TUGAS INDIVIDU

IMUNOPARASIT

Oleh :
Tri Novia

Kumalasari

20112508059

Dosen Pengampu : DR.dr.Irsan Saleh,M.Biomed

PROGRAM PASCA SARJANA

PROGRAM STUDI ILMU BIOMEDIK
FAKULTAS KEDOKTERAN UNSRI
2012/2013
MONOCLONAL ANTIBODI
Pendahuluan
Antibodi monoklonal adalah antibodi yang diproduksi oleh sel-sel yang berasal dari
satu klon sel. Klon adalah segolongan sel yang berasal dari satu sel dan karenanya

identik secara genetik. Kloning dapat dilakukan dengan mengencerkan larutan sel
sedemikian rupa sehingga biakan sel diperoleh sumur yang hanya mengandung satu sel.
Antibodi monoklonal (mAb atau Moab) adalah antibodi monospecific yang sama
karena mereka dibuat oleh identik sel-sel kekebalan yang semuanya klon dari sel induk
yang unik.Mengingat hampir substansi apapun, adalah mungkin untuk menghasilkan
antibodi monoklonal yang secara khusus mengikat zat yang, mereka kemudian dapat
berfungsi untuk mendeteksi atau memurnikan zat yang. Hal ini telah menjadi alat
penting dalam biokimia , biologi molekuler dan kedokteran

Gambar 1.Sebuah representasi umum dari metode yang digunakan untuk memproduksi
antibodimonoclonal
Protein mieloma adalah protein/imunoglobulin yang diproduksi neoplasma sel plasma.
Tumor ini tumbuh tanpa kontrol dan dan imunoglobulin tersebut ditemukan dalam
jumlah besar pada pasien dengan mieloma. Bila sel B tunggal menjadi ganas, semua
antibodi adalah identik

Gambar 2. Pembentukan antibodi monoklonal

Sel plasma yang diambil dari darah tidak akan tumbuh dalam biakan jaringan dan akan
mati dalam beberapa hari, sebaliknya sel mieloma akan tumbuh terus menerus dalam
biakan jaringan. Satu sel plasma dan satu sel mieloma dapat difusikan menjadi satu sel
yang disebut hibridoma yang mempunyai sifat dari kedua sel asalnya dan akan
membentuk antibodi monoclonal. Dalam antibodi monoclonal semua molekulnya
adalah identik.
Penemuan
Ide dari " peluru ajaib "pertama kali diusulkan oleh Paul Ehrlich , yang, pada awal abad
ke-20, mendalilkan bahwa, jika suatu senyawa bisa dibuat yang selektif ditargetkan
organisme penyebab penyakit, maka racun untuk organisme yang dapat dikirim
bersama dengan agen selektivitas. Dia dan Elie Metchnikoff menerima Hadiah Nobel
1908 untuk Fisiologi atau Kedokteran untuk pekerjaan ini, yang menyebabkan suatu
pengobatan sifilis efektif dengan 1910.
Pada 1970-an, B-sel kanker multiple myeloma dikenal, dan itu dimengerti bahwa
kanker sel-B semua menghasilkan satu jenis antibodi (a paraprotein ). Ini digunakan
untuk mempelajari struktur antibodi, tapi itu belum mungkin untuk memproduksi
antibodi yang identik yang diberikan khusus untuk antigen .
Produksi antibodi monoklonal yang melibatkan sel-sel tikus manusia-hibrida
digambarkan oleh Jerrold Schwaber pada tahun 1973 dan tetap banyak dikutip di antara
mereka yang menggunakan manusia yang diturunkan hybridomas , tetapi klaim untuk
prioritas telah kontroversial. Sebuah sejarah ilmu makalah tentang subjek memberikan

beberapa kredit untuk Schwaber untuk menemukan teknik yang banyak dikutip, tetapi
berhenti pendek menunjukkan bahwa ia telah ditipu. Penemuan dikandung oleh George
Pieczenik , dengan John Sedat, Elizabeth Blackburn ' Suami, sebagai saksi dan
dikurangi untuk berlatih dengan Cotton dan Milstein, dan kemudian oleh Kohler dan
Milstein. Georges Khler , Csar Milstein , dan Niels Kaj Jerne pada tahun 1975; yang
berbagi Penghargaan Nobel dalam Fisiologi atau Kedokteran pada tahun 1984 untuk
penemuan. Ide utama adalah untuk menggunakan garis sel-sel myeloma yang telah
kehilangan kemampuan mereka untuk mensekresi antibodi, datang dengan sebuah
teknik untuk sekering sel-sel dengan sehat memproduksi antibodi B-sel, dan dapat
memilih untuk sel berhasil menyatu.
Pada tahun 1988, Greg Musim Dingin dan timnya merintis teknik untuk memanusiakan
antibodi monoklonal, menghilangkan reaksi yang antibodi monoklonal yang disebabkan
pada beberapa pasien.

PERANAN ANTIBODI MONOCLONAL DALAM LABORATORIUM

Produksi
Antibodi monoklonal merupakan bahan standar yang banyak digunakan dalam
laboratorium untuk mengidentifikasi berbagai jenis sel, typing darah dan menegakkan
diagnosis berbagai penyakit. Kemajuan sekarang telah memungkinkan untuk
memproduksi antibodi monoklonal manusia melalui rekayasa genetik dalam jumlah
yang besar untuk digunakan dalam terapi berbagai penyakit.
Antibodi tersebut dapat disintesis di laboratorium dari hibridroma yaitu sel yang
dihasilkan dengan menyatukan dua sel yang berlainan. Hibridroma merupakan cell line
sel hibrid yang diperoleh dari fusi sel tumor limfoid dengan limfosit yang memperoleh
sifat abadi dari sel tumor dan fungsi efektor (sekresi antibodi monoklonal) limfosit.
Dengan teknis imunofluoresensi yang menggunakan antibodi monoklonal, jumlah sel
B, sel T dan subset sel T dapat dibedakan satu dari yang lainnya dan dihitung di bawah
mikroskop fluoresen atau cell sorter.

Cell line yang memproduksi antibiotik yang diinginkan, monospesifik dan monoklonal
telah dapat dikembangkan. Prosedur tersebut telah distandarisasi untuk memproduksi
antibodi dalam jumlah besar yang diperlukan baik untuk penelitian maupun klinis.
Dasarnya ialah membuat sel hibrid dengan fusi sel imortal (sel tumor mieloma) dengan
sel B yang spesifik dari hewan/orang yang diimunisasi.
Hibridroma yang dihasilkan hidup terus dan memproduksi antibodi yang homogen dan
spesifik. Kegunaan antibodi tersebut tergantung dari spesifisitasnya. Antibodi
monoclonal (mAb) terhadap jenis antigen yang diinginkan sudah dapat dibuat dalam
jumlah besar. mAb telah merupakan reagens dalam riset dasar dan memiliki nilai
diagnostik dan aplikasi klinis.

Gambar 3. Para peneliti melihat slide budaya sel yang membuat antibodi monoklonal.
Ini adalah tumbuh di laboratorium dan para peneliti menganalisis produk untuk pilih
yang paling menjanjikan dari mereka.Antibodi monoklonal dapat tumbuh dalam jumlah
terbatas dalam botol yang ditunjukkan pada gambar ini.

Gambar 4. Teknisi tangan mengisi sumur dengan cairan untuk tes penelitian.Tes ini
melibatkan persiapan budaya di mana hibrida ditanam dalam jumlah besar untuk
menghasilkan antibodi yang diinginkan. Hal ini dilakukan dengan menggabungkan
mieloma sel dan tikuslimfosit untuk membentuk sel hibrid ( hibridoma ). Mandi teknisi
laboratorium disiapkan slide dalam suatu larutan. Teknisi menyiapkan slide ini
antibodi monoklonal bagi para peneliti. Sel-sel yang ditampilkan adalah pelabelan
manusia kanker payudara .

