LAPORAN PKL YORDI TUV NORD - Rev-1

PENETAPAN KADAR AFLATOXIN M1 PADA SUSU BUBUK
(WESTLAND) SECARA KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI

(KCKT) BERDASARKAN MU-03/41
PRAKTEK KERJA INDUSTRI (PRAKERIN) Formatted: German (Germany)
DI PT. TUV NORD INDONESIA
Oleh :
YORDI AFIQ SYAHRIZAL
NIS 166659
KEMENTRIAN PERINDUSTRIAN REPUBLIK INDONESIA

SEKOLAH MENENGAH KEJURUAN
SMAK PADANG
2019
i
LAPORAN PRAKERIN DISUSUN BERDASARKAN PENELITIAN DI
LABORATORIUM DAN TELAH DIPERIKSA DAN DISETUJUI PADA
TANGGAL: DESEMBER 2019
Pembimbing Laboratorium, Manager Lab.

PT TUV Nord Indonesia
(Busro Wintolo) (Tri Tresnawati, S.Si)
Guru Pembimbing, Kepala SMK SMAK Padang
(Farlina S.Pd, M.Hum) (Drs. Nasir)
ii
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum wr.wb
Puji dan syukur kehadirat Allah SWT, atas limpahan rahmat dan karunia-Nya sehingga
penyusun dapat menyelesaikan Praktik Kerja Industri dan laporan PKL di PT. TÜV
NORD Indonesia. Sholawat dan salam tidak lupa dihaturkan kepada junjungan kita
Nabi Muhammad SAW beserta keluarga, para sahabat dan Insya Allah kepada kita.
Penulis menyadari jika Praktik Kerja Industri yang telah dilaksanakan dari tanggal 8
Juli hingga 8 Desember 2019 tidak akan berjalan dengan baik tanpa adanya bantuan
serta bimbingan dari berbagai pihak, oleh karena itu dalam kesempatan ini penulis ingin
berterimakasih kepada:
1. Bapak Drs. Nasir, selaku Kepala Sekolah Menengah Analis Kimia Padang
2. Ibu Tri Tresnawati, S.Si selaku Manajer laboratorium PT. TÜV NORD
Indonesia
3. Bapak Busro Wintolo selaku Asisten Manajer di PT. TÜV NORD Indonesia
4. Mas Ricky Prabowo selaku Supervisor Quality Control Laboratorium Kimia Commented [FJ1]: Ganti dengan : Laboratorium Kimia
sekaligus pembimbing di PT. TUV NORD Indonesia Formatted: Font: Not Italic
5. Ibu Farlina S.Pd, M.Hum selaku guru pembimbing dari SMK SMAK Padang
6. Ibu Barwita Yuniana, M.Si selaku Waka Hubim yang telah membantu
pengurusan segala kepentingan Praktik Kerja Industri
7. Bang Fajar yang telah mengajarkan dan memberikan ilmunya tentang analisis
dan penggunaan alat HPLC.
8. Mas jamal, Mas Adam, Kak Nur, Kak Rakha, Kak Lutfi, Bang Andre, Bang
Vandes, Kak Sandi, Mas Harry, Kak Ucul, Kak Faiq, Kak Cholis, Mas Iqbal,
Mas Jupe, Mas Fahmi, Kak Anam, Mas Raju, Kak Helbi, Mas Julhan, Mbak
Kiki, Mas Tian, terima kasih sebesar-besarnya telah memberikan pengarahan
dan bantuan selama penulis melakukan analisa di perusahaan.
9. Seluruh karyawan PT. TÜV NORD Indonesia yang telah memberikan bantuan
dan pengarahan selama kerja praktik berlangsung
10. Guru dan karyawan SMK-SMAK Padang atas semua ilmu, dukungan,
semangat dan bantuan yang telah diberikan kepada penulis.
iii
11. Kedua Orang tua tercinta dan keluarga yang telah memberikan dorongan, doa
dan dukungan baik berupa moril maupun materil.
12. Seluruh angkatan Aliansi Merak 52 (SMK SMAK Padang) yang telah
memberikan semangat selama penulis melakukan Prakerin.
13. Seluruh pihak yang telah membantu dalam menyusun laporan ini baik secara
langsung maupun tidak langsung.
Penyusunan laporan ini telah di usahakan semaksimal mungkin, namun penulis

menyadari tentu masih terdapat banyak kekurangan di dalamnya, oleh karena itu
penulis menerima kritik dan saran yang bersifat membangun. Penulis sangat berharap
laporan ini dapat berguna dalam rangka menambah wawasan serta pengetahuan kita
mengenai Analisa Aflatoxin M1 dalam susu bubuk (Westland Milk Product) dari PT.
Mitra Kulina Sejahtera dengan metoda HPLC Agilent. Sekiranya laporan yang telah
disusun ini dapat berguna bagi kami sendiri maupun orang yang membacanya.
Cikarang, Desember 2019
Penulis
iv
DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR ...........................................................................................................

DAFTAR ISI .........................................................................................................................
BAB I ....................................................................................................................................
PENDAHULUAN .................................................................................................................
1.1 Latar Belakang ...........................................................................................................
1.2 Tujuan .......................................................................................................................
1.3 Manfaat ......................................................................................................................
BAB II ...................................................................................................................................
PROFIL PERUSAHAAN .....................................................................................................
2.1 Sejarah Perusahaan ....................................................................................................
2.2 Struktur organsasi ......................................................................................................
2.3 Gambaran Proses Industri dan Komoditi ...................................................................
2.3.1 Proses Laboratorium Penguji ........................................................................
2.3.2 Proses Kalibrasi ............................................................................................
2.3.3 Proses Sertifikasi Produk2.4 Ruang Lingkup Laboratorium ........................
2.4 Kegiatan Usaha (Operasional) PT. TÜV NORD Indonesia.......................................
BAB III ..................................................................................................................................
PELAKSANAAN PRAKERIN.............................................................................................
3.1 Waktu dan Tempat Pelaksanaan ................................................................................
3.2 Pengujian yang Dilakukan .........................................................................................
3.3 Tinjauan Pustaka Parameter Pengujian ......................................................................
3.3.1 Susu Bubuk ...................................................................................................
3.3.2 Aflatoxin M1 .................................................................................................
3.3.3 KCKT ( Kromatografi Cair Kinerja Tinggi ) ................................................
3.4 Metodologi Pengujian ................................................................................................
BAB IV..................................................................................................................................
HASIL DAN PEMBAHSAN ................................................................................................
4.1 Hasil Pengujian ..........................................................................................................
4.2 Pembahasan................................................................................................................
BAB V ...................................................................................................................................
PENUTUP .............................................................................................................................
5.1 Kesimpulan ................................................................................................................
5.2 Saran ..........................................................................................................................
DAFTAR PUSTAKA............................................................................................................
LAMPIRAN ..........................................................................................................................
v
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Praktik kerja industri (Prakerin) merupakan salah satu program kurikulum

Sekolah Menengah Kejuruan – SMAK Padang untuk menghasilkan tenaga analis kimia
yang siap pakai dan sebagai wujud pelaksanaan program Pendidikan Sistem Ganda
(PSG) yang diterapkan oleh pemerintah pada setiap Sekolah Menengah Kejuruan,
sedangkan prakerin ini dibantu sepenuhnya oleh lembaga atau instansi pemerintah dan
perusahaan-perusahaan swasta yang berhubungan dengan bidang kimia dan
mikrobiologi.
Susu bubuk merupakan suatu produk hasil olahan susu susu segar yang Formatted: Font color: Text 1
dikeringkan sehingga menjadi serbuk. Susu jenis ini biasanya dikemas dengan kaleng
atau kardus yang didalamnya ada kemasan alumunium foilnya. BSusu bubuk adalah
susu jenis ini biasanya dikemas dengan kaleng atau kardus yang didalamnya ada
kemasan alumunium foilnya. Commented [FJ2]: Pbaiki !
Formatted: Font color: Text 1
Berdasarkan SNI 3752-2009, yang dimaksud Deputi MENLH (2006)
menyebutkan bahwa pembuatan susu bubuk merupakan salah satu upaya untuk
mengawetkan susu sehingga dapat tahan lebih lama. Susu jenis ini susu bubuk adalah
produk susu yang diperoleh dengan cara mengurangi sebagian besar air melalui proses
pengeringan susu segar dan atau susu rekombinasi yang telah dipasteurisasi, dengan
atau tanpa penambahan vitamin, mineral, dan bahan tambahan pangan
yang diizinkan.dapat langsung dibedakan dari bentuk dan penampilannya. Produk susu
bubuk merupakan hasil proses penguapan dan pengeringan dengan cara penyemprotan
dalam tekanan tinggi.
Aflatoksin merupakan mikotoksin yang dihasilkan oleh kapang

Aspergillus flavus dan A.parasiticus(IARC 2002). Kapang tersebut dapat
mengontaminasi bahan pakan ternak dan akan menghasilkantoksin
berupaaflatoksin B1, B2, G1,dan G2 (Syarief et al. 2003). Aflatoksin yang ada
dalam pakan jika terkonsumsi oleh hewanternak akan meninggalkan residu
aflatoksin pada produk ternak seperti daging, telur,dan susu. Sapi perah yang
6
mengonsumsi pakan yang terkontaminasi aflatoksin B1 (AFB1) akan
mengekskresikan metabolit hidroksilasi berupa aflatoksin M1 (AFM1) ke dalam
susu yang dihasilkan (Prandini et al. 2009)
Aflatoksin M1 dapat masuk ke dalam rantai pangan manusia melalui susu.

Kendala utama dalam penanganan AFM1 pada susu ialah sifatnya yang stabil
pada pemanasan, baik suhu pasteurisasi maupun sterilisasi, dan proses
penyimpanan (Stoloffet al. 1975). Aflatoksin M1 tidak terurai pada pemanasan
mencapai 250 °C (Syarief et al. 2003), sehingga masih dapat ditemukan pada susu
pasteurisasi(Celik et al. 2005), susu ultra high temperature (Ghanem dan Orfi 2009;
Heshmati dan Milani 2010), susu bubuk (Al-Sawaf et al. 2012), dankeju
(Sarimehmetoglu et al. 2004). Keberadaan AFM1 dalam pangan dapat dideteksi
secara kualitatif dan kuantitatif. Metode deteksi yang dapat digunakan antara lain
high performance liquid chromatography (HPLC), gas chromatography (GC),
liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS), fluorimetri,dan
immunoassayseperti enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) (Maryam
2007). Metode ELISA digunakan untuk mendeteksi mikotoksin karena memiliki
spesifisitas dan sensitifitas yang tinggi (Zheng et al. 2006).
1.2 Tujuan Formatted: German (Germany)
Tujuan dari prakerin adalah:

1. Meningkatkan, memperluas keterampilan serta kemampuan siswa memasuki
lapangan kerja yang sesuai.
2. Menumbuhkembangkan dan memantapkan sikap profesional siswa yang
diperlukan untuk memasuki dunia kerja sesuai dengan bidangnya,
meningkatkan wawasan siswa pada aspek-aspek yang potensial dalam dunia
kerja, antara lain struktur organisasi, disiplin, lingkungan dan sistem kerja.
3. Meningkatkan pengetahuan siswa dalam hal penggunaan instrumen kimia
analis yang lebih modern dibandingkan dengan fasilitas yang ada di sekolah.
4. Mendapatkan gambaran nyata mengenai pengoperasian kerja dan penerapannya
dalam upaya mengoperasikan sarana produksi.
5. Memperoleh masukkan dan timbal balik guna memperbaiki dan
mengembangkan pendidikan di sekolah analis kimia.
7
6. Memberikan peluang masuk penempatan tamatan dan kerja sama.
Tujuan penulisan laporan prakerin antara lain:

