presentasi kelompok VII

Dosen pengajar: Apt. Amrina

Amalia Yogananda, S.Farm.,
M.Sc.
• Lailatul Fitriyah (213333103)
• Abdurrahman Marzuqi (213333117)
• Emalia Nor Damayanti (213333120)
• Anis Manis Ta’la (213333138)
* Proses pembuatan antibodi monoklonal
* Antibodi monoklonal sebagai agen
diagnosis dan terapi
Definisi antibodi monoklonal
Antibodi monoclonal adalah
antibodi buatan yang identik
karena diproduksi oleh sel imun
spesifik menggunakan teknik
hibridoma yang kemudin diklon
ke dalam sel tersebut.
Teknik hibridoma adalah
peleburan dua sel dari organisme
yang sama atau berbeda untuk
untuk menghasilkan satu sel
dengan kombinasi dua
karakteristik seluler.
Sejarah antibodi monoklonal
Sejak Metchnikoff dan Erhlich mengusulkan
teori imunologi yang membuat mereka
dianugerahi hadiah Nobel pada tahun 1908,
banyak kemajuan telah dibuat di bidang
imulogi. Seperti diketahui bahwa antibodi dapat
digunakan untuk mendeteksi keberadaan
antigen didalam tubuh. Meskipun imunologi
khususnya imunokimia telah berkembang
pesat, antibodi yang digunakan untuk
mengenali suatu antigen masih diproduksi
dengan cara konvensional, yaitu dengan
mengimunisasi hewan uji mengambil darahnya
dan mengisolasi antibodi poliklonal.
Pada tahun 1975, Kohier dan Milstein memperkenalkan
cara baru untuk membuat antibodi dengan
mengimunisasi hewan laboratorium, kemudian
menggabungkan limfositdengan sel myeloma sehingga
sel hybrid dapat terus tumbuh. Menerus (immortal) dan
membuat antibodi homogen yang dihasilkan oleh klon
hibrida. Antibodi homogen ini disebut antibodi
monoclonal yang memiliki sifat lebih spesifik daripada
antibodi poliklonal karena hanya dapat berikatan
dengan 1 epitop antigen dan dapat dibuat dalam jumlah
yang tidak terbatas.Penemuan antibodi monoklonalnya
membawa perubahan besar dalam produksi antibodi
secara in vitro.
Antibodi monoklonal merupakan senyawa yang bersifat
homogen, sangat spesifik dan dapat diproduksi dalam
jumlah banyak sehingga sangat berguna bila digunakan
sebagai alat diagnostic. Berbagai jenis antibodi
monoclonal tersedia secara komersial untuk mendeteksi
bakteri dan virus pathogen, serta untuk tes kehamilan.
Antibodi monoclonal dapat dibuat untuk mengikat antigen
spesifik dan nantinya dapat mendeteksi atau
memurnikannya. Antibodi monoclonal hanya melindungi
tubuh dari organisme penyakit, tetapi juga menarik
molekul target lain di dalam tubuh, seperti protein reseptor
yang terdapat pada permukaan sel normal atau molekul
yang khas terdapat pada permukaan sel kanker.

Spesifisitas antibodi yang luar biasa menjadikan zat ini

dapat digunakan sebagai terapi. Antibodi mengikat sel
kanker dan bergabung dengan zat sitotoksik untuk
membentuk suatu kompleks yang dapat menemukan dan
menghancurkan sel kanker.
 Proses pembuatan antibodi monoklonal
terdiri dari beberapa tahapan yaitu:

1. Imunisasi tikus dan pemilihan donor tikus untuk menghasilkan sel

hibridoma
2. Skrining tikus untuk produksi antibodi
3. Persiapan sel myeloma
4. Fusion sel myeloma dengan sel immune limpa
5. Kloning hybridoma cell lines “membatasi pengenceran” atau
ekspansi dan stabilisasi klon oleh produksi ascites
1. Imunisasi tikus dan pemilihan donor tikus untuk
menghasilkan sel hibridoma
Tikus diimunisasi dengan antigen yang
disiapkan untuk injeksi baik dengan
mengemulsi antigen dengan adjuvant
freund atau adjuvants lainnya atau dengan
menghomogenkan gel slice yang
mengandung antigen. Sel utuh, seluruh
membrane, dan mikroorganisme terkadang
digunakan sebagai immunogen.
Di hampir semua laboratorium, tikus digunakan
untuk menghasilkan antibodi yang diinginkan.
Secara umum, mencit diimunisasi setiap 2-3
minggu sekali, tetapi protokol imunisasi
bervariasi diantara para peneliti. Ketika antibodi
serum yang cukup tercapai, tikus yang
diimunisasi dibunuh dan limpanya diangkat
untuk digunakan sebagai sumber sel untuk fusi
sel myeloma.
2. Skrining tikus untuk produksi antibodi
Setelah beberapa minggu imunisasi,
sampel darah tikus diambil untuk
pengukuran antibodi serum. Berbagai
teknik manusia telah dikembangkan
untuk mengumpulkan sejumlah kecil
darah dari tikus. Antibodi serum
ditentukan dengan berbagai teknik,
seperti enzyme-linked immunosorbent
assay (ELISA) dan flow cytometry.
Jika titer antibodi tinggi, fusi sel dapat dilakukan.
Jika titer terlalu rendah, tikus dapat distimulasi
sampai respon yang memadai tercapai,
sebagaimana ditentukan dengan pengambilan
sampel darah berulang. Ketika antibodi cukup tinggi,
tikus biasanya dikuatkan dengan suntikan intravena
antigen non-adjuvan (melalui vena ekor) 3 hari
sebelum kawin tetapi 2 minggu setalah imunisasi
sebelumnya. Tikus kemudian dibunuh dan limpa
mereka dipanen untuk produksi sel hibridoma in
vitro.
 3. Persiapan sel myeloma
Sel-sel limpa memproduksi
antibodi, yang memiliki umur
terbatas, dengan sel-sel yang
berasal dari tumor abadi
limfotik (myeloma)
menghasilkan hibridoma yang
dapat tumbuh tanpa batas.
Satu minggu sebelum fusi sel,
Sel myeloma adalah sel yang
sel myeloma ditumbuhkan pada
diabadikan secara kultur
8- azaguanine. Sel harus
dengan 8-azaguanine untuk
memiliki viabilitas tinggi dan
memastikan sensitivitasnya
pertumbuhan yang cepat. HAT
terhadap media seleksi
menengah memungkinkan
hipoksantin-aminopterin-
hanya sel yang menyatu untuk
timidin (HAT) yang digunakan
bertahan hidup dalam kultur.
setelah lisis sel.
4. Fusion sel myeloma dengan sel immune limpa
Sel limpa tunggal dari tikus yang
diimunisasi digabungkan dengan sel
myeloma yang telah disiapkan
sebelumnya. Fusi dilakukan dengan
memusatkan sel limpa yang baru
dipanen dan sel myeloma dalam
polietilen glikol, suatu zat yang
menyebabkan membrane sel melebur.
Seperti disebutkan pada langkah 3, hanya
sel-sel yang saling menempel yang akan
tumbuh pada media yang dipilih secara
khusus. sel-sel tersebut kemudian dibagikan
kedalam 96 cawan yang berisi sel-sel
pengumpan yang diperoleh dari
perendaman saline peritoneal tikus. Sel
pengumpan diyakini menyediakan faktor
pertumbuhan sel hibridoma.
5. Kloning hybridoma cell lines “membatasi pengenceran”
atau ekspansi dan stabilisasi klon oleh produksi ascites

Pada tahap ini, kelompok kecil sel hibridoma 96

lempeng sumur dapat ditumbuhkan dalam kultur
jaringan, diikuti dengan seleksi untuk pengikatan
antigen atau ditumbuhkan dengan metode ascites
mouse dengan cloning berikutnya. Cloning
“pengenceran terbatas” saat ini memastikan bahwa
sebagian besar sumur mengandung paling banyak
klon tunggal.
Pada tahap ini, banyak pertimbangan diperlukan untuk
memilih hibrida yang mampu berekspansi versus
kehilangan total produk fusi sel karena kurangnya
populasi atau pertumbuhan in vitro yang tidak
mencukupi pada pengenceran tinggi.

Dalam beberapa kasus, antibodi yang disekresikan

bersifat toksik terhadap sel-sel rapuh yang
dipelihara secara in vitro. Mengoptimalkan metode
ekspansi ascites mouse pada tahap ini dapat
mengawetkan sel.

Antibodi monoclonal dapat digunakan
sebagai agen diagnostic dan terapeutik.
Contohnya adalah terapi sebagai cara
untuk mengobati kanker. Antibodi
moboklonal dikenal untuk terapi
kanker, dimana antibodi ini akan
secara khusus mengenali antigen
tertentu yang ada pada sel kanker,
sehingga hanya sel kanker yang
dibunuh.
Selain untuk terapi diagnosis kanker,
antibodi monoclonal juga dapat
digunakan sebagai cara untuk mengobati
dan menyembuhkan pasien covid-19
dengan strain virus SARS-coV-2. Secara
umum, antibodi monoclonal adalah
protein yang dibuat di laboratorium yang
bekerja dengan cara melemahkan
kemampuan sistem kekebalan tubuh
manusia untuk melawan infeksi virus
(imunoterapi) dan pathogen berbahaya
lainnya.
 Antibodi monoclonal bisa dimanfaatkan
dalam bidang teknologi kesehatan, seperti:
1. Pengukuran dan deteksi menggunakan teknologi
antibodi monoklonal relatif lebih cepat, lebih akurat
dan lebih sensitif karena spesifitas yang tinggi. 4. Teknologi antibodi
2. Teknologi antibodi monoklonal saat ini digunakan banyak digunakan untuk
untuk deteksi kehamilan, alat diagnostik berbagai mendeteksi penyakit pada
penyakit menular dan deteksi sel kanker.
tumbuhan dan hewan,
3. Teknologi antibodi monoklonal dapat digunakan untuk
membunuh sel kanker tanpa mempengaruhi sel sehat pencemaran makanan dan
lingkungan,