PENGGUNAAN PROBIOTIK Bacillus sp.

IRVE01 DAN
Pseudomonas stutzeri IRNAE01 ASAL TAMBAK UDANG PADA
LARVA UDANG VANNAMEI (Litopenaeus vannamei)

Oleh:

Ryo Chandra Silaban

G34103039

DEPARTEMEN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2007
 ABSTRAK

RYO CHANDRA SILABAN. Penggunaan probiotik Bacillus sp. IRVE01

dan Pseudomonas stutzeri IRNAE01 asal tambak udang pada larva udang
vannamei (Litopenaeus vannamei). Dibimbing oleh IMAN RUSMANA dan
KASTITONIF.
Bakteri asal tambak udang Bacillus sp. IRVE01, IRVE02, dan IRVE03 diuji
tantang terhadap Vibrio harveyi. Bacillus sp. IRVE01 yang menghasilkan indeks
penghambatan terbesar terhadap V. harveyi, yaitu sebesar 1,125 dipilih sebagai
probiotik pada larva udang vannamei. Bakteri nitrifikasi dan denitrifikasi P.
stutzeri IRNAE01 dikombinasikan dengan Bacillus sp. IRVE01 untuk
meningkatkan nilai Survival Rate (SR) pada larva. Probiotik komersial Epicin-D
digunakan sebagai pembanding. Bacillus sp. IRVE01 berhasil menekan Total
Vibrio Count (TVC) dalam air pemeliharaan dan tubuh larva. Saat stadia post
larva 8, nilai TVC dalam air pemeliharaan pada kontrol sebesar 1.47 x 106 Colony
Forming Unit (CFU)/ml, sedangkan pada pembanding sebesar 1.75 x 104 CFU/ml
dan perlakuan probiotik Bacillus sp. IRVE01 dan P. stutzeri IRNAE01 sebesar
2.44 x 103 CFU/ml. Nilai SR akhir paling tinggi terdapat pada perlakuan Bacillus
sp. IRVE01 dan P. stutzeri IRNAE01, yaitu sebesar 29.06%, sedangkan
pembanding menghasilkan SR sebesar 26.66%.

ABSTRACT

RYO CHANDRA SILABAN. Use of probiotic Bacillus sp. IRVE01 and

Pseudomonas stutzeri IRNAE01 isolated from shrimp ponds in larva culture of
white leg shrimp (Litopenaeus vannamei). Under supervision of IMAN
RUSMANA and KASTITONIF.
Bacillus sp. IRVE01, IRVE02, and IRVE03 isolated from shrimp ponds
were challanged against Vibrio harveyi. Bacillus sp. IRVE01 has the biggest
inhibitory activity to V. harveyi. This isolat that has inhibitory index 1.125 was
selected as a potential probiotic in larva culture of L. vannamei. P. stutzeri
IRNAE01 (a nitrification and denitrification bacterium) was combined with
Bacillus sp. IRVE01 to increase Survival Rate (SR) of larva. A commercial
probiotic (Epicin-D) used as standard. The results show that the combination
Bacillus sp. IRVE01 and P. stutzeri IRNAE01 could reduce Total of Vibrio Count
(TVC) in water culture and larva body. In post larva 8 stage, TVC value in water
culture at control was 1.47 x 106 Colony Forming Unit (CFU)/ml, however at
standar was 1.75 x 104 CFU/ml and treatment of Bacillus sp. IRVE01 and P.
stutzeri IRNAE01 was 2.44 x 103 CFU/ml. The highest final SR value was found
at the treatment of Bacillus sp. IRVE01 and P. stutzeri IRNAE01, that was
29.06%, while the standard was 26.6%.
 PENGGUNAAN PROBIOTIK Bacillus sp. IRVE01 DAN
Pseudomonas stutzeri IRNAE01 ASAL TAMBAK UDANG PADA
LARVA UDANG VANNAMEI (Litopenaeus vannamei)

Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Sains
pada Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Institut Pertanian Bogor

Oleh:

Ryo Chandra Silaban

G34103039

DEPARTEMEN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2007
JUDUL : PENGGUNAAN PROBIOTIK Bacillus sp. IRVE01 DAN
Pseudomonas stutzeri IRNAE01 ASAL TAMBAK UDANG PADA
LARVA UDANG VANNAMEI (Litopenaeus vannamei)
NAMA : RYO CHANDRA SILABAN
NRP : G34103039

Menyetujui,

Pembimbing I Pembimbing II

Prof. Dr. Ir. Yonny Koesmaryono

NIP: 131473999

Tanggal Lulus :
 RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Jakarta pada tanggal 9 Februari 1985 sebagai anak
kedua dari empat bersaudara, putra kesayangan dari pasangan Sardi Silaban dan
Tianur Simanjuntak.
Penulis menyelesaikan pendidikan dasar di SD Tunas Keluarga Mulia 1
Jakarta Utara pada tahun 1997, kemudian melanjutkan ke SLTP St. Fransiskus
Xaverius III Jakarta Utara hingga lulus pada tahun 2000. Pendidikan menengah
ditempuh di SMU Negeri 52 Jakarta. Pada tahun 2003, penulis lulus SMU dan
pada tahun yang sama diterima di Departemen Biologi Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam IPB melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB (USMI).
Selama mengikuti perkuliahan, penulis menjadi asisten mata kuliah Biologi
Alga dan Bryophyta pada semester genap tahun ajaran 2005/2006 dan
Mikrobiologi Dasar pada semester ganjil tahun ajaran 2006/2007. Penulis
melaksanakan Praktek Lapang (PL) di PT Novell Pharmaceutical Laboratories
pada bulan Juli-Agustus 2006.
Kegiatan kemahasiswaan yang pernah diikuti penulis selama perkuliahan
antara lain bergabung dengan Tim Bola Basket Putra Biologi IPB dan Tim Futsal
Biologi IPB tahun 2005-2006, kemudian meraih juara III Futsal dalam Turnament
MISOTO IPB tahun 2006. Pada tahun 2005, penulis aktif dalam Program
Kreativitas Mahasiswa Ilmiah (PKMI).
 PRAKATA
Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Pengasih atas
segala kasih karunia yang telah dilimpahkan sehingga karya ilmiah ini berhasil
diselesaikan. Karya ilmiah ini berjudul Penggunaan Probiotik Bacillus sp.
IRVE01 dan Pseudomonas stutzeri IRNAE01 Asal Tambak Udang pada
Pemeliharaan Larva Udang Vannamei (Litopenaeus vannamei), yang
dilaksanakan pada bulan Februari 2007 hingga April 2007 bertempat di
Laboratorium Scientific Study (Biotechnology aquaculture), PT Central Pertiwi
Bahari, Kalianda, Lampung. Penelitian ini didanai oleh Proyek Penelitian PT
Central Pertiwi Bahari melalui Dr. Ir Iman Rusmana, M.Si selaku Manager
Departemen IQA (Integrated Quality Assurance) di PT Central Pertiwi Bahari.
Pada kesempatan ini, penulis mengucapkan terima kasih yang mendalam
kepada Dr. Ir. Iman Rusmana, M.Si selaku pembimbing pertama atas bimbingan
atau saran selama pelaksanaan penelitian dan penyusunan karya ilmiah ini, dan
kepada Ir. Kastitonif selaku pembimbing kedua yang telah banyak memberikan
bimbingan maupun arahan dalam bidang mikrobiologi yang sangat berharga bagi
penulis. Serta kepada Dra. Hilda Akmal selaku dosen penguji dan wakil komisi
pendidikan atas saran dan masukan yang berharga bagi perbaikan karya ilmiah ini.
Penulis ucapkan juga terima kasih kepada Staff Breeding Operation PT
Central Pertiwi Bahari, yaitu Mas Esti Handoyo, Agung, Mbak Nurul, Adi, Pak
Resopim, Pak Nawal, dan Mbak Esti yang telah menyumbangkan waktu, tenaga,
hati yang mulia, dan pikirannya bagi karya ilmiah ini. Di samping itu, ungkapan
terima kasih bercampur rasa sayang penulis sampaikan kepada Thresia dan
keluarganya atas kasih sayang, perhatian, semangat, dukungan, dan ide bagi
penulis dan karya ilmiah ini, dan kepada Teguh, Maman, Evan, Dede, Indrie, dan
Rina atas semangat yang diberikan, serta seluruh teman Biologi angkatan 40,
terutama Bibah, Ima, Ika Suparnika, Andri, Wahyu, Ika Madona, Besti, Rut,
Mutiha, Ari, Novan, Irfan, Mbak Iis, Kak Airul, Kak Ria, dan Bu Id yang telah
memberikan pengorbanannya bagi penulis dalam penyusunan karya ilmiah dan
menjadikan penulis berarti. Rasa hormat dan ungkapan penghargaan juga
disampaikan kepada Bapa dan Mama tercinta untuk budi yang tak terbalaskan,
serta kakak dan adik-adikku tersayang, Ira dan Rentina yang senantiasa
mendoakan dan telah mencurahkan kasih sayangnya.
Semoga karya ilmiah ini dapat berguna bagi masyarakat luas di kemudian
hari.

Bogor, September 2007

Ryo Chandra Silaban

 DAFTAR ISI

Halaman

DAFTAR TABEL ............................................................................................ vii

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... vii

DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... viii

PENDAHULUAN ........................................................................................... 1
Latar Belakang ........................................................................................ 1
Tujuan ..................................................................................................... 1
Waktu dan Tempat Penelitian ................................................................. 2

BAHAN DAN METODE ................................................................................ 2

Bahan dan Alat ........................................................................................ 2
Metode .................................................................................................... 2
Uji Tantang Vibrio sp. Skala Laboratorium ................................... 2
Penyiapan Bak Mini Hatchery ....................................................... 2
Penerimaan Nauplii ........................................................................ 3
Manajemen Probiotik ..................................................................... 3
Manajemen Pakan dan Obat-obatan............................................... 3
Manajemen Air Laut ...................................................................... 3
Parameter yang Diamati ................................................................. 3

HASIL .............................................................................................................. 4
Aktivitas Penghambatan Isolat Bacillus sp. Terhadap Vibrio sp.
Secara In Vitro ........................................................................................ 4
Suhu Air Pemeliharaan Larva ................................................................. 4
pH Air Pemeliharaan Larva .................................................................... 5
Alkalinitas Air Pemeliharaan Larva ........................................................ 5
Oksigen Terlarut (DO) ............................................................................ 5
Total Ammonia Nitrogen (TAN) ............................................................. 5
Sisa Pakan Larva ..................................................................................... 6
Populasi Bakteri ...................................................................................... 6
Kesehatan Larva ...................................................................................... 7
Tingkat Kelangsungan Hidup Larva ....................................................... 7

PEMBAHASAN .............................................................................................. 8
Aktivitas Penghambatan Isolat Bacillus sp. Terhadap Vibrio sp.
Secara In Vitro ........................................................................................ 8
Suhu Air Pemeliharaan Larva ................................................................. 9
pH Air Pemeliharaan Larva .................................................................... 9
Alkalinitas Air Pemeliharaan Larva ........................................................ 10
Oksigen Terlarut (DO) ............................................................................ 10
 Total Ammonia Nitrogen (TAN) ............................................................. 10
Sisa Pakan Larva ..................................................................................... 11
Populasi Bakteri ...................................................................................... 11
Kesehatan Larva ...................................................................................... 12
Tingkat Kelangsungan Hidup Larva ....................................................... 12

