BERSAMA 2

H+ H+
Glukosa-1-fosfat Dihidroksiaseton 3-fosfat Malate

K+ K+

Phosphoenol- vakuola
?
Sukrosa Sukrosa Sukrosa piruvat Malate Cl -
K+

(C)
sitoplasma
KLOROPLAS

Ribulosa-1,5- Fruktosa-6-fosfat Glukosa-6-fosfat Pati

bifosfat

Fruktosa-1,6-bifosfat
siklus
Glukosa maltosa
Calvin

Dihidroksiaseton 3-fosfat
3 phosphoglycerate CO 2

Cl - Cl -
BERSAMA 2

H+ H+
Glukosa-1-fosfat Dihidroksiaseton 3-fosfat Malate

K+ K+

Phosphoenol- vakuola
?
Sukrosa Sukrosa Sukrosa piruvat Malate Cl -
K+
 Biru-Light Tanggapan: Gerakan stomata dan Morphogenesis 413

GAMBAR 18.15 Tiga jalur osmoregulatory berbeda dalam sel penjaga. 4. Penyerapan sukrosa apoplastic dihasilkan oleh fotosintesis mesofil
▲

Panah gelap mengidentifikasi langkah-langkah metabolisme utama dari

setiap jalur yang mengarah pada akumulasi zat terlarut osmotik aktif dalam
sel penjaga. (A) Kalium dan counterions nya. Kalium dan klorida yang
diambil dalam proses transportasi sekunder didorong oleh gradien proton; Tergantung pada kondisi lingkungan, satu atau beberapa jalur dapat
malat terbentuk dari hidrolisis pati. (B) Akumulasi sukrosa dari pati diaktifkan. Misalnya, merah pembukaan stomata cahaya-dirangsang di
hidrolisis. (C) Akumulasi sukrosa dari karbon fotosintesis fixa- tion. epidermis terpisah semata-mata tergantung pada sukrosa yang dihasilkan
Kemungkinan penyerapan sukrosa apoplastic juga puncak-berdedikasi.
oleh fotosintesis penjaga sel, tanpa K terdeteksi + serapan. Jalur
(Dari Talbott dan Zeiger 1998.)
osmoregulatory lainnya dapat selektif diaktifkan di bawah kondisi
percobaan yang berbeda (lihat Web Topik 18,1 ). studi saat ini mulai
mengungkap misteri osmoregulasi penjaga sel dalam daun utuh (Dietrich et
al. 2001).
Cally zat terlarut aktif, dan stomata menutup pada akhir hari paralel
penurunan kandungan sukrosa dari sel penjaga (Gambar 18.16) (Talbott
dan Zeiger 1998).
Fotoreseptor BIRU-LIGHT
Fitur-fitur osmoregulatory menunjukkan bahwa pembukaan stomata
berhubungan terutama dengan K + serapan, dan penutupan dikaitkan Percobaan yang dilakukan oleh Charles Darwin dan putranya Francis pada
dengan penurunan rendemen (lihat Gambar 18.16). Kebutuhan potasium abad kesembilan belas ditentukan bahwa situs photoreception di
yang berbeda dan fase osmoregulatory sucrosedominated tidak jelas, tetapi fototropisme cahaya dirangsang biru di ujung koleoptil. Awal hipotesis
mungkin mendasari aspek regulasi fungsi stomata. Kalium mungkin zat tentang fotoreseptor biru cahaya terfokus pada karotenoid dan flavin (untuk
terlarut pilihan untuk pembukaan harian yang konsisten yang terjadi saat account sejarah penelitian awal pada fotoreseptor cahaya biru, lihat Web
matahari terbit. Tahap sukrosa mungkin terkait dengan koordinasi gerakan Topik 18.2 ). Meskipun upaya penelitian aktif, tidak ada kemajuan yang
stomata pada epidermis dengan tingkat fotosintesis pada mesofil. signifikan terhadap identifikasi fotoreseptor Bluelight dibuat sampai awal
1990-an. Dalam kasus fototropisme dan penghambatan pemanjangan
batang, kemajuan hasil identifikasi mutan untuk respon biru-lampu tombol,
Di mana zat terlarut osmotik aktif berasal? Empat jalur metabolisme dan isolasi berikutnya dari gen yang relevan.
yang berbeda yang dapat menyediakan zat terlarut osmotik aktif untuk
menjaga sel-sel telah ditandai (lihat Gambar 18.15):

Kloning gen menyebabkan identifikasi dan karakterisasi protein yang

1. Penyerapan K + dan Cl - digabungkan dengan biosintesis
dikode oleh gen. Dalam kasus sel penjaga stomata, yang zeaxanthin
dari malat 2-
karotenoid telah didalilkan menjadi kromofor dari fotoreseptor cahaya biru,
2. Produksi sukrosa dari pati hidrolisis sedangkan identitas apoprotein tetap akan didirikan. Untuk pembahasan

3. Produksi sukrosa oleh fiksasi karbon fotosintesis di kloroplas penjaga rinci tentang perbedaan mendasar antara karotenoid dan flavin

sel fotoreseptor, lihat

Web Topik 18.3 . Pada bagian berikut kita akan menjelaskan tiga
25 2,25 fotoreseptor terkait dengan tanggapan biru cahaya: kriptokrom,
(pmol/guard cell pair)
K+ stain (percent area) Sucrose

aperture stomata
phototropins, dan zeaxanthin.

55 1,75
20 Kriptokrom Apakah Terlibat dalam Penghambatan Stem
Stomatal aperture ( µ m)

45 Pemanjangan
Sukrosa K 1,25
+ Itu hy4 mutan Arabidopsis tidak memiliki penghambatan cahaya dirangsang biru
35
15 hipokotil elongasi dijelaskan sebelumnya dalam bab ini. Sebagai hasil dari
10 0,75 cacat genetik ini, hy4 tanaman menunjukkan hipokotil memanjang ketika disinari
25
dengan cahaya biru. Isolasi HY4 gen menunjukkan bahwa mengkode protein 75
5 5 15
0.25 kDa dengan homologi urutan signifikan untuk DNA mikroba photolyase, enzim
cahaya diaktifkan biru yang dimer perbaikan pirimidin di DNAformed sebagai
7:00

9:00

23:00
11:00

13:00

15:00

17:00

19:00

21:00

akibat dari paparan radiasi ultraviolet (Ahmad dan Cashmore 1993). Dalam
Waktu hari pandangan kesamaan urutan ini, protein hy4, kemudian berganti nama menjadi cryptochrome
GAMBAR 18,16 Tentu saja setiap hari dari perubahan stomata aperture, dan 1 (cry1), diusulkan untuk menjadi fotoreseptor cahaya biru mediasi
kalium dan rendemen, dari sel penjaga dari daun utuh dari kacang luas ( Vicia penghambatan pemanjangan batang.
faba). Hasil ini puncak-cate bahwa perubahan potensial osmotik diperlukan
untuk pembukaan stomata di pagi hari dimediasi oleh sium potas- dan
counterions nya, sedangkan perubahan sore dimediasi oleh sukrosa.
(Setelah Talbott dan Zeiger 1998.) Photolyases adalah protein pigmen yang mengandung flavin adenin
dinukleotida (FAD; lihat Gambar 11.2b) dan pterin a.
 414 Bab 18
(SEBUAH) (B)
0,8
0,6 1,5
Anthocyanin accumulation
Hypocotyl length (cm)
absorbance change
0,4 1.0
0,2 0,5
0,0 CRY1 OE WT
cry1 CRY1 OE WT
GAMBAR 18,17 cahaya biru merangsang akumulasi antosianin (A) dan
penghambatan pemanjangan batang (B) di transgenik dan bibit mutan Arabidopsis.
grafik batang ini menunjukkan fenotipe transgenik yang mengekspresikan gen
yang mengkodekan CRY1 (CRY1 OE), tipe liar (WT), dan cry1 mutan. respon
biru-cahaya ditingkatkan dari tanaman transgenik yang mengekspresikan gen
yang mengkodekan CRY1 menunjukkan peran penting dari produk gen ini
dalam merangsang biosintesis antosianin dan menghambat pemanjangan
batang. (Setelah Ahmad et al. 1998)
Pterins ringan-menyerap, turunan pteridin yang sering berfungsi sebagai
pigmen pada serangga, ikan, dan burung (lihat Bab 12 untuk struktur pterin).
Ketika dinyatakan dalam Escherichia coli,
protein cry1 mengikat FAD dan pterin, tetapi tidak memiliki aktivitas
photolyase terdeteksi. Tidak ada informasi yang tersedia pada kromofor (s)
terikat cry1 in vivo, atau pada sifat dari reaksi fotokimia yang melibatkan
cry1, yang akan mulai mendalilkan transduksi kaskade sensorik mediasi
beberapa tanggapan biru cahaya dimediasi oleh cry1.
Bukti yang paling penting untuk peran cry1 penghambatan cahaya
dimediasi biru pemanjangan batang berasal dari studi berlebih. Berlebih dari
protein CRY1 dalam tembakau transgenik atau Arabidopsis tanaman hasil
dalam penghambatan cahaya dirangsang biru kuat dari hipokotil elongasi
daripada di tipe liar, serta peningkatan produksi antosianin, respon
biru-cahaya lain (Gambar 18.17). Dengan demikian, berlebih dari CRY1
menyebabkan peningkatan sensitivitas terhadap cahaya biru dalam
tanaman transgenik. blue-light tanggapan lain, seperti fototropisme dan
gerakan stomata tergantung cahaya biru, tampak normal di cry1 fenotip
mutan.
Sebuah homolog produk gen kedua CRY1, bernama CRY2, telah
diisolasi dari Arabidopsis ( Lin 2000). Kedua CRY1 dan CRY2 muncul di
mana-mana di seluruh kerajaan tanaman. Amajor perbedaan antara
mereka adalah bahwa CRY2 cepat terdegradasi di dalam terang,
sedangkan CRY1 stabil di bibit cahaya tumbuh.
tanaman transgenik yang mengekspresikan gen yang mengkodekan CRY2
menunjukkan peningkatan kecil dari penghambatan hipokotil elongasi,
menunjukkan bahwa tidak seperti CRY1, CRY2 tidak memainkan peran utama
dalam menghambat pemanjangan batang. Di sisi lain, tanaman transgenik yang
mengekspresikan gen yang mengkodekan CRY2 menunjukkan peningkatan besar
dalam ekspansi kotiledon cahaya dirangsang biru, satu lagi biru cahaya
tanggapan. Selain itu, CRY1 telah terbukti terlibat dalam pengaturan jam
sirkadian di Arabidopsis ( lihat Bab 17), dan kedua CRY1 dan CRY2 telah
terbukti berperan dalam induksi berbunga (lihat Bab 24). homolognya
cryptochrome telah ditemukan untuk mengatur jam sirkadian di Drosophila, mouse,
dan manusia.
Phototropins Apakah Terlibat dalam fototropisme dan
kloroplas Gerakan
cry1 Beberapa baru-baru ini terisolasi Arabidopsis mutan terganggu pada
fototropisme tergantung cahaya biru dari hipokotil yang telah memberikan
informasi berharga tentang peristiwa selular sebelumnya lentur. Salah satu
mutan ini, nph1 (n di p hototropic h ypocotyl) mutan telah ditemukan untuk
menjadi genetik independen dari hy4 (cry1) mutan dibahas sebelumnya: The
nph1 mutan tidak memiliki respon phototropic di hipokotil tetapi memiliki
inhibisi cahaya dirangsang biru normal hipokotil elongasi, sedangkan hy4 memiliki
fenotip converse. baru-baru ini nph1 gen diubah namanya phot1, dan protein
encode bernama phototropin ( Briggs dan Christie 2002).
C-terminal setengah dari phototropin adalah kinase serin / treonin.
N-terminal setengah berisi dua domain berulang, dari sekitar 100 asam
amino masing-masing, yang memiliki kesamaan urutan protein lain yang
terlibat dalam signaling pada bakteri dan mamalia. Protein dengan
kesamaan urutan ke N terminus phototropin mengikat flavin kofaktor.
Protein ini adalah sensor oksigen di Escherichia coli
dan Azotobacter, dan sensor tegangan di saluran kalium dari Drosophila dan
vertebrata.
Ketika dinyatakan dalam sel serangga, setengah N-terminal phototropin
mengikat mononukleotida flavin (FMN) (lihat Gambar 11.2b dan Web
Essay 18.2 ) dan menunjukkan reaksi autofosforilasi tergantung cahaya
biru. Reaksi ini menyerupai fosforilasi tergantung cahaya biru dari protein
120 kDa membran ditemukan di daerah bibit etiolated tumbuh.
Itu Arabidopsis genom mengandung gen kedua, phot2,
yang terkait dengan phot1. Itu phot1 mutan kekurangan hipokotil fototropisme dalam
menanggapi intensitas rendah cahaya biru (0,01-1
μ mol mol -2 s -1) tapi mempertahankan respon phototropic pada intensitas yang
lebih tinggi (1-10 μ mol m -2 s -1). Itu phot2 mutan memiliki respon phototropic
normal, tetapi phot1 / phot2 mutan ganda sangat terganggu pada kedua
intensitas rendah dan tinggi. Data ini menunjukkan bahwa kedua phot1 dan phot2
terlibat dalam respon phototropic, dengan phot2 berfungsi pada tingkat
Fluence cahaya tinggi.
Biru muda-diaktifkan gerakan kloroplas. Daun menunjukkan fitur
adaptif yang dapat mengubah distribusi intraseluler kloroplas mereka untuk
mengontrol penyerapan cahaya dan mencegah photodamage (lihat
Gambar 9.5). Spektrum aksi untuk gerakan kloroplas menunjukkan “tiga
jari” struktur halus khas tanggapan biru cahaya. Ketika radiasi insiden
lemah, kloroplas berkumpul di permukaan atas dan bawah dari sel-sel
mesofil (yang “-tuduhannya
 Biru-Light Tanggapan: Gerakan stomata dan Morphogenesis 415

mulation”respon; lihat Gambar 9.5B), sehingga memaksimalkan penyerapan (A)

1250
cahaya.

radiation ( µ mol m –2 s –1)

Photosynthetically active
Di bawah cahaya yang kuat, kloroplas pindah ke permukaan sel yang
250 1000
sejajar dengan insiden ringan (yang “penghindaran” respon; lihat Gambar

Zeaxanthin (mmol mol –1 Chl a+b)

9.5C), sehingga meminimalkan penyerapan cahaya. Studi terbaru menunjukkan
200 750
bahwa sel-sel mesofil dari
sel
phot1 mutan memiliki respon penghindaran normal dan respon akumulasi 500
150
dasar. Sel dari phot2
Jagalah
acara mutan respon akumulasi normal tetapi tidak memiliki respon 250
100
penghindaran. Sel dari phot1 / phot2 ganda kurangnya mutan baik mesofil
sel
menghindari dan akumulasi tanggapan (Sakai et al. 2001). Hasil ini
50
menunjukkan bahwa phot2 12:00 15:00 18:00 21:00
memainkan peran kunci dalam respon penghindaran, dan bahwa kedua
14 0
phot1 dan phot2 berkontribusi pada respon akumulasi. (B)

12
The Karotenoid Zeaxanthin menengahi Biru-Light
Photoreception di Garda Sel
10

Stomatal aperture ( m m)
The zeaxanthin karotenoid telah terlibat sebagai fotoreseptor di pembukaan
stomata cahaya dirangsang biru. Ingat dari Bab 7 dan 9 yang zeaxanthin 8

adalah salah satu dari tiga komponen dari siklus xantofil kloroplas, yang
6
melindungi pigmen fotosintesis dari energi eksitasi berlebih. Dalam sel
penjaga, namun, perubahan konten zeaxanthin sebagai fungsi dari insiden 4

radiasi yang jelas berbeda dari perubahan sel-sel mesofil (Gambar 18.18).
2

Dalam tanaman matahari seperti Vicia faba, zeaxanthin akumulasi
dalam mesofil dimulai pada sekitar 200 μ mol m -2 s -1, dan tidak ada
zeaxanthin terdeteksi di pagi hari atau sore hari. Sebaliknya, kandungan
zeaxanthin dalam sel penjaga erat mengikuti insiden radiasi matahari di
permukaan daun sepanjang hari, dan hampir berbanding lurus dengan fluks
insiden foton di pagi hari dan sore hari. Beberapa karakteristik kunci dari
kloroplas penjaga sel kuat mengindikasikan bahwa fungsi utama dari
kloroplas penjaga sel transduksi sensori dan tidak fiksasi karbon (Zeiger et
al. 2002).
0
6:00 9:00 12:00 15:00 18:00 21:00 6:00 9:00
Waktu hari
GAMBAR 18.18 Isi zeaxanthin dari sel penjaga erat melacak fotosintesis
radiasi aktif dan membangun struktur aper- stomata. (A) program Harian
radiasi aktif fotosintesis mencapai permukaan daun, dan zeaxanthin isi sel
penjaga dan mesofil sel-sel Vicia faba daun tumbuh dalam rumah kaca.
Daerah putih dalam grafik menyoroti sensitivitas kontras dari siklus xantofil
di meso phyll dan sel penjaga kloroplas bawah irradiances rendah yang
berlaku awal dan di akhir hari. lubang (B) stomata pada daun yang sama
digunakan untuk mengukur sel penjaga zeaxanthin konten. (Setelah
Srivastava dan Zeiger 1995a.)

bukti kuat menunjukkan bahwa zeaxanthin adalah fotoreseptor Bluelight

di sel penjaga:

• Spektrum penyerapan zeaxanthin (Gambar 18.19) sangat cocok

dengan spektrum aksi untuk membuka stomata cahaya dirangsang
biru (lihat Gambar 18.11).

• Dalam kursus sehari-hari pembukaan stomata daun utuh tumbuh di 0.25

rumah kaca, radiasi insiden, zeaxanthin isi sel penjaga, dan lubang
stomata berkaitan erat (lihat Gambar 18.18). 0,2
Absorbance

0,15
• Sensitivitas cahaya biru dari sel penjaga meningkat sebagai fungsi
konsentrasi zeaxanthin mereka. Eksperimental, zeaxanthin konsentrasi
0,1
dalam sel penjaga dapat divariasikan dengan meningkatkan tingkat Fluence
dari lampu merah. Ketika sel penjaga dari kulit epidermal diterangi dengan
0,05
meningkatkan tingkat Fluence dari lampu merah yang terkena cahaya biru,
membuka cahaya dirangsang yang dihasilkan biru stomata berhubungan
linier dengan tingkat fluence latar belakang lampu merah iradiasi (lihat 350 400 450 500
pengobatan tipe liar pada Gambar 18,20) dan untuk Panjang gelombang (nm)

GAMBAR 18.19 Penyerapan spektrum zeaxanthin dalam etanol.

416 Bab 18

GAMBAR 18.20 tanggapan stomata terhadap cahaya biru dalam jenis liar dan npq1, sebuah
Tipe liar
Arabidopsis mutan yang tidak memiliki zeaxanthin. Stomata pada epidermis terpisah
2.8 npq1 ( mutan kurang
diiradiasi dengan lampu merah selama 2 jam, dan 20 μ mol m -2 s -1 cahaya biru
zeaxanthin)

Stomatal aperture ( m m)
ditambahkan selama satu jam tambahan. pembukaan stomata dalam jenis liar
sebanding dengan tingkat fluence latar belakang lampu merah. Sebaliknya, npq1 stomata
tidak memiliki respon ini dan menunjukkan penurunan pembukaan di bawah kedua 2.4
cahaya biru dan merah, mungkin dimediasi oleh fotosintesis penjaga sel. (Dari
Frechilla et al. 1999)

2.0

50 100 150
konten zeaxanthin (Srivastava dan Zeiger 1995b). Hubungan yang Latar belakang lampu merah ( m mol m -2 s -1)

sama antara latar belakang lampu merah, konten zeaxanthin, dan

sensitivitas cahaya biru telah ditemukan di fototropisme cahaya
dirangsang biru koleoptil jagung (lihat Web Topik 18,4 ).
• Biru pembukaan stomata cahaya dirangsang benar-benar dihambat
oleh 3 m M dithiothreitol (DTT), dan penghambatan tergantung
konsentrasi. Pembentukan zeaxanthin diblokir oleh DTT, agen
pereduksi yang mengurangi obligasi S-S untuk kelompok -SH dan
efektif menghambat
enzim yang mengubah violaxanthin ke zeaxanthin. Kekhasan
penghambatan pembukaan biru muda-dirangsang stomata oleh DTT,
dan ketergantungan konsentrasi, menunjukkan bahwa sel penjaga
zeaxanthin diperlukan untuk respon stomata terhadap cahaya biru.
• Dalam spesies CAM fakultatif crystallinum Mesembryanthemum ( lihat
Bab 8 dan 25), akumulasi garam

energi cahaya KLOROPLAS

(PAR)

ADP P saya
ATP H+ +
BERSAMA 2 penginderaan oleh Rubisco
ATP
synthase BERSAMA 2
Ribulosa-1,5
bifosfat
H+

karboksilasi
siklus
kelahiran kembali Calvin
ATP
Grana H+
+
tilakoid
Pengurangan NADPH
fosfat triose

ADP P saya
H+ ATP
+
ADP + P saya

Violaxanthin
penginderaan
+ NADP +

biru-cahaya npq1

zeaxanthin

sitoplasma
? phot1 phot2

14-3-3
Serin / treonin kinase H+ K+
H + Cl -
protein
P

C terminus

H + -ATPase
tidak aktif H+ Cl - K+ GAMBAR 18.21 Sebuah transduksi kaskade sensorik
H+ pembukaan stomata cahaya dirangsang biru.
Aktif
 Biru-Light Tanggapan: Gerakan stomata dan Morphogenesis
bergeser metabolisme karbon dari C 3 ke mode CAM. Dalam C 3 modus,
stomata menumpuk zeaxanthin dan menunjukkan respon biru-cahaya.
CAM induksi menghambat kemampuan sel penjaga menumpuk
zeaxanthin, dan untuk menanggapi cahaya biru (Tallman et al. 1997).
Tanggapan biru terang Arabidopsis mutan
npq1. Itu Arabidopsis mutan npq1 (n di p hotochemical
q uenching), memiliki lesi genetik dalam enzim yang mengubah violaxanthin
ke zeaxanthin (lihat Gambar 18.21) (Niyogi et al. 1998). Karena mutasi ini,
tidak mesofil atau sel penjaga kloroplas dari npq1 menumpuk zeaxanthin
(Frechilla et al. 1999). Ketersediaan mutan ini memungkinkan untuk
menguji hipotesis zeaxanthin dengan sel penjaga di mana akumulasi
zeaxanthin secara genetik diblokir.
Karena fotosintesis di kloroplas penjaga sel dirangsang oleh cahaya
biru (lihat Gambar 18.10), tes yang memadai untuk respon biru-cahaya
zeaxanthin-kurang npq1
mutan membutuhkan desain eksperimental memastikan bahwa setiap respon yang
diamati terhadap cahaya biru adalah biru muda spesifik dan tidak dimediasi oleh
fotosintesis. Sebagaimana dibahas sebelumnya dalam bab ini, spektrum tindakan
memberikan tes ketat kekhususan, namun penentuan tindakan spektrum memakan
waktu dan tenaga kerja-intensif.
Pilihan lain adalah untuk menguji peningkatan sensitivitas cahaya biru
oleh latar belakang lampu merah, karakteristik spesifik gerakan stomata
cahaya dirangsang biru (Assmann
1988), dibahas sebelumnya. Dalam percobaan menguji peningkatan respon
biru-cahaya dalam npq1 oleh latar belakang lampu merah, stomata
zeaxanthin-kurang menunjukkan lubang dasar dalam menanggapi cahaya
biru atau merah, didorong oleh fotosintesis penjaga sel, dan gagal
menunjukkan peningkatan respon biru-cahaya.
Hubungan erat antara insiden radiasi matahari dan zeaxanthin konten
dalam sel penjaga, dan peran zeaxanthin dalam photoreception Bluelight
menunjukkan bahwa komponen Bluelight dari respon stomata fungsi
cahaya sebagai sensor cahaya yang pasangan stomata lubang untuk fluks
insiden foton di permukaan daun. Komponen fotosintesis, di sisi lain, bisa
berfungsi dalam kopling tanggapan stomata dengan tingkat fotosintesis di
mesofil (lihat Bab 9).
Itu phot1 / phot2 mutan kekurangan pembukaan cahaya
dirangsang biru. Stomata dari phot1 / phot2 mutan ganda gagal
menunjukkan respon biru-cahaya tertentu, sedangkan di tunggal phot1 atau
phot2 mutan respon Bluelight hanya sedikit terpengaruh (Kinoshita et al.
2001). Temuan ini melibatkan phototropin dalam respon biru-cahaya
stomata (Gambar 18,21). Ini akan sangat menarik untuk menentukan
apakah phototropin adalah fotoreseptor cahaya biru kedua di sel penjaga
atau memainkan peran regulasi dalam langkah-langkah selanjutnya dari
transduksi kaskade sensorik.
417
SIGNAL TRANSDUKSI
kaskade transduksi sensori untuk respon biru-cahaya mencakup urutan
kejadian yang menghubungkan penyerapan awal cahaya biru oleh
kromofor dan ekspresi akhir dari respon biru-cahaya, seperti membuka
stomata atau fototropisme. Pada bagian ini kita akan membahas informasi
yang tersedia di kaskade transduksi sinyal untuk kriptokrom, phototropin,
dan zeaxanthin.
Kriptokrom setiap di Inti
Urutan kesamaan cry1 dan cry2 untuk photolyase menunjukkan bahwa
seperti photolyase, kriptokrom memulai transduksi cascade sensorik
mereka dengan pengurangan kromofor flavin oleh cahaya, dan reaksi
transfer elektron berikutnya ke akseptor elektron (lihat Gambar 11.2).
Namun, tidak ada bukti eksperimental untuk keterlibatan cry1 atau cry2
dalam reaksi redoks.
Studi terbaru menunjukkan cry2 itu, dan untuk cry1 tingkat lebih rendah,
terakumulasi dalam inti. Hal ini menunjukkan bahwa kedua protein mungkin
terlibat dalam regulasi ekspresi gen. Tetapi beberapa aksi cryptochrome
dalam menanggapi cahaya biru tampaknya terjadi dalam sitoplasma karena
salah satu cacat terdeteksi paling awal di cry1 bibit mutan terganggu
aktivasi saluran anion pada membran plasma. Selain itu, cry1 dan cry2
telah terbukti berinteraksi dengan fitokrom A in vivo, dan terfosforilasi oleh
fitokrom A in vitro (lihat Bab 17 dan Web Essay 18.3 ).
Phototropin Mengikat FMN
Sebagaimana dibahas sebelumnya, produk-produk dari phot1 dan phot2
gen diekspresikan in vitro mengikat FMN dan menjalani fotofosforilasi
dalam menanggapi cahaya biru. studi spektroskopi terbaru menunjukkan
bahwa biru perubahan spektral cahaya yang disebabkan phototropin-terikat
FMN mirip khas pengikatan FMN ke residu sistein dari phototropin (Gambar
18,22; lihat juga Web Essay 18.2 ) ( Swartz et al. 2001). Reaksi ini terbalik
dengan perlakuan gelap.
R R
N N HAI N N HAI
Cahaya
NH NH
N Gelap NH
XH
X-
HAI HAI
S- S
Cys Cys
GAMBAR 18,22 pembentukan adduct diusulkan FMN dan residu Teine cys-
protein phototropin pada iradiasi cahaya biru. XH dan X - mewakili tak dikenal,
akseptor proton donor. (Setelah Briggs dan Christie 2002.)
418 Bab 18
Hasil ini menunjukkan bahwa iradiasi biru FMN proteinbound dalam sel
utuh menyebabkan perubahan konformasi dari phototropin yang memicu
autofosforilasi dan mulai transduksi cascade sensorik. Peristiwa seluler
yang mengikuti autofosforilasi tetap tidak diketahui.
analisis resolusi tinggi dari perubahan tingkat pertumbuhan mediasi
penghambatan hipokotil elongasi oleh cahaya biru telah memberikan
informasi berharga tentang interaksi antara phototropin, cry1, cry2, dan
fitokrom Phya (Taman et al. 2001). Setelah lag 30 s, biru muda-diobati, tipe
liar Arabidopsis bibit menunjukkan penurunan yang cepat di tingkat
perpanjangan selama 30 menit pertama, dan kemudian mereka tumbuh
sangat lambat selama beberapa hari (Gambar
18,23).
Analisis respon yang sama di phot1, cry1, cry2, dan
Phya mutan telah menunjukkan bahwa penekanan pemanjangan batang oleh
cahaya biru selama bibit de-etiolasi diprakarsai oleh phot1, dengan cry1, dan
sampai batas tertentu cry2, modulasi respon setelah 30 menit. Tingkat
pertumbuhan yang lambat dari batang di bibit cahaya diperlakukan biru
terutama akibat dari tindakan terus-menerus dari cry1, dan ini adalah alasan
bahwa
cry1 mutan dari Arabidopsis menunjukkan hipokotil panjang, dibandingkan
dengan hipokotil pendek dari tipe liar. Ada juga peran fitokrom A dalam
setidaknya tahap awal pertumbuhan cahaya diatur biru karena hambatan
pertumbuhan tidak berjalan dengan normal di Phya mutan.
1.0
0,8
Relative growth rate
0,6
0,4 Biru
muda
pada
0,2
0 1 2 3 4 5
Waktu (h)
phot1 cry1 / cry2 / Phya (melalui saluran anion)
GAMBAR 18,23 Sensory transduksi riam penghambatan cahaya
dirangsang biru pemanjangan batang di
Arabidopsis. tingkat elongasi dalam gelap (0,25 mm h -1) dinormalisasi ke 1. Dalam waktu
30 s dari timbulnya diation irra- biru cahaya, tingkat pertumbuhan menurun dan
mendekati nol dalam waktu 30 menit, kemudian dilanjutkan pada tingkat yang sangat
berkurang selama beberapa hari. Jika cahaya biru diterapkan pada phot1 mutan, tingkat
pertumbuhan gelap tetap tidak berubah untuk pertama 30 menit, menunjukkan bahwa
penghambatan pemanjangan di 30 menit pertama adalah di bawah kontrol phototropin.
KASIH pengalaman- sama dengan cry1, cry2, dan Phya mutan menunjukkan bahwa
produk gen masing-masing mengontrol tingkat perpanjangan waktu kemudian. (Setelah
Taman et al. 2001)
Zeaxanthin Isomerisasi Mungkin Mulai Membuka Cascade
Mediasi Blue Light-Merangsang stomata
Beberapa langkah kunci dalam transduksi kaskade sensorik untuk
membuka stomata cahaya dirangsang biru telah ditandai (lihat Gambar
18.21). C terminus dari H + ATPase (lihat Gambar 6.15) memiliki domain
otoinhibitor yang mengatur aktivitas enzim. Jika domain otoinhibitor ini
eksperimental dihapus oleh protease, H + ATPase menjadi ireversibel
diaktifkan. Domain otoinhibitor dari terminal C diduga menurunkan aktivitas
enzim dengan memblokir situs katalitik. Sebaliknya, fusiccocin muncul
untuk mengaktifkan enzim dengan memindahkan domain otoinhibitor jauh
dari situs katalitik.
Setelah iradiasi biru-cahaya, H + -ATPase menunjukkan lebih rendah K m
untuk ATP dan lebih tinggi V max ( lihat Bab 6), menunjukkan bahwa cahaya
biru mengaktifkan H + ATPase. Aktivasi enzim melibatkan fosforilasi serin
dan treonin residu dari domain C-terminal dari H + ATPase (Kinoshita dan
Shimazaki 1999). Biru muda-dirangsang proton memompa dan pembukaan
stomata dicegah oleh inhibitor protein kinase, yang mungkin memblokir
fosforilasi dari H + ATPase. Seperti fusiccocin, fosforilasi domain C-terminal
muncul juga untuk menggantikan domain otoinhibitor dari C-terminal dari
situs katalitik enzim.
SEBUAH 14-3-3 protein telah ditemukan untuk mengikat ke terminal C
terfosforilasi dari H penjaga sel + -ATPase, tetapi bukan satu
nonphosphorylated. Keluarga 14-3-3 protein awalnya ditemukan pada
jaringan otak, dan anggota-anggotanya yang ditemukan protein regulasi di
mana-mana pada organisme eukariotik. Pada tumbuhan, 14-3-3 protein
mengatur transkripsi dengan mengikat aktivator dalam inti, dan mereka
mengatur enzim metabolik seperti nitrat reduktase.
Hanya satu dari empat 14-3-3 isoform ditemukan di sel penjaga
mengikat H + -ATPase, sehingga mengikat tampaknya tertentu (Emi et al.
2001). 14-3-3 isoform yang sama mengikat penjaga sel H + -ATPase di
respon baik fusiccocin dan perawatan biru cahaya. The 14-3-3 protein
tampaknya memisahkan dari H + -ATPase pada defosforilasi domain
C-terminal.
tingkat Proton-memompa sel penjaga meningkat dengan tingkat Fluence
cahaya biru (lihat Gambar 18.13), dan gradien elektrokimia yang dihasilkan oleh
proton pump drive ion penyerapan ke dalam sel penjaga, meningkatkan turgor
dan turgor-dimediasi lubang stomata. Secara bersama-sama, langkah-langkah
menentukan langkah-langkah transducing sensorik utama yang
menghubungkan aktivasi protein kinase serin / treonin oleh cahaya biru dan biru
pembukaan stomata cahaya dirangsang (lihat Gambar 18.21).
Hipotesis zeaxanthin mendalilkan bahwa eksitasi zeaxanthin di tempat
tidur antena dari kloroplas penjaga sel oleh cahaya biru mulai kaskade
transduksi sensori yang mengaktifkan kinase serin / treonin dalam sitosol.
Isomerisasi adalah reaksi fotokimia dominan
 Biru-Light Tanggapan: Gerakan stomata dan Morphogenesis
pulsa cahaya:
Biru
Biru hijau
Stomatal opening
Biru-hijau-biru
- 10 0 10 20 30
Waktu (min)
GAMBAR 18,24 Biru / hijau reversibilitas KASIH move- stomata. Stomata
terbuka ketika diberi 30 s pulsa cahaya biru (1800 m mol m -2 s -1) di bawah latar
belakang lampu merah terus menerus (120 m mol m -2 s -1). Sebuah pulsa lampu
hijau (3600 m mol m -2 s -1) diterapkan setelah biru cahaya blok pulsa respon
cahaya biru, dan pembukaan dipulihkan setelah tion applica- dari pulsa cahaya
biru kedua diberikan setelah pulsa lampu hijau. (Setelah Frechilla et al. 2000)
karotenoid, sehingga cahaya biru akan isomerize zeaxanthin dan
perubahan konformasi akan memulai kaskade transducing.
Pembalikan pembukaan cahaya dirangsang biru oleh cahaya
hijau. Areversal pembukaan stomata cahaya dirangsang biru dengan
lampu hijau baru-baru ini ditemukan. Stomata pada epidermis strip terbuka
dalam menanggapi 30 s pulsa Bluelight (Gambar 18,24), tetapi pembukaan
tidak diamati jika pulsa Bluelight diikuti dengan pulsa lampu hijau.
Pembukaan dipulihkan jika pulsa hijau diikuti oleh pulsa cahaya biru kedua,
di respon analog dengan / kedapatbalikan jauh-merah merah tanggapan
fitokrom. (Frechilla et al.
2000.)
Biru / tanggapan reversibilitas hijau telah dilaporkan pada stomata dari
beberapa spesies, dan biru muda-dirangsang, fototropisme koleoptil (lihat Web (Zeiger et al. 2002). Sifat-sifat ini lebih menyukai lumen pengasaman pada
Essay 18.4 ). Peran / pembalikan hijau biru gerakan stomata di bawah
kondisi alam masih harus dibentuk, tetapi bisa berhubungan dengan
penginderaan kondisi lingkungan seperti matahari dan bayangan.
Spektrum aksi untuk pembalikan hijau pembukaan cahaya dirangsang
biru menunjukkan maksimum pada 540 nm, dan dua puncak minor pada
490 dan 580 nm. spektrum tindakan tersebut mengesampingkan
keterlibatan fitokrom atau klorofil di respon. Sebaliknya, spektrum tindakan
sangat mirip dengan spektrum aksi untuk biru
419
Pembukaan cahaya dirangsang stomata (lihat Gambar 18.11), tapi merah
bergeser (pengungsi menuju lagi, band gelombang merah spektrum) sekitar
90 nm.
pergeseran merah spektral seperti telah diamati pada isomerisasi
karotenoid dalam lingkungan protein (lihat
Web Essay 18.4 ). Dalam vesikel dilarutkan mengandung klorofil a / b -binding
protein dan xanthophylls zeaxanthin, violaxanthin, dan neoxanthin, biru
perubahan spektrum penyerapan / hijau reversibel telah dikaitkan dengan
zeaxanthin isomerisasi.
Biru / pembalikan hijau gerakan stomata dan perubahan spektrum
penyerapan ditimbulkan oleh cahaya biru dan hijau menunjukkan bahwa
secara fisiologis tidak aktif, trans isomer dari zeaxanthin dikonversi menjadi cis
isomer oleh cahaya biru, dan bahwa isomerisasi mulai transduksi cascade
sensorik. Data yang tersedia menunjukkan bahwa lampu hijau mengubah
cis isomer ke fisiologis tidak aktif trans bentuk, dan karena itu membalikkan
40
sinyal pembukaan cahaya dirangsang biru. Hasil dari penelitian sebelumnya
lebih lanjut menunjukkan bahwa setelah pulsa biru, cis bentuk perlahan-lahan
beralih ke trans bentuk dalam gelap (Iino et al. 1985).
The Xanthophyll Siklus menganugerahkan Plastisitas ke
Responses stomata ke Light
Zeaxanthin konsentrasi dalam sel penjaga bervariasi dengan aktivitas
siklus xantofil. Enzim yang mengubah violaxanthin untuk zeaxanthin
adalah protein tilakoid terpisahkan menunjukkan optimum pH pada pH 5,2
(Yamamoto
1979). Pengasaman pH lumen merangsang pembentukan zeaxanthin, dan
lumen Alkalinisasi nikmat violaxanthin formasi.
Lumen pH tergantung pada tingkat radiasi aktif insiden fotosintesis
(paling efektif pada panjang gelombang biru dan merah; lihat Bab 7), dan
pada tingkat sintesis ATP, yang menghantarkan gradien pH di tilakoid
tersebut. Dengan demikian, aktivitas fotosintesis di kloroplas penjaga sel,
lumen pH, zeaxanthin konten, sensitivitas cahaya biru, dan lubang stomata
erat digabungkan.
Beberapa sifat unik dari kloroplas penjaga sel muncul secara optimal
diarahkan untuk fungsi transducing sensorik. Dibandingkan dengan
rekan-rekan mesofil mereka, kloroplas penjaga sel diperkaya dalam
fotosistem II, dan mereka memiliki tarif yang luar biasa tinggi transpor
elektron fotosintesis dan tingkat rendah dari fiksasi karbon fotosintesis
fluks foton rendah, dan mereka jelaskan zeaxanthin formasi dalam
kloroplas penjaga sel pagi hari (lihat Gambar 18.18).
Regulasi konten zeaxanthin dengan lumen pH, dan kopling ketat antara
lumen pH dan aktivitas siklus Calvin dalam kloroplas penjaga sel (lihat
Gambar 18.21) lebih lanjut menunjukkan bahwa zeaxanthin juga bisa
beroperasi sebagai CO 2 sensor di sel penjaga (lihat Web Essay 18.5 ).
The kemajuan luar biasa yang dicapai oleh penemuan terbaru dalam
biologi molekuler tanggapan biru-cahaya memiliki
420 Bab 18
secara dramatis meningkatkan pemahaman kita tentang subjek. Identifikasi
kriptokrom, phototropin, dan zeaxanthin sebagai fotoreseptor cahaya biru
diduga dalam sel tanaman telah merangsang minat yang besar dalam aspek
photobiology tanaman. pekerjaan saat ini dan masa depan adalah
menangani pertanyaan terbuka yang penting, seperti urutan rinci dari
kaskade transduksi sensori dan lokalisasi yang tepat dan komposisi protein
pigmen yang terlibat. penelitian yang sedang berlangsung pada subjek
hampir memastikan kemajuan lebih lanjut yang cepat.
RINGKASAN
Tanaman memanfaatkan cahaya sebagai sumber energi dan sebagai sinyal
yang berisi informasi tentang lingkungan mereka. Sebuah keluarga besar
tanggapan biru-cahaya digunakan untuk merasakan kuantitas dan arah cahaya.
sinyal cahaya biru ini ditransduksi menjadi listrik, metabolisme, dan proses
genetik yang memungkinkan tanaman untuk mengubah pertumbuhan,
perkembangan, dan fungsi dalam rangka untuk menyesuaikan diri terhadap
perubahan kondisi lingkungan. tanggapan Bluelight termasuk fototropisme,
gerakan stomata, penghambatan pemanjangan batang, aktivasi gen, biosintesis
pigmen, pelacakan matahari oleh daun, dan gerakan kloroplas dalam sel.
Spesifik respon biru-cahaya dapat dibedakan dari tanggapan lain yang
memiliki kepekaan terhadap cahaya biru oleh “tiga-jari” tindakan spektrum
karakteristik dalam 400 sampai 500 nm daerah.
Fisiologi respon biru-cahaya bervariasi secara luas. Dalam
fototropisme, batang tumbuh ke arah sumber cahaya sepihak oleh
pertumbuhan asimetris di sisi teduh mereka. Dalam penghambatan
pemanjangan batang, persepsi cahaya biru mendepolarisasi potensial
membran sel elongating, dan tingkat pemanjangan cepat menurun. Aktivasi
gen, cahaya biru merangsang transkripsi dan translasi, yang mengarah ke
penumpukan produk gen yang diperlukan untuk respon morphogenetic
terhadap cahaya.
gerakan stomata cahaya dirangsang biru didorong oleh perubahan
tergantung cahaya biru di osmoregulasi dari sel penjaga. cahaya biru
merangsang H + -ATPase pada membran plasma penjaga sel, dan
pemompaan yang dihasilkan dari proton melintasi membran menghasilkan
gradien elektrokimia-potensi yang menyediakan kekuatan pendorong untuk
penyerapan ion. Cahaya biru juga merangsang degradasi pati dan
biosintesis malat. akumulasi zat terlarut dalam sel penjaga mengarah ke
pembukaan stomata. sel penjaga juga memanfaatkan sukrosa sebagai zat
terlarut osmotik aktif utama, dan kualitas cahaya dapat mengubah aktivitas
jalur osmoregulatory berbeda yang memodulasi gerakan stomata.
Menangis 1 dan cry2 dua Arabidopsis gen yang terlibat dalam
penghambatan tergantung cahaya biru pemanjangan batang, ekspansi
kotiledon, sintesis antosianin, kontrol berbunga, dan pengaturan ritme
sirkadian. Telah diusulkan bahwa CRY1 dan CRY2 yang apoprotein protein
pigmen flavin yang mengandung yang memediasi photoreception biru
cahaya.
The cry1 dan cry2 produk gen memiliki kesamaan urutan ke photolyase
namun tidak ada aktivitas photolyase. Protein cry1, dan untuk cry2 tingkat
lebih rendah, terakumulasi dalam inti dan mungkin terlibat dalam ekspresi
gen. Protein cry1 juga mengatur aktivitas saluran anion pada membran
plasma.
The phototropin protein memiliki peran utama dalam regulasi fototropisme.
C-terminal setengah dari phototropin adalah kinase serin / treonin, dan
setengah N-terminal memiliki dua domain flavinbinding. In vitro, phototropin
mengikat FMN flavin dan autophosphorylates dalam menanggapi cahaya biru.
mutan disebut phot1 dan phot2 cacat dalam fototropisme dan dalam gerakan
kloroplas. Itu phot1 / phot2 mutan ganda tidak memiliki biru pembukaan
stomata cahaya dirangsang.
Karotenoid zeaxanthin chloroplastic telah terlibat dalam photoreception
biru-cahaya dalam sel penjaga. Biru pembukaan stomata cahaya
dirangsang diblokir jika akumulasi zeaxanthin dalam sel penjaga dicegah
dengan cara genetik atau biokimia. Manipulasi konten zeaxanthin dalam sel
penjaga memungkinkan untuk mengatur respon mereka terhadap cahaya
biru. Sinyal transduksi kaskade untuk respon Bluelight dari sel penjaga
terdiri persepsi Bluelight di kloroplas penjaga sel, transduksi sinyal Bluelight
di amplop kloroplas, aktivasi H + -ATPase, turgor penumpukan, dan
membuka stomata.
Bahan web
Topik web
18.1 Penjaga sel Osmoregulasi dan
Blue Light-Activated Metabolik Beralih
cahaya biru mengontrol jalur osmoregulatory utama dalam
sel penjaga dan alga uniseluler.
18.2 Catatan sejarah tentang Penelitian
Biru-Light Fotoreseptor
Karotenoid dan flavin telah menjadi kandidat utama untuk
fotoreseptor cahaya biru.
18.3 Membandingkan flavin dan Karotenoid
Flavin dan fotoreseptor karotenoid telah kontras sifat
fungsional.
18.4 The koleoptil kloroplas
Baik koleoptil dan kloroplas penjaga sel mengkhususkan
diri dalam transduksi sensori.
Esai web
18.1 Penjaga Sel Fotosintesis
Fotosintesis dalam kloroplas penjaga sel menunjukkan
fitur peraturan yang unik.
18.2 Phototropins
Phototropins mengatur beberapa tanggapan cahaya pada tanaman.
 Biru-Light Tanggapan: Gerakan stomata dan Morphogenesis
18.3 The Sensory Transduksi dari Penghambatan
Stem Pemanjangan oleh Blue Light
Pengaturan tingkat pemanjangan batang oleh cahaya biru
memiliki arti penting bagi perkembangan tanaman.
18.4 The Blue / Hijau Reversibilitas dari
Biru-Light Tanggapan Stomata
Biru / pembalikan hijau gerakan stomata merupakan
respon Photobiological yang luar biasa.
18,5 Zeaxanthin dan CO 2 Merasakan di Garda Sel
Hubungan fungsional antara aktivitas siklus Calvin dan
konten zeaxanthin dari sel penjaga pasangan cahaya biru
dan CO 2 penginderaan saat buang stomata.
Bab Referensi
Ahmad, M., dan Cashmore, AR (1993) HY4 gen A. thaliana
mengkode protein dengan karakteristik dari photore- cahaya ceptor biru. Alam 366:
162-166.
Ahmad, M., Jarillo, JA, Smirnova, O., dan Cashmore, AR (1998)
Cryptochrome fotoreseptor cahaya biru dari Arabidopsis terlibat dalam
fototropisme. Alam 392: 720-723.
Amodeo, G., Srivastava, A., dan Zeiger, E. (1992) menghambat Vanadate
biru pembengkakan cahaya dirangsang dari Vicia protoplas penjaga sel.
Tanaman Physiol. 100: 1567-1570.
Assmann, SM (1988) Peningkatan respon stomata menjadi biru
cahaya dengan lampu merah, mengurangi konsentrasi antar karbon dioksida dan
perbedaan tekanan uap yang rendah. Tanaman Physiol. 87: 226-231.
Assmann, SM, Simoncini, L., dan Schroeder, JI (1985) Cahaya biru
mengaktifkan electrogenic ion memompa di protoplas penjaga sel
Vicia faba. Alam 318: 285-287.
Briggs, WR, dan Christie, JM (2002) Phototropins 1 dan 2: Versa-
reseptor cahaya biru tanaman genteng. Tren Tanaman Sci. 7: 204-210. Cerda-Olmedo,
E., dan Lipson, ED (1987) Phycomyces. Cold Spring
Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY. Cosgrove, DJ (1994)
Photomodulation pertumbuhan. Di Photomorpho-
genesis di Tanaman, 2nd ed., RE Kendrick dan GHM Kronen- berg, eds., Kluwer,
Dordrecht, Belanda, pp. 631-658. Dietrich, P., Sanders, D., dan Hedrich, R. (2001)
Peran chan- ion
nels di pembukaan stomata tergantung cahaya. J. Exp. Bot. 52: 1959-1967. Emi, T.,
Kinoshita, T., dan Shimazaki, K. (2001) Spesifik pengikatan
isoform vf14-3-3a ke membran plasma H + -ATPase respon terhadap cahaya
biru dan fusicoccin di sel penjaga dari kacang luas.
Tanaman Physiol. 125: 1115-1125. Firn, RD (1994) fototropisme. Di Photomorphogenesis
di Tanaman, 2
ed., RE Kendrick dan GHM Kronenberg, eds., Kluwer, drecht Dor-, Belanda, pp.
659-681.
Frechilla, S., Talbott, LD, Bogomolni, RA, dan Zeiger, E. (2000)
Pembalikan pembukaan stomata cahaya dirangsang biru oleh cahaya hijau.
Plant Cell Physiol. 41: 171-176.
Frechilla, S., Zhu, J., Talbott, LD, dan Zeiger, E. (1999) Stomata dari
npq1, sebuah zeaxanthin-kurang Arabidopsis mutan, kurang respon spesifik
terhadap cahaya biru. Plant Cell Physiol. 40: 949-954. Horwitz, BA (1994) Properties
dan rantai transduksi UV
dan fotoreseptor cahaya biru. Di Photomorphogenesis di Tanaman,
2nd ed., RE Kendrick dan GHM Kronenberg, eds., Kluwer, Dordrecht, Belanda,
pp. 327-350.
421
Iino, M., Ogawa, T., dan Zeiger, E. (1985) sifat Kinetic dari
respon cahaya biru dari stomata. Proc. Natl. Acad. Sci. Amerika Serikat 82: 8019-8023.
Karlsson, PE (1986) regulasi cahaya biru dari stomata dalam gandum
bibit. II. spektrum aksi dan mencari tindakan dichroism.
Physiol. Menanam. 66: 207-210.
Kinoshita, T., dan Shimazaki, K. (1999) Cahaya biru mengaktifkan
plasma membran H + -ATPase oleh fosforilasi minus C-ter- di sel penjaga
stomata. EMBO J. 18: 5548-5558. Kinoshita, T., dan Shimazaki, K. (2001) Analisis
phosphory- yang
tingkat lation di sel penjaga membran plasma H + -ATPase dalam menanggapi
fusicoccin. Plant Cell Physiol. 42: 424-432. Kinoshita, T., Doi, M., Suetsugu, N.,
Kagawa, T., Wada, M., dan Shi-
Mazaki, K. (2001) phot1 dan phot2 memediasi regulasi cahaya biru pembukaan
stomata. Alam 414: 656-660. Lin, C. (2000) Tanaman reseptor cahaya biru. Tren
Tanaman Sci. 5: 337-342. Matters, GL, dan Beale, SI (1995) Biru-light-diatur ekspresi
gen untuk dua langkah awal biosintesis klorofil di
Chlamydomonas reinhardtii. Tanaman Physiol. 109: 471-479. Niyogi, KK, Grossman,
AR, dan Björkman, O. (1998) Arabidopsis
mutan mendefinisikan peran sentral untuk siklus xantofil dalam modulasi reg-
konversi energi fotosintesis. Sel tanaman 10: 1121-1134.
Melarang, WH, Jr (1983) konsep sekarang tentang peran kalium
dalam gerakan stomata. Physiol. Menanam. 59: 302-311. Taman, BM, Cho, MH,
dan Spalding, EP (1998) Dua genetik
fase dipisahkan dari hambatan pertumbuhan yang disebabkan oleh cahaya biru di bibit
Arabidopsis. Tanaman Physiol. 118: 609-615. Taman, BM, Folta, KM, dan Spalding, EP
(2001) photocontrol dari
pertumbuhan batang. Curr. Opin. Tanaman Biol. 4: 436-440. Sakai, T., Kagawa, T.,
Kasahara, M., Swartz, TE, Christie, JM,
Briggs, WR, Wada, M., dan Okada, K. (2001) Arabidopsis nph1 dan npl1: reseptor
cahaya biru yang menengahi kedua fototropisme dan relokasi kloroplas. Proc. Natl.
Acad. Sci. Amerika Serikat 98: 6969-6974.
Schroeder, JI, Allen, GJ, Hugouvieux, V., Kwak, JM, dan Waner,
D. transduksi sinyal (2001) sel Guard. Annu. Pendeta Tanaman Phys- iol. Tanaman Mol.
Biol. 52: 627-658.
Schwartz, A., dan Zeiger, E. (1984) energi metabolik untuk stomata
pembukaan. Peran fotofosforilasi dan phorylation fosfat oksidatif. Planta 161:
129-136. Senger, H. (1984) Blue Light Efek dalam Sistem Biologi. Peloncat,
Berlin.
Serrano, EE, Zeiger, E., dan Hagiwara, S. (1988) Red light stimu-
lates pompa proton electrogenic di Vicia protoplas penjaga sel.
Proc. Natl. Acad. Sci. Amerika Serikat 85: 436-440. Shimazaki, K., Iino, M., dan Zeiger, E.
(1986) biru tergantung cahaya
proton ekstrusi oleh protoplas penjaga sel Vicia faba. Alam
319: 324-326.
Spalding, EP, dan Cosgrove, DJ (1989) depo- membran Besar
larization mendahului cepat biru-induksi cahaya penghambatan pertumbuhan mentimun. Planta
178: 407-410.
Srivastava, A., dan Zeiger, E. (1995a) Penjaga sel zeaxanthin trek
fotosintesis aktif radiasi dan stomata lubang di Vicia faba Daun-daun. Plant Cell
Lingkungan. 18: 813-817. Srivastava, A., dan Zeiger, E. (1995b) The inhibitor
zeaxanthin untuk-
mation, dithiothreitol, menghambat pembukaan stomata biru-cahaya dirangsang Vicia
faba. Planta 196: 445-449. Swartz, TE, Corchnoy, SB, Christie, JM, Lewis, JW,
Szundi, I.,
Briggs, WR, dan Bogomolni, RA (2001) The photocycle dari domain
flavin-mengikat dari biru muda fotoreseptor totropin pho-. J. Biol. Chem. 276:
36.493-36.500. Talbott, LD, dan Zeiger, E. (1998) Peran sukrosa dalam sel
penjaga
osmoregulasi. J. Exp. Bot. 49: 329-337. Talbott, LD, Srivastava, A., dan Zeiger,
E. (1996) Stomata dari
Pertumbuhan-ruang-tumbuh Vicia faba memiliki sensitivitas ditingkatkan untuk CO 2. Plant Cell
Lingkungan. 19: 1188-1194.
422 Bab 18
Tallman, G., Zhu, J., Mawson, BT, Amodeo, G., Nouhi, Z., Levy, K.,
dan Zeiger, E. (1997) Induksi CAM di crystallinum Mesembryanthemum menghapuskan
respon stomata terhadap cahaya biru dan pembentukan zeaxanthin tergantung
cahaya di kloroplas penjaga sel.
Plant Cell Physiol. 38: 236-242.
Thimann, KV, dan Curry, GM (1960) fototropisme dan foto-
taksi. Di Perbandingan Biokimia, Vol. 1, M. Florkin dan HS Mason, eds., Academic
Press, New York, pp. 243-306. Tsunoyama, Y., Morikawa, K., Shiina, T., dan
Toyoshima, Y. (2002)
Biru muda spesifik dan diferensial ekspresi faktor sigma plastid, Sig5 di Arabidopsis
thaliana. FEBS Lett. 516: 225-228. Vogelmann, TC (1994) Cahaya di dalam pabrik.
Di Photomorphogen-
ESIS di Tanaman, 2nd ed., RE Kendrick dan GHM Kronenberg, eds., Kluwer,
Dordrecht, Belanda, pp. 491-533.
Vogelmann, TC, dan Haupt, W. (1985) The biru gradien cahaya dalam
sepihak diiradiasi koleoptil jagung: Pengukuran dengan probe serat optik. Photochem.
Photobiol. 41: 569-576. Yamamoto, HY (1979) Biokimia dari siklus violaxanthin di
tumbuhan tingkat tinggi. Pure Appl. Chem. 51: 639-648. Zeiger, E., dan Hepler, PK (1977)
Cahaya dan stomata fungsi: Biru
merangsang cahaya pembengkakan protoplas penjaga sel. Ilmu 196: 887-889.
Zeiger, E., Talbott, LD, Frechilla, S., Srivastava, A., dan Zhu, JX
(2002) Penjaga sel kloroplas: Aperspective untuk dua puluh abad pertama. Baru
fitol. 153: 415-424.
Bab

