IMUNOLOGI DASAR

MAKALAH
ANTIBODY MONOCLONAL

Dosen Pengampu: Dr.dr. Andani Eka Putra, MSc

ZAHRA FRIZKI ASTY

1720312015

PROGRAM PASCASARJANA ILMU BIOMEDIK

FAKULTAS KEDOKTERAN
 2018

DAFTAR ISI

Halaman judul.....................................................................................................1

Daftar isi…………………………………………………….........………….....2

BAB I PENDAHULUAN

A. Latar Belakang.............................................................................................3

B. Rumusan masalah….…………………….…….………………………......4

C. Tujuan ..........................................................................................................4

BAB II PEMBAHASAN

A. Sejarah Antibodi Monoklonal......................................................................5

B. Teknik Hibridoma ......................................................................................6

C. Pemilihan Antibodi Spesifik – Penghasil Klon............................................9

D. Aplikasi Klinis..............................................................................................10

BAB III PENUTUP

A. Simpulan ....................................................................................................12

B. Saran ..........................................................................................................12

Daftar Pustaka...................................................................................................13
 BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang
Antibodi, juga dikenal sebagai imunoglobulin, yang merupakan
salah satu komponen terpenting dari respon imun humoral: yang
melindungi pejamu terhadap infeksi. Antibodi diklasifikasikan sebagai
antibodi poliklonal (PoAbs) dan antibodi monoklonal (mAbs), dan
antibodi ini memiliki struktur dan fungsi yang sama, tetapi berbeda satu
sama lain berdasarkan asal, produksi, dan spesifisitasnya. Antibodi
monoklonal diproduksi oleh satu klon, sedangkan antibodi poliklonal
diproduksi oleh banyak klon (Büyükköroğlu dan Şenel, 2018).
Pengetahuan akan sel B secara genetik terprogram untuk
mensintesis antibodi sangat spesifik yang telah dimanfaatkan dalam
pengembangan antibodi untuk tes diagnostik yang dikenal sebagai antibodi
monoklonal. Biasanya, respon terhadap antigen adalah heterogeneous
karena epitop multipel antigen yang dimurnikan akan menstimulasi
berbagai klon sel B (Stevens, 2003).
Perawatan dengan antibodi monoklonal menjadi semakin penting
dalam onkologi klinis. Antibodi ini secara khusus menghambat jalur sinyal
dalam pertumbuhan tumor dan / atau menginduksi tanggapan imunologi
terhadap sel tumor. Dengan menggabungkan antibodi monoklonal
beberapa jalur dapat ditargetkan secara bersamaan, berpotensi
menyebabkan efek aditif atau sinergis. Secara teoritis, antibodi sangat
cocok untuk digunakan dalam terapi kombinasi, karena toksisitas tumpang
tindih yang terbatas dan kurangnya interaksi farmakokinetik (Henricks,
Schellens, Huitemad, Beijnen, 2015).
Berdasarkan latar belakang tersebut maka perlu adanya
pemahaman lebih lanjut mengenai antibodi moniklonal.
B. Rumusan Masalah
1. Bagaimana sejarah dari antibodi monoklonal?
2. Apakah teknik yang digunakan dalam pembuatan antibodi monoklonal?
3. Bagaimana aplikasi klinisnya?

C. Tujuan
1. Menjawab semua permasalahan yang ada pada rumusan masalah di atas.
2. Menambah pengetahuan mengenai antibodi monoklonal.
 BAB II