SIMPULAN ..................................................................................................... 12

SARAN ............................................................................................................ 12

DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................... 13

DAFTAR TABEL
Halaman

1 Jadwal pemberian beberapa jenis probiotik .................................................. 3

DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Bak yang ditutup dengan plastik transparan ................................................. 3
2 Uji tantang Bacillus sp. IRVE01 terhadap Vibrio sp. H3B23B .................... 4
3 Uji tantang P. stutzeri IRNAE01 terhadap Vibrio ........................................ 4
4 Uji tantang Bacillus sp. IRVE01 terhadap P. stutzeri IRNAE01.................. 4
5 Grafik nilai suhu air pemeliharaan larva pada kontrol dan probiotik ........... 5
6 Grafik nilai pH air pemeliharaan larva pada kontrol dan probiotik .............. 5
7 Grafik nilai alkalinitas air pemeliharaan larva pada kontrol dan probiotik .. 5
8 Grafik nilai DO air pemeliharaan larva pada kontrol dan probiotik ............. 5
9 Grafik nilai TAN air pemeliharaan larva pada kontrol dan probiotik ........... 6
10 Klekap pada kontrol dan perlakuan probiotik ............................................... 6
11 Jumlah bakteri pada air pemeliharaan larva .................................................. 6
12 Jumlah bakteri pada tubuh larva ................................................................... 6
13 Grafik nilai TVC dalam air pemeliharaan larva ............................................ 6
14 Grafik nilai TVC dalam tubuh larva ............................................................. 7
15 Grafik Jumlah Bacillus dalam air pemeliharaan larva .................................. 7
16 Grafik Jumlah Bacillus dalam tubuh larva .................................................... 7
17 Grafik SR akhir kontrol dan probiotik .......................................................... 7

DAFTAR LAMPIRAN
Halaman

1 Manajemen pakan buatan, pakan alami, dan obat-obatan............................. 16

2 Hasil pengamatan uji tantang Bacillus sp. IRVE01, IRVE02, dan IRVE03
terhadap Vibrio luminesen menggunakan metode double layer .................. 17
3 Hasil pemeriksaan kesehatan larva kontrol dan probiotik ............................ 18

PENDAHULUAN
Latar Belakang
Salah satu komoditas ekspor perikanan
Indonesia dan sering dikonsumsi masyarakat
Indonesia ialah udang. Udang putih Amerika
Litopenaeus vannamei merupakan salah satu
jenis udang yang dapat dibudidayakan di
Indonesia, selain udang windu (Penaeus
monodon Fabricius). Keunggulan udang
vannamei antara lain mampu memijah atau
kawin secara spontan, mudah berkembang
biak, pertumbuhan larvanya lebih baik, dan
mampu dibudidayakan dalam kepadatan
tinggi (Liu et al. 2004), sehingga udang
vannamei mampu menggeser kedudukan
udang windu dalam budi daya.
Telur udang vannamei berukuran ±0.22
mm dan telur yang telah menetas menjadi
larva berukuran 0.32-0.58 mm (stadia
nauplii). Pada stadia nauplii, sistem
pencernaanya belum sempurna dan masih
memiliki cadangan makanan berupa kuning
telur. Apabila kondisi memungkinkan larva
untuk hidup dan berkembang, maka larva
sudah berukuran 1.05-3.30 mm (stadia zoea)
dalam waktu 15-24 jam. Pada stadia ini,
larva udang dapat diberi pakan alami, seperti
Artemia dan mengalami pergantian kulit
sebanyak tiga kali, yaitu stadia zoea 1, zoea
2, dan zoea 3. Lama proses pergantian kulit
sebelum memasuki stadia berikutnya (mysis)
sekitar 4-5 hari. Pada stadia mysis, larva
sudah mulai mengkonsumsi pakan
fitoplankton dan zooplankton. Ukuran larva
berkisar 3.50-4.80 mm. Stadia ini memiliki 3
substadia, yaitu mysis 1, mysis 2, dan mysis
3 yang berlangsung selama 3-4 hari sebelum
masuk stadia post larva (PL). Pada stadia
PL, larva udang vannamei sudah tampak
seperti udang dewasa dan sudah mulai aktif
bergerak lurus ke depan. Hitungan stadia
yang digunakan sudah berdasarkan hari,
misalnya PL 1 berarti post larva berumur 1
hari (Haliman & Adijaya 2006).
Suatu kendala yang umum terjadi
dalam budi daya udang ialah larva udang
sering mengalami bolitas syndrome atau
zoea 2 syndrome pada stadia zoea 2.
Sindrom ini menyebabkan tingkat
kelangsungan hidup larva rendah. Pada
tahun 1998, Cedeno et al. telah
membandingkan etiologi mikroorganisme
secara biokimia dan analisis genetika larva
udang, dan ternyata sindrom ini disebabkan
oleh penyakit vibriosis. Ruangpan et al.
(1998) menyatakan bahwa penyebab
kematian massal pada udang budi daya
1
(vibriosis) sebagian besar oleh Vibrio sp.,
terutama disebabkan oleh bakteri berpendar
V. harveyi (Moriatty 1999). Gejala klinis
penyakit vibriosis ialah nafsu makan udang
turun dan timbul warna merah pada tubuh
udang (Haliman & Adijaya 2006).
Ada beberapa cara yang dapat dilakukan
untuk menekan vibriosis, yaitu melalui
penggunaan antibiotik dan probiotik.
Pemakaian antibiotik dapat menyebabkan
resistensi bakteri dan pencemaran
lingkungan. Selain itu, belakangan ini telah
ditetapkan suatu peraturan tentang residu
antibiotik zero tolerant oleh negara-negara
Eropa, Amerika, dan Jepang yang
merupakan negara tujuan ekspor udang
Indonesia. Akibat hal tersebut, maka
pemakaian antibiotik telah dilarang.
Alternatif lain pencegahan penyakit
larva udang ialah dengan menggunakan
probiotik yang mampu berkompetisi dengan
bakteri patogen, misalnya bakteri V.
alginolyticus “strain Ili" (Cedeno et al.
1998). Haliman & Adijaya (2006)
menyatakan bahwa bakteri lain yang mampu
digunakan sebagai probiotik ialah Bacillus
sp. dan bakteri fotosintesis. Probiotik dalam
akuakultur ialah mikrob hidup yang
memiliki efek menguntungkan pada inang
dengan cara memodifikasi asosiasi inang
atau ambang batas komunitas mikrob
dengan meningkatkan penggunaan pakan
atau nilai nutrisi, meningkatkan ketahanan
inang terhadap penyakit atau meningkatkan
kualitas lingkungan (Verschuere et al.
2000). Probiotik mampu meningkatkan
kesehatan inangnya dengan cara menekan
populasi bakteri patogen, meningkatkan
kualitas perairan, atau membantu
mendegradasi limbah organik. Pemberian
probiotik pada larva udang mampu
mencegah vibriosis dan menghasilkan benur
siap tebar yang berkualitas bagus sehingga
memperoleh SR (Survival Rate) yang tinggi
ketika panen. Jenis probiotik yang
dibandingkan dalam penelitian ini ialah
probiotik koleksi Laboratorium
Mikrobiologi, Departemen Biologi IPB,
yaitu Bacillus sp. IRVE01, IRVE02 atau
IRVE03 dan Pseudomonas stutzeri
IRNAE01 dengan probiotik komersial
(Epicin-D).
Tujuan
Penelitian ini bertujuan mengkaji
pengaruh pemberian probiotik Bacillus sp.
IRVE01, IRVE02 atau IRVE03 dan P.
stutzeri IRNAE01 terhadap kualitas air,

kesehatan larva, dan SR larva udang dengan
jumlah Vibrio sebagai parameter utama.
Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan mulai bulan
Februari 2007 hingga April 2007 di
Laboratorium Scientific Study
(Biotechnology aquaculture), PT Central
Pertiwi Bahari, Kalianda, Lampung.
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Hewan uji yang digunakan ialah larva
udang vannamei yang diperoleh dari PT
Central Pertiwi Bahari. Bakteri uji yang
digunakan ialah isolat bakteri asal bak
pemeliharaan larva, Vibrio sp. yang
berwarna kuning, hijau, dan yang
berluminesen dalam media Thiosulfate
Citrate Bile-salt (TCBS). Probiotik yang
digunakan ialah isolat bakteri asal tambak
udang Bacillus sp. IRVE01, IRVE02, dan
IRVE03 serta P. stutzeri IRNAE01 koleksi
Laboratorium Mikrobiologi, Departemen
Biologi IPB. Probiotik pembanding yang
digunakan ialah probiotik komersial Epicin-
D. Bahan yang digunakan antara lain media
untuk pertumbuhan bakteri seperti Sea
Water Complete Agar (SWC-Agar 50%),
TSA (Trypticase Soy Agar), TCBS, Molase
dan Fishmeal. Pakan buatan yang diberikan
ialah BP Eguchi, CP Star 100 dan 200, dan
Lanzy ZM serta MPL. Pakan alami yang
diberikan ialah alga Skeletonema sp. dan
Artemia. Obat yang diberikan ialah Iodine,
EDTA, Formalin, dan Treflan. Alat yang
digunakan terdiri atas 6 bak berkapasitas 3.5
ton, 6 set lampu neon, selang aerasi, batu
aerasi, timah aerasi, neraca analitik, ORP
(Oksidation Reduction Potential) meter tipe
RM-12P, Hand Refraktometer,
spektrofotometer DR 4000, Erlenmeyer, dan
saringan pakan mesh 100 dan 200 µl.
Metode
Uji Tantang Vibrio sp. Skala
Laboratorium
Isolat P. stutzeri IRNAE01 dan tiga
calon probiotik, yaitu Bacillus sp. IRVE01,
IRVE02, dan IRVE03 diremajakan terlebih
dahulu dalam media agar SWC 50%,
kemudian diinkubasi selama 48 jam pada
suhu 35 0C. Selanjutnya, tiga isolat Vibrio
2
yang berwarna kuning, hijau, dan
berluminesen dalam media TCBS
dipindahkan sebanyak satu lup secara
aseptik masing-masing ke dalam tiga
erlenmeyer yang berisi 50 ml media cair
SWC 50%, kemudian dihomogenkan selama
24 jam pada suhu ruang. Ketiga kultur
Vibrio tersebut disuspensikan ke dalam 50
ml media SWC semi padat sebanyak 50 μl,
kemudian dihomogenkan. Setelah homogen,
media tersebut dituang pada permukaan agar
SWC 50 %, lalu didiamkan beberapa saat
hingga beku. Isolat Bacillus sp. IRVE01,
IRVE02, dan IRVE03 serta P. stutzeri
IRNAE01 hasil peremajaan 48 jam
diinokulasikan pada agar tersebut
menggunakan tusuk gigi steril, kemudian
diinkubasi selama 24 jam pada suhu 35 0C.
Bacillus yang menghasilkan senyawa
antimikrob atau memiliki indeks
penghambatan terhadap Vibrio ditunjukkan
oleh adanya zona bening di sekitar koloni
Bacillus. Salah satu Bacillus yang memiliki
indeks penghambatan Vibrio terbesar
digunakan sebagai probiotik untuk larva
udang. Probiotik terpilih diperkaya ke dalam
300 ml media molase dan fishmeal,
kemudian diinkubasi selama 48 jam pada
suhu 35 0C.
Penyiapan Bak Mini Hatchery
Enam bak mini Hatchery dicuci dahulu
dengan larutan detergen yang dicampur
dengan iodine 100 ppm kemudian dibilas
dengan air tawar. Dinding dan lantai bak
serta lantai ruang pemeliharaan dibilas lagi
dengan larutan kaporit 1000 ppm dan
dibiarkan hingga kering. Batu aerasi dan
timah pemberat direndam dengan larutan
detergen selama 24 jam, selanjutnya
dilakukan pencucian dan dibilas dengan air
tawar. Selang aerasi dicuci dengan detergen
yang dicampur dengan iodine 100 ppm dan
dibilas dengan air tawar.
Bak yang sudah kering diisi 2.5 ton air
laut yang kadar salinitasnya 30-33 ppt dan
sudah difiltrasi serta diozonisasi. Air laut
yang masuk ke dalam bak disaring
menggunakan saringan air yang terbuat dari
bahan khusus. Selang yang sudah
dimasukkan timah pemberat dan batu aerasi
pada salah satu ujungnya dipasangkan ke
bak secara teratur. Semua bak ditutup
dengan plastik transparan (Gambar 1).
Sumber kontaminan yang mengganggu
kesehatan larva dicegah dengan
disediakannya tempat cuci tangan dan cuci
kaki menggunakan klorin atau iodin bagi
 3