19 Auksin: The Hormon Pertumbuhan

BENTUK DAN FUNGSI organisme multisel tidak akan mungkin tanpa komunikasi yang
efisien antara sel, jaringan, dan organ. Pada tumbuhan yang lebih tinggi, regulasi dan
koordinasi metabolisme, pertumbuhan, dan morfogenesis sering bergantung pada sinyal
kimia dari salah satu bagian dari tanaman yang lain. Ide ini berasal dari abad kesembilan
belas dengan botani Jerman Julius von Sachs (1832-1897).

Sachs mengusulkan bahwa pembawa pesan kimia yang bertanggung jawab untuk
pembentukan dan pertumbuhan organ tanaman yang berbeda. Dia juga menyarankan bahwa
faktor-faktor eksternal seperti gravitasi bisa mempengaruhi distribusi zat ini dalam tanaman.
Meskipun Sachs tidak tahu identitas ini utusan kimia, ide-idenya menyebabkan penemuan
akhirnya mereka.
Banyak konsep-konsep kita saat ini tentang komunikasi antar tanaman telah diturunkan
dari penelitian serupa pada hewan. Pada hewan utusan kimia yang memediasi komunikasi
antar disebut hormon. Hormon berinteraksi dengan protein seluler tertentu yang disebut

reseptor.
Kebanyakan hormon hewan disintesis dan disekresi di salah satu bagian dari tubuh dan
ditransfer ke situs target tertentu di bagian lain dari tubuh melalui aliran darah. hormon
hewan jatuh ke dalam empat kategori umum: protein, peptida kecil, turunan asam amino,
dan steroid.
Tanaman juga memproduksi molekul sinyal, disebut hormon, yang memiliki efek
mendalam pada pengembangan pada konsentrasi vanishingly rendah. Sampai baru-baru,
pengembangan tanaman dianggap diatur oleh hanya lima jenis hormon: auksin, giberelin,
sitokinin, etilen, dan asam absisat. Namun sekarang ada bukti kuat keberadaan hormon
steroid tanaman, brassinosteroids bahwa memiliki berbagai efek morfologi pembangunan
tanaman. (Brassinosteroids sebagai hormon tanaman yang dibahas dalam Web Essay
19.1 .)

Avariety molekul sinyal lain yang memainkan peran dalam ketahanan terhadap patogen
dan pertahanan terhadap herbivora juga telah diidentifikasi, termasuk asam jasmonat, asam
salisilat, dan systemin polipeptida (lihat Bab 13). Dengan demikian jumlah dan jenis hormon
dan agen signaling menyerupai hormon pada tanaman terus berkembang.
424 Bab 19
Hormon Pabrik pertama akan kita perhatikan adalah auksin. Auksin layak
kebanggaan tempat di setiap diskusi hormon tanaman karena itu adalah
hormon pertumbuhan pertama yang ditemukan dalam tanaman, dan banyak
dari awal pekerjaan fisiologis pada mekanisme ekspansi sel tanaman dilakukan
dalam kaitannya dengan tindakan auksin.
Selain itu, baik auksin dan sitokinin berbeda dari hormon tanaman lain dan
agen sinyal dalam satu hal penting: Mereka yang diperlukan untuk kelangsungan
hidup. Sejauh ini, tidak ada mutan kurang baik auksin atau sitokinin telah
ditemukan, menunjukkan bahwa mutasi yang menghilangkan mereka adalah
mematikan. Sedangkan hormon tanaman lain tampaknya bertindak sebagai on /
off switch yang mengatur proses perkembangan tertentu, auksin dan sitokinin
tampaknya diperlukan pada beberapa tingkat lebih atau kurang terus menerus.
Kita mulai diskusi kita dari auksin dengan sejarah singkat penemuan
mereka, diikuti dengan penjelasan struktur kimia dan metode yang
digunakan untuk mendeteksi auksin dalam jaringan tanaman. J melihat
jalur biosintesis auksin dan sifat polar transportasi auksin berikut. Kami
kemudian akan meninjau berbagai proses perkembangan dikendalikan oleh
auksin, seperti pemanjangan batang, dominasi apikal, inisiasi akar,
pengembangan buah, dan berorientasi, atau
tropis, pertumbuhan. Akhirnya, kita akan memeriksa apa yang saat ini diketahui
tentang mekanisme pertumbuhan auksin-diinduksi pada tingkat seluler dan
molekuler.
MUNCULNYA auksin KONSEP
Selama bagian akhir abad kesembilan belas, Charles Darwin dan putranya
Francis mempelajari fenomena pertumbuhan tanaman yang melibatkan
tropisme. Salah satu kepentingan mereka adalah lentur tanaman menuju
cahaya. Fenomena ini, yang disebabkan oleh pertumbuhan diferensial,
disebut fototropisme. Dalam beberapa percobaan yang Darwin digunakan
bibit rumput kenari ( Phalaris canariensis), di mana, seperti di banyak rumput
lain, daun termuda yang dilapisi organ pelindung yang disebut koleoptil ( Gambar jalur biosintesis auksin dan kerusakan.
19.1).
Koleoptil sangat sensitif terhadap cahaya, terutama cahaya biru (lihat Bab
18). Jika diterangi di satu sisi dengan pulsa pendek dari cahaya biru redup,
mereka akan berusaha (tumbuh) menuju sumber pulsa cahaya dalam waktu
satu jam. The Darwin menemukan bahwa ujung koleoptil dirasakan cahaya,
karena jika mereka menutupi ujung dengan foil, koleoptil tidak akan
membungkuk. Tapi wilayah koleoptil yang bertanggung jawab untuk menekuk
ke arah cahaya, yang disebut zona pertumbuhan, adalah beberapa milimeter di
bawah ujung.
Dengan demikian mereka menyimpulkan bahwa semacam sinyal diproduksi di
ujung, perjalanan ke zona pertumbuhan, dan menyebabkan sisi teduh untuk
tumbuh lebih cepat dari sisi diterangi. Hasil eksperimen mereka diterbitkan pada
tahun 1881 dalam sebuah buku yang luar biasa berjudul Kekuatan Gerakan di
Tanaman.
Ada diikuti periode panjang eksperimentasi oleh banyak peneliti pada
sifat stimulus pertumbuhan
koleoptil. Penelitian ini memuncak dalam demonstrasi pada tahun 1926
oleh Frits Pergi dari kehadiran kimia pertumbuhan mempromosikan di ujung
oat ( Avena sativa) koleoptil. Hal itu diketahui bahwa jika ujung koleoptil telah
dihapus, pertumbuhan koleoptil berhenti. pekerja sebelumnya telah
berusaha untuk mengisolasi dan mengidentifikasi bahan kimia
pertumbuhan-mempromosikan dengan menggiling tips koleoptil dan
menguji aktivitas ekstrak. Pendekatan ini gagal karena menggiling up
jaringan dilepaskan ke zat penghambatan ekstrak yang biasanya yang
terkotak dalam sel.
Pergi terobosan utama adalah untuk menghindari menggiling dengan
memungkinkan bahan untuk berdifusi keluar tips koleoptil dieksisi langsung ke
blok gelatin. Jika ditempatkan asimetris di atas koleoptil dipenggal, blok ini dapat
diuji untuk kemampuan mereka untuk menyebabkan membungkuk dengan tidak
adanya sumber cahaya unilateral (lihat Gambar 19.1). Karena substansi
mempromosikan pemanjangan bagian koleoptil (Gambar 19.2), itu akhirnya
dinamakan auksin dari bahasa Yunani auxein, yang berarti “untuk meningkatkan”
atau “untuk tumbuh.”
BIOSINTESIS DAN METABOLISME auksin
Pergi ini studi dengan blok agar menunjukkan dengan tegas bahwa
pertumbuhan-mempromosikan “pengaruh” menyebar dari ujung koleoptil
adalah zat kimia. Fakta bahwa itu diproduksi di satu lokasi dan diangkut
dalam jumlah menit ke situs kerjanya memenuhi syarat sebagai hormon
tanaman yang otentik.
Dalam tahun-tahun berikutnya, identitas kimia dari “substansi
pertumbuhan” ditentukan, dan karena potensi penggunaan pertanian,
banyak analog kimia terkait diuji. pengujian ini menyebabkan generalisasi
tentang persyaratan kimia untuk kegiatan auksin. Sejalan dengan penelitian
tersebut, teknik blok difusi agar sedang diterapkan pada masalah
transportasi auksin. Kemajuan teknologi, terutama penggunaan isotop
sebagai pelacak, ahli biokimia tanaman memungkinkan untuk mengungkap
Diskusi kita dimulai dengan sifat kimia auksin dan berlanjut dengan
deskripsi biosintesis, transportasi, dan metabolismenya. ilmuwan semakin
metode analisis yang kuat dan penerapan pendekatan biologi molekuler
baru-baru ini memungkinkan untuk mengidentifikasi prekursor auksin dan
mempelajari omset auksin dan distribusi dalam pabrik.
Kepala Sekolah Auksin di Tanaman Tinggi Apakah
Indole-3-Acetic Acid
Pada pertengahan 1930-an ditetapkan bahwa auksin adalah asam
indole-3acetic (IAA). Beberapa auksin lainnya pada tanaman yang lebih
tinggi ditemukan kemudian (Gambar 19.3), tapi IAA adalah yang paling
berlimpah dan fisiologis yang relevan. Karena struktur IAA relatif sederhana,
akademik dan laboratorium industri dengan cepat mampu mensintesis lebar
 Auksin: The Hormon Pertumbuhan 425

bibit oat Darwin (1880) Dari percobaan pada fototropisme

4-hari-tua Cahaya
koleoptil, Darwin menyimpulkan pada
tahun 1880 bahwa stimulus
koleoptil pertumbuhan diproduksi di ujung
koleoptil dan ditularkan ke zona
Benih pertumbuhan.

bibit utuh Ujung koleoptil Buram tutup pada ujung

1 cm (kelengkungan) dipotong (ada (kelengkungan tidak)

lekukan)

Akar Boysen-Jensen (1913) Pada tahun 1913, P. Boysen-Jensen

menemukan bahwa stimulus
pertumbuhan melewati gelatin tetapi
tidak melalui hambatan air-kedap
seperti mika.

Mica sheet disisipkan Mica sheet Tip dihapus Gelatin kelengkungan

pada sisi gelap (tidak disisipkan pada sisi antara ujung dan phototropic yang
ada kelengkungan) terang koleoptil tunggul normal tetap
(kelengkungan) mungkin

Paal (1919)

di alam.
tip dihapus Tip diganti pada satu Pertumbuhan stimulus diproduksi di ujung adalah kimia
sisi tunggul koleoptil kelengkungan berkembang bahwa-pertumbuhan mempromosikan
Paal memberikan bukti
tanpa stimulus cahaya
auksin kuantitatif. Pada tahun 1919, A.
unilateral koleoptil-membungkuk untuk analisis
dalam blok gelatin. Ia juga merancang uji
mempromosikan zat dapat berdifusi ke
bahwa aktif-pertumbuhan
Pergi (1926) Pada tahun 1926, FW Pergi menunjukkan
45 °

kiat koleoptil pada Tips dibuang; gelatin dipotong Setiap blok gelatin Koleoptil membungkuk dalam
gelatin menjadi blok yang lebih kecil ditempatkan di salah kegelapan total; sudut
satu sisi tunggul koleoptil kelengkungan dapat diukur
Curvature (degrees)

Curvature (degrees)

5 5

0gelatin 20
2 15 10
4 6 8 10 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30
Jumlah kiat koleoptil pada IAA di blok gelatin (mg / L) 20 15 10

GAMBAR 19.1 Ringkasan dari percobaan awal dalam penelitian auksin.

426 Bab 19

(SEBUAH) (B)

GAMBAR 19.2 Auksin merangsang pemanjangan bagian oat koleoptil. Ini bagian koleoptil diinkubasi
selama 18 jam baik air (A) atau auksin (B). Jaringan kuning dalam koleoptil tembus adalah daun primer.
(Foto ©
MB Wilkins.)

array molekul dengan aktivitas auksin. Beberapa ini digunakan sebagai
herbisida dalam hortikultura dan pertanian (Gambar
19,4) (untuk auksin sintetis tambahan, lihat Web Topik 19,1 ).
Definisi awal auksin termasuk semua zat kimia alami dan sintetis yang
merangsang pemanjangan di koleoptil dan bagian batang. Namun, auksin
mempengaruhi banyak proses perkembangan selain pemanjangan sel.
Dengan demikian auksin dapat didefinisikan sebagai senyawa dengan
aktivitas biologis yang sama dengan yang IAA, termasuk kemampuan untuk
mempromosikan pemanjangan sel di koleoptil dan batang bagian,
pembelahan sel dalam budaya kalus di hadapan sitokinin, pembentukan akar
adventif pada daun terpisah dan batang, dan fenomena perkembangan lain
yang terkait dengan IAAaction.
Meskipun mereka secara kimiawi beragam, fitur umum dari semua
auksin aktif adalah jarak molekul sekitar 0,5 nm antara muatan positif
pecahan pada cincin aromatik dan gugus karboksil bermuatan negatif (lihat Web
Topik 19,2 ).
Auxins di Sampel Biologi dapat diukur
Tergantung pada informasi yang peneliti kebutuhan, jumlah dan / atau
identitas auksin dalam sampel biologis dapat ditentukan dengan bioassay,
spektrometri massa, atau enzyme-linked immunosorbent assay, yang
disingkat sebagai ELISA (lihat Web Topik 19,3 ).
SEBUAH bioassay adalah pengukuran efek zat aktif biologis yang
diketahui atau diduga pada bahan hidup. Dalam karya rintisannya lebih dari
60 tahun yang lalu, Pergi digunakan
Avena sativa ( oat) koleoptil dalam teknik yang disebut Avena
Tes koleoptil kelengkungan ( lihat Gambar 19.1). The koleoptil melengkung
karena peningkatan auksin di satu sisi dirangsang pemanjangan sel, dan
penurunan auksin di sisi lain (karena tidak adanya ujung koleoptil)
menyebabkan penurunan pertumbuhan tingkat-fenomena yang disebut pertumbuhan
diferensial.
Pergi menemukan bahwa ia bisa memperkirakan jumlah auksin dalam sampel
dengan mengukur koleoptil curva- yang dihasilkan

Cl

CH 2 COOH CH 2 COOH

CH 2 CH 2 CH 2 COOH

N N

NH
H H

Indole-3-acetic acid (IAA) 4-Chloroindole-3-acetic acid Indole-3-butyric acid (IBA)

(4-CI-IAA)

GAMBAR 19.3 Struktur tiga auksin alami. Indole-3-acetic acid (IAA) terjadi pada semua tanaman, tetapi senyawa lain
yang terkait dalam tanaman memiliki aktivitas auksin. Peas, misalnya, mengandung asam 4-chloroindole-3-asetat.
Mustard dan jagung mengandung asam butirat indole-3- (IBA).
 Auksin: The Hormon Pertumbuhan 427

transformasi Arabidopsis daun dengan membangun ini dalam plasmid Ti

OCH 2 COOH
menggunakan Agrobacterium, adalah mungkin untuk memvisualisasikan
Cl COOH
distribusi auksin bebas di muda, daun berkembang. Dimanapun auksin bebas
Cl OCH 3
diproduksi, GUS ekspresi occurs- dan dapat dideteksi histokimia. Dengan
menggunakan teknik ini, baru-baru ini menunjukkan bahwa auksin dihasilkan

Cl Cl oleh sekelompok sel yang terletak di situs di mana hidatoda akan

asam 2,4-Dichlorophenoxyacetic 2-Methoxy-3, asam
(2,4-D) 6-dichlorobenzoic (dikamba)
GAMBAR 19.4 Struktur dua auksin sintetis. Kebanyakan auksin sintetik syn
digunakan sebagai herbisida dalam hortikultura dan pertanian.
mendatang. bioassay auksin masih digunakan saat ini untuk mendeteksi
adanya aktivitas auksin dalam sampel. Itu Avena koleoptil uji kelengkungan
adalah ukuran sensitif aktivitas auksin (itu adalah efektif untuk konsentrasi IAA
dari sekitar 0,02 sampai 0,2 mg L -1). bioassay lain mengukur perubahan
auksin-diinduksi dalam pertumbuhan lurus Avena koleoptil mengambang
dalam larutan (lihat Gambar 19.2). Kedua bioassay ini dapat membangun
kehadiran auksin dalam sampel, tetapi mereka tidak dapat digunakan untuk
kuantifikasi tepat atau identifikasi senyawa tertentu.
mengembangkan (Gambar 19.5).
hidatoda modifikasi glandlike dari tanah dan pembuluh darah jaringan,
biasanya pada margin daun, yang memungkinkan pelepasan air cair
(cairan gutasi) melalui pori-pori di epidermis di hadapan tekanan akar (lihat
Bab 4). Seperti ditunjukkan dalam Gambar 19.5, selama tahap-tahap awal
diferensiasi hidatod pusat sintesis auksin tinggi terbukti sebagai gelap noda
GUS biru pekat (panah) di lobus daun bergerigi dari Arabidopsis ( Aloni et al.
2002). Adiffuse jejak aktivitas GUS mengarah ke membedakan unsur-unsur
kapal di untai vaskular berkembang. mikrograf yang luar biasa ini
menangkap proses diferensiasi vaskular auksin-diatur dalam sangat
tindakan!
Kami akan kembali ke topik kontrol diferensiasi vaskular kemudian
dalam bab ini.

spektrometri massa adalah metode pilihan ketika informasi tentang

kedua struktur kimia dan jumlah IAA yang dibutuhkan. Metode ini
digunakan dalam hubungannya dengan protokol pemisahan yang
melibatkan kromatografi gas. Hal ini memungkinkan kuantifikasi tepat dan
identifikasi auksin, dan dapat mendeteksi sesedikit 10 -12 g (1 pikogram, atau
pg) dari IAA, yang baik dalam kisaran auksin ditemukan di bagian kacang
batang tunggal atau kernel jagung. Teknik-teknik canggih telah
memungkinkan peneliti untuk menganalisis secara akurat prekursor auksin,
omset auksin, dan distribusi auksin di dalam pabrik.

IAA Apakah disintesis di meristem, Daun Muda, dan

Mengembangkan Buah dan Biji
IAAbiosynthesis dikaitkan dengan cepat membagi dan berkembang pesat
jaringan, terutama di tunas. Meskipun hampir semua jaringan tanaman
tampak mampu menghasilkan tingkat rendah IAA, menembak meristem
apikal, daun muda, dan mengembangkan buah-buahan dan biji-bijian adalah
situs utama dari sintesis IAA (Ljung et al. In press).

Dalam primordia daun yang sangat muda Arabidopsis, auksin disintesis

di ujung. Selama pengembangan daun ada pergeseran bertahap dalam
situs produksi auksin basipetally sepanjang margin, dan kemudian, di
wilayah tengah lamina. Pergeseran basipetal dalam produksi auksin
berkorelasi erat dengan, dan mungkin kausal berkaitan dengan, urutan
pematangan basipetal pembangunan daun dan diferensiasi vaskular (Aloni
2001).
Dengan menggabungkan GUS ( β- glucuronidase) gen reporter untuk
promotor yang mengandung unsur respon auksin, dan
GAMBAR 19.5 Deteksi situs sintesis auksin dan port trans dalam primordial
daun muda DR5 Arabidopsis dengan cara GUS gen reporter dengan moter
pro auksin-sensitif. Selama tahap awal diferensiasi hidatod, pusat sintesis
auksin jelas sebagai biru tua pekat GUS noda (panah) di lobus daun
bergerigi gin Mar-. Sebuah gradien aktivitas GUS diencerkan memanjang
dari margin menuju untai vaskular membedakan (arrow- kepala), yang
berfungsi sebagai wastafel untuk auksin yang mengalir originat- ing di
lobus. (Courtesy of R. Aloni dan CI Ullrich.)
428 Bab 19

Beberapa Persiapan Exist untuk Biosintesis IAA asetaldehida kemudian dioksidasi untuk IAA oleh dehidrogenase tertentu.

IAA secara struktural terkait dengan asam amino triptofan, dan studi awal
biosintesis auksin difokuskan pada triptofan sebagai prekursor
kemungkinan. Namun, penggabungan eksogen berlabel triptofan (misalnya,
[ 3 H] triptofan) ke IAA oleh jaringan tanaman telah terbukti sulit untuk
menunjukkan. Namun demikian, sebuah badan besar bukti kini telah
terakumulasi menunjukkan bahwa tanaman mengubah triptofan untuk
IAAby beberapa jalur, yang dijelaskan dalam paragraf berikut.
TAM jalur. Itu tryptamine (TAM) jalur ( lihat Gambar 19.6D) mirip dengan
IPApathway, kecuali bahwa urutan reaksi deaminasi dan dekarboksilasi
dibalik, dan enzim yang berbeda yang terlibat. Spesies yang tidak
memanfaatkan IPApathway memiliki jalur TAM. Dalam setidaknya satu
kasus (tomat), ada bukti untuk kedua jalur IPAand TAM (Nonhebel et al.
1993).

The IAN jalur. Dalam indole-3-asetonitril (IAN)

The IPApathway. Itu asam indole-3-piruvat (IPA) jalur (lihat Gambar
19.6C), mungkin yang paling umum dari jalur tryptophan tergantung. Ini
melibatkan reaksi deaminasi untuk membentuk IPA, diikuti dengan reaksi
dekarboksilasi untuk membentuk indole-3-asetaldehida (IAld). Indole-3-
jalur (lihat Gambar 19.6B), triptofan pertama dikonversi ke
indole-3-acetaldoxime dan kemudian ke indole-3-asetonitril. Enzim yang
mengubah IAN ke IAA disebut nitrilase.
The IAN jalur mungkin penting dalam hanya tiga keluarga tanaman:
Brassicaceae (mustard keluarga), Poaceae (rumput

(SEBUAH) (B) (C) (D)

jalur asam indole-3-piruvat

COOH

NH
NH 2

* Trp monooxygenase Triptofan (Trp) Trp dekarboksilase

Trp transaminase

IAN COOH
TAM

HAI
NH
NOH
NH NH 2
indole-3-piruvat (IPA) NH

Indole-3-acetaldoxime Tryptamine (TAM)

IPA dekarboksilase
jalur bakteri

HAI Amine
oksidase
N
HAI
NH
NH NH 2 NH

Indole-3-acetamide (IAM) Indole-3-asetonitril (IAN) indole-3-asetaldehida (IAld) asam

IAld dehidrogenase
nitrilase

COOH
* IAM hidrolase

NH

Indole-3-acetic acid (IAA)

GAMBAR 19.6 jalur triptofan tergantung dari IAA biosintesis pada tanaman dan bakteri. Enzim yang hadir
hanya dalam bakteri ditandai dengan tanda bintang. (Setelah Bartel 1997.)

keluarga), dan musaceae (pisang keluarga). Namun demikian, gen atau kegiatan
nitrilase-seperti baru-baru ini diidentifikasi dalam Cucurbitaceae (labu keluarga),
Solanaceae (keluarga tembakau), Fabaceae (kacang-kacangan), dan Rosaceae
(naik keluarga).
Empat gen ( NIT1 melalui NIT4) bahwa enzim encode nitrilase kini telah
kloning dari Arabidopsis. Kapan
NIT2 diungkapkan dalam tembakau transgenik, tanaman yang dihasilkan diperoleh
kemampuan untuk menanggapi IAN sebagai auksin dengan menghidrolisis ke IAA
(Schmidt et al. 1996).
tryptophan tergantung biosintesis pathway- satu sama lain yang
menggunakan indole-3-acetamide (IAM) sebagai perantara (lihat
Figure19.6A) -adalah digunakan oleh berbagai bakteri patogen, seperti savastanoi
Pseudomonas dan Agrobacterium tumefaciens. Jalur ini melibatkan dua
enzim monooksigenase triptofan dan IAM hidrolase. The auksin yang
dihasilkan oleh bakteri ini sering menimbulkan perubahan morfologi di host
pabrik mereka.
Selain jalur tryptophan-dependent, studi genetik baru-baru ini telah
memberikan bukti bahwa tanaman dapat mensintesis IAAvia satu atau jalur
lebih tryptophan-independen. Adanya beberapa jalur untuk IAAbiosynthesis
membuat hampir tidak mungkin untuk tanaman kehabisan auksin dan
mungkin refleksi dari peran penting dari hormon ini dalam perkembangan
tanaman.
IAA Apakah Juga disintesis dari Indole atau dari
Indole-3-Gliserol Fosfat
Meskipun jalur triptofan-independen IAA biosintesis telah lama dicurigai
karena rendahnya tingkat konversi triptofan radiolabeled untuk IAA, tidak
sampai pendekatan genetik yang tersedia bisa keberadaan jalur tersebut
dikonfirmasikan dan didefinisikan. Mungkin mencolok sebagian besar
penelitian ini pada jagung melibatkan pericarp oranye (ORP) mutan (Gambar
19.7), di mana kedua subunit dari sintase enzim triptofan tidak aktif
(Gambar
19,8). Itu ORP mutan adalah auxotroph triptofan yang benar, membutuhkan
triptofan eksogen untuk bertahan hidup. Namun, nei-
GAMBAR 19.7 Oranye pericarp ( ORP) mutan jagung yang hilang baik
subunit dari sintase triptofan. Sebagai hasilnya, pericarps sekitarnya setiap
kernel menumpuk sisi glyco- asam anthranilic dan indole. Warna oranye
adalah karena kelebihan indol. (Courtesy of Jerry D. Cohen.)
Auksin: The Hormon Pertumbuhan 429
Ther yang ORP bibit maupun bibit-tipe liar dapat mengubah triptofan
menjadi IAA, bahkan ketika bibit mutan yang diberikan cukup triptofan
untuk membalikkan efek mematikan dari mutasi.
Meskipun blok dalam biosintesis triptofan, yang ORP
mutan mengandung jumlah IAA50-kali lipat lebih tinggi daripada tanaman
tipe liar (Wright et al. 1991). Signficantly, ketika
ORP bibit diberi makan [ 15 N] anthranilate (lihat Gambar 19.8), label
kemudian muncul di IAA, tapi tidak di triptofan. Hasil ini memberikan bukti
eksperimental terbaik untuk jalur triptofan-independen IAA biosintesis.
Penelitian lebih lanjut menetapkan bahwa titik cabang untuk
IAAbiosynthesis adalah baik indole atau prekursor, indole-3glycerol fosfat
(lihat Gambar 19.8). IAN dan IPAare mungkin intermediet, tetapi prekursor
langsung dari IAA di jalur triptofan-independen belum diidentifikasi.
Penemuan jalur triptofan-independen telah berubah drastis pandangan
kita tentang IAA biosintesis, tetapi kepentingan relatif dari dua jalur
(tryptophandependent vs tryptophan-independent) kurang dipahami. Dalam
beberapa tanaman telah menemukan bahwa jenis IAAbiosynthesis jalur
bervariasi antara jaringan yang berbeda, dan antara waktu yang berbeda
dari pembangunan. Sebagai contoh, selama embriogenesis dalam wortel,
jalur tryptophandependent penting sangat awal dalam pembangunan,
sedangkan jalur triptofan-independen mengambil alih segera setelah
sumbu akar-shoot didirikan. (Untuk bukti lebih dari biosintesis
triptofan-independen IAA, lihat Web Topik 19,4 .)
Kebanyakan IAA di Plant yang Apakah dalam Formulir kovalen
Bound
Meskipun gratis IAA adalah bentuk biologis aktif dari hormon, sebagian besar
auksin pada tanaman ditemukan dalam keadaan terikat secara kovalen. Ini
terkonjugasi, atau “terikat,” auksin telah diidentifikasi dalam semua tanaman
yang lebih tinggi dan dianggap hormon tidak aktif.
IAAhas telah ditemukan terkonjugasi untuk kedua senyawa tinggi dan
rendah molekul-berat.
• Molekul rendah berat badan terkonjugasi auksin meliputi ester dari
IAAwith glukosa atau urat inositol dan amida konjugat seperti IAA- N- aspartat
(Gambar 19.9).
• -Berat molekul tinggi IAA konjugat termasuk IAAglucan (7-50 unit
glukosa per IAA) dan IAA-glikoprotein ditemukan dalam biji sereal.
Senyawa yang IAA terkonjugasi dan sejauh mana konjugasi tergantung
pada enzim konjugasi tertentu. Reaksi yang terbaik-dipelajari adalah
konjugasi IAA menjadi glukosa di Zea mays.
Konsentrasi tertinggi auksin gratis di tanaman hidup berada di meristem
apikal tunas dan daun muda karena ini adalah situs utama auksin synthe-
430 Bab 19

Triptofan biosintesis GAMBAR 19.8 jalur triptofan-independen IAA biosintesis pada tanaman. Triptofan (Trp)
biosintesis jalur ditunjukkan di sebelah kiri. Mutan dibahas di Web Topik 19,4 ditunjukkan
Chorismate
dalam tanda kurung. Cabang-point prekursor untuk biosintesis triptofan-independen tidak
anthranilate pasti (indole-3-gliserol fosfat atau indol), dan IAN dan IPA dua kemungkinan intermediet.
synthase PR, phosphoribosyl. (Setelah Bartel 1997.)
anthranilate

Anthranilate
PR-transferase

5-Phosphoribosylanthranilate

PR-anthranilate
isomerase

1- ( Hai- Carboxyphenylamino) -1-

deoxyribulose 5-P

IGP synthase JALUR triptofan-INDEPENDEN IAA SINTESIS

OH
Feedback inhibition

CH 2 OP nitrilase ( nit1)
NH

NH OH
Indole-3-asetonitril (IAN)
COOH
Indole-3-gliserol fosfat (IGP)
NH

Trp synthase Sebuah ? COOH IAA

( trp3)

HAI
NH
serin +

NH
asam indole-3-piruvat (IPA)

indole

Trp synthase b
( trp2, ORP) Trypotophan
aminotransferase
COOH
(hipotetis)

NH
NH 2
Trp
sis. Namun, auksin secara luas didistribusikan di pabrik. Metabolisme
auksin terkonjugasi mungkin merupakan faktor utama dalam regulasi
tingkat auksin gratis. Sebagai contoh, selama perkecambahan benih Zea
mays,
IAA- urat inositol translokasi dari endosperm ke koleoptil melalui floem.
Setidaknya sebagian dari IAA bebas yang dihasilkan dalam tips koleoptil
dari Zea mays diyakini berasal dari hidrolisis IAA- urat inositol.
Selain itu, rangsangan lingkungan seperti cahaya dan gravitasi telah
terbukti mempengaruhi baik tingkat konjugasi auksin (pengangkatan auksin
gratis) dan laju pelepasan auksin gratis (hidrolisis auksin terkonjugasi).
Pembentukan auksin terkonjugasi dapat melayani fungsi lain juga,
termasuk penyimpanan dan perlindungan terhadap degradasi oksidatif.
IAA yang terdegradasi oleh Beberapa Persiapan
Seperti IAAbiosynthesis, yang enzimatik breakdown (oksidasi) dari IAA dapat
melibatkan lebih dari satu jalur. Untuk beberapa waktu telah berpikir bahwa
enzim peroxidative yang terutama bertanggung jawab untuk oksidasi IAA,
terutama karena enzim ini di mana-mana pada tanaman yang lebih tinggi dan
kemampuan mereka untuk mendegradasi IAA dapat ditunjukkan in vitro
(Gambar 19.10A). Namun, signifikansi fisiologis dari jalur peroksidase tidak
jelas. Sebagai contoh, tidak ada perubahan dalam tingkat IAA tanaman
transgenik diamati dengan baik peningkatan sepuluh kali lipat dalam ekspresi
peroksidase atau represi sepuluh kali lipat dari aktivitas peroksidase
(Normanly et al.
1995).
Atas dasar pelabelan isotop dan identifikasi metabolit, dua jalur oksidatif
lainnya lebih mungkin untuk terlibat dalam degradasi terkendali IAA (lihat
Gambar 19.10B). Produk akhir dari jalur ini adalah asam oxindole3-asetat
(OxIAA), senyawa alami dalam endosperm dan menembak jaringan Zea
mays. Dalam satu jalur, IAA teroksidasi tanpa dekarboksilasi untuk OxIAA.
 Auksin: The Hormon Pertumbuhan 431

HAI COOH

CH 2 C C H

H CH 2

NH aspartat NH
COOH N

Indole-3-acetic acid Indoleacetylaspartate

GAMBAR 19,9 Struktur dan jalur metabolisme diusulkan auksin terikat. Diagram
menunjukkan struktur dari berbagai konjugat IAA dan jalur metabolisme diusulkan
UDP-glucose

H CH 2 HO
COOH
terlibat dalam sintesis dan break ke bawah. panah tunggal menunjukkan jalur
OHHH
HO ireversibel; ganda panah, reversibel.
H CH 2OH
OH

CH 2 C

OO

NH

urat inositol
Indoleacetyl- β- D- glukosa

(SEBUAH) Dekarboksilasi: Jalur minor

H
CH 2
HAI H OH COOH
HH OH
H HO peroksidase
CH 2 BERSAMA OH
NH NH HAI
OH H
BERSAMA 2

NH Indole-3-acetic acid
3-Methyleneoxindole

Indoleacetyl-2- O-urat inositol (B) jalur Nondecarboxylation

Konjugasi
B
Di jalur lain, konjugat IAA-aspartat teroksidasi pertama yang menengah
HAI
dioxindole-3-acetylaspartate, dan kemudian ke OxIAA.

aspartat
In vitro IAA dapat dioksidasi nonenzymatically ketika terkena cahaya
intensitas tinggi, dan photodestruction dalam vitro dapat dipromosikan oleh
Indole-3-acetylaspartate
pigmen tumbuhan seperti riboflavin. Meskipun produk auksin fotooksidasi NH

telah diisolasi dari tanaman, peran, jika ada, dari jalur fotooksidasi in vivo
dianggap menjadi kecil.
SEBUAH
HAI

Dua Pools subselular dari IAA Exist: sitosol dan

aspartat
Kloroplas
Distribusi IAA dalam sel tampaknya diatur terutama oleh pH. karena IAA - tidak
HAI
menyeberangi membran tanpa bantuan, sedangkan IAAH mudah berdifusi NH
-Dioxindole 3-
melintasi membran,
acetylaspartate

COOH

GAMBAR 19.10 Biodegradasi IAA. (A) dengan peroksidase (dekarboksilasi

NH HAI
jalur) memainkan peranan yang relatif kecil. (B) Dua rute
nondecarboxylation dari IAA oxida- degradasi tive, A dan B, adalah jalur
metabolik yang paling umum. Oxindole-3-acetic acid
(OxIAA)
432 Bab 19
auksin cenderung menumpuk di kompartemen lebih basa
dari sel.
Distribusi IAA dan metabolitnya telah dipelajari dalam
sel tembakau. Sekitar sepertiga dari IAA ditemukan
dalam kloroplas, dan sisanya terletak di sitosol. IAA
konjugat terletak secara eksklusif di sitosol. IAA dalam menembak
apex
sitosol dimetabolisme baik oleh konjugasi atau
katabolisme nondecarboxylative (lihat Gambar 19.10).
IAA di kloroplas dilindungi dari proses ini, tetapi diatur hipokotil
oleh jumlah IAAin sitosol, dengan yang berada dalam
kesetimbangan (Sitbon et al. 1993).
Faktor-faktor yang mengatur konsentrasi mapan
auksin bebas dalam sel tanaman diagram diringkas
dalam Topik web
GAMBAR 19,11 Metode standar untuk mengukur transportasi auksin kutub. Polaritas
19,5 .
transportasi independen dari orientasi terhadap gravitasi.
auksin TRANSPORT
Sumbu utama tunas dan akar, bersama dengan cabang-cabang mereka
menunjukkan puncak-dasar polaritas struktural, dan polaritas struktural ini
berawal pada polaritas transportasi auksin. Segera setelah Pergi
mengembangkan tes kelengkungan koleoptil untuk auksin, ditemukan
bahwa IAA bergerak terutama dari apikal sampai akhir basal ( basipetally) di
dipotong bagian oat koleoptil. Jenis transportasi searah disebut transportasi
kutub. Auksin adalah satu-satunya hormon pertumbuhan tanaman yang
dikenal untuk diangkut polarly.
Karena apeks pucuk berfungsi sebagai sumber utama auksin untuk
seluruh pabrik, transportasi kutub telah lama diyakini sebagai penyebab
utama gradien auksin membentang dari ujung tunas ke ujung akar. Gradien
longitudinal auksin dari tunas ke akar mempengaruhi berbagai proses
perkembangan, termasuk pemanjangan batang, dominasi apikal,
penyembuhan luka, dan penuaan daun.
Baru-baru ini telah diakui bahwa sejumlah besar transportasi auksin
juga terjadi pada floem, dan bahwa floem mungkin adalah rute utama
dimana auksin diangkut acropetally ( yaitu, ke ujung) di root. Dengan
demikian, lebih dari satu jalur bertanggung jawab untuk distribusi auksin di
pabrik
Polar Transport Membutuhkan Energi dan Gravity adalah
Independen
Untuk mempelajari transportasi kutub, para peneliti mempekerjakan
donor-receiver metode agar block ( Gambar 19,11): Sebuah blok agar yang
mengandung auksin (blok donor radioisotop-label) ditempatkan pada salah satu
ujung segmen jaringan, dan blok penerima ditempatkan pada ujung lainnya.
Pergerakan auksin melalui jaringan ke blok penerima dapat ditentukan dari
waktu ke waktu oleh pengukuran radioaktivitas di blok penerima.
Dari banyak studi tersebut, sifat-sifat umum transportasi IAA kutub telah
muncul. Jaringan berbeda dalam
A (donor)
mengandung auksin radiolabeled
Apikal akhir (A) B (receiver)
Transportasi ke penerima
blok donor Agar yang
terjadi
bagian
dipotong
Membalikkan
B (donor)
Basal akhir (B) Transportasi ke penerima diblokir
A (receiver)
bibit
tingkat polaritas transportasi IAA. Di koleoptil, vegetatif batang, dan tangkai
daun, transportasi basipetal mendominasi. transportasi kutub tidak
terpengaruh oleh orientasi jaringan (setidaknya selama periode waktu yang
singkat), sehingga independen gravitasi.
Sebuah demonstrasi sederhana dari kurangnya efek gravitasi pada
transportasi polar ditunjukkan pada Gambar 19,12. Ketika stek batang
(dalam hal ini bambu) ditempatkan dalam ruang lembab, akar adventif
selalu terbentuk pada akhir basal dari stek, bahkan ketika stek yang
terbalik. Karena diferensiasi akar dirangsang oleh peningkatan kadar
auksin, auxin harus diangkut basipetally di batang bahkan ketika
pemotongan berorientasi terbalik.
hasil transportasi kutub dalam mode sel-sel, daripada melalui simplas
tersebut. Artinya, auksin keluar sel melalui membran plasma, berdifusi
melintasi lamella tengah majemuk, dan memasuki sel bawah melalui
membran plasma. Hilangnya auksin dari sel disebut penghabisan auksin; masuknya
auksin ke dalam sel disebut serapan auksin atau
arus. Proses keseluruhan membutuhkan energi metabolik, yang dibuktikan
dengan sensitivitas transportasi kutub ke O 2 kekurangan dan inhibitor
metabolik.
Kecepatan transportasi auksin kutub adalah 5 sampai 20 cm h -1 -
lebih cepat dari laju difusi (lihat Web Topik 3.2 ), tapi lebih lambat dari
tingkat translokasi floem (lihat Bab 10). transportasi kutub juga spesifik
untuk auksin aktif, baik alam dan sintetis. Baik analog auksin tidak aktif atau
metabolit auksin diangkut polarly, menunjukkan bahwa transportasi kutub
melibatkan operator protein spesifik pada membran plasma yang dapat
mengenali hormon dan analog aktif.
Situs utama transportasi auksin kutub basipetal di batang dan daun merupakan
jaringan parenkim pembuluh darah. Koleoptil muncul untuk menjadi pengecualian
dalam transportasi kutub basipetal