1. Mengetahui kadar Aflatoxin M1 pada sampel susu bubuk dengan metoda High
Performance Liquid Cromatography (HPLC) Agilent.
2. Mengetahui kualitas sampel susu bubuk yang di Analisa apakah aman untuk
dikonsumsi.
3. Untuk memastikan bahwa sampel yang di Analisa bebas dari cemaraan
Aflatoxin M1 yang melebhi batas maksimum yang berdasarkan SNI
2970:2015, Susu Bubuk.
1.3 Manfaat
Manfaat dari Prakerin antara lain sebagai berikut :
1. Dapat mengenali suatu pekerjaan industri dilapangan sehingga setelah selesai
dari SMK SMAK Padang dan terjun ke lapangan kerja dapat memandang suatu
pekerjaan bukan hal asing.
2. Dapat menambah keterampilan dan wawasan siswa dalam dunia usaha yang
profesional dan handal.
3. Untuk mengasah keterampilan yang telah diberikan di sekolah dan juga sesuai
dengan Visi dan Misi SMK SMAK Padang.
4. Dapat menghasilkan tenaga kerja yang berkualitas, yaitu tenaga kerja yang
memiliki tingkat pengetahuan, keterampilan, etos kerja yang sesuai dengan
tuntutan lapangan pekerjaan.
5. Dapat mengetahui kadar Aflatoxin M1 pada sampel dan dapat mengetahui
apakah sampel mengandung toxin yang tinggi sehimgga berbahaya untuk
dikonsumsi.
8
BAB II Formatted: German (Germany)
PROFIL PERUSAHAAN
2.1 Sejarah Perusahaan

TÜV NORD Group merupakan perusahaan yang bergerak dalam bidang jasa
pengujian, kalibrasi, serta sertifikasi baik sistem maupun produk. TÜV NORD Group
merupakan perusahaan asing yang berbasis di Jerman. TÜV NORD Group
(Technischer Überwachungs-Verein - technical inspection agency) group didirikan
oleh 25 negara pada tahun 1947 dan sekarang telah memiliki tenaga kerja lebih dari
10000 orang yang tersebar di 70 negara di Eropa, Asia, dan Amerika dan merupakan
Asosiasi Inspeksi Teknis terbesar di German. Yang memiliki berbagai kompetensi
teknis, konsultan, sistem sertifikasi, energi sertifikasi, inspeksi produk, dan rekayasa
sistem dengan prinsip : independen, netralitas, dan integritas.
PT. TÜV NORD Indonesia adalah badan usaha yang didirikan pada tahun 2003
memiliki kegiatan pokok di bidang jasa yang melaksanakan kegiatan usaha dalam Formatted: German (Germany)
bidang jasa sertifikasi mutu, produk, lingkungan, laboratorium uji, kalibrasi dan K3
(Kesehatan dan Keselamatan Kerja), serta berbagai jenis sertifikasi lainnya yang
dikembangkan baik secara nasional maupun Internasional.
PT. TÜV NORD Indonesia memberikan harapan bagi perkembangan dan

pengawasan berbagai jenis produk-produk olahan makanan yang kian dituntut
berkualitas dan sesuai dengan kebutuhan asupan gizi, hygiene dan keamanan. Karena
tidak sedikit perusahaan yang membutuhkan jaminan mutu produknya berdasarkan
standar nasional seperti SNI (Standar Nasional Indonesia) maupun standar keamanan
khususnya bagi pangan lainnya yang tentu saja berlaku secara nasional maupun global.
Jaminan-jaminan mutu tersebut menjadi faktor penentu produk-produk mereka,
sebelum dapat beredar dan dikonsumsi khususnya di Indonesia.
PT. TÜV NORD Indonesia telah memperoleh pengakuan Sistem Manajemen

melalui mitra kerja TÜV NORD dari Deutsche Akkreditierungsstelle (DAkkS),
Deutsche Akkreditierungssystem Prüfwesen (DAP) dan and Komite Akreditasi Commented [FJ3]: Ganti dengan : dan
Formatted: German (Germany)
Nasional (KAN).
9
Hingga kini, sedikitnya tercatat 2000 Perusahaan menjadi klienklien PT.
TÜVNORD Indonesia. Pesatnya pertumbuhan klien dan semakin ketatnya regulasi
pengawasan makanan membuat PT. TÜV NORD Indonesia untuk senantiasa
mewujudkan komitmennya dalam memberikan layanan prima bagi semua klien klien Commented [FJ4]: Bahasi indonesi, tidak perlu miring
nya, melainkan juga tak henti berupaya meningkatkan kemampuan serta performance Formatted: German (Germany)
dalam proses layanannya.
Gambar 1. Logo PT. TÜV NORD Indonesia

2.2 Struktur Organisasi Commented [FJ5]: Huruf warnanya biru ?
Gambar 2. Struktur Organisasi Laboratorium PT. TÜV NORD Indonesia
10
Struktur Organisasi Laboratorium
PT. Tüv Nord Indonesia
Jakarta,01 Maret 2016
Tri Tresnawati Robert Napitupulu
Gambar 3. Struktur Organisasi Laboratotium PT. TÜV NORD
11
2.3 Gambaran Proses Industri dan Komoditi Commented [FJ6]: Huruf warnanya biru ?
2.3.1 Proses Laboratorium Penguji Formatted: Font color: Text 1

Permohonan
Customer
Receiving sample Kaji Ulang

Administration Technical Spv/Manager/Quality
Sample Code
SPPC, COA
Lab Technician
Report LDA
Checked Approved
Technical Manager Assist Technical Manager
Administration Checked
Certificate Technical Manager
Approved
Quality Manager
Gambar 4. Diagram Alur Proses Pengujian
12
2.3.2 Proses Kalibrasi.
Permohonan Kalibrasi
Customer Insitu
Receiving sample
Administration
Sample Code Approved

SPPC, COA Technical Manager
Kalibrator
Report LDK
Checked Approved
Technical Supervisor Technical Manager
Administration
Certificate Checked
Technical Manager
Approved
Quality Manager
Gambar 5. Diagram Alur Proses Kalibrasi
13
2.3.3 Proses Sertifikasi Produk
(1)
Certification
Procedure
(2)
Application by
Client
(3)
Certification Meeting
Scheme
NO
Decision,Agree?
(4)
Quotation
NO
Decision,Agree?
YES
(5) (8)
Product Sampling Preparation
(6) (9)
Product testing in ISO 17025 Factory Inspection
Accredited lab and appointed by
Minister Of Industry NO
Passed
NO
Passed YES
YES (10)
Factory Inspection
(7) Report
Lab Test
Report
(11)
Reports
Compilation
(12)
Technical Panel
Review
NO
Passed
YES
(13)
Certificate
Issuence
Gambar 6.
Diagram Alur Proses
14
Sertifikasi Produk. Commented [FJ7]: Pindahkan keatas !
2.4 Ruang Lingkup Laboratorium

2.4.1 Kegiatan Usaha (Operasional) PT. TÜV NORD Indonesia
PT. TÜV NORD Indonesia merupakan perusahaan korporasi TÜV NORD
Group German yang bergerak dalam bidang jasa pengujian laboratorium dan sertifikasi
produk, dengan layanan yaitu:
A. Laboratorium Penguji
Standar bahan pangan berperan penting dalam memenuhi persyaratan keamanan

pangan yang beredar terutama untuk konsumsi masyrakat. Standar pangan berisikan
persyaratan produk untuk menjamin bahwa pangan yang dimaksud aman untuk
dikonsumsi, dengan demikian memberikan perlindungan terhadap kesehatan
konsumen. Penanganan masalah pangan di Indonesia difokuskan untuk melindungi
kesehatan Manusia. Hal ini dapat dilihat dengan adanya berbagai peraturan dibidang
keamanan pangan antara lain food additive, batas maksimum residu pestisida & lain-
lain.
Laboratorium penguji PT. TÜV NORD Indonesia menerapkan sistem

manajemen mutu Laboratorium ISO/IEC 17025, telah diakreditasi oleh Komite
Akreditasi Nasional dengan nomor akreditasi LP-411-IDN dan merupakan salah satu
Laboratorium independen untuk menguji produk pangan dan olahannya.
Untuk menunjang keakuratan hasil pengujian, serta komitmen layanan yang

memadai dan professional, Laboratorium PT. TÜV NORD Indonesia dilengkapi
dengan berbagai macam peralatan instrumentasi kimia seperti : Liquid
Chromatography Mass Spectroscopy (LCMS/MS), Auto System Gas Chromatography
Mass Spectrometer (GC-MS), High Performance Liquid Chromatography (HPLC) dan
Atomic Absorption Spectrophotometer (AAS), Spectrophotometer serta berbagai jenis
instrumentasi dan peralatan penunjang lainnya.
Bidang pengujian Laboratorium PT. TÜV NORD Indonesia adalah :

1. Laboratorium Kimia
2. Laboratorium Instrument
3. Laboratorium Mikrobiologi
15
B. Laboratorium Kalibrasi
Kalibrasi adalah kegiatan untuk menentukan nilai kebenaran penunjukan alat ukur
konvensional dan mengukur bahan dengan membandingkannya dengan standar
pengukuran yang dapat dilacak ke standar nasional dan/internasional.
Tujuan kalibrasi alat ukur adalah untuk menentukan deviasi dan kebenaran
konvensional nilai penunjukan alat ukur dan pengukuran hasil dijamin
ketertelusurannya terhadap standar nasional dan international. Dengan demikian
kondisi alat ukur dan bahan dapat disimpan sesuai dengan spesifikasi. Sementara
manfaat kalibrasi adalah untuk menjaga kondisi alat ukur tetap sesuai dengan
spesifikasi.
Laboratorium Kalibrasi PT. TÜV NORD Indonesia sebagai validasi lembaga

independen dari negara didukung dengan adanya Laboratorium sistem manajemen
yang telah terakreditasi oleh KAN dengan registrasi Nomor LK-109-IDN dan didukung
dengan penggunaan metode referensi standar yang dapat telusur ke standar
internasional.
Kalibrasi alat ukur, meliputi besaran Temperatur, Massa, Volumetrik, Tekanan,

Dimensi dan Instrument analitik, dengan kapasitas jumlah pelanggan 500 perusahaan.
C. Lembaga Sertifikasi Produk
Dengan Kebijakan pemerintah dalam pemberlakuan SNI marking terhadap

produk-produk yang beredar di Indonesia, Lembaga Sertifikasi Produk (LSPro) PT.
TÜV NORD Indonesia sebagai salah satu LSPro yang telah terakreditasi oleh Komite
Akreditasi Nasional (KAN) dengan nomor registasi LSPr-012-IDN memiliki peran
penting dalam menjamin penerapan SNI marking tersebut.
Untuk mendapatkan sertifikat SNI produsen atau importer harus menghubungi
LSPro (Lembaga sertifikasi Produk) untuk dilakukan factory audit dan pengambilan
sampel produk untuk dilakukan test produk di laboratorium, jika semua dinyatakan
lulus oleh LSPro (lulus sesuai standar SNI), maka produsen atau importer akan
memperoleh Sertifikat SNI dari LSPro dan berhak mencantumkan logo SNI pada
produk tersebut.
16
Ruang lingkup LSPro PT. TÜV NORD Indonesia yaitu untuk kategori
1. Lampu dan kelistrikan (battery, lampu flouresen dsb.)