orang yang ingin keluar masuk ruang Manajemen Pakan dan Obat-obatan
pemeliharaan, disediakannya peralatan untuk Pemberian pakan setiap hari dilakukan
masing-masing bak, dan disediakannya sebanyak tiga kali untuk pakan alami dan
tempat cuci peralatan di samping bak enam kali untuk pakan buatan. Pakan buatan
sebelum dan sesudah peralatan digunakan. diberikan pada pagi (05.30 dan 10.00), siang
(14.00), sore (17.00), dan malam hari (20.00
dan 00.00). Pakan alami diberikan pada pagi
(08.00), sore (16.00), dan malam hari
(22.00). Pakan alami Skeletonema sp.
diberikan dari stadia nauplii hingga PL 1.
Pakan alami Artemia mulai diberikan pada
stadia PL 1 hingga PL 9. Obat-obatan
seperti EDTA, Treflan, dan Formalin
diberikan pada stadia tertentu. Manajemen
Gambar 1 Bak yang ditutup dengan plastik pakan buatan, pakan alami, dan obat-obatan
transparan. dapat dilihat pada Lampiran 1.
Penerimaan Nauplii Tabel 1 Jadwal pemberian beberapa jenis
EDTA sebanyak 10 ppm dimasukkan ke probiotik
dalam bak sekitar 7-8 jam sebelum nauplii
masuk. Selanjutnya, dua bak perlakuan IRVE IRNAE01 Pembanding
Stadia Volume Volume
IRVE01+IRNAE01 diberi penambahan 500 Hari Larva (ml) (ml) ppm gram
ml suspensi Bacillus sp. IRVE01 dengan 0 Persiapan 500
konsentrasi ±108 sel/ml dalam media molase 1 N 4-6 2 6
dan fishmeal yang telah diinkubasi selama
2 Zoea 1 2 6
48 jam, sedangkan bak lainnya tidak diberi
3 Zoea 1-2 2.5 7.5
probiotik sama sekali. Pada saat nauplii
4 Zoea 2 2.5 7.5
diterima, kantong plastik nauplii dicuci
dengan larutan Formalin 200 ppm sebelum 5 Zoea 3 3 9
Zoea
masuk ke bak. Kantong plastik nauplii 6 /Mysis 300 3 9
dibuka di dalam bak, kemudian dilakukan 7 Mysis 1 3 9
aklimatisasi minimal 15 menit sebelum 8 Mysis 2 3 9
dituang ke dalam bak. Selama proses 9 Mysis 3 300 3 9
tersebut, air laut yang ada di dalam bak 10 PL 1 4 12
ditambahkan ke dalam kantong setiap 5
11 PL 2 4 12
menit, agar suhu dan kadar salinitas
12 PL 3 4 12
mendekati kondisi air di dalam bak.
13 PL 4 4 12
Kepadatan nauplii yang ditebar ke setiap bak
ialah 100 ekor per liter (300.000 ekor dalam 14 PL 5 300 300 4 12

3 ton air). 15 PL 6 4 12
16 PL 7 4 12
Manajemen Probiotik 17 PL 8 4 12
Sebanyak 300 ml suspensi Bacillus sp. 18 PL 9 4 12
IRVE dalam media molase dan fishmeal
dengan konsentrasi ±108 sel/ml ditambahkan Manajemen Air Laut
masing-masing ke dalam dua bak perlakuan Penambahan 0.17 ton air laut yang
IRVE pada masa perantaraan stadia zoea dan kadar salinitasnya sama dengan air di bak
mysis. Pada masa perantaraan stadia mysis dilakukan pada stadia zoea 3, mysis 1, dan
dan PL ditambahkan 300 ml suspensi P. mysis 3. Pengurangan 0.17 ton air laut
stutzeri IRNAE01 dalam media molase dan dilakukan pada stadia mysis 3, PL 5, dan
fishmeal dengan konsentrasi ±108 sel/ml. menjelang panen.
Pada PL 5 diberi penambahan lagi suspensi
Bacillus sp. IRVE dan P. stutzeri IRNAE01 Parameter yang Diamati
dalam media molase dan fishmeal masing- Selama uji ini berlangsung, dilakukan
masing 300 ml. Probiotik komersial, Epicin- pengamatan terhadap kualitas air, kesehatan
D diberikan setiap hari dengan jumlah larva, dan tingkat kelangsungan hidup (SR)
tertentu ke dalam dua bak perlakuan larva. Pengamatan kualitas air, seperti
pembanding (Tabel 1). analisa parameter fisik, kimia, maupun
 4

mikroba dilakukan sebanyak enam kali, H1B13B, dan H3B23B. Nilai indeks
yaitu pada tahap air persiapan, zoea 2, mysis penghambatan Bacillus sp. IRVE01 terbesar
2, PL 2, PL 5, dan PL 8. Parameter fisik dan ialah sebesar 1.125 terhadap koloni Vibrio
kimia kualitas air yang diamati ialah sp. H3B23B (Gambar 2).
alkalinitas, oksigen terlarut (DO), pH,
potensial oksidasi reduksi, salinitas, suhu, Vibrio sp. H3B23B
IRVE02
dan Total Ammonia Nitrogen (TAN).
Zona Bening
Pengukuran alkalinitas menggunakan
indikator fenolftalein (PP), indikator Brom
Cresol Green (BCG), dan indikator Methil
Red (MR), kemudian dititrasi dengan larutan
asam sulfat 0.04 N. Pengukuran potensial
oksidasi reduksi menggunakan alat ORP
meter tipe RM-12P. Pengukuran salinitas
IRVE01
menggunakan Hand Refraktometer. TAN IRVE03

diukur berdasarkan metode Phenate, yaitu

Gambar 2 Uji tantang Bacillus sp. IRVE01
menggunakan reagen fenol, reagen sodium
terhadap Vibrio sp. H3B23B.
nitroprusid, dan oxidizing reagent, kemudian
konsentrasinya diukur menggunakan
P. stutzeri IRNAE01 dan Bacillus sp.
spektrofotometer DR 4000 pada panjang
IRVE03 sama sekali tidak menghambat
gelombang 640 nm (Greenberg et al. 1992).
Vibrio. Gambar 3 menunjukkan bahwa P.
Pemeriksaan mikroba yang dilakukan
stutzeri IRNAE01 tidak menghambat Vibrio.
ialah analisa total bakteri dan total Vibrio
dari media pemeliharaan larva dan tubuh
Vibrio sp.
larva menggunakan media TSA dan TCBS.
Selain itu, dilakukan juga pengamatan
terhadap jumlah bakteri probiotik Epicin-D
dan Bacillus sp. IRVE di setiap bak
perlakuan dengan metode heat shock, yaitu
memanaskan media pemeliharaan larva dan
tubuh larva di atas suhu 70 0C selama 10 IRNAE01

menit, kemudian dikulturkan dalam media

TSA dan TCBS. Pengamatan kesehatan
larva, seperti panjang, lebar, bobot larva, dan
sebagainya dilakukan setiap 3 hari, yaitu Gambar 3 Uji tantang P. stutzeri IRNAE01
sejak penerimaan nauplii hingga PL 8. SR terhadap Vibrio.
larva diperoleh dengan membagi jumlah
larva yang hidup saat panen dengan jumlah Selain itu, P. stutzeri IRNAE01 dapat
larva yang hidup pada awal perlakuan, dihambat oleh Bacillus sp. IRVE01 dan
kemudian dikalikan 100%. Bacillus sp. IRVE02. Gambar 4
menunjukkan bahwa P. stutzeri IRNAE01
dapat dihambat oleh Bacillus sp. IRVE01.
HASIL IRNAE01

Aktivitas Penghambatan Isolat Bacillus

sp. Terhadap Vibrio sp. Secara In Vitro
Vibrio asal bak pemeliharaan larva
udang yang diuji dalam penelitian ini
merupakan jenis Vibrio yang berluminesen,
yaitu Vibrio sp. H1B14W, H1B14B,
IRVE01
H1B13W, H1B13B, H3B21B, dan H3B23B. Zona Bening
Umumnya, Bacillus sp. IRVE01 memiliki
indeks penghambatan terhadap Vibrio yang Gambar 4 Uji tantang Bacillus sp. IRVE01
lebih besar dibandingkan Bacillus sp. terhadap P. stutzeri IRNAE01.
IRVE02 (Lampiran 2). Namun, tidak semua
Vibrio dihambat oleh Bacillus sp. IRVE01. Suhu Air Pemeliharaan Larva
Dalam penelitian ini, Bacillus sp. IRVE01 Suhu air pemeliharaan dari stadia
hanya menghambat Vibrio sp. H1B13W, nauplii hingga PL 8 berada dalam kisaran
 5

suhu yang aman bagi pertumbuhan udang, alkalinitas pada tiap air pemeliharaan larva
yaitu 27.4-30.6 0C (Gambar 5). Suhu rata- ditampilkan pada Gambar 7.
rata terendah terdapat pada kontrol saat 250,00
stadia PL 2, yaitu 27.7 0C dan tertinggi
terdapat pada perlakuan Bacillus sp. IRVE01 200,00

