LAPORAN PENELITIAN

PENGARUH PENAMBAHAN CuSO4.5H2O

PADA FERMENTASI BIOETANOL DARI MOLASE

DENGAN Saccharomyces cerevisiae

Disusun oleh:

Ihsan Januar Aditya 1141520002

Risdiana Nur Fitrasari 1141520008

JURUSAN TEKNIK KIMIA

FAKULTAS TEKNIK
INSTITUT TEKNOLOGI INDONESIA
SERPONG
AGUSTUS
2019
 HALAMAN PERSETUJUAN

Proposal penelitian ini disusun oleh:

Nama : 1. Ihsan Januar Aditya (1141520002)

2. Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)

Judul : Pengaruh Penambahan CuSO4.5H2O Pada Fermentasi Bioetanol

Dari Molase Dengan Saccharomyces cerevisiae

Menyetujui,

Pembimbing

(Dr. Ir. Sidik Marsudi, M.Si)

Mengetahui,

Koordinator Penelitian Mahasiswa

(Linda Aliffia Yoshi, S.T, M.T)

 ABSTRAK

Produksi etanol dilakukan dengan penambahan CuSO4.5H2O sebesar 0

g/L, 0.5 g/L, dan 1 g/L. Medium fermentasi berupa molase. Proses fermentasi
dilakukan selama 5 hari dan parameter yang diamati adalah kadar etanol dan
pertumbuhan mikroorganisme Saccharomyces cereviciae secara gravimetri.
Rancangan penelitian yang digunakan adalah rancangan acak lengkap dengan dua
factor dan ulangan sebanyak dua kali. Faktor pertama adalah konsentrasi CuSO4
0 g/L, 0.5 g/L, dan 1 g/L faktor kedua adalah lama fermentasi 1, 2, 3, 4, dan 5 hari.
Penentuan konsentrasi etanol dilakukan dengan alat instrument gas kromatografi,
sedangkan pertumbuhan mikroorganisme diukur secara gravimetri. Hasil
penelitian menunjukkan bahwa penambahan CuSO4 pada konsentrasi tertentu
memberikan pengaruh terhadap kadar etanol namun tidak signifikan.

Kata kunci: Etanol, Molase, Saccharomices cerevisiae

iii
 ABSTRACT

Ethanol production was carried out with the addition of CuSO 4.5 H2O of
0g/L, 0.5 g/L, and 1 g/L. Medium fermentation in the form of molasses. The
fermentation process is done for 5 days and the observed parameter is the level of
ethanol and the growth of microorganisms Saccharomyces cereviciae gravimetry
methode. The research plan used is a random design complete with two factors
and a replay twice. The first factor is the concentration of CuSO4 0 g/L, 0.5 g/L,
and 1 g/L factor is the duration of fermentation of 1, 2, 3, 4, and 5 days. The
concentration determination of ethanol is carried out with a chromatographic gas
instrument, while the growth of microorganisms is measured by a gravimetry
methode. The results showed that the addition of CuSO4 to certain concentrations
had an influence on ethanol levels but not significant.

Keywords: Ethanol, Molase, Saccharomices cerevisiae

iv
 KATA PENGANTAR

Puji syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa, karena berkat rahmat-Nya penulis
dapat menyelesaikan laporan penelitian yang berjudul “Pengaruh Penambahan
CuSO4.5H2O Pada Fermentasi Bioetanol Dari Molase Dengan Saccharomyces
cerevisiae”.

Dalam penulisan proposal penelitian ini penulis menyampaikan ucapan terima

kasih dengan tulus kepada:
1. Dr. Ir. Sidik Marsudi,M.Si selaku Ketua Jurusan Teknik Kimia, Fakultas
Teknik, Institut Teknologi Indonesia sekaligus Dosen Pembimbing Penelitan.
2. Linda Aliffia Yoshi, S.T, M.T selaku Koordinator Penelitian Mahasiswa
Jurusan Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Institut Teknologi Indonesia Tahun
2019.
3. Orang tua dan keluarga penulis atas kasih sayang, perhatian, doa dan
dukungan moril maupun material yang telah diberikan sejauh ini.
4. Teman-teman Teknik Kimia Institut Teknologi Indonesia angkatan genap
tahun 2015.

Penulis menyadari bahwa penyusunan laporan penelitian ini masih banyak

kekurangan, untuk itu kritik dan saran yang membangun sangat diharapkan. Penulis
berharap semoga proposal penelitian ini dapat bermanfaat bagi pembaca.

Tangerang Selatan, 10 Agustus 2019

Penulis

v
 DAFTAR ISI

ABSTRAK ............................................................................................................. iii

ABSTRACT ........................................................................................................... iv
KATA PENGANTAR ............................................................................................ v
DAFTAR ISI .......................................................................................................... vi
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... viii
DAFTAR TABEL .................................................................................................. ix
BAB 1 ..................................................................................................................... 1
PENDAHULUAN .................................................................................................. 1
1.1 Latar Belakang .......................................................................................... 1
1.2 Rumusan Masalah ..................................................................................... 2
1.3 Tujuan Penelitian ...................................................................................... 2
BAB II ..................................................................................................................... 3
TINJAUAN PUSTAKA ......................................................................................... 3
2.1 Molase ....................................................................................................... 3
2.1.1 Komponen yang terkandung dalam molase .............................................. 5
2.2 Alkohol ..................................................................................................... 6
2.3 Fermentasi ................................................................................................. 8
2.3.1 Proses Fermentasi Dari Molase .............................................................. 11
2.4 Sel Saccharomyces cerevisiae ................................................................. 13
2.4.1 Sumber Energi Saccharomyces cerevisiae ............................................. 15
2.4.2 Pertumbuhan sel Saccharomyces cerevisiae ........................................... 16
2.5 CuSO4 ..................................................................................................... 17
2.5.1 Ion-ion Anorganik Sebagai Kofaktor Enzim .......................................... 18
2.6 Perhitungan Jumlah Sel Metode Berat Kering Sel ................................. 20
2.6.1 Prinsip Kerja Berat Kering Bakteri ......................................................... 22
2.7 Gas Chromatography Solution Shimadzhu 2010.................................... 22
2.7.1 Spesifikasi Gas Chromatography Solution Shimadzu 2010 ................... 23
2.7.2 Penerapan kromatografi gas .................................................................... 24
BAB III ................................................................................................................. 25
METODE PENELITIAN ...................................................................................... 25

vii
 3.1 Alat dan Bahan ........................................................................................ 25
3.1.1 Alat :........................................................................................................ 25
3.1.2 Bahan ...................................................................................................... 25
3.2 Variabel Penelitian .................................................................................. 26
3.2.1 Variabel Bebas ........................................................................................ 26
3.2.2 Variabel Tetap ......................................................................................... 26
3.3 Rancangan Percobaan ............................................................................. 26
3.3.1 Persiapan Alat ......................................................................................... 26
3.3.2 Preparasi Inokulum ................................................................................. 27
3.3.3 Regenerasi Sel Saccharomycess cerevisiae ............................................ 27
3.3.4 Pembuatan Stock Inokulum (Kultsum, 2009) ......................................... 27
3.3.5 Pembuatan Kurva Pertumbuhan (E. Li1 and R. Mira de Ordun˜a, 2009)28
3.3.6 Preparasi Sample (Wahyudi, 1997) ........................................................ 28
3.3.7 Proses Batch ............................................................................................ 29
3.3.8 Analisa Kadar Etanol .............................................................................. 29
3.3.9 Analisa Kadar Etanol Metode Kromatografi Gas ................................... 29
3.4 Diagram Alir Fermentasi Bioetanol ........................................................ 30
3.5 Matriks Penelitian ................................................................................... 31
3.5.1 Pengaruh Waktu Inkubasi Terhadap Pertumbuhan Mikroorganisme ..... 31
3.5.2 Efek Jumlah CuSO4 dan Lama Inkubasi Terhadap Kadar Etanol .......... 31
3.6 Jadwal Penelitian .................................................................................... 32
BAB IV ................................................................................................................. 33
HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................................. 33
4.1 Hasil dan Pembahasan ............................................................................ 33
4.1.1 Pengaruh Waktu Terhadap Pertumbuhan Mikroorganisme Metode Berat
Kering Sel .......................................................................................................... 33
4.1.2 Pengaruh Waktu dan Jumlah CuSO4 Terhadap Kadar Etanol ................ 36
KESIMPULAN ..................................................................................................... 39
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 40
LAMPIRAN .......................................................................................................... 41

vii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Jalur Glikolisis Substrat Karbohidrat .................................................10

Gambar 2.2 Sel Saccharomyces cerevisiae dengan Perbesaran 10 x 40................13
Gambar 2.3 Kurva Pertumbuhan Sel Saccharomyces cerevisiae .........................16
Gambar 2.4 Kristal CuSO4.5H2O ...........................................................................18
Gambar 2.5 Gas Chromatography Shimadzu Auto Injector 2010 .........................23
Gambar 3.1 Diagram Alir Fermentasi Bioethanol .................................................30
Gambar 4.1 Pengaruh Waktu Terhadap Pertumbuhan Mikroba ............................35
Gambar 4.2 Pengaruh Waktu dan Jumlah CuSO4 Terhadap Kadar Etanol ...........38

viii
 DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Komponen Yang Terkandung Dalam Molase .........................................5