Produksi sel hibridoma

Antibodi monoklonal biasanya dibuat oleh sel-sel myeloma sekering dengan sel limpa
dari tikus yang telah diimunisasi dengan antigen yang diinginkan.Namun, kemajuan
terbaru telah memungkinkan penggunaan kelinci B-sel untuk membentuk hibridoma
Kelinci .glikol Polyethylene digunakan untuk sekering membran plasma yang
berdekatan, namun tingkat keberhasilan rendah sehingga menengah selektif di mana
hanya sel-sel bisa tumbuh menyatu digunakan. Hal ini karena sel-sel myeloma telah
kehilangan

kemampuan

untuk

mensintesis

hipoksantin-guanin-phosphoribosyl

transferase (HGPRT), suatu enzim yang diperlukan untuk sintesis penyelamatan asam
nukleat. Tidak adanya HGPRT tidak masalah bagi sel-sel ini kecuali sintesis de novo
purin jalur juga terganggu. Dengan mengekspos sel untuk aminopterin (analog asam
folat, yang menghambat reduktase dihydrofolate , DHFR), mereka tidak bisa
menggunakan jalur de novo dan menjadi sepenuhnya auksotrofik rangkap untuk asam
nukleat yang membutuhkan suplemen untuk bertahan hidup.
Media kultur selektif disebut media HAT karena mengandung hipoksantin ,
aminopterin, dan timidin . Media ini adalah selektif untuk menyatu ( hibridoma ) sel.
Sel-sel myeloma tidak disatukan tidak dapat berkembang karena kurangnya HGPRT,
dan dengan demikian tidak dapat mereplikasi DNA mereka. Sel limpa tidak disatukan
tidak dapat tumbuh tanpa batas karena hidup yang terbatas mereka.Sel hibrida hanya
menyatu, disebut sebagai hybridomas, dapat tumbuh tanpa batas dalam media karena
sel limpa mitra pasokan HGPRT dan mitra myeloma memiliki sifat yang membuatnya
abadi (karena merupakan sel kanker).
Ini campuran sel kemudian diencerkan dan klon yang tumbuh dari sel induk tunggal
pada microtitre sumur. Antibodi yang disekresikan oleh klon yang berbeda kemudian

diuji untuk kemampuan mereka untuk mengikat antigen (dengan tes seperti ELISA atau
Assay Microarray Antigen) atau immuno- dot blot . Klon paling produktif dan stabil ini
kemudian dipilih untuk penggunaan masa depan.
Para hybridomas dapat tumbuh tanpa batas dalam kultur sel medium.They cocok juga
bisa disuntikkan ke tikus (dalam rongga peritoneal , sekitar usus). Di sana, mereka
menghasilkan tumor mensekresi cairan yang kaya antibodi yang disebut ascites cairan.
Media harus diperkaya selama-vitro seleksi untuk pertumbuhan hibridoma lebih
nikmat.Hal ini dapat dicapai dengan menggunakan lapisan sel-sel feeder fibrocyte atau
media suplemen seperti briclone .Budaya-menengah dikondisikan oleh makrofag juga
dapat digunakan. Produksi dalam kultur sel biasanya lebih disukai sebagai teknik
ascites adalah menyakitkan untuk hewan. Dimana teknik alternatif ada, metode ini
(ascites) dianggap tidak etis .

Pemurnian antibodi monoklonal

Setelah mendapat sampel baik media hybridomas budidaya atau sampel cairan asites,
antibodi yang diinginkan harus diekstrak. Kontaminan dalam sampel kultur sel akan
terdiri terutama dari komponen media seperti faktor pertumbuhan, hormon, dan
transferrins. Sebaliknya, dalam sampel vivo cenderung memiliki antibodi host,
protease, nucleases, asam nukleat, dan virus.Dalam kedua kasus, sekresi lainnya oleh
hybridomas seperti sitokin dapat hadir.Mungkin juga ada kontaminasi bakteri dan,
sebagai hasilnya, endotoksin yang disekresikan oleh bakteri. Tergantung pada
kompleksitas media diperlukan dalam kultur sel, dan dengan demikian kontaminan
dalam pertanyaan, satu metode (in vivo atau in vitro) mungkin lebih baik daripada yang
lain.
Sampel pertama AC, atau dipersiapkan untuk pemurnian. Sel, sel puing-puing, lipid,
dan bahan kental yang pertama dihilangkan, biasanya dengan sentrifugasi diikuti oleh
filtrasi dengan filter 0,45 pM. Partikel-partikel yang besar dapat menyebabkan
fenomena yang disebut membran fouling dalam langkah-langkah pemurnian
nanti.Selain itu, konsentrasi produk dalam sampel mungkin tidak cukup, terutama
dalam kasus di mana antibodi yang diinginkan adalah salah satu yang dihasilkan oleh

garis sel mensekresi rendah. Sampel Oleh karena itu kental dengan ultrafiltrasi atau
dialisis .
Sebagian besar kotoran biasanya anion bermuatan seperti asam nukleat dan
endotoksin.Ini

sering dipisahkan

dengan

kromatografi

pertukaran

ion

.Baik

kromatografi penukar kation digunakan pada pH yang cukup rendah bahwa antibodi
mengikat ke kolom yang diinginkan sementara anion mengalir melalui, atau
kromatografi anion exchange digunakan pada pH yang cukup tinggi yang diinginkan
antibodi mengalir melalui kolom sementara anion mengikat untuk itu.Berbagai protein
juga dapat dipisahkan bersama dengan mereka anion berdasarkan titik isoelektrik (PI).
Sebagai contoh, albumin memiliki PI 4,8, yang secara signifikan lebih rendah dari
antibodi monoklonal yang paling, yang memiliki PI sebesar 6,1. Dengan kata lain, pada
suatu pH tertentu, biaya rata-rata molekul albumin mungkin akan lebih negatif.
transferin , di sisi lain, memiliki PI 5,9, sehingga tidak dapat dengan mudah dipisahkan
dengan metode ini. Perbedaan di Pi minimal 1 diperlukan untuk pemisahan yang baik.
Transferin bukannya dapat dihilangkan dengan kromatografi eksklusi ukuran
.Keuntungan dari metode pemurnian adalah bahwa itu adalah salah satu teknik
kromatografi lebih handal.Karena kita berhadapan dengan protein, sifat seperti biaya
dan afinitas tidak konsisten dan bervariasi dengan pH sebagai molekul yang
terprotonasi dan deprotonated, sementara ukuran tetap relatif konstan. Meskipun
demikian, ia memiliki kekurangan seperti resolusi rendah, kapasitas rendah dan waktu
elusi rendah.
A, lebih cepat satu langkah metode pemisahan adalah Protein A / Gafinitas
kromatografi . Antibodi selektif mengikat Protein A / G, sehingga tingkat tinggi
kemurnian (umumnya> 80%) diperoleh.Namun, metode ini dapat menjadi masalah bagi
antibodi yang mudah rusak, seperti kondisi yang keras umumnya digunakan.Sebuah pH
rendah dapat mematahkan ikatan untuk menghapus antibodi dari kolom.Selain mungkin
mempengaruhi produk, pH rendah dapat menyebabkan Protein A / G sendiri bocor dari
kolom dan muncul dalam sampel dielusi.Sistem buffer lembut elusi yang
mempekerjakan konsentrasi garam yang tinggi juga tersedia untuk menghindari
mengekspos antibodi sensitif terhadap pH rendah. Biaya juga merupakan pertimbangan
penting dengan metode ini karena bergerak Protein A / G adalah resin lebih mahal.