A l k a l i n i ta s (m g / L )
dan P. stutzeri IRNAE01 dan pembanding
saat stadia zoea 2, yaitu 30.55 0C. 150,00

31,00 100,00
30,00
50,00
29,00
S u h u (C )

0,00
28,00

Z2

M2

8
PL

PL

PL
27,00

n
Stadia

pa
sia
er
26,00

rp
Kontrol IRVE01+IRNAE01 Pembanding

Ai
25,00
Gambar 7 Grafik nilai alkalinitas air
pemeliharaan larva pada
Z2

M2

8
PL

PL

PL
n
pa

Stadia kontrol dan probiotik.

s ia
er
rp

kontrol IRVE01+IRNAE01 Pembanding

Ai

Oksigen Terlarut (DO)

Gambar 5 Grafik nilai suhu air pemeliharaan
DO masing-masing air pemeliharaan
larva pada kontrol dan probiotik.
relatif sama, yaitu di atas 3 ppm dan tidak
berbeda nyata (Gambar 8). Nilai rata-rata
pH Air Pemeliharaan Larva
DO terendah sebesar 3.16 ppm terdapat pada
Nilai rata-rata pH air pemeliharaan
pembanding saat stadia PL 8 dan tertinggi
kontrol dan perlakuan relatif tidak berbeda
sebesar 3.71 ppm pada pembanding juga
nyata, yaitu tiap perlakuan mengalami
saat air persiapan.
penurunan pH dari air persiapan hingga
stadia PL 8 (Gambar 6). Umumnya, nilai pH 3,80

di setiap air pemeliharaan berada dalam 3,60

kondisi optimum (6-9), yaitu pH terendah
7.68 dan pH tertinggi 8.36.
D O (p p m )

3,40
8,70
3,20
8,40
3,00
8,10
pH

2,80
7,80
Z2

M2

8
PL

PL

PL
n
pa

7,50 Stadia
sia
er
rp

kontrol IRVE01+IRNAE01 Pembanding

Ai

7,20
Gambar 8 Grafik nilai DO air pemeliharaan
Z2

8
2

PL

PL

PL
M

larva pada kontrol dan probiotik.

an
ap

Stadia
si
er
rp

kontrol IRVE01+IRNAE01 Pembanding

Ai

Total Ammonia Nitrogen (TAN)

Gambar 6 Grafik nilai pH air pemeliharaan Semenjak awal pemeliharaan larva,
larva pada kontrol dan probiotik. TAN semakin meningkat hingga stadia PL
8. Namun, kadar TAN pada setiap air
Alkalinitas Air Pemeliharaan Larva pemeliharaan tidak melebihi 3 ppm, yaitu
Nilai rata-rata alkalinitas kontrol dan nilai TAN tertinggi sebesar 2.48 pada
tiap perlakuan dalam penelitian ini berada perlakuan Bacillus sp. IRVE01 dan P.
dalam kisaran alkalinitas yang ideal. Nilai stutzeri IRNAE01 dan pembanding saat
rata-rata alkalinitas terendah terdapat dalam stadia PL 8, sehingga masih relatif aman
perlakuan pembanding saat air persiapan, bagi larva tersebut. Grafik yang
yaitu sebesar 82.4 ppm dan nilai tertinggi menunjukkan kadar TAN air pemeliharaan
188 ppm terdapat dalam perlakuan probiotik larva dapat dilihat pada Gambar 9.
Bacillus sp. IRVE01 dan P. stutzeri
IRNAE01 saat stadia PL 5. Grafik nilai
 6

3.000.000
3,00
2.500.000
2,50

T B C ( C F U /m L )
2.000.000

T A N ( m g /L )
2,00 1.500.000

1,50 1.000.000

500.000
1,00
0
Air
0,50 Persiapan
Z2 M2 PL2 PL5 PL8

kontrol 2.880 5.900 1.500 44.000 223.000 3.000.000

0,00
Pembanding 2.200 2.700 6.200 6.100 6.100 166.000
Z2 M2 PL2 PL5 PL8
IRVE01+IRNAE01 5.150 800 2.400 13.000 13.000 22.100
Stadia Stadia

kontrol IRVE01+IRNAE01 Pembanding kontrol Pembanding IRVE01+IRNAE01

Gambar 9 Grafik nilai TAN air Gambar 11 Jumlah bakteri pada air
pemeliharaan larva pada pemeliharaan larva.
kontrol dan probiotik. 300.000

250.000
Sisa Pakan Larva (Klekap)

T B C (C F U / m L )
200.000
Ada perbedaan yang nyata antara bak
150.000
kontrol dan perlakuan dalam pembentukan
klekap (sisa pakan yang tidak terdegradasi 100.000

dan berlendir) di permukaan dasar bak pada 50.000

saat panen. Gambar 10 menunjukkan bahwa 0

Air
pada kontrol masih banyak terbentuk klekap Persiapan
Z2 M2 PL2 PL5 PL8

yang menggumpal dan hampir 60% Kontrol 51.800 33.000 42.000 112.000 139.000 300.000

menutupi seluruh permukaan dasar bak. Pembanding 78.000 67.000 105.000 155.000 66.000 300.000
IRVE01+IRNAE01 78.000 43.000 56.000 127.000 56.000 114.900
Pada pembanding juga terlihat adanya Stadia
gumpalan-gumpalan klekap di permukaan Kontrol Pembanding IRVE01+IRNAE01
dasar bak, tetapi lebih sedikit jumlahnya
dibandingkan kontrol. Pada perlakuan Gambar 12 Jumlah bakteri pada tubuh larva.
Bacillus sp. IRVE01 dan P. stutzeri
IRNAE01 hanya menutupi kurang dari 10% Saat stadia PL 8, nilai TVC (Total
dari permukaan dasar bak atau hampir tidak Vibrio Count) pada air pemeliharaan kontrol
terdapat klekap. sebesar 1.470.000 CFU/ml, sedangkan
pembanding sebesar 17.500 CFU/ml dan
Bak kontrol Bak IRVE01+IRNAE01 Bak pembanding
probiotik Bacillus sp. IRVE01 dan P.
stutzeri IRNAE01 sebesar 2.440 CFU/ml
(Gambar 13).
1.700.000
1.500.000

Gambar 10 Klekap pada kontrol dan 1.300.000

T V C ( C F U /m L )

1.100.000
perlakuan probiotik. 900.000
700.000
500.000
Populasi Bakteri 300.000
Saat menjelang panen, nilai Total 100.000

Bacteria Count (TBC) tertinggi dalam air -100.000

Air
Z2 M2 PL2 PL5 PL8
pemeliharaan larva terdapat pada kontrol, Persiapan
kontrol 1.400 2.040 8.500 44.000 80.000 1.470.000
yaitu sebesar 3.000.000 Colony Forming Pembanding 600 1.630 3.600 31.000 4.100 17.500
Unit (CFU)/ml, dan terendah pada Bacillus IRVE01+IRNAE01 700 1.570 1.250 4.800 4.200 2.440
sp. IRVE01 dan P. stutzeri IRNAE01, yaitu Stadia

sebesar 22.100 CFU/ml (Gambar 11). Nilai kontrol Pembanding IRVE01+IRNAE01

TBC tertinggi dalam tubuh larva terdapat Gambar 13 Grafik nilai TVC dalam air
pada kontrol dan pembanding, yaitu sebesar pemeliharaan larva.
300.000 CFU/ml, dan terendah pada
Bacillus sp. IRVE01 dan P. stutzeri Saat stadia PL 2 terjadi kenaikan nilai
IRNAE01, yaitu sebesar 114.900 CFU/ml TVC dalam tubuh larva pada kontrol dan
saat stadia PL 8 (Gambar 12). probiotik Bacillus sp. IRVE01 dan P.
stutzeri IRNAE01, sedangkan pembanding
 7

mengalami penurunan (Gambar 14). Nilai 90000

TVC tertinggi dalam tubuh larva sebelum 80000
dipanen terdapat pada kontrol, yaitu 76.000

T o t a l B a c i ll u s ( C F U / m L )
70000
CFU/ml 60000
90.000 50000
80.000
40000
70.000
T V C (C F U /m L )

60.000 30000
50.000 20000
40.000 10000
30.000
0
20.000 Z2 M2 PL2 PL5 PL8
10.000
Pembanding 30000 34000 36000 37900 83000
0
Air IRVE01+IRNAE01 5500 6400 1350 15600 19800
Z2 M2 PL2 PL5 PL8
Persiapan Stadia
Kontrol 13.900 24.300 36.000 67.000 67.000 76.000 Pembanding IRVE01+IRNAE01
Pembanding 17.600 7.900 63.000 42.000 35.000 37.900
IRVE01+IRNAE01 8.700 6.000 24.900 51.000 34.500 19.600 Gambar 16 Grafik jumlah Bacillus dalam
Stadia tubuh larva.
Kontrol Pembanding IRVE01+IRNAE01

Gambar 14 Grafik nilai TVC dalam tubuh Kesehatan Larva

larva. Perkembangan larva dari stadia ke
stadia antara kontrol dan perlakuan berjalan
Jumlah Bacillus di air pemeliharaan normal hingga stadia mysis 2. Ketika
maupun di tubuh larva pada perlakuan memasuki stadia mysis-PL, larva mengalami
Bacillus sp. IRVE01 dan P. stutzeri pergantian kulit yang tidak sempurna pada
IRNAE01 maupun pembanding diamati kontrol dan probiotik Bacillus sp. IRVE01
menggunakan metode heat shock. Jumlah dan P. stutzeri IRNAE01 sehingga kondisi
Bacillus pada air pemeliharaan larva yang larva menjadi lemah dan mengalami
diberi probiotik pembanding cenderung penurunan populasi. Hasil pemeriksaan
lebih banyak dibandingkan dengan kesehatan larva kontrol dan perlakuan dapat
perlakuan Bacillus sp. IRVE01 dan P. dilihat pada Lampiran 3.
stutzeri IRNAE01 (Gambar 15).
30000 Tingkat Kelangsungan Hidup Larva
Hasil SR akhir kontrol dan pembanding
T o t a l B a c illu s ( C F U /m L )

25000
maupun kombinasi IRVE01+IRNAE01
20000 menunjukkan SR terendah dihasilkan oleh
15000 kontrol yang larvanya mengalami
10000
pembilasan pada stadia PL 5 karena populasi
sangat rendah (Gambar 17). Nilai SR akhir
5000
paling tinggi terdapat pada perlakuan
0
Z2 M2 PL2 PL5 PL8
kombinasi Bacillus sp. IRVE01 dan P.
Pembanding 990 8000 1970 1370 18300
stutzeri IRNAE01, yaitu sebesar 29,06%,
IRVE01+IRNAE01 1300 1200 315 240 1450 sedangkan perlakuan pembanding
Stadia menghasilkan SR sebesar 26,60%.
Pembanding IRVE01+IRNAE01
40,00
Gambar 15 Grafik jumlah Bacillus dalam
air pemeliharaan larva . 30,00
S R (% )

Sama halnya dengan jumlah Bacillus di 20,00

air pemeliharaan, di tubuh larva perlakuan
pembanding pun cenderung lebih banyak 10,00
mengandung Bacillus bila dibandingkan
perlakuan Bacillus sp. IRVE01 dan P. 0,00
stutzeri IRNAE01. Saat stadia PL 2, jumlah IRVE01+IRNAE0
Kontrol Pembanding
Bacillus dalam tubuh larva perlakuan 1
Bacillus sp. IRVE01 dan P. stutzeri
IRNAE01 mengalami penurunan (Gambar Perlakuan 3,35 29,06 26,60
16). Gambar 17 Grafik SR akhir kontrol dan
probiotik.

