TUGAS DIAGNOSTIK MOLEKULER

”PRINSIP DAN BAGAN PROSEDUR KERJA ALAT-ALAT POLYMERASE

CHAIN REACTION (PCR), SPEKTROFOTOMETER DAN ELEKTROFORESIS
GEL AGAROSA”

OLEH:
KELOMPOK 3

 NURUL ZEIKA WAHDANIYA (P00341018028)

 PERMANITA (P00341018029)
 PIRA NURMALASARI (P00341018030)

TINGKAT: II.A (2A)

KEMENTRIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA

POLITEKNIK KESEHATAN KEMENKES KENDARI
JURUSAN D.III ANALIS KESEHATAN
TAHUN 2020
Judul : Elektroforesis gel agarosa
Prinsip : Memisahkan komponen protein ataupun potongan DNA berdasarkan laju migrasi
partikel bermuatan dalam suatu medan listrik
Prosedur kerja :
A. PEMBUATAN AGAR

Timbang bubuk agarosa lalu masukkan kedalam Erlenmeyer ,tambahkan buffer sampai batas
yang dibutuhkan kemudian homogenkan dengan cara menggoyang-goyangkan Erlenmeyer

Masukan kedalam mikroweif kemudian setting alat dan biarkan alat bekerja setelah seleisai
keluarkan Erlenmeyer dari mikroweif

Setelah selesai dari dalam mikroweif, lalu pipet EtBR 0,5 ug/ml,menggunakan mikropipet
dan teteskan kedalam Erlenmeyer yang terdapat gel, kemudian masukkan kedalam waterbat
dengan suhu 65oC .

Kemudian siapakan wadah cetakan untuk mencetak gel, lalu pasang sisir-sisir pada cetakan,
kemudian tuang gel kedalam cetakan secara perlahan setelah gel memadat cabut sisir-sisir
dari cetakan

Kemudian bungkus wadah gel dengan pastik, lalu masukkan kedalam lemari
pendingin,kemudian keluarkan gel dari lemari pendingin dan masukkan gel pada tangki
elektroforesis
 A. Setting Up Gel Apparatus And Separating DNA Fragments

pipet 0,25 %
bromophenol + 0,25% atur alat 1-5 V/cm
letakkan di dalam cup
xylenecyanol + 30% between electrodes
sampel
glycerol, menggunakan (100oC)
mikropipet

cuk alat dengan tangki isi tangki dengan

biarkan alat berkerja yang terdapat buffer larutan buffer sampai
dan gel gel tenggelam

buka penutup
terdapat gelembung tangkikemudian
gelembung / uap pada setelh selesai teteskan loading dye
tangki pada sumuran yang
terdapat di gel

kemudian tekan tombol

setelah selesai , matikan
star , alat akan tutup kembali tangkinya
alat
memperoses

keluarkan gel dan

buka penutup tangki setalah itu komputer
letakkan pada alat sinar
ambil cetakan gel akan menampilkan hasil
uv

setelah semua selesai ,

buang gel pada
tempatnya
RUNNING ELEKTROFORESIS :

tuang buffer ke dalam

masukkan jel agarosa ke
siapakan tangki tangki sampai jel nya
dalam tangki
tenggelam

letakkan / masukkan
pipet mikrotube yang siapkan mikrotube yang
kedalam sumuran jel
terdapat loading daem berisi loading daem
agarosa

kemudian cuk kabel yang

terdapat pada tangki
tutup tangki tekan tombol on pada alat
sesuaikan dengan warna
pada alat

kemudian seting alat

tekan tombol + atur sampai
atur time nya sampai 60 dengan menekan tombol
angka 100
constant V

kemudian terdpat
kemudian tekan tombol
biarkan alat berkerja uap/gelembung pada
run ( kecepatannya )
buffer

lody daem yang terdapat

pada gel agarosa akan
mengalami pemanjangan
dengan sendirinya.
JUDUL : SPEKTROFOTOMETER