Untuk mencapai kemurnian maksimal dalam satu langkah, pemurnian afinitas dapat
dilakukan, dengan menggunakan antigen untuk memberikan spesifisitas indah untuk
antibodi.Dalam metode ini, antigen yang digunakan untuk menghasilkan antibodi
secara kovalen melekat pada dukungan yang agarosa. Jika antigen peptida, itu biasanya
disintesis dengan terminal sistein , yang memungkinkan lampiran selektif dengan
protein pembawa, seperti KLH selama pengembangan dan dukungan untuk pemurnian.
Antibodi yang mengandung media kemudian diinkubasi dengan antigen bergerak, baik
dalam batch atau sebagai antibodi dilewatkan melalui kolom, di mana ia selektif
mengikat dan dapat dipertahankan sementara kotoran dicuci pergi. Sebuah elusi dengan
buffer pH rendah atau buffer, lebih lembut garam elusi tinggi kemudian digunakan
untuk memulihkan antibodi dimurnikan dari mendukung.
Untuk lebih memilih untuk antibodi, antibodi dapat diendapkan keluar menggunakan
natrium sulfat atau amonium sulfat . Antibodi endapan pada konsentrasi rendah garam,
sementara protein lainnya yang paling endapan pada konsentrasi yang lebih
tinggi.Tingkat yang sesuai garam ditambahkan dalam rangka untuk mencapai
pemisahan terbaik.Kelebihan garam kemudian harus dihilangkan dengan metode
desalting seperti dialisis .
Kemurnian akhir dapat dianalisis menggunakan kromatogram . Setiap kotoran akan
menghasilkan puncak, dan volume dibawah puncak menunjukkan jumlah pengotor.
Atau, elektroforesis gel dan elektroforesis kapiler dapat dilakukan. Kotoran akan
menghasilkan band-band dari berbagai intensitas, tergantung pada berapa banyak
pengotor hadir.

Rekombinan
Produksi rekombinan monoklonal antibodi melibatkan teknologi, disebut sebagai
repertoar kloning atau fag tampilan / layar ragi . Rekombinan rekayasa antibodi
melibatkan penggunaan virus atau ragi untuk membuat antibodi, bukan tikus. Teknik ini
bergantung pada kloning cepat dari segmen gen imunoglobulin untuk membuat
perpustakaan antibodi dengan sedikit berbeda asam amino urutan dari yang antibodi
dengan kekhususan yang diinginkan dapat dipilih. Para perpustakaan fag antibodi
adalah varian dari perpustakaan fag antigen pertama diciptakan oleh George Pieczenik
Teknik-teknik ini dapat digunakan untuk meningkatkan spesifisitas antibodi yang

mengenali antigen, stabilitas mereka dalam berbagai kondisi lingkungan, keberhasilan

terapi mereka, dan pendeteksian mereka dalam aplikasi diagnostik. kamar Fermentasi
telah digunakan untuk memproduksi antibodi pada skala besar.

Antibodi Chimeric
Awalnya, masalah utama untuk penggunaan terapi antibodi monoklonal dalam
kedokteran adalah bahwa metode awal yang digunakan untuk menghasilkan mereka
menghasilkan mouse, tidak antibodi manusia. Sementara yang strukturnya sama,
perbedaan antara keduanya cukup untuk memanggil respon imun terjadi ketika murine
antibodi monoklonal yang disuntikkan ke manusia dan mengakibatkan penghapusan
yang cepat dari darah, efek inflamasi sistemik, dan produksi manusia anti-tikus antibodi
(HAMA)
Dalam upaya untuk mengatasi kendala ini, pendekatan menggunakan DNA rekombinan
telah dieksplorasi sejak akhir 1980-an. Dalam satu pendekatan, mouse pengkodean
DNA bagian pengikatan antibodi monoklonal yang bergabung dengan manusia
memproduksi antibodi DNA dalam sel-sel hidup, dan ekspresi ini chimeric DNA
melalui kultur sel menghasilkan sebagian-tikus, sebagian manusia antibodi monoklonal.
Untuk produk ini, istilah deskriptif "chimeric" dan "dimanusiakan" antibodi
monoklonal telah digunakan untuk mencerminkan kombinasi mouse dan sumber DNA
manusia yang digunakan dalam proses rekombinan.

Antibodi manusia 'Penuh' monoklonal

Sejak penemuan bahwa antibodi monoklonal dapat dihasilkan in-vitro, para ilmuwan
telah menargetkan penciptaan 'sepenuhnya' antibodi manusia untuk menghindari
beberapa efek samping antibodi manusiawi dan chimeric. Dua pendekatan yang
berhasil diidentifikasi - fag tampilan yang dihasilkan antibodi dan tikus rekayasa
genetika untuk memproduksi antibodi yang lebih mirip manusia.
Salah satu organisasi komersial yang paling berhasil balik terapi antibodi monoklonal
adalah antibodi Cambridge Teknologi (CAT). Para ilmuwan di CAT menunjukkan
bahwa tampilan fag dapat digunakan seperti bahwa domain antibodi variabel dapat
dinyatakan pada antibodi fag berfilamen.

CAT mengembangkan teknologi tampilan mereka lebih lanjut menjadi beberapa,

antibodi alat penemuan dipatenkan genomik / fungsional, yang diberi nama Proximol TM
dan ProAb

TM.

ProAb diumumkan pada Desember 1997 dan melibatkan skrining

highthroughput perpustakaan antibodi terhadap jaringan yang sakit dan non-sakit,

sementara Proximol menggunakan reaksi enzimatik radikal bebas dengan molekul label
dalam kedekatan dengan protein tertentu.Antibodi monoklonal telah dihasilkan dan
disetujui untuk mengobati: kanker , penyakit jantung , penyakit inflamasi , degenerasi
makula , penolakan transplantasi , multiple sclerosis , dan infeksi virus
PERANAN ANTIBODI MONOCLONAL DALAM DUNIA KEDOKTERAN
Tes Diagnostik
Setelah antibodi monoklonal untuk suatu zat tertentu telah diproduksi, mereka dapat
digunakan untuk mendeteksi keberadaan zat ini. Para Western blot tes dan immuno dot
blot tes mendeteksi protein pada membran. Mereka juga sangat berguna dalam
imunohistokimia , yang mendeteksi antigen dalam bagian jaringan tetap dan
imunofluoresensi tes, yang mendeteksi substansi di bagian jaringan beku atau dalam sel
hidup.

Terapi pengobatan
Pengobatan kanker
Salah satu kemungkinan pengobatan untuk kanker melibatkan antibodi monoklonal
yang mengikat hanya untuk kanker sel-spesifik antigen dan menginduksi respon
imunologi terhadap sel kanker target. MAb tersebut juga dapat dimodifikasi untuk
pengiriman dari toksin , radioisotop , sitokin atau konjugasi aktif lainnya, namun juga
memungkinkan untuk merancang antibodi bispecific yang dapat mengikat dengan
mereka daerah Fab baik untuk menargetkan antigen dan ke sel efektor konjugasi atau.
Bahkan, setiap antibodi utuh dapat mengikat reseptor sel atau protein lain dengan
perusahaan daerah Fc .