Tabel 2.2 Kandungan Kimia Saccharomyces cerevisiae ......................................14
Tabel 2.3 Komposisi Sel Saccharomyces cerevisiae .............................................14
Tabel 2.4 Kandungan Asam Amino Dalam Saccharomyces cerevisiae ................14
Tabel 2.5 Kofaktor Ion Logam...............................................................................19
Tabel 3.1 Daftar Bahan ..........................................................................................25
Tabel 3.2 Matriks Penelitian Efek Waktu Pada Pertumbuhan Mikroorganisme ...31
Tabel 3.3 Matriks Penelitian Efek Perubahan Jumlah CuSO4 Pada Etanol ...........31
Tabel 3.4 Jadwal Penelitian....................................................................................32
Tabel 4.1 Pengaruh Waktu Terhadap Pertumbuhan Mikroorganisme ...................33
Tabel 4.2 Pengaruh Waktu dan Jumlah CuSO4 Terhadap Kadar Etanol ..............36

ix
 BAB 1
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Etanol pada umumnya dibuat secara kimiawi, namun metode ini kurang
ramah lingkungan. Oleh karena itu, etanol perlu diproduksi menggunakan bantuan
mikroorganisme melalui proses fermentasi. Etanol hasil fermentasi menggunakan
mikroorganisme dikenal sebagai bioetanol. Bioetanol dapat dibuat dengan cara
peragian (fermentasi) terhadap bahan-bahan yang mengandung pati atau gula.
Molase (tetes tebu) merupakan hasil samping dari industri pengolahan
gula yang masih mengandung gula cukup tinggi. Kandungan gula sebesar 10 –
18% dalam medium fermentasi umumnya menghasilkan etanol yang cukup
memuaskan. Dua bentuk molasses kedua-duanya adalah hasil samping industri gula
tebu, seringkali digunakan dalam proses fermentasi.
Proses fermentasi menggunakan mikroorganisme yang mampu
menghasilkan alkohol. Mikroorganisme yang sering digunakan adalah
Saccharomyces cereviciae. Hal ini disebabkan adanya enzim yang diproduksi oleh
mikroorganisme yang dapat membantu menghidrolisis pati menjadi glukosa.
Jumlah studi tentang proses yang terlibat dalam penyerapan logam dengan
khamir Saccharomyces cerevisiae telah meningkat secara signifikan dalam
beberapa tahun terakhir (Vesna Stehlik-Thomas et al, 2004). Rupanya, ion logam
sangat penting untuk semua organisme, dan karena itu pengangkut ion memainkan
peran penting dan utama yaitu mempertahankan homeostasis. Ragi ini telah
menjadi model mikroorganisme untuk mempelajari transporter logam dan
akumulasi mereka dalam sel. Namun, jumlah berlebihan dapat menyebabkan
kerusakan pada fungsi.
Melihat adanya pengaruh yang dihasilkan dari penambahan logam Tembaga
(Cu) pada aktifitas fermentasi dari bakteri Saccharomyces cerevisiae, maka peneliti
melakukan percobaan yaitu pengaruh kadar tembaga (Cu) pada pembuatan
bioetanol dari molase secara fermentasi menggunakan bakteri Saccharomyces
cerevisiae.

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 1

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
1.2 Rumusan Masalah
Perumusan masalah dalam penelitian ini adalah:
1. Apakah lama waktu fermentasi dapat mempengaruhi pertumbuhan
mikroorganisme?
2. Apakah lama waktu fermentasi dapat mempengaruhi konsentrasi etanol yang
diperoleh?
3. Apakah ada pengaruh dengan ditambahkannya kofaktor Tembaga (Cu)
terhadap bioetanol yang dihasilkan?

1.3 Tujuan Penelitian

Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan :
1. Mengetahui waktu optimum pertumbuhan mikroorganisme Saccharomyces
cerevisiae.
2. Mengetahui apakah jumlah konsentrasi Tembaga (Cu) mempengaruhi hasil
kadar bioethanol.

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 2

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Molase
Menurut Cruger dan Grueger (1984), molase merupakan salah satu
substrat yang sering digunakan dalam fermentasi alkohol sebagai salah satu
sumber karbohidrat bagi yeast yang mengandung gula, vitamin, dan senyawa N.
Molase dari tetes tebu didapatkan dari hasil pemisahan dengan kristal gula
pada pengolahan gula tebu. Proses pengolahan diawali dengan penggilingan tebu
untuk mengeluarkan nira mentah yang berbentuk jus, setelah itu nira mentah akan
memasuki proses pemurnian untuk mendapatkan nira jernih dengan cara
mengendapkan nira kotor, selanjutnya nira jernih memasuki proses penguapan yang
bertujuan untuk meningkatkan konsentrasi sampai dengan tingkat jenuhnya.
Sampai tahap ini nira kental hasil dari proses penguapan akan melalui proses
pembentukan kristal gula melalui pemasakan, setelah kristal terbentuk dan melalui
tahap pendinginan dilakukan pemisahan menggunakan alat pemusing dan
penyaring sehingga didapatkan gula mentah dan tetes tebu. (wikipedia : 2017)
Menurut Harahap (2003) produksi alkohol dengan cara fermentasi dapat
diproduksi dengan 3 macam karbohidrat, yaitu ;
a. Bahan-bahan yang mengandung gula. Bahan yang mengandung gula atau
yang biasa disebut substansi sakarin yang rasanya manis, misalnya gula tebu,
gula bit, molase, macam-macam sari buah-buahan dan lain-lain.
b. Bahan yang mengandung pati. Bahan yang mengandung pati misalnya padi-
padian, jagung, kentang, sorgum, ubi kayu, dan lain-lain. Pada pembentukan
alkohol (Said, 198)7) dengan bahan dasar pati memerlukan 3 tahap sebagai
berikut :
1) Tahap I. Pemecahan pati dengan menggunakan enzim amylase menjadi
komponen disakarida yaitu maltosa dengan reaksi sebagai berikut ;

amilase
2 C6H12O5 + H2O C12H22O11

Pati Maltosa

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 3

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
 2) Tahap II. Pemecahan maltosa dengan menggunakan enzym maltase.
Maltosa akan dihidrolisis menjadi glukosa
maltase
C12H22O11 + H2O 2 C6H12O6

Maltosa Glukosa
3) Tahap III. Pemecahan Glukosa menjadi etanol dan karbondioksida
dengan bantuan enzim zymase
zymase
C6H12O6 2 C2H5OH + 2O2

Glukosa Etanol

c. Bahan-bahan yang mengandung selulosa. Bahan-bahan yang mengandung

selulosa diantaranya kayu, cairan bunga pabrik pulp, dan cairan (waste sulfire
liquior). Bahan-bahan yang mengandung selulosa lebih sulit diuraikan karena
umumnya selulosa terikat oleh lignin. Sebelum selulosa menjadi oleh
glukosa, selulosa harus dibebaskan dahulu dari lignin. Pelepasan tersebut bisa
dilakukan dengan asam, basa, panas, dan enzimatis. Monosakarida yang sudah
dibebaskan diatas, kemudian difermentasikan menjadi alkohol (Taharisman
dan Santosa, 1999).

2C6H10O5 + H2O C12H22O11

Selulosa Maltosa

C12H22O11 + H2O 2C6H12O6

Maltosa Glukosa

C6H12O6 2 C2H5OH + 2O2

Glukosa Etanol
(Austin, 1984)

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 4

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
 2.1.1 Komponen yang terkandung dalam molase

Bahan baku molase yang dipakai untuk produksi bioetanol mengandung

beberapa komponen seperti berikut (Tabel 2.1)

Tabel 2.1 Komponen Yang Terkandung Dalam Molase (Toharisman dan Santosa, 1999)

Kandungan Kisaran (%) Rata-rata (%)

Air 17-25 20
Senyawa organik
Sakarosa 30-40 35
Glukosa 4-9 7
Fruktosa 5-12 9
Gula reduksi lain 1-5 3
Protein kasar 2.5-4.5 4
Asam amino 0.3-0.5 0.4
Senyawa Anorganik
K2O 4.8
CuO 1.2
MgO 0.98
Na2O 0.1
Fe2O3 0.12
SO3 1.9
Cl 1.8
P2O5 0.6
SiO2 tak larut 0.6

Kandungan Kisaran (%) Rata-rata (%)

Wax, Phospolipid, Sterol 0.4
Vitamin (µ/g)
Biotin (H) 2
Cholin (B4) 8.8
Asam folat (B Komplek) 0.35
Niacin (B Komplek) 23
Riboflavin (B2) 40
Asam panthotenat (B Komplek) 2.5
Phyrodoxin (B6) 4
Thiamine (B1) 0.8

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 5

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
2.2 Alkohol
Alkohol adalah istilah yang dipakai untuk menyebut etanol, yang juga
disebut “grain alkohol” dan kadang untuk minuman yang mengandung alkohol. Hal
ini disebabkan karena memang etanol yang digunakan sebagai bahan dasar pada
minuman tersebut, bukan metanol, atau group alkohol lainnya. Begitu juga
dengan alkohol yang digunakan dalam dunia farmasi. Alkohol yang dimaksudkan
adalah etanol.
Produksi etanol dengan cara fermentasi bisa diproduksi dari 3 macam
karbohidrat, yaitu :
1. Bahan-bahan yang mengandung gula atau disebut juga substansi sakharin yang
rasanya manis, seperti misalnya gula tebu, gula bit, molase (tetes tebu), macam-
macam sari buah-buahan dan lain-lain. Molase mengandung 50- 55% gula
yang dapat difermentasi, yang terdiri dari atas 69% sakhrosa dan 30% gula
inversi.
2. Bahan yang mengandung pati misalnya: padi-padian, jagung, gandum, kentang
sorgum, malt, barlrey, ubi kayu dan lain-lain.
3. Bahan-bahan yang mengandung selulosa, misalnya: kayu, cairan buangan
pabrik pulp dan kertas (waste sulfire liquor).