2. Pupuk
3. Food (makanan, minuman, susu, minuman energi, dsb.)
4. Agro (kopi, teh, tepung terigu, dsb.)
5. Otomotif (aki, ban, oli, helm, kaca pengaman)
6. Industri (lubricant, semen, kertas, baja)
7. Safety (sepatu pengaman)
17
BAB III
PELAKSANAAN PRAKERIN
3.1 Waktu dan Tempat Pelaksanaan

Waktu pelaksanaan Praktik Kerja Industri dimulai pada tanggal 8 Juli 2019 dan
berakhir pada tanggal 8 Desember 2019. Adapun tempat pelaksanaan yaitu di bagian
Laboraturium Kimia PT. TÜV NORD Indonesia, Kawasan industri Jababeka V Jalan
Science Timur 1 Blok B3-F1 Sertajaya Cikarang Timur-Bekasi, Jawa Barat 17530.
3.2 Pengujian Yang Dilakukan
Pengujian yang dilakukan adalah “Analiasa kadar Aflatoxin M1 pada susu

bubuk (WestLand) secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) berdasarkan
acuan MU-03/41.
3.3 Tinjauan Pustaka Parameter Pengujian

3.3.1 Susuk Bubuk
Susu bubuk
Gambar 7. Susu Bubuk

Susu bubuk adalah susu bubuk berlemak, rendah lemak dan tanpa lemak
dengan atau tanpa penambahan vitamin, mineral dan bahan tambahan makanan
yang diijinkan. Susu bubuk dibedakan ada tiga kelompok yaitu a) susu bubuk
berlemak (full cream milk powder) adalah susu sapi yang telah diubah bentuknya
menjadi bubuk, b) susu bubuk rendah lemak (partly skim milk powder) adalah susu
sapi yang telah diambil sebagian lemaknya dan diubah bentuknya menjadi bubuk,
dan c) susu bubuk tanpa lemak (skim milk powder) adalah susu sapi yang telah
diambil lemaknya dan diubah menjadi bubuk (SNI 1992).
18
Gizi yang tersedia dalam susu berupa protein, glukosida, lipida, garam-
garam mineral dan vitamin sangat cocok untuk pertumbuhan dan pertambahan
jumlah sel anak- anak dan mamalia muda lainnya. Sehubungan dengan itu
mikroorganisme menggunakan susu sebagai bahan yang sangat ideal untuk
pertumbuhannya (Buckle et al. 1987). Komposisi kandungan gizi dari berbagai
jenis susu bubuk dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1 Komposisi kandungan gizi beberapa jenis susu bubuk
Air Protein Lemak Laktosa Mineral

Jenis Susu Bubuk
(%) (%) (%) (%) (%)
Susu Bubuk Full Cream 3,5 25,2 26,2 38,1 7,0
Susu Bubuk Skim 4,3 35,0 0,97 51,9 7,8
Susu Bubuk Krim 4,0 21,5 40,0 29,5 5,0
Susu Bubuk Whey 7,1 12,0 1,2 71,5 8,2
Susu bubuk Buttermilk 3,1 33,4 2,28 54,7 6,5
Sumber : Sudarwanto dan Lukman (1993).
Proses pembuatan susu bubuk umumnya dengan cara spray drying, yaitu
susu cair dimasukkan ke dalam sebuah celah yang sangat sempit, dari celah tersebut
memancarlah udara yang kering, dengan demikian hanya udara kering yang
mengenai susu cair tersebut. Dari proses spray drying ini susu cair berubah wujud
menjadi susu bubuk (Juergens et al. 2002).
Pengeringan pada proses pembuatan susu bubuk dapat menggunakan spray
dryer maupun drum dryer. Susu bubuk yang dikeringkan dengan drum dryer Formatted: German (Germany)
butirannya berbentuk pipih dengan ketebalan 8 – 10 mikron. Sifat kelarutan dalam

air kurang sempurna, karena butiran-butiran lemak akan mengapung di atas. Susu
bubuk yang dikeringkan dengan spray dryer terdiri atas partikel 10 – 15 mikron.
Sifat kelarutan dalam air sempurna, hampir sama dengan susu segar. Adanya udara
diantara butiran- butiran tersebut dapat menyebabkan timbulnya oksidasi selama
penyimpanan (Syarief dan Halid 1997).
Menurut Oliveira et al. (2000) proses pembuatan susu bubuk melalui
beberapa tahap yaitu :
1. Perlakuan pasteurisasi dengan suhu 90 oC selama 8 detik atau 108 oC
selama 2 detik.
2. Penguapan air dengan perlakuan pemanasan akan menghasilkan 48%
padatan.
3. Proses penyemprotan kering (spray drying), susu disemprot dengan
udara kering melalui lubang pada suhu 270 oC.
19
Susu bubuk merupakan sumber protein yang sangat baik dan penting, mudah
disusun kembali/rekonstruksi menjadi susu cair serta dapat menjadi bahan-
bahan unsur produk lainnya. Secara luas susu bubuk dapat digunakan untuk
produksi roti, biskuit, kue-kue, kopi krimer, sop, keju, susu coklat, es krim,
susu formula, nutrisi tambahan, rekombinan produk susu seperti susu
pasteurisasi, susu evaporasi, susu kental manis, keju lunak dan keju keras,
krem, whipping cream, yoghurt dan produk fermentasi lainnya (Pearce 2006;
Juergens et al. 2002).
Di Indonesia proses pembuatan susu bubuk oleh produsen pada
umumnya mencampur susu bubuk yang diimpor dengan perasa atau pun
tambahan bahan lainnya (emulsifier, lemak, vitamin dan lain-lainnya).
Susu Bubuk Skim

Susu bubuk skim umumnya dapat diproduksi dengan metode roller-
dried dan spray-dried. Spray-dried menghasilkan susu bubuk non instant dan
instant. Komposisi kimia susu bubuk skim adalah protein 34,0 – 37,0%,
laktosa 49,5 – 52,0%, lemak 0,6 – 1,25%, abu 8,2 – 8,6% dan kelembutan 3,0
– 4,0% (non instant) serta 3,5 – 4,5% (instant). Menurut proses pemanasan
yang digunakan dalam memproduksi susu bubuk skim diklasifikasikan
menjadi tiga, yaitu high-heat (least soluble), medium-heat, dan low-heat (most
soluble) (USDEC 2006). Komposisi mikrobiologi, fisik dan kimia susu bubuk
skim dapat dilihat pada Tabel 2.
20
Tabel 2 Komposisi mikrobiologi, fisik dan kimia susu bubuk skim
Komposisi Jumlah Maksimal yang Diijinkan

Mikrobiologi :
Standart Plate Count ≤ 50.000 cfu/g (non instant)
≤ 35.000 cfu/g (instant)
Coliform ≤ 10 cfu/g (instant)
≤ 50.000 cfu/g (lainnya)
E. coli negatif
Salmonella negatif
Listeria negatif
Staphylococcus koagulase positif negatif Formatted: German (Germany)
Karakteristik lain :
Partikel abu 7,5 – 15.0 mg (spray dried)
≤ 22,5 mg (roller dried)
Kadar keasaman Daya 0,14 – 0,15%
larut ≤ 1,0 ml (instant)
≤ 1,25 ml (spray dried)
≤ 15,0 ml (roller dried)
Warna Rasa, putih jika terkena cahaya berwarna krem
bau bersih, berbau susu
Sumber : USDEC 2006
Susu bubuk skim adalah susu bubuk yang mengandung lemak maksimum
1,5% (Sudarwanto dan Lukman 1993), sedangkan menurut Williams (1979) susu
bubuk skim adalah susu bubuk rendah lemak (low fat dry milk) yang kandungan
lemaknya antara 0,5% sampai dengan nilai maksimum 2,0%. Produksi susu bubuk
skim melalui proses pasteurisasi, evaporasi, vakum dan spray drying dan
ditambahkan vitamin A dan vitamin D untuk menambah nilai kandungan nutrisinya
(Syarief dan Halid 1997).
Susu bubuk skim dapat digunakan untuk pembuatan coklat, es krim dan Formatted: German (Germany)
pembuatan permen. Susu bubuk skim dapat larut sempurna dalam air dingin
(Syarief dan Halid 1997).
Penyimpanan dan Faktor yang Mempengaruhi Kerusakan Susu

