DEFINISI

Elektroforesis adalah teknik pemisahan makromolekul

khususnya protein dan asam nukleat berdasarkan
perbedaan ukuran
FUNGSI ELEKTROFORESIS
menyediakan informasi mengenai ukuran, konfirmasi dan
muatan dari protein dan asam nukleat

sebagai metode pemisahan yang dapat digunakan untuk

menentukan komponen dari protein atau asam nukleat
setiap individu

Pada bidang kepolisian teknik ini digunakan nuntuk

pemeriksaan DNA, karakteristik khusus, misalnya sidik
jari. Sehingga membantu polisi dalam mengungkap
sebuah kasus.

Dalam biologi molekuler, elektroforesis merupakan salah

satu cara untuk memvisualisasikan keberadaan DNA,
plasmid, dan produk PCR.
Bagian elektroforesis
CARA KERJA
1. Buat 250 ml larutan buffer TAE 1x dengan cara mencampurkan
5 ml TAE 50x ke
dalam 245ml aquades

2. Buat gel agarosa 1% dengan cara menimbang agarosa 0,2 g

untuk dilarutkan ke
dalam bufer TAE 1x hingga volume 20 ml. Larutan agarosa
dididihkan hingga larut
sempurna.

3. Siapkan baki gel agarosa, lekatkan selotip di tiap ujung baki

gel agarosa (pastikan
bahwa selotip melekat kuat dan tidak ada lubang pada masing-
masing ujung baki)
4. Pasang sisir elektroforesis di salah satu ujung baki gel
agarosa dengan posisi hampir
menyentuh dasar baki

5. Periksalah suhu larutan agarosa dengan cara

menempelkan erlenmeyer ke tangan,
jika suhunya sudah turun hingga sekitar 50-60 0C,
tambahkan 1 l etidium bromid
(PERINGATAN KERAS!!, gunakan sarung tangan
karena bersifat karsinogenik).
6. Larutan agarosa dihomogenkan sebentar, kemudian tuangkan larutan ke dalam
baki gel agarosa, biarkan hingga larutan berubah menjadi gel yang padat.

7. ambil sisir dengan hati-hati, lepaskan selotip dari ujung-ujung baki

8. masukkan baki yang telah berisi gel agarosa ke dalam tangki elektroforesis
yang telah diisi
dengan larutan bufer TAE 1x (pastikan bahwa gel terendam seluruhnya dalam
TAE).

9. siapkan sekitar 5 cm kertas parafilm di dekat tangki elektroforesis

10. masukkan 10 l sampel DNA dan 2 l loading dye 6x ke dalam sumuran gel
agarosa dengan cara mencampurkan kedua bahan tersebut terlebih dahulu
secara
merata pada kertas parafilm menggunakan mikropipet.

11. buatlah catatan mengenai nomor sumuran dan jenis sampel DNA yang
dimasukkan.
12. hubungkan kabel dari sumber arus ke tangki
elektroforesis (pastikan bahwa
kabel yang tersambung ke kutub negatif berada di dekat
sumuran; jika tidak
demikian, ubahlah posisi baki/gel ke arah sebaliknya).

13. nyalakan sumber arus, aturlah volatase dan waktu running

hingga
diperoleh angka 70 V dan 45 menit dengan cara menekan
tombol yang sesuai
pada sumber arus.
14. jalankan elektroforesis (lakukan running) dengan cara menekan
tombol run
pada sumber arus

15. elektroforesis akan berhenti apabila waktu yang ditetapkan sudah

habis,
yang ditandai oleh adanya bunyi alarm. Matikan sumber arus dan
angkatlah
baki dari tangki elektroforesis.
16. keluarkan gel dan letakkan di atas UV transluminator (letakkan
selubung
kaca hitam di atas UV transluminator).

17. nyalakan UV transluminator, amati pita-pita DNA yang tervisualisasi.

JENIS ELEKTROFORESIS
Elektroforesis kertas

Kertas sebagai fase diam dan partikel bermuatan yang

terlarut sebagai fase gerak, terutama ialah ion-ion
kompleks.
Pemisahan ini terjadi akibat adanya gradasi konsentrasi sepanjang
sistem pemisahan.
Pergerakan partikel dalam kertas tergantung pada muatan atau valensi
zat terlarut, luas penampang, tegangan yang digunakan, konsentrasi
elektrolit, kekuatan ion, pH, viskositas, dan adsorpsivitas zat terlarut.
Keunggulan Elektroforesis Kertas
Proses migrasi lebih cepat
Pemisahan spot menjadi lebih kecil
Mudah memisahkan sampel dengan spektrofotometri
Mudah dilarutkan dalam pelarut dalam jumlah sedikit.

Kekurangan
adanya gangguan yang disebabkan oleh adanya gugus OH-
yang terdapat pada selulosa yang dapat berinteraksi
dengan molekul polar sehingga daya migrasi molekul
tersebut terganggu dan menjadi lebih rendah
Elektroforesis gel
Menggunakan gel sebagai fase diam untuk memisahkan
molekul-molekul.
Awalnya medium gel kanji digunakan sebagai fase diam
untuk memisahkan biomolekul yang lebih besar
seperti protein. Kemudian berkembang dengan
menjadikan agrosa dan poliakrilamida sebagai gel
media. Medote elektrofororesis gel agrarosa didaarkan
pada pergerakan molekul bermatan dalam media
penyangga matriks stabil di bawah pengaruh medan
listrik
Keunggulan Elektroforesis Gel
Mudahnya mengamati reaksi kimia selama proses
berlangsung
Sampel dapat ditangani dengan baik dan cepat
Gel dari hasil percobaan dapat disimpan dalam kantong
plastik dan didinginkan setelah percobaan,sehingga dapat
dipakai untuk dokumentasi penting yang dapat dipelajari
lebih lanjut di lain waktu, dan beberapa kelebihan lainnya.

Kekurangan Elektroforesis Gel

Rawan terjadi kesalahan pada proses pemindahan
campuran sampel ke dalam slot gel, karena slot gel
ukurannya sang