Dalam proses fermentasi alkohol digunakan ragi. Ragi ini dapat mengubah
glukosa menjadi alkohol dan gas CO2. Ragi merupakan mikroorganisme bersel
satu, tidak berklorofil dan termasuk golongan eumycetes. Dari golongan ini
dikenal beberapa jenis, antara lain Saccharomyces anamenesis,
Schizosaccharomyces pombe dan Saccharomyces cereviside. Masing-masing
mempunyai kemampuan memproduksi alkohol yang berbeda.
Etanol juga dapat dihasilkan dari hidrasi etilen yang merupakan derivat dari
minyak bumi dan batu bara. Proses tanpa fermentasi ini berlangsung dengan cara
menambahkan air pada suhu tinggi (Winarno, 2007). Menurut Murdiyatmo (2007)
68% etanol di dunia digunakan sebagai bahan bakar. Produksi etanol tersebut
banyak dikembangkan dengan komoditi pertanian melalui fermentasi. Menurut
Harahap (2003), produksi etanol dengan cara fermentasi bisa diproduksi dari 3
macam karbohidrat yaitu bahan-bahan yang mengandung gula seperti gula tebu,
gula bit, molase (tetes tebu), sari buah dan lain-lain. Etanol (sering disebut juga etil-

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 6

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
alkohol atau alkohol saja), adalah alkohol yang paling sering digunakan dalam
kehidupan sehari-hari. Karena sifatnya yang tidak beracun, bahan ini banyak
dipakai sebagai pelarut dalam dunia farmasi dan industri makanan dan minuman.
Etanol tidak berwarna dan tidak berasa tapi memilki bau yang khas. Bahan ini dapat
memabukkan jika diminum. Rumus molekul etanol adalah C2H5OH atau rumus
empiris C2H6O. Etanol dan alkohol membentuk larutan azeotrop. Karena itu
pemurnian etanol yang mengandung air dengan cara penyulingan biasa hanya
mampu menghasilkan etanol dengan kemurnian 96%. Etanol murni (absolut)
dihasilkan pertama kali oleh Johan Tobias Lowitz yaitu dengan cara menyaring
alkohol hasil distilasi melalui arang. Lavoisier menggambarkan bahwa etanol
adalah senyawa yang terbentuk dari karbon, hidrogen dan oksigen. Pada tahun 1808
Saussure dapat menentukan rumus kimia etanol.
Lima puluh tahun kemudian (Couper, 1858) menerbitkan rumus bangun
etanol. Dengan demikian etanol adalah salah satu senyawa kimia yang pertama kali
ditemukan rumus bangunnya (Muslimin, 1996). Etanol dapat dibuat melalui proses
fermentasi diikuti kemudian dengan proses destilasi sehingga serat dan gumpalan
gula dari bahan dasar (jagung, gandum, tebu, buah-buahan ataupun sisa sayur
mayur) ataupun pengotor lainnya terpisah dari etanolnya. Produksi etanol/bioetanol
(alkohol) dengan bahan baku tanaman yang mengandung pati atau karbohidrat,
dilakukan melalui proses konversi karbohidrat menjadi gula (glukosa) larut air
dilakukan dengan penambahan air dan enzim dengan perbandingan 1:2, kemudian
dilakukan proses peragian atau fermentasi gula menjadi etanol dengan penambahan
yeast atau ragi. Selain etanol/bioetanol dapat diproduksi dari bahan tanaman yang
mengandung selulosa, namun dengan adanya lignin mengakibatkan proses
penggulaannya menjadi sulit, sehingga pembuatan etanol dari selulosa tidak
direkomendasikan meskipun teknik produksi etanol/bioetanol merupakan teknik
yang sudah lama diketahui, namun etanol/bioetanol untuk bahan bakar kendaraan
memerlukan etanol dengan karakteristik tertentu yang memerlukan teknologi yang
relatif baru di Indonesia antara lain mengenai neraca energi (energy balance) dan
efisiensi produksi, sehingga penelitian lebih lanjut mengenai teknologi proses
produksi etanol masih perlu dilakukan.
Pada proses fermentasi sebelum terbentuk alkohol maka akan membentuk

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 7

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
glukosa lebih dahulu sehingga untuk pembentukan alkohol membutuhkan waktu
lebih lama dari pada pembentukan glukosa. Namun bila fermentasi terlalu lama
nutrisi dalam subtrat, akan habis dan khamir tidak dapat memfermentasi bahan.
Anik (Purbarini, 2003).

2.3 Fermentasi
Fermentasi adalah Proses produksi energi dalam sel dalam keadaan
anaerobik (tanpa oksigen) maupun aerob. Secara umum, Fermentasi adalah Salah
satu bentuk respirasi anaerobik, akan tetapi, terdapat definisi yang lebih jelas yang
mendefinisikan fermentasi sebagai respirasi dalam lingkungan anaerobik dengan
tanpa akseptor elektron eksternal (Dirmanto, 2006). Fermentasi mempunyai
pengertian aplikasi metabolisme mikroba untuk mengubah bahan baku menjadi
produk yang bernilai tinggi, seperti asam–asam organik, protein sel tunggal,
antibiotika, dan biopolymer. Fermentasi merupakan proses yang relatif murah yang
pada hakekatnya telah lama dilakukan oleh nenek moyang kita secara tradisional
dengan produk–produknya yang sudah biasa dikonsumsi manusia sampai sekarang
seperti tape, tempe, oncom, dan lain–lain. ( Nurhayani, 2000 )
Fermentasi dapat diartikan sebagai perubahan gradual oleh enzim beberapa
bakteri, khamir, dan jamur. Contoh perubahan kimia dari fermentasi meliputi
pengasaman susu, dekomposisi pati dan gula menjadi alkohol dan karbondioksida,
serta oksidasi senyawa nitrogen organik. (Hidayat, 2006) Pada proses fermentasi
lebih dari 3 hari terjadi perombakan gula menjadi alkohol, akan dapat menyebabkan
minuman sari buah beralkohol (Siswadji, 1985). Pada proses fermentasi melibatkan
beberapa enzim yang dikeluarkan oleh kapang, sehingga jumlah sel kapang yang
hidup paling tinggi terdapat pada lama fermentasi 3 hari dan semakin lama
fermentasi aktivitas kapang semakin menurun (Inggrid, 2003).
Lamanya proses fermentasi tergantung kepada bahan dan jenis produk yang
akan dihasilkan. Proses pemeraman singkat (fermentasai tidak sempurna) yang
berlangsung sekitar 1-2 minggu dapat menghasilkan produk dengan kandungan
etanol 3-8%. Contohnya adalah produk bir. Sedangkan proses pemeraman yang
lebih panjang (fermentasi sempurna) yang dapat mencapai waktu bulanan bahkan
tahunan seperti dalam pembuatan anggur dapat menghasilkan produk dengan
kandungan etanol sekitar 7-18%. (Hidayat, 2006).

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 8

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
 Reaksi dalam fermentasi berbeda-beda tergantung pada jenis gula yang
digunakan dan produk yang dihasilkan. Secara singkat glukosa (C6H12O6) yang
merupakan gula paling sederhana, melalui fermentasi akan menghasilkan etanol
(2C2H5OH). Reaksi fermentasi ini dilakukan oleh ragi, dan digunakan pada
produksi makanan. Persamaan reaksi kimia yaitu :
C6H12O6 → 2 C2H5OH → 2 CO2 → 2 ATP (energi yang dilepaskan)
Dijabarkan sebagai :
Gula → (glukosa,fruktosa dan sukrosa) alkohol → (etanol) + karbondioksida +
energi(ATP)
(Nurdyastuti, 2008).
Untuk memperoleh hasil yang optimum, persyaratan untuk pertumbuhan
ragi harus diperhatikan, yaitu :
1. pH dan kadar karbohidratnya dari substrat
2. Temperatur selama fermentasi
3. Kemurnian dari ragi itu sendiri. (Winarno, 1980)

Proses fermentasi tergantung pada banyak sedikitnya penambahan khamir

dalam bahan. Semakin banyak jumlah ragi yang diberikan berarti semakin banyak
jumlah khamir yang terlibat, sehingga kadar alkohol meningkat (Tarigan, 1990).
Semakin lama fermentasi maka asam yang dihasilkan akan lebih banyak
(Yuliani, 2003). Proses terjadinya penurunan pH dapat terjadi dari awal fermentasi
diakibatkan terbentuknya asam-asam selama proses fermentasi berlangsung. Asam-
asam yang terbentuk seperti asam asetat, asam piruvat, dan asam laktat dapat
menurunkan pH. (Muljono, dan Daewis, 1990).
Jika tumbuh dalam keadaan anaerobik, kebanyakan khamir lebih cenderung
memfermentasi subtrat karbohidrat untuk menghasilkan etanol bersama sedikit
produk akhir sesuai jalur glikolisis menurut Buckle,(1987) sebagai berikut :

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 9

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
 Gula

Fosfogliceroldehida

Asam
Piruva
Aerobic Anaerobic

Energi Tinggi Asam Etanol Alkohol Ester Asam Keton

+ CO2 + H2O
Lakta

Gambar 2.1 Jalur Glukolisis Substrat Karbohidrat

Fermentasi dapat terjadi karena adanya aktifitas mikroba penyebab

fermentasi pada substrat organik yang sesuai. Faktor-faktor yang mempengaruhi
fermentasi antara lain :
a. Keasaman (pH)
Makanan yang mengandung asam bisanya tahan lama, tetapi jika oksigen
cukup jumlahnya dan kapang dapat tumbuh serta fermentasi berlangsung terus,
maka daya awet dari asam tersebut akan hilang. Tingkat keasaman sangat
berpengaruh dalam perkembangan bakteri. Kondisi keasaman yang baik untuk
bakteri adalah 4,5-5,5.

b. Mikroba
Fermentasi biasanya dilakukan dengan kultur murni yang dihasilkan di
laboratorium. Kultur ini dapat disimpan dalam keadaan kering atau dibekukan.
c. Suhu
Suhu fermentasi sangat menentukan macam mikroba yang dominan selama
fermentasi. Tiap-tiap mikroorganisme memiliki suhu pertumbuhan yang
maksimal, suhu pertumbuhan minimal, dan suhu optimal.
d. Oksigen
Udara atau oksigen selama fermentasi harus diatur sebaik mungkin untuk
memperbanyak atau menghambat pertumbuhan mikroba tertentu. Setiap
mikroba membutuhkan oksigen yang berbeda jumlahnya untuk pertmbuhan
atau membentuk sel-sel baru dan untuk fermentasi. Misalnya ragi roti

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 10

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
 (Saccharomycess cereviseae) akan tumbuh lebih baik dalam keadaan aerobik,
tetapi keduannya akan melakukan fermentasi terhadap gula jauh lebih cepat
dengan keadaan anaerobik.

e. Waktu
Laju perbanyakan bakteri bervariasi menurut spesies dan kondisi
pertumbuhannya.