Bubuk
Daya tahan susu bubuk sangat tergantung pada jenis bahan kemasan
(pembungkus), jumlah oksigen, kelembaban, suhu penyimpanan dan juga
21
kandungan kadar air dalam produk tersebut. Kerusakan susu bubuk akibat
pertumbuhan mikroorganisme sangat jarang terjadi karena mempunyai aktivitas air
(Aw) yang rendah (Sudarwanto dan Lukman 1993). Susu bubuk lebih tahan
terhadap bentuk kerusakan biologi, tetapi masih memungkinkan terhadap adanya
kerusakan kimia seperti oksidasi lemak dan reaksi browning nonenzimatik (Syarief
dan Halid 1997).
Kerusakan susu bubuk yang bersifat kimiawi biasanya disebabkan oleh O2,
sisa- sisa atau cemaran logam, suhu penyimpanan dan kadar air tepung susu.
Kerusakan ditunjukkan oleh adanya flavor seperti ketengikan yang terjadi karena
hidrolisis gliserida dan pelepasan asam lemak butirat dan kaproat, adanya oksidasi
asam lemak tidak jenuh, oksidasi fosfolipid, adanya bau amis karena oksidasi dan
reaksi hidrolisis. Mikroorganisme juga dapat merusak susu bubuk, antara lain
bakteri yang hidup pada susu seperti Bacillus subtilis, B. cereus, Pseudomonas
putrefaciens, P. ichthyoma, Proteus vulgaris dan Streptococcus lactis (Buckle et
al. 1987).
Susu bubuk dapat dikemas dalam kantong plastik (plastic milk powder bag)
atau kertas karton (multiwall paper) yang terdiri dari 3 lapis dengan ketebalan 5
milimeter. Lapisan luar terbuat dari bahan polypropylene (Farkye dan Obispo
2000). Susu bubuk dapat dikemas dalam plastik yang terbuat dari linen dan dilapisi
dengan kertas semen dan dikemas dengan ukuran 25 kg atau 600 kg, disimpan
dalam gas nitrogen untuk melindungi produk dari oksidasi sehingga aroma dan
kualitasnya tetap terjaga (Pearce 2006).
Susu bubuk mengandung laktosa sangat tinggi kira-kira 38% (Muchtadi dan
Sugiyono 1992). Selama pengemasan dan penyimpanan susu bubuk harus bebas
dari pengembunan karena laktosa dapat dengan cepat menyerap air yang
menyebabkan penggumpalan susu bubuk. Sebelum dikirim susu bubuk dikemas
secara vakum untuk meningkatkan daya tahannya (Juergens et al. 2002).
Susu bubuk dapat disimpan pada suhu dingin dan kering, ada ventilasi udara
dengan suhu tidak lebih dari 25 oC, kelembaban tidak kurang dari 65%, tidak terkena
sinar matahari secara langsung atau bau yang menyengat. Susu bubuk yang disimpan
pada suhu 4 oC – 20 oC memiliki daya tahan/keawetan selama satu tahun, sedangkan
pada suhu 37 oC daya tahan susu bubuk hanya selama tiga bulan (Anonim 2005).
Beberapa faktor perubahan fisik dan kimiawi dapat menurunkan daya
22
simpan susu bubuk dan nilai komersialnya, seperti terjadinya penggumpalan,
adanya oksidasi lemak, berbau karamel dan perubahan warna menjadi coklat
(Syarief dan Halid 1997). Berdasarkan hasil penelitian mengenai kondisi higiene
yang berbeda dari susu mentah yang diolah menjadi susu bubuk akan
mempengaruhi kualitas/mutu susu bubuk yang dihasilkannya. Suhu penyimpanan
dan transportasi mungkin juga dapat mempengaruhi kualitas dan sifat susu bubuk
khususnya index kelarutan dan kadar asamnya (Oliviera et al. 2000).
Karakteristik Susu
Susu yang biasa dikonsumsi adalah air susu yang dihasilkan induk hewan tanpa
penambahan apapun. Induk hewan penghasil susu biasanya hewan mamalia, terutama sapi.
Susu merupakan minuman bergizi tinggi, khususnya karena mengandung protein yang
bernilai poikmikm umumnya terdiri dari 3,3% protein, 3,8% lemak, 4,7% karbohidrat,
kalsium 0,12%, vitamin 0,58% serta kadar air yang tinggi sekitar 87,6% (Gaman dan
Sherrington 1994). Komposisi rata-rata susu sapi mengandung laktosa 4,8%, lemak 3,7%,
protein 3,4%, protein non nitrogen 0,19% dan abu 0,7% (Marshall 1993).
Susu dikenal sebagai bahan pangan sumber protein hewani yang mempunyai daya
cerna tinggi dan kaya akan zat-zat gizi seperti protein, laktosa, mineral dan vitamin (Fardiaz
1989). Sifat fisik susu mempunyai pH 6,5 – 7,5, derajat keasaman 15 – 16 oD, berat jenis 1,027
– 1,035 dan titik beku -0,50 oC – -0,52 oC (Syarief dan Halid 1997).
Susu merupakan media pertumbuhan yang baik bagi bermacam-macam bakteri,
baik patogen maupun non patogen. Jumlah mikroba pada susu segar sangat dipengaruhi
oleh berbagai faktor seperti keadaan alat pemerahan, udara kandang, kebersihan ambing
dan suhu. Susu dapat tercemar mikroba pada saat melewati saluran kelenjar susu, kelenjar
sisterna dan saluran puting (Rahman et al. 1992). Hasil pemerahan susu yang dilakukan
dengan cara aseptis dan berasal dari ternak yang sehat, susu yang dihasilkan tidak steril,
mengandung bakteri antara 100 – 1000 cfu/ml yang berasal dari ambing (Saleh 1988).
Mikroorganisme yang terkandung pada susu segar akan mempengaruhi daya tahan
dan keamanan susu olahan atau produk susu lainnya. Pada umumnya bila jumlah bakteri di
dalam susu mencapai 10 7 cfu/ml, terjadi perubahan warna, rasa dan konsistensi (Thusita et
al. 2000). Susu mentah yang tidak dipanaskan mengandung mikroorganisme yang dapat
menyebabkan kerusakan kualitas susu yaitu susu menjadi asam dan kental. Kontaminasi
dapat berasal dari hewan yang diambil susunya, selama proses pemerahan,
23
Syarat Mutu Susuk Bubuk
Tabel 3 Syarat Mutu Susu Bubuk Berdasarlan SNI 2970:2015
Persyaratan
Susu bubuk full Susu bubuk Susu

No. Kriteria uji Satuan
cream semi skim bubuk skim
1 Keadaan
1.1 Bau - normal normal normal
1.2 Rasa - normal normal normal
1.3 Warna - normal normal normal
2 Air % (b/b) maks. 5 maks. 5 maks. 5
min.26 dan lebih dari 1,5 dan Formatted: German (Germany)

3 Lemak susu 1) % (b/b) maks. 1,5
kurang dari 42 kurang dari 26
Protein (N x % (b/b)
4 2) min. 32 min. 32 min. 32
6,38)
Scorched maks. maks. disc
5 - maks. disc B
particles disc B B
Indeks ketidak maks.
6 mL maks. 1,0 maks. 1,0
larutan 1,0
Cemaran
7
logam
maks.
7.1 Timbal (Pb) 3) mg/kg maks. 0,02 maks. 0,02
0,02
maks.
7.2 Kadmium (Cd) mg/kg maks. 0,2 maks. 0,2
0,2
maks. 40,0 / maks. 40,0 / maks. 40,0 /
7.3 Timah (Sn) mg/kg
250,0 4) 250,0 4) 250,0 4)
24
Tabel 3 (Lanjutan)
Persyaratan
Susu bubuk Susu bubuk

No. Kriteria uji Satuan Susu bubuk skim
full cream semi skim
8.4 Merkuri (Hg) 3) mg/kg maks. 0,03 maks. 0,03 maks. 0,03
Cemaran arsen
9 mg/kg maks. 0,1 maks. 0,1 maks. 0,1
(As) 3)
Cemaran
10
mikroba
Angka lempeng maks. 5 x maks. 5 x
10.1 koloni/g maks. 5 x 104
total 104 104
10.2 Coliform 5) APM/g maks. 10 maks. 10 maks. 10
10.3 Salmonella sp. - negatif/ 25 g negatif/ 25 g negatif/ 25 g
Staphylococcus maks. 1 x maks. 1 x

10.4 koloni/g maks. 1 x 102
aureus 102 102
11 Aflatoksin M1 µg/kg maks. 5 maks. 5 maks. 5
CATATAN: 1) Dihitung sebagai total lemak
2) Dihitung dalam padatan susu tanpa lemak Formatted: German (Germany)
3) Dihitung terhadap produk yang siap dikonsumsi
4) Kadar
Sn susu bubuk yang dikemas dalam kaleng
5) Jika pengujian Enterobacteriaceae menunjukkan hasil negatif per 2x1 g maka tidak
diperlukan pengujian koliform

Sumber :SNI 2970:2015
3.3.2 Aflatoxin M1
Mikotoksin merupakan metabolit sekunder dari beberapa genus kapang
sebagai hasil dari pertumbuhan kapang (Sweeney danDobson 1998). Mikotoksin
dalam bahan pangan dapat menyebabkan gangguan kesehatan bagi manusia yang
disebut dengan mikotoksikosis (Syarief et al. 2003). Mikotoksikosis terjadi apabila
toksin terkonsumsi oleh manusia dalam jumlah yang tidak dapat ditoleransi
oleh tubuh.Mikotoksin telah dilaporkan bersifat karsinogenik, teratoganik,
hepatotoksik, neurotoksik,dan nefrotoksik (Sengun etal. 2008). Mikotoksin penting Formatted: German (Germany)
yang dapat menyebabkan gangguan kesehatan bagi manusia antara lain aflatoksin,
okhratoksin, patulin, zearalenon, dan trikotesen (Syarief et al. 2003).
25
Mikotoksin dapat ditemukan dalam pangan asal hewanakibatkontaminasi
langsung dan kontaminasi tidak langsung (carry-over dari pakan). Kontaminasi
langsung terjadi akibat pertumbuhan kapang pada pangan karena
cemaran.Kontaminasi tidak langsung terjadi akibat hewan mengonsumsipakan
yang tercemar mikotoksindan mengekskresikan residu mikotoksinke dalam produk
hewan seperi daging, telur, dan susu (Sengun et al. 2008; Prandini et al. 2009).
Aflatoksin merupakan mikotoksin yang dihasilkan oleh kapang
Aspergillus flavus dan A. parasiticus (IARC 2002).
Gambar 8. Kapang Aspergillus flavus

Kapang tersebut dapat mencemari bahan pakan seperti jagung, bungkil
kedelai,dan silase,danakan menghasilkan aflatoksin. Aflatoksin yang umum ditemui
dalam pakan ternak ialah aflatoksin B1, B2, G1,dan G2. Mamalia laktasi yang
mengonsumsi pakan yang terkontaminasi aflatoksin B1 (AFB1) akan
mengekskresikan metabolit hidroksilasi berupa aflatoksin M1 (AFM1) ke dalam
susu yang dihasilkan. Sapi laktasi yang mengonsumsi 40 μg AFB1 akan
menghasilkan susu yang mengandung AFM1 dengan konsentrasi 0.05 μg/kg dalam
waktu 2-3 hari setelah konsumsi AFB1 (Prandini et al. 2009). Tingkat carry-over
AFM1 bervariasi bergantung pada konsentarsi AFB1 dalam pakan. Penelitian
Bantaokul dan Ruangwises (2010) menyatakan tingkat carry-over AFB1 ke dalam
susu sapi selama periode laktasi ialah 2.35±0.7%. Tingkat carry-over AFB1 dalam
pakan menjadi AFM1 pada susu sapi peranakan Friesian Holsteindi Yogyakartasebesar
0.1%, nilai ini lebih rendah dibandingkan dengan tingkat carry-over pada sapi
perah di daerah sub-tropis (Sumantri et al. 2012).
26
Aflatoksin yang banyak ditemukan pada bahan pakan seperti susu bubuk
dan bersifat toksik ialah AFB1(Sweeney dan Dobson 1998). Handajani dan
Setyaningsih (2006) melaporkan, aflatoksin B1 merupakan salah satu senyawa yang
dapat menyebabkan terjadinya kanker pada manusia.
Di Indonesia, aflatoksin merupakan mikotoksin yang sering ditemukan pada
produk-produk pertanian dan hasil olahan. Selain itu, residu aflatoksin dan
metabolitnya juga ditemukan pada produk peternak seperti susu, telur, dan daging
ayam. Selain itu, jagung, kacang tanah dan biji kapuk merupakan komoditi yang
beresiko tinggi terkontaminasi aflatoksin (Rachmawati et al., 2004).
Kerugian akibat pencemaran kapang dan aflatoksin merupakan masalah yang
utama karena pangan dan pakan banyak dirusak secara fisik dan kimiawi. Kerusakan
fisik terjadi oleh peningkatan pertumbuhan dan populasi kapang sehingga warna,
bentuk, dan bau bahan tersebut berubah, sedangkan kerusakan kimiawi terjadi akibat
adanya produksi aflatoksin dari kapang tersebut (Rachmawati et al., 2004).
Toksin ini pertama kali diketahui berasal dari kapang Aspergillus flavus yang
berhasil diisolasi pada tahun 1960. A. flavus sebagai penghasil utama aflatoksin
umumnya hanya memproduksi aflatoksin B1 dan B2 (AFB1 dan AFB2) Sedangkan A.
parasiticus memproduksi AFB1, AFB2, AFG1, dan AFG2. A. flavus ini tumbuh pada
kisaran suhu yang jauh, yaitu berkisar dari 10-120C sampai 42-430C dengan suhu
optimum 280-330C (Sudibyo, 2003). Sedangkan kisaran suhu minimal untuk
pertumbuhan A. parasiticus adalah 6-8oC, maksimal pada suhu 44-46oC, dan optimal
pada suhu 25-35oC (Suarni, 2008).
Aflatoksin bersifat stabil pada pemanasan. Beberapa hasil penelitian
menunjukkan bahwa kadar aflatoksin tidak akan hilang atau berkurang dengan
pemasakan atau pemanasan (Midio et al., 2001). Pada suhu pemanasan normal (100ºC)
aflatoksin belum terurai. Titik lebur aflatoksin relatif tinggi yaitu diatas 250ºC . Oleh
karena itu, bahan pangan yang terkontaminasi aflatoksin berbahaya untuk dikonsumsi
meskipun sudah diolah dengan pemanasan atau pemasakan.
Aflatoksin merupakan hepato-karsinogen yang dapat mengakibatkan

kerusakan hati dan apabila dikonsumsi dalam jumlahkecil secara terus menerus dapat
mengkibatkan kanker hati (Syarief et al. 2003).International Agency for Research
on Cancer(IARC2002) telah mengklasifikasikan mikotoksin sebagai salah satu
27
penyebab kanker pada manusia, karsinogenitas AFB1dan AFM1diklasifikasikan ke
dalam grup 1 (carcinogenic to humans).
Aflatoksin M1 bersifat sitotoksik pada beberapa spesies, dengan tingkat
sitotoksik yang serupa dengan AFB1 (Prandini et al. 2009). Penelitian pada tikus
Fischer jantan yang diberi pakan AFM1 50 μg/kg mulai umur 7 minggu sampai
21 minggu menunjukkan 2 dari 37 tikus terdeteksi hepatoseluler karsinoma dan 6 dari
37 tikus terdeteksi neoplastic nodulespada umur 19-21 bulan, sedangkan 19 dari 20
tikus yang beri pakan AFB1 50 μg/kg terdeteksi hepatoseluler karsinoma pada umur
19 bulan (Cullen et al. 1987)
Gambar 9. Struktur kimia Aflatoxin
3.3.3 Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)

Kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) merupakan tipe kromatografi elusi
yang paling serbaguna dan digunakan secara luas. Teknik ini digunakan oleh para
kimiawan untuk memisahkan dan menentukan spesi-spesi dalam berbagai bahan atau
senyawa seperti senyawa organik, anorganik, maupun material biologis. Pada
kromatografi cair, fasa gerak merupakan pelarut cair berisi sampel yang berupa
campuran dari bahan-bahan terlarut. Jenis-jenis kromatografi cair kinerja tinggi
(KCKT) biasanya dikelompokkan oleh mekanisme pemisahannya ataupun jenis fasa
diamnya. Pengelompokkan tersebut diantaranya:
a) Partisi atau Kromatografi Cair-Cair
b) Adsorpsi atau kromatografi Padat-Cair
c) Penukar Ion atau Kromatografi Ion
d) Size-Exclusion Chromatography (Kromatografi Eksklusi Ukuran)
28
e) Kromatografi Afinitas
f) Kromatografi Kiral
Ada dua cara pengelusian dalam kromatografi cair kinerja tinggi, yaitu elusi
isokratis dan elusi gradien. Elusi yang menggunakan pelarut tunggal dengan komposisi
tetap atau campuran beberapa pelarut ynag komposisinya dibuat tetap disebut elusi
isokratik. Sedangkan pada elusi gradien, digunakan dua (atau kadang lebih) pelarut
dalam suatu sistem yang memiliki perbedaan kepolaran yang besar / signifikan.
Perbandingan dari kedua atau lebih pelarut ini divariasikan melalui cara yang telah
ditentukan dengan program saat pemisahan berlangsung. Pengubahan perbandingan ini
kadang dilakukan secara terus-menerus dan kadang secara bertahap. Elusi gradien
seringkali meningkatkan efisiensi pemisahan, seperti halnya pemrograman suhu pada
GC. Instrumen HPLC modern biasanya dilengkapi dengan katup yan berpotongan
sehingga dapat memasukkan cairan dari dua atau lebih reservoir dengan perbandingan
yang dapat divariasikan secara terus menerus. (Skoog, 2004: 973-977)
Fasa gerak
Di dalam kromatografi cair komposisi dari solven atau rasa gerak adalah salah
satu dari variabel yang mempengaruhi pemisahan. Terdapat variasi yang sangat luas
pada solven yang digunakan untuk KCKT/HPLC, tetapi ada beberapa sifat umum yang
sangat disukai, yaitu rasa gerak harus :
1. Murni, tidak terdapat kontaminan
2. Tdak bereaksi dengan wadah (packing)
3. Sesuai dengan defektor
4. Melarutkan sampel
5. Memiliki viskositas rendah
6. Bila diperlukan, memudahkan "sample recovery"
7. Diperdagangan dapat diperoleh dengan harga murah (reasonable price)
Umumnya, semua solven yang sudah digunakan langsung dibuang karena
prosedur pemumiannya kembali sangat membosankan dan mahal biayanya. Dari
semua persyaratan di atas, persyaratan 1) s/d 4) merupakan yang sangat penting.
Menghilangkan gas (gelembung udara) dari solven, terutama untuk
KCKT/HPLC yang menggunakan pompa bolak balik(reciprocating pump) sangat
diperlukan terutama bila detektor tidak tahan kinerja sampai 100 psi. Udara yang
terlarut yang tidak dikeluarkan akan menyebabkan gangguan yang besar di dalam
29
detektor sehingga data yang diperoleh tidak dapat digunakan (the data may be useless).
Menghilangkan gas (degassing) juga sangat baik bila menggunakan kolom yang sangat
sensitif terhadap udara (contoh :kolom berikatan dengan NH2). (Effendy De Lux Putra,
2004: 7-8)
Komponen-komponen alat dalam HPLC diantaranya ialah:
• Reservoir (wadah pelarut / cairan)
• Pompa
• Sistem injeksi sampel
• Kolom, terdiri dari
1. Kolom Analitik / Kolom Utama
2. Kolom Guard
3. Termostat
• Detektor
• Komputer (Pengolah data)
Gambar 10. Komponen alat KCKT / HPLC
Reservoir merupakan wadah yang menampung cairan-cairan yang akan

digunakan dalam pemisahan. Cairan-cairan tersebut berupa pelarut. Masing-masing
reservoir dihubungkan kepada katup berpotongan, dimana katup ini berfungsi untuk
mengatur cairan-cairan yang masuk / dipompa kedalam kolom.
30
Pelarut dimasukkan ke kolom melalui pipa atau selang menggunakan pompa.
Pelarut dipompa dari reservoir sehingga dapat membawa sampel menuju kolom. Pompa
yang digunkan dalam HPLC hatus memenuhi kriteria sebagai berikut:
3.1 Harus memiliki aliran terkontrol yang ‘reproducible’
3.2 Harus menghasilkan aliran yang ‘pulse-free’ (bebas pulsa, tidak
menghasilkan gelembung)
3.3 Hold-up volume (volume tampungan) kecil (R.P. Budhiraja, 2004: 172)
Karena HPLC menggunakan tekanan yang cukup tinggi, mustahil sampel dapat
diinjeksikan dengan cara yang sama seperti pada kromatografi gas. Maka dari itu,
sampel dimasukkan melalui loop injector. Sampling loop dapat diganti dan tersedia
pada volume 0,5 mikroliter sampai 2 mililiter. Pada posisi terisi, sampling loop
terisolasi dari fasa gerak dan terbuka terhadap atmosfer. Sebuah syringe dengan
kapasitas beberapa kali dari loop sampling digunakan untuk menempatkan sampel
kedalam loop.
Kolom yang paling umum digunakan untuk HPLC dibuat dari stainless steel
dengan diameter internal antara 2,1 mm dan 4,6 mm dengan panjang mulai dari sekitar
30 mm sampai 300 mm. kolom-kolom ini dipak dengan 3-10 mikrometer partikel-
partikel silika berpori yang dapat berbentuk irregular atau spherical. Kolom ini
berfungsi sebagai tempat pemisahan berlangsung.
Terdapat dua masalah yang menyebabkan kolom analitik berkurang masa
hidupnya. Pertama, zat terlarut yang mengikat fasa diam secara irreversibel
menurunkan performa kolom karena fasa diam yang tersedia menjadi berkurang.
Kedua, material partikulat yang diinjeksikan bersama sampel dapat menyumbat kolom
analitik. Maka dari itu, kolom guard ditempatkan sebelum kolom analitik untuk
meminimalisasi masalah-masalah tersebut. Kolom guard biasanya berisi material
partikulat packing dan fasa diam yang sama dengan kolom analitik, namun jauh lebih
pendek dan murah. Panjangnya 7,5 mm dan harganya satu persepuluh dari kolom
analitik. Hal ini dikarenakan kolom guard digunakan sebagai “tumbal” dan diganti
secara berkala.
Selanjutnya sampel yang telah terpisahkan dibawa menuju detektor. Detektor
ini berfungsi untuk memberikan sinyal sehingga data dapat diolah dan ditampilkan.
Detektor-detektor yang dapat digunakan dalam HPLC diantaranya:
• Detektor Spektroskopi (adsorpsi sinar UV)
• Detektor elektrokimia
31
Selain itu, ada juga detektor yang menggunakan pengukuran pada perubahan
index refraksi dari fasa gerak, namun kurang berguna untuk elusi gradien kecuali
komponen-komponen fasa gerak memiliki index refraksi yang mirip.
(Harvey David, 2000: 578-585)
Keuntungan KCKT/HPLC
KCKT dapat dipandang sebagai pelengkap Kromatografi Gas (KG). Dalam
banyak hal kedua teknik ini dapat digunakan untuk memperoleh efek pemisahan yang
sama membaiknya. Bila derivatisasi diperlukan pada KG, namun pada KCKT zat-zat
yang tidak diderivatisasi dapat dianalisis. Untuk zat-zat yang labil pada pemanasan
atau tidak menguap, KCKT adalah pilihan utama. Namun demikian bukan berarti
KCKT menggantikan KG, tetapi akan memainkan peranan yang lebih besar bagi para
analis laboratorium. Derivatisasi juga menjadi populer pada KCKT karena teknik ini
dapat digunakan untuk menambah sensitivitas detektor UV Visibel yang umumnya
digunakan.
KCKT menawarkan beberapa keuntungan dibanding dengan kromatografi cair
klasik, antara lain:
Cepat: Waktu analisis umumnya kurang dari1 jam. Banyak analisis yang dapat
diselesaikan sekitar 15-30 menit. Untuk analisis yang tidak rumit (uncomplicated),
waktu analisis kurang dari 5 menit bisa dicapai.
Resolusi : Berbeda dengan KG, Kromatografi Cair mempunyai dua rasa dimana
interaksi selektif dapat terjadi. Pada KG, gas yang mengalir sedikit berinteraksi dengan
zat padat; pemisahan terutama dicapai hanya dengan fasa diam. Kemampuan zat padat
berinteraksi secara selektif dengan fasa diam dan fasa gerak pada KCKT memberikan
parameter tambahan untuk mencapai pemisahan yang diinginkan.
Sensitivitas detektor: Detektor absorbsi UV yang biasa digunakan dalam KCKT dapat
mendeteksi kadar dalam jumlah nanogram (10-9 gram) dari bermacam- macam zat.
Detektor-detektor Fluoresensi dan Elektrokimia dapat mendeteksi jumlah sampai
picogram (10-12 gram). Detektor-detektor seperti Spektrofotometer Massa, Indeks
Refraksi, Radiometri, dll dapat juga digunakan dalam KCKT.
32
Kolom yang dapat digunakan kembali: Berbeda dengan kolom kromatografi
klasik, kolom KCKT dapat digunakan kembali (reusable) . Banyak analisis yang bisa
dilakukan dengan kolom yang sma sebelum darijenis sampel yang diinjeksi, kebersihan
dari solven dan jenis solven yang digunakan Ideal untuk zat bermolekul besar dan
berionik :zat – zat yang tidak bisa dianalisis dengan KG karena volatilitas
rendah ,biasanya diderivatisasi untuk menganalisi spsesies ionik. KCKT dengan tipe
eksklusi dan penukar ion ideal sekali untuk mengalissis zat –zat tersebut.
Mudah rekoveri sampel: Umumnya setektor yang digunakan dalam KCKT
tidak menyebabkan destruktif(kerusakan) pada komponen sampel yang diperiksa, oleh
karena itu komponen sampel tersebut dapat dengan mudah dikumpulkan setelah
melewati detector.Solvennya dapat dihilangkan dengan menguapkan ksecuali untuk
kromatografi penukarion memerlukan prosedur khusus.
(Effendy De Lux Putra, 2004: 8)
3.4 Metodologi pengujian
3.4.1 Prinsip pengujian