GAMBAR 19,12 Akar tumbuh dari ujung basal ini bagian boo bam-, bahkan
ketika mereka terbalik. Akar terbentuk pada akhir basal karena transportasi
auksin kutub dalam menembak independen gravitasi. (Foto © MB Wilkins.)
terjadi terutama pada jaringan nonvascular. Acropetal transportasi kutub di
root secara khusus terkait dengan parenkim xilem dari prasasti (Palme dan
Gälweiler 1999). Namun, seperti yang akan kita lihat nanti dalam bab ini,
sebagian besar auksin yang mencapai ujung akar translokasi melalui floem.
Sejumlah kecil transportasi auksin basipetal dari ujung akar juga telah
ditunjukkan. Dalam akar jagung, misalnya, radiolabeled IAAapplied ke
ujung akar diangkut basipetally sekitar 2 sampai 8 mm (Young dan Evans
1996). transportasi auksin basipetal di akar terjadi pada epidermis dan korteks
jaringan, dan seperti yang akan kita lihat, memainkan peran sentral dalam
gravitropisme.
Sebuah Model kemiosmotik Telah Usulan untuk Jelaskan
Transportasi Polar
Penemuan mekanisme kemiosmotik transportasi zat terlarut pada akhir
tahun 1960 (lihat Bab 6) menyebabkan penerapan model ini untuk
transportasi auksin kutub. Menurut sekarang berlaku umum Model
kemiosmotik untuk transportasi auksin kutub, serapan auksin didorong
oleh gaya proton motif ( Δ E + Δ pH) melintasi membran plasma, sementara
penghabisan auksin didorong oleh potensi membran, Δ E.
(Proton kekuatan motif dijelaskan secara lebih rinci dalam Web Topik 6.3 dan
Bab 7.)
Auksin: The Hormon Pertumbuhan 433
Fitur Acrucial dari model transportasi kutub adalah bahwa operator
penghabisan auksin dilokalisasi di ujung basal sel melakukan (Gambar
19.13). Bukti untuk setiap langkah dalam model ini dianggap secara
terpisah dalam diskusi yang berikut.
masuknya auksin. Langkah pertama dalam transportasi kutub adalah auksin
masuknya. Menurut model, auksin dapat memasuki sel tanaman dari segala arah oleh
salah satu dari dua mekanisme:
1. difusi pasif dari terprotonasi (IAAH) bentuk di seluruh lapisan
ganda fosfolipid
2. transpor aktif sekunder dari dipisahkan (IAA yang -)
bentuk melalui 2H + -IAA - symporter Jalur ganda penyerapan auksin
muncul karena permeabilitas pasif membran untuk auksin sangat
bergantung pada pH apoplastic.
Bentuk terurai asam indole-3-asetat, di mana kelompok karboksil
terprotonasi, adalah lipofilik dan mudah berdifusi melintasi membran lipid
bilayer. Sebaliknya, bentuk dipisahkan dari auksin yang bermuatan negatif
dan karena itu tidak menyeberangi membran tanpa bantuan. Karena
membran plasma H + -ATPase biasanya mempertahankan solusi dinding
sel pada sekitar pH 5, sekitar setengah dari auksin yang (pK a = 4.75) di
apoplast akan dalam bentuk terurai dan akan berdifusi pasif melintasi
membran plasma menuruni gradien konsentrasi. dukungan eksperimental
untuk pH-tergantung, serapan auksin pasif pertama kali diberikan oleh
demonstrasi yang IAAuptake oleh sel tanaman meningkat sebagai pH
ekstraseluler diturunkan dari netral ke nilai lebih asam.
Acarrier-dimediasi, mekanisme penyerapan aktif sekunder terbukti
saturable dan spesifik untuk auksin aktif (Lomax 1986). Dalam percobaan
di mana Δ pH dan Δ E
nilai-nilai vesikel membran terisolasi dari zucchini ( Cucurbita pepo) hipokotil
dimanipulasi artifisial, penyerapan auksin radiolabeled terbukti dirangsang
dengan adanya gradien pH, seperti dalam penyerapan pasif, tetapi juga
ketika dalam vesikel itu bermuatan negatif relatif terhadap luar.
Ini dan percobaan lainnya menyarankan bahwa + -IAA H - symporter
cotransports dua proton bersama dengan anion auksin. Ini transpor aktif
sekunder auksin memungkinkan untuk akumulasi auksin lebih besar dari
difusi sederhana tidak karena didorong melintasi membran oleh kekuatan
motif proton.
Apermease-jenis auksin serapan carrier, AUX1, terkait dengan operator
asam amino bakteri, telah diidentifikasi di Arabidopsis akar (Bennett et al.
1996). Akar aux1
mutan yang agravitropic, menunjukkan bahwa auksin masuknya adalah
faktor pembatas untuk gravitropisme di akar. Seperti yang diperkirakan oleh
model kemiosmotik, AUX1 tampaknya merata di sekitar sel-sel dalam jalur
transportasi kutub (Marchant et al. 1999). Jadi secara umum, polaritas
transportasi auksin diatur oleh langkah penghabisan bukan langkah
masuknya.
434 Bab 19

IAA -
Membran 1. IAA memasuki sel baik secara pasif
plasma dalam bentuk terurai (IAAH) atau
dengan cotransport aktif sekunder
H+ dalam bentuk anionik (IAA -).
H+
IAA -
Puncak IAAH

2H +
Dinding sel
IAAH
pH 5 sitosol
ATP ATP
2. dinding sel dipertahankan pada pH
asam oleh aktivitas membran plasma H H+ IAA - H+
3. Dalam sitosol, yang memiliki pH
+ - ATPase. netral, bentuk anionik (IAA -) mendominasi.
+ -cotransport ATP
pH 7
H+

vakuola
ATP

H+

IAA - 4. anion keluar sel melalui operator

penghabisan auksin anion yang
terkonsentrasi di ujung basal setiap sel
dalam jalur memanjang.
Basis permease H IAA -

H+
IAAH GAMBAR 19.13 Model kemiosmotik untuk transportasi auksin
kutub. Ditampilkan di sini adalah satu sel di kolom sel
auksin-mengangkut. (Dari Jacobs dan Gilbert 1983.)
ATP

penghabisan auksin. Setelah IAAenters sitosol,

yang memiliki pH sekitar 7,2, hampir semua itu akan
terpisah bentuk anionik. Karena membran kurang
permeabel untuk IAA - daripada IAAH, IAA - akan
cenderung menumpuk di sitosol. Namun, banyak dari (SEBUAH) (B)
auksin yang memasuki sel lolos melalui auksin anion
penghabisan pembawa.

Menurut model kemiosmotik, transportasi IAA - keluar

dari sel didorong oleh potensi membran negatif di
dalam.
Seperti disebutkan sebelumnya, fitur utama dari
model kemiosmotik untuk transportasi kutub adalah
bahwa IAA - penghabisan berlangsung secara istimewa
pada akhir basal setiap sel. Pengulangan serapan auksin
pada akhir apikal sel dan pelepasan preferensial dari
dasar setiap sel di jalur menimbulkan total efek
transportasi kutub. Sebuah keluarga yang diduga
pembawa penghabisan auksin dikenal sebagai

protein PIN ( dinamai perbungaan pin berbentuk

dibentuk oleh pin1 mutan Arabidopsis; Gambar 19.14A) GAMBAR 19,14 Itu pin1 mutan

dilokalisasi tepat sebagai model akan Arabidopsis ( A) dan lokalisasi protein PIN1
pada ujung basal sel ducting con- oleh
memprediksi-yang, di ujung basal sel melakukan (lihat
immunofluorescence mikroskop (B). (Courtesy
Gambar 19.14B). of L. Gälweiler dan K. Palme.)
 Auksin: The Hormon Pertumbuhan 435

LUAR CELL nomenon dengan memasukkan NPA atau TIBA menjadi baik donor atau blok
penerima dalam percobaan transportasi auksin. Kedua senyawa menghambat
auksin penghabisan ke blok penerima, tetapi mereka tidak mempengaruhi

X Plasma penyerapan auksin dari blok donor.

Beberapa Atis, seperti TIBA, yang memiliki aktivitas auksin lemah dan
saya II AKU AKUIV V
AKU VI VII VIII XI membran
diangkut polarly, dapat menghambat transportasi kutub sebagian oleh
bersaing dengan auksin untuk situs yang mengikat operator penghabisan.
Lainnya, seperti NPA, tidak diangkut polarly dan diyakini mengganggu
transportasi auksin dengan mengikat protein yang terkait dalam kompleks
COOH dengan pembawa penghabisan. protein NPA mengikat seperti juga
ditemukan di ujung basal sel melakukan, konsisten dengan lokalisasi
sitoplasma NH 2
protein PIN (Jacobs dan Gilbert 1983).

GAMBAR 19,15 Topologi dari protein PIN1 dengan sepuluh segmen

transmembran dan loop hidrofilik besar di tengah. (Setelah Palme dan
Gälweiler 1999.)
protein PIN harus 10 sampai 12 transmembran daerah karakteristik dari
superfamili utama transporter bakteri dan eukariotik, yang meliputi protein
resistensi obat dan pengangkut gula (Gambar 19,15). Meskipun kesamaan
topologi untuk transporter lain, studi terbaru menunjukkan bahwa PIN mungkin
memerlukan protein lain untuk kegiatan, dan dapat menjadi bagian dari
kompleks protein yang lebih besar.
Inhibitor Auksin Transportasi Blok Auksin penghabisan
Beberapa senyawa telah disintesis yang dapat bertindak sebagai
inhibitor transportasi auksin (Atis), termasuk NPA (1- N-
Asam naphthylphthalamic) dan TIBA (asam 2,3,5-Triiodobenzoic) (Gambar
19.16). Inhibitor ini memblokir transportasi polar dengan mencegah auksin
penghabisan. Kita bisa menunjukkan ini Phe-
Baru-baru kelas lain dari Atis telah diidentifikasi yang menghambat
pembawa AUX1 serapan (Parry et al. 2001). Misalnya, 1-naphthoxyacetic
asam (1-KKP) (lihat Gambar
19,16) blok penyerapan auksin ke dalam sel, dan bila diterapkan
Arabidopsis tanaman itu menyebabkan akar agravitropism mirip dengan yang
dari aux1 mutan. seperti aux1 mutasi, tidak 1NOAnor salah satu penghambat
AUX1-spesifik lainnya memblokir transportasi auksin kutub.
PIN Protein Apakah Cepat bersepeda ke dan dari Plasma
Membran
Lokalisasi basal dari operator penghabisan auksin melibatkan ditargetkan
sekresi vesikel ke ujung basal sel melakukan. Baru-baru ini telah
menunjukkan bahwa protein PIN, meskipun stabil, tidak tetap pada
membran plasma secara permanen, tetapi dengan cepat bersepeda ke
sebuah ruang endosom tak dikenal melalui vesikel endocytotic, dan
kemudian didaur ulang kembali ke membran plasma (Geldner et al. 2001).

Alami inhibitor transportasi

inhibitor transportasi auksin tidak ditemukan pada tanaman auksin

OH

HAI OH HO HAI
OH

NH

OH
HAI
O
HO saya II
(flavonol)
NPA (1-N-naphthylphthalamic asam) TIBA (asam 2,3,5-Triiodobenzoic)

OH
OH
O-CH 2 -COOH OH O

OO
HO
1-NOA (1-naphthoxyacetic asam) Genistein Quercetin

GAMBAR 19,16 Struktur inhibitor transportasi auksin.

436 Bab 19
(SEBUAH) (B)
(D) (E)
Sebelum pengobatan, protein PIN1 terlokalisir di ujung basal (atas) dari
sel-sel akar kortikal parenkim (Gambar
19.17A). pengobatan Arabidopsis bibit dengan brefeldin A (BFA), yang
menyebabkan Golgi vesikel dan kompartemen endosomal lainnya untuk
agregat di dekat inti, menyebabkan PIN menumpuk di ini kompartemen
intraseluler yang abnormal (lihat Gambar 19.17B). Ketika BFA dicuci
dengan penyangga, lokalisasi normal pada membran plasma di dasar sel
dipulihkan (lihat Gambar 19.17C). Tapi ketika Cytochalasin D, penghambat
polimerisasi aktin, termasuk dalam solusi washout penyangga,
relocalization normal PIN ke membran plasma dicegah (lihat Gambar
19.17D). Hasil ini menunjukkan bahwa PIN cepat bersepeda antara
membran plasma di dasar sel dan kompartemen endosomal tak dikenal
oleh mekanisme aktin-dependent.
Meskipun mereka mengikat target yang berbeda, baik TIBAand NPA
mengganggu lalu lintas vesikel ke dan dari membran plasma. Cara terbaik
untuk menunjukkan fenomena ini adalah untuk menyertakan TIBA dalam
larutan washout setelah pengobatan BFA. Dengan kondisi tersebut,
TIBAprevents yang relocalization normal PIN pada membran plasma
mengikuti pengobatan washout (lihat Gambar 19.17E) (Geldner et al. 2001).
(C)
GAMBAR 19,17 inhibitor transportasi auksin
memblokir sekresi pembawa auksin penghabisan
PIN1 ke membran plasma. (A) Control,
menunjukkan lokalisasi asimetris PIN1. (B)
Setelah pengobatan dengan brefeldin A (BFA).
(C) Setelah tambahan dua jam washout dari BFA.
(D) Setelah washout BFA dengan Cytochalasin
D. (E) Setelah BFAwashout dengan auksin
transportasi inhibitor TIBA. (Foto milik Klaus
Palme 1999.)
Efek dari TIBAand NPAon bersepeda tidak spesifik untuk protein PIN,
dan telah diusulkan bahwa ATIS dapat benar-benar mewakili inhibitor umum
bersepeda membran (Geldner et al. 2001). Di sisi lain, tidak TIBAnor NPA
saja menyebabkan delokalisasi PIN, meskipun mereka memblokir auksin
penghabisan. Oleh karena itu, TIBAand NPAmust juga dapat langsung
menghambat aktivitas transportasi kompleks PIN pada plasma
membran-dengan mengikat baik untuk PIN (sebagai TIBA tidak) atau untuk
satu atau lebih protein regulator (sebagai NPAdoes).
Sebuah model sederhana dari efek TIBA dan NPA bersepeda PIN dan auksin
penghabisan ditunjukkan pada Gambar 19.18. Sebuah model yang lebih lengkap
yang menggabungkan banyak temuan baru-baru ini disajikan dalam Web Essay
19.2 .
Flavonoid Sajikan sebagai endogen Atis
Ada bukti bahwa flavonoid (lihat Bab
13) dapat berfungsi regulator sebagai endogen transportasi auksin kutub.
Memang, senyawa alami flavonoid aglycone (flavonoid tanpa gula
terlampir) mampu bersaing dengan NPA untuk situs yang mengikat
membran (Jacobs dan Rubery 1988) dan biasanya terlokalisasi pada
membran plasma di ujung basal sel mana
 Auksin: The Hormon Pertumbuhan 437

GAMBAR 19,18 Aktin tergantung PIN bersepeda antara membran plasma dan Membran
sebuah ruang endosom. inhibitor transportasi auksin TIBA dan NPA kedua plasma
mengganggu calization relo- protein PIN1 ke membran plasma basal setelah
BFAwashout (lihat Gambar 19.17). Hal ini menunjukkan bahwa kedua
inhibitor transportasi auksin mengganggu PIN1 bersepeda.

COMPARTMENT
pembawa penghabisan terkonsentrasi (rekan et al. 2001). Selain itu, studi PIN PIN
endosomal
terbaru menunjukkan bahwa sel-sel dari flavonoid-kekurangan Arabidopsis mutan
bersepeda
kurang mampu mengakumulasi auksin dari sel-sel tipe liar, dan bibit mutan
Actin- tergantung
yang kekurangan flavonoid telah mengubah profil distribusi auksin (Murphy et
al 1999;. Brown et al, 2001.).

Banyak flavonoid yang menggantikan NPA dari situs yang mengikat

Gelembung Gelembung
membran juga inhibitor protein kinase dan fosfatase protein (Bernasconi
1996). Sebuah Arabidopsis mutan yang ditunjuk rcn1 (r Oots c url di N PA 1) diidentifikasi
PIN PIN
atas dasar sensitivitas ditingkatkan untuk NPA. Itu
TIBA,
NPA
RCN1 gen terkait erat dengan subunit regulasi protein fosfatase 2A,
fosfatase serin / treonin (Garbers et al. 1996).

protein fosfatase diketahui memainkan peran penting dalam regulasi PIN PIN

enzim, ekspresi gen, dan transduksi sinyal dengan menghapus gugus

fosfat peraturan dari protein (lihat Bab 14 pada situs web). Temuan ini aktin microfilament
kompleks PIN
menunjukkan bahwa jalur transduksi sinyal yang melibatkan protein kinase
dan fosfatase protein mungkin terlibat dalam signaling antara protein
NPA-mengikat dan pembawa auksin penghabisan.

Transfer terjadi terutama di jaringan belum matang dari apeks pucuk.

Auksin Apakah Juga Diangkut Nonpolarly di Floem
Sebagian besar IAA yang disintesis di daun dewasa tampaknya diangkut ke
seluruh tanaman nonpolarly melalui floem. Auksin, bersama dengan
komponen lain dari floem getah, dapat berpindah dari daun ini atas atau
bawah tanaman pada kecepatan jauh lebih tinggi daripada transportasi
kutub (lihat Bab 10). translokasi auksin di floem sebagian besar pasif, tidak
memerlukan energi secara langsung.
Meskipun pentingnya keseluruhan jalur floem versus sistem
transportasi kutub untuk gerakan jarak jauh dari IAA pada tanaman masih
belum terselesaikan, bukti menunjukkan bahwa jarak jauh transportasi
auksin di floem adalah penting untuk mengendalikan proses seperti
pembelahan sel cambial, akumulasi callose atau penghapusan dari
unsur-unsur tabung saringan, dan pembentukan akar cabang. Memang,
floem muncul untuk mewakili jalur utama untuk jarak jauh auksin translokasi
ke akar (Aloni 1995; Swarup et al, 2001.).
transportasi kutub dan transportasi floem tidak independen satu sama
lain. Studi terbaru dengan radiolabeled IAA menunjukkan bahwa pada
kacang, auksin dapat ditransfer dari jalur floem nonpolar untuk jalur
transportasi kutub. Ini
Contoh kedua transfer auksin dari jalur floem nonpolar untuk sistem
transportasi kutub baru-baru ini telah didokumentasikan di Arabidopsis. Hal
ini menunjukkan bahwa AUX1 permease yang asimetris terlokalisasi pada
membran plasma di ujung atas sel protophloem root (yaitu, akhir distal dari
ujung) (Gambar 19.19).
Telah diusulkan bahwa AUX1 permease berorientasi asimetris
mempromosikan gerakan acropetal auksin dari floem ke apeks akar
(Swarup et al.
2001). Jenis transportasi auksin kutub berdasarkan lokalisasi asimetris
AUX1 berbeda dari transportasi kutub yang terjadi di shoot dan daerah
basal dari akar, yang didasarkan pada distribusi asimetris kompleks PIN.
Catatan pada Gambar 19.19B yang AUX1 juga sangat dinyatakan
dalam cluster sel dalam kolumela tutup akar, serta dalam sel akar topi
lateral yang yang overlay sel-sel zona pemanjangan distal dari akar. Sel-sel
ini membentuk kecil, tapi secara fisiologis penting, jalur basipetal dimana
auksin mencapai kolumela yang diarahkan ke belakang ke arah jaringan
terluar zona pemanjangan. Pentingnya jalur ini akan menjadi jelas ketika
kita meneliti mekanisme akar gravitropisme.
438 Bab 19

(SEBUAH) (B) (C)

Kulit ari

lapisan luar

endodermis

Pericycle

pembuluh darah

topi akar lateral

pusat diam dan sel-sel 20 m m

induk

Kolumela topi
akar GAMBAR 19.19 Auksin permease AUX1 secara khusus dinyatakan dalam
subset dari columella, topi akar lateral, dan jaringan bintang. (A) Diagram
jaringan di Arabidopsis ujung akar. (B) Immunolocalization dari AUX1 dalam
sel protophloem dari prasasti, sebuah cluster pusat sel di kolumela, dan
sel-sel akar topi lateral. (C) lokalisasi asimetris dari AUX1 dalam file sel
protophloem. Skala bar 2 μ m di C. (Dari Swarup et al. 2001)

sel-sel ini. Karena tingkat auksin endogen di wilayah pemanjangan tanaman

EFEK FISIOLOGIS auksin: CELL Pemanjangan
Auksin ditemukan sebagai hormon yang terlibat dalam pembengkokan
koleoptil ke arah cahaya. Tikungan koleoptil karena harga yang tidak sama
dari pemanjangan sel pada perusahaan berbayang dibandingkan sisi
diterangi nya (lihat Gambar 19.1). Kemampuan auksin untuk mengatur laju
pemanjangan sel memiliki ilmuwan tanaman lama terpesona. Pada bagian
ini kita akan meninjau fisiologi pemanjangan sel auksin-diinduksi, beberapa
aspek yang dibahas dalam Bab 15.
Auxins Promosikan Pertumbuhan Batang dan koleoptil, Sementara
Menghambat Pertumbuhan Akar
Sebagaimana telah kita lihat, auksin disintesis di daerah apeks pucuk dan
diangkut basipetally ke jaringan di bawah ini. The pasokan auksin tiba di
wilayah subapical dari batang atau koleoptil diperlukan untuk pemanjangan
terus
yang sehat normal adalah hampir optimal untuk pertumbuhan, penyemprotan
tanaman dengan auksin eksogen hanya menyebabkan stimulasi sederhana dan
singkat dalam pertumbuhan, dan bahkan mungkin penghambatan dalam kasus
bibit darkgrown , yang lebih sensitif terhadap supraoptimal konsentrasi auksin
dibandingkan tanaman cahaya ditanam adalah.
Namun, ketika sumber endogen auksin dihilangkan dengan eksisi bagian
yang mengandung zona pemanjangan, laju pertumbuhan cepat menurun ke
tingkat basal yang rendah. bagian dipotong tersebut akan sering merespon
secara dramatis untuk auksin eksogen oleh cepat meningkatkan tingkat
pertumbuhan mereka kembali ke tingkat di pabrik utuh.
Dalam percobaan jangka panjang, pengobatan bagian yang dieksisi dari
koleoptil (lihat Gambar 19.2) atau dikotil batang dengan auksin merangsang
laju pemanjangan bagian hingga 20 jam (Gambar 19.20). Konsentrasi auksin
yang optimal untuk pertumbuhan elongasi biasanya 10 -6 10 -5 M ( Gambar
19.21).

Waktu (min)
0 10 20 30
2 IAA
Growth (mm)
IAA + Suc
1 fase lag
0
90
Elongation (% increase in length)
60
30
0 5 10 15
Waktu (jam)
GAMBAR 19.20 Tentu saja waktu untuk pertumbuhan auksin diinduksi
Avena ( bagian oat) koleoptil. Pertumbuhan diplot sebagai peningkatan persen
per- panjang. Auksin ditambahkan pada waktu nol. Ketika sukrosa (Suc) termasuk
dalam medium, respon dapat terus selama 20 jam. Sukrosa memperpanjang
respon pertumbuhan auksin terutama dengan menyediakan zat terlarut osmotik
aktif yang dapat diambil untuk pemeliharaan tekanan turgor selama pemanjangan
sel. KCl dapat menggantikan sukrosa. inset menunjukkan kursus waktu jangka
pendek plot- ted dengan posisi-sensing transduser elektronik. Dalam grafik ini,
pertumbuhan diplot sebagai panjang mutlak dalam ters millime- terhadap waktu.
Kurva menunjukkan jeda waktu sekitar 15 menit untuk pertumbuhan
auksin-dirangsang untuk mulai. (Dari Cleland 1995.)
Penghambatan luar konsentrasi optimal umumnya dikaitkan dengan
auksin-diinduksi biosintesis etilen. Seperti yang akan kita lihat dalam Bab
22, hormon etilen gas menghambat membendung elongasi di banyak
spesies.
control auksin pertumbuhan pemanjangan akar telah lebih sulit untuk
menunjukkan, mungkin karena auksin menginduksi produksi etilen, inhibitor
pertumbuhan akar. Namun, bahkan jika biosintesis etilen khusus diblokir,
konsentrasi rendah (10 -10 10 -9 M) auksin mempromosikan pertumbuhan
akar utuh, sedangkan konsentrasi yang lebih tinggi (10 -6
M) menghambat pertumbuhan. Dengan demikian, akar mungkin memerlukan konsentrasi
minimum auksin untuk tumbuh, namun pertumbuhan akar sangat dihambat oleh
konsentrasi auksin yang mempromosikan pemanjangan di batang dan koleoptil.
GAMBAR 19.21 kurva dosis-respons khas untuk pertumbuhan IAA-diinduksi dalam kacang batang atau oat
koleoptil bagian. pertumbuhan pemanjangan bagian yang dieksisi dari koleoptil atau muda batang diplot
terhadap meningkatnya konsentrasi eksogen IAA. Pada konsentrasi yang lebih tinggi (di atas 10 -5 M), IAA
menjadi kurang dan kurang efektif; atas sekitar 10 -4 M menjadi penghambatan, seperti yang ditunjukkan oleh
fakta bahwa kurva turun di bawah garis putus-putus, yang mewakili pertumbuhan dalam ketiadaan
menambahkan IAA.
Auksin: The Hormon Pertumbuhan 439
Outer Jaringan dari dikotil Batang Are Sasaran dari Auksin
Aksi
Dikotil batang terdiri dari berbagai jenis jaringan dan sel, hanya beberapa
yang dapat membatasi laju pertumbuhan. Hal ini diilustrasikan oleh
eksperimen sederhana. Ketika bagian batang dari tumbuh daerah dari
batang dikotil etiolated, seperti kacang, dibagi memanjang dan diinkubasi
dalam buffer, kedua bagian tikungan luar.
Hasil ini menunjukkan bahwa, dengan tidak adanya auxin jaringan
pusat, termasuk empulur, jaringan pembuluh darah, dan korteks dalam,
memanjang pada tingkat lebih cepat dari jaringan luar, yang terdiri dari
IAA
korteks luar dan epidermis. Dengan demikian jaringan luar harus
membatasi tingkat perpanjangan batang tanpa adanya auksin. Namun,
ketika bagian split diinkubasi dalam buffer ditambah auksin, kedua bagian
Suc
sekarang kurva batin, menunjukkan bahwa jaringan luar dikotil batang
adalah target utama aksi auksin selama pemanjangan sel.
20 25
Pengamatan bahwa lapisan luar sel adalah target auksin tampaknya
bertentangan dengan lokalisasi transportasi kutub dalam sel-sel parenkim
dari ikatan pembuluh. Namun, auksin dapat bergerak lateral dari jaringan
pembuluh darah dari dikotil batang ke jaringan luar zona pemanjangan.
Dalam koleoptil, di sisi lain, semua jaringan nonvascular (epidermis
ditambah mesofil) mampu mengangkut auksin, serta menanggapi itu.
Waktu Lag Minimum untuk Pertumbuhan Auksin-Induced Apakah Sepuluh
Menit
Ketika bagian batang atau koleoptil dipotong dan dimasukkan ke dalam
perangkat pertumbuhan mengukur sensitif, respon pertumbuhan auksin dapat
dipantau pada resolusi yang sangat tinggi. Tanpa auksin dalam medium, tingkat
pertumbuhan menurun dengan cepat. Penambahan auksin nyata merangsang
pertumbuhan setelah periode lag hanya 10 sampai 12 menit (lihat inset pada
Gambar 19.20).
Kedua Avena ( oat) koleoptil dan Glycine max ( kedelai) hipokotil (dikotil stem)
mencapai tingkat pertumbuhan maksimum setelah
+ IAA
+
Relative segment elongation growth
Pertumbuhan kontrol
(tanpa menambahkan IAA)
-
10 -8 10 -7 10 -6 10 -5 10 -4 10 -3 10 -2
Konsentrasi IAA ( M)
440 Bab 19
Kedelai
Elongation rate (% h –1)
5
Haver
0 1 2 3
waktu inkubasi di 10 μ M IAA (jam) IAA
GAMBAR 19.22 Perbandingan kinetika pertumbuhan oat koleoptil dan
hipokotil kedelai bagian, diinkubasi dengan 10 μ M IAA dan 2% sukrosa.
Pertumbuhan diplot sebagai tingkat di setiap titik waktu, bukan tingkat
panjang mutlak. Tingkat pertumbuhan hipokotil kedelai berosilasi setelah 1
jam, sedangkan dari koleoptil oat adalah konstan. (Setelah Cleland 1995.)
30 sampai 60 menit dari pengobatan auksin (Gambar 19.22). maksimum ini
merupakan lima sampai sepuluh kali lipat meningkat selama tingkat basal.
bagian Oat koleoptil dapat mempertahankan tingkat maksimum ini hingga 18
jam di hadapan zat terlarut osmotik aktif seperti sukrosa atau KCl.
Seperti bisa diduga, stimulasi pertumbuhan dengan auksin membutuhkan
energi, dan inhibitor metabolik menghambat respon dalam beberapa menit.
pertumbuhan auksin-diinduksi juga sensitif terhadap inhibitor sintesis protein
seperti cycloheximide, menunjukkan bahwa protein dengan tingkat turnover
tinggi yang terlibat. Inhibitor sintesis RNA juga menghambat pertumbuhan
auxininduced, setelah penundaan sedikit lebih panjang (Cleland 1995).
Meskipun panjang jeda waktu untuk pertumbuhan auksin-dirangsang dapat
ditingkatkan dengan menurunkan suhu atau dengan menggunakan konsentrasi
auksin suboptimal, jeda waktu tidak dapat dipersingkat dengan menaikkan suhu,
dengan menggunakan konsentrasi auksin supraoptimal, atau oleh abrasi dari
kutikula lilin untuk memungkinkan auksin untuk menembus jaringan yang lebih
cepat. Sehingga jeda waktu minimal 10 menit tidak ditentukan oleh waktu yang
dibutuhkan untuk auksin untuk mencapai lokasi kerjanya. Sebaliknya, jeda waktu
mencerminkan waktu yang dibutuhkan untuk mesin biokimia sel untuk membawa
tentang peningkatan laju pertumbuhan.
Auksin Cepat Meningkatkan Perluasan dari Cell Dinding
Bagaimana auksin menyebabkan lima sampai sepuluh kali lipat peningkatan dalam tingkat
pertumbuhan hanya dalam 10 menit? Untuk memahami mekanisme, pertama kita harus
meninjau proses pembesaran sel pada tanaman (lihat Bab 15). sel tanaman memperluas
dalam tiga langkah:
1. serapan osmotik air melintasi membran plasma didorong oleh gradien
potensial air ( Δ Y w).
2. Tekanan Turgor membangun karena kekakuan dari dinding sel.
3. Biokimia dinding melonggarkan terjadi, yang memungkinkan sel untuk memperluas
dalam menanggapi tekanan turgor.
Efek dari parameter ini pada tingkat pertumbuhan yang dirumuskan dalam
persamaan laju pertumbuhan:
GR = m ( Y p - Y)
dimana GR adalah tingkat pertumbuhan, Y p adalah tekanan turgor, Y adalah ambang
hasil, dan m adalah koefisien ( dinding diperpanjang) yang berhubungan tingkat
pertumbuhan untuk perbedaan antara
Y p dan Y.
Pada prinsipnya, auksin dapat meningkatkan laju pertumbuhan dengan
meningkatkan m, meningkat Y p, atau menurun Y. Meskipun percobaan
ekstensif telah menunjukkan bahwa auksin tidak meningkatkan tekanan
turgor ketika merangsang pertumbuhan, hasil bertentangan telah diperoleh
mengenai auxininduced penurunan Y. Namun, ada kesepakatan umum
bahwa auksin menyebabkan peningkatan parameter dinding diperpanjang, m.
Auksin-Induced Proton Ekstrusi acidifies Sel Dinding dan
Meningkatkan Sel Ekstensi
Menurut diterima secara luas hipotesis pertumbuhan asam,
ion hidrogen bertindak sebagai penengah antara auksin dan dinding sel
melonggarkan. Sumber ion hidrogen adalah membran plasma H + -ATPase,
yang kegiatannya dianggap meningkatkan respon terhadap auksin. Hipotesis
pertumbuhan asam memungkinkan lima prediksi utama:
1. Asam buffer saja harus mendorong pertumbuhan jangka pendek, yang
disediakan kutikula telah terkelupas untuk memungkinkan akses proton
pada dinding sel.
2. Auksin harus meningkatkan tingkat proton ekstrusi (dinding
pengasaman), dan kinetika proton ekstrusi harus erat cocok dengan
pertumbuhan auksin-diinduksi.
3. buffer Netral harus menghambat pertumbuhan auksin-diinduksi.
4. Senyawa (selain auksin) yang mempromosikan proton ekstrusi harus
merangsang pertumbuhan.
5. Dinding sel harus berisi “dinding melonggarkan faktor” dengan
optimal pH asam.
Semua lima prediksi ini telah dikonfirmasi. buffer asam menyebabkan
peningkatan yang cepat dan segera dalam tingkat pertumbuhan, asalkan
kutikula telah terabrasi. Auksin merangsang proton ekstrusi ke dalam dinding
sel setelah 10 sampai 15 menit waktu lag, konsisten dengan kinetika
pertumbuhan (Gambar 19.23).
pertumbuhan auksin-induced juga telah terbukti dihambat oleh buffer
netral, selama kutikula telah abraided. Fusicoccin, sebuah phytotoxin
jamur, menstimulasi kedua ekstrusi proton yang cepat dan pertumbuhan
sementara di batang dan koleoptil bagian (lihat Web Topik 19,6 ). Dan
akhirnya, wallloosening protein yang disebut expansins telah diidentifikasi
dalam dinding sel berbagai spesies tanaman (lihat Bab 15). Pada pH asam,
expansins melonggarkan dinding sel oleh melemahnya ikatan hidrogen
antara komponen polisakarida dinding.
 Auksin: The Hormon Pertumbuhan 441

diisolasi dan muncul untuk dapat mengaktifkan membran plasma H +

-ATPase di hadapan auksin (Steffens et al. 2001).
6.0

240 Baru-baru ini ABP dari beras, ABP 57, ditunjukkan untuk mengikat
langsung ke membran plasma H + -ATPases dan merangsang proton
5.5 200 ekstrusi-tetapi hanya di hadapan IAA (Kim et al. 2001). Ketika IAA tidak
pH

Elongation (microns)
Panjangnya
ada, aktivitas H + ATPase ditekan oleh domain C-terminal enzim, yang
pH

160 dapat memblokir situs katalitik. ABP 57 ( dengan IAA terikat) berinteraksi
5.0 dengan H + -ATPase, mengaktifkan enzim. Sebuah situs auksin mengikat
120 kedua mengganggu aksi pertama, mungkin menjelaskan kurva berbentuk
lonceng tindakan auksin. Model ini hipotetis untuk aksi ABP 57 ditunjukkan
4,5 40 80 pada Gambar 19,24.

- 10 0 10 20 30 40 50 60
Waktu (menit) IAA
H + -ATPase sintesis. Kemampuan inhibitor sintesis protein, seperti
GAMBAR 19.23 Kinetika auksin-diinduksi elongasi dan dinding sel cycloheximide, untuk secara cepat menghambat auxininduced ekstrusi
pengasaman di koleoptil jagung. PH dinding sel diukur dengan proton dan pertumbuhan menunjukkan bahwa auksin mungkin juga
microelectrode pH. Perhatikan kali lag sama (10 sampai 15 menit) untuk merangsang proton memompa dengan meningkatkan sintesis dari H +
kedua dinding sel acidi- fikasi dan peningkatan laju pemanjangan. (Dari
ATPase. Peningkatan jumlah ATPase membran plasma di koleoptil jagung
Jacobs dan Ray 1976.)
terdeteksi imunologis setelah hanya 5 menit dari pengobatan auksin, dan
dua kali lipat dari H + -ATPase diamati setelah 40 menit pengobatan.
Sebuah stimulasi tiga kali lipat oleh auksin dari mRNA untuk H + -ATPase
ditunjukkan secara khusus dalam jaringan nonvascular dari koleoptil.
Auksin-Induced Proton Ekstrusi Semoga Libatkan Kedua Aktivasi
dan Sintesis
Secara teori, auksin dapat meningkatkan tingkat proton ekstrusi oleh dua Singkatnya, pertanyaan aktivasi terhadap sintesis masih belum
kemungkinan mekanisme: terselesaikan, dan adalah mungkin bahwa auksin merangsang proton
ekstrusi oleh kedua aktivasi dan stimulasi sintesis dari H + ATPase.
1. Aktivasi yang sudah ada sebelumnya plasma membran H + ATPase
Gambar 19.25 merangkum

2. Sintesis baru H + -ATPases pada membran

plasma

aktivasi H + ATPase. Ketika auksin

ditambahkan langsung ke vesikel membran +
PM H + -ATPase
plasma terisolasi dari sel tembakau, stimulasi LUAR

kecil (sekitar 20%) dari aktivitas proton-memompa

ATP-driven diamati, menunjukkan bahwa auksin
Catalytic
langsung mengaktifkan H + ATPase. Sebuah
stimulasi yang lebih besar (sekitar 40%) diamati
jika sel-sel hidup diobati dengan IAA sebelum Hambat situs

membran diisolasi, menunjukkan bahwa faktor H+

ATP
selular juga diperlukan (Peltier dan Rossignol
domain situs ABP 57
1996). docking IAA H

ADP + P saya
DALAM

Meskipun reseptor auksin belum diidentifikasi ABP 57 mengikat PM H + IAA mengikat Pengikatan IAA ke
tegas (seperti yang dibahas kemudian dalam bab -ATPase di situs menyebabkan situs kedua menurun
docking. perubahan konformasi interaksi dengan H +
ini), berbagai protein auksin mengikat (ABPS)
dalam ABP 57. ABP 57 -ATPase domain
memiliki penghambatan;
kemudian berinteraksi enzim terhambat.
dengan domain
penghambatan PM H +
-ATPase mengaktifkan
enzim.
GAMBAR 19,24 Model aktivasi membran plasma (PM) H + -ATPase oleh ABP 57 dan
auksin.
442 Bab 19

Aktivasi hipotesis:
Auksin mengikat protein mengikat
auxin- (ABP1) terletak baik pada IAA H+ H+ H+
+
permukaan sel atau di sitosol.
ABP1-IAA kemudian berinteraksi ABP1
langsung dengan membran plasma
H + -ATPase untuk merangsang H+
1 ATP ATP ATP ATP
proton memompa (langkah 1). IAA
ATP H
utusan kedua, seperti kalsium atau hipotesis
ABP1
pH intraseluler, juga bisa terlibat. aktivasi
IAA ATP

H+
4
Sintesis hipotesis: kedua utusan
Kasar tubuh ER Golgi
IAA-induced second messenger
mengaktifkan ekspresi gen
(langkah
INTI ATP
2) yang menyandikan membran
6
plasma H + -ATPase (langkah 3). H+
2
Protein disintesis di retikulum pengolahan
endoplasma kasar (langkah 4) dan protein
ditargetkan melalui jalur sekretorik
ke membran plasma (langkah 5 Promotor H + -ATPase
dan 6). Peningkatan hasil proton gen ATP
ekstrusi dari peningkatan jumlah
proton pompa pada membran. H+

5
hipotesis mRNA ATP
sintesis 3
H + -ATPase pada membran
vesikel

Membran H+
DINDING SEL Pengaktifan
plasma Expansin

GAMBAR 19,25 Model-model terbaru untuk IAA-diinduksi H + ekstrusi. Dalam banyak tanaman, baik dari mekanisme ini
dapat beroperasi. Terlepas dari bagaimana H + memompa meningkat, asam-diinduksi melonggarkan dinding diduga
dimediasi oleh expansins.

mekanisme yang diusulkan auksin-induced melonggarkan dinding sel melalui Pada bagian ini kita akan memeriksa bukti bahwa membungkuk dalam
proton ekstrusi. menanggapi cahaya atau gravitasi hasil dari redistribusi lateral auksin. Kami juga
akan mempertimbangkan mekanisme seluler yang terlibat dalam menghasilkan
gradien auksin lateral selama membungkuk pertumbuhan. Sedikit yang diketahui
EFEK FISIOLOGIS auksin: fototropisme DAN
tentang mekanisme thigmotropisme, meskipun, juga, mungkin melibatkan
gravitropisme
gradien auksin.
Tiga sistem bimbingan utama mengontrol orientasi pertumbuhan tanaman:

Fototropisme Apakah Dimediasi oleh Redistribusi

1. fototropisme, atau pertumbuhan sehubungan dengan cahaya, adalah
Lateral dari Auksin
dinyatakan dalam semua tunas dan beberapa akar; menjamin bahwa daun akan
menerima sinar matahari yang optimal untuk fotosintesis.
Seperti yang kita lihat sebelumnya, Charles dan Francis Darwin
memberikan petunjuk pertama mengenai mekanisme fototropisme dengan
menunjukkan bahwa situs persepsi dan pertumbuhan diferensial (lentur)
2. gravitropisme, pertumbuhan dalam menanggapi gravitasi, memungkinkan
terpisah: Cahaya dirasakan di ujung, tapi lentur terjadi di bawah ujung. The
akar tumbuh ke bawah ke tanah dan tunas untuk tumbuh ke atas jauh
Darwin mengusulkan bahwa beberapa “pengaruh” yang diangkut dari ujung
dari tanah, yang terutama penting selama tahap awal perkecambahan.
ke wilayah berkembang disebabkan respon pertumbuhan asimetris yang
diamati. Pengaruh ini kemudian terbukti indole-3-asam asetat-auksin.
3. thigmotropisme, atau pertumbuhan dengan hormat untuk menyentuh,

memungkinkan akar untuk tumbuh di sekitar batu dan bertanggung jawab

untuk kemampuan tunas dari tanaman merambat untuk membungkus struktur Ketika menembak tumbuh secara vertikal, auksin diangkut polarly dari
lain untuk dukungan. tumbuh ujung ke zona pemanjangan. Itu
 Auksin: The Hormon Pertumbuhan 443

polaritas transportasi auksin dari ujung ke dasar adalah perkembangan 1.8

ditentukan dan independen dari orientasi terhadap gravitasi. Namun, auksin
juga dapat diangkut lateral, dan pergerakan lateral ini auksin terletak di
sisi teduh
jantung model untuk tropisme awalnya diusulkan secara terpisah oleh ahli 1,5
fisiologi tanaman Rusia, Nicolai Cholodny dan Frits Pergi dari Belanda pada
1920-an.
1.2
Menurut Cholodny-Pergi model fototropisme, ujung koleoptil rumput

Growth in length (mm)

memiliki tiga fungsi khusus:
0,9
Kontrol (tanpa
1. Produksi auksin
cahaya)

2. Persepsi dari stimulus cahaya unilateral

0,6
3. lateral transportasi dari IAA dalam menanggapi stimulus phototropic

0,3 sisi iradiasi

Dengan demikian, dalam menanggapi stimulus cahaya directional, auksin
yang diproduksi di ujung, bukannya diangkut basipetally, diangkut lateral ke
arah sisi teduh.
Situs yang tepat produksi auksin, persepsi cahaya, dan transportasi 0 20 40 60 80 100 120

lateral yang telah sulit untuk menentukan. Dalam koleoptil jagung, auksin Waktu (min)

dihasilkan di atas 1 sampai 2 mm dari ujung. The zona photosensing dan

GAMBAR 19,26 Tentu saja waktu pertumbuhan di sisi diterangi dan
transportasi lateral yang memperpanjang lebih jauh, dalam 5 mm atas berbayang dari koleoptil menanggapi pulsa 30 detik cahaya biru searah.
ujung. Respon ini juga sangat tergantung pada fluence cahaya (lihat Web Kontrol koleoptil tidak diberi perawatan ringan. (Setelah Iino dan Briggs
Topik 19,7 ). 1984.)

Dua flavoproteins, phototropins 1 dan 2, adalah fotoreseptor untuk biru

cahaya signaling jalur (lihat Web Essay 19.3 ) yang menginduksi lentur
phototropic di Arabidopsis hipokotil dan koleoptil oat bawah kedua kondisi
tinggi dan rendah Fluence (Briggs et al. 2001).
Phototropins yang autophosphorylating protein kinase yang
kegiatannya dirangsang oleh cahaya biru. Tindakan spektrum untuk cahaya
biru aktivasi aktivitas kinase sangat cocok dengan spektrum aksi untuk
fototropisme, termasuk beberapa puncak di daerah biru. Phototropin 1
menampilkan gradien lateral dalam fosforilasi selama paparan
rendah-Fluence cahaya biru unilateral.
menyebabkan photodestruction auksin pada sisi diterangi, seperti yang
telah diusulkan oleh beberapa peneliti.
Konsisten dengan baik Cholodny-Pergi hipotesis dan hipotesis
pertumbuhan asam, pH apoplastic di sisi teduh dari phototropically
membungkuk batang atau koleoptil lebih asam daripada sisi yang
menghadap cahaya (Mulkey et al. 1981).
Gravitropisme Juga Melibatkan Redistribusi Lateral dari Auksin

Menurut hipotesis saat ini, gradien di fosforilasi phototropin
menginduksi pergerakan auksin ke sisi teduh koleoptil (lihat Topik web
19,7 ). Setelah auksin mencapai sisi teduh dari ujung, diangkut basipetally
ke zona pemanjangan, di mana merangsang pemanjangan sel. Percepatan
pertumbuhan di sisi teduh dan perlambatan pertumbuhan di sisi diterangi
(pertumbuhan diferensial) menimbulkan kelengkungan ke arah cahaya
(Gambar 19.26).
tes langsung dari Cholodny-Pergi model menggunakan agar-agar blok /
koleoptil kelengkungan bioassay telah mendukung prediksi model yang
auksin dalam tips koleoptil diangkut lateral dalam respon terhadap cahaya
unilateral (Gambar
19,27). Jumlah total auksin menyebar keluar dari ujung (di sini dinyatakan
sebagai sudut kelengkungan) adalah sama di hadapan cahaya unilateral seperti
dalam kegelapan (bandingkan Gambar
19.27A dan B). Hasil ini menunjukkan bahwa cahaya tidak
Ketika gelap-dewasa Avena bibit berorientasi horizontal, koleoptil tikungan
ke atas dalam menanggapi gravitasi. Menurut Cholodny-Pergi Model,
auksin di ujung koleoptil berorientasi horizontal diangkut lateral ke sisi
bawah, menyebabkan sisi bawah koleoptil tumbuh lebih cepat dari sisi atas.
bukti eksperimental awal menunjukkan bahwa ujung koleoptil dapat
merasakan gravitasi dan mendistribusikan auksin ke sisi yang lebih rendah.
Sebagai contoh, jika kiat koleoptil berorientasi horizontal, jumlah yang lebih
besar dari auksin berdifusi dari bagian bawah dari bagian atas setengah
(Gambar 19,28).
Jaringan bawah ujung mampu menanggapi gravitasi juga. Misalnya,
ketika berorientasi vertikal koleoptil jagung yang dipenggal oleh
penghapusan 2 mm atas ujung dan berorientasi horizontal, gravitropic
lentur terjadi pada tingkat yang lambat selama beberapa jam bahkan tanpa
ujung. Penerapan IAA ke permukaan dipotong mengembalikan tingkat
lentur
444 Bab 19

Terbagi blok agar Dibagi blok agar

(Gelap
Jagung koleoptil ujung
dipotong dan ditempatkan Koleoptil ujung-benar dibagi
pada agar Agar sudut blok dengan potongan tipis mika;
tidak ada redistribusi auksin
Lengkung (derajat)
25,8 diamati.
11,5 11,2

(B) cahaya Sepihak

Koleoptil ujung sebagian

(D) (C) dibagi dengan potongan tipis
mika; redistribusi lateral
auksin terjadi.
25,6 Tidak ada perusakan auksin 8.1 15.4

cahaya sepihak tidak menyebabkan Auksin diangkut lateral ke sisi teduh di ujung.
photodestruction auksin pada sisi diterangi.