Gambar 5. Antibodi monoklonal untuk kanker.ADEPT , antibodi diarahkan enzim

terapi prodrug; ADCC , antibodi tergantung sel-dimediasi sitotoksisitas, CDC,
melengkapi tergantung cytotoxicity; MAb, antibodi monoklonal; scFv, Fv rantai
tunggal fragmen.
Penyakit-penyakit autoimun
Antibodi monoklonal digunakan untuk penyakit autoimun termasuk infliximab dan
adalimumab , yang efektif dalam rheumatoid arthritis , penyakit Crohn dan kolitis
ulserativa oleh kemampuan mereka untuk mengikat dan menghambat TNF- .
Basiliximab dan daclizumab menghambat IL-2 pada diaktifkan sel T dan sehingga
membantu mencegah akut penolakan transplantasi ginjal. Omalizumab menghambat
manusia imunoglobulin E (IgE) dan berguna dalam moderat hingga berat alergi asma.
Berikut adalah contoh antibodi monoklonal klinis penting.
Utama
kategori
Antiinflamasi

Jenis

infliximab

adalimumab

Aplikasi

rheumatoid arthritis

Penyakit Crohn

Kolitis ulseratif

rheumatoid arthritis

Penyakit Crohn

Kolitis ulseratif

Akut penolakan transplantasi ginjal

basiliximab

Mekanisme / Sasaran

Modus

menghambat TNF-

chimeric

menghambat TNF-

manusia

menghambat IL-2 pada diaktifkan chimeric

sel T

daclizumab

Akut penolakan transplantasi ginjal

menghambat IL-2 pada diaktifkan

manusiawi
sel T

omalizumab

moderat sampai berat alergi asma

menghambat manusia imunoglobulin

manusiawi
E (IgE)

gemtuzumab

kambuh leukemia myeloid akut

target
sel
myeloid
antigen
manusiawi
permukaan CD33 pada leukemia sel

alemtuzumab[

Sel B leukemia

sasaran antigen CD52 pada T- dan

manusiawi
B-limfosit

rituximab

non-Hodgkin limfoma

target phosphoprotein CD20 pada

chimeric
limfosit B

trastuzumab

kanker payudara dengan overekspresi

target HER2/neu (ERBB2) reseptor manusiawi
HER2/neu

Disetujui
pada
skuamosa , Glioma

Uji klinis
berlangsung

cetuximab

Anti-kanker
karsinoma

sel

indikasi

lain

Disetujui
pada
karsinoma
skuamosa , karsinoma kolorektal

sel

bevacizumab

palivizumab

abciximab

nimotuzumab

EGFR inhibitor

Manusiawi

EGFR inhibitor

Chimeric

Anti-angiogenik terapi kanker

menghambat VEGF

manusiawi

RSV infeksi pada anak-anak

menghambat fusi RSV (F) protein

manusiawi

Mencegah koagulasi dalam angioplasti menghambat reseptor GpIIb / IIIa

chimeric
pada trombosit
koroner

untuk

Lainnya

POLICLONAL ANTIBODI
Pendahuluan
Antibodi policlonal merupakan bahan yang dapat mengaktifkan berbagai klon limfosit
yang tidak tergantung dari spesifisitas antigen. Contohnya : anti IgM untuk sel B dan
anti-CD3, superantigen bakteri dan PHA (Phitohemaglutinin) untuk sel T.
Antibodi poliklonal (atau antiserum) adalah antibodi yang diperoleh dari berbagai sel B
sumber daya. Mereka adalah kombinasi dari molekul imunoglobulin disekresikan
terhadap spesifik antigen , masing-masing yang berbeda mengidentifikasi epitop
Bila antigen tertentu dimasukan ke dalam sistem imun hewan percobaan, semua sel B
yang mengenal banyak epitop pada antigen akan dirangsang dan memproduksi antibodi.
Darah yang diambil dari hewan tersebut akan mengandung antibodi yang multipel yang
akan bereaksi dengan setiap epitop. Serum tersebut disebut policlonal oleh karena
mengandung produk yang berasal dari banyak klon sel B. Menurnikan antibodi yand
diperlukan dari serum tersebut sangatlah sulit.
Epitop atau determinan merupakan bagian spesifik makromolekul antigen yang
berikatan dengan antibodi. Determinan/epitop merupakan bagian peptida yang diikat
molekul MHC (Major HistocmpabilityComplex) untuk dikenal TCR (T Cell Reseptor)

PERANAN ANTIBODI MONOCLONAL DALAM LABORATORIUM

Produksi
Antibodi ini biasanya diproduksi oleh inokulasi dari yang cocok mamalia , seperti
kelinci, tikus atau kambing. Mamalia yang lebih besar sering lebih disukai sebagai
jumlah serum yang dapat dikumpulkan lebih besar.Sebuah antigen disuntikkan ke
dalam

mamalia.

Hal

ini

menyebabkan

B-

limfosit

untuk

menghasilkan

IgGimunoglobulin spesifik untuk antigen. Ini poliklonalIgG dimurnikan dari mamalia

serum .Sebaliknya, antibodi monoklonal berasal dari garis sel tunggal.
Ada banyak metodologi untuk produksi antibodi poliklonal pada hewan laboratorium.
Pedoman kelembagaan yang mengatur penggunaan hewan dan prosedur yang berkaitan
dengan metodologi ini umumnya berorientasi pada pertimbangan manusiawi dan
perilaku yang tepat untuk adjuvant (agen yang memodifikasi efek dari agen lain
sementara memiliki sedikit jika ada efek langsung saat diberikan sendiri) digunakan. Ini
termasuk seleksi ajuvan, rute dan situs administrasi, volume injeksi per situs dan jumlah
situs per hewan.Kebijakan kelembagaan umumnya mencakup volume diijinkan darah
per tindakan pencegahan keselamatan, termasuk pengumpulan dan menahan diri yang
tepat dan obat penenang atau anestesi hewan untuk pencegahan cedera pada hewan atau
personil.
Tujuan utama dari produksi antibodi pada hewan laboratorium untuk mendapatkan
tinggi titer , afinitas tinggi antiserum untuk digunakan dalam eksperimen atau tes
diagnostik. Adjuvant digunakan untuk memperbaiki atau meningkatkan respon imun
terhadap antigen.Kebanyakan adjuvant memberikan suntikan depot situs, antigen yang
memungkinkan untuk rilis lambat antigen ke kelenjar getah bening pengeringan.

Gambar 6. Pembentukan antibodi policlonal

Gambar 7.

Poliklonal

respon oleh sel B

melawan

epitop linier
Banyak

juga

mengandung

adjuvant

atau bertindak langsung sebagai:

1. surfaktan yang mempromosikan konsentrasi molekul protein antigen melalui
area permukaan besar, dan
2. imunostimulan molekul atau properti. Adjuvant umumnya digunakan dengan
antigen protein larut untuk meningkatkan titer antibodi dan menyebabkan
respon berkepanjangan dengan memori yang menyertainya.
Antibodi adalah saat ini juga sedang diproduksi dari isolasi manusia B-limfosit untuk ns
miskin.Antigen protein yang paling kompleks menginduksi beberapa klon sel-B selama
respon kekebalan tubuh, sehingga respon poliklonal.Respon imun non-protein antigen
umumnya

buruk

atau

ditingkatkan

oleh

adjuvant

dan

tidak

ada

memori

sistem.menghasilkan antibodi spesifik poliklonal rekombinan. Perusahaan bioteknologi,

Symphogen , menghasilkan jenis antibodi untuk aplikasi terapeutik.Mereka adalah
perusahaan penelitian pertama untuk mengembangkan obat antibodi poliklonal
rekombinan untuk mencapai tahap dua percobaan.Produksi ini mencegah penularan
virus dan prion.
Seleksi Hewan
Hewan yang sering digunakan untuk produksi antibodi poliklonal termasuk ayam,
kambing, babi guinea, hamster, kuda, tikus, tikus, dan domba.Namun, kelinci adalah
hewan laboratorium yang paling umum digunakan untuk tujuan ini. Hewan seleksi
harus didasarkan pada:
1. jumlah antibodi yang diperlukan,
2. hubungan antara donor antigen dan antibodi produser penerima (umumnya
hubungan filogenetik yang lebih jauh, semakin besar potensi untuk respon
antibodi titer tinggi) dan
3. karakteristik yang diperlukan [misalnya, kelas, subkelas (isotipe), melengkapi
sifat memperbaiki] dari antibodi yang akan dibuat. Imunisasi dan phlebotomies
adalah stres terkait dan, setidaknya ketika menggunakan kelinci dan hewan
pengerat, spesifik patogen gratis (SPF) hewan lebih disukai. Penggunaan hewan
seperti secara dramatis dapat mengurangi morbiditas dan kematian akibat
organisme patogen, terutama Pasteurella multocida pada kelinci.
Kambing atau kuda yang umumnya digunakan ketika jumlah besar antiserum yang
diperlukan.Banyak peneliti mendukung ayam karena jarak filogenetik mereka dari
mamalia. Ayam mentransfer jumlah tinggi IgY (IgG) ke dalam kuning telur dan
pemanenan antibodi dari telur menghilangkan kebutuhan untuk prosedur invasif
perdarahan. Telur satu minggu dapat mengandung antibodi 10 kali lebih besar daripada
volume darah kelinci yang diperoleh dari satu pendarahan mingguan.Namun, ada
beberapa kelemahan ketika menggunakan antibodi ayam tertentu diturunkan dalam
immunoassay.IgY ayam tidak memperbaiki komponen C1 mamalia melengkapi dan
tidak melakukan sebagai antibodi pengendap menggunakan solusi standar.