Lemak dalam sampel dipisahkan dengan cara disentrifuge, skim milk hasil
pemisahan selanjutnya dianalisis untuk penentuan Aflatoxin M1. Skim milk
diaplikasikan ke dalam immuno affinity column Aflatoxin M1 yang dicoating dengan
antibody yang spesifik untuk aflatoxin M1(protein target), dalam hal ini Aflatoxin M1
terikat oleh antibody. Selanjutnya dilakukan pencucian dengan air untuk
menghilangkan pengotor dalam column (selain protein target). Kemudian aflatoxin
M1 yang terikat oleh antobodi didilute menggunakan campuran acetonitrile :
methanol. Selanjutnya aflatoxin M1 yang terikat dapat diukur secara propoersional
menggunakan HPLC (Instruction Manual VICAM Afla M1).
3.4.2 Alat dan Bahan

a. Alat Percobaan
 Neraca Anallitik
 Labu Ukur 250 ml
 Beaker Glass 100 ml
 Pipet Volumetri 10 ml
33
 Erlenmeyer 250 ml
 Corong
 Batang Pengaduk
 Micropipet (10-100 µl dan 100-1000 µl)
 Botol Vial 1,5 ml
 Vortex
 Sentrifuge
 Vakum Manifold
 Ultrasonic Hmogenizer
 Waterbath
 Tabung sentrifuge
 Spatula
 Hot Place
 Penangas Air
 HPLC Agillent seri 1200
 Binary pump 61312 B
 Auto sampler 61329 B
 Coloumn pump 61316 A
 Detektor FLD 61321 B
 Kolom C18
b. Bahan Percobaan
 Sampel Susu Bubuk
 Aquabides
 Methanol
 Acetonitrile
 Aquabides : Acetonitri (70 : 30)
 Methanol : Acetonitril (3 : 2)
 Standar Aflatoxin M1
 Immuno Affinity Column
 Kertas Saring Whatman No. 41
34
3.4.3 Prosedur Kerja Analisa
a. Pembuatan Fasa Gerak

 Menyiapkan alat dan bahan.
 Memasukkan aquabides dan asetonitril sesuai dengan perbandingan ke
dalam labu ukur 1 Liter.
 Homogenkan.
 Sonikasi selama 10 menit dan masukkan ke dalam botol penampung
fasa gerak.
b. Pembuatan Larutan Deret Standar Aflatoxin M1 dari larutan stok 10 ppb

dalam Aquabides : Asetonitril ( 70 : 30 )
 Menghitung volume deret standar dengan kurva kalibrasi 0.1, 0.5, 1, 2,
dan 5 µg/ml.
 Memipet larutan stok sesuai dengan volume konsentrasi yang telah
ditentukan sebagai berikut :
Conc. (ppb) Volume Larutan Standar Volume Akhir
10 ppb yang di pipet (ml) (ml)
0.1 0.1 10
0.5 0.5 10
1.00 1 10
2.00 2 10
5.00 5 10
 Menterakan dengan fasa gerak ( Aquabides : Asetonitril 70 : 30 )

 Homogenkan.
 Memindahkan larutan deret standar ke dalam botol vial gelap. Formatted: German (Germany)
c. Pereparasi sampel
 Timbang ±10 g contoh larutkan dengan air panas (T=30-40°C)
memasukkan ke dalam lanu takar 250 ml dan tera dengan aquabides.
 Dipipet larutan sebanyak 50 ml ke dalam tabung sentrifuge.
35
 Disentrifuge dengan kecepatan 4000 rpm selama 20 menit.
 Disaring untuk memisahkan fat dan skim milk.
 Kemudian skim milk dilewwatkan ke dalam immune affinity column
Aflatoxin M1, kecepatan 1-2 tetes/detik
 Cuci colum dengan aquabides sebanyak 10 ml
 Dilute colum dengan campuran acetonitrile : methanol (3:2) sebanyak
1,25 ml dan ditampung hasil dilusi ke dalam tabung reaksi, kecepatan
1-2 tetes/detik.
 Dilute colum dengan aquades sebanyak 1,25 ml dan ditampung hasil
dilusi ke dalam tabung reaksi, ekstrak ke vial untuk di Analisa ke
HPLC.
d. Cara Kerja
 Siapkan instrument dengan kolom yang cocok
Kondisi HPLC
Kolom : C18 15 nm × 4,6 nm
Suhu kolom : 30°C
Mobil fase : 1.0 µl
Detektor : Detektor FLD
Garm : 18
Eksitasi dan emisi : 365 nm dan 436 nm
Volume injeksi : 60 µl
 Mengaktifkan HPLC Agilent

 Mengaktifkan Ups
 Menyalakan Komputer
 Menyalakan HPLC dengan menekan tombol power pada masing –
masing modul ( degesser, pompa, detektor, auto sampler ).
 Buka aplikasi “openlab control” pada computer.
 Pilih detektor yang akan digunakan.
 Klik “launch online”
 Lakukan pemrograman alat dengan computer. Ikuti langkahnya sesuai
dengan instruksi computer
36
 Pilih mode yang akan digunakan sesuai dengan parameter kondisi
instrument.
 Setelah injeksi standar amati kurva kalibrasi yang di peroleh. Bila r
dari Regresi > 0,995 lanjutkan Analisa dengan injeksi contoh.
37
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.2 Data Pengamatan

 Bobot sampel susu bubuk
Bobot Kode Sampel ( duplo )
Sampel
(gram) Sampel A Sampel B
10, 0580 10,0511
 Hasil Pengamatan Sampel Susu Bubuk

No Kode Sampel Waktu Retesnsi Luas Area
( min )
1 Sampel A -4 -
2 Sampel B -4 -
 Deret standar Aflatoxin M1

Konsentrasi (ppb) Waktu Retensi Luas Area
(min)
0,1 4.038 9.18196
0,5 4.002 35.07531
1 3.989 65.01603
2 3.985 131.67227
5 3.989 314.52786
38
Grafik deret standar Afkatoxin M1
 Hasil Kadar Aflatoxin M1 pada Sampel Susu Bubuk dengan HPLC

Agilent
Sample Extraction Dilution Result Average

Conc.
Sample Sample Weight Volume Factor Result
R=C(V/W)*(2.5/50)*DF RPD
Code Name
(C),
(W), g (V), ml (DF) (R), ppb ppb
ppb
Sampel 1 10.0080 250 0.0000 1 0.00
Whole Milk
0.00 -#DIV/0!Commented [FJ8]: Ganti dengan : -
Powder
Sampel 2 10.0511 250 0.0000 1 0.00
39
4.2 Pembahasan
Aflatoxin M1 adalah senyawa kimia dari kelas aflatoksin, sekelompok
mikotoksin yang diproduksi oleh tiga spesies Aspergillus - Aspergillus
flavus,Aspergillus parasiticus, dan Aspergillus nomius yang langka - yang
mencemari tanaman dan produk tanaman. Aspergillus flavus hanya menghasilkan
aflatoksin tipe-B. Aflatoksin M1 adalah metabolit terhidroksilasi dari aflatoksin
B1 dan dapat ditemukan dalam susu atau produk susu yang diperoleh dari ternak
yang telah mencerna makanan yang terkontaminasi. Potensi karsinogenik dari
aflatoksin M1 dalam spesies sensitif adalah sekitar satu urutan besarnya kurang
dari aflatoksin B1. Aflatoksin M1 biasanya dianggap sebagai produk sampingan
detoksikasi aflatoksin B1. Sampel yang digunakan pada pengujian kali ini adalah
susu bubuk yaitu produk olahan dari susu sapi yaitu susu bubuk
Susu bubuk adalah susu bubuk berlemak, rendah lemak dan tanpa lemak
dengan atau tanpa penambahan vitamin, mineral dan bahan tambahan makanan yang
diizinkan. Alasan memilih sampel susu bubuk adalah untuk mengetahui kadar
aflatoxin M1 pada susu bubuk, dan untuk memastikan bahwa kadar aflatoxin M1
pada sampel tersebut tidak melebhihi batas maximum. Metoda yang digunnakan
pada pengujian ini yaitu Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT).
Prinsip dari analisa menggunakan KCKT adalah pemisahan komponen dari

sampel karena perbedaan distribusi analit diantara dua fase yaitu fase diam dan
fase gerak. Pemisahan ini berdasarkan kepolaran dari sampel dengan fase diam
yang digunakan. Pemisahan terjadi didalam kolom dengan aliran eluen yng
bertekanan tinggi. Komponen yang daya ikatnya lemah dengan fase diam akan
keluar terlebih dahulu dan sebaliknya, inilah yang mendasari analisa secara
KCKT. Fasa gerak yang digunakan berupa campuran ( H₂2O : C₂2H₃3N ) dengan Commented [FJ9]: Angka menggunakan subscript
perbandingan 70 : 30. Sedangakan fase diam yang digunakan adalah kolom C-18 Commented [y10R9]: Maksudnya angkanya dibuat kecil
seperti ini mas?
yang bersifat non polar. Oleh karena itu pengujian kali ini menggunakan metoda
HPLC fase terbalik. Karena fase gerak yang digunakan bersifat polar sedangkan
fase diam yang digunakan bersifat non polar, dengan system elusi isokratik artinya
selama analisis digunakan fase gerak dengan perbandingan pelarut yang tetap.
Secara umum prinsip pengujian aflatoxin M1 yaitu, memisahkan lemak

dalam sampel dengan cara disentrifuge, skim milk hasil pemisahan selanjutnya
40
dianalisa untuk penentuan aflatoxin M1. Skim milk diaplikasikan ke dalam
immuno affinity column Aflatoxin M1, dan setelah itu dialirkan beberapa
campuran. Kemudian diukur secara proporsional dengan HPLC.
Pada percobaan ini, analisa kadar aflatoksin M1 dilakukan secara

kuantitatif dengan menggunakan metode KCKT. Analit diinjek ke instrumen
HPLC Agillent serie 1200 auto sampler dengan detektor FLD eksitasi 365 nm
emisi 435nm. Fase gerak akan membawa analit kedalam kolom dengan tekanan
tinggi. Sampel yang terbawa masuk kedalam fase diam yang kemudian terjadi
pemisahan. Pemisahan komponen terjadi karena daya afinitas analit dengan fase
gerak. Metode yang digunakan adalah fase terbalik dimana fase gerak bersifat
polar dan fase diam bersifat non polar. Komponen yang bersifat polar akan keluar
terlebih dahulu karena daya ikat yang rendah dengan fase diam dan terbalik dengan
komponen yang bersifat non polar yang berikatan kuat sehingga keluar dan menuju
detektor lebih lama.
Analisa dilakukan secara duplo. analisa yang dilakukan secara duplo (

pengukuran terulang pada contoh yang sama ) bertujuan untuk meningkatkan
ketepatan percobaan. Jika suatu pengukuran dilakukan berulangkali sedangkan
variasinya kecil maka dapat dikatakan bahwa kecermatan pengukuran tinggi.
Hasil percobaan yang dilakukan secara duplo tidak ditemukan atau tidak
terdeteksi kadar Aflatoxin M1 pada sampel yang dianalisa. Dengan data sebagai
berikut.
No Kode Kadar Aflatoxin M1