GAMBAR 19,27 Bukti bahwa redistribusi lateral auksin dirangsang oleh cahaya directional uni- di koleoptil
jagung.

ke tingkat normal. Temuan ini menunjukkan bahwa kedua persepsi stimulus
gravitasi dan redistribusi lateral auksin dapat terjadi pada jaringan di bawah
ujung, meskipun ujung masih diperlukan untuk produksi auksin.
redistribusi lateral auksin di shoot meristem apikal lebih sulit untuk
menunjukkan daripada di koleoptil karena kehadiran daun. Dalam beberapa
tahun terakhir, penanda molekuler telah banyak digunakan sebagai gen
reporter untuk mendeteksi gradien auksin lateral horizontal ditempatkan
batang dan akar.
Dalam hipokotil kedelai, gravitropisme mengarah ke asimetri cepat
dalam akumulasi sekelompok mRNA auksin-dirangsang disebut SAURs ( s mall
Sebuah uxin u p-diatur
R NAs) (McClure dan Guilfoyle 1989). Dalam bibit vertikal, SAUR ekspresi
gen didistribusikan secara simetris. Dalam waktu 20 menit setelah bibit
berorientasi horizontal, SAURs mulai menumpuk di bagian bawah hipokotil
tersebut. Dengan kondisi tersebut, gravitropic lentur pertama menjadi jelas
setelah 45 menit, baik setelah induksi SAURs (lihat Web Topik 19,8 ). Adanya
gradien lateral dalam ekspresi gen SAUR adalah bukti tidak langsung
keberadaan gradien lateral auksin terdeteksi dalam waktu 20 menit dari
stimulus gravitropic.
Seperti yang akan dibahas kemudian dalam bab ini, GH3 keluarga gen juga
up-diatur dalam waktu 5 menit dari auksin memperlakukan

(SEBUAH) (B) setengah lebih rendah Separuh atas

GAMBAR 19,28 Auksin diangkut ke sisi bawah tip oat koleoptil berorientasi horizontal. (A) Auksin dari
bagian atas dan bawah dari ujung horisontal diperbolehkan untuk berdifusi ke dua blok agar. (B) The agar
blok dari bagian bawah (kiri) menginduksi kelengkungan yang lebih besar dalam koleoptil dipenggal
daripada blok agar dari bagian atas (kanan). (Foto © MB Wilkins.)
 Auksin: The Hormon Pertumbuhan 445

GAMBAR 19,29 gradien auksin lateral dibentuk di

Arabidopsis hipokotil selama respon pertumbuhan diferensial terhadap
cahaya (A) dan gravitasi (B). Tanaman diubah dengan DR5 :: GUS gen
reporter. Auksin-tuduhannya mulation pada berbayang (A) atau lebih
rendah (B) sisi hipokotil ditunjukkan oleh pewarnaan biru ditampilkan di
insets. (Foto milik Klaus Palme.)

ment dan telah digunakan sebagai penanda molekuler untuk kehadiran auksin.
Dengan menggabungkan urutan promotor buatan didasarkan pada GH3 promotor ke
GUS gen reporter, adalah mungkin untuk memvisualisasikan gradien lateral dalam
konsentrasi auksin yang terjadi selama kedua foto dan gravitropisme (Gambar
19,29).

Statoliths Sajikan sebagai Gravity Sensor di Tunas dan Akar

Tidak seperti cahaya unilateral, gravitasi tidak membentuk gradien antara

sisi atas dan bawah dari organ. Semua bagian tanaman mengalami stimulus
gravitasi sama. Bagaimana sel tumbuhan mendeteksi gravitasi?
Satu-satunya cara bahwa gravitasi dapat dirasakan adalah melalui gerakan
tubuh jatuh atau sedimenting.
calon yang jelas untuk sensor gravitasi intraseluler pada tanaman
adalah besar, amyloplasts padat yang hadir dalam banyak sel tanaman. Ini
amyloplasts khusus adalah kepadatan cukup tinggi relatif terhadap sitosol
bahwa mereka siap sedimen ke bagian bawah sel (Gambar 19.30).
Amyloplasts yang berfungsi sebagai sensor gravitasi disebut
statoliths, dan khusus sel gravitasi-sensing di mana mereka terjadi disebut statocytes.
Apakah statocyte ini mampu mendeteksi gerakan ke bawah dari statolith
yang saat melewati sitoskeleton atau apakah stimulus yang dirasakan
hanya ketika statolith datang untuk beristirahat di bagian bawah sel belum
terselesaikan.
Tunas dan koleoptil. Dalam tunas dan koleoptil, gravitasi dirasakan
dalam pati selubung, lapisan sel yang mengelilingi jaringan pembuluh
darah tunas. Pati selubung kontinu dengan endodermis akar, tetapi tidak
seperti endodermis mengandung amyloplasts. Arabidopsis
mutan kurang amyloplasts di pati selubung pertumbuhan tunas tampilan
agravitropic tapi normal pertumbuhan gravitropic root (Fujihira et al. 2000).
Seperti tercantum dalam Bab 16, yang orang-orangan sawah (scr) mutan
Arabidopsis hilang kedua endodermis dan selubung pati. Akibatnya, para
hipokotil dan perbungaan dari
scr mutan yang agravitropic, sedangkan akar menunjukkan respon
gravitropic normal. Atas dasar fenotip dua mutan ini, kita dapat
menyimpulkan sebagai berikut:
• Pati selubung diperlukan untuk gravitropisme di tunas.
• Endodermis akar, yang tidak mengandung statoliths, tidak
diperlukan untuk gravitropisme di akar.
Akar. Situs persepsi gravitasi di akar primer adalah topi root. Besar,
amyloplasts graviresponsive terletak di statocytes (lihat Gambar 19.30Aand
B) dalam silinder pusat, atau kolumela, tutup root. Penghapusan tutup akar
dari akar jika tidak utuh menghapuskan akar gravitropisme tanpa
menghambat pertumbuhan.
Tepatnya bagaimana statocytes merasakan statoliths jatuh mereka
masih kurang dipahami. Menurut salah satu hipotesis, kontak atau tekanan
yang dihasilkan dari amiloplas beristirahat di retikulum endoplasma di sisi
bawah sel memicu respons (lihat Gambar 19.30C). Retikulum endoplasma
sel kolumela secara struktural yang unik, terdiri dari 5-7 kasar-ER lembar
melekat pada batang nodal sentral dalam whorl sebuah, seperti kelopak
bunga di bunga. Ini khusus “nodal ER” berbeda dari yang lebih tubular ER
cisternae kortikal dan mungkin terlibat dalam respon gravitasi (Zheng dan
Staehelin 2001).
Itu hipotesis pati-statolith gravitasi persepsi di akar didukung oleh
beberapa bukti. Amyloplasts adalah satu-satunya organel yang secara
konsisten sedimen dalam sel kolumela spesies tanaman yang berbeda, dan
tingkat sedimentasi berkorelasi erat dengan waktu yang dibutuhkan untuk
merasakan stimulus gravitasi. Tanggapan gravitropic mutan
pati-kekurangan umumnya jauh lebih lambat dibandingkan tanaman tipe
liar. Namun demikian, mutan starchless menunjukkan beberapa
gravitropisme, menunjukkan bahwa meskipun pati diperlukan untuk respon
gravitropic normal, mekanisme persepsi gravitasi pati-independen juga
mungkin ada.
organel lain, seperti inti, mungkin cukup padat untuk bertindak sebagai
statoliths. Ini bahkan mungkin tidak diperlukan untuk statolith untuk datang
untuk beristirahat di bagian bawah sel. Jaringan sitoskeletal mungkin dapat
mendeteksi perpindahan vertikal parsial organel.
(SEBUAH) (C)

orientasi vertikal
MM M Amyloplasts cenderung sedimen
dalam menanggapi reorientasi
sel dan tetap bersandar UGD.
Ketika akar berorientasi vertikal,
tekanan yang diberikan oleh
plasts amylo- pada ER yang
merata.

CC
tekanan
amiloplas
seragam
pada ER
ujung akar
Statolith

orientasi horisontal

PP

(B)
Dalam asi orient- horisontal
ujung akar tekanan pada ER adalah tidak
merata di kedua sisi sumbu
vertikal dari akar.

tekanan yang
tidak sama
Statolith
pada ER

GAMBAR 19.30 Persepsi gravitasi oleh statocytes dari Arabidopsis. ( A) mikrograf elektron dari ujung
akar, menunjukkan apikal meristem (M), kolumela (C), dan periph eral (P) sel. (B) Pembesaran
pandangan sel columella, menunjukkan amyloplasts beristirahat di atas retikulum endoplasma di
bagian bawah sel. (C) Diagram dari perubahan yang terjadi selama reorientasi dari vertikal ke posisi
horizontal. (A, B milik Dr. John Cium; C berdasarkan Sievers et al 1996 dan Volkmann dan Sievers
1979..)

Retikulum endoplasma

Baru-baru ini Andrew Staehelin dan rekan mengusulkan sebuah model baru lanjut mengusulkan bahwa ER nodal, yang juga terhubung ke saluran
untuk gravitropisme, yang disebut Model tensegrity melalui mikrofilamen aktin, dapat melindungi sitoskeleton dari yang
(Yoder et al. 2001). tensegrity adalah istilah-a arsitektur kontraksi integritas terganggu oleh statoliths di daerah tertentu, sehingga memberikan sinyal
tensional -coined oleh arsitek inovatif R. Buckminster Fuller. Pada intinya, tensegrity
untuk directionality stimulus.
mengacu pada integritas struktural yang diciptakan oleh ketegangan
interaktif antara komponen struktural. Dalam hal ini komponen struktural
terdiri dari anyaman dari mikrofilamen aktin yang membentuk bagian dari Persepsi gravitasi tanpa statoliths? Mekanisme alternatif persepsi
sitoskeleton sel kolumela tengah tutup root. Jaringan aktin diasumsikan gravitasi yang tidak melibatkan statoliths telah diusulkan untuk raksasa
berlabuh reseptor untuk meregangkan diaktifkan pada membran plasma. bersel alga air tawar Chara. Lihat Web Topik 19,8 untuk rincian.
reseptor peregangan di sel hewan biasanya saluran ion mechanosensitive,
dan saluran kalsium meregangkan diaktifkan telah dibuktikan pada
tanaman. Auksin Apakah Redistribusi lateral di Root Cap
Selain berfungsi untuk melindungi sel-sel sensitif dari meristem apikal
sebagai ujung menembus tanah, tutup akar adalah situs persepsi gravitasi.
Menurut model tensegrity, sedimentasi dari statoliths melalui sitosol Karena topi ini agak jauh dari zona pemanjangan mana lentur terjadi,
lokal mengganggu meshwork aktin, mengubah distribusi ketegangan seorang utusan kimia dianggap terlibat dalam komunikasi antara topi dan
ditransmisikan ke saluran kalsium pada membran plasma, sehingga zona pemanjangan. eksperimen mikro di mana setengah dari
mengubah kegiatan mereka. Yoder dan rekan (2001) memiliki
 Auksin: The Hormon Pertumbuhan 447

(SEBUAH) Penghapusan tutup dari akar Penghapusan setengah dari topi selama gravitropisme? Sebagaimana dibahas
vertikal sedikit merangsang menyebabkan akar vertikal menekuk ke
sebelumnya dalam bab ini, auksin dari tunas tersebut
berorientasi vertikal akar pertumbuhan elongasi. arah sisi dengan tersisa setengah-cap.
kontrol dengan topi translokasi dari prasasti ke ujung akar melalui sel
protophloem. permeases AUX1 asimetris terlokalisasi
pada sel-sel protophloem parenkim mengarahkan
transportasi acropetal auksin dari floem untuk
sekelompok sel di kolumela tutup. Auksin kemudian
diangkut radial ke sel akar topi lateral, di mana AUX1
normal. Akar
juga sangat diungkapkan (lihat Gambar 19.19).

topi akar
menunjukkan lentur gravitropic

kontrol dengan cap

Sel-sel akar topi lateral yang overlay zona elongasi
(B)
Penghapusan tutup dari akar distal (DEZ) dari root- yang wilayah pertama yang
berorientasi horizontal akar horisontal menghapuskan respon
merespon gravitasi. Auksin dari topi diambil oleh
terhadap gravitasi, sementara sedikit
merangsang pertumbuhan elongasi. parenkim korteks dari DEZ dan diangkut basipetally
melalui zona pemanjangan akar. transportasi basipetal
ini, yang terbatas pada zona pemanjangan, difasilitasi
oleh operator anion auksin berhubungan dengan
keluarga PIN (disebut AGR1), yang terlokalisasi di
ujung basal sel parenkim korteks.

GAMBAR 19,31 eksperimen mikro menunjukkan bahwa cap akar menghasilkan inhibitor yang
auksin yang basipetally diangkut terakumulasi di
mengatur akar gravitropisme. (Setelah Shaw dan Wilkins 1973.)
zona pemanjangan dan tidak lulus di luar daerah ini.
Flavonoid mampu menghambat auksin

topi telah dihapus menunjukkan bahwa topi menghasilkan inhibitor penghabisan disintesis di wilayah ini dari akar dan mungkin mempromosikan
pertumbuhan akar (Gambar 19.31). Temuan ini menunjukkan bahwa tutup auksin retensi oleh sel-sel ini (Gambar 19,32) (Murphy et al. 2000).
memasok inhibitor ke sisi yang lebih rendah dari akar selama lentur gravitropic.

Meskipun topi akar mengandung sejumlah kecil IAA dan asam absisat
(ABA) (lihat Bab 23), IAA lebih menghambat membasmi pertumbuhan dari
ABAwhen diterapkan secara langsung ke zona pemanjangan, menunjukkan
bahwa IAA adalah inhibitor akar topi. Konsisten dengan kesimpulan ini,
ABA-kekurangan
Arabidopsis mutan memiliki akar gravitropisme normal, sedangkan akar
mutan yang cacat dalam transportasi auksin, seperti aux1 dan agr1, adalah
agravitropic (Palme dan Gälweiler 1999). Itu Agr mutan tidak memiliki Kotiledon dan
daerah apikal
pembawa auksin penghabisan terkait dengan protein PIN (Chen et al
1998;.. Müller et al 1998; Utsuno et al 1998.). The AGR1 protein terlokalisir
di basal (distal) akhir sel kortikal dekat ujung akar di

Arabidopsis.
Bagaimana kita mendamaikan fakta bahwa menembak meristem apikal
adalah sumber utama auksin ke akar dengan peran tutup akar sebagai
sumber auksin penghambatan zona transisi
hipokotil-akar

GAMBAR 19,32 lokalisasi flavonoid dalam 6-hari-tua Arabidopsis ujung akar

bibit. Prosedur pewarnaan yang digunakan menyebabkan flavonoid untuk oresce flu-.
Flavonoid terkonsentrasi di tiga daerah: kotiledon dan daerah apikal, zona transisi
hipokotil-root, dan daerah ujung akar (inset). Di ujung akar, flavonoid terlokalisasi
khusus di zona pemanjangan dan topi, jaringan yang terlibat dalam transportasi
auksin basipetal. (Dari Murphy et al. 2000)
448 Bab 19

GAMBAR 19,33 Usulan model untuk redistribusi

1. IAA disintesis dalam
auksin selama pism gravitro- di akar jagung.
menembak dan diangkut ke
akar di prasasti. (Setelah Hasenstein dan Evans 1988.)

Cortex
zona elongasi
Stele (sintesis
IAA
flavonoid)

2. Ketika akar adalah vertikal, statoliths di tutup

menetap ke ujung basal sel. Auksin diangkut
acropetally di root melalui prasasti yang merata di
Cap Akar semua sisi dari tutup root. IAA kemudian diangkut
IAA IAA basipetally dalam korteks ke zona pemanjangan,
di mana ia mengatur pemanjangan sel.
sel akar topi IAA
(diperbesar)

Statoliths

(B) (A)
orientasi
orientasi
horisontal
vertikal

6. konsentrasi menurun auksin

pada sisi atas merangsang sisi
atas untuk tumbuh. Akibatnya, IAA
akar membungkuk.

IAA
IAA
IAA

5. Konsentrasi tinggi dari auksin di 4. Sebagian besar auksin di 3. Dalam akar horisontal yang
sisi bawah dari akar menghambat tutup kemudian diangkut statoliths menetap ke sisi sel
pertumbuhan. basipetally di korteks di sisi topi, memicu transportasi kutub
bawah dari akar. IAA ke sisi bawah tutup.

Menurut model, basipetal transportasi auksin dalam akar berorientasi
vertikal adalah sama di semua sisi (Gambar 19.33A). Ketika akar berorientasi
horizontal, bagaimanapun, topi pengalihan sebagian besar auksin ke sisi yang
lebih rendah, sehingga menghambat pertumbuhan sisi yang lebih rendah (lihat
Gambar 19.33B). Konsisten dengan ide ini, pengangkutan [ 3 H] IAAacross akar
topi berorientasi horizontal adalah polar, dengan gerakan ke bawah
preferensial (Young et al. 1990).
Pin3 Pindah lateral ke Bawah Side Sel Akar Columella
Baru-baru ini mekanisme redistribusi auksin lateral dalam topi akar telah
baru telah dijelaskan (Friml et al. 2002). Salah satu anggota keluarga
protein PIN dari operator penghabisan auksin, pin3, tidak hanya diperlukan
untuk kedua photoand gravitropisme di Arabidopsis, tetapi telah terbukti
relocalized ke sisi yang lebih rendah dari sel-sel kolumela selama akar
gravitropisme (Gambar 19.34).
Sebagaimana dicatat sebelumnya, protein PIN yang terus bersepeda
antara membran plasma dan kompartemen sekretori intraseluler. bersepeda
ini memungkinkan beberapa protein PIN ditargetkan untuk sisi tertentu dari
sel dalam menanggapi
untuk stimulus terarah. Dalam akar berorientasi vertikal, pin3 terdistribusi
secara seragam di sekitar sel kolumela (lihat Gambar 19.34A). Tapi ketika
akar ditempatkan pada sisinya, pin3 istimewa ditargetkan ke sisi yang lebih
rendah dari sel (lihat Gambar 19.34B). Akibatnya, auksin diangkut polarly
ke bagian bawah tutup.
Gravity Sensing Semoga Libatkan Kalsium dan pH sebagai
Kedua Rasul
Berbagai percobaan telah menyarankan bahwa calmodulin kalsium
diperlukan untuk akar gravitropisme pada jagung. Beberapa percobaan ini
melibatkan EGTA (etilena glikol-bis ( β-
aminoethyl ether) -N, N, N ', N '- Asam tetraacetic), suatu senyawa yang dapat
chelate (membentuk kompleks dengan) ion kalsium, sehingga mencegah
penyerapan kalsium oleh sel. EGTAinhibits baik gravitropisme akar dan
distribusi asimetris auksin dalam menanggapi gravitasi (Young dan Evans
1994).
Menempatkan blok agar yang mengandung ion kalsium di sisi tutup
akar jagung berorientasi vertikal menginduksi akar tumbuh ke arah samping
dengan blok agar (Gambar
19,35). Seperti dalam kasus [+ H] IAA, 45 ca 2+ adalah polarly diangkut ke
bagian bawah tutup akar dirangsang oleh

Orientasi vertikal (A) (B) orientasi Horizontal
10 m m 10 m m
GAMBAR 19.34 Relocalization pembawa auksin penghabisan pin3 selama akar gravitropisme
di Arabidopsis. ( A) Dalam akar berorientasi vertikal, pin3 terdistribusi secara seragam di
sekitar sel-sel kolumela. (B) Setelah ori- ented horizontal selama 10 menit, pin3 telah
relocalized ke sisi yang lebih rendah dari sel-sel kolumela. Foto di (B) telah reorientated
sehingga sisi bawah adalah di sebelah kanan. (Arah gravitasi puncak-kombatan oleh
panah.) (Dari Friml et al. 2002, courtesy of Klaus Palme.)
gravitasi. Namun, sejauh ini tidak ada perubahan dalam distribusi kalsium
intraseluler telah terdeteksi dalam sel kolumela dalam menanggapi stimulus
gravitasi.
Bukti terbaru menunjukkan bahwa perubahan pH intraseluler adalah
perubahan terdeteksi awal dalam sel kolumela menanggapi gravitasi. Fasano et
al. (2001) digunakan pewarna pH-sensitif untuk memantau baik intraseluler dan
ekstraseluler pH di Arabidopsis akar setelah mereka ditempatkan di sebuah
horisontal
GAMBAR 19,35 Sebuah akar jagung membungkuk ke arah agar blok yang mengandung
kalsium ditempatkan pada tutup. (Courtesy of Michael
L. Evans.)
Auksin: The Hormon Pertumbuhan 449
posisi. Dalam waktu 2 menit dari gravistimulation, pH sitoplasma sel
kolumela tutup akar meningkat 7,2-7,6, dan pH apoplastic menurun dari 5,5
ke
4.5. Perubahan ini didahului setiap tropic kelengkungan terdeteksi oleh
sekitar 10 menit.
The alkalinisasi sitosol dikombinasikan dengan pengasaman apoplast
menunjukkan bahwa aktivasi dari membran plasma H + -ATPase adalah
salah satu peristiwa awal yang memediasi akar persepsi gravitasi atau
transduksi sinyal.
EFEK PEMBANGUNAN auksin
Meskipun awalnya ditemukan dalam kaitannya dengan pertumbuhan,
auksin pengaruh hampir setiap tahap dari tanaman siklus hidup dari
perkecambahan ke penuaan. Karena efek yang auksin menghasilkan
tergantung pada identitas jaringan target, respon jaringan untuk auksin
diatur oleh Program genetik perkembangan ditentukan dan selanjutnya
dipengaruhi oleh ada atau tidak adanya molekul sinyal lainnya. Seperti yang
akan kita lihat dalam hal ini dan selanjutnya bab, interaksi antara dua atau
lebih hormon adalah tema yang berulang dalam perkembangan tanaman.
Pada bagian ini kita akan membahas beberapa proses perkembangan
tambahan diatur oleh auksin, termasuk dominasi apikal, amputasi daun,
pembentukan lateral akar, dan diferensiasi pembuluh darah. Sepanjang
diskusi ini kita menganggap bahwa mekanisme utama dari aksi auksin
sebanding dalam semua kasus, yang melibatkan reseptor yang sama dan
jalur transduksi sinyal. Keadaan saat ini pengetahuan kita tentang jalur
sinyal auksin akan dipertimbangkan pada akhir bab ini.
Auksin Mengatur Dominasi apikal
Dalam kebanyakan tanaman lebih tinggi, tunas apikal tumbuh menghambat
pertumbuhan lateral (ketiak) tunas-fenomena yang disebut
450 Bab 19
GAMBAR 19,36 Auksin dukungan- (SEBUAH)
menekan pertumbuhan tunas ketiak di
kacang ( Phaseolus vulgaris) tanaman.
tunas (A) aksila The ditekan di pabrik utuh
karena dominasi apikal. (B) Penghapusan
dari tunas terminal melepaskan tunas lary
axil- dari apikal nance domi- (panah). (C)
Menerapkan IAA di lanolin pasta (yang
terkandung dalam kapsul gelatin) ke
permukaan dipotong mencegah
perkembangan dari tunas ketiak. (Foto ©
MB Wilkins.)
dominasi apikal. Penghapusan apeks pucuk (pemenggalan kepala) biasanya
menghasilkan pertumbuhan satu atau lebih dari tunas lateral. Tidak lama
setelah penemuan auksin, ditemukan bahwa IAAcould pengganti tunas apikal
dalam menjaga penghambatan tunas lateral kacang ( Phaseolus vulgaris) tanaman. luciferase-dikatalisasi.
Percobaan klasik ini diilustrasikan pada Gambar 19.36.
Hasil ini segera dikonfirmasi untuk berbagai jenis tanaman lainnya, yang
mengarah ke hipotesis bahwa perkembangan dari tunas ketiak dihambat
oleh auksin yang diangkut basipetally dari tunas apikal. Untuk mendukung
ide ini, cincin transportasi auksin inhibitor TIBA dalam pasta lanolin (sebagai
pembawa) yang ditempatkan di bawah apeks pucuk merilis tunas ketiak dari
penghambatan.
Bagaimana auksin dari apeks pucuk menghambat pertumbuhan tunas
lateral? Kenneth V. Thimann dan Folke Skoog awalnya diusulkan bahwa
auksin dari apeks pucuk menghambat pertumbuhan tunas ketiak-langsung
yang disebut Model directinhibition. Menurut model, konsentrasi auksin yang
optimal untuk pertumbuhan tunas rendah, jauh lebih rendah daripada
konsentrasi auxin biasanya ditemukan di batang. Tingkat auksin biasanya
hadir dalam batang dianggap menghambat pertumbuhan tunas lateral.
Jika model langsung penghambatan dominasi apikal benar, konsentrasi
auksin dalam tunas ketiak harus menurunkan mengikuti pemenggalan
kepala daerah apeks pucuk. Namun, sebaliknya tampaknya benar. Hal ini
ditunjukkan dengan tanaman transgenik yang mengandung gen reporter
luciferase bakteri ( LUXA dan LUXB) di bawah kendali
(B)
(C)
promotor auksin-responsif (Langridge et al. 1989). gen reporter ini
memungkinkan peneliti untuk mempelajari tingkat auksin pada jaringan yang
berbeda dengan memantau jumlah cahaya yang dipancarkan oleh reaksi
Ketika tanaman transgenik yang dipenggal, ekspresi LUX gen
meningkat di dalam dan sekitar tunas ketiak dalam waktu 12 jam.
Percobaan ini menunjukkan bahwa setelah dipenggal, isi auksin dari tunas
ketiak meningkat bukan menurun.
pengukuran fisik langsung dari tingkat auksin di tunas juga
menunjukkan peningkatan auksin dari tunas ketiak setelah dipenggal. The
IAAconcentration di tunas ketiak dari Phaseolus vulgaris ( kacang ginjal)
meningkat lima kali lipat dalam waktu 4 jam setelah dipenggal (Gocal et al.
1991). Ini dan hasil yang sama lain membuatnya tidak mungkin bahwa
auksin dari apeks pucuk menghambat tunas ketiak langsung.
hormon lain, seperti sitokinin dan ABA, mungkin terlibat. aplikasi
langsung dari sitokinin untuk tunas ketiak merangsang pertumbuhan tunas
pada banyak spesies, mengesampingkan efek penghambatan dari apeks
pucuk. Auksin membuat apeks pucuk wastafel untuk sitokinin disintesis di
root, dan ini mungkin salah satu faktor yang terlibat dalam dominasi apikal
(lihat Web Topik 19.10 ).
Akhirnya, ABAhas ditemukan di tunas lateral aktif pada tanaman utuh.
Ketika apeks pucuk dihapus, tingkat ABA di tunas lateral menurun.
Tingginya kadar IAA dalam menembak dapat membantu menjaga kadar
ABA tinggi di tunas lateral. Menghapus puncak menghilangkan sumber
utama IAA, yang
 Tipe liar
(SEBUAH) (B) (C)

memungkinkan tingkat inhibitor pertumbuhan tunas jatuh (lihat Web

Topik 19,11 ).

Auksin Meningkatkan Pembentukan Lateral dan

Akar Adventif
Meskipun pemanjangan akar primer dihambat oleh konsentrasi
auksin lebih besar dari 10 -8 M, inisiasi lateral (cabang) akar dan
akar adventif dirangsang oleh tingkat auksin tinggi. akar lateral
biasanya ditemukan di atas zona elongasi dan akar rambut dan
berasal dari kelompok-kelompok kecil dari sel-sel di Pericycle (lihat
Bab 16). Auksin merangsang sel-sel Pericycle ini untuk membagi.
Sel-sel membagi secara bertahap membentuk menjadi apeks akar, alf- 1
dan akar lateral yang tumbuh melalui korteks akar dan epidermis. (D) (E) (F)

akar adventif (akar yang berasal dari jaringan bukan akar)

dapat timbul di berbagai lokasi jaringan dari kelompok sel dewasa
yang memperbaharui aktivitas pembelahan sel mereka. Sel-sel
membagi berkembang menjadi akar meristem apikal dalam cara
yang agak analog dengan pembentukan akar lateral. Dalam
hortikultura, efek stimulasi dari auksin pada pembentukan akar
adventif telah sangat berguna untuk perbanyakan vegetatif
tanaman dengan stek.

Seri dari Arabidopsis mutan, bernama alf (a berrant l akar ateral f ormation),
telah memberikan beberapa wawasan ke dalam peran auksin GAMBAR 19,37 Akar morfologi Arabidopsis ( A-C) tipe liar dan alf1 bibit (D-F) pada
dalam inisiasi akar lateral. Itu alf1 mutan pameran proliferasi ekstrim media bebas hormon. Perhatikan liferation pro dari primoridia akar tumbuh dari
akar adventif dan lateral, ditambah dengan peningkatan 17 kali Pericycle di alf1
bibit (D dan E). (Dari Celenza et al. 1995, courtesy of J. Celenza.)
lipat dalam auksin endogen (Gambar 19.37).

mutan lain, alf4, memiliki fenotipe yang berlawanan: Ini adalah

benar-benar tanpa akar lateral. analisis mikroskopis alf4 akar menunjukkan
bahwa primordia lateral akar yang absen. Itu alf4 fenotipe tidak dapat dibalik
dengan penerapan eksogen IAA.
Namun mutan lain, alf3, rusak dalam pengembangan primordia lateral
akar ke akar lateral yang matang. Akar primer ditutupi dengan ditangkap
primordia lateral akar yang tumbuh sampai mereka menonjol melalui
lapisan sel epidermis dan kemudian berhenti tumbuh. Pertumbuhan
ditangkap dapat diatasi dengan penerapan eksogen IAA.
Atas dasar fenotip dari alf mutan, sebuah model di mana IAA diperlukan
untuk setidaknya dua langkah dalam pembentukan akar lateral telah
diusulkan (Gambar 19.38) (Celenza et al 1995.):
1. IAA diangkut acropetally (ke arah ujung) di prasasti itu diperlukan untuk
memulai pembelahan sel di Pericycle tersebut.
dasar tangkai daun. Dalam kebanyakan tanaman, amputasi daun didahului
oleh diferensiasi lapisan yang berbeda dari sel, lapisan absisi, dalam zona
amputasi. Selama penuaan daun, dinding sel di lapisan absisi dicerna,
yang menyebabkan mereka menjadi lunak dan lemah. daun akhirnya
terputus pada lapisan absisi sebagai akibat dari stres pada dinding sel
melemah.
tingkat auksin tinggi di daun muda, semakin menurun dalam daun jatuh
tempo, dan relatif rendah di menua daun ketika proses amputasi dimulai.
Peran auksin di amputasi daun bisa ditunjukan oleh eksisi pisau dari daun
dewasa, meninggalkan tangkai daun utuh pada batang. Sedangkan
penghapusan helai daun mempercepat pembentukan lapisan absisi pada
tangkai daun, aplikasi IAA di lanolin tempelkan ke permukaan potongan
tangkai daun mencegah pembentukan lapisan absisi. (Lanolin tempelkan
saja tidak mencegah amputasi.)

2. IAA diperlukan untuk mempromosikan pembelahan sel dan menjaga kelangsungan

hidup sel di akar lateral yang berkembang.
Hasil ini menyarankan sebagai berikut:

• Auksin diangkut dari pisau biasanya mencegah amputasi.

Auksin Penundaan tersebut Onset dari Daun Abscission

Penumpahan daun, bunga, dan buah-buahan dari tanaman hidup dikenal

sebagai amputasi. bagian ini abscise di wilayah yang disebut zona • Amputasi dipicu selama penuaan daun, ketika auksin tidak lagi

amputasi, yang terletak di dekat diproduksi.

452 Bab 19

IAA diangkut acropetally dalam silinder mungkin mengambil alih sebagai sumber auksin utama selama tahap-tahap selanjutnya.
vaskular diperlukan untuk memulai
pembelahan sel di Pericycle tersebut. IAA
biasanya membatasi pasokan auksin root.
IAA
Gambar 19,39 menunjukkan pengaruh auksin yang dihasilkan oleh
achenes stroberi pada pertumbuhan wadah strawberry.
ALF1

Auksin Menginduksi Vascular Diferensiasi

ALF4 ALF3
jaringan pembuluh darah baru membedakan langsung di
Gen dan IAA Gen dan IAA diperlukan
IAA bawah mengembangkan tunas dan daun tumbuh muda (lihat
diperlukan untuk untuk mempertahankan
Gambar 19.5), dan penghapusan daun muda mencegah
memulai pertumbuhan lateral
pembentukan akar
diferensiasi vaskular (Aloni 1995). Kemampuan suatu tunas
lateralis-akar apikal
untuk merangsang diferensiasi pembuluh darah dapat ditunjukkan dalam
GAMBAR 19,38 Amodel untuk pembentukan akar lateral, berdasarkan alf mutan
kultur jaringan. Ketika tunas apikal dicangkokkan ke rumpun sel dibedakan,
dari Arabidopsis.
atau kalus, xilem dan floem membedakan bawah graft.
(Setelah Celenza et al. 1995)

Jumlah relatif xilem dan floem membentuk diatur oleh konsentrasi

Namun, seperti yang akan dibahas dalam Bab 22, etilen juga memainkan peran
penting sebagai regulator positif dari amputasi.
Auksin Transportasi Mengatur Pengembangan Floral
Bud
mengobati Arabidopsis tanaman dengan inhibitor transportasi auksin NPA
menyebabkan pengembangan bunga abnormal, menyarankan bahwa
transportasi auksin kutub di meristem perbungaan diperlukan untuk
pengembangan bunga normal. Di
Arabidopsis, yang “pin-formed” mutan pin1, yang tidak memiliki sebuah kapal
penghabisan auksin dalam jaringan shoot, memiliki bunga yang abnormal mirip
dengan tanaman NPA-diperlakukan (lihat Gambar 19.14A). Rupanya meristem
bunga berkembang tergantung pada auksin diangkut untuk itu dari jaringan
subapical. Dengan tidak adanya operator penghabisan, meristem yang
kelaparan untuk auksin, dan phyllotaxis normal dan pengembangan bunga
terganggu (Kuhlemeier dan Reinhardt 2001).
auksin: Konsentrasi tinggi auksin menginduksi diferensiasi xilem dan floem,
tetapi hanya floem membedakan pada konsentrasi auksin rendah. Demikian
pula, percobaan pada jaringan batang telah menunjukkan bahwa
konsentrasi auksin rendah menginduksi diferensiasi floem, sedangkan
tingkat IAA yang lebih tinggi menginduksi xilem (Aloni 1995).
Regenerasi jaringan pembuluh darah melukai berikut ini juga
dikendalikan oleh auksin yang dihasilkan oleh daun muda langsung di atas
luka situs (Gambar 19.40). Penghapusan daun mencegah regenerasi
jaringan pembuluh darah, dan diterapkan auksin dapat menggantikan daun
dalam merangsang regenerasi.
diferensiasi vaskular adalah polar dan terjadi dari daun ke akar. Dalam
tanaman keras berkayu, auksin yang dihasilkan oleh tumbuh tunas di musim
semi merangsang aktivasi kambium di

(A) buah normal (B) achenes

dihapus (C) achenesdisemprot
dihapus;dengan auksin

Auksin Mempromosikan
Pengembangan Buah

Banyak bukti menunjukkan bahwa auksin

terlibat dalam regulasi perkembangan buah.
Auksin diproduksi di serbuk sari dan di
endosperm dan embrio benih berkembang, dan wadah
stimulus awal untuk pertumbuhan buah bengkak
mungkin hasil dari penyerbukan.

penyerbukan berhasil memulai pertumbuhan

bakal biji, yang dikenal sebagai
buah set. Setelah pembuahan, pertumbuhan achene

buah mungkin tergantung pada auksin diproduksi

dalam mengembangkan benih. endosperm dapat
berkontribusi auksin selama tahap awal
pertumbuhan buah, dan embrio berkembang
GAMBAR 19,39 ( A) stroberi “buah” sebenarnya adalah sebuah wadah bengkak yang pertumbuhannya diatur oleh
auksin yang dihasilkan oleh “benih,” yang sebenarnya achenes -
buah sejati. (B) Ketika achenes dihapus, wadah gagal untuk berkembang secara normal. (C) Penyemprotan wadah
achene-kurang dengan IAA mengembalikan pertumbuhan dan perkembangan normal. (Setelah A. Galston 1994.)

batang dipenggal, dan daun
dan tunas di atas situs luka
telah dihapus untuk
menurunkan auksin endogen.
daun
muda
IAA dalam
pasta
daun dewasa
lanolin
tunas (A)
Luka
kotiledon
tanaman mentimun utuh apikal
GAMBAR 19.40 IAA-diinduksi regenerasi xilem sekitar luka dalam mentimun ( Cucumis sativus) batang
jaringan. (A) Metode untuk melaksanakan percobaan regenerasi luka. (B) Fluoresensi mikrograf
menunjukkan regenerasi jaringan pembuluh darah di sekitar luka. (B courtesy of R. Aloni.)
arah basipetal. Babak baru pertumbuhan sekunder dimulai pada ranting
terkecil dan berlangsung ke bawah menuju ujung akar.
bukti lebih lanjut untuk peran auksin dalam diferensiasi vaskular berasal
dari studi di mana konsentrasi auksin dimanipulasi oleh transformasi
tanaman dengan gen auksin biosintesis melalui penggunaan Ti plasmid
dari Agrobacterium. Ketika gen auksin biosintesis itu diekspresikan pada
tanaman petunia, jumlah elemen xilem tracheary meningkat. Sebaliknya,
ketika tingkat bebas IAA pada tanaman tembakau menurun transformasi
dengan gen penyandi enzim yang terkonjugasi IAA untuk asam amino lisin,
jumlah elemen kapal menurun dan ukuran mereka meningkat (Romano et
al. 1991). Dengan demikian tingkat auksin bebas muncul untuk mengatur
jumlah elemen tracheary, serta ukuran mereka.
Di elegans Zinnia mesofil kultur sel, auksin diperlukan untuk diferensiasi
sel tracheary, tetapi sitokinin juga berpartisipasi, mungkin dengan
meningkatkan sensitivitas sel untuk auksin. Sedangkan auksin diproduksi
dalam menembak dan diangkut ke bawah ke akar, sitokinin diproduksi oleh
ujung akar dan diangkut ke atas ke tunas. Kedua hormon mungkin terlibat
dalam regulasi aktivasi kambium dan diferensiasi vaskular (lihat Bab 21).
Auksin: The Hormon Pertumbuhan 453
(B)
Segera setelah luka-luka, IAA
dalam pasta lanolin diaplikasikan
pada batang di atas luka.
Node
Luka
vaskular
helai
Xilem diferensiasi terjadi di sekitar
luka, mengikuti jalan difusi auksin.
Sintetis Auxins Memiliki Berbagai
Penggunaan Komersial
Auxins telah digunakan secara komersial di bidang pertanian dan
hortikultura selama lebih dari 50 tahun. Penggunaan komersial awal
termasuk pencegahan buah dan daun drop, promosi berbunga dalam
nanas, induksi buah parthenocarpic, menipis buah, dan perakaran stek
untuk perbanyakan tanaman. Perakaran ditingkatkan jika daun yang
dieksisi atau batang pemotongan dicelupkan dalam larutan auksin, yang
meningkatkan inisiasi akar adventif di cut akhir. Ini adalah dasar dari
senyawa rooting komersial, yang terutama terdiri dari auksin sintetis
dicampur dengan bedak.
Dalam beberapa spesies tanaman, buah-buahan tanpa biji dapat diproduksi
secara alami, atau mereka mungkin disebabkan oleh pengobatan bunga
unpollinated dengan auksin. Produksi buah-buahan tanpa biji tersebut disebut partenokarpi.
Dalam merangsang pembentukan buah parthenocarpic, auksin dapat bertindak
terutama untuk menginduksi buah set, yang pada gilirannya dapat memicu
produksi endogen auksin oleh jaringan buah tertentu untuk menyelesaikan proses
perkembangan.
Ethylene juga terlibat dalam pengembangan buah, dan beberapa efek
auksin pada berbuah mungkin hasil dari promosi sintesis etilen. Kontrol dari
etilena dalam penanganan komersial buah dibahas dalam Bab 22.
454 Bab 19
Selain aplikasi ini, hari ini auksin banyak digunakan sebagai herbisida.
Bahan kimia 2,4-D dan dikamba (lihat Gambar 19.4) mungkin yang auksin
sintetis yang paling banyak digunakan. auksin sintetik sangat efektif karena
mereka tidak dimetabolisme oleh tanaman secepat IAA adalah. Karena
jagung dan lainnya monokotil cepat dapat menginaktivasi auksin sintetis
dengan konjugasi, auksin ini digunakan oleh petani untuk pengendalian
gulma dikotil, juga disebut gulma berdaun lebar, di bidang sereal komersial,
dan oleh tukang kebun rumah untuk pengendalian gulma seperti dandelion
dan aster di rumput.
Auksin jalur transduksi sinyal
Tujuan utama dari penelitian tentang mekanisme molekuler tindakan
hormon adalah untuk merekonstruksi setiap langkah dalam jalur transduksi
sinyal, dari reseptor mengikat respon fisiologis. Pada bagian terakhir ini bab
ini, kita akan memeriksa calon reseptor auksin dan kemudian
mendiskusikan berbagai jalur sinyal yang telah terlibat dalam tindakan
auksin. Akhirnya kita akan mengalihkan perhatian kita untuk ekspresi gen
auxinregulated.
Fungsi ABP1 sebagai Auksin Receptor
Selain peran langsung mungkin dalam membran plasma H + ATPase
aktivasi (dibahas sebelumnya), yang ABP1 protein auksin mengikat
tampaknya berfungsi sebagai reseptor auksin dalam jalur transduksi sinyal
lainnya. ABP1 homolognya telah diidentifikasi dalam berbagai spesies
monokotil dan dikotil (penis maju dan Napier 1997). KO dari ABP1
gen pada Arabidopsis yang mematikan, dan mutasi kurang parah
mengakibatkan pembangunan diubah (Chen et al. 2001). Studi terbaru
menunjukkan bahwa, meskipun lokal terutama pada retikulum endoplasma
(ER), sejumlah kecil ABP1 disekresikan ke permukaan luar membran plasma di
mana ia berinteraksi dengan auksin menyebabkan protoplas pembengkakan
dan H + memompa (penis maju et al 1996.; Steffens et al. 2001).
Namun, tidak mungkin bahwa ABP1 menengahi semua jalur respon
auksin karena ekspresi dari sejumlah gen auksin-responsif tidak
terpengaruh ketika protoplas diinkubasi dengan antibodi anti-ABP1. Hal ini
juga tidak jelas apa peran ABP1 dalam ER bermain di auksin-responsif
transduksi sinyal. Akhirnya, masih harus ditentukan apakah ABP 57, yang
ABP larut dan tidak terkait dari beras yang mengaktifkan H + -ATPase (lihat
Gambar 19,24), terlibat dalam jalur transduksi sinyal.
Kalsium dan intraselular pH Apakah Kemungkinan
intermediet Signaling
Kalsium memainkan peran penting dalam transduksi sinyal pada hewan
dan diduga terlibat dalam aksi hormon tanaman tertentu juga. Peran
kalsium dalam aksi auksin tampaknya sangat kompleks dan, pada saat ini
dalam waktu, sangat
pasti. Namun demikian, beberapa bukti eksperimental menunjukkan bahwa auksin
meningkatkan tingkat kalsium bebas dalam sel.
Perubahan pH sitoplasma juga dapat berfungsi sebagai utusan kedua
pada hewan dan tumbuhan. Pada tumbuhan, auksin menginduksi
penurunan pH sitosol dari sekitar 0,2 unit dalam waktu 4 menit dari aplikasi.
Penyebab penurunan pH ini tidak diketahui. Karena pH sitosol biasanya
sekitar 7,4, dan optimum pH membran plasma H + ATPase adalah
6,5, penurunan pH sitosol dari 0,2 unit dapat menyebabkan peningkatan
yang ditandai dalam aktivitas membran plasma H + ATPase. Penurunan pH
sitosol mungkin juga menjelaskan peningkatan auksin-diinduksi kalsium
intraseluler bebas, dengan mempromosikan disosiasi bentuk terikat.
MAP kinase (lihat Bab 14 pada situs web) yang berperan dalam
transduksi sinyal oleh fosforilasi protein dalam kaskade yang pada akhirnya
mengaktifkan faktor transkripsi juga telah terlibat dalam respon auksin.
Ketika sel-sel tembakau yang telah dicabut dari auksin, mereka menangkap
pada akhir baik G 1 atau G 2 fase dan berhenti membagi; jika auksin
ditambahkan kembali ke dalam media kultur, siklus sel resume (Koens et al.
1995). (Untuk penjelasan tentang siklus sel, lihat Bab 1.) Auksin tampaknya
mengerahkan efeknya pada siklus sel terutama dengan merangsang
sintesis utama cyclin-dependent protein kinase (CDK): Cdc2 ( c elo
d ivision c ycle 2) ( lihat Bab 14 pada situs web).
Gen-gen auksin-Induced Jatuh ke Dua Kelas: Awal dan Akhir
Salah satu fungsi penting dari jalur transduksi sinyal (s) dimulai ketika
auksin mengikat reseptor adalah aktivasi dari kelompok memilih faktor
transkripsi. faktor transkripsi diaktifkan memasuki nukleus dan
mempromosikan ekspresi gen tertentu. Ekspresi gen yang dirangsang oleh
aktivasi faktor transkripsi yang sudah ada sebelumnya disebut gen respon
primer atau
gen awal.
Definisi ini menyiratkan bahwa semua protein yang dibutuhkan untuk
ekspresi auksin yang disebabkan gen awal yang hadir dalam sel pada saat
paparan hormon; dengan demikian, ekspresi awal-gen tidak dapat diblokir
oleh inhibitor sintesis protein seperti cycloheximide. Akibatnya, waktu yang
dibutuhkan untuk ekspresi gen awal bisa sangat singkat, mulai dari
beberapa menit sampai beberapa jam (Abel dan theologis 1996).
Secara umum, gen respon primer memiliki tiga fungsi utama: (1)
Beberapa gen awal menyandi protein yang mengatur transkripsi gen
respon sekunder, atau
gen akhir, yang diperlukan untuk respon jangka panjang untuk hormon.
Karena gen akhir membutuhkan sintesis protein novo de, ekspresi mereka
dapat diblokir oleh inhibitor sintesis protein. (2) gen awal lainnya yang
terlibat dalam komunikasi antar, atau sel-sel sinyal. (3) Kelompok lain gen
awal terlibat dalam adaptasi terhadap stres.