PEMBAHASAN
Aktivitas Penghambatan Isolat Bacillus
sp. Terhadap Vibrio sp. Secara In Vitro
V. harveyi merupakan bakteri patogen
yang dapat menyebabkan kematian massal
pada udang terutama lebih patogen pada
stadia yang lebih muda. Bakteri ini
umumnya bersifat patogen oportunistik,
yaitu organisme yang dalam keadaan normal
ada dalam lingkungan pemeliharaan dan
berkembang dari sifat saprofitik menjadi
patogenik apabila kondisi lingkungan dan
inang memburuk. Beberapa dari galur
bakteri ini dapat menyebabkan kematian
total larva udang dengan dosis yang sangat
rendah, yaitu 102 CFU/ml (Rengpipat et al.
1998).
V. harveyi yang diuji tantang ialah jenis
Vibrio berluminesen yang diisolasi dari air
pemeliharaan dan tubuh larva udang
menggunakan media TCBS. Selain larva
udang, bakteri ini dapat juga diisolasi dari
air laut sekitar panti benih, air laut di bak
penampungan dan sudah melalui sistem
filtrasi, kepiting, dan plankton (Taufik &
Rukyani 2002). Media TCBS merupakan
media yang cocok untuk mengisolasi V.
harveyi karena bersifat selektif untuk genus
Vibrio dan koloni V. harveyi akan berwarna
hijau serta berpendar dalam media ini jika
diamati dalam ruang gelap (Lavilla-Pitogo et
al. 1990).
Setiap mikroorganisme memiliki musuh
alami di habitatnya, begitu juga dengan V.
harveyi. Bacillus dapat ditemukan dalam
sedimen laut dan secara alami berada dalam
saluran pencernaan hewan, seperti udang
yang makanannya ada di bawah atau di atas
permukaan sedimen. Bacillus diketahui
menghasilkan senyawa antimikrob yang
mampu menghambat Vibrio dan
meningkatkan angka kematian Vibrio jika
dilakukan uji kompetitif terhadap Vibrio
(Moriarty 1999). Senyawa antimikrob yang
dihasilkan Bacillus berupa polipeptida,
seperti bakteriosin dan antibiotik. Jenis
senyawa bakteriosin yang dihasilkan
Bacillus, antara lain subtilin dan ericin oleh
B. subtilis, coagulin oleh B. coagulans,
thuricin oleh B. thuringiensis, megacin oleh
B. megaterium, lichernin oleh B.
licheniformis, dan cerein oleh B. cereus
(Lisboa et al. 2006; Torkar & Matijasic
2003). Antibiotik yang dihasilkan Bacillus
dapat berupa polimiksin, basitrasin, colistin,
tyrotrisin, dan Gramisidin S (Katz &
Demain 1977). Bacillus juga telah dijadikan
8
probiotik dan berhasil meningkatkan nilai
SR ketika diuji secara in vivo pada
pemeliharaan larva udang monodon
(Decamp et al. 2004).
Bacillus sp. IRVE01 bukan termasuk
bakteri patogen pada udang karena bakteri
ini diisolasi dari sedimen tambak udang dan
pencernaan udang menggunakan media
SWC. Koloni Bacillus sp. IRVE01 berwarna
krem, berbentuk bundar, tepian tak
beraturan, dan elevasi seperti kawah dalam
media SWC. Media ini mengandung pepton,
ekstrak khamir, gliserol, air laut, dan
akuades. Media ini biasanya digunakan
untuk menumbuhkan V. fischeri. Namun, V.
harveyi juga dapat tumbuh dan berpendar
dalam media ini dengan morfologi koloni
berbentuk bulat, elevasi cembung, berwarna
krem, dan diameternya 2-3 mm setelah
inkubasi 24 jam pada suhu 28 0C (Atlas
2000; Lavilla-Pitogo et al. 1990). Uji
tantang yang dilakukan dalam penelitian ini
menggunakan media SWC 50% dengan
harapan Bacillus sp. IRVE01 dapat tumbuh
pada media yang nutrisinya kurang,
sehingga ketika di mini hatchery dapat
terbiasa dengan kondisi kekurangan nutrisi.
Uji tantang dalam penelitian ini
menggunakan metode yang sudah umum
digunakan, yaitu metode double layer.
Metode ini dipilih karena dua permukaan
pada media agar diharapkan dapat
memperjelas zona hambat yang dibentuk
Bacillus. Selain itu, waktu isolasi yang
bersamaan antara Bacillus dan V. harveyi
diharapkan terjadi kompetisi pertumbuhan
yang adil. Namun, ada beberapa metode lain
yang dapat digunakan untuk melakukan uji
tantang terhadap Vibrio, yaitu metode cross
streak, pour plate, dan uji kompetitif.
Metode cross streak dan pour plate pernah
dilakukan untuk menguji aktivitas
penghambatan dari 55 galur Bacillus
terhadap 11 galur Vibrio patogen yang
diisolasi dari penyakit udang Asia dan
Amerika Latin (Decamp et al. 2004). Hal
pertama yang dilakukan terlebih dahulu pada
metode cross streak ialah menggores
Bacillus dan menginkubasinya selama 24
jam, kemudian dilanjutkan dengan
menggores Vibrio secara berlawanan arah
(Chytnya et al. 2002).
Hasil uji tantang menunjukkan bahwa
Bacillus sp. IRVE01 memiliki indeks
penghambatan terbesar terhadap Vibrio
berluminesen, yaitu 1.125 terhadap Vibrio
sp. H3B23B. Bakteri ini dipilih menjadi
probiotik dalam rangka menekan populasi

bakteri patogen pada larva udang. Akan
tetapi, vibriosis berhubungan juga dengan
faktor-faktor stres seperti penanganan,
kepadatan yang tinggi, kekurangan nutrisi,
suhu yang ekstrim, luka-luka luar tubuh, dan
tingginya kadar amonia, salinitas atau
nitrogen. Pengaruh dari vibriosis akan sangat
bergantung pada tingkat infeksi, tetapi
tingkat kematian inang dapat melebihi 70%
(Main & Laramore 2005). Oleh karena itu,
dibutuhkan calon probiotik lain untuk
dikombinasikan dengan Bacillus sp. IRVE01
sehingga stress pada larva dapat berkurang.
P. stutzeri IRNAE01 yang diisolasi dari
air dan sedimen tambak udang di daerah
Kendari, Sulawesi Selatan diketahui
memiliki kemampuan dalam proses
nitrifikasi dan denitrifikasi. Bakteri ini
merupakan kelompok bakteri nitrifikasi yang
bersifat heterotrofik, yaitu mengubah nitrit
menjadi nitrat dan termasuk kelompok
bakteri denitrifikasi, yaitu mereduksi
senyawa nitrat dan nitrit menjadi gas
nitrogen (Widiyanto 2006). Kombinasi
antara Bacillus sp. IRVE01 dan P. stutzeri
IRNAE01 diharapkan menjadi probiotik
yang lebih baik. Akan tetapi, hasil uji
tantang Bacillus terhadap P. stutzeri
IRNAE01 menunjukkan bahwa P. stutzeri
IRNAE01 dihambat oleh Bacillus sp.
IRVE01. Oleh karena itu, jadwal pemberian
Bacillus sp. IRVE01 dan P. stutzeri
IRNAE01 yang berselang-seling diharapkan
tidak terjadi kompetisi antara dua bakteri
tersebut. Pada stadia perantaraan zoea dan
mysis hanya diberikan Bacillus sp. IRVE01,
sedangkan pada stadia mysis 3 hanya
diberikan P. stutzeri IRNAE01.
Beberapa persyaratan yang harus
dimiliki probiotik, antara lain dapat mudah
dipelihara dan diperbanyak, dapat hidup dan
bertahan dalam usus inang, dapat dipelihara
dalam media yang mungkin dapat
diintroduksi ke dalam usus inang, dan dapat
hidup dan berkembang di dalam air wadah
pemeliharaan (Feliarta et al. 2004). Oleh
karena itu, P. stutzeri IRNAE01 dan Bacillus
sp. IRVE01 diperkaya dalam media produksi
fish meal, yaitu sejenis pakan bagi hewan
perairan. Ada tiga jenis fish meal, antara lain
Australian fish meal, Danish fish meal, dan
Peruvian fish meal. Ketiga jenis fish meal
ini mempunyai bobot kering, jumlah
nitrogen, dan jumlah energi yang cukup
tinggi. Kandungan asam amino dari ketiga
jenis fish meal ini lebih tinggi dari soybean
meal sehingga soybean meal tidak dipakai
sebagai media produksi dalam penelitian ini
9
(Allan et al. 2000). Media produksi lain
yang digunakan ialah molase, yaitu media
yang berasal dari sisa pengolahan tebu.
Harga media ini murah dan kandungan
karbonnya masih cukup tinggi.
Suhu Air Pemeliharaan Larva
Pemeriksaan kualitas air pemeliharaan
larva selama penelitian berlangsung
dilakukan setiap 3 hari sekali. Walaupun
prosedur yang baik dalam pemeriksaan
kualitas air ialah dilakukan setiap hari,
namun pemeriksaan 3 hari sekali sudah
cukup mewakili data kualitas air
pemeliharaan larva. Kualitas air diperiksa
untuk mengetahui seberapa jauh pengaruh
pemberian probiotik terhadap larva
dibandingkan kontrol dan pembanding.
Parameter kualitas air, seperti salinitas air
tidak diperiksa dalam penelitian ini karena
air laut yang digunakan sebagai air
pemeliharaan pada tiap perlakuan berasal
dari sumber air yang sama.
Grafik nilai rata-rata suhu air
pemeliharaan menunjukkan kemiripan
dalam hal kenaikan dan penurunan nilai
suhu antara kontrol dan perlakuan probiotik.
Grafik ini juga menunjukkan bahwa suhu air
pemeliharaan dari stadia nauplii hingga PL 8
berada dalam kisaran suhu yang aman bagi
pertumbuhan udang, yaitu 27.4-30.6 0C. Hal
ini menandakan bahwa kehadiran probiotik
dalam air pemeliharaan larva tidak begitu
mempengaruhi nilai suhu air. Namun, suhu
air pemeliharaan larva dapat mempengaruhi
kondisi tubuh larva. Apabila air
pemeliharaan larva berada dalam suhu yang
tinggi, maka laju metabolisme sel menjadi
cepat dan perkembangan tubuh larva pun
semakin meningkat. Suhu juga memiliki
pengaruh tehadap respirasi organisme air
dan dapat memperlihatkan peningkatan
konsumsi oksigen seiring dengan
peningkatan suhu (Effendi 2000). Kisaran
suhu optimum untuk pertumbuhan udang
ialah 25-32 0C dan akan mengalami
kematian pada suhu di atas 35 0C (Dharmadi
& Ismail 1995). Suhu air pemeliharaan juga
mempengaruhi kondisi pertumbuhan
probiotik. Suhu optimum bagi
perkembangan probiotik Bacillus sp.
IRVE01 berada pada kisaran suhu 30-35 0C.
pH Air Pemeliharaan Larva
Grafik hasil pengukuran pH
menggambarkan bahwa nilai pH antara
kontrol dan perlakuan relatif tidak berbeda
nyata, tetapi pada kontrol mengalami