Meskipun tikus yang paling sering digunakan untuk produksi antibodi monoklonal,
ukurannya yang kecil biasanya mencegah penggunaannya untuk jumlah yang cukup
dari poliklonal, antibodi serum.Namun, antibodi poliklonal pada tikus dapat
dikumpulkan dari cairan asites menggunakan salah satu dari sejumlah asites
memproduksi metodologi.
Bila menggunakan kelinci, hewan dewasa muda (2,5-3,0 kg atau 5,5- 6,5) harus
digunakan untuk imunisasi dasar karena respon antibodi yang kuat. Puncak fungsi
kekebalan pada pubertas dan tanggapan utama untuk antigen baru menurun dengan
usia. Kelinci betina umumnya lebih disukai karena mereka lebih jinak dan dilaporkan
untuk me-mount respon kekebalan yang lebih kuat daripada laki-laki. Setidaknya dua
hewan per antigen harus digunakan ketika menggunakan hewan outbred. Prinsip ini
mengurangi potensi kegagalan total yang dihasilkan dari tidak respon terhadap antigen
individu hewan.
Persiapan Antigen
Ukuran, tingkat agregasi dan kelahiran relatif dari antigen protein semua dapat secara
dramatis mempengaruhi kualitas dan kuantitas antibodi yang dihasilkan. Polipeptida
kecil (<10 ku ) dan non-protein antigen umumnya perlu terkonjugasi atau silang untuk
yang lebih besar, imunogenik, protein pembawa untuk meningkatkan imunogenisitas
dan menyediakan sel T epitop. Umumnya, semakin besar protein imunogenik yang
lebih baik.Protein lebih besar, bahkan dalam jumlah yang lebih kecil, biasanya hasilnya
dalam keterlibatan yang lebih baik dari sel-sel antigen antigen menyajikan pengolahan
untuk respon kekebalan yang memuaskan.Injeksi larut, non-agregat protein memiliki
probabilitas yang lebih tinggi toleransi merangsang daripada respon antibodi yang
memuaskan.
Limpet lubang kunci hemocyanin (KLH) dan bovine serum albumin dua protein
pembawa digunakan secara luas.Poli-L-lisin juga telah berhasil digunakan sebagai
tulang punggung untuk peptida.Meskipun penggunaan Poli-L-lisin mengurangi atau
menghilangkan produksi antibodi terhadap protein asing, dapat menyebabkan
kegagalan peptida-diinduksi produksi antibodi.Baru-baru ini, liposom juga telah
berhasil digunakan untuk pengiriman peptida kecil dan teknik ini adalah sebuah
alternatif untuk pengiriman dengan adjuvan emulsi berminyak.

Kuantitas Antigen
Pemilihan jumlah antigen untuk imunisasi bervariasi dengan sifat antigen dan adjuvant
yang dipilih.Secara umum, mikrogram untuk jumlah miligram protein dalam ajuvan
diperlukan untuk memperoleh antibodi titer tinggi.Dosis antigen umumnya spesies,
bukan berat badan, yang terkait."Jendela" yang bernama imunogenisitas pada setiap
spesies yang luas, tetapi antigen terlalu banyak atau terlalu sedikit dapat menyebabkan
penyimpangan toleransi, penekanan atau kebal terhadap imunitas seluler daripada
respon humoral yang memuaskan. Kadar antigen optimal dan biasanya protein untuk
mengimunisasi spesies tertentu telah dilaporkan dalam rentang berikut:
1. kelinci, 5-10 mg;
2. tikus, 10-200 mg;
3. guinea pig, 50-500 mg; dan
4. kambing, 250-5000 mg.
Optimal "priming" dosis dilaporkan pada akhir rendah kisaran masing-masing.
Afinitas antibodi serum meningkat dengan waktu (bulan) setelah injeksi antigen-ajuvan
campuran dan sebagai antigen dalam sistem menurun. Dosis antigen banyak digunakan
untuk "booster" atau imunisasi sekunder biasanya satu setengah untuk sama dengan
dosis priming. Antigen harus bebas dari produk samping preparatif dan bahan kimia
seperti gel poliakrilamida, SDS, urea, endotoksin, partikulat dan ekstrem dari pH.
Antibodi Peptida
Bila peptida yang sedang digunakan untuk menghasilkan antibodi, adalah sangat
penting untuk merancang antigen benar.Ada beberapa sumber yang dapat membantu
dalam desain serta perusahaan yang menawarkan layanan ini. Expasy telah agregat satu
set alat publik di bawah nya ProtScale halaman yang membutuhkan beberapa tingkat
pengetahuan pengguna untuk menavigasi. Untuk alat peptida yang lebih sederhana
mencetak ada profiler Antigen alat yang tersedia yang akan memungkinkan Anda untuk
skor individu berdasarkan urutan peptida pada database pemetaan epitop hubungan

immunogens sebelumnya digunakan untuk menghasilkan antibodi. Akhirnya, sebagai

peptida aturan umum harus mengikuti beberapa kriteria dasar.
Ketika memeriksa peptida untuk sintesis dan imunisasi, dianjurkan bahwa residu
tertentu dan urutan dihindari karena masalah sintesis potensial. Ini termasuk beberapa
karakteristik yang lebih umum:

Sangat panjang mengulangi dari asam amino yang sama (misalnya RRRR)

Serin (S), treonin (T), Alanin (A), dan (V) valine doublet

Mengakhiri atau memulai urutan dengan prolin (P)

Glutamin (Q) atau Asparagin (N) di ujung n-

Peptida lebih berbobot dengan residu hidrofobik (misalnya V, A L, I, dll ...)

Reaktivitas
Harus mempertimbangkan status kelahiran antigen protein ketika digunakan sebagai
immunogens dan reaksi dengan antibodi yang diproduksi. Antibodi bereaksi dengan
protein asli terbaik dengan protein asli dan antibodi untuk protein didenaturasi bereaksi
dengan protein didenaturasi terbaik. Jika menimbulkan antibodi yang akan digunakan
pada bercak membran (protein mengalami kondisi denaturasi) maka harus dibuat
antibodi terhadap protein didenaturasi. Di sisi lain, jika antibodi yang akan digunakan
untuk bereaksi dengan protein asli atau memblokir situs protein yang aktif, maka harus
dibuat antibodi terhadap protein asli. Adjuvant sering dapat mengubah protein
kelahiran. Umumnya antigen protein, terserap dalam minyak dalam air preformed
emulsi ajuvan, mempertahankan struktur protein lebih besar daripada yang asli dalam
air-dalam minyak emulsi.
Asepticity
Antigen harus selalu siap menggunakan teknik yang memastikan bahwa mereka bebas
dari kontaminasi mikroba. Persiapan antigen protein yang paling dapat disterilisasi