PEMBAHASAN

A. Sejarah
Antibodi monoklonal pertama (mAbs) diciptakan pada pertengahan
1970-an untuk menargetkan mutasi spesifik dan cacat pada struktur
protein yang diekspresikan pada beberapa penyakit dan kondisi. Antibodi
ini sekarang bagian dari perawatan utama untuk neoplastik, autoimun,dan
penyakit peradangan kronis, yang menyebabkan peningkatan laporan
reaksi hipersensitivitas (HSR) sekunder untuk kelas obat ini (Santos dan
Galvao, 2017).
Generasi pertama mAbs adalah antibodi monospesifik/
bifungsional, dengan satu ikatan bagian ke antigen tertentu dan bagian Fc
utuh yang mengikat pada reseptor Fc pada aksesori sel. Pada tahun 2009,
catumaxomab, mAb bispecific/trifunctional, disetujui untuk pengobatan
ascites maligna pada pasien dengan kanker (Santos dan Galvao, 2017).
Menurut Hafeezl, Gan, dan Scott (2018), karena pemenang Nobel
Paul Ehrlich mengusulkan konsep peluru ajaib pada tahun 1906, Köhler
dan Milstein menemukan teknologi Hybridoma pada tahun 1975, dan Greg
Winter memelopori teknik untuk memanusiakan antibodi monoklonal
pada tahun 1988, antibodi monoklonal telah berhasil dikembangkan untuk
mengobati penyakit medis. Antibodi monoklonal adalah pengobatan yang
efektif untuk menghambat reaktivitas alloimun, keganasan hematologis,
keganasan organ padat, penyakit virus dan juga digunakan sebagai terapi
antiplatelet.
Penggunaan antibodi monoklonal dalam kanker dan penyakit
autoimun pada manusia telah menjadikan mereka salah satu kelas yang
paling cepat berkembang dari obat-obatan baru yang disetujui untuk
indikasi ini dalam beberapa dekade terakhir. Ulasan ini berfokus pada
 peran antibodi monoklonal sebagai terapi imunomodulator terhadap
kanker dan penyakit autoimun, strategi yang digunakan untuk
meningkatkan kemanjuran, dan bagaimana mekanisme resistensi sedang
ditangani untuk meningkatkan hasil terapi untuk pasien (Hafeezl, Gan, dan
Scott, 2018)

B. Teknik Hibridoma

Tikus yang diimunisasi dengan antigen tertentu dan setelah

beberapa waktu, sel-sel limfa diambil. Sel limfa digabungkan dengan sel-
sel mieloma dengan adanya polietilenglikol (PEG), yang merupakan suatu
surfaktan. PEG menghasilkan fusi sel plasma dengan sel mieloma, dan
menghasilkan hibridoma. Hanya sebagian kecil sel yang benar-benar
menyatu, dan beberapa di antaranya seperti sel, dua sel mieloma atau dua
sel limfa. Setelah fusi, sel ditempatkan dalam kultur menggunakan media
selektif yang mengandung hypoxanthine, aminopterin, dan thymidine
(HAT) (Stevens, 2013).
Kultur dalam media ini digunakan untuk memisahkan sel
hibridoma dengan memungkinkan mereka untuk tumbuh secara selektif.
Sel mieloma biasanya dapat tumbuh tanpa batas dalam kultur jaringan,
tetapi dalam hal ini sel mieloma tidak bisa karena kedua jalur untuk
sintesis nukleotida diblokir. Satu jalur diblokir karena garis sel mieloma
yang digunakan kurang dalam enzim yang dibutuhkan HGPRT dan
timidin kinase. Jalur lain juga terhalang oleh kehadiran aminopterin.
Akibatnya sel-sel mieloma mati (Stevens, 2013).
Sel B normal tidak dapat dipertahankan terus menerus dalam kultur
sel, jadi sel B akan mati. Sehingga ini akan menyisakan sel hibridoma
yang menyatu, yang memiliki kemampuan yang diperoleh dari sel
mieloma untuk memproduksi tanpa batas dalam kultur dan kemampuan
yang diperoleh dari sel B normal, untuk mensintesis nukleotida melalui
jalur HGPRT dan timidin kinase (Stevens, 2013).
 Gambar 1. Struktur dan Fungsi Antibodi

Keterangan. Formasi dari hibridoma pada produksi antibodi monoklonal.