Lima kelas utama gen auksin-responsif awal telah diidentifikasi:
• Gen yang terlibat dalam pertumbuhan dan perkembangan auksin-diatur:
1. AUX / IAA keluarga gen
2. SAUR keluarga gen
3. GH3 keluarga gen
• gen respon stres:
1. Gen yang mengkode glutathione S-transferase
2. Gen yang mengkode 1-aminocyclopropane-1-karboksilat
asam (ACC) synthase, enzim kunci dalam jalur biosintesis
etilen (lihat Bab 22)
gen awal untuk pertumbuhan dan perkembangan. Anggota
AUX / IAA gen keluarga encode faktor transkripsi singkat yang berfungsi
sebagai represor atau aktivator dari ekspresi gen auksin-diinduksi akhir.
Ekspresi sebagian besar AUX / IAA keluarga gen dirangsang oleh auksin
dalam waktu 5 sampai 60 menit penambahan hormon Semua gen
mengkodekan polipeptida hidrofilik kecil yang memiliki diduga
DNA-mengikat motif mirip dengan represor bakteri. Mereka juga memiliki
pendek paruh (sekitar 7 menit), menunjukkan bahwa mereka membalik
cepat.
Itu SAUR keluarga gen disebutkan sebelumnya dalam bab dalam
kaitannya dengan tropisme. Auksin merangsang ekspresi SAUR gen dalam
2 sampai 5 menit dari pengobatan, dan respon tidak sensitif terhadap
cycloheximide. lima SAUR gen kedelai terkumpul bersama, tidak
mengandung intron, dan mengkodekan polipeptida sangat mirip fungsi
yang tidak diketahui. Karena kecepatan respon, ekspresi SAUR gen telah
terbukti menjadi probe nyaman untuk transportasi lateral auksin selama foto
dan gravitropisme.
GH3 anggota keluarga awal-gen, diidentifikasi di kedua kedelai dan Arabidopsis,
cacat perkembangan yang parah. Untuk mengikat AuxRE stabil, ARFs harus
dirangsang oleh auksin dalam waktu 5 menit. mutasi pada Arabidopsis
GH3- seperti gen mengakibatkan dwarfisme (Nakazawa et al. 2001) dan
berfungsi dalam respon auksin cahaya diatur (Hsieh et al. 2000). Karena
GH3 Ekspresi adalah refleksi yang baik dari kehadiran auksin endogen, sintetik GH3- AUX / IAA keluarga gen (sendiri salah satu keluarga gen respon auksin awal)
berdasarkan reporter gen yang dikenal sebagai DR5 banyak digunakan dalam
bioassay auksin (lihat Gambar 19.5 dan Web Topik 19,12 ) ( Ulmasov et al.
1997).
gen awal untuk stres adaptasi. Seperti disebutkan sebelumnya dalam
bab ini, auksin terlibat dalam respon stres, seperti melukai. Beberapa gen
yang mengkode glutathione-S-transferase (GSTs), kelas protein dirangsang
oleh berbagai kondisi stres, yang disebabkan oleh konsentrasi auksin yang
tinggi. Demikian juga, ACC sintase, yang juga disebabkan oleh
Auksin: The Hormon Pertumbuhan 455
stres dan adalah langkah tingkat-pembatas dalam biosintesis etilen (lihat Bab
22), diinduksi oleh tingginya tingkat auksin.
Untuk diinduksi, promotor dari gen auksin awal harus mengandung
unsur respon yang mengikat faktor transkripsi yang menjadi aktif di
hadapan auksin. Sebuah jumlah terbatas elemen respon ini tampaknya
diatur combinatorily dalam promotor dari berbagai gen auksin-diinduksi.
Domain auksin-Responsif Apakah Struktur Komposit
Sebuah dilestarikan respon auksin elemen (AuxRE) dalam promotor dari
gen auksin awal, seperti GH3, biasanya dikombinasikan dengan
unsur-unsur respon lain untuk membentuk respon domain auksin
(AuxRDs). Sebagai contoh, GH3 promotor gen kedelai terdiri dari tiga
AuxRDs bertindak secara independen (masing-masing berisi beberapa
AuxREs) yang berkontribusi secara bertahap ke inducibility auksin kuat
promotor.
Gen Auksin awal Apakah Diatur oleh Faktor Respon
Auksin
Sebagaimana dicatat sebelumnya, gen auksin awal secara definisi tidak
sensitif terhadap inhibitor sintesis protein seperti cycloheximide. Bukannya
terhambat, ekspresi banyak gen auksin awal telah ditemukan dirangsang
oleh cycloheximide.
stimulasi cycloheximide ekspresi gen dilakukan baik oleh aktivasi
transkripsi dan dengan stabilisasi mRNA. aktivasi transkripsi gen oleh
inhibitor sintesis protein biasanya menunjukkan bahwa gen sedang ditekan
oleh protein represor singkat atau dengan jalur peraturan yang melibatkan
protein dengan tingkat turnover tinggi.
Sebuah keluarga faktor respon auksin (ARFs) berfungsi sebagai
aktivator transkripsi dengan mengikat elemen respon auksin TGTCTC,
yang hadir dalam promotor GH3
dan gen respon auksin awal lainnya. Mutasi pada gen ARF mengakibatkan
membentuk dimer. Telah diusulkan bahwa dimer ARF mempromosikan
transkripsi dengan mengikat dua AuxREs diatur dalam palindrom (Ulmasov et
al. 1997).
Penelitian terbaru juga menunjukkan bahwa protein yang disandikan oleh
dapat menghambat transkripsi gen respon auksin awal dengan membentuk
heterodimer aktif dengan ARFs. Ini heterodimers tidak aktif dapat bertindak
untuk menghambat ARF-AuxRE mengikat, sehingga menghalangi baik
aktivasi gen atau penindasan. AUX / IAAproteins mungkin sehingga berfungsi
sebagai inhibitor ARF.
Hal ini sekarang percaya bahwa auksin menginduksi transkripsi gen
respon awal dengan mempromosikan degradasi proteolitik dari
penghambatan AUX / IAA protein sehingga dimer ARF aktif dapat
membentuk. The tepat mekanisme
456 Bab 19

1. Dengan tidak adanya 3. Di hadapan auksin, protein 5. degradasi IAA-diinduksi

IAA, faktor transkripsi, AUX / IAA ditargetkan untuk protein AUX / IAA
ARF, membentuk tidak penghancuran oleh ubiquitin memungkinkan
aktif ligase diaktifkan. homodimers ARF aktif
IAA untuk membentuk.
heterodimer dengan
protein AUX / IAA.

Transduksi
Aktif homodimer
sinyal jalur
Tidak aktif ARF
heterodimer ARF

ARF Aktivasi ligase ARF ARF

AUX / IAA ubiquitin TGTCTC CTCTGT DNA

palindromic AuxRE

AUX / IAA dan gen ubiquitin ATP 6. homodimers ARF aktif

awal lainnya mengikat AuxREs palindromic
4. Protein AUX / IAA di promotor gen awal,
2. dimer heterogen aktif ditandai dengan ubiquitin mengaktifkan transkripsi.
Ubi
memblokir transkripsi gen dan terdegradasi oleh
auksin awal. Tidak ada AUX / IAA proteasome 26S.
respon auksin.
AUX / IAA dan gen
awal lainnya

8. Stimulasi AUX / IAA gen

memperkenalkan umpan
balik negatif.
Auksin-dimediasi pertumbuhan /
pengembangan

proteasome
7. Transkripsi gen awal
memulai respon auksin.

GAMBAR 19,41 Amodel untuk peraturan auksin dari aktivasi transkripsi gen respon awal oleh auksin.
(Setelah Gray et al. 2001)

yang auksin menyebabkan omset AUX / IAA tidak diketahui, meskipun
diketahui melibatkan ubiquitination oleh ligase ubiquitin dan proteolisis oleh
26S besar proteasome kompleks (lihat Bab 14 pada situs web) (Gray et al
2001;.. Zenser et al 2001 ). Perhatikan bahwa umpan balik negatif
diperkenalkan ke jalur berdasarkan fakta bahwa salah satu keluarga gen
diaktifkan oleh auksin adalah AUX / IAA, yang menghambat respon.
Sebuah model untuk regulasi auksin dari gen respon awal berdasarkan
temuan dijelaskan di sini ditunjukkan pada Gambar 19,41.
RINGKASAN
Auksin adalah hormon pertama yang ditemukan pada tanaman dan merupakan
salah satu dari daftar memperluas agen sinyal kimia yang mengatur perkembangan
tanaman. bentuk alami yang paling umum dari auksin adalah indole-3-acetic acid
(IAA). Salah satu peran yang paling penting auksin pada tanaman yang lebih tinggi
adalah regulasi pertumbuhan elongasi di batang muda dan koleoptil. Rendahnya
tingkat auksin juga diperlukan untuk pemanjangan akar, meskipun pada konsentrasi
yang lebih tinggi auxin bertindak sebagai inhibitor pertumbuhan akar.
pengukuran akurat dari jumlah auksin di jaringan tanaman sangat
penting untuk memahami peran hormon ini dalam fisiologi tanaman. Awal
bioassay berbasis koleoptil telah digantikan oleh teknik yang lebih akurat,
termasuk metode fisikokimia dan immunoassay.
Peraturan pertumbuhan tanaman mungkin tergantung sebagian pada
jumlah auksin hadir bebas dalam sel tanaman, jaringan, dan organ. Ada
dua kolam renang utama auksin dalam sel: sitosol dan kloroplas. Tingkat
auksin bebas dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor, termasuk sintesis
dan pemecahan terkonjugasi IAA, IAAmetabolism, kompartemensi, dan
transportasi auksin kutub. Beberapa jalur telah terlibat dalam
IAAbiosynthesis, termasuk jalur tryptophan-dependent dan
triptofan-independen. Beberapa jalur degradatif untuk IAAhave juga telah
diidentifikasi.
IAA disintesis terutama dalam tunas apikal dan diangkut polarly ke akar.
transportasi kutub diduga terjadi terutama pada sel-sel parenkim yang
berhubungan dengan jaringan pembuluh darah. transportasi auksin polar
dapat dibagi menjadi dua proses utama: IAA masuknya dan IAA
penghabisan. Sesuai dengan model kemiosmotik untuk transportasi kutub,
ada dua mode IAA masuknya: oleh transportasi pasif pH tergantung dari
bentuk terurai, atau dengan H aktif +

Mekanisme cotransport didorong oleh membran plasma H + ATPase.
Auksin penghabisan diduga terjadi istimewa di ujung basal sel
mengangkut melalui operator penghabisan anion dan didorong oleh potensi
membran yang dihasilkan oleh membran plasma H + ATPase. inhibitor
transportasi auksin (ATIS) dapat mengganggu transportasi auksin langsung
dengan bersaing dengan auksin untuk pori saluran penghabisan atau
dengan mengikat protein peraturan atau struktural yang terkait dengan
saluran penghabisan. Auksin dapat diangkut nonpolarly di floem.
Auksin-induced pemanjangan sel dimulai setelah jeda waktu sekitar 10 menit.
Auksin mendorong pertumbuhan elongasi terutama dengan meningkatkan dinding
sel diperpanjang. Auksin-diinduksi dinding melonggarkan memerlukan input
metabolisme berkelanjutan dan menirukan sebagian oleh pengobatan dengan buffer
asam.
Menurut hipotesis pertumbuhan asam, salah satu tindakan penting
auksin adalah untuk menginduksi sel-sel untuk mengangkut proton ke
dalam dinding sel dengan merangsang membran plasma H + ATPase. Dua
mekanisme telah diusulkan untuk auksin-induced proton ekstrusi: aktivasi
langsung dari pompa proton dan ditingkatkan sintesis membran plasma H +
ATPase. Kemampuan proton untuk menyebabkan dinding sel
melonggarkan dimediasi oleh kelas protein yang disebut expansins.
Expansins melonggarkan dinding sel dengan memecah ikatan hidrogen
antara komponen polisakarida dinding. Selain proton ekstrusi, pertumbuhan
auksin-diinduksi jangka panjang melibatkan penyerapan zat terlarut dan
sintesis dan deposisi polisakarida dan protein yang dibutuhkan untuk
mempertahankan kapasitas asam-diinduksi dinding-melonggarkan.
Promosi pertumbuhan batang dan koleoptil dan penghambatan
pertumbuhan akar adalah efek fisiologis yang paling dipelajari dari auksin.
Pertumbuhan diferensial auksin-dipromosikan di organ-organ ini
bertanggung jawab untuk respon untuk directional rangsangan (yaitu,
cahaya, gravitasi) disebut tropisme. Menurut Cholodny-Pergi Model, auksin
diangkut lateral ke sisi teduh selama fototropisme dan sisi bawah selama
gravitropisme. Statoliths (amyloplasts pati-diisi) di statocytes terlibat dalam
persepsi ini normal gravitasi, tetapi mereka tidak benar-benar diperlukan.
Selain peran dalam pertumbuhan dan tropisme, auksin memainkan
peran regulasi pusat di dominasi apikal, inisiasi lateralroot, amputasi daun,
diferensiasi pembuluh darah, pembentukan tunas bunga, dan
pengembangan buah. aplikasi komersial auksin termasuk senyawa rooting
dan herbisida.
The ABP1 protein terlarut auksin-mengikat adalah kandidat kuat untuk
reseptor auksin. ABP1 terletak terutama di lumen ER. Studi dari jalur
transduksi sinyal yang terlibat dalam aksi auksin telah terlibat intermediet
sinyal lain seperti Ca 2+, pH intraseluler, dan kinase dalam pembelahan sel
auksin-diinduksi.
gen auksin yang disebabkan jatuh ke dalam dua kategori: awal dan akhir.
Induksi gen awal oleh auksin tidak memerlukan
Auksin: The Hormon Pertumbuhan 457
sintesis protein dan tidak sensitif terhadap inhibitor sintesis protein. Gen
awal jatuh ke dalam tiga kelas fungsional: ekspresi gen akhir (gen respon
sekunder), adaptasi stres, dan sinyal antar. Domain respon auksin dari
promotor dari gen awal auksin memiliki struktur komposit di mana elemen
respon auksin-diinduksi dikombinasikan dengan elemen respon konstitutif.
gen auksin-induced dapat negatif diatur oleh protein represor yang
terdegradasi melalui jalur aktivasi ubiquitin.
Bahan web
Topik web
19,1 Auxins sintetis tambahan
Biologis auksin sintetik aktif memiliki struktur
mengejutkan beragam.
19.2 Persyaratan Struktural untuk Auksin
Aktivitas
Perbandingan dari berbagai senyawa yang memiliki
aktivitas auksin telah mengungkapkan fitur-fitur umum
pada tingkat molekuler yang penting untuk aktivitas
biologis.
19,3 Auksin Pengukuran oleh Radioimmunoassy
Radioimmunoassay (RIA) memungkinkan pengukuran tingkat
fisiologis (10 - 9 g = 1 ng) dari IAA dalam jaringan tanaman.
19,4 Bukti untuk Tryptophan-Independen
Biosintesis IAA
bukti eksperimental tambahan untuk biosintesis
triptofan-independen IAA disediakan.
19,5 Multiple Faktor-faktor Yang Mengatur steady
Tingkat negara IAA
Tingkat mapan gratis IAA dalam sitosol ditentukan oleh
beberapa proses yang saling berhubungan, termasuk
sintesis, degradasi, konjugasi, kompartemensi dan
transportasi.
19,6 Mekanisme Fusicoccin Aktivasi
Plasma Membran H + -ATPase
Fusicoccin, sebuah phytotoxin diproduksi oleh jamur Fisicoccum
amygdale, menyebabkan hiperpolarisasi membran dan
proton ekstrusi di hampir semua jaringan tanaman, dan
bertindak sebagai “superauxin” di tes elongasi.
19,7 The Fluence Respon dari fototropisme
Pengaruh dosis cahaya pada fototropisme digambarkan
dan model menjelaskan fenomena yang disajikan.
458 Bab 19
19,8 Diferensial SAUR Gene Expression selama
gravitropisme
SAUR ekspresi gen digunakan untuk mendeteksi auksin
gradien lateral selama gravitropisme.
19,9 Persepsi gravitasi tanpa Statoliths di
Chara
Raksasa bersel alga air tawar, chara, membungkuk dalam
menanggapi gravitasi tanpa statoliths jelas.
19.10 Peran Sitokinin di Dominasi apikal
Dalam Douglas fir Psuedotsuga menziesii, ada korelasi
antara tingkat sitokinin dan pertumbuhan pucuk aksilar.
19,11 Peran ABA di Dominasi apikal
Dalam Quackgrass ( Elytrigia repens) Pertumbuhan tunas ketiak
berkorelasi dengan penurunan ABA.
19,12 The Fasilitasi Pengukuran IAA oleh
GH3- Constructs Reporter berdasarkan
Karena GH3 Ekspresi adalah refleksi yang baik dari
kehadiran auksin endogen, sebuah GH3-
berdasarkan reporter gen, yang dikenal sebagai DR5, banyak digunakan
dalam bioassay auksin.
19.13 Pengaruh Auksin pada Ubiquitin-Mediated
Degradasi AUX / IAA Protein
Sebuah model untuk degradasi auksin-diatur protein
AUX / IAA dibahas.
Esai web
19,1 Brassinosteroids: Kelas Baru Tanaman
Hormon steroid
Brassinosteroids telah terlibat dalam berbagai fenomena
perkembangan tanaman, termasuk pemanjangan
batang, penghambatan pertumbuhan akar, dan
biosintesis etilen.
19.2 Menjelajahi Dasar Seluler dari Polar Auksin
Mengangkut.
Bukti eksperimental menunjukkan bahwa transportasi kutub
dari hormon auksin tanaman diatur di level.This seluler
menyiratkan bahwa protein yang terlibat dalam transportasi
auksin harus asimetris didistribusikan pada membran plasma.
Bagaimana mereka protein transportasi sampai ke tujuan
mereka adalah fokus dari penelitian yang sedang berlangsung.
19,3 Fototropisme: Dari Photoperception ke
Perubahan auksin-Dependent di Gene Expression
Bagaimana photoperception oleh phototropins
digabungkan ke sinyal auksin adalah subjek esai ini.
Bab Referensi
Abel, S., Ballas, N., Wong, LM., Dan theologis, A. (1996) DNAele-
KASIH responsif terhadap auksin. Bioessays 18: 647-654. Aloni, R. (2001) aspek
Foliar dan aksial diferensiasi vaskular:
Hipotesis dan bukti. J. Pertumbuhan Tanaman regul. 20: 22-34. Aloni, R. (1995)
Induksi jaringan pembuluh darah oleh auksin dan
sitokinin. Di Tanaman Hormon dan Peran mereka dalam Pembangunan
Pertumbuhan tanaman, 2 nd ed., PJ Davies, ed., Kluwer, Dordrecht, Belanda, pp.
531-546.
Aloni, R., Schwalm, K., Langhans, M., dan Ullrich, CI (2002)
pergeseran bertahap dalam situs dan tingkat sintesis auksin selama perkembangan
primordial daun-dan peran mereka dalam tiation diferensiasi pembuluh darah dan
morfogenesis daun di Arabidopsis. Naskah sub mitted untuk publikasi. Bartel, B. (1997)
Auksin biosintesis. Annu. Rev. Tanaman Physiol. Menanam
Mol. Biol. 48: 51-66.
Bennett, MJ, Marchand, A., Hijau, HG, Mei, ST, Ward, SP,
Millner, PA, Walker, AR, Schultz, B., dan Feldmann, KA (1996) Arabidopsis gen
AUX1: Sebuah regulator permease seperti akar gravitropisme. Ilmu 273: 948-950.
Bernasconi, P. (1996) Pengaruh protein sintetis dan alami tyro-
kinase inhibitor sinus pada penghabisan auksin di zucchini ( Cucurbita pepo) hipokotil.
Physiol. Menanam. 96: 205-210. Briggs, WR, Beck, CF, Cashmore, AR, Christie,
JM, Hughes,
J., Jarillo, JA, Kagawa, T., Kanegae, H., Liscum, E., Nagatani,
A., Okada, K., Salomon, M., Rudiger, W., Sakai, T., Takano, M., Wada, M., dan
Watson, JC (2001) The phototropin keluarga fotoreseptor. Sel tanaman 13:
993-997. Brown, DE, Rashotte, A. M, Murphy, AS, Normanly, J., Tague,
BW, rekan WA, Taiz, L., dan Muday, GK (2001) Flavonoid bertindak regulator
negatif dari transportasi auksin in vivo di bidopsis Ara-. Tanaman Physiol. 126:
524-535. Celenza, JL, Grisafi, PL, dan Fink, GR (1995) Apathway untuk
pembentukan akar lateral Arabidopsis thaliana. Gen Dev. 9: 2131-2142.
Chen, JG, Ullah, H., Young, JC, Sussman, MR, dan Jones, A.
M. (2001) ABP1 diperlukan untuk pemanjangan sel terorganisir dan divisi di Arabidopsis
embriogenesis. Gen Dev. 15: 902-911. Chen, R., Hilson, P., Sedbrook, J., Rosen,
E., Caspar, T., dan mas-
anak, PH (1998) The Arabidopsis thaliana AGRAVITROPIC 1 gen mengkode
komponen pembawa penghabisan kutub-auksin transportasi. Proc. Natl. Acad. Sci.
Amerika Serikat 95: 15.112-15.117. Cleland, RE (1995) Auksin dan sel elongasi. Di Hormon
tanaman
dan Peran mereka dalam Pertumbuhan Tanaman dan Pembangunan, ed 2., PJ
Davies, ed., Kluwer, Dordrecht, Belanda, pp. 214-227. Fasano, JM, Swanson, SJ,
Blancaflor, EB, Dowd, PE, Kao, T.
H., dan Gilroy, S. (2001) Perubahan pH akar topi diperlukan untuk respon
gravitasi dari Arabidopsis akar. Sel tanaman 13: 907-921. Friml, J., Wl
sniewska, J., Benková, E., Mendgen, K., dan Palme, K. (2002)
relokasi Lateral auksin penghabisan regulator pin3 ates medi- tropisme di Arabidopsis.
Alam 415: 806-809. Fujihira, K., Kurata, T., Watahiki, MK, Karahara, I., dan
Yamamoto, KT (2000) Sebuah mutan agravitropic dari Arabidop- sis, endodermal-amiloplas
kurang 1, yang tidak memiliki amyloplasts di lapisan sel endodermal hipokotil. Plant
Cell Physiol. 41: 1193-1199. Galston, A. (1994) Proses kehidupan Tanaman. Scientific
American
Perpustakaan, New York.
Garbers, C., DeLong, A., Deruere, J., Bernasconi, P., dan Soll, D.
(1996) Amutation protein fosfatase 2A Unit sub peraturan mempengaruhi
transportasi auksin di Arabidopsis. EMBO J. 15: 2115-2124.
Geldner, N., Friml, J., Stierhof, YD, Jurgens, G., dan Palme, K.
(2001) Auksin inhibitor transportasi memblokir PIN1 bersepeda dan perdagangan cle
vesi-. Alam. 413: 425-428.

Gocal, GFW, Pharis, RP, Yeung, EC, dan Pearce, D. (1991)
Perubahan setelah dipenggal di konsentrasi IAA dan asam absisat di tunas
ketiak yang lebih besar dari Phaseolus vulgaris L. kultivar tender Green. Tanaman
Physiol. 95: 344-350. Abu-abu, WM, Kepinski, S., Rouse, D., Leyser, O., dan
Estelle, M.
(2001) Auksin mengatur SCFTIR 1 degradasi -tergantung dari AUX / IAAproteins. Alam
414: 271-276.
Hasenstein, KH, dan Evans, ML (1988) Pengaruh kation pada
transportasi hormon dalam akar utama Zea mays. Tanaman Physiol.
86: 890-894.
Hsieh, HL, Okamoto, H, Wang, ML, Ang, LH, Matsui, M.,
Goodman, H., Deng, XW. (2000) FIN219, gen Auksin-diatur, mendefinisikan
hubungan antara fitokrom A dan down aliran regulator COP1 mengendalikan
terang Arabidopsis ment mengembangkan-. Gen Dev. 14: 1958-1970.
Iino, M., dan Briggs, WR (1984) distribusi Pertumbuhan selama pertama
kelengkungan phototropic positif dari koleoptil jagung. Plant Cell Lingkungan. 7:
97-104.
Jacobs, M., dan Gilbert, SF (1983) lokalisasi Basal dari pra tersebut
sumptive pembawa auksin dalam sel induk kacang. Ilmu 220: 1297-1300. Jacobs,
M., dan Rubery, PH (1988) terjadi secara alami auksin
regulator transportasi. Ilmu 241: 346-349.
Jacobs, M, dan Ray, PM (1976) Cepat auksin-diinduksi penurunan
ruang bebas pH dan hubungannya dengan pertumbuhan auksin-diinduksi pada jagung dan
kacang. Tanaman Physiol. 58: 203-209.
Kim, Y.-S., Min, J.-K., Kim, D., dan Jung, J. (2001) Asoluble auxin-
protein yang mengikat, ABP57. J. Biol. Chem. 276: 10.730-10.736. Koens, KB,
Nicoloso, FT, Toby, M., Libbenga, KR, dan
Kijne, JW (1995) hasil Auksin kelaparan di G2-penangkapan di sel tembakau
pensiun-berbudaya mempertahankan satu. J. Tanaman Physiol. 147: 391-396. Kuhlemeier, C
dan Reinhardt, D. (2001) Auksin dan Phyllotaxis.
Tren Plant Science. 6: 187-189.
Langridge, WHR, Fitzgerald, KJ, Koncz, C., Schell, J., dan Sza-
berbaring, AA (1989) promotor Dual Agrobacterium tumefaciens
gen synthase mannopine diatur oleh pertumbuhan tanaman Mones hor-. Proc. Natl.
Acad. Sci. Amerika Serikat 86: 3219-3223. Ljung, K., Bhalerao, RP, dan Sandberg, G.
(2001) Tempat dan rumah-
kontrol ostatic biosintesis auksin di Arabidopsis selama pertumbuhan etative sayuran-. Tanaman
J. 29: 325-332.
Lomax, TL (1986) serapan auksin aktif oleh mem- plasma tertentu
operator brane. Di Zat Pertumbuhan tanaman, M. Bopp, ed., Springer, Berlin, pp.
209-213.
Marchant, A., Kargul, J., Mei, ST, Muller, P., Delbarre, A., Perrot-
Rechenmann, C., dan Bennet, MJ (1999) AUX1 mengatur akar gravitropisme di Arabidopsis
dengan memfasilitasi penyerapan auksin dalam jaringan apikal akar. EMBO J. 18:
2066-2073.
McClure, BA, dan Guilfoyle, T. (1989) redistribusi Cepat
auksin-diatur RNA selama gravitropisme. Ilmu 243: 91-93. Mulkey, TI,
Kuzmanoff, KM, dan Evans, ML (1981) corre-
lations antara proton-penghabisan dan pola pertumbuhan selama geotropism dan
fototropisme pada jagung dan bunga matahari. Planta
152: 239-241.
Müller, A., Guan, C., Gälweiler, L., Taenzler, P., Huijser, P.,
Marchant, A., Parry, G., Bennett, M., Wisman, E., dan Palme,
K. (1998) AtPIN2 mendefinisikan lokus Arabidopsis untuk root kontrol itropism
grav-. EMBO J. 17: 6903-6911.
Murphy, AS, rekan WA, dan Taiz, L. (2000) Peraturan auksin
transportasi oleh aminopeptidase dan flavonoid endogen.
Planta 211: 315-324.
Nakazawa, M., Yabe, N., Ishikawa, T., Yamamoto, YY Yoshizumi,
T., Hasunuma, K., Matsui, M. (2001) DFL1, sebuah sive auksin-yang
bertanggung GH3 homolog gen, negatif mengatur sel tunas elon- gation dan
pembentukan akar lateral, dan positif mengatur respon cahaya panjang hipokotil. Tanaman
J. 25: 213-221. Nonhebel, JM, TP Cooney, dan R. Simpson. (1993) The rute,
kontrol dan kompartemensi sintesis auksin. Aust J. Tanaman Physiol. 20:
527-539.
Auksin: The Hormon Pertumbuhan 459
Normanly, JP, Slovin, J., dan Cohen, J. (1995) Rethinking auksin
biosintesis dan metabolisme. Tanaman Physiol. 107: 323-329. Palme, K., dan
Gälweiler, L. (1999) PIN-menunjuk molekul
dasar transportasi auksin. Curr. Opin. Tanaman Biol. 2: 375-381. Parry, G.,
Delbarre, A., Marchant, A., Swarup, R., Napier, R., Per-
membusuk-Rechenmann, C., Bennett, MJ (2001) auksin Novel trans- pelabuhan
inhibitor phenocopy auksin masuknya operator mutasi aux1. Tanaman J. 25: 399-406.
Rekan, WA, Brown, D., Taiz, L., Muday, GK, dan Murphy, AS
(2001) pola akumulasi Flavonol berkorelasi dengan fenotipe opmental opment
mutan testa transparan Ara- bidopsis thaliana. Tanaman Physiol. 126: 536-548.
Peltier, J.-B., dan Rossignol, M. (1996) diferensial Auksin-induced
sensitivitas dari H + ATPase di subfraksi membran plasma dari sel tembakau. Biochem.
Biophys. Res. Commun. 219: 492-496.
Romano, CP, Hein, MB, dan Klee, HJ (1991) Inaktivasi
auksin dalam tembakau diubah dengan gen sintetase asam-lisin indoleacetic
dari savastanoi pseudomonas. Gen Dev. 5: 438-446.
Schmidt, RC, Müller, A., Hain, R., BARTLING, D., dan Weiler, EW
(1996) tanaman tembakau transgenik yang mengekspresikan Arabidopsis thaliana
enzim nitrilase II. Tanaman J. 9: 683-691. Shaw, S., dan Wilkins, MB (1973)
Sumber dan trans- lateral yang
pelabuhan inhibitor pertumbuhan akar geotropically dirangsang dari
Zea mays dan Pisum sativum. Planta 109: 11-26. Sievers, A., Buchen, B., dan
Hodick, D. (1996) Gravity penginderaan di
Tip tumbuh sel. Tren Tanaman Sci. 1: 273-279. Sitbon, F., Edlund, A.,
Gardestrom, P., Olsson, O., dan Sandberg,
G. (1993) kompartemensi dari lism asam indole-3-asetat metabo- di protoplas
yang diisolasi dari daun tipe liar dan IAA- overproducing tanaman tembakau
transgenik. Planta 191: 274-279. Steffens, B., Feckler, C., Palme, K., Kristen, M.,
Bottger, M., dan
Luthen, H. (2001) Sinyal auksin untuk pembengkakan protoplas dirasakan oleh
ABP1 ekstraseluler. Tanaman J. 27: 1-10. Swarup, R., Friml, J., Marchant, A., Ljung,
K., Sandberg, G., Palme,
K., dan Bennett, M. (2001) Lokalisasi auksin permease AUX1 menunjukkan dua
jalur transportasi hormon fungsional yang berbeda beroperasi di Arabidopsis apeks
akar. Gen Dev. 15: 2648-2653.
Ulmasov, T., Murfett, J., Hagen, G., dan Guilfoyle, TJ (1997)
Aux / IAAproteins menekan ekspresi gen reporter con- taining alami dan sangat
aktif respon auksin sintetis KASIH-unsur. Sel tanaman. 9: 1963-1971.
Utsuno, K., Shikanai, T., Yamada, Y., dan Hashimoto, T. (1998)
AGR, locus of AGRAVITROPIC Arabidopsis thaliana,
mengkodekan anggota membran keluarga protein baru. Plant Cell Physiol. 39:
1111-1118.
Penis maju, MA, dan Napier, RM (1997) persepsi Auksin dan sig-
transduksi nal. Di Sinyal Transduksi di Tanaman, P. Aducci, ed., Birkhäuser,
Basel, Swiss, pp. 45-63. Penis maju, MA, Napier, RM, Oliver, S. (1996) Analisis
molekuler dari
auksin spesifik transduksi sinyal. Peraturan Pertumbuhan tanaman. 18: 1-6.
Volkmann, D., dan Sievers, A. (1979) Graviperception di multi-
organ seluler. Di Encyclopedia of Plant Physiology, New Series, Vol. 7, W. Haupt
dan ME Feinleib, eds., Springer, Berlin, pp. 573-600.
Wright, AD, Sampson, MB, Neuffer, MG, Michalczuk, LP,
Slovin, J., dan Cohen, J. (1991) sis Indole-3-acetic acid biosynthe- di mutan
pericarp jagung jeruk, otroph aux- tryptophan. Ilmu 254: 998-1000.
Yoder, TL, Zheng, H.-Q., Todd, P., dan Staehelin, LA (2001)
Amiloplas dinamika sedimentasi di sel kolumela jagung mendukung model baru
untuk aparat gravitasi-sensing akar. Tanaman Physiol. 125: 1045-1060.
460 Bab 19
Young, LM, dan Evans, ML (1994) Kalsium tergantung asym-
Gerakan metrik asam 3H-indole-3-asetat di gravistim- ulated topi akar terisolasi
dari jagung. Pertumbuhan tanaman regul. 14: 235-242.
Young, LM, dan Evans, ML (1996) Pola auksin dan
Gerakan asam absisik di ujung akar primer gravistimulated jagung. Pertumbuhan
tanaman regul. 20: 253-258. Muda, LM, Evans, ML, dan Hertel, R. (1990) Korelasi
antara kelengkungan gravitropic dan gerakan auksin di akar gravistimulated dari Zea
mays. Tanaman Physiol. 92: 792-796.
Zenser, N., Ellsmore, A., Leasure, C., dan Callis, J. (2001) Auksin
memodulasi tingkat degradasi protein Aux / IAA. Proc. Natl. Acad. Sci. Amerika
Serikat 98: 11.795-11.800. Zheng, HQ, dan Staehelin, LA (2001) retic- Nodal
endoplasma
ulum, bentuk khusus dari retikulum endoplasma ditemukan di gravitasi-sensing
sel ujung akar kolumela. Tanaman Physiol. 125: 252-265.
Bab

20 giberelin:
Regulator Tanaman Tinggi

UNTUK HAMPIR 30 TAHUN setelah penemuan auksin pada tahun 1927, dan lebih dari 20 tahun
setelah penjelasannya struktural sebagai asam indole-3-asetat, ilmuwan tanaman Barat mencoba
untuk menganggap peraturan dari semua fenomena perkembangan pada tanaman untuk auksin.
Namun, seperti yang kita akan melihat dalam hal ini dan selanjutnya bab, pertumbuhan dan
perkembangan tanaman diatur oleh beberapa jenis hormon bertindak secara individu dan dalam
konser.
Pada tahun 1950 kelompok kedua hormon, yang giberelin (GAs), ditandai. The giberelin
adalah kelompok besar senyawa terkait (lebih dari 125 diketahui) bahwa, tidak seperti
auksin, didefinisikan oleh struktur kimia mereka daripada oleh aktivitas biologis mereka.
Giberelin yang paling sering dikaitkan dengan promosi pertumbuhan batang, dan penerapan
giberelin untuk tanaman utuh dapat menginduksi peningkatan besar tinggi tanaman. Seperti
yang akan kita lihat, bagaimanapun, giberelin memainkan peran penting dalam berbagai
fenomena fisiologis.

Biosintesis giberelin berada di bawah kontrol genetik, perkembangan, dan lingkungan

yang ketat, dan berbagai mutan giberelin-kekurangan telah diisolasi. tinggi / alel kerdil
Mendel dalam kacang polong adalah contoh yang terkenal. mutan tersebut telah berguna
dalam menjelaskan jalur kompleks biosintesis giberelin.

Kita mulai bab ini dengan menggambarkan penemuan, struktur kimia, dan peran
giberelin dalam mengatur berbagai proses fisiologis, termasuk perkecambahan biji,
mobilisasi cadangan penyimpanan endosperm, menembak pertumbuhan, pembungaan,
pengembangan bunga, dan set buah. Kami kemudian memeriksa biosintesis dari giberelin,
serta identifikasi bentuk aktif dari hormon.

Dalam beberapa tahun terakhir, penerapan pendekatan genetika molekuler telah

menyebabkan kemajuan besar dalam pemahaman kita tentang mekanisme kerja giberelin
pada tingkat molekuler. Kemajuan ini akan dibahas pada akhir bab ini.
462 Bab 20
PENEMUAN DARI giberelin
Meskipun giberelin tidak menjadi diketahui ilmuwan Amerika dan Inggris
sampai tahun 1950-an, mereka telah ditemukan jauh sebelumnya oleh para
ilmuwan Jepang. Petani padi di Asia telah lama dikenal dari penyakit yang
membuat tanaman padi tumbuh tinggi namun menghilangkan produksi
benih. Di Jepang penyakit ini disebut “bibit bodoh,” atau Bakanae,
penyakit.
patologi tanaman menyelidiki penyakit menemukan bahwa tallness
tanaman ini diinduksi oleh bahan kimia yang disekresikan oleh jamur yang
telah terinfeksi tanaman tinggi. kimia ini diisolasi dari filtrat dari jamur
berbudaya dan disebut giberelin setelah Gibberella fujikuroi, nama jamur.
Pada 1930 ilmuwan Jepang berhasil memperoleh kristal murni dari dua
senyawa pertumbuhan aktif jamur, yang mereka sebut giberelin A dan B, tetapi
karena hambatan komunikasi dan Perang Dunia II, informasi tidak
mencapai Barat. Tidak sampai pertengahan 1950-an melakukan dua
kelompok-satu di stasiun penelitian Imperial Chemical Industries (ICI) di
Welyn di Inggris, yang lain di Departemen Pertanian Amerika Serikat
(USDA) di Peoria, Illinois-berhasil dalam penguraian struktur material
bahwa mereka telah dimurnikan dari budaya jamur filtrat, yang mereka
namakan asam giberelat:
OH
BERSAMA H CH 2
HO
COOH O
CH 3
asam giberelat (GA 3)
Pada sekitar para ilmuwan saat yang sama di Universitas Tokyo
diisolasi tiga giberelin dari aslinya giberelin A dan nama mereka giberelin A 1,
giberelin A 2, dan giberelin A 3. giberelin A 3 dan asam giberelat terbukti identik.
Ini menjadi jelas bahwa seluruh keluarga giberelin ada dan di setiap
budaya jamur giberelin yang berbeda mendominasi, meskipun asam
giberelat selalu komponen utama. Seperti yang akan kita lihat, fitur struktural
yang semua giberelin memiliki kesamaan, dan yang mendefinisikan mereka
sebagai sebuah keluarga molekul, adalah bahwa mereka berasal dari ent-
struktur cincin kaurene:
CH 2
ent- Kaurene
Sebagai asam giberelat menjadi tersedia, ahli fisiologi mulai menguji
pada berbagai macam tanaman. tanggapan spektakuler diperoleh dalam
pertumbuhan pemanjangan kerdil dan
tanaman roset, khususnya di kacang polong genetik kerdil ( Pisum sativum), jagung
kerdil ( Zea mays), dan banyak tanaman roset.
Sebaliknya, tanaman yang secara genetik sangat tinggi tidak menunjukkan
respon lebih lanjut untuk giberelin diterapkan. Baru-baru ini, percobaan dengan
kacang polong kerdil dan jagung kerdil telah mengkonfirmasi bahwa pertumbuhan
pemanjangan alami tanaman diatur oleh giberelin, karena kami akan menjelaskan
nanti.
Karena aplikasi giberelin bisa meningkatkan ketinggian tanaman kerdil,
wajar untuk bertanya apakah tanaman mengandung giberelin mereka
sendiri. Tak lama setelah penemuan efek pertumbuhan asam giberelat, zat
giberelin seperti diisolasi dari beberapa spesies tanaman. 1
substansi giberelin-seperti mengacu pada senyawa atau ekstrak yang
memiliki aktivitas biologis giberelin-seperti, tapi yang struktur kimia belum
ditentukan. respon tersebut menunjukkan, tapi tidak membuktikan, bahwa
zat diuji adalah giberelin a.
Pada tahun 1958 sebuah giberelin (giberelin A 1) itu meyakinkan diidentifikasi
dari bibit tanaman (pelari kacang lebih tinggi, Phaseolus coccineus):
OH
BERSAMA H CH 2
HO
COOH O
CH 3
giberelin A 1 ( GA 1)
Karena konsentrasi giberelin dalam biji yang belum matang jauh
melebihi dalam jaringan vegetatif, biji yang belum matang adalah jaringan
pilihan untuk ekstraksi giberelin. Namun, karena konsentrasi giberelin pada
tanaman sangat rendah (biasanya 1-10 bagian per miliar untuk giberelin
aktif dalam jaringan vegetatif dan hingga 1 bagian per juta total giberelin
dalam biji), ahli kimia harus menggunakan truk benih.
Karena semakin banyak giberelin dari jamur dan tanaman sumber yang
ditandai, mereka diberi nomor sebagai giberelin A X ( atau GA X), dimana X adalah
angka, dalam urutan penemuan mereka. Skema ini diadopsi untuk semua
giberelin pada tahun 1968. Namun, jumlah giberelin hanyalah sebuah
kenyamanan katalog, yang dirancang untuk mencegah kekacauan dalam
penamaan giberelin. Sistem ini menyiratkan ada kesamaan kimia dekat
atau hubungan metabolik antara giberelin dengan angka yang berdekatan.
Semua giberelin didasarkan pada ent- kerangka gibberellane:
1 C 12 11
9 13
2
10 20
14
HA
3 5 B 8 D 16 17
4
67
15
H
18 19
ent- struktur Gibberellane
1 Phinney (1983) memberikan account pribadi indah sejarah penemuan
giberelin.
 Giberelin: Regulator Tanaman Tinggi 463

Beberapa giberelin memiliki lengkap 20 karbon (C 20- Gas): Selain itu, seperti disebutkan sebelumnya, banyak tanaman lama-hari rosette
memiliki persyaratan dingin untuk pemanjangan batang dan berbunga, dan
20
H3 C persyaratan ini diatasi dengan giberelin diterapkan.

H CH 2 GAalso mempromosikan pemanjangan ruas di anggota keluarga

6 7 rumput. Target aksi giberelin adalah meristem kabisat meristem -a dekat
H
H 3 C COOH COOH pangkal ruas yang menghasilkan turunan atas dan di bawah. beras

GA 12 ( C 20- giberelin)
Lainnya hanya memiliki 19 (C 19- GAs), kehilangan satu karbon untuk metabolisme.
Ada variasi lain dalam struktur dasar, terutama keadaan oksidasi
karbon 20 (di C 20- GAs) dan jumlah dan posisi gugus hidroksil pada molekul
(lihat Web Topik 20.1 ). Meskipun kebanyakan giberelin hadir dalam
tanaman, analisis genetik telah menunjukkan bahwa hanya sedikit yang
biologis aktif sebagai hormon. Semua yang lain berfungsi sebagai
prekursor atau mewakili bentuk tidak aktif.
Deepwater adalah contoh yang sangat mencolok. Kami akan memeriksa
efek dari giberelin terhadap pertumbuhan padi deepwater di bagian atas
mekanisme pemanjangan batang gibberellininduced kemudian dalam bab
ini.
Meskipun pertumbuhan batang dapat secara dramatis ditingkatkan dengan GAs,
giberelin memiliki efek langsung sedikit pada pertumbuhan akar. Namun,
pertumbuhan akar kerdil ekstrim adalah kurang dari itu tanaman tipe liar, dan
aplikasi giberelin untuk menembak meningkatkan baik tunas dan akar pertumbuhan.
Apakah efek dari giberelin pada pertumbuhan akar langsung atau tidak langsung
saat ini belum terselesaikan.

EFEK giberelin TERHADAP Giberelin Mengatur Transisi dari Juvenile ke Fase

PERTUMBUHAN DAN PEMBANGUNAN Dewasa
Meskipun mereka pada awalnya ditemukan sebagai penyebab penyakit Banyak tanaman keras berkayu tidak berbunga sampai mereka mencapai tahap
padi yang dirangsang ruas perpanjangan, giberelin endogen kematangan tertentu; sampai ke tahap itu mereka dikatakan
mempengaruhi berbagai proses perkembangan. Selain membendung
elongasi, giberelin mengontrol berbagai aspek perkecambahan biji,
termasuk hilangnya dormansi dan mobilisasi cadangan endosperm. Dalam
perkembangan reproduksi, giberelin dapat mempengaruhi transisi dari
remaja ke tahap dewasa, serta inisiasi bunga, penentuan jenis kelamin, dan
set buah. Pada bagian ini kita akan meninjau beberapa fenomena
giberelin-diatur tersebut.

Giberelin Merangsang Pertumbuhan Stem di Dwarf dan Rosette

Tanaman

giberelin Terapan mempromosikan pemanjangan ruas dalam berbagai

spesies. Namun, rangsangan yang paling dramatis terlihat di kerdil dan
roset spesies, serta anggota keluarga rumput. eksogen GA 3 menyebabkan
seperti pemanjangan batang ekstrim pada tanaman kerdil yang mereka
menyerupai varietas tertinggi dari spesies yang sama (Gambar 20.1).
Mendampingi efek ini adalah penurunan ketebalan batang, penurunan
ukuran daun, dan warna hijau pucat daun.

Beberapa tanaman mengasumsikan bentuk roset di hari pendek dan menjalani

menembak elongasi dan berbunga hanya pada hari-hari yang panjang (lihat Bab 24).
Hasil aplikasi giberelin di hal mengunci
(Pertumbuhan batang) pada tanaman disimpan di hari pendek (Gambar 20.2), dan
perbautan normal diatur oleh giberelin endogen.