oleh bagian melalui filter 0.22u. Abses septik sering terjadi pada tempat inokulasi
hewan ketika persiapan yang terkontaminasi yang digunakan. Hal ini dapat
mengakibatkan kegagalan imunisasi terhadap antigen yang ditargetkan.
Adjuvan
Ada banyak tersedia secara komersial adjuvant imunologi . Pemilihan adjuvant tertentu
atau jenis bervariasi tergantung pada apakah mereka akan digunakan untuk produksi
penelitian dan antibodi atau dalam pengembangan vaksin. Adjuvant digunakan untuk
vaksin hanya perlu untuk menghasilkan antibodi pelindung dan memori sistemik baik
sedangkan untuk produksi antiserum perlu cepat menginduksi titer tinggi, antibodi
aviditas tinggi.Tidak ajuvan tunggal ideal untuk semua tujuan dan semua memiliki
kelebihan dan kekurangan.Ajuvan digunakan umumnya disertai oleh efek samping yang
tidak diinginkan dari berbagai keparahan dan durasi.Penelitian tentang adjuvant baru
berfokus pada zat yang memiliki toksisitas minimal sementara tetap mempertahankan
immunostimulation maksimum. Penyidik harus selalu sadar akan rasa sakit dan
kesusahan potensial terkait dengan penggunaan ajuvan pada hewan laboratorium.
Yang adjuvant paling sering digunakan untuk produksi antibodi, Alum Freund, para
Ribi ajuvan Sistem dan Titermax.
Freund adjuvant
Ada dua tipe dasar Freund adjuvant s : s ajuvan Freund lengkap (FCA) dan Freund
Adjuvant Incomplete itu (FIA). FCA adalah emulsi air-dalam-minyak yang melokalisasi
antigen untuk periode rilis hingga 6 bulan.Hal ini diformulasikan dengan minyak
mineral, monoleate mannide surfaktan dan panas membunuh Mycobacterium
tuberculosis, Mycobacterium butyricum atau ekstrak mereka (untuk agregasi makrofag
di situs inokulasi).Ini ajuvan ampuh merangsang baik dimediasi sel dan imunitas
humoral

dengan

induksi

preferensial

antibodi

terhadap

epitop

protein

didenaturasi.Meskipun FCA secara historis ajuvan yang paling banyak digunakan, itu
adalah salah satu agen lebih beracun karena non-metabolizable minyak mineral dan
menginduksi reaksi granulomatosa.Penggunaannya terbatas pada hewan laboratorium
dan harus digunakan hanya dengan antigen yang lemah.Ini tidak boleh digunakan lebih
dari sekali dalam hewan tunggal karena beberapa FCA inokulasi dapat menyebabkan

reaksi sistemik yang berat dan penurunan respon imun. Freund Adjuvant Incomplete
memiliki formulasi yang sama dengan FCA tetapi tidak mengandung Mycobacterium
atau komponennya. FIA biasanya terbatas pada dosis booster antigen karena biasanya
jauh kurang efektif dibandingkan FCA untuk induksi antibodi primer. Freund adjuvant
yang biasanya dicampur dengan bagian yang sama dari persiapan antigen untuk
membentuk emulsi stabil.
Sistem ajuvan Ribi
Adjuvant Ribi adalah minyak-dalam air emulsi mana antigen dicampur dengan volume
kecil minyak metabolizable (squalene) yang kemudian diemulsikan dengan garam yang
mengandung surfaktan Tween 80.Sistem ini juga berisi produk olahan mikobakteri
(kabel

faktor,

dinding

sel

kerangka)

sebagai

imunostimulan

dan

bakteri

monophosphoryl lipid A. Tiga spesies yang berbeda berorientasi formulasi dari sistem
ajuvan yang tersedia.Adjuvant ini berinteraksi dengan membran sel kekebalan
mengakibatkan induksi sitokin, yang meningkatkan antigen serapan, pengolahan dan
presentasi.Sistem adjuvant jauh kurang beracun dan kurang kuat dibandingkan FCA
tetapi umumnya menginduksi antibodi jumlah memuaskan aviditas tinggi terhadap
antigen protein.
Titermax
Titermax merupakan generasi baru adjuvant yang kurang beracun dan tidak
mengandung bahan biologis berasal. Hal ini didasarkan pada campuran surfaktan
bertindak, linier, blok atau rantai kopolimer polyoxypropylene nonionik (POP) dan
polioksietilena (POE). Ini kopolimer kurang toksik dibandingkan banyak bahan
surfaktan lain dan memiliki sifat adjuvant kuat yang mendukung kemotaksis, aktivasi
dan melengkapi produksi antibodi. Titermax ajuvan membentuk emulsi air-dalamminyak

microparticulate

dengan

kopolimer

dan

minyak

metabolizable

squalene.Kopolimer ini dilapisi dengan partikel silika menstabilkan emulsi yang

memungkinkan untuk penggabungan jumlah besar dari berbagai macam bahan
antigenik.Kopolimer aktif adjuvant bentuk permukaan hidrofilik, yang mengaktifkan
komplemen,

sel-sel

kekebalan

tubuh

dan

peningkatan

ekspresi

molekul

histokompatibilitas kelas utama II pada makrofag.Titermax menyajikan antigen dalam

bentuk yang sangat terkonsentrasi ke sistem kekebalan tubuh, yang sering terjadi dalam
titer antibodi yang sebanding atau lebih tinggi dari FCA.
Specol : Specol adalah air dalam minyak ajuvan terbuat dari dimurnikan minyak
mineral . Telah dilaporkan untuk menginduksi respon imun dibandingkan dengan
ajuvan Freund yang pada kelinci dan hewan penelitian lain sambil menghasilkan lesi
histologis lebih sedikit. 9
PERANAN ANTIBODI POLICLONAL DALAM DUNIA KEDOKTERAN
Digoxin kekebalan Fab adalah fragmen antigen pengikatan antibodi poliklonal
dibesarkan untuk digitalis derivatif sebagai hapten yang terikat pada protein dan
digunakan untuk pembalikan mengancam kehidupan digoksin atau digitoxin toksisitas.
Rho (D) immune globulin terbuat dari plasma manusia dikumpulkan disediakan oleh
Rh-negatif donor dengan antibodi terhadap antigen D. Hal ini digunakan untuk
menyediakan kekebalan pasif yang mengikat antigen, mencegah respon imun ibu aktif
yang berpotensi dapat mengakibatkan penyakit hemolitik pada bayi baru lahir .
PERBANDINGAN

ANTIBODI

MONOCLONAL

DAN

ANTIBODI

POLICLONAL
Antibodi poliklonal

Murah untuk menghasilkan

Teknologi yang dibutuhkan

rendah

Keterampilan yang dibutuhkan

rendah

Antibodi monoklonal

Mahal untuk menghasilkan

Teknologi tinggi diperlukan

Pelatihan diperlukan untuk menggunakan teknologi

Skala waktu pendek

Skala waktu yang panjang untuk hybridomas

Menghasilkan sejumlah besar

Dapat menghasilkan sejumlah besar antibodi spesifik

antibodi nonspesifik

Mengakui epitop antigen

beberapa pada salah satu

tetapi mungkin terlalu spesifik

Mengakui hanya satu epitop pada antigen

Dapat batch ke batch yang

Setelah hibridoma dibuat itu adalah sumber konstan

variabilitas

dan terbarukan dan semua batch akan sama

Antibodi monoklonal
Fakta:

Mendeteksi hanya satu epitop pada antigen.

Mereka akan terdiri dari hanya satu subtipe antibodi. Apabila suatu antibodi
sekunder diperlukan untuk deteksi, sebuah antibodi terhadap subclass yang
benar harus dipilih.

Antibodi produksi

Teknologi tinggi diperlukan.

Pelatihan diperlukan untuk teknologi yang digunakan.

Skala waktu yang panjang untuk hybridomas.

Keuntungan:

Setelah hybridomas dibuat itu adalah sumber konstan dan terbarukan dan semua
batch akan sama - berguna untuk konsistensi dan standarisasi prosedur
eksperimental dan hasil

Monoclonals mendeteksi satu epitop antigen hanya pada salah satu yang memiliki
keuntungan sebagai berikut:

Monoclonals biasanya memiliki latar belakang kurang dari pewarnaan bagian

dan sel. Karena mereka lebih khusus mendeteksi satu epitop sasaran, mereka
kurang cenderung untuk bereaksi silang dengan protein lain.