Seekor tikus diinjeksi, dan diambil sel limfanya. Sel limfa tersebut
digabungkan dengan sel mieloma dan disepuhkan dalam media yang terbatas.
Hanya sel hibridoma yang akan tumbuh di media ini, dimana sel hibridoma
akan mensitesa dan megeluarkan imunoglobulin monoklonal spesifik untuk
penentu tunggal pada antigen

Berdasarkan National Academy of Sciences (1999), perkembangan

teknologi hibridoma telah mengurangi jumlah hewan (tikus, kelinci, dan
sebagainya) diperlukan untuk menghasilkan antibodi yang diberikan tetapi
dengan penurunan kesejahteraan hewan ketika metode asites digunakan.
Ada lima tahapan dalam melakukan teknik hibridoma, yaitu:
 Langkah 1: Imunisasi Tikus dan Pemilihan Donor Mouse untuk
Menghasilkan Sel Hibridoma
Tikus diimunisasi dengan antigen yang disiapkan untuk injeksi
baik dengan mengemulsi antigen dengan adjuvant Freund atau adjuvants
lainnya atau dengan menyeragamkan gel slice yang mengandung antigen.
Sel utuh, seluruh membran, dan mikroorganisme kadang-kadang
digunakan sebagai imunogen. Di hampir semua laboratorium, tikus
digunakan untuk menghasilkan antibodi yang diinginkan. Secara umum,
tikus diimunisasi setiap 2-3 kali tetapi protokol imunisasi bervariasi di
antara para peneliti.Ketika titer antibodi yang cukup tercapai dalam serum,
tikus yang diimunisasi di-eutanasia dan limpa dikeluarkan untuk
digunakan sebagai sumber sel untuk fusi sel myeloma.
Langkah 2: Skrining Tikus untuk Produksi Antibodi
Setelah beberapa minggu imunisasi, sampel darah diperoleh dari
tikus untuk pengukuran antibodi serum. Beberapa teknik manusiawi telah
dikembangkan untuk mengumpulkan volume kecil darah dari tikus.Titer
antibodi serum ditentukan dengan berbagai teknik, seperti enzyme-linked
immunosorbent assay (ELISA) dan flow cytometry. Jika titer antibodi
tinggi, fusi sel dapat dilakukan. Jika titer terlalu rendah, tikus dapat
dikuatkan sampai respon yang memadai tercapai, seperti ditentukan
dengan pengambilan sampel darah berulang. Ketika titer antibodi cukup
tinggi, tikus biasanya didorong oleh suntikan antigen tanpa adjuvant
intraperitoneal atau intravena (melalui vena ekor) 3 hari sebelum fusi
tetapi 2 minggu setelah imunisasi sebelumnya. Kemudian tikus-tikus itu
di-eutanasia dan limpa mereka diambil untuk in vitro produksi sel
hibridoma.
Langkah 3: Persiapan Sel Myeloma
Sel-sel limpa memproduksi antibodi, yang memiliki rentang hidup
yang terbatas, dengan sel-sel yang berasal dari tumor abadi limfosit
(myeloma) menghasilkan hibridoma yang mampu tumbuh tanpa batas.
Sel-sel myeloma adalah sel yang diabadikan yang dikultur dengan 8-
azaguanine untuk memastikan kepekaan mereka terhadap hypoxanthine-
 aminopterin-thymidine (HAT) medium seleksi yang digunakan setelah
fusi sel. Seminggu sebelum sel fusi, sel-sel myeloma tumbuh di 8-
azaguanine. Sel harus memiliki viabilitas tinggi dan pertumbuhan yang
cepat. Itu HAT menengah hanya memungkinkan sel-sel leburan untuk
bertahan hidup dalam budaya.
Langkah 4: Fusion Sel Myeloma dengan Sel Immune Limpa
Sel limpa tunggal dari tikus yang diimunisasi digabungkan dengan
sel mieloma yang disiapkan sebelumnya. Fusi dicapai dengan co-
sentrifugasi sel limpa yang baru dipanen dan sel myeloma dalam
polietilenglikol, zat yang menyebabkan membran sel menjadi sekering.
Seperti yang disebutkan pada langkah 3, hanya sel yang bersatu akan
tumbuh di media pilihan khusus. Sel-sel tersebut kemudian didistribusikan
ke 96 piring yang berisi sel-sel feeder yang diturunkan dari pencelupan
peritoneal salin tikus. Sel pengumpan diyakini memasok faktor
pertumbuhan yang mempromosikan pertumbuhan sel hibridoma.
Langkah 5: Kloning Hybridoma Cell Lines “Membatasi
Pengenceran ” atau Ekspansi dan Stabilisasi Klon oleh Produksi Ascites
Pada tahap ini, kelompok kecil sel hibridoma dari 96 lempeng
sumur dapat tumbuh di jaringan kultur diikuti oleh seleksi untuk
pengikatan antigen atau ditumbuhkan oleh metode ascites mouse dengan
kloning dikemudian waktu. Kloning dengan “membatasi pengenceran ”
saat ini memastikan bahwa mayoritas sumur masing-masing mengandung
paling banyak sebuah klon tunggal. Pertimbangan yang cukup diperlukan
pada tahap ini untuk memilih hibrida yang mampu melakukan ekspansi
versus hilangnya total produk fusi sel karena kurangnya populasi atau in
vitro yang tidak memadai pertumbuhan tinggi pengenceran. Dalam
beberapa kasus, antibodi yang disekresikan bersifat racun bagi sel-sel yang
rapuh yang dipertahankan in vitro. Mengoptimalkan metode ekspansi
asites tikus pada tahap ini dapat menyimpan sel.