kenaikan dari stadia PL 5 hingga PL 8.
Apabila dilihat secara menyeluruh dari air
persiapan hingga pL 8, maka grafik nilai pH
kontrol dan probiotik menunjukkan
penurunan pH. Namun, penurunan yang
lebih tajam ditunjukkan pada perlakuan
pembanding, kemudian diikuti probiotik.
Data pH ini menunjukkan bahwa
pemberian probiotik dapat menurunkan pH.
Salah satu mekanisme kerja probiotik ialah
memproduksi senyawa inhibitor, seperti
antimikrob, siderofor, dan senyawa lain
yang diketahui dapat merubah nilai pH
(Verschuere et al. 2000). Jadi, dapat
diartikan bahwa zat antimikrob yang
dihasilkan Bacillus sp. IRVE01 untuk
menghambat Vibrio dapat merubah pH air.
Akan tetapi, dosis pemberian probiotik
dalam penelitian ini masih dapat ditolerir
karena pH air pemeliharaan yang diberi
probiotik masih berada pada kisaran pH 6-9
yang memampukan ikan dan larva udang
tumbuh dengan baik. Apabila pH air berada
di luar kisaran 6-9, maka pertumbuhannya
dapat terganggu. Apabila nilai pH berada di
bawah 4.5 atau di atas 10, maka akan terjadi
kematian (Buttner et al. 1993).
Alkalinitas Air Pemeliharaan Larva
Pada pemeriksaan alkalinitas air,
alkalinitas kontrol dan perlakuan masih
berada dalam kisaran alkalinitas yang masih
dapat ditolerir, yaitu 82.4-188 ppm. Kisaran
alkalinitas yang cocok di lingkungan
perairan ialah antara 20-300 ppm.
Alkalinitas yang dimaksud ialah ion (atom-
atom yang mempunyai muatan positif atau
negatif) karbonat dan bikarbonat yang larut
dengan air (Buttner et al. 1993). Grafik nilai
alkalinitas menunjukkan bahwa pada stadia
PL 5 terjadi kenaikan nilai alkalinitas yang
cukup drastis pada perlakuan probiotik
Bacillus sp. IRVE01 dan P. stutzeri
IRNAE01, yaitu dari 122.2 menjadi 188
ppm. Hal ini wajar terjadi karena keberadaan
karbondioksida dan alkalinitas berkaitan erat
dengan derajat keasaman atau pH. Semakin
tinggi nilai pH, maka semakin tinggi pula
nilai alkalinitas, sementara kadar karbon
dioksida bebas akan semakin rendah
(Effendi 2000). Pada stadia PL 5, pH air
pemeliharaan pada perlakuan probiotik juga
sedikit mengalami kenaikan, yaitu dari 7.86
menjadi 7.87. Hal ini menandakan bahwa
pemberian probiotik dapat mempengaruhi
nilai alkalinitas air pemeliharaan larva.
10
Oksigen Terlarut (DO)
Pada penelitian ini, oksigen yang
terlarut dalam air (DO) diberikan melalui
aerasi dari blower. DO masing-masing
perlakuan secara keseluruhan tidak berbeda
nyata dan berada di atas 3 ppm, yaitu berada
pada kisaran 3.16-3.71 ppm. Kisaran nilai
DO ini masih termasuk aman karena DO
pada budi daya udang harus di atas 3 ppm
(Dharmadi & Ismail 1995). Hal ini
menandakan bahwa pemberian probiotik
Bacillus sp. IRVE01 dan P. stutzeri
IRNAE01 tidak begitu berpengaruh terhadap
perubahan nilai DO. DO merupakan salah
satu faktor utama yang penting dan dapat
mempengaruhi kelangsungan hidup udang.
Apabila larva berada dalam kondisi DO
yang rendah dalam waktu yang lama, maka
mengakibatkan stress kronis bagi larva
tersebut, nafsu makan larva akan berkurang,
dan kemampuan untuk mengubah makanan
menjadi kulit akan berkurang, serta sangat
rentan terhadap penyakit. Kelarutan oksigen
dalam air dipengaruhi oleh suhu dan
salinitas. Semakin tinggi suhu dan salinitas
maka kelarutan oksigen akan berkurang
(Boyd 1991). Selain dari blower, oksigen
terlarut dalam air dapat juga berasal dari
hasil fotosintesis oleh alga dan difusi dari
udara (Hariyadi et al. 1992)
Total Ammonia Nitrogen (TAN)
Amonia pada air pemeliharaan dapat
berasal dari proses dekomposisi pakan yang
tidak terkonsumsi, alga yang telah mati,
serta dari kotoran larva itu sendiri. Amonia
pada air pemeliharaan larva terdapat dalam
dua bentuk, yaitu gas NH3 dan ion
ammonium (NH4+). Amonia dalam bentuk
gas bersifat toksik bagi larva, yaitu mampu
menganggu pernafasan larva. Apabila larva
terlalu banyak diberi pakan yang
mengandung banyak protein, maka
konsentrasi amonia pada air pemeliharaan
larva akan tinggi (Buttner et al. 1993).
Amonia tidak terionisasi juga dapat
meningkat apabila pH air pemeliharaan
meningkat (Boyd 1991). Konsentrasi amonia
diketahui melalui nilai TAN (Total
Ammonium-Nitrogen).
Grafik pengukuran TAN menunjukkan
kadar TAN yang terus meningkat hinga PL 8
dan nilai TAN tertinggi ialah 2.48 ppm.
Apabila dilihat secara keseluruhan dari
pemeriksaan TAN pada stadia tertentu,
maka kadar TAN antara kontrol dan
perlakuan tidak menunjukkan perbedaan
yang nyata. Namun, hal tersebut tidak

menandakan bahwa pemberian probiotik P.
stutzeri IRNAE01 tidak berhasil
menurunkan kadar TAN. Hal ini wajar
terjadi karena populasi larva pada probiotik
masih berada dalam jumlah yang tinggi
sehingga nilai TAN tetap tinggi. Sedangkan
pada kontrol, populasi larva menurun tetapi
kadar TAN tetap tinggi. Nilai TAN pada air
pemeliharaan tidak boleh melebihi 3 ppm.
Kadar amonia mampu dihilangkan oleh
bakteri yang mampu mengubah amonia
menjadi nitrit dan akhirnya diubah menjadi
nitrat yang tidak bersifat toksik bagi larva.
P. stutzeri IRNAE01 termasuk salah satu
bakteri tersebut.
Sisa Pakan Larva (Klekap)
Pada gambar yang memperlihatkan
pembentukan klekap (sisa pakan yang tidak
terdegradasi dan berlendir) menunjukkan
bahwa klekap pada perlakuan probiotik
Bacillus sp. IRVE01 dan P. stutzeri
IRNAE01 hanya menutupi kurang dari 10%
dari permukaan dasar bak atau hampir tidak
terdapat klekap. Hal ini berbeda jauh
keadaannya dengan pembanding dan
kontrol, yaitu pembentukan klekap pada
kontrol hampir menutupi 60% permukaan
dasar bak. Adanya penekanan nilai TVC
oleh pemberian Bacillus sp. IRVE01
menyebabkan populasi larva tetap tinggi,
sehingga pakan yang tidak terkonsumsi oleh
larva menjadi sedikit. Klekap yang sedikit
juga merupakan dampak tidak langsung dari
pemberian P. stutzeri IRNAE01 yang
mampu menekan kadar amonia dari kotoran
larva, sehingga larva tidak keracunan
amonia dan populasi larva tetap tinggi.
Populasi Bakteri
Populasi bakteri pada tiap perlakuan di
air pemeliharaan larva mengalami kenaikan
dari air persiapan hingga PL 8. Kenaikan
yang drastis terjadi pada kontrol, yaitu dari
223.000 CFU/ml menjadi 3.000.000
CFU/ml. Populasi bakteri dalam tubuh larva
lebih sedikit dibandingkan air pemeliharaan
larva. Selama penelitian berlangsung,
populasi bakteri tiap perlakuan dalam tubuh
larva mengalami kenaikan yang tidak teratur
dari stadia nauplii hingga PL 8. Namun,
populasi terendah sebelum larva dipanen
masih terdapat pada Bacillus sp. IRVE01
dan P. stutzeri IRNAE01, yaitu 114.900
CFU/ml.
Ada perbedaan yang nyata dalam hal
kenaikan jumlah TVC antara kontrol dan
perlakuan, yaitu Bacillus sp. IRVE01 dan P.
11
stutzeri IRNAE01 berhasil menekan
kenaikan jumlah TVC hingga terjadi
penurunan. Nilai TVC pada air
pemeliharaan perlakuan Bacillus sp.
IRVE01 dan P. stutzeri IRNAE01 terjadi
penurunan dari PL 2 hingga PL 8, yaitu dari
4.800 CFU/ml menjadi 2.440 CFU/ml. Hal
ini berbeda dengan nilai TVC pada air
pemeliharaan kontrol yang mengalami
kenaikan terlalu tinggi hingga mencapai
1.470.000 CFU/ml pada stadi PL 8. Hasil
analisa TVC pada tubuh larva menunjukkan
perbedaan yang nyata antara tubuh nauplii
(N) kontrol dengan perlakuan. Nilai TVC
dalam tubuh larva pada kontrol mengalami
kenaikan dari stadia N 6 dan mencapai
76.000 CFU/ml pada stadia PL 8. Hal ini
menyebabkan populasi larva pada kontrol
mengalami penurunan, khususnya saat stadia
MPL (mysis-post larva) ingin memasuki
stadia PL.
Jumlah Bacillus pada air pemeliharaan
larva yang diberi probiotik pembanding
cenderung lebih banyak dibandingkan
dengan perlakuan probiotik Bacillus sp.
IRVE01 dan P. stutzeri IRNAE01, yaitu
18.300 CFU/ml pada stadia PL 8. Hal ini
wajar terjadi karena dosis probiotik
pembanding yang lebih banyak, yaitu
sebanyak 4 ppm diberikan setiap hari,
sehingga cenderung selalu bertambah di air
pemeliharaan larva. Dosis untuk probiotik
Bacillus sp. IRVE01 dan P. stutzeri
IRNAE01 tidak ditambahkan setiap hari,
yaitu hanya saat air persiapan, zoea-mysis,
mysis 3 dan PL 5. Jumlah Bacillus di air
pemeliharaan Bacillus sp. IRVE01 dan P.
stutzeri IRNAE01 sebanyak 1.300 CFU/ml
lebih tinggi dibandingkan dengan
pembanding saat stadia zoea 2. Hal ini dapat
disebabkan oleh dosis pemberian Bacillus
sp. IRVE01 pada waktu air persiapan lebih
banyak dibandingkan dosis pemberian pada
stadia lainnya, yaitu 500 ml. Walaupun
secara keseluruhan jumlah Bacillus pada
perlakuan Bacillus sp. IRVE01 dan P.
stutzeri IRNAE01 lebih sedikit, namun
jumlah tersebut mampu menekan Vibrio
lebih tinggi, sehingga larva mampu bertahan
hidup. Hal ini dapat disebabkan oleh zat
antimikrob yang dihasilkan Bacillus sp.
IRVE01 memiliki spektrum penghambatan
yang lebih luas terhadap berbagai bakteri
dibandingkan zat antimikrob yang
dihasilkan Bacillus dalam pembanding.
Bacillus merupakan bakteri Gram
positif, membentuk endospora, dan bersifat
aerob atau fakultatif anaerob (Holt et al.