1. Proses Fermentasi Dari Molase

Saccharomyces cereviseae menghasilkan enzim zimase dan invertase.

Enzim zimase berfungsi sebagai pemecah sukrosa menjadi monosakarida (glukosa
dan fruktosa), invertase selanjutnya mengubah glukosa menjadi etanol. Reaksi
adalah sebagai berikut ;
C12H22O11 + H2O  C6H12O6 + C6H12O6

Glukosa Fruktosa

Fermentasi C6H12O6  2C2H5OH + 2CO2

Kemudian disiapkan tetes tebu (molase) yang telah siap untuk difermentasi
menjadi alkohol. (Anonim, 2011).

Pada kondisi anaerob, metabolisme glukosa menjadi etanol terjadi melalui

jalur Embden Meyerhoff-Parnas yang merupakan reaksi-reaksi fosforilasi dan
defosforilasi dengan ATP dan ADP sebagai donor aseptor fosfat, reaksi
pemecahan C6 menjadi 2 molekul C3 yang terfosforilasi, reaksi oksidasireduksi
dan reaksi dekarboksilasi. Gukosa mengalami fosforilasi menjadi glukosa-6-P dan
fruktosa-6-P dengan ATP sebagai donor fosfat. Fruktosa-6-P kemudian dirubah
menjadi fruktosa-1.6-di-P kemudian dipecah mencadi 2 molekul C3 yang
terfosforilasi yaitu dihidroksiaseton fosfat dan gliseraldehida-3P. Dihidroksi
aseton fosfat selanjutnya teroksidasi menjadi gliserol fosfat kemudian diubah
menjadi gliserol yang merupakan metabolit sekunder. Gliseraldehid-3-P tereduksi
membentuk asam 1.3-difosfogliserat kemudian mengalami difosforilasi menjadi
3-P-asam gliserat dengan melepaskan fosfat dan akseptor fosfat ADP membentuk
ATP. Selanjutnya, 3-P terbentuk asam fosfoenol piruvat dengan menghasilkan

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 11

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
ATP. Melalui reaksi dekarboksilasi, asam piruvat akan membentuk asetaldehid
dan CO2 yang kemudian akan mengalami reaksi oksidasi membentuk etanol.

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 12

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
2.4 Sel Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae merupakan khamir sejati tergolong eukariot yang
secara morfologi hanya membentuk blastospora berbentuk bulat lonjong, silindris,
oval atau bulat telur yang dipengaruhi oleh strainnya. Dapat berkembangbiak
dengan membelah diri melalui "budding cell" . Reproduksinya dapat dipengaruhi
oleh keadaan lingkungan serta jumlah nutrisi yang tersedia bagi pertumbuhan sel .
Penampilan makroskopik mempunyai koloni berbentuk bulat, warna kuning
muda, permukaan berkilau, licin, tekstur lunak dan memiliki sel bulat dengan
askospora 1-8 buah (Nikon et al, 2004).
Khamir dapat berkembang biak dalam gula sederhana seperti glukosa,
maupun gula kompleks disakarida yaitu sukrosa (Marx, 1991). Selain itu untuk
menunjang kebutuhan hidup diperlukan oksigen, karbohidrat, dan nitrogen. Pada
uji fermentasi gula – gula mempunyai reaksi positif pada gula dekstrosa, galaktosa,
sukrosa, maltosa, raffinosa, trehalosa, dan negatif pada gula laktosa (Lodder, 1970).
Gambar 2.2 menunjukkan bentuk sel Saccharomyces cerevisiae dengan bentuk
blastospora bulat lonjong yang dilihat menggunakan mikroskop cahaya.

Gambar 2.2 Sel Saccharomyces cerevisiae dengan perbesaran 10 x 40

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 13

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
Komposisi kimia S. cerevisiae dapat di lihat dalam tabel 2.2

Tabel 2.2 Kandungan kimia Saccharomyces cerevisiae

Komposisi Senyawa Presentasi (%)

Protein 50-52
Karbohidrat 30-37
Lemak 4-5
Mineral lain 7-8

(Reed and Nagodawithana, 1991)

Suriawiria (1990) melaporkan komposisi kimia sel khamir yang hampir

sama pada Tabel 2.3 dan kandungan asam aminonya Tabel 2.4.

Tabel 2.3 Komposisi sel Saccharomyces cerevisiae

Komposisi Senyawa Presentasi (%)

Abu 5.0-9.5
Asam Nukleat 6.0-12.0
Lemak 2.0-6.0
Nitrogen 7.5-8.5
(Suriawiria, 1990)

Tabel 2.4 Kandungan asam amino dalam Saccharomyces cerevisiae

Komposisi Senyawa Presentasi (%)

Fenilalanin 4.1-4.8
Isoleusin 4.6-5.3
Lisin 7.7-7.8
Leusin 7.0-7.8
Metionin 1.6-1.7
Sistin 00.09
Treonin 4.8-5.4
Triptofan 1.1-1.3
Valin 5.3-5.8
Penggunaan sel Saccharomyces cerevisiae dalam produksi etanol
didasarkan pada beberapa faktor yaitu mudahnya diperoleh sel Saccharomyces

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 14

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
cerevisiae di sekitar kita, dan juga didasarkan pada jenis karbohidrat yang
digunakan sebagai medium. Untuk memproduksi etanol dari molase yang sebagian
besar merupakan sukrosa maka sel Saccharomyces cerevisiae adalah sel yang tepat.
Hal ini dikarenakan sel ini mampu tumbuh dan berkembang dengan cepat dan
mempunyai toleransi terhadap konsentrasi gula (sukrosa) yang tinggi, selain itu
etanol yang dihasilkan dapat ditoleransi oleh sel ini (Sa’id, 1987).
Menurut Fraenkel (1982), temperatur pertumbuhan yang optimum untuk sel
Saccharomyces cerevisiae adalah 28 – 36oC dan pH optimum untuk pertumbuhan
adalah 4,5 – 5,5 ( Moat and Foster, 1998)

1. Sumber Energi Saccharomyces cerevisiae

Sel Saccharomyces cerevisiae dapat hidupnya memperoleh energi dari
bahan – bahan organik dan anorganik. Sel ini mendapatkan energi dari ikatan
karbon, hal ini digunakannya untuk pertumbuhan dan perkembangbiakannya yang
seluruhnya diperoleh dari molekul glukosa, sukrosa, asam organik ataupun alkohol
yang telah diubah menjadi senyawa kompleks seperti protein, polisakarida, lemak
dan lignin (Gattaway and evans, 1984).
Menurut Buckle (1987) karbon dan energi yang diperlukan oleh sel
Saccharomyces cerevisiae diperoleh dari gula dan karbohidrat lain seperti glukosa.
Karbohidrat merupakan sumber karbon paling banyak yang digunakan dalam
fermentasi oleh sel ini.
Dalam industri etanol digunakan khamir jenis Saccharomyces cerevisiae
yang sering juga disebut khamir permukaan (top yeast), yaitu khamir yang bersifat
fermentatif kuat dan tumbuh dengan cepat pada suhu 20oC. Khamir permukaan ini
tumbuh secara bergerombol dan melepaskan karbon dioksida dengan cepat, yang
mengakibatkan sel terapung pada permukaan (Fardiaz, 1992).
Kemampuan untuk mengkonversi gula menjadi etanol ini disebabkan oleh
adanya peran dari enzim zimase dan invertase. Enzim zimase adalah enzim yang
berperan sebagai pemecah sukrosa dari gula menjadi monosakarida-
monosakaridanya (glukosa dan fruktosa), selanjutnya terdapat enzim invertase
yang mengubah glukosa menjadi etanol. Konsentrasi gula yang umumnya dibuat
untuk pembuatan etanol berkisar 14-20 persen. Jika konsentrasi lebih tinggi akan
menghambat aktivitas dari khamir dikarenakan menurunnya oksigen terlarut yang

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 15

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
diperlukan khamir. Lama dari fermentasi sekitar 30 – 70 jam dengan kondisi
anaerob (Judoamidjojo et al. 1992)

2. Pertumbuhan sel Saccharomyces cerevisiae

Pertumbuhan sel merupakan puncak aktivitas fisiologi yang saling

mempengaruhi secara berurutan. Proses pertumbuhan ini sangat kompleks meliputi
pemasukan nutrien dasar dari lingkungan ke dalam sel, konversi bahan-bahan
nutrien menjadi energi dan berbagai constituen vital cell serta perkembangbiakan.
Pertumbuhan mikrobial ditandai dengan peningkatan jumlah dan massa sel serta
kecepatan pertumbuhan tergantung pada lingkungan fisik dan kimia
(Anonymous,2008).
Adapun kurva pertumbuhan mikroba secara umum dapat dilihat pada
Gambar 2.3

Gambar 2.3 Kurva pertumbuhan sel Saccharomyces cerevisiae

1. Fase Log Pertumbuhan Eksponensial

Pada fase eksponensial atau logaritmik, sel berada dalam keadaan
pertumbuhan yang seimbang. Selama fase ini, masa dan volume sel
meningkat oleh faktor yang sama dalam arti rata-rata komposisi sel dan
konsentrasi relatif metabolit tetap konstan. Selama periode ini pertumbuhan
seimbang, kecepatan peningkatan dapat diekspresikan dengan fungsi
eksponensial alami. Sel membelah dengan kecepatan konstan yang ditentukan
oleh sifat intrinsik bakteri dan kondisi lingkungan. Dalam hal ini terdapat
keragaman kecepatan pertumbuhan berbagai mikroorganisme.