GAMBAR 20.1 Pengaruh eksogen GA 1 pada normal dan kerdil ( d1) Jagung.
Giberelin merangsang stem dramatis elon- gation di mutan kerdil namun memiliki
sedikit atau tidak berpengaruh pada tipe liar tumbuhan tinggi. (Courtesy of B.
Phinney.)
464 Bab 20
GAMBAR 20.2 Kubis, tanaman lama-hari, tetap sebagai roset di hari pendek,
tetapi dapat didorong untuk baut dan bunga oleh aplikasi giberelin. Dalam
kasus ini diilustrasikan, batang berbunga raksasa yang diproduksi. (© Sylvan
Wittwer / Visual Unlimited.)
menjadi remaja (lihat Bab 24). Remaja dan dewasa tahap sering memiliki
bentuk daun yang berbeda, seperti dalam ivy bahasa Inggris ( Hedera helix) ( lihat
Gambar 24.9). giberelin Terapan dapat mengatur usia muda ini di kedua arah,
tergantung pada spesies. Dengan demikian, dalam bahasa Inggris ivy GA 3 dapat
menyebabkan pembalikan dari dewasa ke keadaan remaja, dan banyak konifer
remaja dapat diinduksi untuk memasuki fase reproduksi dengan aplikasi
giberelin nonpolar seperti GA 4 + GA 7.
(Contoh terakhir adalah satu contoh di mana GA 3 tidak efektif.)
Giberelin Pengaruh Floral Inisiasi dan Jenis Kelamin
Penentuan
Seperti telah dicatat, giberelin dapat menggantikan longday atau persyaratan
dingin untuk berbunga dalam banyak tanaman,
terutama spesies roset (lihat Bab 24). Giberelin demikian komponen dari
stimulus berbunga di beberapa tanaman, tapi rupanya tidak pada orang
lain.
Dalam tanaman di mana bunga yang berkelamin tunggal daripada
hermafrodit, penentuan bunga seks secara genetik diatur. Namun, hal ini
juga dipengaruhi oleh faktor lingkungan, seperti penyinaran dan status gizi,
dan efek lingkungan dapat dimediasi oleh giberelin. Pada jagung, misalnya,
bunga jantan (laki-laki) dibatasi untuk tassel, dan bunga betina (wanita)
yang terkandung dalam telinga. Paparan hari pendek dan malam yang
dingin meningkatkan tingkat giberelin endogen dalam jumbai 100 kali lipat
dan secara bersamaan menyebabkan feminisasi bunga rumbai. Aplikasi
asam giberelat eksogen ke jumbai juga dapat menginduksi bunga betina.
Untuk studi tentang peraturan genetik, koleksi besar mutan jagung yang
telah mengubah pola penentuan seks telah diisolasi. Mutasi pada gen yang
mempengaruhi baik biosintesis giberelin atau hasil transduksi sinyal giberelin
dalam kegagalan untuk menekan perkembangan benang sari dalam bunga
dari telinga (Gambar 20.3). Dengan demikian peran utama giberelin dalam
penentuan jenis kelamin pada jagung tampaknya untuk menekan
perkembangan benang sari (Irish 1996).
Dalam dikotil seperti mentimun, rami, dan bayam, giberelin tampaknya
memiliki efek sebaliknya. Dalam spesies ini, penerapan giberelin
mempromosikan pembentukan bunga jantan, dan inhibitor biosintesis
giberelin mempromosikan pembentukan bunga betina.
Giberelin Promosikan Buah Set
Aplikasi giberelin dapat menyebabkan buah set ( inisiasi pertumbuhan buah
berikut penyerbukan) dan pertumbuhan beberapa buah-buahan, dalam kasus
di mana auksin mungkin tidak berpengaruh. Misalnya, stimulasi buah
ditetapkan oleh giberelin telah diamati di apple ( Malus sylvestris).
Giberelin Promosikan Benih perbenihan
Perkecambahan biji mungkin memerlukan giberelin untuk salah satu dari beberapa
langkah yang mungkin: aktivasi pertumbuhan vegetatif
GAMBAR 20.3 Anter berkembang di telinga mutan kerdil kekurangan
gibberellin- jagung ( Zea mays). ( Bawah) telinga tidak dibuahi dari mutan
kerdil AN1, menunjukkan kepala sari uous conspic-. (Top) Ear dari tanaman
yang telah diobati dengan giberelin. (Courtesy of MG Neuffer.)
 Giberelin: Regulator Tanaman Tinggi 465

embrio, melemahnya pertumbuhan-membatasi lapisan endosperm

sekitarnya embrio, dan mobilisasi cadangan makanan yang disimpan dari
endosperm. Beberapa biji, terutama yang dari tanaman liar, membutuhkan
cahaya atau dingin untuk menginduksi perkecambahan. Dalam biji seperti
dormansi ini (lihat Bab 23) sering dapat diatasi dengan penerapan giberelin.
Sejak perubahan tingkat giberelin sering, namun tidak selalu, terlihat dalam
menanggapi dingin dari biji, giberelin mungkin merupakan regulator alam
dari satu atau lebih dari proses yang terlibat dalam perkecambahan.

Aplikasi giberelin juga merangsang produksi berbagai hidrolase,

terutama α- amilase, oleh lapisan aleuron dari berkecambah biji-bijian
sereal. Aspek tindakan giberelin telah menyebabkan penggunaannya
dalam industri pembuatan bir dalam produksi malt (dibahas pada bagian
berikutnya). Karena ini adalah sistem utama di mana jalur sinyal giberelin
transduksi telah dianalisis, ia akan diperlakukan secara rinci nanti dalam GAMBAR 20.4 Giberelin menginduksi pertumbuhan anggur tanpa biji Thompson.
bab ini. Sekelompok di sebelah kiri adalah trol con tidak diobati. Sekelompok di sebelah
kanan disemprot dengan giberelin selama pengembangan buah. (© Sylvan
Wittwer / Visual Unlimited.)

Giberelin Memiliki Aplikasi Komersial

Kegunaan utama giberelin (GA 3, kecuali dinyatakan sebaliknya), diterapkan
sebagai semprot atau dip, yang mengelola tanaman buah, untuk malt barley, dan
untuk meningkatkan hasil gula dalam tebu. Dalam beberapa tanaman
pengurangan tinggi yang diinginkan, dan ini dapat dicapai dengan menggunakan
inhibitor sintesis giberelin (lihat Web Topik 20.1 ).
produksi buah. Amajor penggunaan giberelin adalah untuk meningkatkan
panjang tangkai buah anggur tanpa biji. Karena sesak batang buah individu,
tandan buah anggur tanpa biji terlalu kompak dan pertumbuhan buah dibatasi.
Giberelin merangsang batang tumbuh lagi, sehingga memungkinkan anggur
untuk tumbuh lebih besar dengan mengurangi pemadatan, dan
mempromosikan pemanjangan buah (Gambar 20.4).
Amixture benziladenin (sitokinin; lihat Bab
21) dan GA 4 + GA 7 dapat menyebabkan buah apel untuk memanjang dan
digunakan untuk memperbaiki bentuk Lezat-jenis apel dalam kondisi tertentu.
Meskipun pengobatan ini tidak mempengaruhi hasil atau rasa, itu dianggap
diinginkan komersial.
Dalam buah jeruk, giberelin delay penuaan, memungkinkan buah ditinggalkan
di pohon lagi untuk memperpanjang periode pasar.
Malting jelai. Malting adalah langkah pertama dalam proses pembuatan bir.
Selama malting, biji barley ( Hordeum vulgare)
diizinkan untuk berkecambah pada suhu yang memaksimalkan produksi
enzim hidrolitik oleh lapisan aleuron. Giberelin kadang-kadang digunakan
untuk mempercepat proses malting. biji yang berkecambah kemudian
dikeringkan dan ditumbuk untuk menghasilkan “malt,” terutama terdiri dari
campuran amilolitik (pati-merendahkan) enzim dan sebagian dicerna pati.
Selama langkah berikutnya “menumbuk”, air ditambahkan dan amilase
dalam malt yang mengkonversi pati sisa, serta menambahkan pati, ke
maltosa disakarida, yang diubah menjadi glukosa oleh maltase enzim. Yang
dihasilkan “wort” ini kemudian direbus untuk menghentikan reaksi. Pada
tahap akhir,
ragi mengubah glukosa dalam wort menjadi etanol melalui fermentasi.
Meningkatkan hasil tebu. Tebu ( Saccharum officinarum) adalah salah
satu relatif sedikit tanaman yang menyimpan karbohidrat sebagai gula
(sukrosa) bukan pati (tanaman gula menyimpan penting lainnya adalah
gula bit). Awalnya dari New Guinea, tebu adalah rumput abadi raksasa
yang bisa tumbuh dari 4 sampai 6 m. sukrosa disimpan dalam vakuola
tengah sel ruas parenkim. Penyemprotan tanaman dengan giberelin dapat
meningkatkan hasil tebu mentah hingga 20 ton per acre, dan hasil gula
dengan 2 ton per acre. Peningkatan ini merupakan hasil dari stimulasi ruas
perpanjangan selama musim dingin.
Menggunakan dalam pemuliaan tanaman. Periode usia muda panjang
dalam runjung dapat merusak program pembiakan dengan mencegah reproduksi
pohon diinginkan selama bertahun-tahun. Penyemprotan dengan GA 4 + GA 7 cukup
dapat mengurangi waktu untuk benih produksi dengan menginduksi kerucut
terbentuk pada pohon-pohon yang sangat muda. Selain itu, promosi bunga jantan
di cucurbits, dan stimulasi lari di roset dua tahunan tanaman seperti bit ( vulgaris
Beta) dan kubis ( Brassica oleracea), adalah efek menguntungkan dari giberelin
yang kadang-kadang digunakan secara komersial dalam produksi benih.
Giberelin biosintesis inhibitor. Lebih besar tidak selalu lebih baik. Dengan
demikian, inhibitor giberelin biosintesis digunakan secara komersial untuk
mencegah pertumbuhan elongasi di beberapa tanaman. Dalam tanaman bunga,
pendek, tanaman gempal seperti bunga lili, krisan, dan poinsettia yang diinginkan,
dan pembatasan pertumbuhan pemanjangan dapat dicapai dengan aplikasi
inhibitor sintesis giberelin seperti Ancymidol (dikenal secara komersial sebagai
A-Rest) atau paclobutrazol (dikenal sebagai Bonzi ).
466 Chapter 20
Tallness juga kerugian bagi tanaman sereal tumbuh dalam dingin, iklim
lembab, seperti terjadi di Eropa, di mana Penginapan dapat menjadi
masalah. Penginapan -the lentur dari batang ke tanah yang disebabkan oleh
berat pengumpulan air di matang kepala-membuat sulit untuk memanen
gandum dengan combine harvester. ruas pendek mengurangi
kecenderungan tanaman untuk mengajukan, meningkatkan hasil tanaman.
Bahkan wheats genetik kerdil tumbuh di Eropa disemprot dengan inhibitor
giberelin biosintesis untuk mengurangi panjang batang dan penginapan.
Namun aplikasi lain dari inhibitor giberelin biosintesis adalah
pembatasan pertumbuhan penanaman semak pinggir jalan.
BIOSINTESIS DAN METABOLISME giberelin
Giberelin merupakan keluarga besar dari asam diterpen dan disintesis oleh
cabang terpenoid jalur,
yang dijelaskan pada Bab 13. Penjelasan dari jalur giberelin biosintesis
tidak akan mungkin terjadi tanpa pengembangan metode sensitif deteksi.
Seperti disebutkan sebelumnya, tanaman mengandung membingungkan
giberelin, banyak yang biologis tidak aktif.
Pada bagian ini kita akan membahas biosintesis GAs, serta faktor-faktor
lain yang mengatur tingkat mapan dari bentuk biologis aktif dari hormon
dalam jaringan tanaman yang berbeda.
Giberelin Apakah Diukur melalui Teknik Fisika Highly
Sensitive
Sistem pengukuran menggunakan respon biologis, yang disebut
bioassay, awalnya penting untuk mendeteksi aktivitas giberelin-seperti di
ekstrak sebagian dimurnikan dan untuk menilai aktivitas biologis giberelin
dikenal (angka yang cukup
ure 20,5). Penggunaan bioassay, bagaimanapun, telah menurun dengan
perkembangan teknik fisik yang sangat sensitif yang memungkinkan
identifikasi yang tepat dan kuantifikasi giberelin dari sejumlah kecil jaringan.
-Kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) dari ekstrak tanaman, diikuti
dengan metode analisis yang sangat sensitif dan selektif kromatografi gas
dikombinasikan dengan spektrometri massa (GC-MS), kini telah menjadi
metode pilihan. Dengan ketersediaan spektrum massa diterbitkan, peneliti
sekarang dapat mengidentifikasi giberelin tanpa memiliki standar murni.
Ketersediaan standar berat-isotop-berlabel giberelin umum, yang dapat diri
mereka secara terpisah terdeteksi pada spektrometer massa,
memungkinkan pengukuran akurat dari tingkat dalam jaringan tanaman
dengan spektrometri massa dengan ini giberelin berat-isotop-dicap sebagai
standar internal untuk kuantifikasi ( Lihat
Web Topik 20,2 ).
Giberelin Apakah disintesis melalui Terpenoid Pathway di
Tiga Tahapan
Giberelin yang diterpenoid tetracyclic terdiri dari empat unit isoprenoid.
Terpenoid adalah senyawa terdiri dari lima karbon (isoprena) blok
bangunan:
OH
CH 2 C CH CH 2
bergabung kepala ke ekor. Para peneliti telah menentukan seluruh jalur
giberelin biosintesis dalam biji dan vegetatif jaringan beberapa spesies
dengan memberi makan berbagai prekursor radioaktif dan intermediet dan
memeriksa produksi senyawa lain dari jalur (Kobayashi et al. 1996).
The giberelin biosintesis jalur dapat dibagi menjadi tiga tahap,
masing-masing berada di kompartemen selular yang berbeda (Gambar
20.6) (Hedden dan Phillips 2000).
GAMBAR 20.5 Gibberellin causes
elongation of the leaf sheath of rice
seedlings, and this response is used in
the dwarf rice leaf sheath bioassay. Here
4-day-old seedlings were treated with dif-
ferent amounts of GA and allowed to
grow for another 5 days. (Courtesy of P.
Davies.)
 Stage 1

OPP OPP

PLASTID

ent- Kaurene ent- Copalyl diphosphate GGPP

OH

Stage 2

CHO
CH 3 COOH COOH COOH COOH COOH

ent- Kaurene GA 12- aldehyde GA 12 GA 53

ENDOPLASMIC RETICULUM
Stage 3 R
CYTOSOL
CH 3

FIGURE 20.6 The three stages of gibberellin biosynthesis. In stage 1,

geranylgeranyl diphosphate (GGPP) is converted to
ent- kaurene via copalyl diphosphate (CPP) in plastids. In stage 2, which
COOH COOH
takes place on the endoplasmic reticulum,
ent- kaurene is converted to GA 12 or GA 53, depending on whether the GA is GA 12 ( R = H) GA 53 ( R

hydroxylated at carbon 13. In most plants the 13-hydroxylation pathway = OH)

predominates, though in Arabidopsis and some others the non-13-OH

pathway is the main pathway. In stage 3 in the cytosol, GA 12 or GA 53 GA 20-oxidase

R
are converted other GAs. This conversion proceeds with a series of
oxidations at carbon 20. In the 13-hydroxylation pathway this leads to the
HOCH 2
production of GA 20. GA 20 is then oxidized to the active gibberellin, GA 1, by a
3 β- hydroxyla- tion reaction (the non-13-OH equivalent is GA 4). Finally,
hydroxylation at carbon 2 converts GA 20 and GA 1 to the inactive forms GA 29
and GA 8, respectively.
COOH COOH

GA 15- OL (R = H) GA 44- OL
(R = OH)

Active GA GA 20-oxidase
R R
R

GA 3-oxidase GA 20-oxidase
CO CO

HO COOH O COOH O

GA 4 ( R = H) GA 1 ( R GA 9 ( R = H) GA 20 ( R COOH COOH CHO

= OH) = OH)
GA 24 ( R = H) GA 19 ( R
= OH)
GA 2-oxidase GA 2-oxidase

R Inactivation R

HO HO

CO CO

HO COOH O COOH O

GA 34 ( R = H) GA 8 ( R GA 51 ( R = H) GA 29 ( R
= OH) = OH)
468 Chapter 20

Stage 1: Production of terpenoid precursors and ent-kaurene in Geranylgeranyl diphosphate

plastids. The basic biological isoprene unit is isopentenyl diphosphate ls

(IPP). 2 IPP used in gibberellin biosynthesis in green tissues is synthesized
Copalyl diphosphate
in plastids from glyceraldehyde-3-phosphate and pyruvate (Lichtenthaler et
al. 1997). However, in the endosperm of pumpkin seeds, which are very
ent- Kaurene
rich in gibberellin, IPP is formed in the cytosol from mevalonic acid, which is
itself derived from acetyl-CoA. Thus the IPP used to make gibberellins may na

arise from different cellular compartments in different tissues. GA 12- aldehyde

GA 12
Once synthesized, the IPP isoprene units are added successively to
produce intermediates of 10 carbons (geranyl diphosphate), 15 carbons
GA 53
(farnesyl diphosphate), and 20 carbons (geranylgeranyl diphosphate,
GA 20-oxidase
GGPP). GGPP is a precursor of many terpenoid compounds, including
carotenoids and many essential oils, and it is only after GGPP that the GA 44
pathway becomes specific for gibberellins.
GA 20-oxidase

The cyclization reactions that convert GGPP to ent- kaurene represent GA 19

the first step that is specific for the gibberellins (Figure 20.7). The two GA 20-oxidase
enzymes that catalyze the reactions are localized in the proplastids of
GA 20
meristematic shoot tissues, and they are not present in mature chloroplasts
(Aach et al. 1997). Thus, leaves lose their ability to synthesize gibberellins GA 3-oxidase GA 2-oxidase
le sln
from IPP once their chloroplasts mature.
GA 1 GA 29

sln GA 2-oxidase

Compounds such as AMO-1618, Cycocel, and Phosphon D are specific GA 8

inhibitors of the first stage of gibberellin biosynthesis, and they are used as
FIGURE 20.7 A portion of the gibberellin biosynthetic path- way showing the
growth height reducers.
abbreviations and location of the mutant genes that block the pathway in
pea and the enzymes involved in the metabolic steps after GA 53.
Stage 2: Oxidation reactions on the ER form GA 12 and GA 53.
In the second stage of gibberellin biosynthesis, a methyl group
on ent- kaurene is oxidized to a carboxylic acid, followed by contraction of
the B ring from a six- to a five-carbon ring to give GA 12- aldehyde. GA 12- aldehyde
is then oxidized to GA 12, the first gibberellin in the pathway in all plants and P450 monooxygenases specifically inhibit this stage of gibberellin
thus the precursor of all the other gibberellins (see Figure 20.6). biosynthesis before GA 12- aldehyde, and they are also growth retardants.

Many gibberellins in plants are also hydroxylated on carbon 13. The
hydroxylation of carbon 13 occurs next, forming GA 53 from GA 12. All the
enzymes involved are monooxygenases that utilize cytochrome P450 in
their reactions. These P450 monooxygenases are localized on the
endoplasmic reticulum. Kaurene is transported from the plastid to the
endoplasmic reticulum, and is oxidized en route to kaurenoic acid by
kaurene oxidase, which is associated with the plastid envelope (Helliwell et
al. 2001).
Further conversions to GA 12 take place on the endoplasmic reticulum.
Paclobutrazol and other inhibitors of
Stage 3: Formation in the cytosol of all other gibberellins from
GA 12 or GA 53. All subsequent steps in the pathway (see Figure 20.6) are
carried out by a group of soluble dioxygenases in the cytosol. These
enzymes require 2oxoglutarate and molecular oxygen as cosubstrates, and
they use Fe 2+ and ascorbate as cofactors.
The specific steps in the modification of GA 12 vary from species to
species, and between organs of the same species. Two basic chemical
changes occur in most plants:
1. Hydroxylation at carbon 13 (on the endoplasmic reticulum) or carbon 3,
or both.

2. A successive oxidation at carbon 20 (CH 2 → CH 2 OH

2 As noted in Chapter 13, IPP is the abbreviation for isopen- tenyl pyro phosphate, → CHO). The final step of this oxidation is the loss of carbon 20 as CO 2
an earlier name for this compound. Similarly, the other pyrophosphorylated
( see Figure 20.6). When these reactions involve gibberellins initially
intermediates in the pathway are now referred to as di phosphates, but they
hydroxylated at C-13, the resulting gibberellin is GA 20.
continue to be abbreviated as if they were called pyro phos- phates.

GA 20 is then converted to the biologically active form,


GA 1, by hydroxylation of carbon 3. (Because this is in the beta configuration
[drawn as if the bond to the hydroxyl group were toward the viewer], it is
referred to as 3 β-
hydroxylation.)
Finally, GA 1 is inactivated by its conversion to GA 8 by a hydroxylation
on carbon 2. This hydroxylation can also remove GA 20 from the biosynthetic
pathway by converting it to GA 29.
Inhibitors of the third stage of the gibberellin biosynthetic pathway
interfere with enzymes that utilize 2-oxoglutarate as cosubstrates. Among
these, the compound prohexadione (BX-112), is especially useful because
it specifically inhibits GA3-oxidase, the enzyme that converts inactive GA 20 to
growth-active GA 1.
The Enzymes and Genes of the Gibberellin Biosynthetic
Pathway Have Been Characterized
The enzymes of the gibberellin biosynthetic pathway are now known, and
the genes for many of these enzymes have been isolated and characterized
(see Figure 20.7). Most notable from a regulatory standpoint are two
biosynthetic enzymes—GA 20-oxidase (GA20ox) 3 and GA 3-oxidase
(GA3ox)—and an enzyme involved in gibberellin metabolism, GA2-oxidase
(GA2ox):
• GA 20-oxidase catalyzes all the reactions involving the successive
oxidation steps of carbon 20 between GA 53
and GA 20, including the removal of C-20 as CO 2.
• GA 3-oxidase functions as a 3 β- hydroxylase, adding a hydroxyl group
to C-3 to form the active gibberellin, GA 1. ( The evidence demonstrating
that GA 1
is the active gibberellin will be discussed shortly.)
• GA 2-oxidase inactivates GA 1 by catalyzing the addition of a hydroxyl
group to C-2.
The transcription of the genes for the two gibberellin biosynthetic
enzymes, as well as for GA2-oxidase, is highly regulated. All three of these
genes have sequences in common with each other and with other enzymes
utilizing 2oxoglutarate and Fe 2+ as cofactors. The common sequences
represent the binding sites for 2-oxoglutarate and Fe 2+.
Gibberellins May Be Covalently Linked to Sugars
Although active gibberellins are free, a variety of gibberellin
glycosides are formed by a covalent linkage between gibberellin
and a sugar. These gibberellin conjugates are particularly
CO
prevalent in some seeds. The conjugating sugar is usually
CH 3
3 GA 20-oxidase means an enzyme that oxidizes at carbon 20; it
is not the same as GA 20, which is gib- berellin 20 in the GA FIGURE 20.8 Conversion of GA 20 to GA 1 by GA 3 β- hydroxylase, which adds a
numbering scheme. hydroxyl group (OH) to carbon 3 of GA 20.
Gibberellins: Regulators of Plant Height 469
glucose, and it may be attached to the gibberellin via a carboxyl group
forming a gibberellin glycoside, or via a hydroxyl group forming a gibberellin
glycosyl ether.
When gibberellins are applied to a plant, a certain proportion usually
becomes glycosylated. Glycosylation therefore represents another form of
inactivation. In some cases, applied glucosides are metabolized back to
free GAs, so glucosides may also be a storage form of gibberellins
(Schneider and Schmidt 1990).
GA 1 Is the Biologically Active Gibberellin
Controlling Stem Growth
Knowledge of biosynthetic pathways for gibberellins reveals where and how
dwarf mutations act. Although it had long been assumed that gibberellins
were natural growth regulators because gibberellin application caused
dwarf plants to grow tall, direct evidence was initially lacking. In the early
1980s it was demonstrated that tall stems do contain more bioactive
gibberellin than dwarf stems have, and that the level of the endogenous
bioactive gibberellin mediates the genetic control of tallness (Reid and
Howell 1995).
The gibberellins of tall pea plants containing the homozygous Le allele
(wild type) were compared with dwarf plants having the same genetic
makeup, except containing the le allele (mutant). Le and le are the two
alleles of the gene that regulates tallness in peas, the genetic trait first
investigated by Gregor Mendel in his pioneering study in
1866. We now know that tall peas contain much more bioactive GA 1 than
dwarf peas have (Ingram et al. 1983).
As we have seen, the precursor of GA 1 in higher plants is GA 20 ( GA 1 is
3 β- OH GA 20). If GA 20 is applied to homozygous dwarf ( le) pea plants, they
fail to respond, although they do respond to applied GA 1. The implication is
that the Le
gene enables the plants to convert GA 20 to GA 1. Metabolic studies using
both stable and radioactive isotopes demonstrated conclusively that the Le gene
encodes an enzyme that 3 β- hydroxylates GA 20 to produce GA 1 ( Figure
20.8).
Mendel’s Le gene was isolated, and the recessive le allele was shown
to have a single base change leading to a defective enzyme only
one-twentieth as active as the wild-type
OH OH
H CH 2 H CH 2
+ OH GA 3 b- hydroxylase
CO
HO
H COOH O H COOH O
CH 3
GA 20 GA 1
470 Chapter 20

enzyme, so much less GA 1 is produced and the plants are dwarf (Lester et
al. 1997).

Endogenous GA 1 Levels Are Correlated with

Tallness
Although the shoots of gibberellin-deficient le dwarf peas are much shorter
than those of normal plants (internodes of 3 cm in mature dwarf plants
versus 15 cm in mature normal plants), the mutation is “leaky” (i.e., the
mutated gene produces a partially active enzyme) and some endogenous
GA 1
remains to cause growth. Different le alleles give rise to peas differing in
their height, and the height of the plant has been correlated with the amount
of endogenous GA 1 ( Figure 20.9).
There is also an extreme dwarf mutant of pea that has even fewer
gibberellins. This dwarf has the allele na ( the wild-type allele is Na), which
completely blocks gibberellin biosynthesis between ent- kaurene and GA 12- aldehyde
(Reid and Howell 1995). As a result, homozygous ( nana) mutants, which are
almost completely free of gibberellins, achieve a stature of only about 1 cm
at maturity (Figure 20.10).

However, nana plants may still possess an active GA3 β-

hydroxylase encoded by Le, and thus can convert GA 20 to GA 1. If a nana
naLe shoot is grafted onto a dwarf le plant, the resulting plant is tall
because the nana shoot tip can convert the GA 20 from the dwarf into GA 1.

Such observations have led to the conclusion that GA 1

is the biologically active gibberellin that regulates tallness in peas (Ingram
et al. 1986; Davies 1995). The same result has been obtained for maize, a
monocot, in parallel studies using genotypes that have blocks in the
gibberellin biosynthetic pathway. Thus the control of stem elongation by GA 1

appears to be universal.
Although GA 1 appears to be the primary active gibberellin in stem
growth for most species, a few other gib-

16

GA 1 content of pea plants Le

possessing three different
12
Le le alleles
Length between nodes 4 and 6 (cm)

le- 1
4
le- 2

0.01 0.1 1.0

Endogenous GA 1 ( ng per plant) Ultradwarf: no Dwarf: Tall: Ultratall:
GAs contains contains contains no
FIGURE 20.9 Stem elongation corresponds closely to the level of GA 1. Here nana GA 20 GA 1 GAs
the GA 1 content in peas with three dif- ferent alleles at the Le locus is plotted Na le Na Le na la cry s
against the internode elongation in plants with those alleles. The allele le- 2
is a more intense dwarfing allele of Le than is the regular le- 1 allele. There is
a close correlation between the GA level and internode elongation. (After FIGURE 20.10 Phenotypes and genotypes of peas that differ in the gibberellin content
Ross et al. 1989.) of their vegetative tissue. (All alleles are homozygous.) (After Davies 1995.)
 Gibberellins: Regulators of Plant Height 471

berellins have biological activity in other species or tissues. For example,

GA 3, which differs from GA 1 only in having one double bond, is relatively
rare in higher plants but is able to substitute for GA 1 in most bioassays:

OH

CO H CH 2
HO

COOH O
CH 3

Gibberellic acid (GA 3)

GA 4, which lacks an OH group at C-13, is present in both Arabidopsis and

members of the squash family (Cucurbitaceae). It is as active as GA 1, or
even more active, in some bioassays, indicating that GA 4 is a bioactive
gibberellin in the species where it occurs (Xu et al. 1997). The structure of
GA 4 looks like this:

FIGURE 20.11 Gibberellin is synthesized mainly in the shoot apex and in

CO H CH 2
HO
H
CH 3
COOH O
Gibberellin A 4 ( GA 4)
Gibberellins Are Biosynthesized in Apical Tissues
The highest levels of gibberellins are found in immature seeds and
developing fruits. However, because the gibberellin level normally
decreases to zero in mature seeds, there is no evidence that seedlings
obtain any active gibberellins from their seeds.
Work with pea seedlings indicates that the gibberellin biosynthetic
enzymes and GA3ox are specifically localized in young, actively growing
buds, leaves, and upper internodes (Elliott et al. 2001). In Arabidopsis, GA20ox Elliott et al.
is expressed primarily in the apical bud and young leaves, which thus
appear to be the principal sites of gibberellin synthesis (Figure 20.11).
young developing leaves. This false color image shows light emitted by
transgenic Arabidopsis plants express- ing the firefly luciferase coding
sequence coupled to the GA20ox gene promoter. The emitted light was
recorded by a CCD camera after the rosette was sprayed with the substrate
luciferin. The image was then color-coded for intensity and superimposed on
a photograph of the same plant. The red and yellow regions correspond to
the highest light intensity. (Courtesy of Jeremy P. Coles, Andrew L. Phillips,
and Peter Hedden, IACR-Long Ashton Research Station.)
available and the enzymes of gibberellin biosynthesis and degradation are
functional.
For example, the application of gibberellin causes a down-regulation of
the biosynthetic genes—GA20ox and GA3ox—and an elevation in
transcription of the degradative gene—GA2ox (Hedden and Phillips 2000;
2001). Amutation in the GA2-oxidase gene, which prevents GA 1 from being
degraded, is functionally equivalent to applying exogenous gibberellin to the
plant, and produces the same effect on the biosynthetic gene transcription.

The gibberellins that are synthesized in the shoot can be transported to
the rest of the plant via the phloem. Intermediates of gibberellin
biosynthesis may also be translocated in the phloem. Indeed, the initial
steps of gibberellin biosynthesis may occur in one tissue, and metabolism
to active gibberellins in another.
Gibberellins also have been identified in root exudates and root
extracts, suggesting that roots can also synthesize gibberellins and
transport them to the shoot via the xylem.
Gibberellin Regulates Its Own Metabolism
Endogenous gibberellin regulates its own metabolism by either switching on
or inhibiting the transcription of the genes that encode enzymes of
gibberellin biosynthesis and degradation (feedback and feed-forward
regulation, respectively). In this way the level of active gibberellins is kept
within a narrow range, provided that precursors are
Conversely, a mutation that lowers the level of active gibberellin, such
as GA 1, in the plant stimulates the transcription of the biosynthetic
genes—GA20ox and GA3ox— and down-regulates the degradative
enzyme—GA2ox. In peas this is particularly evident in very dwarf plants,
such as those with a mutation in the LS gene (CPP synthase) or even more
severely dwarf na plants (defective GA 12- aldehyde synthase) (Figure
20.12).
Environmental Conditions Can Alter the Transcription of
Gibberellin Biosynthesis Genes
Gibberellins play an important role in mediating the effects of environmental
stimuli on plant development. Environmental factors such as photoperiod
and temperature can alter the levels of active gibberellins by affecting gene
transcription for specific steps in the biosynthetic pathway (Yamaguchi and
Kamiya 2000).
472 Chapter 20

FIGURE 20.12 Northern blots of the mRNA for the Apical Leaflets Internodes Roots
enzymes of gibberellin biosynthesis in different ls LS ls LS ls LS ls LS
tissues of peas. The more intense the band, the
more mRNAwas present. The plants designated LS
are tall wild-type plants. Those designated ls are
PsGA20ox1
very dwarf mutants due to a defective copalyl
diphosphate synthase that creates a block in the
GA biosynthesis pathway. The differences in the
spot intensity show that a low level of GA 1 in the
mutant ls plants causes the upregulation of GA 1 biosynthesis
PsGA3ox1
by GA20ox and GA3ox, and a repres- sion of
GA 1 breakdown by GA2ox. (From Elliott et al.
2001.)

PsGA2ox1

Light regulation of GA 1 biosynthesis. The presence of light has
many profound effects. Some seeds germinate only in the light, and in such
cases gibberellin application can stimulate germination in darkness. The
promotion of germination by light has been shown to be due to increases in
GA 1 levels resulting from a light-induced increase in the transcription of the
gene for GA3ox, which converts GA 20 to GA 1 ( Toyomasu et al. 1998). This
effect shows red/far-red photoreversibility and is mediated by phytochrome
(see Chapter 17).
When a seedling becomes exposed to light as it emerges from the soil,
it changes its form (see Chapter 17)—a process referred to as de-etiolation.
One of the most strik-
ing changes is a decrease in the rate of stem elongation such that the stem
in the light is shorter than the one in the dark. Initially it was assumed that
the light-grown plants would contain less GA 1 than dark-grown plants.
However, light-grown plants turned out to contain more GA 1 than
dark-grown plants—indicating that de-etiolation is a complex process
involving changes in the level of GA 1, as well as changes in the
responsiveness of the plant to GA 1.
In peas, for example, the level of GA 1 initially falls within 4 hours of
exposure to light because of an increase in transcription of the gene for
GA2ox, leading to an increase in GA 1 breakdown (Figure 20.13A). The level
of GA 1 remains low for a day but then increases, so that by

(A) (B)

7 30

6
25

5
GA 1 level ng g FW –1

Rate of elongation (mm d- 1)

20

15
3
Rapid decline in GA 1
due to degradation 10
2

1
5

0 0
Dark Dark to 4 Dark to 24 Dark to 120 Continuous Dark Dark to light Light
hours light hours light hours light light 1D after GA 1

application

FIGURE 20.13 When a plant grows in the light, the rate of extension slows
down through regulation by changes in hormone levels and sensitivity. (A)
When dark-grown pea seedlings are transferred to light, GA 1 level drops
rapidly because of metabolism of GA 1, but then increases to a higher level,
similar to that of light-grown plants, over the next 4 days. (B) To investigate
the GA 1 response in various light regimes, 10 mg of GA 1 was applied to the
internode of
GA-deficient na plants in darkness, 1 day after the start of the light, or 6
days of continuous light, and growth in the next 24 hours was measured.
The results show that the gib- berellin sensitivity of pea seedlings falls
rapidly upon trans- fer from darkness to light, so the elongation rate of
plants in the light is lower than in the dark, even though their total GA 1 content
is higher. (After O’Neill et al. 2000.)
 Gibberellins: Regulators of Plant Height 473

another inhibitor, BX-112, which blocks the

production of GA 1 from GA 20, can be
overcome only by GA 1
(Figure 20.16B). This result demonstrates that
the rise in GA 1 is the crucial factor in
regulating spinach stem growth.

The level of GA20-oxidase mRNA in

spinach tissues, which occurs in the highest
amount in shoot tips and elongating stems
(see Figure 20.11), is increased under
long-day conditions (Wu et al. 1996). The fact
that GA20oxidase is the enzyme that converts
GA 53 to GA 20 ( see Figure 20.7) explains why
the concentration of GA 20

was found to be higher in spinach under

long-day conditions (Zeevaart et al. 1993).
FIGURE 20.14 Spinach plants undergo stem and petiole elongation only in long days, remaining in a
rosette form in short days. Treatment with the GA biosynthe- sis inhibitor AMO-1618 prevents stem and
petiole elongation and maintains the rosette growth habit even under long days. Gibberellic acid can Photoperiod control of tuber
reverse the inhibitory effect of AMO-1618 on stem and petiole elongation. As shown in Figure
formation. Potato tuberization is another
process regulated by photoperiod (Figure
20.16, long days cause changes in the gibberellin content of the plant. (Courtesy of
J. A. D. Zeevaart.) 20.17). Tubers form on wild potatoes only in
short days (although the requirement for short

5 days there is a fivefold increase in the GA 1 content of the stems, even
though the stem elongation rate is lower (Figure 20.13B) (O’Neill et al.
2000). The reason that growth slows down despite the increase in GA 1 level
is that the plants are now severalfold less sensitive to the GA 1 present.
As will be discussed later in the chapter, sensitivity to active gibberellin
is governed by components of the gibberellin signal transduction pathway.
days has been bred out of many cultivated varieties), and this tuberization
can be blocked by applications of gibberellin. The transcription of GA20ox
was found to fluctuate during the light–dark cycle, leading to lower levels of
GA 1 in short days. Potato plants overexpressing the GA20ox gene showed
delayed tuberization, whereas trans-

Photoperiod regulation of GA 1 biosynthesis. When plants that

Level at the start of long days (ng/g fresh
require long days to flower (see Chapter 24) are shifted from short days to weight): GA 20: 1.4 GA 1: 1.0 GA 8: 18.0
long days, gibberellin metabolism is altered. In spinach ( Spinacia oleracea), in
short days, when the plants maintain a rosette form (Figure 20.14), the level
1500
of gibberellins hydroxylated at carbon 13 is relatively low. In response to
increasing day length, the shoots of spinach plants begin to elongate after
Percent change in amount

about 14 long days.

(inactive GA1
1000
precursor)
The levels of all the gibberellins of the carbon 13–hydroxylated GA 8
(inactive GA1
gibberellin pathway (GA 53 → GA 44 →
metabolite)
GA 19 → GA 20 → GA 1 → GA 8) start to increase after about 4 days (Figure 500
20.15). Although the level of GA 20 increases 16-fold during the first 12 days,
it is the fivefold increase in GA 1 that induces stem growth (Zeevaart et al. GA 1 ( active GA, responsible for
growth)
1993).
The dependence of stem growth on GA 1 has been shown through the 0 4 8 12
use of different inhibitors of gibberellin synthesis and metabolism. The Number of long days GA 20
inhibitors AMO-1618 and BX-112 both prevent internode elongation
FIGURE 20.15 The fivefold increase in GA 1 is what causes growth in spinach
(bolting). The effect of AMO-1618, which blocks gibberellin biosynthesis
exposed to an increasing number of long days but before stem elongation
prior to GA 12- aldehyde, can be overcome by applications of GA 20 ( Figure
starts at about 14 days. (After Davies 1995; redrawn from data in Zeevaart
20.16A). However, the effect of et al.
1993.)
 474 Chapter 20

(A) AMO-1618 (B) BX-112

AMO-1618, which blocks GA biosynthesis at the cyclization In contrast, BX-112, which blocks the conversion of GA 20 to
step, does not inhibit growth in the presence of either GA 20 or GA 1, inhibits growth even in the presence of GA20.
GA 1.

Control AMO-1618
AMO-1618 + GA 20
40 40

AMO-1618 + GA 1 BX-112 + GA 1
Stem length (cm)

Stem length (cm)

30 30

20 20

10 10
Control BX-112 BX-112 + GA 20

0 12 14 16 18 20 22 24 0 12 14 16 18 20 22 24

Number of long days Number of long days

FIGURE 20.16 The use of specific growth retardants (GA biosynthesis inhibitors) and the reversal of the
effects of the growth retardants by different GAs can show which steps in GA biosynthesis are regulated
by environmental change, in this case the effect of long days on stem growth in spinach. The control
lacks inhibitors or added GA. (After Zeevaart et al. 1993.)

formation with the antisense gene for GA20ox promoted tuberization, dence that many phytochrome effects are in part due to modulation of the
demonstrating the importance of the transcription of this gene in the levels of gibberellins through changes in the transcription of the genes for
regulation of potato tuberization (Carrera et al. 2000). gibberellin biosynthesis and degradation.

In general, de-etiolation, light-dependent seed germination, and the

photoperiodic control of stem growth in rosette plants and tuberization in Temperature effects. Cold temperatures are required for the
potato are all mediated by phytochromes (see Chapter 17). There is germination of certain seeds (stratification) and for flowering in certain
mounting evi- species (vernalization) (see Chapter

FIGURE 20.17 Tuberization of potatoes is promoted

by short days. Potato ( Solanum tuberosum spp. Andigena)
plants were grown under either long days or short
days. The formation of tubers in short days is
associated with a decline in GA 1

levels (see Chapter 24). (Courtesy of S. Jackson.)

Long days Short days
 Gibberellins: Regulators of Plant Height 475

15

Decapitated
+ IAA

10 7 7 7
GA 1 level, ng.g –1

5
Intact
6 6 6

Decapitated
0

Intact Decapitated Decapitated

+ IAA
FIGURE 20.18 Decapitation reduces, and IAA (auxin) restores, endogenous GA 1
content in pea plants. Numbers refer to the leaf node. (From Ross et al. 2000.)

24). For example, a prolonged cold treatment is required for both the stem plant are the results of many combined signals. In addition, hormones can
elongation and the flowering of Thlaspi arvense ( field pennycress), and influence each other’s biosynthesis so that the effects produced by one
gibberellins can substitute for the cold treatment. hormone may in fact be mediated by others.

In the absence of the cold treatment, ent- kaurenoic acid accumulates to For example, it has long been known that auxin induces ethylene
high levels in the shoot tip, which is also the site of perception of the cold biosynthesis. It is now evident that gibberellin can induce auxin biosynthesis
stimulus. After cold treatment and a return to high temperatures, the ent- kaurenoic
and that auxin can induce gibberellin biosynthesis. If pea plants are
acid is converted to GA 9, the most active gibberellin for stimulating the decapitated, leading to a cessation in stem elongation, not only is the level
flowering response. These results are consistent with a cold-induced of auxin lowered because its source has been removed, but the level of GA 1
increase in the activity of ent- kaurenoic acid hydroxylase in the shoot tip in the upper stem drops sharply. This change can be shown to be an auxin
(Hazebroek and Metzger 1990). effect because replacing the bud with a supply of auxin restores the GA 1 level
(Figure 20.18).

Auxin Promotes Gibberellin Biosynthesis The presence of auxin has been shown to promote the transcription of GA3ox
Although we often discuss the action of hormones as if they act singly, the and to repress the transcription of
net growth and development of the GA2ox ( Figure 20.19). In the absence of auxin the reverse occurs. Thus the
apical bud promotes growth not only through the direct biosynthesis of
(A) auxin, but also through the auxin-induced biosynthesis of GA 1 ( Figure
Decap.
Intact Decap, + IAA 20.20) (Ross et al. 2000; Ross and O’Neill 2001).

Figure 20.21 summarizes some of the factors that modulate the active
gibberellin level through regulation of the transcription of the genes for
GA3ox mRNA (GA 20
to GA 1) gibberellin biosynthesis or metabolism.

Dwarfness Can Now Be Genetically Engineered

GA2ox mRNA (GA 20 The characterization of the gibberellin biosynthesis and metabolism
to GA 29,
genes— GA20ox, GA3ox, and GA2ox —has
and GA 1 to GA 8)

(B)
0h 2h 4h 6h 8h
Con. IAA Con. IAA Con. IAA Con. IAA Con. IAA Intact

FIGURE 20.19 ( A) IAA up-regulates the

transcription of GA 3 β- hydroxy- lase (forming
GA 1), and down-regu- lates that of GA
2-oxidase, which destroys GA 1. ( B) The
increase in GA 3 β- hydroxylase in response to
IAA can be seen by 2 hours. Con., control.
(From Ross et al. 2000.)
GA3ox mRNA
476 Chapter 20

Apical
bud

IAA

IAA growth

GA 20 GA 1 growth

IAA

GA 29 GA 8

FIGURE 20.22 Genetically engineered dwarf wheat plants. The

untransformed wheat is shown on the extreme left. The three plants on the
right were transformed with a gib- berellin 2-oxidase cDNA from bean under
the control of a constitutive promoter, so that the endogenous active GA 1

was degraded. The varying degrees of dwarfing reflects varying

degrees of overexpression of the foreign gene. (Photo from Hedden and
FIGURE 20.20 IAA (from the apical bud) promotes and is required for GA 1 biosynthesis
Phillips 2000, courtesy of Andy Phillips.)
in subtending internodes. IAA also inhibits GA 1 breakdown. (From Ross
and O’Neill
2001.)

enabled genetic engineers to modify the transcription of these genes to
alter the gibberellin level in plants, and thus affect their height (Hedden and
Phillips 2000). The desired effect is usually to increase dwarfness because
plants grown in dense crop communities, such as cereals, often grow too
tall and thus are prone to lodging. In addition, because gibberellin regulates
bolting, one can prevent bolting by inhibiting the rise in gibberellin. An
example of the latter is the inhibition of bolting in sugar beet.
Sugar beet is a biennial, forming a swollen storage root in the first
season and a flower and seed stalk in the second. To extend the growing
season and obtain bigger beets, farmers sow the beets as early as possible
in the spring, but sowing too early leads to bolting in the first year, with the
result that no storage roots form. A reduction in the capacity to make
gibberellin inhibits bolting, allowing earlier sowing of the seeds and thus the
growth of larger beets.

Reductions in GA 1 levels have recently been achieved in

such crops as sugar beet and wheat, either by the
transformation of plants with antisense constructs of the GA20ox
or GA3ox genes, which encode the enzymes leading to
the synthesis of GA 1, or by overexpressing the gene
Auxin responsible for GA 1 metabolism: GA2ox.

GA20 ox GA3 ox Either approach results in dwarfing in wheat (Figure

GA response 20.22) or an inhibition of bolting in rosette plants such as
GA 12/53 GA 9/20 GA 4/1
pathway
Photoperiod (stem Red light beet.
elongation and (germination) The inhibition of seed production in such transgenic
tuberization)
plants can be overcome by sprays of gibberellin solution,
GA2 ox
provided that the reduction in gibberellin has been
achieved by blocking the genes for GA20ox or GA3ox,
Multiple genes with
GA 34/8 the gibberellin biosynthetic enzymes. A similar strategy
= differential expression
has recently been applied to turf grass, keeping the grass
short with no seedheads, so that mowing can be virtually
FIGURE 20.21 The pathway of gibberellin biosynthesis showing the iden- tities of the genes
eliminated—a boon for homeowners!
for the metabolic enzymes and the way that their tran- scription is regulated by feedback,
environment, and other endogenous hormones.
 Gibberellins: Regulators of Plant Height 477

PHYSIOLOGICAL MECHANISMS OF
GIBBERELLIN-INDUCED GROWTH
As we have seen, the growth-promoting effects of gibberellin are most
evident in dwarf and rosette plants. When dwarf plants are treated with
gibberellin, they resemble the tallest varieties of the same species (see
Figure 20.1). Other examples of gibberellin action include the elongation of
hypocotyls and of grass internodes.

Node
Aparticularly striking example of internode elongation is found in 2
deep-water rice ( Oryza sativa). In general, rice plants are adapted to
conditions of partial submergence. To enable the upper foliage of the plant
Lag period

Growth (mm)
to stay above water, the internodes elongate as the water level rises. Intercalary
Deep-water rice has the greatest potential for rapid internode elongation. meristem internode section
Under field conditions, growth rates of up to 25 cm per day have been Leaf
Node GA 3 added to
measured.

The initial signal is the reduced partial pressure of O 2

resulting from submergence, which induces ethylene biosynthesis (see 1
Chapter 22). The ethylene trapped in the submerged tissues, in turn,
Control internode section (no GA 3 added)
reduces the level of abscisic acid (see Chapter 23), which acts as an
antagonist of gibberellin. The end result is that the tissue becomes more
responsive to its endogenous gibberellin (Kende et al.