Karena kekhususan mereka, antibodi monoklonal yang sangat baik sebagai

antibodi primer dalam pengujian, atau untuk mendeteksi antigen dalam jaringan,
dan seringkali akan memberikan pewarnaan latar belakang secara signifikan
kurang dari antibodi poliklonal.

Dibandingkan dengan antibodi poliklonal, homogenitas antibodi monoklonal

sangat tinggi. Jika kondisi eksperimental dipertahankan konstan, hasil dari
antibodi monoklonal akan sangat direproduksi, antara percobaan.

Spesifisitas antibodi monoklonal membuat mereka sangat efisien untuk

mengikat antigen dalam campuran molekul terkait, seperti dalam kasus
pemurnian afinitas

Kekurangan:

Mereka dapat menghasilkan sejumlah besar antibodi spesifik tetapi mungkin

terlalu spesifik (misalnya kurang mungkin untuk mendeteksi dalam di berbagai
spesies)

Lebih rentan terhadap hilangnya epitop melalui pengobatan kimia antigen

antibodi poliklonal daripada. Hal ini dapat diimbangi oleh penyatuan dua atau
lebih antibodi monoklonal terhadap antigen yang sama.

Antibodi poliklonal
Fakta:

Mengakui epitop antigen beberapa pada setiap satu. Serum yang diperoleh akan
mengandung campuran heterogen yang kompleks antibodi afinitas yang berbeda

Polyclonals terdiri terutama dari subclass IgG

Peptida immunogens sering digunakan untuk menghasilkan antibodi poliklonal

yang menargetkan epitop yang unik, terutama untuk keluarga protein homologi
yang tinggi

Antibodi produksi:

Murah untuk menghasilkan

Teknologi dan keterampilan yang dibutuhkan untuk produksi rendah

Produksi skala waktu singkat

Antibodi poliklonal yang tidak berguna untuk memeriksa domain yang spesifik
antigen antiserum poliklonal karena biasanya akan mengenali banyak domain

Umum keuntungan:
Polyclonals akan mengenali epitop antigen beberapa pada salah satu yang memiliki
keuntungan sebagai berikut:

Polyclonals dapat membantu memperkuat sinyal dari protein target dengan

tingkat ekspresi yang rendah, sebagai protein target akan mengikat lebih dari
satu molekul antibodi pada beberapa eptitopes. Ini tidak akan menjadi
keuntungan untuk eksperimen kuantifikasi misalnya dalam flow cytometry,
sebagai hasilnya akan menjadi tidak akurat.

Karena pengakuan beberapa epitop, polyclonals dapat memberikan hasil yang

lebih baik di IP / CHIP

Lebih toleran terhadap perubahan kecil dalam antigen, misalnya, polimorfisme,

heterogenitas dari glikosilasi, atau denaturasi sedikit, dari monoklonal
(homogen) antibodi.

Mereka akan mengidentifikasi protein homologi tinggi untuk protein imunogen

atau layar untuk protein target dalam sampel jaringan dari spesies lain daripada
antibodi imunogen Poliklonal misalnya kadang-kadang digunakan ketika sifat
antigen dalam spesies belum teruji tidak diketahui. Hal ini juga membuat
penting untuk memeriksa urutan imunogen untuk reaktivitas silang.

Antibodi poliklonal sering pilihan yang lebih disukai untuk deteksi protein
didenaturasi.

Beberapa epitop umumnya memberikan deteksi yang lebih kuat.

Antibodi poliklonal tidak berguna untuk memeriksa domain yang spesifik

antigen, karena biasanya akan mengenali antiserum banyak domain.

Kekurangan:

Rentan terhadap variabilitas batch ke batch.

Mereka menghasilkan sejumlah besar antibodi non-spesifik yang kadangkadang dapat memberikan sinyal latar belakang dalam beberapa aplikasi.

Beberapa epitop membuatnya penting untuk memeriksa urutan imunogen untuk

reaktivitas silang.

Setelah hybridomas dibuat itu adalah sumber konstan dan terbarukan dan semua
batch akan sama - berguna untuk konsistensi dan standarisasi prosedur
eksperimental dan hasil

Monoclonals mendeteksi satu epitop antigen hanya pada salah satu yang memiliki
keuntungan sebagai berikut:

Monoclonals biasanya memiliki latar belakang kurang dari pewarnaan bagian

dan sel. Karena mereka lebih khusus mendeteksi satu epitop sasaran, mereka
kurang cenderung untuk bereaksi silang dengan protein lain.

Karena kekhususan mereka, antibodi monoklonal yang sangat baik sebagai

antibodi primer dalam pengujian, atau untuk mendeteksi antigen dalam jaringan,

dan seringkali akan memberikan pewarnaan latar belakang secara signifikan

kurang dari antibodi poliklonal.

Dibandingkan dengan antibodi poliklonal, homogenitas antibodi monoklonal

sangat tinggi. Jika kondisi eksperimental dipertahankan konstan, hasil dari
antibodi monoklonal akan sangat direproduksi, antara percobaan.

Spesifisitas antibodi monoklonal membuat mereka sangat efisien untuk

mengikat antigen dalam campuran molekul terkait, seperti dalam kasus
pemurnian afinitas

Kekurangan:

Mereka dapat menghasilkan sejumlah besar antibodi spesifik tetapi mungkin

terlalu spesifik (misalnya kurang mungkin untuk mendeteksi dalam di berbagai
spesies)

Lebih rentan terhadap hilangnya epitop melalui pengobatan kimia antigen

antibodi poliklonal daripada. Hal ini dapat diimbangi oleh penyatuan dua atau
lebih antibodi monoklonal terhadap antigen yang sama.

KEPUSTAKAAN
1.

2.

^ Schwaber, J.; Cohen, EP (1973). "Manusia x tikus sel somatik

mensekresi imunoglobulin klon hibrida dari kedua tipe parental" Alam244
(5416):. 444-447. Bibcode1973Natur.244 .. 444S . DOI : 10.1038/244444a0 .
PMID4200460 . mengedit
^ Science Citation Index

3.

^ Cambrosio, A.; Keating, P. (1992). "Antara fakta dan teknik: awal

teknologi hibridoma". Journal of Sejarah Biologi25 (2): 175-230. DOI :
10.1007/BF00162840 . PMID11623041 . mengedit

4.

^ Khler, G.; Milstein, C. (1975). "Terus-menerus budaya sel mensekresi

antibodi menyatu kekhususan standar" Alam256 (5517):. 495-497.
Bibcode1975Natur.256 .. 495K . DOI : 10.1038/256495a0 . PMID1172191 .
mengedit

5.

^ Riechmann L, M Clark, Waldmann H, Musim Dingin G (Maret 1988).

"Penyusunan Kembali antibodi manusia untuk terapi" Alam332 (6162):. 323327. DOI : 10.1038/332323a0 . PMID3127726 .

6.

^ Vlasek J, Ionescu R (2008). "Antibodi monoklonal Hetergeneity

Terungkap dengan Metode Mengisi-Sensitif" Bioteknologi Farmasi Lancar9
(6):.. 468-481 DOI : 10.2174/138920108786786402 . PMID19075686 .

7.

^ Siegel DL (2002). "Rekombinan monoklonal antibodi teknologi"

Transfusi Clinique et biologique:. Jurnal de la Socit de francaise transfusi
optimis9 (1): 15-22. PMID11889896 .

8.

^ Schmitz U, Versmold A, Kaufmann P, Frank HG (2000). "Fag

menampilkan: alat molekuler untuk generasi antibodi-review" Plasenta21
(Suppl A):.. S106-S112 DOI : 10.1053/plac.1999.0511 . PMID10831134 .

9.

^ Helen E. Chadd dan Steven M. Chamow, "antibodi ekspresi Terapi

teknologi," Opini Lancar Bioteknologi 12, tidak ada. 2 (1 April, 2001): 188-194.

10.