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 16

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
2. Fase Stasioner
Pada saat digunakan kondisi biakan rutin, akumulasi produk limbah,
kekurangan nutrien, perubahan pH, dan faktor lain yang tidak diketahui akan
mendesak dan mengganggu biakan, mengakibatkan penurunan kecepatan
pertumbuhan. Selama fase ini, jumlah sel yang hidup tetap konstan untuk
periode yang berbeda, bergantung pada bakteri, tetapi akhirnya menuju
periode penurunan populasi. Dalam beberapa kasus, sel yang terdapat dalam
suatu biakan yang populasi selnya tidak tumbuh dapat memanjang,
membengkak secara abnormal, atau mengalami penyimpangan, suatu
manifestasi pertumbuhan yang tidak seimbang.
3. Fase Penurunan Populasi Atau Fase Kematian
Pada saat medium kehabisan nutrien maka populasi bakteri akan menurun
jumlahnya. Pada saat ini jumlah sel yang mati lebih banyak daripada sel yang
hidup.
Pada dasarnya pertumbuhan sel Saccharomyces cerevisiae dapat
berlangsung tanpa batas, akan tetapi karena pertumbuhan sel Saccharomyces
cerevisiae berlangsung dengan mengkonsumsi nutrien sekaligus mengeluarkan
produk-produk metabolisme yang terbentuk maka setelah waktu tertentu laju
pertumbuhan akan menurun dan akhirnya pertumbuhan berhenti sama sekali.
Berhentinya pertumbuhan dapat disebabkan karena berkurangnya beberapa nutrien
esensial dalam medium atau karena terjadinya akumulasi aututuksin dalam medium
atau kombinasi dari keduanya (Ansori, 1989).

2.5 CuSO4
Tembaga (II) sulfat, juga dikenal dengan cupri sulfat, adalah sebuah
senyawa kimia dengan rumus molekul CuSO4. Senyawa garam ini eksis di bumi
dengan kederajatan hidrasi yang berbeda-beda. Bentuk anhidratnya berbentuk
bubuk hijau pucat atau abu-abu putih, sedangkan bentuk pentahidratnya
(CuSO4·5H2O), berwarna biru terang. (Oxford University, 2007)

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 17

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
 Gambar 2.4 Kristal CuSO4·5H2O

1. Ion-ion Anorganik Sebagai Kofaktor Enzim

Kofaktor adalah bahan kimia yang membantu (molekul atau ion), yang
terikat enzim untuk meningkatkan aktivitas biologis enzim. Sebagian besar enzim
membutuhkan kofaktor untuk mengerahkan aktivitas mereka, sedangkan beberapa
enzim mungkin tidak membutuhkan mereka. Sebuah enzim tanpa kofaktor yang
disebut apoenzim. Ketika apoenzim bersama-sama dengan kofaktor, ia dikenal
sebagai holoenzim. Beberapa enzim dapat mengaitkan dengan satu kofaktor
sementara beberapa dapat mengaitkan dengan beberapa kofaktor. Tanpa kofaktor,
aktivitas enzim akan hilang. Kofaktor dapat dibagi menjadi dua sebagai kofaktor
organik dan faktor co anorganik. Kofaktor anorganik terutama mencakup ion
logam. Magnesium sangat penting untuk heksokinase, polimerase DNA dan
enzim glukosa-6-fosfat. Zinc merupakan ion logam penting bagi dehidrogenase
alkohol, karbonat anhidrase dan fungsi DNA polimerase. Selain magnesium dan
seng, ada ion logam lain seperti tembaga, besi, besi, mangan, nikel dll, yang
berhubungan dengan berbagai jenis enzim. Ion logam enzim dapat berpartisipasi
dalam proses katalitik dalam tiga cara utama ;
1. Dengan mengikat substrat untuk mengarahkan dengan benar untuk reaksi
2. Dengan elektrostatis menstabilkan atau melindungi muatan negatif
3. Dengan memfasilitasi oksidasi, reaksi reduksi melalui perubahan reversibel
pada tingkat oksidasi ion logam
Aktivator biasanya berikatan lemah dengan satu enzim. Banyak enzim yang
berasosiasi dengan glikolisis memerlukan logam sebagai aktivator. Logam
yang diketahui merupakan aktivator dari sistem enzim adalah Cu, Fe, Mn, Zn, Ca,

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 18

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
K dan Co. (jurnal, “Aktivitas Ligninolitik Jenis Ganoderma pada Berbagai Sumber
Karbon”). Beberapa ion logam yang dapat digunakan sebagai kofaktor dan
fungsinya dapat dilihat pada tabel 2.5

Tabel 2.5 Kofaktor ion logam

Kofaktor Ion Logam Enzim Peran kofaktor

Fe Sitokrom oksidase Redoks
Katalase
Peroksidase
Cu Asam askorbat oksidase Redoks
Zn Alkohol dehidrogenase Mengikat NAD
Karbonik anhidrase
Mn Histidin ammonia liase Pengambilan elektron
Arginase
Mg Heksokinase
Glukosa-6-fosfatase
Co Glutamat mutase
Ni Urease
Mo Xanthin oksidase redoks
V Nitrat reduktase redoks
Se Glutation peroksidase
K Piruvat kinase
Ernawati Sinaga 2012

Logam berat dapat dibagi menjadi dua kelompok, logam berat esensial dan
non esensial. Logam berat non esensial meliputi Pb, Cd, Hg, Cr, dan Ag. Logam
berat non esensial sangat beracun dan tanpa nilai gizi. Logam berat esensial seperti
Fe, Mn, Cu, Mo, Zn dan Mg. Logam berat esensial penting sebagai mikronutrien
pada sejumlah organisme tetapi beracun pada tingkat tinggi (Solisio et al., 2008).
Pada konsentrasi 5 ppm, logam berat Cu dapat menurunkan laju pertumbuhan sel
(Soeprobowati dan Haryati, 2013).
Aktivator biasanya berikatan lemah dengan satu enzim. Banyak enzim yang
berasosiasi dengan glikolisis memerlukan logam sebagai aktivator. Logam
yang diketahui merupakan aktivator dari sistem enzim adalah Cu, Fe, Mn, Zn, Ca,
K dan Co. (jurnal, “Aktivitas Ligninolitik Jenis Ganoderma pada Berbagai Sumber
Karbon”)
Tembaga juga merupakan kation divalen penting dalam sel ragi,

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 19

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
bertindak sebagai kofaktor beberapa enzim seperti sitokrom c oxydase, laktase
dan Cu, Zn-superoksida dismutase. Konsentrasi yang optimal dari Cu2 + ion
dalam medium nutritif untuk pertumbuhan ragi dan aktivitas fermentasi berada
di kisaran 1 – 10 M. Namun, hal ini juga beracun dalam jumlah berlebih (V.
Stehlik-Tomas et al)
Senyawa kofaktor yang berupa ion logam ada yang berpotensi
meningkatkan aktivitas kerja suatu enzim yang disebut sebagai aktivator enzim,
ada pula ion logam yang menghambat aktivitas enzim disebut inhibitor enzim
(Sumardjo, 2006).
Kemampuan logam tertentu untuk berikatan dengan banyak ligan dalam
bidang koordinasi logam menyebabkan logam dapat ikut serta dalam pengikatan
substrat atau koenzim ke enzim dan menimbulkan polarisasi gugus reaktif di
tempat aktif. Ion logam dapat mendukung efisiensi katalitik enzim. Ion logam
dapat membantu reaksi katalitik dengan cara mengikat substrat pada sisi
pemotongan. Selain berperan dalam pengikatan enzim dengan substrat, beberapa
ion logam juga dapat mengikat enzim secara langsung untuk menstabilkan
konformasi aktifnya atau menginduksi formasi situs pengikatan atau situs aktif
suatu enzim (Baehaki, Rinto, & Budiman, 2011).