1998). Because inhibitors of gibberellin biosynthesis block the stimulatory

effect of both submergence and ethylene on growth, and exogenous
gibberellin can stimulate growth in the absence of submergence, gibberellin
appears to be the hormone directly responsible for growth stimulation.
GA-stimulated growth in deep-water rice can be studied in an excised
stem system (Figure 20.23). The addition of gibberellin causes a marked
increase in the growth rate after a lag period of about 40 minutes. Cell
elongation accounts for about 90% of the length increase during the first 2
hours of gibberellin treatment.
Gibberellins Stimulate Cell Elongation and Cell
Division
The effect of gibberellins applied to intact dwarf plants is so dramatic that it
would seem to be a simple task to determine how they act. Unfortunately,
this is not the case because, as we have seen with auxin, so much about
plant cell growth is not understood. However, we do know some
characteristics of gibberellin-induced stem elongation.
Gibberellin increases both cell elongation and cell division, as
evidenced by increases in cell length and cell number in response to
applications of gibberellin. For example, internodes of tall peas have more
cells than those of dwarf peas, and the cells are longer. Mitosis increases
markedly in the subapical region of the meristem of rosette long-day plants
after treatment with gibberellin (Figure 20.24). The dramatic stimulation of
internode elongation in deep-water rice is due in part to increased cell
division activity in the intercalary meristem. Moreover, only the cells of the
inter-
Excision of internode section
0 1 2 3 4 5 6 7
Time (hours) after internode excised from plant 3
FIGURE 20.23 Continuous recording of the growth of the upper internode of
deep-water rice in the presence or absence of exogenous GA 3. The control
internode elongates at a constant rate after an initial growth burst during the
first 2 hours after excision of the section. Addition of GA after 3 hours
induced a sharp increase in the growth rate after a 40-minute lag period
(upper curve). The difference in the initial growth rates of the two treatments
is not signifi- cant here, but reflects slight variation in experimental mate-
rials. The inset shows the internode section of the rice stem used in the
experiment. The intercalary meristem just above the node responds to GA.
(After Sauter and Kende 1992.)
calary meristem whose division is increased by gibberellin exhibit
gibberellin-stimulated cell elongation.
Because gibberellin-induced cell elongation appears to precede
gibberellin-induced cell division, we begin our discussion with the role of
gibberellin in regulating cell elongation.
Gibberellins Enhance Cell Wall Extensibility without
Acidification
As discussed in Chapter 15, the elongation rate can be influenced by both
cell wall extensibility and the osmotically driven rate of water uptake.
Gibberellin has no effect
478 Chapter 20
(A)
a mitotic event
0h 24 h 48 h
Distribution of cell division following application of GA Each dot represents
FIGURE 20.24 Gibberellin applications to rosette plants induce stem
internode elongation in part by increasing cell division. (A) Longitudinal
sections through the axis of
Samolus parviflorus ( brookweed) show an increase in cell
on the osmotic parameters but has consistently been observed to cause an
increase in both the mechanical extensibility of cell walls and the stress
relaxation of the walls of living cells. An analysis of pea genotypes differing
in gibberellin content or sensitivity showed that gibberellin decreases the
minimum force that will cause wall extension (the wall yield threshold)
(Behringer et al. 1990). Thus, both gibberellin and auxin seem to exert their
effects by modifying cell wall properties.
In the case of auxin, cell wall loosening appears to be mediated in part
by cell wall acidification (see Chapter 19). However, this does not appear to
be the mechanism of gibberellin action. In no case has a
gibberellin-stimulated increase in proton extrusion been demonstrated. On
the other hand, gibberellin is never present in tissues in the complete
absence of auxin, and the effects of gibberellin on growth may depend on
auxin-induced wall acidification.
The typical lag time before gibberellin-stimulated growth begins is
longer than for auxin; as noted already, in deepwater rice it is about 40
minutes (see Figure 20.23), and in peas it is 2 to 3 hours (Yang et al. 1996).
These longer lag times point to a growth-promoting mechanism distinct
from that of auxin. Consistent with the existence of a separate
gibberellin-specific wall-loosening mechanism, the growth responses to
applied gibberellin and auxin are additive.
Various suggestions have been made regarding the mechanism of
gibberellin-stimulated stem elongation, and all have some experimental
support, but as yet none provide a clear-cut answer. For example, there is
evidence that the enzyme xyloglucan endotransglycosylase (XET) is
involved in gibberellin-promoted wall extension. The function of XET may
be to facilitate the penetration of expansins into the cell wall. (Recall that
expansins are cell wall proteins that cause wall loosening in acidic
conditions
(B)
30
Mitotic figures per 64 µ m slice
20
10
Control
treatment with GA GA applied
0
72 h 12 24 36 48
Time (hours) following
division after application of GA. (Each dot represents one mitotic figure in a
section 64 µ m thick.) (B) The number of such mitotic figures with and
without GA in stem apices of
Hyoscyamus niger ( black henbane). (After Sachs 1965.)
by weakening hydrogen bonds between wall polysaccharides [see Chapter
15].) Both expansins and XET may be required for gibberellin-stimulated
cell elongation (see Web Topic 20.3 ).
Gibberellins Regulate the Transcription of Cell Cycle
Kinases in Intercalary Meristems
As noted earlier, the growth rate of the internodes of deepwater rice
dramatically increases in response to submergence, and part of this
response is due to increased cell divisions in the intercalary meristem. To
study the effect of gibberellin on the cell cycle, researchers isolated nuclei
from the intercalary meristem and quantified the amount of DNAper nucleus
(Figure 20.25) (Sauter and Kende 1992).
In submergence-induced plants, gibberellin activates the cell division
cycle first at the transition from G 1 to S phase, leading to an increase in
mitotic activity. To do this, gibberellin induces the expression of the genes
for several
cyclin-dependent protein kinases (CDKs), which are involved in
regulation of the cell cycle (see Chapter 1). The transcription of these
genes—first those regulating the transition from G 1 to S phase, followed by
those regulating the transition from G 2 to M phase—is induced in the
intercalary meristem by gibberellin. The result is a gibberellininduced
increase in the progression from the G 1 to the S phase through to mitosis
and cell division (see Web Topic
20.4 ) ( Fabian et al. 2000).
Gibberellin Response Mutants Have Defects in Signal
Transduction
Single-gene mutants impaired in their response to gibberellin provide
valuable tools for identifying genes that encode possible gibberellin
receptors or components of signal transduction pathways. In screenings for
such mutants,
 Gibberellins: Regulators of Plant Height 479

Mitosis identified so far are repressors of gibberellin signaling; that is, they repress
what we regard as gibberellin-induced tall growth and make the plant dwarf.
30 M 90
G1 The repressor proteins are negated or turned off by gibberellin so that the
G2 defaulttype growth—namely, tall—is allowed to proceed. The loss of
S function resulting from a mutation in the functional domain of such a negative
regulator results in the mutant appearing as if it has been treated with
(DNA
synthesis) gibberellin; that is, it has a tall phenotype. Thus a loss-of-function mutation

Percent nuclei in G 1 phase

20 80 of a negative regulator is like a double negative in English grammar: It
Percent nuclei in S and G 2 phases

translates into a positive.

G1

S
Because the effects of these loss-of-function mutations are
pleiotropic—that is, they also affect developmental processes other than
10 70 stem elongation—the steps in the pathway involved in the growth response
G2
are probably common to all gibberellin responses.

Regulatory domain. If a mutation in the gene for the

same negative regulator causes a change in the regulatory domain ( i.e.,
60
0 5 10 15 20 25
that part of the protein that receives a signal from the gibberellin receptor

GA treatment (hours)
indicating the presence of gibberellin), the protein is unable to receive the
signal, and it retains its growth-repressing activity. The phenotype of such a
FIGURE 20.25 Changes in the cell cycle status of nuclei from the intercalary mutant will be that of a gibberellin-insensitive dwarf. Thus, different
meristems of deep-water rice internodes treated with GA 3. Note that the scale mutations in the same gene can give opposite phenotypes (tall versus
for the G 1 nuclei is on the right side of the graph. (After Sauter and Kende
dwarf), depending on whether the mutation is located in the repression
1992.)
domain or the regulatory domain.

three main classes of mutations affecting plant height have been selected: The regulatory domain mutations that confer loss of gibberellin
sensitivity result in the synthesis of a constitutively active form of the
repressor than cannot be turned off by gibberellin. The more of this type of
1. Gibberellin-insensitive dwarfs
mutant repressor that is present in the cell, the more dwarf the plant will be.
2. Gibberellin-deficient mutants in which the gibberellin deficiency has Hence, such regulatory domain mutations are semidominant.
been overcome by a second “suppressor” mutation, so the plants look
closer to normal In contrast, mutations in the repression domain inactivate the negative

3. Mutants with a constitutive gibberellin response (“slender” regulator (i.e., they act as “knockout” alleles) so that it no longer represses
mutants) growth; such mutations are recessive because in a heterozygote half the
proteins will still be able to repress growth in the absence of gibberellin. All of
All three types of gibberellin response mutants have been generated in Arabidopsis,
the negative regulators have to be nonfunctional for the plant to grow tall
but equivalent mutations have also been found in several other species; in without gibberellin.
fact, some have been in agricultural use for many years.
With this as background, we now examine specific examples of
The three types of mutant screens have sometimes identified genes mutations in the genes that encode proteins in the gibberellin signal
encoding the same signal transduction components, even though the transduction pathway.
phenotypes being selected are completely different. This is possible
because mutations at different sites in the same protein can produce vastly Different Genetic Screens Have Identified the Related
different phenotypes, depending on whether the mutation is in a regulatory Repressors GAI and RGA
domain or in an activity, or functional, domain. Some examples of the Several gibberellin-insensitive dwarf mutants have been isolated from
different phenotypes that can result from changes at different sites in the various species. The first to be isolated in Arabidopsis was the gai-1 mutant
same protein are described in the sections that follow. (Figure 20.26) (Sun 2000). The
gai-1 mutants resemble gibberellin-deficient mutants, except that they do
not respond to exogenous gibberellin.
Another mutant was obtained by screening for a second mutation in a
Functional domain (repression). The principal gibberellin signal gibberellin-deficient Arabidopsis mutant that restores, or partially restores,
transduction components that have been wild-type growth. The origi-
480 Chapter 20

FIGURE 20.26 The effects of gibberellin treatment and mutations in three different genes ( gai,
ga1, and rga) on the phenotype of Arabidopsis.

Wild type

The reason that gai-1 is dwarf, while rga is tall, is that the
mutations are in different parts of the protein. Whereas the gai-1 mutation
(which negates sensitivity of the repressor to gibberellin) is in the
regulatory domain, the rga mutation (which prevents the action
of the repressor in blocking growth) is located in the repression
domain, as illustrated in Figure 20.28.

+ GA or spy gai

The mutant gai-1 gene has been shown to encode a mutant

protein with a deletion of 17 amino acids, which corresponds to
the regulatory domain of the repressor (Dill et al. 2001). Asimilar
mutation in the receptor domain of the RGA gene also produces
a gibberellin-insensitive dwarf, demonstrating that the two
related proteins have overlapping functions. Because of this
deletion in the gai-1 mutant, the action of the repressor cannot
ga1
be alleviated by gibberellin, and growth is constitutively inhibited.

rga Gibberellins Cause the Degradation of RGA

Transcriptional Repressors
The Arabidopsis wild-type GAI and RGA genes are members of
a large gene family encoding tran-

nal gibberellin-deficient mutant was ga1-3, and the second mutation GA signaling
that partially “rescued” the phenotype (i.e., restored normal growth) intermediate
was called rga ( for r epressor of ga1-3). 4 The rga mutation is a
recessive mutation that, when present in double copy, gives a plant of
intermediate height (see Figure 20.26).
Active Inactive
form form
Despite the contrasting phenotypes of the mutants, the wild-type GAI
and RGA genes turned out to be closely related, with a very high
Regulatory
(82%) sequence identity. The gai-1 mutation is semidominant, as are
domain
similar gibberellin-insensitive dwarf mutations in other species. Degradation

Repression
domain
Genetic analyses have indicated that both the GAI and RGA
proteins normally act as repressors of gibberellin responses.
Gibberellin acts indirectly through an unidentified signaling
intermediate, which is thought to bind to the regulatory domains of the
GAI and RGA proteins (Figure 20.27). The repressor is no longer able NUCLEUS

to inhibit growth, and the resulting plant is tall.

FIGURE 20.27 Two main functional domains of GAI and RGA: the regulatory
domain and the repression domain. The repres- sion domain is active in the
absence of gibberellin. A gib- berellin-induced signaling intermediate binds to the
4 Be careful not to confuse gai ( gibberellin insensitive) and ga1 ( gibberellin-deficient
regulatory domain, targeting it for destruction. Note that the protein forms
#1), which can look alike in print. homodimers.
 Gibberellins: Regulators of Plant Height 481

Active GA signaling Inactive

form intermediate form

Regulatory
domain
repression domain

domain
absence of GA. Mutated
of GA. Mutated regulatory
Repression
grows tall even in the
domain
dwarf even in the presence
protein, so the plant
repressor, so the plant is

disables the regulatory

Degradation into a constitutively active

domain turns the repressor repression domain

No growth Growth No growth Growth

Wild-type repressor in the In the presence of GA, the A mutation in the regulatory A mutation in the
absence of GA represses repressor is degraded,
elongation growth. allowing elongation to occur.

FIGURE 20.28 Different mutations in the repressors GAI and RGA can
have different effects on growth.

scriptional repressors that have highly conserved regions with nuclear
localization signals. To demonstrate the nuclear localization and repressor
nature of the RGAproduct, the RGA promoter was fused to the gene for a
green fluorescent protein whose product can be visualized under the
microscope. The green color could be seen in cell nuclei.
When the plants were treated with gibberellin, there was no green color,
showing that the RGAprotein was not present following gibberellin
treatment. However, when the gibberellin content was severely lowered by
treatment
with the gibberellin biosynthesis inhibitor paclobutrazol, the nuclei acquired
a very intense green fluorescence, demonstrating both the presence and
nuclear localization of the RGA protein only when gibberellin was absent or
low (Figure 20.29) (Silverstone et al. 2001).
Both GAI and RGAalso have a conserved region at the amino terminus
of the protein referred to as DELLA, after
(B)

FIGURE 20.29 The RGA pro- tein is (A)

found in the cell nucleus, consistent
with its identity as a transcription fac-
tor, and its level is affected by the level
of GA. (A) Plant cells were
transformed with the gene for RGA
+ GA
fused to the gene for green fluorescent
protein (GFP), allowing detec- tion of 2h
RGA in the nucleus by fluorescence
microscopy. (B) Effect of GA on RGA.
48 h
A 2- hour pretreatment with gib-
berellin causes the loss of RGA from +
the cell (top). When the gibberellin Paclobutrazole

biosyn- thesis is inhibited in the pres-

ence of paclobutrazole, the RGA
content in the nucleus increases RGA GFP RGA
(bottom). (From Silverstone et al.
DNA Promoter
2001.)
construct
482 Chapter 20
the code letters for the amino acids in that sequence. This region is
involved in the gibberellin response because it is the location of the
mutation in gai-1 that renders it nonresponsive to gibberellin. It turns out
that the RGAprotein is synthesized all the time; in the presence of
gibberellin this protein is targeted for destruction, and the DELLA region is
required for this response (Dill et al. 2001).
It is likely that gibberellin also brings about the turnover of GAI. RGA and
GAI have partially redundant functions in maintaining the repressed state of
the gibberellin signaling pathway. However, RGA appears to play a more
dominant role than GAI because in a gibberellin-deficient mutant, a second
mutation in the repression domain of gai
( gai-t6) does not restore growth, whereas a comparable mutation in rga does.
On the other hand, the existence of repression domain mutations in both of
these genes allows for complete expression of many characteristics
induced by GA, including plant height, in the absence of gibberellin (see
Figure 20.26) (Dill and Sun 2001; King et al. 2001).
DELLA Repressors Have Been Identified in Crop
Plants
Functional DELLA repressors have been found in several crop plants that
have dwarfing mutations, analogous to gai-
1, in the genes encoding these proteins. Most notable are the rht (r educed h eigh(spy) in Arabidopsis ( Figure 20.30). All of these mutations are recessive and
t) mutations of wheat that have been in use in agriculture for 30 years.
These alleles encode gibberellin response modulators that lack gibberellin
responsiveness, leading to dwarfness (Peng et al. 1999; Silverstone and
Sun 2000).
Cereal dwarfs such as these are very important as the foundations of
the green revolution that enabled large increases in yield to be obtained.
Normal cereals grow too tall when close together in a field, especially with
high levels of fertilizer. The result is that plants fall down (lodge), and the
yield decreases concomitantly. The use of these stiff-strawed dwarf
varieties that resist lodging enables high yields.
Wild type ga1
FIGURE 20.30 The Arabidopsis spy mutation causes the negation of a
growth repressor, so the plants look as if they were treated with gibberellin.
From left to right: wild type,
The Negative Regulator SPINDLY Is an Enzyme That Alters
Protein Activity
“Slender mutants” resemble wild-type plants that have been treated with
gibberellin repeatedly. They exhibit elongated internodes, parthenocarpic
(seed-free) fruit growth (in dicots), and poor pollen production. Slender
mutants are rare compared to dwarf mutants.
One possible explanation of the slender phenotype could be simply that
the mutants have higher-than-normal levels of endogenous gibberellins. For
example, in the sln
mutation of peas, a gibberellin deactivation step is blocked in the seed. As a
result, the mature seed, which in the wild type contains little or no GA, has
abnormally high levels of GA 20. The GA 20 from the seed is then taken up by
the germinating seedling and converted to the bioactive GA 1, giving rise to
the slender phenotype. However, once the seedling runs out of GA 20 from
the seed, its phenotype returns to normal (Reid and Howell 1995).
If, on the other hand, the slender phenotype is not due to an
overproduction of endogenous gibberellin, the mutant is considered to be a constitutive
response mutant
(Sun 2000). The best characterized of such mutants are the ultratall
mutants: la cry s in pea, (representing mutations at two loci: La and Cry s) ( see
Figure 20.10); procera (pro) in tomato; slender (sln) in barley; and spindly
appear to be loss-of-function mutations in negative regulators of the
gibberellin response pathway, as in the case of the DELLA regulators.
SPINDLY (SPY) in Arabidopsis and related genes in other species are
similar in sequence to genes that encode glucosamine transferases in
animals (Thornton et al. 1999). These enzymes modify target proteins by
the glycosylation of serine or threonine residues. Glycosylation can modify
protein activity either directly or indirectly by interfering with or blocking sites
of phosphorylation by protein kinases. The target protein for spindly
proteins has not yet been identified.
ga1/spy spy
ga1 ( GA-deficient), ga1/spy double mutant, and spy.
(Courtesy of N. Olszewski.)
 Gibberellins: Regulators of Plant Height 483

SPY Acts Upstream of GAI and RGA in the Gibberellin

GA
Signal Transduction Chain

actions of SPY, GAI, and RGA On the basis of the evidence presented in the preceding sections and other
RGA GA acts to block the
enhances the effect of GAI and
SPY: also a negative regulator; studies on the expression of SPY, GAI, and
SPY – O–GlcNAc transferase:
RGA ( Sun 2000; Dill et al. 2001), we can begin to sketch out the following
involved in protein modification
elements of the gibberellin signal transduction chain (Figures 20.31 and
GAI/RGA: act in the 20.32):
absence of GA to GAI/RGA – transcription factors
suppress growth • Two or more transcriptional regulators encoded by
GAI and RGA act as inhibitors of the transcription of genes that
mRNA transcription directly or indirectly promote growth.
leading to growth
• SPY appears to be a signal transduction intermediate acting upstream
of GAI and RGA that, itself, turns on or enhances the transcription or
Growth action of GAI and
RGA, or another negative regulator.
FIGURE 20.31 Interactions between gibberellin and the genes
SPY, GAI, and RGA in the regulation of stem elongation. • In the presence of gibberellin, SPY, GAI, and RGA are all negated or
turned off.

GA-deficient plant cell: No growth

CYTOPLASM In a GA-deficient cell in a GA biosynthesis mutant, or a

GA
wild-type cell without the GA signal, the transmembrane
receptor
SPY GA receptor is inactive in the absence of GA signal. In
this situation, SPY is an active O-GlcNAc transferase
RGA GAI that catalyzes the addition of a signal GlcNAc residue
(from UDP-GlcNAc) via an O linkage to specific serine
and/or threonine residues of target proteins, possibly
RGA and GAI. Active RGA and GAI function as
Transcription of repressors of transcription, and they indirectly or directly
GA-induced genes inhibit the expression of GA-induced genes.

Plasma NUCLEUS

membrane

Plant cell with GA: Growth

GA CYTOPLASM In the presence of GA the GA receptor is activated by

receptor binding of bioactive GA. The GA signal inhibits RGA
and GAI repressors both directly and by deactivating
SPY
SPY. In the absence of repression by RGA and GAI,
GA-induced genes are transcribed.
RGA GAI
GA

Transcription of
GA-induced genes

NUCLEUS

FIGURE 20.32 Proposed roles of the active SPY, GAI, and RGA proteins in the
GA signaling pathway within a plant cell.
484 Chapter 20
• The RGA protein is degraded, and it is likely that GAI is similarly
destroyed. Whether gibberellin negates GAI and RGA through SPY,
or independently, or both, is currently under investigation. However, the
basic message in this case and in the cases of other plant hormones, such
as ethylene (see Chapter 22) and the photoreceptor phytochrome (see
Chapter 17), is that the default developmental program is for the induced
type of growth to occur, but the default pathway is prevented by the
presence of various negative regulators. Rather than directly promoting an
effect, the arrival of the developmental signal—in this case
gibberellin—negates the growth repressor, enabling the default condition.
GIBBERELLIN SIGNAL TRANSDUCTION: CEREAL
ALEURONE LAYERS
Genetic analyses of gibberellin-regulated growth, such as the studies
described in the previous section, have identified some of the genes and
their gene products, but not the biochemical pathways involved in
gibberellin signal transduction. The biochemical and molecular
mechanisms, which are probably common to all gibberellin responses, have
been studied most extensively in relation to the gibberellin-stimulated
synthesis and secretion of α- amylase in cereal aleurone layers (Jacobsen
et al. 1995).
In this section we will describe how such studies have shed light on the
location of the gibberellin receptor, the transcriptional regulation of the
genes for α- amylase and other proteins, and the possible signal
transduction pathways involved in the control of α- amylase synthesis and
secretion by gibberellin.
Gibberellin from the Embryo Induces α- Amylase Production
by Aleurone Layers
Cereal grains ( caryopses; singular caryopsis) can be divided into three parts:
the diploid embryo, the triploid endosperm, and the fused testa–pericarp
(seed coat–fruit wall). The embryo part consists of the plant embryo proper,
along with its specialized absorptive organ, the scutellum
(plural scutella), which functions in absorbing the solubilized food reserves
from the endosperm and transmitting them to the growing embryo. The
endosperm is composed of two tissues: the centrally located starchy
endosperm and the aleurone layer (Figure 20.33A).
The starchy endosperm, typically nonliving at maturity, consists of
thin-walled cells filled with starch grains. The aleurone layer surrounds the
starchy endosperm and is cytologically and biochemically distinct from it.
Aleurone cells are enclosed in thick primary cell walls and contain large
numbers of protein-storing vacuoles called protein bodies ( Figures
20.33B–D), enclosed by a single membrane. The protein bodies also
contain phytin, a mixed cation salt (mainly Mg 2+ and K+) of myo- inositolhexaphosphoric
acid (phytic acid).
During germination and early seedling growth, the stored food reserves
of the endosperm—chiefly starch and protein—are broken down by a
variety of hydrolytic enzymes, and the solubilized sugars, amino acids, and
other products are transported to the growing embryo. The two enzymes
responsible for starch degradation are α- and
β - amylase. α- Amylase hydrolyzes starch chains internally to produce
oligosaccharides consisting of α- 1,4-linked glucose residues. β- Amylase
degrades these oligosaccharides from the ends to produce maltose, a
disaccharide. Maltase then converts maltose to glucose.
α - Amylase is secreted into the starchy endosperm of cereal seeds by
both the scutellum and the aleurone layer (see Figure 20.33A). The sole
function of the aleurone layer of the seeds of graminaceous monocots (e.g.,
barley, wheat, rice, rye, and oats) appears to be the synthesis and release
of hydrolytic enzymes. After completing this function, aleurone cells
undergo programmed cell death.
Experiments carried out in the 1960s confirmed Gottlieb Haberlandt’s
original observation of 1890 that the secretion of starch-degrading enzymes
by barley aleurone layers depends on the presence of the embryo. When
the embryo was removed (i.e., the seed was de-embryonated), no starch
was degraded. However, when the de-embryonated “half-seed” was
incubated in close proximity to the excised embryo, starch was digested,
demonstrating that the embryo produced a diffusible substance that
triggered α-
amylase release by the aleurone layer.
It was soon discovered that gibberellic acid (GA 3) could substitute for the
embryo in stimulating starch degradation. When de-embryonated
half-seeds were incubated in buffered solutions containing gibberellic acid,
secretion of
α -amylase into the medium was greatly stimulated after an 8-hour lag
period (relative to the control half-seeds incubated in the absence of
gibberellic acid).
The significance of the gibberellin effect became clear when it was
shown that the embryo synthesizes and releases gibberellins (chiefly GA 1) into
the endosperm during germination. Thus the cereal embryo efficiently
regulates the mobilization of its own food reserves through the secretion of
gibberellins, which stimulate the digestive function of the aleurone layer
(see Figure 20.33A).
Gibberellin has been found to promote the production and/or secretion
of a variety of hydrolytic enzymes that are involved in the solubilization of
endosperm reserves; principal among these is α- amylase. Since the 1960s,
investigators have utilized isolated aleurone layers, or even aleurone cell
protoplasts (see Figure 20.33C and D), rather than halfseeds (see Figure
20.33B). The isolated aleurone layer, consisting of a homogeneous
population of target cells, provides a unique opportunity to study the
molecular aspects of gibberellin action in the absence of nonresponding cell
types.
In the following discussion of gibberellin-induced α-
amylase production we focus on three questions:
 Gibberellins: Regulators of Plant Height 485

First foliage leaf

Coleoptile Testa-pericarp
2. Gibberellins
diffuse to the Aleurone layer
aleurone layer.
Shoot apical Starchy endosperm
meristem
Aleurone cells
the growing embyro. (A)
1. Gibberellins are 3. Aleurone layer cells are induced
synthesized by the to synthesize and secrete a- amylase
Hydrolytic
embryo and
scutellum andreleased into to
transported GAs and other hydrolases into the
GAs enzymes
the starchy endosperm endosperm.
via the scutellum.
are absorbed by the
Endosperm
solutes
5. The endosperm solutes

Scutellum 4. Starch and other

macromolecules are broken
down to small molecules.

Root

(B) (C) (D)

PSV

PSV

FIGURE 20.33 Structure of a barley grain and the functions of various tissues
PSV
during germination (A). Microscope pho- tos of the barley aleurone layer (B)
and barley aleurone pro- toplasts at an early (C) and late stage (D) of
amylase pro- duction. Protein storage vesicles (PSV) can be seen in each
cell. G = phytin globoid; N = nucleus. (Photos from Bethke et al. 1997,
courtesy of P. Bethke.)

1. How does gibberellin regulate the increase in a-amylase? at the level of gene transcription (Jacobsen et al. 1995). The two main lines
of evidence were as follows:

2. Where is the gibberellin receptor located in the cell?
3. What signal transduction pathways operate between the gibberellin
receptor and a-amylase production?
Gibberellic Acid Enhances the Transcription of α-
Amylase mRNA
Before molecular biological approaches were developed, there was already
physiological and biochemical evidence that gibberellic acid might enhance α-
amylase production
1. GA 3- stimulated α- amylase production was shown to
be blocked by inhibitors of transcription and translation.
2. Heavy-isotope- and radioactive-isotope-labeling studies demonstrated
that the stimulation of α- amylase activity by gibberellin involved de novo
synthesis of the enzyme from amino acids, rather than activation of
preexisting enzyme. Definitive molecular evidence now shows that
gibberellin acts primarily by inducing the expression of the
486 Chapter 20

(A) Enzyme synthesis toplasts and the production of the blue color was shown to be stimulated by
gibberellin (Jacobsen et al. 1995).
The partial deletion of known sequences of bases from
α -amylase promoters from several cereals indicates that the sequences
conferring gibberellin responsiveness, termed
16 gibberellin response elements, are located 200 to 300 base pairs upstream of the
Rate of α- amylase synthesis

transcription start site (see Web Topic 20.6 ).

(enzyme units per 120 min)

hours of treatment with GA 3 ( 10 –6 M).

12
Treated with
A GA-MYB Transcription Factor Regulates α-
GA 3
8
No GA
Amylase Gene Expression
by isolated barley aleurone layerstreatment
is evident after 6–8 The stimulation of α- amylase gene expression by gibberellin is mediated by
4
a specific transcription factor that binds to the promoter of the α- amylase
gene (Lovegrove and Hooley
0 5 10 15 2000). To demonstrate such DNA-binding proteins in rice, a technique
Duration of exposure to GA 3 ( h) Synthesis of a- amylase called a mobility shift assay was used (see Web Topic 20.7 ). This assay
detects the increase in size that occurs when the α- amylase promoter binds
(B) mRNA synthesis to a protein isolated from gibberellin-treated aleurone cells (Ou-Lee et al.
A gibberellin-induced increase in translatable a- amylase 1988). The mobility shift assay also allowed identification of the regulatory
mRNA precedes the release of the a- amylase from DNAsequences ( gibberellin response elements)
a- Amylase translatable mRNA (percent of total in vitro

the aleurone cells by several hours.

in the promoter that are involved in binding the protein.

Identical gibberellin response elements were found to occur in all cereal
16
α- amylase promoters, and their presence was shown to be essential for the

Treated with induction of α- amylase gene transcription by gibberellin. These studies

12
GA 3 demonstrated that gibberellin increases either the level or the activity of a
transcription factor protein that switches on the production of α- amylase
8
No GA mRNA by binding to an upstream regulatory element in the α- amylase gene
promoter.
protein synthesis)

4 treatment

The sequence of the gibberellin response element in the

0 5
Duration of exposure to GA 3 ( h)
FIGURE 20.34 Gibberellin effects on enzyme synthesis and mRNA
synthesis. The α- amylase mRNA in this case was measured by the in vitro
production of α- amylase as a per- centage of the protein produced by the
translation of the bulk mRNA. (From Higgins et al. 1976.)
10 15
α - amylase gene promoter turned out to be similar to that of the binding
sites for MYB transcription factors that are known to regulate growth and
development in phytochrome responses (see Chapter 14 on the Web site
and Chapter 17) (Jacobsen et al. 1995). This knowledge enabled the
isolation of mRNA for a MYB transcription factor, named GA-MYB,
associated with the gibberellin induction of α- amylase gene expression.

The synthesis of GA-MYB mRNA in aleurone cells increases within 3

gene for α- amylase. It has been shown that GA 3 enhances the level of
translatable mRNA for α- amylase in aleurone layers (Figure 20.34).
Furthermore, by using isolated nuclei, investigators also demonstrated that
there was an enhanced transcription of the α- amylase gene rather than a
decrease in mRNA turnover (see Web Topic 20.5 ).
The purification of α- amylase mRNA, which is produced in relatively
large amounts in aleurone cells, enabled the isolation of genomic clones
containing both the structural gene for α- amylase and its upstream
promoter sequences. These promoter sequences were then fused to the
reporter gene that encodes the enzyme β- glucuronidase (GUS), which
yields a blue color in the presence of an artificial substrate when the gene is
expressed. The regulation of transcription by gibberellin was proved when
such chimeric genes containing α- amylase promoters that were fused to
reporter genes were introduced into aleurone pro-
hours of gibberellin application, several hours before the increase in α- amylase
mRNA (Gubler et al. 1995) (Figure 20.35). The inhibitor of translation,
cycloheximide, has no effect on the production of MYB mRNA, indicating
that GA-MYB is a primary response gene, or early gene. In contrast, the α- amylase
gene is a secondary response gene, or late gene, as indicated by the fact
that its transcription is blocked by cycloheximide.
How does gibberellin cause the MYB gene to be expressed? Because
protein synthesis is not involved, gibberellin may bring about the activation
of one or more preexisting transcription factors. The activation of
transcription factors is typically mediated by protein phosphorylation events
occurring at the end of a signal transduction pathway. We will now examine
what is known about the signaling pathways involved in gibberellin-induced α-
amylase production up to the point of GA-MYB production.

100
GA-MYB mRNA
75
Relative transcript levels
50
a- Amylase mRNA
25
0 3 6 12
Hours after exposure to GA
FIGURE 20.35 Time course for the induction of GA-MYB
and α- amylase mRNA by gibberellic acid. The production of GA-MYB mRNA
precedes α- amylase mRNA by about 5 hours. This result is consistent with
the role of GA-MYB as an early GA response gene that regulates the
transcription of the gene for α- amylase. In the absence of GA, the levels of
both GA-MYB and α- amylase mRNAs are negligible. (After Gubler et al.
1995.)
Gibberellin Receptors May Interact with G- Proteins
on the Plasma Membrane
Acell surface localization of the gibberellin receptor is suggested from the
fact that gibberellin that has been bound to microbeads that are unable to
cross the plasma membrane is still active in inducing α- amylase production
in aleurone protoplasts (Hooley et al. 1991). In addition, microinjection of
GA 3 into aleurone protoplasts had no effect, but when the protoplasts were
immersed in GA 3 solution, they produced
α - amylase (Gilroy and Jones 1994). These results suggest that gibberellin
acts on the outer face of the plasma membrane.
Two gibberellin-binding plasma membrane proteins have been isolated
through the use of purified plasma membrane and a radioactively labeled
gibberellin that was chemically modified to permanently attach to protein to
which it was weakly bound. Because the presence of excess gibberellin
reduces binding, and these proteins from a semidwarf,
gibberellin-insensitive sweet pea bind gibberellin less strongly, they may
represent the gibberellin receptors (Lovegrove et al. 1998).
In animal cells, heterotrimeric GTP-binding proteins (Gproteins) in the
cell membrane are often involved as first steps in a pathway between a
hormone receptor and subsequent cytosolic signals. Evidence has been
obtained that G-proteins are also involved in the early gibberellin signaling
events in aleurone cells (Jones et al. 1998).
Treatment of oat aleurone protoplasts with a peptide called Mas7, which
stimulates GTP/GDP exchange by Gproteins, was found to induce α- amylase
gene expression and to stimulate α- amylase secretion, suggesting that
such a GTP/GDP exchange on the cell membrane is a reaction en route to
the induction of α- amylase biosynthesis by gibberellin. In addition,
gibberellin-induced α- amylase gene
Gibberellins: Regulators of Plant Height 487
expression and secretion were inhibited by a guanine nucleotide analog
that binds to the α subunit of heterotrimeric G-proteins and inhibits
GTP/GDP exchange, further supporting the preceding conclusion.
Recent genetic studies have provided further support for the role of
G-proteins as intermediates in the gibberellin signal transduction pathway.
The rice dwarf mutant dwarf 1 (d1) has a defective gene encoding the α subunit.
Besides being dwarf, the aleurone layers of the d1 mutant synthesize less α-
amylase in response to gibberellin than wildtype aleurone layers do. This
reduction in α- amylase production by the d1 mutant demonstrates that
G-proteins are one of the components of the gibberellin signal transduction
18 24
pathway involved in both the growth response and the production of α- amylase.
However, the difference in α-
amylase production between the mutant and the wild type goes away with
increasing gibberellin concentration, suggesting that gibberellin can also
stimulate α- amylase production by a G-protein-independent pathway
(Ashikari et al. 1999; Ueguchi-Tanaka et al. 2000).
Cyclic GMP, Ca 2+, and Protein Kinases Are Possible Signaling
Intermediates
In animal cells, G-proteins can activate the enzyme guanylyl cyclase, the
enzyme that synthesizes cGMP from GTP, leading to an increase in cGMP
concetration. Cyclic GMP, in turn, can regulate ion channels, Ca 2+ levels,
protein kinase activity, and gene transcription (see Chapter 14 on the Web
site). Gibberellin has been reported to cause a transient rise in cGMP levels
in barley aleurone layers, suggesting a possible role for cGMP in α- amylase
production (Figure 20.36) (see Web Topic 20.8 ) ( Pensen et al. 1996).
Calcium and the calcium-binding protein calmodulin act as second
messengers for many hormonal responses in
GA-MYB
100
80
Response to GA (percent)
60
pH i a- Amylase
40
RNase
20
CaM
0 DNase
cGMP
0 10 100 1000 10,000
Time after GA treatment (min) [Ca 2+]i
FIGURE 20.36 Following the addition of GA to barley aleu- rone protoplasts,
a multiple signal transduction pathway is initiated. The timing of some of
these events is shown. (From Bethke et al. 1997.)
488 Chapter 20
FIGURE 20.37 Increase in the calcium in barley aleurone (A)
protoplasts following GA addition can be seen from this false
color image. The level of calcium corresponding to the colors
is in the lower scale. (A) Untreated protoplast. (B) GA-
treated protoplast. (C) Protoplast treated with both abscisic
acid (AB) and GA. Abscisic acid opposes the effects of GA in
aleurone cells. (From Ritchie and Gilroy 1998b.)
Control
50
animal cells (see Chapter 14 on the Web site), and they have been
implicated in various plant responses to environmental and hormonal
stimuli. The earliest event in aleurone protoplasts after the application of
gibberellin is a rise in the cytoplasmic calcium concentration that occurs
well before the onset of α- amylase synthesis (see Figures 20.36 and 20.37)
(Bethke et al. 1997). Without calcium, α- amylase secretion does not occur,
though in barley aleurone protoplasts its synthesis goes ahead normally, so
we have to conclude that, in barley, calcium is not on the signaling pathway
to α- amylase gene transcription, though it does play a role in enzyme
secretion.
Protein phosphorylation by protein kinases is another component in
many signaling pathways, and gibberellin appears to be no exception. The
injection of a protein kinase substrate into barley aleurone protoplasts to
compete with endogenous protein phosphorylation inhibited
α -amylase secretion, suggesting the involvement of protein
phosphorylation in the α- amylase secretion pathway (Ritchie and Gilroy
1998a). This did not affect the gibberellin-stimulated increase in calcium,
indicating that the protein kinase step is downstream of the calcium
signaling event.
In conclusion, gibberellin signal transduction in aleurone cells seems to
involve G-proteins as well as cyclic GMP, leading to production of the
transcription factor GAMYB, which induces α- amylase gene transcription. α- Amylase
secretion has similar initial components but also involves an increase in
cytoplasmic calcium and protein phosphorylation. The detailed signaling
pathways remain to be worked out. Amodel of the known biochemical
components of the gibberellin signal transduction pathways in aleurone
cells is illustrated in Figure 20.38.
The Gibberellin Signal Transduction Pathway Is Similar for
Stem Growth and α- Amylase Production
It is widely believed that gibberellin initially acts through a common pathway
or pathways in all of its effects on devel-
(B) (C)
v
v
GA GA+ ABA
100 300 500 1000
Cytoplasmic [Ca 2+] ( n M)
opment. As we have seen, the genetic approaches applied to the study of
gibberellin-stimulated growth led to the identification of the SPY/GAI/RGA negative
regulatory pathway. The proteins SPY, GAI, and RGA act as repressors of
gibberellin responses. Gibberellin deactivates these repressors.
Because the aleurone layers of gibberellin-insensitive dwarf wheat are
also insensitive to GA, the same signal transduction pathways that regulate
growth appear to regulate gibberellin-induced α- amylase production. Indeed
a
SPY- type gene associated with α- amylase production has been isolated
from barley ( HvSPY), and its expression is able to inhibit gibberellin-induced
α- amylase synthesis, while GA-MYB-type factors are also implicated in the
gibberellin transduction chain regulating stem growth.
Rice with the dwarf 1 mutation also produces little α-
amylase in response to gibberellin. As noted earlier, the mutation causing dwarf
1 is known to be in the α subunit of the G-protein complex, providing
evidence that the action of gibberellin in both stem elongation and the
production of α- amylase are regulated by plasma membrane heterotrimeric
G-proteins.
As the entire elongation growth and α- amylase signaling pathways are
worked out, it will be interesting to see how much they have in common and
where they diverge.
SUMMARY
Gibberellins are a family of compounds defined by their structure. They now
number over 125, some of which are found only in the fungus Gibberella
fujikuroi. Gibberellins induce dramatic internode elongation in certain types
of plants, such as dwarf and rosette species and grasses.
FIGURE 20.38 Composite model for the induction of α-
▲
amylase synthesis in barley aleurone layers by gibberellin. A
calcium-independent pathway induces α- amylase gene transcription; a
calcium-dependent pathway is involved in
α - amylase secretion. (The SPY negative regulator was omit- ted for clarity.)
 Gibberellins: Regulators of Plant Height 489

GA 1
Heterotrimeric Plasma
GA receptor G-protein membrane

1. GA 1 from the embryo first γ α

binds to a cell surface receptor.
β
GTP ALEURONE LAYER CELL
1

2. The cell surface GA 2

receptor complex interacts
with a heterotrimeric G-
Ca 2+- dependent signal Ca 2+- independent signal
protein, initiating two separate
transduction pathway involving transduction pathway with
signal transduction chains.
calmodulin and protein kinase cGMP

3
3. A calcium-
independent pathway,
Activated GA
involving cGMP, results in the
signaling
activation of a signaling
intermediate
intermediate.

Secretion
4. The activated signal- ing NUCLEUS
intermediate binds to DELLA
repressor proteins in the 5
nucleus. DELLA Repressor
repressor degraded
5. The DELLA repressors are 4
degraded when bound to the
GA signal. DNA GA-MYB gene

Transcription and
6. The inactivation of the DELLA 6
processing
repressors allows the expression
of the MYB gene, as well as other GA-MYB mRNA
genes, to proceed through
7
transcription, processing, and
translation. GA-MYB
transcription
α - amylase gene factor
Transcription and
7. The newly synthesized MYB 8
processing
protein then enters the nucleus
and binds to the promoter α - amylase mRNA
genes for

a- amylase and other Ribosomes

hydrolytic enzymes.
Rough ER
8. Transcription of
a- amylase and other 9
hydrolytic genes is
activated.

9. a- Amylase and other Golgi body

hydrolases are synthesized on
the rough ER.
10 Secretory
vesicles
10. Proteins are secreted via the containing
Golgi. a- amylase
11

11. The secretory pathway

requires GA stimulation via a
calcium–calmodulin-
dependent signal transduction
pathway.
a- amylase

Starch degradation in endosperm

490 Chapter 20
Other physiological effects of gibberellin include changes in juvenility and
flower sexuality, and the promotion of fruit set, fruit growth, and seed
germination. Gibberellins have several commercial applications, mainly in
enhancement of the size of seedless grapes and in the malting of barley.
Gibberellin synthesis inhibitors are used as dwarfing agents.
Gibberellins are identified and quantified by gas chromatography
combined with mass spectrometry, following separation by
high-performance liquid chromatography. Bioassays may be used to give
an initial idea of the gibberellins present in a sample. Only certain GAs,
notably GA 1 and GA 4, are responsible for the effects in plants; the others are
precursors or metabolites.
Gibberellins are terpenoid compounds, made up of isoprene units. The
first compound in the isoprenoid pathway committed to gibberellin
biosynthesis is ent- kaurene. The biosynthesis up to ent- kaurene occurs in
plastids. ent- Kaurene is converted to GA 12 —the precursor of all the other
gibberellins—on the plastid envelope and then on the endoplasmic
reticulum via cytochrome P450 monooxygenases. Commonly a
hydroxylation at C-13 also takes place to give GA 53.
GA 53 or GA 12, each of which has 20 carbon atoms, is converted to other
gibberellins by sequential oxidation of carbon
20, followed by the loss of this carbon to give 19-carbon gibberellins. This
process is followed by hydroxylation at carbon 3 to give the growth-active
GA 1 or GA 4. A subsequent hydroxylation at carbon 2 eliminates biological
activity.
The steps after GA 53 or GA 12 occur in the cytoplasm. The genes for GA
20-oxidase ( GA20ox), which catalyzes the steps between GA 53 and GA 20, GA3
β- hydroxylase (or GA3-oxidase; GA3ox), which converts GA 20 into GA 1, and
GA2-oxidase ( GA2ox), which converts active GA 1 to inactive GA 8, have been
isolated. Dwarf plants have been genetically engineered by the use of
antisense GA20ox or
GA3ox, or overexpression of GA2ox. Gibberellins may also be glycosylated
to give either an inactivated form or a storage form.
The endogenous level of active gibberellin regulates its own synthesis
by switching on or inhibiting the transcription of the genes for the enzymes
of gibberellin biosynthesis and degradation. Environmental factors such as
photoperiod (e.g., leading to bolting and potato tuberization) and
temperature (vernalization), and the presence of auxin from the stem apex,
also modulate gibberellin biosynthesis through the transcription of the
genes for the gibberellin biosynthetic enzymes. Light regulates both GA 1 biosynthesis
through regulation of the transcription of the gibberellin degradation gene
and also causes a decrease in the responsiveness of stem elongation to
the presence of gibberellin.
The most pronounced effect of applied gibberellins is stem elongation in
dwarf and rosette plants. Gibberellins
stimulate stem growth by promoting both cell elongation and cell division.
The activity of some wall enzymes has been correlated with
gibberellin-induced growth and cell wall loosening. Gibberellin-stimulated
cell divisions in deep-water rice are regulated at the transition between DNA
replication and cell division.
Three types of gibberellin response mutants have been useful in the
identification of genes involved in the gibberellin signaling pathway involved
in stem growth: (1) gibberellin-insensitive dwarfs (e.g., gai-1), ( 2) gibberellin
deficiency reversion mutants (e.g., rga), and (3) constitutive gibberellin
responders (slender mutants) (e.g., spy).
GAI and RGA are related nuclear transcription factors that repress
growth. In the presence of gibberellin they are degraded. The mutant gai-1, and
the related wheat dwarfing gene mutant rht, have lost the ability to respond
to gibberellin. SPY encodes a glycosyl transferase that is a member of a
signal transduction chain prior to GAI/RGA. When a mutation interferes with
the repressor function of any of these, the plants grow tall.
Gibberellin induces transcription of the gene for α- amylase biosynthesis
in cereal grain aleurone cells. This process is mediated by the transcription
of a specific transcription factor, GA-MYB, which binds to the upstream
region of the
α -amylase gene, thus switching it on. The gibberellin receptor is located on
the surface of aleurone cells. G-proteins and cyclic GMP have been
implicated as members of the signal transduction chain on the way to
GA-MYB. Calcium is not on the route to α- amylase gene transcription,
though it does play a role in α- amylase secretion via protein
phosphorylation.
The gibberellin signal transduction pathway is probably similar for stem
elongation and α- amylase production. Dwarf wheat and rice also have
impaired α- amylase gene transcription. Gibberellin acts by deactivating
repressors, such as SPY, GAI, and RGAen route to both an increase in cell
elongation and the production of α- amylase.
Web Material
Web Topics
20.1 Structures of Some Important Gibberellins,
Their Precursors and Derivatives, and
Inhibitors of Gibberellin Biosynthesis
The chemical structures of various gibberellins and
inhibitors of gibberellin biosynthesis are presented.
20.2 Gibberellin Detection
Gibberellin quantitation is now routine thanks to sensitive
modern physical methods of detection.