PRINSIP DASAR SPEKTROFOTOMETRI

Berdasarkan absorpsi/ serapan cahaya pada panjang gelombang tertentu yang melewati
larutan (sampel) tertentu yang mengandung metabolit yang ingin diketahui konsentrasinya.
PROSE KERJA:

 ALUR TAHAPAN

Pipet aquadest sebanyak 955 µl

Siapkan alat dan bahan
letakkan pada tube

Tambahkan 5 µl sampel Lakukan resuspensi kemudian pindahkan

DNA hasil isolasi larutan kedalam kuvet

Masukkan kedua kuvet Siapkan 1 kuvet berisi 1

kedalam alat µl aquadest sebagai
larutan blanko
spektrofotometer
Baca absorbansi sampel Tentukan rasio
DNA pada OD 260 nm absorbansi pada OD 260
dan absorbansi kedua nm dan OD 280 nm
pada OD 280 nm

Hitung konsentrasi DNA

sampel dan tentukan
konsentrasi DNA yang
diperoleh
Judul : PCR (POLYMERASE CHAIN REACTION)
Prinsip :
1. Denaturasi : proses pemisahan untaian dsDNA menjadi ssDNA pada suhu 94-95oC
2. Anneling : proses penempelan primer ke sekuens komplemennya pada DNA target pada
suhu 5o dibawah Tm primer (37o-60oC)
3. Extention : proses pemanjangan baca nukleotida oleh taq polimerase dari ujung 3’- bebas
primer dengan arah sintesis 5’ -> 3’ pada suhu 70-72oC
Prosedur Kerja :
 PART I

mengisi lembar kerja

untuk mengetahui siapkan cup sampel
siapkan alat dan bahan
volume setiap yang baru
komponen pcr

pipet MBH2O
kemudian letakkan di
tipsnya di buang] menggunakan
cup sampel
mikropipet tips putih

kemudian pipet ACTN3F masukkan di cup kemudian pipet ACTN3R

menggunakan sampel yang sudah dengan mikropipet tips
mikropipet tips kuning berisi MBH2O tadi kuning

letakkan di cap sampel

Kemudian pipet Read letakkan di cap sampel
yang sudah berisi
taq mix menggunakan yang berisi MBH2O
MBH2O + ACTN3F +
mikropipet tips putih +ACTN3F
ACTN3R

homogenkan dengan
sampel di sentrifuge
cara menggoyang
selama 2 menit 14,5 klik tombol star
goyangkan
rpm
menggunakan jari

biarkan sentrifuge
berkerja sampai
keluarkan sampel dari
setelah selesai penutup sentrifuge
sentrifuge
terbuka dengan
sendirinya
J
PART II

pipet sampel yang tadi di

sampel yang sudah di kemudian siapkan
simpan di box ice
sentrifuge simpan di ice mikrotube kecil sebanyak
menggunakan mikropipet
box 5
tips putih

ambil mikrotube yang kemudian beri kode pada letakkan di mikrotube

berisi dna cetakkan mikrotube A,B,C,D dan AC kecil

homogenkn pipet dna cetakan yang

mikrotubenya dengan terdapt di mikrotube masukkan di mikrotube
cara menggyang besar pipet kecil yang terdapat kode
goyangkan dengan ujung menggunakanmikropipet A
jari tips putih

lakukan hal itu seterusnya masukkan ke mikrotube kemudian dna cetakan

sampai mikrotube kecil kecil yang terdapat kode yang ke 2 di pipet
yang di beri kode d B menggunakan mikropipet

homogenkan mikrotube
kemudian mikrotube kecil
kecil yang diberi kode masukkan di centrifuge
di tutup
A,B,C,D dan AC

nyalakan alat
setelah selesai di
buka penutup alat programmable thermal
centrifuge
controll

kemudian tinggalkan 1-
masukkan mikrotube berjam jam alat akan
yang sudah di centrifuge berkerja dengan
sendirinya