C. Pemilihan antibodi Spesifik-Penghasil Klon

 Sel hibridoma yang tersisa diencerkan dan ditempatkan di dalam
sumur mikrotiter, dimana mereka diizinkan untuk tumbuh. Setiap sumur
mengandung satu klon, kemudian disaring atau ada antibodi yang
diinginkan dengan mengeluarkan supernatan. Setelah diidentifikasi,
hibridoma mampu dipertahankan dalam kultur sel tanpa batas, dan
menghasilkan pasokan antibodi monoklonal yang siap bereaksi dengan
epitop tunggal (Stevens, 2013).

D. Aplikasi Klinis
Antibodi monoklonal awalnya digunakan untuk pengujian
diagnnostik in vitro, yang menggunakan antibodi spesifik untuk rantai β
dari chorionic gonadotropin manusia, sehingga menghilangkan banyak
reaksi positif palsu. Contoh lain termasuk deteksi antigen tumor dan
oengukuran kadar hormon. Baru-baru ini, bagaimanapun, ada penekanan
pada penggunaan antibodi monoklonal sebagai agen terapeutik.
Salah satu kemajuan terbesar dalam bidang bioteknologi adalah
penemuan antibodi monoklonal (mAbs). Antibodi monoklonal telah
merevolusi bidang penelitian dan kedokteran. Dengan memanfaatkan
kekhususan molekuler untuk target biologis, antibodi monoklonal telah
memberi peneliti kemampuan untuk mempelajari proses biologis dengan
andal dan dengan akurasi yang belum pernah terjadi sebelumnya. Para
ilmuwan telah menciptakan banyak teknik biologis umum, seperti tes
immunosorbent enzim-linked, western blot, dan flow cytometry melalui
penggunaan antibodi monoklonal. Di luar penggunaannya di laboratorium,
antibodi monoklonal menunjukkan harapan besar dalam pengaturan klinis
dalam pengobatan penyakit (Ndoja dan Lima, 2017).
Selain itu kisah sukses terbesar lainnya dalam pengobatan dua
penyakit autoimun: rheumatoid arthritis dan penyakit Chron (radang kolin
inflamasi progresif). Kedua penyakit ini telah diobati dengan antibodi
monoklonal yang disebut inflixmab yang menghalangi aksi tumor necrosis
faktor-alpha. Pengobatan untuk kanker payudara, limfoma non-Hodgkin,
dan terapi anti platelet untuk sindrom koroner akut juga sangat
menjanjikan. Faktanya bahwa antibodi monoklonal sekarang dapat
dimanusiakan oleh teknologi rekombinan telah mengurangi reaksi
terhadap reagen itu sendiri, yang dulunya berasal dari tikus. Antibodi ini
cenderung berkembang di masa depan karena lebih seperempat dari obat
saat ini dalam perkembangan bersifat monoklonal (Stevens, 2013).
 BAB III