20.3 Gibberellin-Induced Stem Elongation
Various mechanisms of gibberellin-induced cell wall
loosening are discussed.
20.4 CDKs and Gibberellin-Induced Cell Division
Additional information on the mechanism of gibberellin
regulation of the cell cycle is given.
20.5 Gibberellin-Induction of α- amylase mRNA
Evidence is provided for gibberellin-induced transcription
of α- amylase mRNA.
20.6 Promoter Elements and Gibberellin
Responsiveness
Gibberellin response elements mediate the effects of
gibberellin on α- amylase transcription.
20.7 Regulation of α- amylase Gene Expression by
Transcription Factors
Experiments identifying MYB transcription factors as
mediators of gibberellin-induced gene transcription are
described.
20.8 Gibberellin Signal Transduction
Various signaling intermediates have been implicated in
gibberellin responsiveness.
Chapter References
Aach, H., Bode, H., Robinson, D.G., and Graebe, J. E. (1997) ent- Kau-
rene synthase is located in proplastids of meristematic shoot tis- sues. Planta 202:
211–219.
Ashikari, M., Wu, J., Yano, M., Sasaki, T., and Yoshimura, A. (1999)
Rice gibberellin-insensitive dwarf mutant gene Dwarf 1 encodes the α- subunit of
GTP-binding protein. Proc. Natl. Acad. Sci. USA
96: 10284–10289.
Behringer, F. J., Cosgrove, D. J., Reid, J. B., and Davies, P. J. (1990)
Physical basis for altered stem elongation rates in internode length mutants of Pisum.
Plant Physiol. 94: 166–173. Bethke, P. C., Schuurink, R., and Jones, R. L. (1997)
Hormonal sig-
nalling in cereal aleurone. J. Exp. Bot. 48: 1337–1356. Campbell, N. A., Reece, J.
B., and Mitchell, L. G. (1999) Biology, 5th
ed. Benjamin Cummings, Menlo Park, CA.
Carrera, E., Bou, J., Garcia-Martinez, J. L., and Prat, S. (2000) Changes
in GA20-oxidase gene expression strongly affect stem length, tuber induction
and tuber yield of potato plants. Plant J. 22: 247–256.
Davies, P. J. (1995) The plant hormones: Their nature, occurrence,
and functions. In Plant Hormones: Physiology, Biochemistry and Molecular
Biology, P. J. Davies, ed., Kluwer, Dordrecht, Nether- lands, pp. 1–12.
Dill, A., and Sun, T. P. (2001) Synergistic derepression of gibberellin
signaling by removing RGA and GAI function in Arabidopsis thaliana. Genetics 159:
778–785.
Dill, A., Jung, H. S., and Sun, T. P. (2001) The DELLAmotif is essen-
tial for gibberellin-induced degradation of RGA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98:
14162–14167.
Elliott, R. C., Ross, J. J., Smith, J. J., and Lester, D. R. (2001) Feed-for-
ward regulation of gibberellin deactivation in pea. J. Plant Growth Regul. 20: 87–94.
Gibberellins: Regulators of Plant Height 491
Fabian, T., Lorbiecke, R., Umeda, M., and Sauter, M. (2000) The cell
cycle genes cycA1;1 and cdc2Os-3 are coordinately regulated by gibberellin in
planta. Planta 211: 376–383. Gilroy, S., and Jones, R. L. (1994) Perception of
gibberellin and
abscisic acid at the external face of the plasma membrane of bar- ley ( Hordeum
vulgare L.) aleurone protoplasts. Plant Physiol. 104: 1185–1192.
Gubler, F., Kalla, R., Roberts, J. K., and Jacobsen, J. V. (1995) Gib-
berellin-regulated expression of a myb gene in barley aleurone cells: Evidence of
myb transactivation of a high-pl alpha-amylase gene promoter. Plant Cell 7:
1879–1891. Hazebroek, J. P., and Metzger, J. D. (1990) Thermoinductive regu-
lation of gibberellin metabolism in Thlaspi arvense L. I. Metabo- lism of
[2H]-ent-Kaurenoic acid and [14C]gibberellin A 12- alde- hyde. Plant Physiol. 94:
157–165.
Hedden, P., and Kamiya, Y. (1997) Gibberellin biosynthesis:
Enzymes, genes and their regulation. Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 48:
431–460.
Hedden, P., and Phillips, A. L. (2000) Gibberellin metabolism: New
insights revealed by the genes. Trends Plant Sci. 5: 523–530. Helliwell, C. A.,
Sullivan, J. A., Mould, R. M., Gray, J. C., Peacock, W.
J., and Dennis, E. S. (2001) Aplastid envelope location of Ara- bidopsis ent- kaurene
oxidase links the plastid and endoplasmic reticulum steps of the gibberellin
biosynthesis pathway. Plant J.
28: 201–208.
Higgins, T. J. V., Zwar, J. A., and Jacobsen, J. V. (1976) Gibberellic acid
enhances the level of translatable mRNAfor α- amylase in barley aleurone layers. Nature
260: 166–169. Hooley, R., Beale, M. H., and Smith, S. J. (1991) Gibberellin percep-
tion at the plasma membrane of Avena fatua aleurone protoplasts.
Planta 183: 274–280.
Ingram, T. J., Reid, J. B., and Macmillan, J. (1986) The quantitative
relationship between gibberellin A 1 and internode growth in
Pisum sativum L. Planta 168: 414–420. Ingram, T. J., Reid, J. B., Potts, W. C., and
Murfet, I. C. (1983) Intern-
ode length in Pisum. IV The effect of the Le gene on gibberellin metabolism. Physiol.
Plant. 59: 607–616. Irish, E. E. (1996) Regulation of sex determination in maize. Bioessays
18: 363–369.
Jacobsen, J. V., Gubler, F., and Chandler, P. M. (1995) Gibberellin
action in germinated cereal grains. In Plant Hormones: Physiology, Biochemistry
and Molecular Biology, P. J. Davies, ed., Kluwer, Dor- drecht, Netherlands, pp.
246–271. Jones, H. D., Smith, S. J., Desikan, R., Plakidou, D. S., Lovegrove, A.,
and Hooley, R. (1998) Heterotrimeric G proteins are implicated in gibberellin
induction of α- amylase gene expression in wild oat aleurone. Plant Cell 10:
245–253.
Kende, H., van-der, K. E., and Cho, H. T. (1998) Deepwater rice: A
model plant to study stem elongation. Plant Physiol. 118: 1105–1110.
King, K. E., Moritz, T., and Harberd, N. P. (2001) Gibberellins are not
required for normal stem growth in Arabidopsis thaliana in the absence of GAI and
RGA. Genetics 159: 767–776. Kobayashi, M., Spray, C. R., Phinney, B. O., Gaskin,
P., and MacMil-
lan, J. (1996) Gibberellin metabolism in maize: The stepwise con- version of
gibberellin A 12- aldehyde to gibberellin A 20. Plant Phys- iol. 110: 413–418.
Lester, D. R., Ross, J. J., Davies, P. J., and Reid, J. B. (1997) Mendel’s
stem length gene ( Le) encodes a gibberellin 3 β- hydroxylase. Plant Cell 9:
1435–1443.
Lichtenthaler, H. K., Rohmer, M., and Schwender, J. (1997) Two inde-
pendent biochemical pathways for isopentenyl diphosphate and isoprenoid
biosynthesis in higher plants. Physiol. Plant. 101: 643–652.
Lovegrove, A., and Hooley, R. (2000) Gibberellin and abscisic acid
signalling in aleurone. Trends Plant Sci. 5: 102–110.
492 Chapter 20
Lovegrove, A., Barratt, D. H. P., Beale, M. H., and Hooley, R. (1998)
Gibberellin-photoaffinity labelling of two polypeptides in plant plasma
membranes. Plant J. 15: 311–320.
O’Neill, D. P., Ross, J. J., and Reid, J. B. (2000) Changes in gibberellin
A 1 levels and response during de-etiolation of pea seedlings.
Plant Physiol. 124: 805–812.
Ou-Lee, T. M., Turgeon, R., and Wu, R. (1988) Interaction of a gib-
berellin-induced factor with the upstream region of an α- amy- lase gene in rice
aleurone tissue. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 6366–6369.
Peng, J., Richards, D. E., Hartley, N. M., Murphy, G. P., Flintham, J.
E., Beales, J., Fish, L. J., Pelica, F., Sudhakar, D., Christou, P., Snape, J. W.,
Gale, M. D., and Harberd, N. P. (1999) ‘Green rev- olution’ genes encode mutant
gibberellin response modulators.
Nature 400: 256–261.
Pensen, S. P., Schuurink, R. C., Fath, A., Gubler, F., Jacobsen, J. V., and
Jones, R. L. (1996) cGMP is required for gibberellic acid-induced gene expression
in barley aleurone. Plant Cell 8: 2325–2333. Phinney, B. O. (1983) The history of
gibberellins. In The Biochemistry
and Physiology of Gibberellins, A. Crozier (ed.), Praeger, New York, pp. 15–52.
Reid, J. B., and Howell, S. H. (1995) Hormone mutants and plant
development. In Plant Hormones: Physiology, Biochemistry and Mol- ecular Biology, P.
J. Davies, ed., Kluwer, Dordrecht, Netherlands, pp. 448–485.
Ritchie, S., and Gilroy, S. (1998a) Calcium-dependent protein phos-
phorylation may mediate the gibberellic acid response in bar- ley aleurone. Plant
Physiol. 116: 765–776.
Ritchie, S., and Gilroy, S. (1998b) Tansley Review No. 100: Gib-
berellins: Regulating genes and germination. New Phytol. 140: 363–383.
Ross, J., and O’Neill, D. (2001) New interactions between classical
plant hormones. Trends Plant Sci. 6: 2–4.
Ross, J. J., O’Neill, D. P., Smith, J. J., Kerckhoffs, L. H. J., and Elliott,
R. C. (2000) Evidence that auxin promotes gibberellin A 1 biosyn- thesis in pea. Plant
J. 21: 547–552.
Ross, J. J., Reid, J. B., Gaskin, P. and Macmillan, J. (1989) Internode
length in Pisum. Estimation of GA 1 levels in genotypes Le, le and
led. Physiol. Plant. 76: 173–176. Sachs, R. M. (1965) Stem elongation. Annu. Rev.
Plant. Physiol. 16:
73–96.
Sauter, M., and Kende, H. (1992) Gibberellin-induced growth and
regulation of the cell division cycle in deepwater rice. Planta 188: 362–368.
Schneider, G., and Schmidt, J. (1990) Conjugation of gibberellins in
Zea mays L. In Plant Growth Substances, 1988, R. P. Pharis and S. B. Rood eds.,
Springer, Heidelberg, Germany, pp. 300–306. Silverstone, A. L., and Sun, T. P. (2000)
Gibberellins and the green
revolution. Trends Plant Sci. 5: 1–2. Silverstone, A. L., Jung, H. S., Dill, A.,
Kawaide, H., Kamiya, Y., and
Sun, T. P. (2001) Repressing a repressor: Gibberellin-induced rapid reduction of
the RGAprotein in Arabidopsis. Plant Cell 13: 1555–1565.
Sun, T. P. (2000) Gibberellin signal transduction. Curr. Opin. Plant
Biol. 3: 374–380.
Thornton, T. M., Swain, S. M., and Olszewski, N. E. (1999) Gib-
berellin signal transduction presents . . . the SPY who O-Glc- NAc’d me. Trends
Plant Sci. 4: 424–428. Toyomasu, T., Kawaide, H., Mitsuhashi, W., Inoue, Y., and
Kamiya,
Y. (1998) Phytochrome regulates gibberellin biosynthesis during germination of
photoblastic lettuce seeds. Plant Physiol. 118: 1517–1523.
Ueguchi-Tanaka, M., Fujisawa, Y., Kobayashi, M., Ashikari, M.,
Iwasaki, Y., Kitano, H., and Matsuoka, M. (2000) Rice dwarf mutant d1, which is
defective in the alpha subunit of the het- erotrimeric G protein, affects gibberellin
signal transduction. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97: 11638–11643. Wu, K., Li, L.,
Gage, D. A., and Zeevaart, J. A. D. (1996) Molecular
cloning and photoperiod-regulated expression of gibberellin 20- oxidase from the
long-day plant spinach. Plant Physiol. 110: 547–554.
Xu, Y. L., Gage, D. A., and Zeevaart, J. A. D. (1997) Gibberellins and
stem growth in Arabidopsis thaliana. Plant Physiol. 114: 1471–1476. Yamaguchi,
S., and Kamiya, Y. (2000) Gibberellin biosynthesis: Its
regulation by endogenous and environmental signals. Plant Cell Physiol. 41:
251–257.
Yang, T., Davies, P. J., and Reid, J. B. (1996) Genetic dissection of the
relative roles of auxin and gibberellin in the regulation of stem elongation in intact
light-grown peas. Plant Physiol. 110: 1029–1034.
Zeevaart, J. A. D., Gage, D. A., and Talon, M. (1993) Gibberellin A 1 is
required for stem elongation in spinach. Proc. Natl. Acad. Sci. USA
90: 7401–7405.
Chapter

21
Cytokinins:
Regulators of Cell Division

THE CYTOKININS WERE DISCOVERED in the search for factors that stimulate plant cells
to divide (i.e., undergo cytokinesis). Since their discovery, cytokinins have been shown to
have effects on many other physiological and developmental processes, including leaf
senescence, nutrient mobilization, apical dominance, the formation and activity of shoot
apical meristems, floral development, the breaking of bud dormancy, and seed germination.
Cytokinins also appear to mediate many aspects of light-regulated development, including
chloroplast differentiation, the development of autotrophic metabolism, and leaf and
cotyledon expansion.

Although cytokinins regulate many cellular processes, the control of cell division is
central in plant growth and development and is considered diagnostic for this class of plant
growth regulators. For these reasons we will preface our discussion of cytokinin function with
a brief consideration of the roles of cell division in normal development, wounding, gall
formation, and tissue culture.

Later in the chapter we will examine the regulation of plant cell proliferation by cytokinins.
Then we will turn to cytokinin functions not directly related to cell division: chloroplast
differentiation, the prevention of leaf senescence, and nutrient mobilization. Finally, we will
consider the molecular mechanisms underlying cytokinin perception and signaling.

CELL DIVISION AND PLANT DEVELOPMENT

Plant cells form as the result of cell divisions in a primary or secondary meristem. Newly
formed plant cells typically enlarge and differentiate, but once they have assumed their
function—whether transport, photosynthesis, support, storage, or protection—usually they do
not divide again during the life of the plant. In this respect they appear to be similar to animal
cells, which are considered to be terminally differentiated.

However, this similarity to the behavior of animal cells is only superficial. Almost every
type of plant cell that retains its nucleus at maturity
494 Chapter 21
has been shown to be capable of dividing. This property comes into play
during such processes as wound healing and leaf abscission.
Differentiated Plant Cells Can Resume Division
Under some circumstances, mature, differentiated plant cells may resume
cell division in the intact plant. In many species, mature cells of the cortex
and/or phloem resume division to form secondary meristems, such as the
vascular cambium or the cork cambium. The abscission zone at the base of
a leaf petiole is a region where mature parenchyma cells begin to divide
again after a period of mitotic inactivity, forming a layer of cells with
relatively weak cell walls where abscission can occur (see Chapter 22).
Wounding of plant tissues induces cell divisions at the wound site. Even
highly specialized cells, such as phloem fibers and guard cells, may be
stimulated by wounding to divide at least once. Wound-induced mitotic
activity typically is self-limiting; after a few divisions the derivative cells stop
dividing and redifferentiate. However, when the soildwelling bacterium Agrobacterium
indefinitely in a simple nutrient medium containing only sucrose, mineral
tumefaciens invades a wound, it can cause the neoplastic (tumor-forming)
disease known as crown gall. This phenomenon is dramatic natural
evidence of the mitotic potential of mature plant cells.
Without Agrobacterium infection, the wound-induced cell division would
subside after a few days and some of the new cells would differentiate as a
protective layer of cork cells or vascular tissue. However, Agrobacterium
changes the character of the cells that divide in response to the wound,
making them tumorlike. They do not stop dividing; rather they continue to
divide throughout the life of the plant to produce an unorganized mass of
tumorlike tissue called a gall ( Figure 21.1). We will have more to say about
this important disease later in this chapter.
FIGURE 21.1 Tumor that formed on a tomato stem infected with the crown gall
bacterium, Agrobacterium tumefaciens. Two months before this photo was
taken the stem was wounded and inoculated with a virulent strain of the crown
gall bac- terium. (From Aloni et al. 1998, courtesy of R. Aloni.)
Diffusible Factors May Control Cell Division
The considerations addressed in the previous section suggest that mature
plant cells stop dividing because they no longer receive a particular signal,
possibly a hormone, that is necessary for the initiation of cell division. The
idea that cell division may be initiated by a diffusible factor originated with
the Austrian plant physiologist G. Haberlandt, who, in about 1913,
demonstrated that vascular tissue contains a water-soluble substance or
substances that will stimulate the division of wounded potato tuber tissue.
The effort to determine the nature of this factor (or factors) led to the
discovery of the cytokinins in the 1950s.
Plant Tissues and Organs Can Be Cultured
Biologists have long been intrigued by the possibility of growing organs,
tissues, and cells in culture on a simple nutrient medium, in the same way
that microorganisms can be cultured in test tubes or on petri dishes. In the
1930s, Philip White demonstrated that tomato roots can be grown
salts, and a few vitamins, with no added hormones (White 1934).
In contrast to roots, isolated stem tissues exhibit very little growth in
culture without added hormones in the medium. Even if auxin is added, only
limited growth may occur, and usually this growth is not sustained.
Frequently this auxin-induced growth is due to cell enlargement only. The
shoots of most plants cannot grow on a simple medium lacking hormones,
even if the cultured stem tissue contains apical or lateral meristems, until
adventitious roots form. Once the stem tissue has rooted, shoot growth
resumes, but now as an integrated, whole plant.
These observations indicate that there is a difference in the regulation
of cell division in root and shoot meristems. They also suggest that some
root-derived factor(s) may regulate growth in the shoot.
Crown gall stem tissue is an exception to these generalizations. After a
gall has formed on a plant, heating the plant to 42°C will kill the bacterium
that induced gall formation. The plant will survive the heat treatment, and its
gall tissue will continue to grow as a bacteria-free tumor (Braun 1958).
Tissues removed from these bacteria-free tumors grow on simple,
chemically defined culture media that would not support the proliferation of
normal stem tissue of the same species. However, these stem-derived
tissues are not organized. Instead they grow as a mass of disorganized,
relatively undifferentiated cells called callus tissue.
Callus tissue sometimes forms naturally in response to wounding, or in
graft unions where stems of two different plants are joined. Crown gall
tumors are a specific type of callus, whether they are growing attached to
the plant or in culture. The finding that crown gall callus tissue can be
cultured demonstrated that cells derived from stem tissues are capable of
proliferating in culture and that contact with
 Cytokinins: Regulators of Cell Division 495

the bacteria may cause the stem cells to produce cell division–stimulating
factors.
THE DISCOVERY, IDENTIFICATION, AND
PROPERTIES OF CYTOKININS
Agreat many substances were tested in an effort to initiate and sustain the
proliferation of normal stem tissues in culture. Materials ranging from yeast
extract to tomato juice were found to have a positive effect, at least with
some tissues. However, culture growth was stimulated most dramatically
when the liquid endosperm of coconut, also known as coconut milk, was
added to the culture medium.
Kinetin is not a naturally occurring plant growth regulator, and it does
not occur as a base in the DNA of any species. It is a by-product of the
heat-induced degradation of DNA, in which the deoxyribose sugar of
adenosine is converted to a furfuryl ring and shifted from the 9 position to
the 6 position on the adenine ring.
The discovery of kinetin was important because it demonstrated that
cell division could be induced by a simple chemical substance. Of greater
importance, the discovery of kinetin suggested that naturally occurring
molecules with structures similar to that of kinetin regulate cell division
activity within the plant. This hypothesis proved to be correct.

Philip White’s nutrient medium, supplemented with an auxin and 10 to Zeatin Is the Most Abundant Natural Cytokinin
20% coconut milk, will support the continued cell division of mature, Several years after the discovery of kinetin, extracts of the immature
differentiated cells from a wide variety of tissues and species, leading to the endosperm of corn ( Zea mays) were found to contain a substance that has
formation of callus tissue (Caplin and Steward 1948). This finding indicated the same biological effect as kinetin. This substance stimulates mature
that coconut milk contains a substance or substances that stimulate mature plant cells to divide when added to a culture medium along with an auxin.
cells to enter and remain in the cell division cycle. Letham (1973) isolated the molecule responsible for this activity and
identified it as trans- 6-(4-hydroxy-3methylbut-2-enylamino)purine, which he
called zeatin:
Eventually coconut milk was shown to contain the cytokinin zeatin, but
this finding was not obtained until several years after the discovery of the
cytokinins (Letham
CH 2 OH CH 3
1974). The first cytokinin to be discovered was the synthetic analog kinetin. CCH CCH
HN CH 2 CH 3 HN CH 2 CH 2 OH

Kinetin Was Discovered as a Breakdown Product of DNA N

N
N
N

N NH N NH
In the 1940s and 1950s, Folke Skoog and coworkers at the University of
Wisconsin tested many substances for their ability to initiate and sustain the trans- Zeatin cis- Zeatin
proliferation of cultured tobacco pith tissue. They had observed that the 6-(4-Hydroxy-3-methylbut-2-enylamino)purine

nucleic acid base adenine had a slight promotive effect, so they tested the
possibility that nucleic acids would stimulate division in this tissue.
Surprisingly, autoclaved herring sperm DNA had a powerful cell
division–promoting effect.
After much work, a small molecule was identified from the autoclaved
DNAand named kinetin. It was shown to be an adenine (or aminopurine)
derivative, 6-furfurylaminopurine (Miller et al. 1955):
H H
H C C
The molecular structure of zeatin is similar to that of kinetin. Both
molecules are adenine or aminopurine derivatives. Although they have
different side chains, in both cases the side chain is attached to the 6
nitrogen of the aminopurine. Because the side chain of zeatin has a double
bond, it can exist in either the cis or the trans configuration.
In higher plants, zeatin occurs in both the cis and the
trans configurations, and these forms can be interconverted by an enzyme
known as zeatin isomerase. Although the trans

N
H CC
form of zeatin is much more active in biological assays, the
H
OC cis form may also play important roles, as suggested by the fact that it has
H
Amino
been found in high levels in a number of plant species and particular
purine CN 6 C
N
12 3 4 5 78
H
tissues. Agene encoding a glucosyl transferase enzyme specific to cis- zeatin
C
CNC 9
has recently been cloned, which further supports a biological role for this
H N
isoform of zeatin.
H

Kinetin
In the presence of an auxin, kinetin would stimulate tobacco pith
parenchyma tissue to proliferate in culture. No kinetin-induced cell division
occurs without auxin in the culture medium. (For more details, see Web
Topic 21.1 .)
Since its discovery in immature maize endosperm, zeatin has been
found in many plants and in some bacteria. It is the most prevalent cytokinin
in higher plants, but other substituted aminopurines that are active as
cytokinins have been isolated from many plant and bac-
496 Chapter 21

terial species. These aminopurines differ from zeatin in the nature of the and all the naturally occurring cytokinins are aminopurine derivatives. There
side chain attached to the 6 nitrogen or in the attachment of a side chain to are also synthetic cytokinin compounds that have not been identified in
carbon 2: plants, most notable of which are the diphenylurea-type cytokinins, such as
thidiazuron, which is used commercially as a defoliant and an herbicide:
CH 3
CCH
HN CH 2 CH 3

O
N NH HN C
N

9NH
N,N ′- Diphenylurea ( nonamino purine
N
with weak activity)
N 6-( ∆ 2- Isopentenyl)-adenine (iP)

CH 2 OH
NH S N
CCH NH

HN CH 2 CH 3
H
Thidiazuron
N
N
In the course of determining the structural requirements for cytokinin
NH
N activity, investigators found that some molecules act as cytokinin

Dihydrozeatin (DZ) antagonists:

In addition, these cytokinins can be present in the plant as a riboside ( in CH 3

NH CH 2 CH
which a ribose sugar is attached to the 9 nitrogen of the purine ring), a ribotide
N CH 2 CH 3
N
( in which the ribose sugar moiety contains a phosphate group), or a glycoside
N

N
(in which a sugar molecule is attached to the 3, 7, or 9 nitrogen of the CH 3

purine ring, or to the oxygen of the zeatin or dihydrozeatin side chain) (see Web
Topic 21.2 ).
Some Synthetic Compounds Can Mimic or
Antagonize Cytokinin Action
Cytokinins are defined as compounds that have biological activities similar
to those of trans- zeatin. These activities include the ability to do the
following:
• Induce cell division in callus cells in the presence of an auxin
• Promote bud or root formation from callus cultures when in the
appropriate molar ratios to auxin
3-Methyl-7-(3-methylbutylamino)pyrazolo[4,3- D] pyrimidine
These molecules are able to block the action of cytokinins, and their effects
may be overcome by the addition of more cytokinin. Naturally occurring
molecules with cytokinin activity may be detected and identified by a
combination of physical methods and bioassays (see Web Topic 21.3 ).
Cytokinins Occur in Both Free and Bound Forms
Hormonal cytokinins are present as free molecules (not covalently attached
to any macromolecule) in plants and certain bacteria. Free cytokinins have
been found in a wide spectrum of angiosperms and probably are universal
in this group of plants. They have also been found in algae, diatoms,

• Delay senescence of leaves mosses, ferns, and conifers.

• Promote expansion of dicot cotyledons

Many chemical compounds have been synthesized and tested for
cytokinin activity. Analysis of these compounds provides insight into the
structural requirements for activity. Nearly all compounds active as
cytokinins are N 6- substituted aminopurines, such as benzyladenine (BA):
CH 2
The regulatory role of cytokinins has been demonstrated only in
angiosperms, conifers, and mosses, but they may function to regulate the
growth, development, and metabolism of all plants. Usually zeatin is the
most abundant naturally occurring free cytokinin, but dihydrozeatin (DZ) and
isopentenyl adenine (iP) also are commonly found in higher plants and
bacteria. Numerous derivatives of these three cytokinins have been
identified in plant extracts (see the structures illustrated in Figure 21.6).

Transfer RNA (tRNA) contains not only the four nucleotides used to
N N HN
construct all other forms of RNA, but also some unusual nucleotides in
NH which the base has been modified. Some of these “hypermodified” bases
N
act as cytokinins when the tRNA is hydrolyzed and tested in one of the
Benzyladenine
(benzylaminopurine) (BA)
cytokinin bioassays. Some plant tRNAs contain cis-
 Cytokinins: Regulators of Cell Division 497

zeatin as a hypermodified base. However, cytokinins are not confined to CH 2 OH

plant tRNAs. They are part of certain tRNAs from all organisms, from CCH
bacteria to humans. (For details, see Web Topic 21.4 .) HN CH 2 CH 3

N
N

The Hormonally Active Cytokinin Is the Free Base 9N

N
It has been difficult to determine which species of cytokinin represents the HOCH 2

active form of the hormone, but the recent identification of the cytokinin O

receptor CRE1 has allowed this question to be addressed. The relevant

experiments have shown that the free-base form of trans- zeatin, but not its
OH OH
riboside or ribotide derivatives, binds directly to CRE1, indicating that the
free base is the active form (Yamada et al. 2001).
Ribosylzeatin (zeatin riboside)

Although the free-base form of trans- zeatin is thought to be the

hormonally active cytokinin, some other compounds have cytokinin activity, CH 3
either because they are readily converted to zeatin, dihydrozeatin, or CCH
isopentenyl adenine, or because they release these compounds from other HN CH 2 CH 3

molecules, such as cytokinin glucosides. For example, tobacco cells in

N
culture do not grow unless cytokinin ribosides supplied in the culture N

medium are converted to the free base. 9N

N
HOCH 2

In another example, excised radish cotyledons grow when they are O

cultured in a solution containing the cytokinin base benzyladenine (BA, an

N 6- substituted aminopurine cytokinin). The cultured cotyledons readily take
OH OH
up the hormone and convert it to various BA glucosides, BAribonucleoside,
and BAribonucleotide. When the cotyledons are transferred back to a
N 6-( D 2- Isopentenyl)adenosine ([9R]iP)
medium lacking a cytokinin, their growth rate declines, as do the
concentrations of BA, BA ribonucleoside, and BA ribonucleotide in the
tissues. However, the level of the BA glucosides remains constant. This FIGURE 21.2 Structures of ribosylzeatin and N6-( ∆ 2-isopen- tenyl)adenosine
finding suggests that the glucosides cannot be the active form of the ([9R]iP).
hormone.

Some Plant Pathogenic Bacteria, Insects, and Nematodes

Secrete Free Cytokinins
Some bacteria and fungi are intimately associated with higher plants. Many
of these microorganisms produce and secrete substantial amounts of
cytokinins and/or cause the plant cells to synthesize plant hormones,
including cytokinins (Akiyoshi et al. 1987). The cytokinins produced by
microorganisms include trans- zeatin, [9R]iP, cis- zeatin, and their ribosides
(Figure 21.2). Infection of plant tissues with these microorganisms can
induce the tissues to divide and, in some cases, to form special structures,
such as mycorrhizae, in which the microorganism can reside in a mutualistic
relationship with the plant.

In addition to the crown gall bacterium, Agrobacterium tumefaciens, other

pathogenic bacteria may stimulate plant cells to divide. For example, Corynebacterium
fascians is a major cause of the growth abnormality known as witches’broom
( Figure 21.3). The shoots of plants infected by C. fascians resemble an
old-fashioned straw broom because the lateral buds, which normally remain
dormant, are stimulated by the bacterial cytokinin to grow (Hamilton and
Lowe 1972).
FIGURE 21.3 Witches’ broom on balsam fir ( Abies balsamea).
(Photo © Gregory K. Scott/Photo Researchers, Inc.)
498 Chapter 21
Infection with a close relative of the crown gall organism, Agrobacterium
rhizogenes, causes masses of roots instead of callus tissue to develop from
the site of infection. A. rhizogenes is able to modify cytokinin metabolism in
infected plant tissues through a mechanism that will be described later in
this chapter.
Certain insects secrete cytokinins, which may play a role in the
formation of galls utilized by these insects as feeding sites. Root-knot
nematodes also produce cytokinins, which may be involved in manipulating
host development to produce the giant cells from which the nematode feeds
(Elzen 1983).
BIOSYNTHESIS, METABOLISM, AND
TRANSPORT OF CYTOKININS
The side chains of naturally occurring cytokinins are chemically related to
rubber, carotenoid pigments, the plant hormones gibberellin and abscisic
acid, and some of the plant defense compounds known as phytoalexins. All
of these compounds are constructed, at least in part, from isoprene units
(see Chapter 13).
Isoprene is similar in structure to the side chains of zeatin and iP (see
the structures illustrated in Figure 21.6). These cytokinin side chains are
synthesized from an isoprene derivative. Large molecules of rubber and the
carotenoids are constructed by the polymerization of many isoprene units;
cytokinins contain just one of these units. The precursor(s) for the formation
of these isoprene structures are either mevalonic acid or pyruvate plus
3phosphoglycerate, depending on which pathway is involved (see Chapter
13). These precursors are converted to the biological isoprene unit
dimethylallyl diphosphate (DMAPP).
Crown Gall Cells Have Acquired a Gene for Cytokinin
Synthesis
Bacteria-free tissues from crown gall tumors proliferate in culture without
the addition of any hormones to the culture medium. Crown gall tissues
contain substantial amounts of both auxin and free cytokinins. Furthermore,
when radioactively labeled adenine is fed to periwinkle ( Vinca rosea) crown
gall tissues, it is incorporated into both zeatin and zeatin riboside,
demonstrating that gall tissues contain the cytokinin biosynthetic pathway.
Control stem tissue, which has not been transformed by Agrobacterium,
does not incorporate labeled adenine into cytokinins.
During infection by Agrobacterium tumefaciens, plant cells incorporate
bacterial DNA into their chromosomes. The virulent strains of Agrobacterium
contain a large plasmid known as the Ti plasmid. Plasmids are circular
pieces of extrachromosomal DNA that are not essential for the life of the
bacterium. However, plasmids frequently contain genes that enhance the
ability of the bacterium to survive in special environments.
A small portion of the Ti plasmid, known as the TDNA, is incorporated
into the nuclear DNA of the host plant cell (Figure 21.4) (Chilton et al.
1977). T-DNAcarries genes necessary for the biosynthesis of trans- zeatin
and auxin, as well as a member of a class of unusual nitrogencontaining
compounds called opines ( Figure 21.5). Opines are not synthesized by
plants except after crown gall transformation.
The T-DNAgene involved in cytokinin biosynthesis— known as the ipt 1 gene—encodes
an i so p entenyl t ransferase (IPT) enzyme that transfers the isopentenyl
group from DMAPP to AMP (adenosine monophosphate) to form
isopentenyl adenine ribotide (Figure 21.6) (Akiyoshi et al. 1984; Barry et al.
1984). The ipt gene has been called the tmr
locus because, when inactivated by mutation, it results in “rooty” tumors.
Isopentenyl adenine ribotide can be converted to the active cytokinins
isopentenyl adenine, trans-
zeatin, and dihydrozeatin by endogenous enzymes in plant cells. This
conversion route is similar to the pathway for cytokinin synthesis that has
been postulated for normal tissue (see Figure 21.6).
The T-DNAalso contains two genes encoding enzymes that convert
tryptophan to the auxin indole-3-acetic acid (IAA). This pathway of auxin
biosynthesis differs from the one in nontransformed cells and involves
indoleacetamide as an intermediate (see Figure 19.6). The ipt gene and the
two auxin biosynthetic genes of T-DNA are phyto-oncogenes, since they
can induce tumors in plants (see Web Topic 21.5 ).
Because their promoters are plant eukaryotic promoters, none of the
T-DNAgenes are expressed in the bacterium; rather they are transcribed
after they are inserted into the plant chromosomes. Transcription of the
genes leads to synthesis of the enzymes they encode, resulting in the
production of zeatin, auxin, and an opine. The bacterium can utilize the
opine as a nitrogen source, but cells of higher plants cannot. Thus, by
transforming the plant cells, the bacterium provides itself with an expanding
environment (the gall tissue) in which the host cells are directed to produce
a substance (the opine) that only the bacterium can utilize for its nutrition
(Bomhoff et al. 1976).
An important difference between the control of cytokinin biosynthesis in
crown gall tissues and in normal tissues is that the T-DNAgenes for
cytokinin synthesis are expressed in all infected cells, even those in which
the native plant genes for biosynthesis of the hormone are normally
repressed.
IPT Catalyzes the First Step in Cytokinin
Biosynthesis
The first committed step in cytokinin biosynthesis is the transfer of the
isopentenyl group of dimethylallyl diphos-
1 Bacterial genes, unlike plant genes, are written in lower- case italics.
 Cytokinins: Regulators of Cell Division 499

2. A virulent bacterium carries a Ti plasmid in addition to

its own chromosomal DNA. The plasmid‘s T-DNA enters a
cell and integrates into the cell‘s chromosomal DNA.

Chromosomal DNA
T-DNA

T-DNA
Ti plasmid Nucleus

Chromosome
Crown gall
Agrobacterium
tumefaciens

Transformed
1. The tumor is initiated when
plant cell
bacteria enter a lesion and
attach themselves to cells.

3. Transformed cells
proliferate to form a crown
gall tumor.
4. Tumor tissue can be cured“ “of bacteria
by incubation at 42ºC. The bacteria-free
tumor can be cultured indefinitely in the
absence of hormones.

FIGURE 21.4 Tumor induction by Agrobacterium tumefaciens. ( After Chilton 1983.)

phate (DMAPP ) to an adenosine moiety. An enzyme that catalyzes such

an activity was first identified in the cellular slime mold Dictyostelium
discoideum, and subsequently the ipt gene from Agrobacterium was found to
encode such an enzyme. In both cases, DMAPP and AMP are converted to
isopentenyladenosine-5 ′- monophosphate (iPMP).

NH 2
As noted earlier, cytokinins are also present in the tRNAs of most cells,
C NH (CH 2)3 CH COOH
including plant and animal cells. The tRNA cytokinins are synthesized by
NH
modification of specific adenine residues within the fully transcribed tRNA. NH

As with the free cytokinins, isopentenyl groups are transferred to the

CH 3 CH COOH
adenine molecules from DMAPP by an enzyme call tRNA-IPT. The genes
for tRNA-IPT have been cloned from many species. Octopine

NH 2

C NH (CH 2)3 CH COOH

NH
NH
FIGURE 21.5 The two major opines, octopine and nopaline, are found only in crown gall tumors. The genes
required for their synthesis are present in the T-DNA from COOH (CH 2)2 CH COOH

Agrobacterium tumefaciens. The bacterium, but not the plant, can utilize the opines as a nitrogen source.
Nopaline
 Plant Bacterial

NH 2 NH 2

N N
N N

N N
N N

O
O
O
O + PP O

P DMAPP
ATP/ADP HO OH P P AMP HO OH P

Bacterial IPT
AtIPT4
(TMR) First enzyme in biosynthetic pathway
for cytokinins

N N

N N
N N

N N
iPA iP
N N

O O
O O

P
HO OH P P HO OH P
iPTP/iPDP iPMP

OH OH OH OH

N N N N N
OH

cis-trans
N N N N N
N N N N isomerase N

N N N N NH
N N N N N
H

O O O trans- Zeatin cis- Zeatin

PP P O P O HO

trans ZOG1 Glucosidase cis ZOG1 Glucosidase

HO OH HO OH HO OH

ZTP/ZDP ZMP ZR

O Glc

FIGURE 21.6 Biosynthetic pathway for cytokinin biosynthesis. The first com- mitted step in cytokinin
biosynthesis is the addition of the isopentenyl side chain from DMAPP to an adenosine moiety.
The plant and bacterial IPT enzymes differ in the adenosine substrate used; the plant enzyme
appears to utilize both ADP and ATP, and the bacterial enzyme utilizes AMP. The prod- ucts of N N
O Glc

these reactions (iPMP, iPDP, or iPTP) are converted to zeatin by an unidentified hydroxylase. The
various phosphorylated forms can be intercon- verted and free trans- Zeatin can be formed from N
N
N
N

the riboside by enzymes of general purine metabolism. trans- Zeatin can be metabolized in various
ways as shown, and these reactions are catalyzed by the indicated enzymes. N
N
N
NH
H

O- glucosyl- O- glucosyl-
trans- zeatin cis- zeatin

The possibility that free cytokinins are derived from tRNAhas been
explored extensively. Although the tRNAbound cytokinins can act as
hormonal signals for plant cells if the tRNA is degraded and fed back to the
cells, it is unlikely that any significant amount of the free hormonal cytokinin
in plants is derived from the turnover of tRNA.
An enzyme with IPT activity was identified from crude extracts of
various plant tissues, but researchers were unable to purify the protein to
homogeneity. Recently, plant
IPT genes were cloned after the Arabidopsis genome was analyzed for
potential ipt- like sequences (Kakimoto 2001; Takei et al. 2001). Nine
different IPT genes were identified

in Arabidopsis —many more than are present in animal genomes, which
generally contain only one or two such genes used in tRNAmodification.
Phylogenetic analysis revealed that one of the Arabidopsis IPT genes
resembles bacterial tRNA- ipt, another resembles eukaryotic tRNA- IPT, and
the other seven form a distinct group or clade together with other plant
sequences (see Web Topic 21.6 ). The grouping of the seven Arabidopsis
IPT genes in this unique plant clade provided a clue that these genes may
encode the cytokinin biosynthetic enzyme.
The proteins encoded by these genes were expressed in
E. coli and analyzed. It was found that, with the exception of the gene most
closely related to the animal tRNA- IPT
genes, these genes encoded proteins capable of synthesizing free
cytokinins. Unlike their bacterial counterparts, however, the Arabidopsis enzymesleaves, and substantial amounts may be present even in senescing leaves.
that have been analyzed utilize ATP and ADP preferentially over AMP (see
Figure 21.6).
Cytokinins from the Root Are Transported to the
Shoot via the Xylem
Root apical meristems are major sites of synthesis of the free cytokinins in
whole plants. The cytokinins synthesized in roots appear to move through
the xylem into the shoot, along with the water and minerals taken up by the
roots. This pathway of cytokinin movement has been inferred from the
analysis of xylem exudate.
When the shoot is cut from a rooted plant near the soil line, the xylem
sap may continue to flow from the cut stump for some time. This xylem
exudate contains cytokinins. If the soil covering the roots is kept moist, the
flow of xylem exudate can continue for several days. Because the cytokinin
content of the exudate does not diminish, the cytokinins found in it are likely
to be synthesized by the roots. In addition, environmental factors that
interfere with root function, such as water stress, reduce the cytokinin
content of the xylem exudate (Itai and Vaadia 1971). Conversely, resupply
of nitrate to nitrogen-starved maize roots results in an elevation of the
concentration of cytokinins in the xylem sap (Samuelson 1992), which has
been correlated to an induction of cytokinin-regulated gene expression in
the shoots (Takei et al. 2001).
Although the presence of cytokinin in the xylem is well established,
recent grafting experiments have cast doubt on the presumed role of this
root-derived cytokinin in shoot development. Tobacco transformed with an
inducible ipt
gene from Agrobacterium displayed increased lateral bud outgrowth and
delayed senescence.
To assess the role of cytokinin derived from the root, the tobacco root
stock engineered to overproduce cytokinin was grafted to a wild-type shoot.
Surprisingly, no phenotypic consequences were observed in the shoot,
even though an increased concentration of cytokinin was measured in the
transpiration stream (Faiss et al. 1997). Thus the excess cytokinin in the
roots had no effect on the grafted shoot.
Cytokinins: Regulators of Cell Division 501
Roots are not the only parts of the plant capable of synthesizing
cytokinins. For example, young maize embryos synthesize cytokinins, as do
young developing leaves, young fruits, and possibly many other tissues.
Clearly, further studies will be needed to resolve the roles of cytokinins
transported from the root versus cytokinins synthesized in the shoot.
A Signal from the Shoot Regulates the Transport of Zeatin
Ribosides from the Root
The cytokinins in the xylem exudate are mainly in the form of zeatin
ribosides. Once they reach the leaves, some of these nucleosides are
converted to the free-base form or to glucosides (Noodén and Letham
1993). Cytokinin glucosides may accumulate to high levels in seeds and in
Although the glucosides are active as cytokinins in bioassays, often they
lack hormonal activity after they form within cells, possibly because they are
compartmentalized in such a way that they are unavailable.
Compartmentation may explain the conflicting observations that cytokinins
are transported readily by the xylem but that radioactive cytokinins applied
to leaves in intact plants do not appear to move from the site of application.
Evidence from grafting experiments with mutants suggests that the
transport of zeatin riboside from the root to the shoot is regulated by signals
from the shoot. The rms4
mutant of pea ( Pisum sativum L.) is characterized by a 40fold decrease in
the concentration of zeatin riboside in the xylem sap of the roots. However,
grafting a wild-type shoot onto an rms4 mutant root increased the zeatin
riboside levels in the xylem exudate to wild-type levels. Conversely, grafting
an rms4 mutant shoot onto a wild-type root lowered the concentration of
zeatin riboside in the xylem exudate to mutant levels (Beveridge et al.
1997).
These results suggest that a signal from the shoot can regulate
cytokinin transport from the root. The identity of this signal has not yet been
determined.
Cytokinins Are Rapidly Metabolized by Plant
Tissues
Free cytokinins are readily converted to their respective nucleoside and
nucleotide forms. Such interconversions likely involve enzymes common to
purine metabolism.
Many plant tissues contain the enzyme cytokinin oxidase, which
cleaves the side chain from zeatin (both cis
and trans), zeatin riboside, iP, and their N- glucosides, but not their O- glucoside
derivatives (Figure 21.7). However, dihydrozeatin and its conjugates are
resistant to cleavage. Cytokinin oxidase irreversibly inactivates cytokinins,
and it could be important in regulating or limiting cytokinin effects. The
activity of the enzyme is induced by high cytokinin concentrations, due at
least in part to an elevation of the RNA levels for a subset of the genes.
502 Chapter 21
HN NH 2
Cytokinin
oxidase CH 3
N N
N N
+ C CH C
NH NH
N O2 N CH 3
iP Adenine 3-Methyl-2-butenal
FIGURE 21.7 Cytokinin oxidase irreversibly degrades some cytokinins.
Agene encoding cytokinin oxidase was first identified in maize
(Houba-Herin et al. 1999; Morris et al. 1999). In
Arabidopsis, cytokinin oxidase is encoded by a multigene family whose
members show distinct patterns of expression. Interestingly, several of the
genes contain putative secretory signals, suggesting that at least some of
these enzymes may be extracellular.
Cytokinin levels can also be regulated by conjugation of the hormone at
various positions. The nitrogens at the 3, 7, and 9 positions of the adenine
ring of cytokinins can be conjugated to glucose residues. Alanine can also
be conjugated to the nitrogen at the 9 positon, forming lupinic acid. These
modifications are generally irreversible, and such conjugated forms of
cytokinin are inactive in bioassays, with the exception of the N 3- glucosides.
The hydroxyl group of the side chain of cytokinins is also the target for
conjugation to glucose residues, or in some cases xylose residues, yielding O-
glucoside and O-
xyloside cytokinins. O- glucosides are resistant to cleavage by cytokinin
oxidases, which may explain why these derivatives have higher biological
activity in some assays than their corresponding free bases have.
Enzymes that catalyze the conjugation of either glucose or xylose to
zeatin have been purified, and their respective genes have been cloned
(Martin et al. 1999). These enzymes have stringent substrate specificities
for the sugar donor and the cytokinin bases. Only free trans- zeatin and
dihydrozeatin bases are efficient substrates; the corresponding nucleosides
are not substrates, nor is cis- zeatin. The specificity of these enzymes
suggests that the conjugation to the side chain is precisely regulated.
The conjugations at the side chain can be removed by glucosidase
enzymes to yield free cytokinins, which, as discussed earlier, are the active
forms. Thus, cytokinin glucosides may be a storage form, or metabolically
inactive state, of these compounds. Agene encoding a glucosidase that can
release cytokinins from sugar conjugates has been cloned from maize, and
its expression could play an important role in the germination of maize
seeds (Brzobohaty et al. 1993).
Dormant seeds often have high levels of cytokinin glucosides but very
low levels of hormonally active free cytokinins. Levels of free cytokinins
increase rapidly, how-
ever, as germination is initiated, and this increase in free cytokinins is
accompanied by a corresponding decrease in cytokinin glucosides.
H
THE BIOLOGICAL ROLES OF CYTOKININS
O
Although discovered as a cell division factor, cytokinins can stimulate or
inhibit a variety of physiological, metabolic, biochemical, and developmental
processes when they are applied to higher plants, and it is increasingly
clear that endogenous cytokinins play an important role in the regulation of
these events in the intact plant.
In this section we will survey some of the diverse effects of cytokinin on
plant growth and development, including a discussion of its role in
regulating cell division. The discovery of the tumor-inducing Ti plasmid in
the plant-pathogenic bacterium Agrobacterium tumefaciens provided plant
scientists with a powerful new tool for introducing foreign genes into plants,
and for studying the role of cytokinin in development. In addition to its role
in cell proliferation, cytokinin affects many other processes, including
differentiation, apical dominance, and senescence.
Cytokinins Regulate Cell Division in Shoots and Roots
As discussed earlier, cytokinins are generally required for cell division of
plant cells in vitro. Several lines of evidence suggest that cytokinins also
play key roles in the regulation of cell division in vivo.
Much of the cell division in an adult plant occurs in the meristems (see
Chapter 16). Localized expression of the ipt
gene of Agrobacterium in somatic sectors of tobacco leaves causes the
formation of ectopic (abnormally located) meristems, indicating that
elevated levels of cytokinin are sufficient to initiate cell divisions in these
leaves (Estruch et al.
1991). Elevation of endogenous cytokinin levels in transgenic Arabidopsis results
in overexpression of the KNOTTED homeobox transcription factor
homologs KNAT1 and
STM —genes that are important in the regulation of meristem function (see
Chapter 16) (Rupp et al. 1999). Interestingly, overexpression of KNAT1 also
appears to elevate cytokinin levels in transgenic tobacco, suggesting an
interdependent relationship between KNAT and the level of cytokinins.
Overexpression of several of the Arabidopsis cytokinin oxidase genes in
tobacco results in a reduction of endogenous cytokinin levels and a
consequent strong retardation of shoot development due to a reduction in
the rate of cell proliferation in the shoot apical meristem (Figures 21.8 and
21.9) (Werner et al. 2001). This finding strongly supports the notion that
endogenous cytokinins regulate cell division in vivo.
Surprisingly, the same overexpression of cytokinin oxidase in tobacco
led to an enhancement of root growth (Figure 21.10), primarily by
increasing the size of the root api-