1994). Endospora Bacillus tetap ada pada
suhu yang ekstrim. Oleh karena itu, suhu
yang dipilih pada metode heat shock ialah di
atas 70 0C dengan harapan semua bakteri
yang tidak menghasilkan endospora mati.
Sama halnya dengan jumlah Bacillus di
media pemeliharaan, di tubuh larva
perlakuan pembanding pun cenderung lebih
banyak mengandung Bacillus bila
dibandingkan perlakuan Bacillus sp.
IRVE01 dan P. stutzeri IRNAE01. Saat
stadia PL 2, jumlah Bacillus dalam tubuh
larva perlakuan IRVE01+IRNAE01
menurun, yaitu dari 6.400 CFU/ml menjadi
1.350 CFU/ml. Hal ini wajar terjadi karena
pada stadia mysis 3, probiotik yang
diberikan hanya P. stutzeri IRNAE01.
Kesehatan Larva
Umumnya, aktivitas larva pada kontrol
dan perlakuan dapat dikategorikan tinggi.
Namun, sebagian besar gut content berada di
bawah 50%, sehingga dapat dikatakan nafsu
makan larva rendah. Hal tersebut dapat
terjadi karena larva mengalami stress. Stress
pada larva disebabkan oleh kondisi
lingkungan yang kurang kondusif bagi
perkembangan larva, serta serangan Vibrio.
Ketika memasuki stadia mysis-PL, larva
mengalami pergantian kulit yang tidak
sempurna pada kontrol dan probiotik
Bacillus sp. IRVE01 dan P. stutzeri
IRNAE01 sehingga kondisi larva menjadi
lemah dan mengalami penurunan populasi.
Umumnya, variasi panjang tubuh larva
yang dipanen tiap perlakuan masih rendah
atau seragam. Panjang tubuh larva terpendek
saat PL 8 terdapat pada perlakuan
pembanding, yaitu 7.69 mm dengan varasi
ukuran ± 0.93 mm, sedangkan yang
terpanjang terdapat pada perlakuan
pembanding juga, yaitu 9.19 mm dengan
variasi ukuran ± 1.49 mm. Apabila dilihat
dari panjang larva, maka hanya pembanding
saja yang belum layak panen karena ukuran
minimal untuk dapat dipanen ialah 8 mm.
Tingkat Kelangsungan Hidup Larva
Hasil SR akhir yang diperoleh dari
kontrol dan perlakuan probiotik baik
kombinasi Bacillus sp. IRVE01 dan P.
stutzeri IRNAE01 maupun pembanding
menunjukkan SR tertinggi terdapat pada
perlakuan kombinasi Bacillus sp. IRVE01
dan P. stutzeri IRNAE01, yaitu sebesar
29.06%. Nilai SR yang tetap tinggi pada
probiotik Bacillus sp. IRVE01 dan P.
stutzeri IRNAE01 disebabkan oleh adanya
12
penekanan nilai TVC yang cukup berarti
pada air pemeliharaan dan tubuh larva serta
kondisi lingkungan yang mendukung, seperti
nilai TAN yang tidak terlalu tinggi, amonia
dan klekap yang sedikit, dan parameter
kualitas air lainnya yang masih termasuk
aman bagi pertumbuhan larva udang. Hasil
SR panen ini membuktikan bahwa
penggunaan probiotik Bacillus sp. IRVE01
dan P. stutzeri IRNAE01 berpengaruh dalam
meningkatkan SR dengan cara menekan
Vibrio dan juga mempertahankan kualitas air
pemeliharaan. Peningkatan nilai SR larva
juga terjadi pada pemeliharaan larva udang
windu (Penaeus monodon) yang diberi
probiotik dari genus Bacillus dibandingkan
kontrol dan antibiotik (Decamp et al. 2004).
SIMPULAN
Pemberian probiotik Bacillus sp.
IRVE01 yang dikombinasikan dengan P.
stutzeri IRNAE01 menghasilkan nilai SR
akhir yang lebih baik dari pembanding, yaitu
29.06%. Probiotik Bacillus sp. IRVE01
terbukti mampu menekan jumlah koloni
Vibrio baik di air pemeliharaan maupun di
tubuh larva yang lebih baik dibandingkan
pembanding. Perlakuan pemberian P.
stutzeri IRNAE01 terbukti mampu
mengurangi pembentukan klekap di dasar
permukaan bak pemeliharaan larva
dibandingkan kontrol dan pembanding.
SARAN
Diperlukan pengujian lebih lanjut
mengenai dosis dan jadwal pemberian
probiotik yang lebih efisien dan efektif lagi
untuk meningkatkan nilai SR akhir larva.
Diperlukan karakterisasi lebih khusus lagi
mengenai Bacillus sp. IRVE01 dan P.
stutzeri IRNAE01 agar dapat diproduksi
pada skala industri besar.

DAFTAR PUSTAKA
Allan GL et al. 2000. Replacement of fish
meal in diets for Australian silver perch,
Bidyanus bidyanus: I. Digestibility of
alternative ingredients. Aquaculture
186: 293-310.
Atlas RM. 2000. Handbooks of
Microbiological Media. 9th Edition.
New York: CRC Pr.
Boyd CE. 1991. Water Quality Management
and Aeration in Shrimp Farming.
Pedoman Teknis dari Proyek Penelitian
dan Pengembangan Perikanan. Jakarta.
hlm 82.
Buttner JK, Sodenberg RW, Terlizzi DE.
1993. An Introduction to Water
Chemistry in Freshwater Aquaculture.
Northeastern Regional Aquaculture
Center: 170.
Cedeno V et al. 1998. Quantitative genetics
and genetic transformation for the
selection of pathogen-resistent shrimp.
Di dalam Flegel TW, editor.
Proceedings to the Special Session on
Shrimp Biotechnology 5th Assian
Fisheries Forum Chiengmai, Thailand.
Bangkok.
Chytnya R, Karunasagar I, Karunasagar I.
2002. Inhibition of shirmp phatogenic
vibriosis by a marine Pseudomonas I-2
strain. Aquaculture 208: 1-10.
Decamp O, Soetaert J, Waraphorn J. 2004.
Probiotics in shrimp larviculture.
INVE Technologies NV.
Dharmadi, Ismail A. 1995. Tinjauan
beberapa faktor penyebab kegagalan
usaha budidaya udang tambak. Di
dalam: Prosiding Seminar Sehari Hasil
Penelitian Sub Balai Penelitian
Perikanan Budidaya Pantai;
Bojonegara-Serang, Cilegon, 11 Maret
1995. Bojonegara-Serang: Pusat
Penelitian Sub Balai Penelitian dan
Perikanan Budidaya Pantai. hlm 193-
202.
Effendi H. 2000. Telaah kualitas air: Bagi
Pengolahan Sumber daya dan
Lingkungan Perairan. Jakarta:
Gramedia.
Feliarta, Efendi I, Suryadi E. 2004. Isolasi
dan identifikasi bakteri probiotik dari
ikan kerapu macan (Ephinephelus
fuscogatus) dalam upaya efisiensi pakan
ikan. J Natur Indonesia 6(2): 75-
80.
Greenberg AE, Clesceri LS, Eaton AD.
1992. Standard Methods for
13
Examination of Water and Wastewater.
18th Edition. Washington DC:
Publication Office American Public
Health Association.
Haliman RW, Adijaya DS. 2006. Udang
vannamei. Jakarta: Penebar Swadaya.
Hariyadi S, Suryadiputra INN, Widigdo B.
1992. Limnologi metode Analisa
Kualitas Air. Bogor: Fakultas
Perikanan, Institut Pertanian Bogor. hlm
190.
Holt JG et al. 1994. Bergey’s Manual of
Determinative Bacteriology. Ed ke-9.
New York: Williams & Wilkins.
Katz E, Demain AL. 1977. Peptide
antibiotics of Bacillus: chemistry,
biogenesis and possible function.
Bacteriol Rev 41: 449-474.
Lavilla–Pitogo CR, Baticados MCL, Cruz-
Lacierda ER, De la Pena LD. 1990.
Occurance of luminous bacterial disease
of Penaeus monodon larvae in the
Philiphines. Aquaculture 91:1-13.
Lisboa MP, Bonatto D, Bizani D, Henriques
JAP, Brandelli A. 2006.
Characterization of a bakteriosin-like
substance produced by Bacillus
amyloliquefaciens isolated from the
Brazillian atlantic forest. Intern
Micobiol 9: 111-118.
Liu CH, Yeh ST, Cheng SY, Chen JC. 2004.
The immune response of the white
shrimp Lithopenaeus vannamei and
its susceptibility to Vibrio infection
in relation with the mouth cycle.
Fish and Shellfih Immunol 16: 151-161.
Main KL, Laramore R. 2005. Chapter 9-
Shrimp Health Management. Harbor
Branch Oceanographic Institution.
http://.hboi.edu/downloads/pdf/shrimp_
manual_chapter 9.pdf [26 Desember
2006].
Moriarty DJW. 1999. Microbial Biosystem;
New Frontiers. Di dalam: Bell CR,
Brylinsky M, Johnson GP, editor.
Proceedings of the 8 th International
Symposium on Microbial Ecology.
Canada.
Rengpipat S, Rukpratanporn S,
Piyatiratitivorakul S, Menasveta P.
1998. Probiotics in aquaculture: A case
study of probiotics for larvae of the
black tiger shrimp (Penaeus monodon).
Di dalam: Flegel TW, editor.
Advances in Shrimp Biotechnology.
Bangkok: National Center for genetic
Engineering and Biotechnology. hlm
177-181.
 14

Ruangpan L, Na-anan P, Direkbusarakom S.