2.6 Perhitungan Jumlah Sel Metode Berat Kering Sel

Pertumbuhan mikroorganisme dapat diukur berdasarkan konsentrasi sel (jumlah

sel per satuan isi kultur) ataupun destilasi sel (berat kering dari sel-sel persatuan
isi kultur). Dua parameter ini tidak selalu sama karena berat kering sel rata-rata
bervariasi pada tahap berlainan dalam pertumbuhan kultur, kedua parameter
tersebut juga tidak bermakna sama dalam penelitian mengenai biokimia
mikroorganisme atau gizi mikroorganisme. Untuk menentukan massa sel
mikroba dalam suatu populasi, dilakukan dengan cara menumbuhkannya dalam
suspensi homogen pada medium yang sesuai dengan konsentrasi (jumlah sel/ml)
dan densitasnya (mg/ml), dihitung adanya peningkatan seiring dengan waktu.
Pada kultur pertumbuhan mikroba dapat ditentukan laju pertumbuhan dan
waktu penuh. Metode penentuan massa sel dapat dibedakan menjadi dua cara,
yaitu secara langsung dan tidak langsung. Pengukuran pertumbuhan

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 20

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
mikroorganisme secara langsung dapat dilakukan dengan beberapa cara,yaitu ;
a. Metode Total Count
Pada metode ini sampel ditaruh di suatu ruang hitung (seperti
hemasitometer) dan jumlah sel dapat ditentukan secara langsung dengan
bantuan mikroskop (Hadioetomo, 5662).
b. Metode Turbidimetrik
Prinsip dasar metode turbidimeter adalah jika cahaya mengenai sel, maka
sebagian cahaya diserap dan sebagian cahaya diteruskan. 7umlah cahaya
yang diserap propisional (sebanding lurus dengan jumlah sel bakteri).
8taupun jumlah cahaya yang diteruskan berbanding terbalik dengan
jumlah sel bakteri. !emakin banyak jumlah sel, semakin sedikit cahaya
yang diteruskan. Metode ini memiliki kelemahan tidak dapat
membedakan antara sel mati dan sel hidup (Purwoko, 2007).
c. Metode Berat Kering
Cara yang paling cepat mengukur jumlah sel adalah metode berat kering.
Metode tersebut relatif mudah dilakukan, yaitu kultur disaringan atau
disentrifugasi, kemudian bagian yang disaring atau yang mengendap
hasil sentrifugasi dikeringkan. Pada metode ini juga tidak dapat
membedakan sel yang hidup dan mati. Akan tetapi keterbatasan itu tidak
mengurangi manfaat metode tersebut dalam hal mengukur efesiensi
fermentasi, karena pertumbuhan diukur dengan satuan berat, sehingga
dapat diperhitungkan dengan parameter konsumsi substrat dan produksi
senyawa yang diinginkan (Purwoko, 2007).
d. Metode Electronic Counter
Pada pengukuran ini, suspensi mikroorganisme dialirkan melalui lubang
kecil (orifice) dengan bantuan aliran listrik. Elektroda yang ditempatkan
pada dua sisi orifice mengukur tekanan listrik (ditandai dengan naiknya
tekanan) pada saat bakteri melalui orifice. Pada saat inilah sel terhitung.
Keuntungan metode ini adalah hasil bisa diperoleh dengan lebih cepat
dan lebih akurat, serta dapat menghitung sel dengan ukuran besar.
(Pratiwi, 2008).

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 21

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
 e. Metode Plating Technique
Metode ini merupakan metode perhitungan jumlah sel tampak (visible)
dan di dasarkan pada asumsi bahwa bakteri hidup akan tumbuh,
membelah dan memproduksi satu koloni tunggal. Satuan perhitungan
yang dipakai adalah CFU (colony forming unit) dengan cara membuat
seri pengenceran sampel dan menumbuhkan sampel pada media padat.
Pengukuran dilakukan pada plat dengan jumlah koloni berkisar 25-250
atau 30-300 (Pratiwi, 2008).
f. Metode Filtrasi Membran
Pada metode ini sampel dialirkan pada suatu sistem filter membran
dengan bantuan vaccum. Bakteri yang terperangkap selanjutnya
ditumbuhkan pada media yang sesuai dan jumlah koloni dihitung.
Keuntungan metode ini adalah dapat menghitung sel hidup dan sistem
perhitungannya langsung, sedangkan kerugiannya adalah tidak ekonomis
(Pratiwi, 2008).

2.6.1 Prinsip Kerja Berat Kering Bakteri

Cara yang paling cepat mengukur jumlah sel adalah metode berat kering.
Metode tersebut relatif mudah dilakukan, yaitu kultur disaringan atau
disentrifugasi, kemudian bagian yang disaring atau yang mengendap hasil
sentrifugasi dikeringkan. Pada metode ini juga tidak dapat membedakan sel yang
hidup dan mati. Akan tetapi keterbatasan itu tidak mengurangi manfaat metode
tersebut dalam hal mengukur efesiensi fermentasi, karena pertumbuhan diukur
dengan satuan berat, sehingga dapat diperhitungkan dengan parameter konsumsi
substrat dan produksi senyawa yang diinginkan. (Purwoko, 2007)

2.7 Gas Chromatography Solution Shimadzhu 2010

Kromatografi gas adalah proses pemisahan campuran menjadi komponen-

komponennya dengan menggunakan gas sebagai fase bergerak yang melewati
suatu lapisan serapan (sorben) yang diam. Seluruh bentuk kromatografi terdiri
dari fase diam dan fase gerak. Sebagaiman dalam dalam fase gas-cair,
kromatografi gas fase gerak dan fase diamnya diantaranya :

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 22

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
1. Fase gerak adalah gas dan zat terlarut terpisah sebagai uap. Pemisahan
tercapai dengan partisi sampel antara fase gas bergerak.
2. Fase diam berupa cairan dengan titik didih tinggi (tidak mudah menguap)
yang terikat pada zat padat penunjangnya.

2.7.1 Spesifikasi Gas Chromatography Solution Shimadzu 2010

Nama alat : Gas Chromatography

Brand : Shimadzu
Type : Gas Chromatography Solution 2010 Auto
Injector
Bahan bakar : Hydrogen
Fase gerak : Purified Air
Jenis kolom : Polar type Db. Wax
Jenis detektor : Flame Ionization Detector (FID)
Temperature kolom : 200˚ C
Injection time : 30 menit
Volume sample : 0.2 µL
Software : GC Solution (suitable for Windows 8)

Gambar 2.5 Gas Chromatography Shimadzu Auto Injector 2010

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 23

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
2.7.2 Penerapan kromatografi gas
1. Untuk identifikasi senyawa
Dengan suatu kolom tertentu dan dengan semua variabelnya seperti
temperatur dan laju alir, dikendalikan secara cermat, waktu retensi atau
volume retensi suatu zat terlarut merupakan suatu besaran dari zat terlarut
tersebut, seperti halnya titk didih atau halnya indek bias adalah besaran. Ini
menunjukkan bahwa sifat retensi dapat digunakan untuk mengetahui suatu
senyawa.
2. Analisis kuantitatif
Dengan GC tergantung pada hubungan antara jumlah suatu zat terlarut dan
ukuran dari pita elusi yang dihasilkan. Secara umum dengan detektor
diferensial, ukuran jumlah zat terlarut yang paling baik adalah luas di bawah
pita elusi. Jumlah zat terlarut = faktor kalibrasi x luas dibawah pita elusi.

Keterbasan GC adalah volatilitas sampel itu harus mempunyai tekanan

uap yang cukup pada temperatur kolom tersebut, dan ini segera
menghilangkan banyak jenis sampel. Suatu perhitungan yang aktual tidak
mungkin dilakukan tetapi harus diperkirakan bahwa sekitar 20% senyawa
kimia yang diketahui kurang cukup volatil.kebanyakan sampel organik tidak
cukup volatil untuk memungkinkan penerapan langsung dari GC.

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 24

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
 BAB III

METODE PENELITIAN

Lokasi penelitian di laboratorium mikrobiologi TIP Institut Teknologi

Indonesia, berikut alat dan bahan yang digunakan:

3.1 Alat dan Bahan

3.1.1 Alat :
1. Erlenmeyer 500 mL
2. Cawan petri
3. Inkubator
4. Centrifuge
5. Laminar air flow
6. pH meter
7. Shaker
8. Autoklaf
9. Botol plastik 1000 mL
10. Pipet ukur
11. Vial 1,5 ml
12. Termometer
13. Neraca analitik
14. Heater
15. Erlenmeyer

3.1.2 Bahan
Daftar bahan yang digunakan pada penelitian ini dapat dilihat pada Tabel
3.1
Tabel 3. 1 Daftar Bahan

Bahan Spesifikasi
Kultur Saccharomyces cerevisiae Biakan murni pada medium yeast padat
(Bila dalam bentuk lifoilisasi dilarutkan
dalam aquadest steril)

Molase -

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 25

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
Bahan Spesifikasi
Aquadest -
Etanol Merck, teknis, 70% v/v

Pepton Merck, serbuk

Merck, serbuk
Yeast extrack
Merck, serbuk
Glukosa
Merck, 98% v/v
H2SO4
-
Urea (NH2)2CO

3.2 Variabel Penelitian

3.2.1 Variabel Bebas

1. Waktu inkubasi: 1 hari, 2 hari, 3 hari, 4 hari, 5 hari.
2. Konsentrasi CuSO4: 0.0 g/L, 0.5 g/L, 1.0 g/L.

3.2.2 Variabel Tetap

3. Pertumbuhan mikroorganisme Saccharomycess cerevisiae yang
dinyatakan dalam satuan absorbansi (Abs)

4. Kadar etanol yang dihasilkan dinyatakan dalam persen volum per

volum (% v/v).

3.3 Rancangan Percobaan

Tahapan proses pembuatan bioetanol dari molase dengan saccharomyces
cerevisiae meliputi: preparasi inoculum, pembuatan media, dan proses
batch.
3.3.1 Persiapan Alat
Cawan petri dan pipet ukur disterilisasi dengan cara membungkus alat
gelas dengan kertas kemudian dioven selama 30 menit dengan suhu
170˚C.