Sampel yang didapat (ppb)
1 Sampel A 0
2 Sampel B 0
Dari hasil kedua sampel tersebut yang tidak terdeteksi Aflatoxin M1

menandakan bahwa sampel yang dianalisa dapat digolongkan aman dan bebas dari
toxin, Aflatoxin M1.
Batas maksimum kadar Aflatoxin M1 berdasarkan SNI 2970 : 2015 yaitu

sebesar 5 µg/kg (ppb). Namun kadar yang didapat dari sampel yaitu 0 ppb ( Not
41
Detected ) Aflatoxin M1. Hal ini dapat terjadi karena kemungkinan kadar aflatoxin
M1 yang terdapat pada produk olahan susu sapi sangatlah kecil sekali. Sebisa
mungkin Aflatoxin M1 ini tidak boleh ada pada produk olahan, dikarenakan
Aflatoxin M1 memiliki siafat Toxin atau bracun dalam kadar yang tinngi dan dapat
menyebabkan penyakit serius seperti Kanker hati jika mengkonsumsi dengan
kadar tinggi sebesar 50 ppb.
Namun menurut ulasan baru-baru ini yang dilakukan oleh Institut Nasional
Belanda untuk Kesehatan Masyarakat dan Lingkungan (RIVM) atas nama
Organisasi Pangan dan Pertanian (FAO), sekitar 60 negara telah menetapkan
Batasan spesifik untuk Aflatoxin M1. Negara – negara Uni Eropa umumnya
menerapkan tingkat maksimum 0.05 µg/kg aflatoxin M1 dalam susu, yang juga
merupakan batas MERCOSUR yang diharmonisasikan yang diterapkan di
Amerika Latin. Batas 0,5 µg/kg untuk aflatoxin M1. Dengan demikian, tingkat
maksimum aflatoxin M1 yang diizinkan dalam susu di UE adalah yang terendah
di dunia, dan didasarkan pada prinsip ALARA (As Low As Reasonably
Achievable). Mempertimbangkan carry-over ke dalam susu dan dampak buruk
yang ditimbulkan pada kesehatan hewan, sekitar 45 negara telah menetapkan
tingkat spesifik untuk aflatoxin B1 dalam pakan untuk hewan susu. Untuk
mendukun kepatuhan dengan tingkat maksimum dalam susu yang dimaksudkan
untuk konsumsi manusia, tingkat maksimum yang ketat juga ditetapkan di UE
untuk bahan makanan yang mungkin di konsumsi oleh sapi perah. Batas 0,005
mg/kg pakan untuk sapi perah diterapkan di negara-negara UE dan negara-negara
Uni Eropa, tetapi hanya dibeberapa negara di luar Eropa. Level ini di bawah level
tidak-efek pada hewan target.
42
BAB V
PENUTUP
5.1 Kesimpulan
Dari percobaan penetapan kadar aflatoksin M1 pada sampel susu bubuk

yang telah dilaksanakan dengan metoda kromatografi cair kinerja tinggi,
didapatkan rata – rata kadar sampel yang dilakukan secara duplo 0 ppb atau tidak
teedeteksi ( not detected ).
Berdasarkan SNI 2970:2015 susu bubuk, makasa sampel yang dianalisa

telah memenuhi standar mutu yang telah ditetapkan. Mengingat maksimum kadar
aflatoksin M1 pada susu bubuk sebesar 5 ppb. Sehingga dapat disimpulkan bahwa
produk yang dianalisa terbebas dari cemaran aflatoxin M1. Commented [FJ11]: Jadikan sama sisi !
5.2 Saran
Penulis berharap supaya analisis terhadap setiap parameter uji HPLC dapat
dilakukan secara lebih baik lagi, dan sesuai dengan metoda uji yang sudah ditetapkan.
Beberapa kegiatan yang telah dilakukan secara rutin harus tetap dipertahankan untuk
selalu dijalankan di dalam Laboratorium seperti, proses audit yang bertujuan untuk
memperoleh bukti audit dan mengevaluasi secara objektif untuk menentukan sejauh
mana kriteria audit telah terpenuhi, validasi metode yang bertujuan untuk memastikan
dan mengkonfirmasi bahwa metode analisis tersebut telah sesuai untuk peruntukannya,
kalibrasi peralatan yang merupakan proses dimana dilakukan untuk mengkonfirmasi
alat ukur sesuai dengan standard yang telah ditetapkan.
Penulis juga berharap agar DI PT. TÜV NORD Indonesia untuk tetap menjalin
kerja sama dengan SMK – SMAK Padang mengingat betapa banyak ilmu yang dapat
dipelajari bagi pelajar – pelajar SMK – SMAK Padang selama prakerin di PT. TÜV
NORD.
43
DAFTAR PUSTAKA
Al-Sawaf SD, Abdullah OA, Sheet OH. Use of enzyme linked

immunosorbent assay for detection of aflatoxin M1 in milk powder. 2012. Iraqi J Vet
Sci. 26(1):39-42.
[AOAC]Association of Analytical Communities. 2000. Aflatoxin M1 and M2
in fluid milk liquid chromatographic method 49.3.06. Di dalam:AOAC Official
Method 982. Edke-26.
Bantaokul C, Ruangwises S. 2010. Carry-over of aflatoxin M1 into cow
milk during early lactation period. Proc 9thCU Vet Sci An Con. 128.
Behfar A, Khorasgani ZN, Alemzadeh Z, Goundarzi M, Ebrahimi R,
Tarhani N. 2012. Determination of aflatoxin M1 levels in produced pasteurized
milk in Ahvaz City by using HPLC. Jundishapur J Nat Pharm Prod. 7(2):80-84.
doi:10.5812/jjpharma.4707.
Celik TH, Sarimehmetoglu B, Kuplulu O. 2005. Aflatoxin M1
contamination in pasteurised milk. Vet Arhiv. 75(1):57-65.
Cullen JM, Ruebner BH, Hsieh LS, Hyde DM, Hsieh DP. 1987.
Carcinogenicity of dietary aflatoxin M1 in male fischer rats compared to aflatoksin
B1. Cancer Res. 47:1913-1917. Commented [FJ12]: Sama sisi !
44
Lampiran 1
Diagram alir analisa aflatoksin M1 dengn metode KCKT
Menimbang sampel sebanyak 10 gram ke dalam

beaker glass 100 ml
Melarutkan sampel dengan aquabides panas

sambal diaduk
Pindahkan ke dalam labu ukur 250 ml, lalu Formatted: German (Germany)
diterakan
Menghomogenkan Sampel
Sentrifus dengan 5000 rpm selama 15 menit
Saring dengan whatman 41 ke dalam Erlenmeyer Formatted: German (Germany)

250 ml
Aktivasi SPE pada immuno affinity column
Alirkan 5 ml sampel ke immuno affinity column
Dicuci dengan 10 ml aquabides
Elusi dengan 1,25 ml Acetonitril : Metanol 3:2

dan 1,25 ml aquabides yang telah ditampung
Vortex selama 30 detik
Masukkan ke botol vial
Injek dengan HPLC dengan detektor fluoresense
45
Lampiran 2
Kromatogram Blanko Aflatoxin M1
=====================================================================
Acq. Operator : SYSTEM Seq. Line : 1
Acq. Instrument : LC FLD Location : Vial 41
Injection Date : 10/10/2019 8:54:51 AM Inj : 1
Inj Volume : 60.000 µl
Acq. Method : C:\CHEM32\3\DATA\10102019_AF-M1_218-1336\AF-M1 2019-
10-10 08-53-38\AFLA_M1.
M
Last changed : 10/10/2019 8:53:38 AM by SYSTEM
Analysis Method : C:\CHEM32\3\DATA\10102019_AF-M1_218-1336\AF-M1 2019-
10-10 08-53-38\AFLA_M1.
M (Sequence Method)
Last changed : 10/10/2019 4:22:33 PM by SYSTEM
Additional Info : Peak(s) manually integrated
FLD1 A, Ex=365, Em=435 (10102019_AF-M1_218-1336\AF-M1 2019-10-10 08-53-38\041-0101.D)
LU
90
80
70
60
50
40
30
20
0 2 4 6 8 10 12 14 min
=====================================================================
External Standard
Report
=========================================
============================
Sorted By : Signal
Calib. Data Modified : 10/10/2019 4:16:34 PM
Multiplier : 1.0000
Dilution : 1.0000
Do not use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs
Signal 1: FLD1 A, Ex=365, Em=435
RetTime Type Area Amt/Area Amount Grp Name

[min] [LU*s] [ng/ul]
-------|------|----------|----------|----------|--|------------------
4.000 - - - Aflatoxin M1
Totals : 0.00000
1 Warnings or Errors :
46
Warning : Calibrated compound(s) not found
=====================================================================
LC FLD 10/10/2019 4:25:08 PM SYSTEM Page 1 of 2 Data File

C:\CHEM32\3\DATA\10102019_AF-M1_218-1336\AF-M1 2019-10-10 08-53-38\041-
0101.D Sample Name: blank
=====================================================================
Area Percent
Report
=========================================
============================
Sorted By : Signal
Multiplier : 1.0000
Dilution : 1.0000
Peak RetTime Type Width Area Area Name

# [min] [min] [LU*s] %
----|-------|------|-------|----------|--------|---------------------
1 4.000 0.0000 0.00000 0.0000 Aflatoxin M1
Totals : 0.00000
=====================================================================
=====================================================================
Calibration Curves
=====================================================================
47
Area
Aflatoxin M1 at
300 5 exp. RT: 4.000
FLD1 A, Ex=365, Em=435
250
Correlation: 0.99983
200
150 4
100
3
50 2
1
0
0 2 4
Amount[ng/ul]
Residual Std. Dev.: 2.45038 Formula:
y = mx + b m: 62.63627 b:
2.80025 x: Amount y: Area
=====================================================================
*** End of Report ***
LC FLD 10/10/2019 4:25:08 PM SYSTEM
48
Lampiran 3
Kromatogram Standar Aflatoxin M1 0,1 ppb
=================================================================
====

10-10 08-53-38\AFLA_M1.
M
10-10 08-53-38\AFLA_M1.
M (Sequence Method)
(modified after loading)
LU
70
65
60
55
50
45
40
35
30
25
0 2 4 6 8 10 12 14 min
=====================================================================
External Standard
Report
=========================================
============================
Sorted By : Signal
Multiplier : 1.0000
Dilution : 1.0000

-------|------|----------|----------|----------|--|------------------
4.038 MM R 9.18196 1.10962e-2 1.01885e-1 Aflatoxin M1
Totals : 1.01885e-1
49
=====================================================================
LC FLD 10/10/2019 1:56:49 PM SYSTEM Page 1 of 2