^ McCafferty, J.; Griffiths, A.; Musim Dingin, G.; Chiswell, D. (1990).

"Fag antibodi: fag berfilamen menampilkan domain antibodi variabel" Alam348

(6301):. 552-554. Bibcode1990Natur.348 .. 552M . DOI : 10.1038/348552a0 .

PMID2247164 . mengedit
11.

^ Osbourn JK (2002). "Kedekatan-dipandu (ProxiMol) pemilihan

antibodi". Metode Mol.. Biol178: 201-5. PMID11968489 .

12.

^http://www.ukbusinesspark.co.uk/cay92125.htm vyy[

13.

^http://www.chidb.com/newsarticles/issue3_1.ASP

14.

15.

^ Lonberg N, Huszar D (1995). "Manusia antibodi dari tikus

transgenik". Int.Rev Immunol13(1):.. 65-93 DOI : 10.3109/08830189509061738
. PMID7494109 .
^http://www.medarex.com/Development/UltiMAb.htm

16.

^http://wwwext.amgen.com/media/media_pr_detail.jsp?
year=2006&releaseID=837754

17.

^http://www.regeneron.com/velocimmune.html

18.

^PhRMA Laporan Mengidentifikasi Lebih dari 400 Obat Biotech dalam

Pembangunan. Teknologi Farmasi, 24 Agustus 2006. Diperoleh 2006/09/04.

19.

^ Dimodifikasi dari Carter P: Meningkatkan efektivitas berbasis antibodi

terapi kanker. Nat Wahyu Kanker 2001; 1:118-129

20.

^ Takimoto CH, Calvo E. "Prinsip Farmakoterapi oncologic" di Pazdur

R, Wagman LD, Camphausen KA, Hoskins WJ (Eds) Manajemen Kanker:
Suatu Pendekatan Multidisiplin . 11 ed. 2008.

21.

^"Definition of Polyclonal from MedicineNet.com" . Webster's New

World Medical Dictionary . Retrieved 2008-05-03 .

22.

^ ab Frank, Steven A. (2002). "Specificity and Cross-Reactivity (Chapter

4)" . Immunology and Evolution of Infectious Disease . Princeton University. pp.
3356. ISBN0-0691-09595-7 . Retrieved 2008-06-23 .

23.

^"Etymology of "clone"" . Online etymology dictionary . Retrieved

2008-06-26 .

24.

^ Bansal, RK (2005). "Reproductive Cloning-An Act Of Human Rights

Violation" . Journal of Indian Association of Forensic Medicine (Indian
Association of Forensic Medicine) 27 (3): Diperoleh 2008/06/23.

25.

^"Definition of inoculation " . TheFreeDictionary.com (citing Dorland's

Medical Dictionary for Health Consumers. 2007 by Saunders, an imprint of
Elsevier, Inc.) . Retrieved 2008-06-10 .

26.

^ abc Pier, Gerald B. (2005) [1945]. "Molecular mechanisms of microbial

pathogenesis (Chapter 105)". In Kasper, Braunwald, Fauci, Hauser, Longo,
Jameson. Harrison's Principles of Internal Medicine .1 (Sixteenth ed.).
McGraw-Hill. pp. 700. ISBN007-123983-9 .

27.

^ abcde Goldsby. "Organization and Expression of Immunoglobulin Genes

(Chapter 5)". Immunology (Fifth ed.). New York. pp. 105136.
ISBN0716767643 .

28.

^ Nairn, Roderick (2004) [1954]. "Immunology (Chapter 8)". In Geo F.

Brooks, Janet S. Butel and Stephen A. Morse. Jawetz, Melnick, & Adelberg's
Medical Microbiology (Twenty-Third Edition International ed.). Lange
publications/McGraw-Hill. pp. 133135, 138139. ISBN007-123983-9 .

29.

^ abc Goldsby. "T-Cell Maturation, Activation and Differentiation

(Chapter 10)". Immunology (Fifth ed.). pp. 221246. ISBN0716767643 .

30.

^ Nair, Deepak; Singh Kavita, Siddiqui Zaved, Nayak Bishnu, Rao

Kanury, Salunke Dinakar (2002-01-09). "Epitope Recognition by Diverse
Antibodies Suggests Conformational Convergence in an Antibody Response" .
The Journal of Immunology (The American Association of Immunologists) 168
(5): 23712382. PMID11859128 . Retrieved 2008-05-03 .

31.

^"Immunochemical Applications" . Technical Tips . EMD biosciences.

Diarsipkan dari aslinya pada Retrieved 2008-05-07 .

32.

^ Davis, Cheryl. "Antigens" . Biology course . Western Kentucky

University . Retrieved 2008-05-12 .

33.

^ Ceri, Howard. "Antigens" . Immunology course . University of

Calgary . Retrieved 2008-05-12 .

34.

^ Khudyakov, Yury; Howard A. Fields (2002). Artificial DNA: Methods

and Applications . Florida: CRC Press. hal

35.

^ abc Myers, CD (1991). "Role of B cell antigen processing and

presentation in the humoral immune response" . The FASEB Journal5 (11):
25472553. PMID1907935 . Retrieved 2008-06-20 .

36.

^ abcdefgh Goldsby. "Overview of the Immune System (Chapter 1)".

Immunology (Fifth ed.). pp. 123. ISBN0716767643 .

37.

^ Goldsby. "Antigen Processing and Presentation (Chapter 8)".

Immunology (Fifth ed.). pp. 188194. ISBN0716767643 .

38.

^ ab Ojcius, DM; L Gapin, JM Kanellopoulos and P Kourilsky (09 1994).

"Is antigen processing guided by major histocompatibility complex
molecules?" . The FASEB Journal8 (5): 974978 . Retrieved 2008-06-20 .

39.

^ Goldsby. "Cells and Organs of the Immune System (Chapter 2)".

Immunology (Fifth ed.). pp. 2456. ISBN0716767643 .

40.

^ abcdefghijk Goldsby. "B-Cell Generation, Activation and Differentiation

(Chapter 11)". Immunology (Fifth ed.). New York. pp. 247275.
ISBN0716767643 .

41.

^McPhee, Stephen ; Ganong, William (2006). Pathophysiology of

Disease: An Introduction to Clinical Medicine . Lange Medical Books/McGrawHill. pp. 39. ISBN007144159X .

42.

^ Cziko, Gary (1995). "The Immune System: Selection by the Enemy" .

Without Miracles: Universal Selection Theory and the Second Darwinian
Revolution (Fifth ed.). Massachusetts: MIT Press. pp. 3948. ISBN0-26203232-5 . Retrieved 2008-05-12 .

43.

^ Greener, Mark (2005-02-14). "Monoclonal antibodies (MAbs) turn 30"

. The Scientist (Philadelphia: SAGE Publications) 19 (3): 14 . Retrieved 200806-06 .

44.

^ Deem, Michael. "Michael W. Deem" . Official Web Page . Rice

University . Diakses 2008-05-08.

45.

^ Granholm, Norman; Tito Cavallo (1992). "Autoimmunity, Polyclonal

B-Cell Activation and Infection (abstract)" . Lupus (SAGE Publications) 1 (2):
Retrieved 2008-05-04 .

46.

^ Montes, Carolina; Eva V. Acosta-Rodrguez, Maria Cecilia Merino,

Daniela A. Bermejo and Adriana Gruppi. "Polyclonal B cell activation in
infections: infectious agents' devilry or defense mechanism of the host?
(abstract)" . Journal of Leukocyte Biology (Society for Leukocyte Biology) 82
(5): Retrieved 2008-05-04 .

47.

^"Emil von Behring: The Founder of Serum Therapy" . Nobel Prize in

Medicine . Retrieved 2008-06-23 .

48.

^ Mage, Rose G.; Ten Feizi. "Elvin A. Kabat" . Biographical memoirs .

Retrieved 2008-06-23 .

49.

^ abcde Greenberg, Steven. "A Concise History of Retrieved 2008-06-23 .