PENUTUP

A. Simpulan

Antibodi diklasifikasikan sebagai antibodi poliklonal (PoAbs) dan

antibodi monoklonal (mAbs). Antibodi monoklonal diproduksi oleh satu
klon. Antibodi monoklonal pertama (mAbs) diciptakan pada pertengahan
1970-an untuk menargetkan mutasi spesifik dan cacat pada struktur
protein yang diekspresikan pada beberapa penyakit dan kondisi.

Dalam pembuatan antibodi monoklonal dengan menggunakan

teknik hibridoma, dimana pada teknik hibridoma ini terdiri dari lima
tahapan:

1. Imunisasi Tikus dan Pemilihan Donor Mouse untuk

Menghasilkan Sel Hibridoma.
2. Skrining Tikus untuk Produksi Antibodi
3. Persiapan Sel Mieloma
4. Fusion Sel Myeloma dengan Sel Immune Limpa
5. Kloning Hybridoma Cell Lines “Membatasi Pengenceran ”

B. Saran
Dengan disusunnya makalah ini, maka kita dapat lebih mengetahui dan
memahami tentang antibodi monoklonal yang berperan dalam tes
diagnostik, dan onkologi klinis serta dapat diinformasikan kepada
masyarakat yang belum memahami mengenai sistem penggolongan darah
pada manusia.
 DAFTAR PUSTAKA

Büyükköroğlu, G. dan Şenel,B. 2018. Engineering Monoclonal Antibodies:

Production and Applications. Journal of Omics Technologies and Bio-
Engineering. Pages 353–389. doi: 10.1016/B978-0-12-804659-3.00016-6
Hafeez1, U., Gan, H.K., Scott, A.M. 2018. Monoclonal antibodies as
immunomodulatory therapy against cancer and autoimmune diseases.
Journal of Current Opinion in Pharmacology. doi:
10.1016/j.coph.2018.05.010
Henricks, L.M. Schellens, J.H.M. Huitemad, A.D.R, Beijnen, J.H. 2015. The use
of combinations of monoclonal antibodies in clinical oncology. Journal of
Cancer Treatment Reviews. 41(10). doi: 10.1016/j.ctrv.2015.10.008
National Academy of Science. 1999. ` Monoclonal Antibody Production: A
Report of the Committee on Methods of Producing Monoclonal Antibodies
Institute for Laboratory Animal Research National Research Counci.
Washington DC: National Academy Press

Ndoja,S., Lima,H. 2017. Monoclonal Antibodies. Jornal of Current Developments

in Biotechnology and Bioengineering. Pages 71–95. doi: 10.1016/B978-0-
444-63660-7.00004-8

Santos, R.B Galvao, V.R. 2017. Monoclonal Antibodies Hypersensitivity

Prevalence and Management. Journal of Immunol Allergy Clin N Am, 37
(2017) 695–711. doi: 10.1016/j.iac.2017.07.003
Stevens, C.D. 2003. Clinical immunology and Serology: A Laboratory
Perspective 2nd edition. United States of America: F.A. Davis Company.