Data File C:\CHEM32\3\DATA\10102019_AF-M1_218-1336\AF-M1 2019-10-10 08-53-
38\042-0201.D
Sample Name: std Af- M1 0.1 ppb
=====================================================================
Calibration Curves
=====================================================================
Area Aflatoxin M1 at exp. RT: 3.989
300 5 FLD1 A, Ex=365, Em=435
250
200
150 4
100
3
50 2
1
Measured point: (0.102, 9.182)
0
0 2 4
Amount[ng/ul]
y = mx + b m: 62.63627 b:
=====================================================================
*** End of Report *** LC FLD
10/10/2019 1:56:49 PM SYST
50
Lampiran 4
Kromatogram Standar Aflatoxin M1 0,5 ppb
=====================================================================
10-10 08-53-38\AFLA_M1.
M
10-10 08-53-38\AFLA_M1.
M (Sequence Method)
LU
70
65
60
55
50
45
40
35
30
25
0 2 4 6 8 10 12 14 min
=====================================================================
External Standard
Report
=========================================
============================
Sorted By : Signal
Multiplier : 1.0000
Dilution : 1.0000

-------|------|----------|----------|----------|--|------------------
Totals : 5.15277e-1
=====================================================================
51
38\043-0301.D
Sample Name: std Af- M1 0.5 ppb
=====================================================================
Calibration Curves
=====================================================================
300 5 FLD1 A, Ex=365, Em=435
250
200
150 4
100
3
50 2
1
0
0 2 4
Amount[ng/ul]
y = mx + b m: 62.63627 b:
=====================================================================
*** End of Report *** LC FLD 10/10/2019
1:57:45 PM SYSTEM
52
Lampiran 5
Kromatogram Standar Aflatoxin M1 1 ppb
=====================================================================
10-10 08-53-38\AFLA_M1.
M
10-10 08-53-38\AFLA_M1.
M (Sequence Method)
LU
70
65
60
55
50
45
40
35
30
25
0 2 4 6 8 10 12 14 min
=====================================================================
External Standard
Report
=========================================
============================
Sorted By : Signal
Multiplier : 1.0000
Dilution : 1.0000

-------|------|----------|----------|----------|--|------------------
Totals : 9.93287e-1
=====================================================================
53

38\044-0401.D Sample Name: std Af- M1 1 ppb
=====================================================================
Calibration Curves
=====================================================================
300 5 FLD1 A, Ex=365, Em=435
250
200
150 4
100
3
50 2
1
0
0 2 4
Amount[ng/ul]
y = mx + b m: 62.63627 b:
=====================================================================
1:57:56 PM SYSTEM
54
Lampiran 6
=====================================================================
10-10 08-53-38\AFLA_M1.
M
10-10 08-53-38\AFLA_M1.
M (Sequence Method)
LU
70
65
60
55
50
45
40
35
30
25
0 2 4 6 8 10 12 14 min
=====================================================================
External Standard
Report
=========================================
============================
Sorted By : Signal
Multiplier : 1.0000
Dilution : 1.0000

-------|------|----------|----------|----------|--|------------------
3.985 MM R 131.67227 1.56257e-2 2.05747 Aflatoxin M1
Totals : 2.05747
=====================================================================
55
0501.D Sample Name: std Af- M1 2 ppb
=====================================================================
Calibration Curves
=====================================================================
300 5 FLD1 A, Ex=365, Em=435
250
200
150 131.672 4
100
3
50 2
1
2.057
0
0 2 4
Amount[ng/ul]
y = mx + b m: 62.63627 b:
=====================================================================
*** End of Report ** LC FLD 10/10/2019
1:58:06 PM SYSTEM
56
Lampiran 7
=====================================================================
10-10 08-53-38\AFLA_M1.
M
10-10 08-53-38\AFLA_M1.
M (Sequence Method)
LU
70
65
60
55
50
45
40
35
30
25
0 2 4 6 8 10 12 14 min
=====================================================================
External Standard
Report
=========================================
============================
Sorted By : Signal
Multiplier : 1.0000
Dilution : 1.0000

-------|------|----------|----------|----------|--|------------------
3.989 MM R 314.52786 1.58231e-2 4.97679 Aflatoxin M1
Totals : 4.97679
=====================================================================
57
0601.D Sample Name: std Af- M1 5 ppb
=====================================================================
Calibration Curves
=====================================================================
300 314.528 5 FLD1 A, Ex=365, Em=435
250
200
150 4
100
3
50 2
1
4.977
0
0 2 4
Amount[ng/ul]
y = mx + b m: 62.63627 b:
=====================================================================
1:58:19 PM SYSTEM
58
Lampiran 8
Kromatogram Aflatoxin M1 Sampel 1
=====================================================================
10-10 08-53-38\AFLA_M1.
M
10-10 08-53-38\AFLA_M1.
M (Sequence Method)
LU
90
80
70
60
50
40
30
20
0 2 4 6 8 10 12 14 min
=====================================================================
External Standard
Report
=========================================
============================
Sorted By : Signal
Multiplier : 1.0000
Dilution : 1.0000

-------|------|----------|----------|----------|--|------------------
Totals : 0.00000
59
=====================================================================

1001.D
Sample Name: Sampel 1
=====================================================================
Area Percent
Report
=========================================
============================
Sorted By : Signal
Multiplier : 1.0000
Dilution : 1.0000

----|-------|------|-------|----------|--------|---------------------
1 4.000 0.0000 0.00000 0.0000 Aflatoxin M1
Totals : 0.00000
=====================================================================
=====================================================================
Calibration Curves
=====================================================================
60
Area
Aflatoxin M1 at
300 5 exp. RT: 4.000
FLD1 A, Ex=365, Em=435
250
200
150 4
100
3
50 2
1
0
0 2 4
Amount[ng/ul]
y = mx + b m: 62.63627 b:
=====================================================================
LC FLD 10/10/2019 4:22:04 PM SYSTEM
61
Lampiran 9
Kromatogram Aflatoxin M1 Sampel 2
=====================================================================
10-10 08-53-38\AFLA_M1.
M
10-10 08-53-38\AFLA_M1.
M (Sequence Method)
LU
90
80
70
60
50
40
30
20
0 2 4 6 8 10 12 14 min
=====================================================================
External Standard
Report
=========================================
============================
Sorted By : Signal
Multiplier : 1.0000
Dilution : 1.0000

-------|------|----------|----------|----------|--|------------------
Totals : 0.00000
62
=====================================================================

1101.D Sample Name: Sampel 2
=====================================================================
Area Percent
Report
=========================================
============================
Sorted By : Signal
Multiplier : 1.0000
Dilution : 1.0000

----|-------|------|-------|----------|--------|---------------------
1 4.000 0.0000 0.00000 0.0000 Aflatoxin M1
Totals : 0.00000
=====================================================================
=====================================================================
Calibration Curves
=====================================================================
63
Area
Aflatoxin M1 at
300 5 exp. RT: 4.000
FLD1 A, Ex=365, Em=435
250
200
150 4
100
3
50 2
1
0
0 2 4
Amount[ng/ul]
y = mx + b m: 62.63627 b:
=====================================================================
LC FLD 10/10/2019 4:22:14 PM SYSTEM
64

LAPORAN PKL YORDI TUV NORD - Rev-1

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

LAPORAN PKL YORDI TUV NORD - Rev-1

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PENETAPAN KADAR AFLATOXIN M1 PADA SUSU BUBUK

(WESTLAND) SECARA KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI

PRAKTEK KERJA INDUSTRI (PRAKERIN) Formatted: German (Germany)

DI PT. TUV NORD INDONESIA

KEMENTRIAN PERINDUSTRIAN REPUBLIK INDONESIA

Pembimbing Laboratorium, Manager Lab.

(Busro Wintolo) (Tri Tresnawati, S.Si)

Guru Pembimbing, Kepala SMK SMAK Padang

(Farlina S.Pd, M.Hum) (Drs. Nasir)

Penyusunan laporan ini telah di usahakan semaksimal mungkin, namun penulis

Cikarang, Desember 2019

KATA PENGANTAR ...........................................................................................................

1.1 Latar Belakang

Praktik kerja industri (Prakerin) merupakan salah satu program kurikulum

Aflatoksin merupakan mikotoksin yang dihasilkan oleh kapang

Aflatoksin M1 dapat masuk ke dalam rantai pangan manusia melalui susu.

1.2 Tujuan Formatted: German (Germany)

Tujuan dari prakerin adalah:

Tujuan penulisan laporan prakerin antara lain:

2.1 Sejarah Perusahaan

PT. TÜV NORD Indonesia memberikan harapan bagi perkembangan dan

PT. TÜV NORD Indonesia telah memperoleh pengakuan Sistem Manajemen

Gambar 1. Logo PT. TÜV NORD Indonesia

Gambar 2. Struktur Organisasi Laboratorium PT. TÜV NORD Indonesia

Jakarta,01 Maret 2016

Tri Tresnawati Robert Napitupulu

Gambar 3. Struktur Organisasi Laboratotium PT. TÜV NORD

2.3.1 Proses Laboratorium Penguji Formatted: Font color: Text 1

Receiving sample Kaji Ulang

Gambar 4. Diagram Alur Proses Pengujian

Sample Code Approved

Gambar 5. Diagram Alur Proses Kalibrasi

Diagram Alur Proses

2.4 Ruang Lingkup Laboratorium

Standar bahan pangan berperan penting dalam memenuhi persyaratan keamanan

Laboratorium penguji PT. TÜV NORD Indonesia menerapkan sistem

Untuk menunjang keakuratan hasil pengujian, serta komitmen layanan yang

Bidang pengujian Laboratorium PT. TÜV NORD Indonesia adalah :

Laboratorium Kalibrasi PT. TÜV NORD Indonesia sebagai validasi lembaga

Kalibrasi alat ukur, meliputi besaran Temperatur, Massa, Volumetrik, Tekanan,

C. Lembaga Sertifikasi Produk

Dengan Kebijakan pemerintah dalam pemberlakuan SNI marking terhadap

1. Lampu dan kelistrikan (battery, lampu flouresen dsb.)

3.1 Waktu dan Tempat Pelaksanaan

3.2 Pengujian Yang Dilakukan

Pengujian yang dilakukan adalah “Analiasa kadar Aflatoxin M1 pada susu

3.3 Tinjauan Pustaka Parameter Pengujian

Gambar 7. Susu Bubuk

Air Protein Lemak Laktosa Mineral

butirannya berbentuk pipih dengan ketebalan 8 – 10 mikron. Sifat kelarutan dalam

Susu Bubuk Skim

Komposisi Jumlah Maksimal yang Diijinkan

Penyimpanan dan Faktor yang Mempengaruhi Kerusakan Susu

Susu bubuk full Susu bubuk Susu

min.26 dan lebih dari 1,5 dan Formatted: German (Germany)

Susu bubuk Susu bubuk

10.2 Coliform 5) APM/g maks. 10 maks. 10 maks. 10

10.3 Salmonella sp. - negatif/ 25 g negatif/ 25 g negatif/ 25 g

Staphylococcus maks. 1 x maks. 1 x

diperlukan pengujian koliform

Gambar 8. Kapang Aspergillus flavus

Aflatoksin merupakan hepato-karsinogen yang dapat mengakibatkan

Gambar 9. Struktur kimia Aflatoxin