1998. Inhibitory effect of Vibrio
alginolyticus on the growth of
V.harveyi. Fish Pathol 33(4): 293-296.
Taufik P, Rukyani A. 2002. Penyakit oleh
Vibrio sp. berpendar pada larva udang
windu Penaeus monodon Fabricius dan
dosis pengobatannya. J Ilmu-ilmu
Perairan dan Perikanan Indones IX(1):
67-70.
Torkar KG, Matijasic BB. 2003. Partial
characterisation of bacteriocins
produced by Bacillus cereus isolat from
milk and milk products. Food Technol
41 (2): 121-129.
Verschuere L. Rombaut G, Sorgeloos P,
Verstraete W. 2000. Probiotic bacteria
as biological control agents in
aquaculture. Microbiol and Mol Biol
Rev: 655-671.
Widiyanto T. 2006. Seleksi bakteri
nitrifikasi dan denitrifikasi untuk
bioremediasi di tambak udang: kasus di
tambak rakyat desa Ciparage,
Kecamatan Tempuran, Kabupaten
Karawang [disertasi]. Bogor: Program
Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
LAMPIRAN
Lampiran 1 Manajemen pakan buatan, pakan alami, dan obat-obatan

Pakan Buatan Pakan Alami Obat-obatan (ppm)

Penam- Pengu- CP star (ppm) Lanzy (ppm) CP
bahan rangan Eguchi Spina total
Hari Sta- air laut air laut Total BP (ppm) (ppm Algae Artemia
ke- dia (ton) (ton) (ton) (ppm) 100 200 300 ZM MPL PL /hari) (ton) (gram) EDTA Treflan Formalin
1 N - - 2.5 1 1 - - 1 - - - 3 0.25 - 10 0.0045 -
2 Z1 - - 2.5 2 3 - - 2,2 - - 0,8 8 0.45 - - - -
3 Z1-2 0.25 - 2.75 3 6 - - 4,5 - - 1,5 15 0.45 - 3 0.0045 -
4 Z2 0,25 - 3 3 8 - - 5,5 - - 1,5 18 0.45 - 3 - -
5 Z3 0.17 - 3.17 3 13 - - 6,5 - - 1,5 24 0.45 - 3 0.0045 -
6 ZM - - 3.17 - 15 - - 9 - - - 24 0.45 - - 0.0045 -
7 M1 0.17 - 3.34 - 18 - - 10 - - - 28 0.45 - 4 - -
8 M2 - - 3.34 - 18 - - 10 - - - 28 0.45 - - 0.0045 -
9 M3 0.17 0.17 3.34 - 20 - - 12 - - - 32 0.45 - 4 0.0045 -
10 MPL - 0.17 3.17 - 21 - - 14 - - - 35 0.45 16 4 - -
11 PL1 - 0.17 3 - 12 9 - 9 5 - - 35 - 30 - 0.0045 -
12 PL2 - - 3 - 12 10 - 9 6 - - 37 - 30 - 0.0063 -
13 PL3 - - 3 - - 22 - - 15 - - 37 - 30 - 0.0063 -
14 PL4 - - 3 - - 23 - - 16 - - 39 - 36 - - 5
15 PL5 0.20 0.20 3 - - 27 - - 18 - - 45 - 36 - 0.0063 -
16 PL6 - - 3 - - 28 - - 20 - - 48 - 30 - 0.0063 -
17 PL7 - - 3 - - 20 8 - 15 5 - 48 - 30 - - 20

18 PL8 - - 3 - - 20 10 - 15 6 - 51 - 30 - 0.0090 -
19 PL9 - - 3 - - 20 12 - 12 10 - 54 - - - - -
16
Lampiran 2 Hasil pengamatan uji tantang Bacillus sp. IRVE01, IRVE02, dan IRVE03 terhadap Vibrio luminesen menggunakan metode
double layer
Aktivitas Penghambatan Pertumbuhan Vibrio oleh Bacillus sp.
Vibrio
IRVEO1 IRVE02 IRVE03
Ф koloni Ф zona IP Ф koloni Ф zona IP Ф koloni Ф zona IP
(mm) bening (mm) (mm) bening (mm) (mm) bening (mm)
H1 B14 W ulangan ke-1 8.5 - - 19.5 - - 5.5 - -

H1 B14 W ulangan ke-2 8 - - 7 - - 4.5 - -

H1 B14 B ulangan ke-1 9.5 - - 3.5 - - 6.5 - -

H1 B14 B ulangan ke-2 8.5 - - 19 - - 5 - -

H1 B13 W ulangan ke-1 3 5 0.67 6 - - 5.5 - -

H1 B13 W ulangan ke-2 menyebar - - 8.5 - - 9.5 - -

H1 B13 B ulangan ke-1 menyebar - - 11.5 - - menyebar - -
H1 B13 B ulangan ke-2 3 6 1 2 4 1 3 - -
H3 B21 B ulangan ke-1 menyebar - - menyebar - - menyebar - -
H3 B21 B ulangan ke-2 menyebar - - menyebar - - menyebar - -
H3 B23 B ulangan ke-1 4 9 1.125 7.5 10.5 0.4 menyebar - -
H3 B23 B ulangan ke-2 4.5 9 1 7.5 12.5 0.53 menyebar - -

17
Lampiran 3 Hasil pemeriksaan kesehatan larva kontrol dan probiotik
Kontrol Ulangan 1
Stadia Larva/Post Larva Condition & Health Monitoring
Gut
Sal
Pigmentation Content GMR Length SV
(ppt)
Tgl Aktifitas (%) deformity Fill (≥1:3) (mm) (mm)
¼-
O
pengecekan Ks Kp R <¼ ½ >½ Kn Hp Gut Keterangan
D= 10 (duri
16,7 ekor
N5 (3/3/7) 34 A 83,3 0,47 0,97 pendek)
Z2 (6/3/7) 33 A 10 60 40 50 50
D= Hp+gut
M2 (9/3/7) 33 A 100 10 80 10 80 20 40 40 =50%
PL2(13/3/7) 34 A 10 60 20 30 50 70 10 40 30 3,07 0,4 M3: 30%

Pembanding Ulangan 1
Stadia Larva/Post Larva Condition & Health Monitoring
Gut
Sal
Pigmentation Content GMR Length SV
(ppt)
Tgl Aktifitas (%) deformity Fill (≥1:3) (mm) (mm)
¼-
O
pengecekan Ks Kp R <¼ ½ >½ Kn Hp Gut Keterangan
D= 10 (duri
16,7 ekor
N5 (3/3/7) 34 A 83,3 0,47 0,97 pendek)
Z2 (6/3/7) 33 A 10 30 50 50 10 10
D= Hp+gut
M2 (9/3/7) 33 A 10 90 50 40 10 70 40 20 3,61 0,62 =30%

18
PL2(13/3/7) 34 A 20 20 40 60 80 5,92 0,74 Btg: 3-6 kk
PL5
(17/3/7) 34 A 60 40 100
PL8(20/3/7) 34 A 10 70 30 60 10 10 10 50 100 9,19 1,49 Nec: gill

Pembanding Ulangan 2
Stadia Larva/Post Larva Condition & Health Monitoring
Pigmentation Gut Content (%) deformity
Sal
Tgl ¼- GMR Length SV
(ppt) O
pengecekan Aktifitas Ks Kp R <¼ ½ >½ Kn Hp Gut Fill (≥1:3) (mm) (mm) Keterangan
D= 10 (duri
16,7 ekor
N5 (3/3/7) 34 A 83,3 0,47 0,97 pendek)
Z2 (6/3/7) 33 A 50 20 80 50 40 10
D=
Hp+gut+Abd
M2 (9/3/7) 33 A 100 20 80 60 50 50 =10%
PL2(13/3/7) 34 A 20 20 20 80 20 20 50 3,38 0,49 Btg: 2 kk
PL5
(17/3/7) 34 A 10 40 60 100 5,52 0,58
PL8(20/3/7) 34 A 20 30 70 10 10 50 100 7,69 0,93 Nec: gill

IRVE01 dan IRNAE01 Ulangan 1

Stadia Larva/Post Larva Condition & Health Monitoring
Pigmentation Gut Content (%) deformity
Sal
Tgl ¼- GMR Length SV
(ppt) O
pengecekan Aktifitas Ks Kp R <¼ ½ >½ Kn Hp Gut Fill (≥1:3) (mm) (mm) Keterangan
D= 10 (duri
16,7
N5 (3/3/7) 34 A 83,3 0,47 0,97 ekor

19
 pendek)
Z2 (6/3/7) 33 A 30 30 70 20 20 90
D= Hp+gut
=60% Nec:
M2 (9/3/7) 33 A 40 60 70 30 70 10 10 uropod
PL2(13/3/7) 34 A 10 10 30 70 10 10 90 90 4,03 0,46 M3: 20%
PL5
(17/3/7) 34 A 60 40 100 6,03 0,95
PL8(20/3/7) 34 A 20 10 30 60 30 10 70 100 8,02 0,85 Nec: gill

IRVE01 dan IRNAE01 Ulangan 2

Stadia Larva/Post Larva Condition & Health Monitoring Keterangan
Gut
Sal
Tgl Pigmentation Content GMR Length SV
(ppt)
pengecekan Aktifitas (%) deformity Fill (≥1:3) (mm) (mm)
¼-
O
Ks Kp R <¼ ½ >½ Kn Hp Gut
D= 10 (duri
16,7 ekor
N5 (3/3/7) 34 A 83,3 0,47 0,97 pendek)
D= Hp+G =
Z2 (6/3/7) 33 A 20 40 60 40 30 20 50 10%
D= Hp+gut
=40%, Nec
M2 (9/3/7) 33 A 10 90 70 30 50 10 10 di body
PL2(13/3/7) 34 A 80 20 70 10 20 30 10 2,82 0,42 M3: 30%
Def: PR,
PL5 Ant, Nec:
(17/3/7) 34 A 40 20 50 40 10 30 70 70 4,65 1,18 PR, gill
PL8(20/3/7) 34 A 20 80 20 10 10 70 100 8,17 0,85 Nec: gill

20
Kontrol Ulangan 2
Stadia Larva/Post Larva Condition & Health Monitoring
Pigmentation Gut Content (%) deformity
Sal
Tgl ¼- GMR Length SV
(ppt) O
pengecekan Aktifitas Ks Kp R <¼ ½ >½ Kn Hp Gut Fill (≥1:3) (mm) (mm) Keterangan
D: 10 (duri
16,7 ekor
N5 (3/3/7) 34 A 83,3 0,47 0,97 pendek)
D:
Hp+G+Rs
Z2 (6/3/7) 33 A 40 20 80 50 40 70 =10%
M2 (9/3/7) 33 A 90 50 40 10 50 50
buntung 6
PL2(13/3/7) 34 A 10 30 50 50 30 100 3,68 0,65 kk
PL5
(17/3/7) 34 A 10 20 20 70 30 60 40 90 4,43 0,66 Def: PR, ant
Nec: gill dan
PL8(20/3/7) 34 A 60 40 50 10 10 10 100 8,81 0,64 Def : PR
Keterangan: KS: Kusam G: Gut (usus) Lipid (lemak) def:Deformity PR: periopode
O: Opaque (kusam) E: Empty (kosong) Kn: kuantitas Nec:Necrosis Ant: antenna
Fill:fillamentous
Ks: konsentrasi pigmen rat: rata-rata Kl: Kualitas bactery GMR: Gut to Muscle Ratio
BTG: buntung BSK: busuk Hp: hepatopankreas

21