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 26

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
3.3.2 Preparasi Inokulum
3.3.2.1 Pembuatan YPGA (Yeast Extract Pepton Glucose Agar)
(Thontowi dkk., 2007)
Media YPGA dibuat dengan menimbang 1 g pepton, 0,5 g yeast extract, 2 g
glukosa, dan 3 g agar, bahan-bahan tersebut kemudian dilarutkan dengan
akuades 100 mL dan dipanaskan hingga mendidih. Selanjutnya media
YPGA disterilisasi dengan autoclave pada suhu 121 ºC dan tekanan 15 psi
selama 15 menit. Larutan tersebut kemudian didinginkan dalam tabung
reaksi pada keadaan miring hingga memadat. Media YPGA ini digunakan
untuk regenerasi Saccharomyces cerevisiae.

3.3.2.2 Pembuatan Media YPGB (Yeast Extract Pepton Glucose Broth)

(Thontowi dkk., 2007)

Media YPGB dibuat dengan menimbang 12 g pepton, 6 g yeast extract,

dan 24 g glukosa, kemudian bahan-bahan tersebut dilarutkan dengan
akuades 1200 mL dan dipanaskan hingga mendidih. Selanjutnya media
YPGB disterilisasi dengan autoclave pada suhu 121 ºC dan tekanan 15
psi selama 15 menit. Media YPGB ini digunakan untuk pembuatan stok
inokulum.

3.3.3 Regenerasi Sel Saccharomyces cerevisiae

Biakan S.cereviciae diambil sebanyak dua ose dan dimasukkan ke dalam
media YPGA, kemudian diinkubasi selama 48 jam pada inkubator suhu
40˚ C. S.cereviciae yang telah diregenerasi digunakan untuk pembuatan
stok inokulum.

3.3.4 Pembuatan Stock Inokulum (Kultsum, 2009)

Pembuatan inokulum ini dilakukan dengan cara memindakan 2 ose
S.cereviciae ke dalam 200 mL media YPGB, kemudian dishaker pada
kecepatan 150 rpm selama 32 jam pada suhu 30 ºC. Stok inokulum
digunakan untuk pembuatan kurva pertumbuhan dan produksi bioetanol.

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 27

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
3.3.5 Pembuatan Kurva Pertumbuhan (E. Li1 and R. Mira de Ordun˜a,
2009)

Timbang cawan alumunium voil dan catat bobot kosongnya, lakukan

proses pre heating selama 12 jam dengan suhu oven 105˚ C. Sebanyak 5
mL stok inokulum dipindahkan dalam 225 mL media YPGB. Buat
sebanyak 5 buah sesuai dengan variable waktu (hari) yang diinginkan.
Lakukan sentrifugasi untuk sampel yang akan diukur berat kering sel nya.
Caranya sampel yang sesuai dengan waktu fermentasinya di sentrifuge
dengan kecepatan 1500 rpm selama 15 menit. Sampel akan terpisah
menjadi 2 fasa. Fase pada bagian bawah adalah substrat microorganisme
Saccharomycess cerevisiae, dan bagian atasnya berisi larutan media
YPGB (Yeast Extract Pepton Glucose Broth). Untuk menghitung berat
kering sel hanya digunakan bagian yang terendapkan, maka bagian atas
dapat disingkrkan untuk mempermudah proses penimbangan. Kemudian
timbang endapan hasil sentrifugasi sebanyak 0.5 g dan ratakan dengan
spatulla. Oven cawan + endapan hasil sentrifugasi pada suhu 105˚C
selama 1 jam. Pindahkan kedalam desicator bila waktu telah tercapai.
Timbang bobot setelah oven dan catat hasilnya. Hitung berat kering sel
dengan rumus ;

(𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑐𝑎𝑤𝑎𝑛 + 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑙𝑒 𝑠𝑒𝑡𝑒𝑙𝑎ℎ 𝑜𝑣𝑒𝑛) − 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑐𝑎𝑤𝑎𝑛 𝑠𝑒𝑏𝑒𝑙𝑢𝑚 𝑜𝑣𝑒𝑛 (𝑔) 𝑔
= ⋯( )
225 𝑚𝑙 𝑚𝑙

3.3.6 Preparasi Sample (Wahyudi, 1997)

Molase yang telah diencerkan hingga 20% (100 g dalam 500 ml) diambil
sebanyak 300 ml kemudian dipanaskan dengan suhu 70 ºC selama 30
menit dan disaring dengan kertas saring. Filtrat yang diperoleh
ditambahkan urea sebanyak 0,3 %, kemudian filtrat dibagi menjadi 3
masing masing 100 ml untuk ditambahkan variabel CuSO4. Ditambahkan
larutan H2SO4 0,05 M untuk mengatur pH yang dikehendaki yaitu pH 5.
Selanjutnya sampel disterilisasi ke dalam autoclave pada suhu 121 °C dan
tekanan 15 psi selama 2 jam.

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 28

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
3.3.7 Proses Batch
Larutan molase steril yang telah dipreparasi sebanyak 3 buah sebanyak
100 mL ditambahkan variasi CuSO4 sebanyak 0 ; 0.5 ; 1 (g). Diberi
identitas supaya tidak tertukar. Kemudian ditambahkan inokulum
S.cereviciae (dari proses stok inokulum) secara aseptis sebanyak 10 mL,
kemudian erlenmeyer ditutup dengan kapas dan dishaker dengan
kecepatan 150 rpm selama waktu fermentasi yang dikehendaki yaitu 1, 2,
3, 4, dan 5 (hari).

3.3.8 Analisa Kadar Etanol

Larutan yang didapatkan dari proses batch diambil sample sebanyak 1,5
ml secara aseptis sesuai dengan variable lama waktu fermentasinya.
Dipindahkan dengan menggunakan pipet ukur steril sebanyak 1,5 ml
kedalam vial steril untuk diukur kadar (%) etanol nya menggunakan alat
Gas Chromatography.

3.3.9 Analisa Kadar Etanol Metode Kromatografi Gas

Sampel yang telah dipindahkan kedalam vial steril diletakkan pada tray
vial alat Gas Chromatography untuk di inject secara otomatis. Proses
inject otomatis diatur pada program aplikasi yang dihubungkan dengan
unit komputer. Input informasi sampel yang diperlukan pada aplikasi (GC
Solution) seperti nama user, nama sample, dan volume yang diambil
syringe untuk masuk kedalam kolom. Klik start bila seluruh informasi
telah diinput. GC akan menginject sample secara otomatis dan berhenti
pada menit ke 30. Analisa hasil peak yang didapat dengan blanko etanol.
Hitung kadar etanol yang didapat dengan rumus sebagai berikut ;

𝐴𝑟𝑒𝑎 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑙𝑒
% Kadar etanol = 𝐴𝑟𝑒𝑎 𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟𝑑 × 100%

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 29

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
3.4 Diagram Alir Fermentasi Bioetanol

Pembuatan Media
- Media Yeast Extract Peptone Glucose Agar
- Media Yeast Extract Peptone Glucose Broth

Regenerasi Sel
Sel S.cerevisiae dipindahkan ke media YPGA diinkubasi selama 48
jam suhu 40˚ C

Kurva Pertumbuhan
25 ml stok inoculum dipindahkan ke 225 ml media YPGB,
siapkan sebanyak 5 buah. Ukur berat kering sesuai dengan waktu
variable (hari) dengan cara sentrifugasi kemudian endapan
ditimbang dan di oven 105˚ C 1 jam.

Preparasi Sample dan Fermentasi

Molase diencerkan 20% 300 ml. saring, filtrate ditambah
urea, dibagi menjadi 3 erlenmeyer sesuai variable CuSO4,
dishaker selama 5 hari, ambil sample setiap 24 jam, cek
kadar etanol dengan Gas Chromatograph

Gambar 3.1 Diagram alir fermentasi bioethanol dari molase dengan saccaromyches
cerevisiae

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 30

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
3.5 Matriks Penelitian
3.5.1 Pengaruh Waktu Inkubasi Terhadap Pertumbuhan Mikroorganisme
Tabel 3.2 Matriks Penelitian untuk Mengamati Efek Waktu terhadap Pertumbuhan
Mikroorganisme

Lama Hari Berat Kering Sel (g/ml)

1

3.5.2 Efek Jumlah CuSO4 dan Lama Inkubasi Terhadap Kadar Etanol

Tabel 3.3 Matriks Penelitian untuk Mengamati Efek Perubahan Jumlah CuSO 4 terhadap
Kadar Etanol

Lama
Inkubasi Jumlah CuSO4 Kadar Etanol
(Hari) (g/L) (%)
1 0.0
0.5
1.0
2 0.0
0.5
1.0
3 0.0
0.5

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 31

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
 1.0
4 0.0
0.5
1.0
5 0.0
0.5
1.0

3.6 Jadwal Penelitian

Tabel 3. 4 Jadwal Penelitian

Bulan
No Kegiatan Mei 2019 Juni 2019 Juli 2019
1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
1 Pemahaman
konsep dan
teori
2 Persiapan Alat
dan Bahan
3 Percobaan
dengan
berbagai
variabel
4 Pengumpulan
dan Analisis
Data
5 Penyusunan
Laporan
Akhir

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 32

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
 BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil dan Pembahasan

4.1.1 Pengaruh Waktu Terhadap Pertumbuhan Mikroorganisme Metode

Berat Kering Sel

Tabel 4.1 Pengaruh Waktu Terhadap Pertumbuhan Mikroorganisme

Berat Kering Sel

Hari
(g/ml)

1 2.6667 E-06

3.5556 E-06
2
4.0000 E-06
3
4.0000 E-06
4

5 4.4444 E-06

Cara yang paling cepat mengukur jumlah sel adalah metode berat kering.
Metode tersebut relatif mudah dilakukan, yaitu kultur disaringan atau
disentrifugasi, kemudian bagian yang disaring atau yang mengendap hasil
sentrifugasi dikeringkan. Pada metode ini juga tidak dapat membedakan sel yang
hidup dan mati. Akan tetapi keterbatasan itu tidak mengurangi manfaat metode
tersebut dalam hal mengukur efesiensi fermentasi, karena pertumbuhan diukur
dengan satuan berat, sehingga dapat diperhitungkan dengan parameter konsumsi
substrat dan produksi senyawa yang diinginkan (Purwoko, 2007).
Sentrifugasi dilakukan untuk mempermudah memisahkan substrat dan
mengendapkan sel bakteri Saccharomycess cerevisiae. Kemudian endapan
ditimbang untuk menghilangkan kadar air yang tersisa hingga didapatkan berat
endapan tanpa air atau pelarut media. Kandungan air akan menguap akibat proses
pemanasan. Digunakan suhu 105˚ C karena asumsinya air menguap pada suhu

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 33

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
100˚ C. Maka diambil suhu yang tidak terlalu signifikan dari titik didih air.
Kemudian setelah proses pengeringan selesai cawan yang berisi sampel
dipindahkan ke dalam desikator. Fungsinya adalah untuk menstabilkan berat
hingga suhu ruang. Didiamkan di desikator sekitar 15 menit hingga konstan
kemudian ditimbang berat setelah oven dan dicatat hasilnya. Besarnya berat
kering sel dapat dihitung menggunakan rumus :

(𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑐𝑎𝑤𝑎𝑛 + 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑙𝑒 𝑠𝑒𝑡𝑒𝑙𝑎ℎ 𝑜𝑣𝑒𝑛) − 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑐𝑎𝑤𝑎𝑛 𝑠𝑒𝑏𝑒𝑙𝑢𝑚 𝑜𝑣𝑒𝑛 (𝑔) 𝑔
=( )
225 𝑚𝑙 𝑚𝑙

Perhitungan ini adalah perhitungan dasar gravimetry. Metode perhitungan dengan

menggunakan prinsip bobot. Pada rumus bobot cawan + sampel setelah oven
dikurangi dengan bobot cawan kosong sebelum oven, kemudian dibagi 225 ml.
Tujuan dibagi dengan 225 ml adalah untuk menghitung berat gram kering per
satuan ml. Karena volume biakan yang digunakan saat proses sentrifugasi adalah
sebanyak 225 ml. Sehingga kita akan mendapat satuan g/ml.
Dari penelitian yang dilakukan didapatkan hasil yang tidak signifikan antara
variable waktu dengan berat kering sel bakteri. Data yang diperoleh dari hari 1
sampai hari ke 5 secara berturut-turut adalah sebanyak 2.6667 E-06 ; 3.5556 E-06
; 4.0000 E-06 ; 4.0000 E-06 ; 4.4444 E-06 g/ml. Hal ini bisa terjadi karena
sampel yang disentrifugasi terlalu sedikit sehingga menghasilkan endapan yang
sedikit pula. Kemudian neraca yang digunakan selama proses praktikum adalah
neraca analitis yang memiliki ketelitian 0,0001 g. Artinya neraca tidak mampu
untuk membaca bobot dengan lebbih kecil dari 0,0001 g. Sedangkan bobot yang
didapatkan kurang terlihat perbedaannya dari variable waktu (hari). Bila
menggunakan neraca dengan ketelitian diatas 0.0001 g mungkin akan lebih
terlihat selisih nya. Berikut ini adalah grafik antara berat kering sel bakteri bila
dibandingkan dengan waktu (hari) :

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 34

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
 Gambar 4.1 Pengaruh Waktu Terhadap Pertumbuhan Mikroorganisme

Sesuai dengan teori yang dikemukakan oleh Purwoko, 2007 yang manyatakan
bahwa metode berat kering tidak dapat membedakan sel yang hidup dan mati.
Sehingga kita tidak dapat mengetahui kapan terjadinya Lag Phase, Log Phase,
Stationary Phase, dan Death Phase. Kerena mikroorganisme baik yang masih
hidup maupun yang sudah mati tetap memiliki massa atau bobot. Namun bila
dilihat dari grafik pertumbuhan pengaruh waktu terhadap pertumbuhan
mikroorganisme pada hari ke 1 hingga hari ke 2 didapatkan hasil yang meningkat.
Artinya pada tahap ini mikroorganisme berkembang pesat. Sesuai dengan
pendapat Ferdias (1998). Mikroorganisme akan mengalami Log Phase pada hari
ke 2 atau ke 3 setelah inkubasi. Dari percobaan yang didapatkan puncak
pertumbuhan mikroorganisme Saccharomyces cerevisiae terjadi pada hari ke 3.

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 35

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
4.1.2 Pengaruh Waktu dan Jumlah CuSO4 Terhadap Kadar Etanol

Tabel 4.2 Pengaruh Waktu dan Jumlah CuSO4 Terhadap Kadar Etanol
Jumlah CuSO4 Kadar Etanol Kadar Etanol Rata-rata
Hari Pengulangan
(g) (%) (%)

simplo 0.04
0 0.05
duplo 0.05

simplo 0.05
0 0.5 0.05
duplo 0.05

simplo 0.07
1 0.07
duplo 0.06

simplo 4.13
0 4.12
duplo 4.1

simplo 4.24
1 0.5 4.25
duplo 4.25

simplo 4.35
1 4.37
duplo 4.38

simplo 7.22
0 7.39
duplo 7.56

simplo 7.48
2 0.5 7.55
duplo 7.62

simplo 7.64
1 7.75
duplo 7.85

simplo 6.67
0 6.55
duplo 6.42

3 simplo 6.51
0.5 6.60
duplo 6.69

1 simplo 6.56 6.62

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 36

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
 duplo 6.68

simplo 3.77
0 3.71
duplo 3.65

simplo 3.84
4 0.5 3.88
duplo 3.92

simplo 4.05
1 4.03
duplo 4

simplo 1.39
0 1.44
duplo 1.48

simplo 1.5
5 0.5 1.58
duplo 1.65

simplo 1.74
1 1.76
duplo 1.77

Jumlah CuSO4.5H2O yang ditambahkan pada fermentasi bioetanol dari

molase dengan Saccharomyces cerevisiae dengan variasi 0; 0,5; dan 1 g. Gambar
4.2 menunjukkan pengaruh waktu fermentasi terhadap berbagai variasi jumlah
CuSO4.5H2O. Dari gambar 4.2 terlihat bahwa semakin lama waktu fermentasi
kadar etanol akan mengalami kenaikan maksimal di hari ke 2 yaitu dikisaran 7%
dan semakin banyak jumlah CuSO4 yang ditambahkan maka akan semakin
banyak juga kadar etanol nya meskipun tidak signifikan. Kenaikan kadar etanol
ini terjadi karena lama waktu fermentasi berhubungan erat dengan kurva
pertumbuhan mikroorganisme.

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 37

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
 8
7.5
7
6.5
6
5.5
5
4.5
4
Kadar Etanol %

3.5
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
0 1 2 3 4 5 6
Waktu Fermentasi (Hari)
Kofaktor 0 gram

Kofaktor 0.5 gram

Kofaktor 1 gram

Gambar 4.2 Pengaruh Waktu dan Jumlah CuSO4 Terhadap Kadar Etanol

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 38

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
 KESIMPULAN

Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan, maka didapatkan kesimpulan

sebagai berikut:
1. Kondisi optimum pertumbuhan Saccharomyces cerevisiae pada aktifitas
fermentasi biotanol berada pada hari ke 3.
2. Penambahan pengaruh CuSO4 memiliki pengaruh namun tidak signifikan
terhadap jumlah bioethanol yang dihasilkan.

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 39

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
 DAFTAR PUSTAKA

Vesna Stehlik-Thomas. 2004. Zinc, Copper, and Manganese Enrichment in Yeast

Saccharomyches cerevisiae. Kroasia: University of Zagreb.
Juwita, Ratna. 2012. Studi Produksi Alkohol Dari Tetes Tebu (Saccharum
officinarum L) Selama Proses Fermentasi. Makassar: Universitas
Hasanuddin.
Puspitasari, Reni. 2008. Kualitas Molase Sebagai Bahan Baku Produksi Alkohol
Pabrik Spirtus Madukismo Yogyakarta. Yogyakarta: Universitas Sanata
Dharma Yogyakarta.
Sinaga, Ernawati. Kofaktor Enzim. 2 Maret 2014. http://
ernawatisinaga.blog.unas.ac.id/tag/kofaktor. Diakses Pada Tanggal 15
Agustus 2018.
https://id.wikipedia.org/wiki/Tembaga(II)_sulfat. Diakses Pada Tanggal 15
Agustus 2018.
Abthoki, Ahmad., dan Siti Khodijah. 2015. Analisis Pengaruh Variasi Persentase
Ragi (Saccharomyces cerevisiae) Dan Waktu Pada Proses Fermentasi
Dalam Pemanfaatan Duckweed (Lemna minor) Sebagai Bioetanol. Malang:
UIN Maliki Malang
E. Li1, dan R. Mira de Ordun˜a. A rapid method for the determination of
microbial biomass by dry weight using a moisture analyser with an
infrared heating source and an analytical balance.USA:Department of
Food Science & Technology, NYSAES, Cornell University, Geneva, NY,
USA.
https://www.academia.edu/23958203/pertumbuhan_bakteri_and_faktor_yang_me
mpengaruhi_pertumbuhan_mikroorganisme. Diakses Pada Tanggal 2
Agustus 2018.

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 40

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)
LAMPIRAN

Teknik Kimia Ihsan Januar Aditya (1141520002) 41

Institut Teknologi Indonesia Risdiana Nur Fitrasari (1141520008)