30/03/2020

ASPIRASI JARUM HALUS

BIOPSI ASPIRASI JARUM HALUS /

FINE NEEDLE ASPIRATION CYTOLOGY
(FNAB)
30/03/2020 FITRIA DINIAH J.S, S.SI., M.SC 1

ASPIRASI JARUM HALUS ALAT YANG DIPERLUKAN UNTUK FNAB

1. Cara mengambil sel jaringan tubuh yang dicurigai suatu neoplasma Peralatan dasar yang diperlukan untuk melakukan FNAB sederhana terdiri dari :
2. Cara mengambil dengan teknik aspirasi memakai spuit dan jarum injeksi biasa untuk lesi yang teraba Sebuah syringe holder atau syringpistol / Terumo syring :3cc, 5 cc, 10 cc
3. Pada lesi yang tidak teraba, perlu panduan Usg ; ct-scan ; mri dan bila perlu memakai jarum dengan Jarum / Needle disposible ukuran 21-25 G
mandrine Kaca objek untuk pembuatan preparat apus dari aspirat jaringan dan telah diberi nomor/
kode sitologi

Pemeriksaan AJH dapat dilakukan di unit rawat jalan setiap rumah sakit maupun praktek. Kapas alcohol
Botol / kotak kaca berisi alkohol 95 % ( untuk fiksasi )
Walaupun akurasi hasil pemeriksaan AJH masih di bawah pemeriksaan histopatologi dari biopsi
terbuka, tetapi dengan panduan data dari pemeriksaan klinis, radiologi dan laboratorium diharapkan Sarung tangan steril
hasil pemeriksaan yang cukup baik dengan biaya yang relatif lebih murah. Botol penampung cairan aspirat
Plester
Ethyl chloride spray
30/03/2020 FITRIA DINIAH J.S, S.SI., M.SC 3 Tissue
30/03/2020 FITRIA DINIAH J.S, S.SI., M.SC 4

ALAT YANG DIGUNAKAN UNTUK - A J H MACAM JARUM YANG DAPAT DIGUNAKAN

UNTUK AJH

Jarum disposible ukuran

22-25 gauge

Jarum disposible dengan

mandrine

1
 30/03/2020

CARA PELAKSANAAN AJH ALAT BANTU YANG DIGUNAKAN

SYRINGE HOLDERS

Franzen syringe holder

Cameco syringe pistol

Dng Spuit disposible 10 cc

Simple syringe holder

PENYULIT TINDAKAN AJH

AJH DENGAN PANDUAN CARA MEBUAT SEDIAAN APUS DARI

ASPIRAT AJH

ULTRASONOGRAFI CT-SCAN

2
 30/03/2020

CARA MEMBUAT SEDIAAN APUS DARI

ASPIRAT - AJH

CARA MEMBUAT SEDIAAN DARI HASIL ASPIRAT PADAT

CARA MEMBUAT SEDIAAN DARI HASIL ASPIRAT CAIR

BIOPSI JARUM HALUS TANPA ASPIRASI

PEMBUATAN SEDIAAN APUS HASIL FNAB

Untuk pembuatan preparat apus, digunakan kaca objek yang bersih yang sudah diberi label
nomor/kode sitologi sesuai dengan nomor yang ada di formulir permintaan FNAB.
Prosedur pembuatan apusan hasil aspirasi adalah sebagai berikut :
❑Setiap kaca objek yang sudah di beri nomor di tetesi dengan1-2 tetes aspirat
❑Aspirat diapuskan dengan merata pada kaca objek dengan menggunakan kaca objek yang
lainnya.
❑Sediaan apus tersebut segera difiksasi dalam alkohol 95 % untuk pewarnaan Papanicolaou,
sedangkan untuk pewarnaan Giemsa difiksasi dalam metanol setelahdikeringkan terlebih dahulu.

30/03/2020 FITRIA DINIAH J.S, S.SI., M.SC 16

GAMBARAN MIKROSKOPIK SEDIAAN HASIL AJH

SKUAMUS CELL CARCINOMA ADENOCARCINOMA

3
 30/03/2020

AJH KELENJAR LIMFE

AJH PAYUDARA
REAKTIF LIMFADENOPATI NHL LIMFOSITIK NHL PLASMACITOID LESI FIBROKISTIK FIBROADENOMA

NHL LARGE B CELL NHL T CELL INFILTRATING DUCT CARCINOMA MEDULARE ADENOCARCINOMA
CENTROCYTIC CENTROBLASTIC IMUNOBLASTIC CONVULATED T CELL

AJH TYROID
AJH LIVER
COLOID GOITER

CIRRHOSIS CA HEPATIS HEPATOCELLULARE

ADENOCARCINOMA PAPILER

ADENOMA / ADENOCARCINOMA
FOLIKULER

AJH PROSTAT
AJH PROSTAT
ALAT BANTU YANG DIGUNAKAN
BPH ADENOCARCINOMA

4
 30/03/2020

AJH TUMOR JARINGAN LUNAK

GIANT CELL TUMOR OSTEOSARKOMA

Terimakasih ☺

30/03/2020 FITRIA DINIAH J.S, S.SI., M.SC 26

VARIASI PENGECATAN PAPANICULOU (RS SARDJITO/AMC)

LAMPIRAN No Reagen Waktu

1 Fiksasi dengan ALKOHOL 95 % 15 menit
2 ALKOHOL 75 % 3 dip
3 ALKOHOL 50 % 3 dip
4 AIR mengalir 2 – 5 menit
5 HEMATOXYLIN 5 – 7 menit
6 AIR mengalir 2 – 5 menit
7 ALKOHOL 75 % 3 dip
8 ALKOHOL 95 % 3 dip
9 Cat OG 3 – 5 menit
10 ALKOHOL 95 % 3 dip
11 ALKOHOL 95 % 3 dip
12 Cat EA 3 – 5 menit
13 ALKOHOL 95 % 3 dip
14 ALKOHOL 95 % 3 dip
15 ALKOHOL 95 % 3 dip

30/03/2020 FITRIA DINIAH J.S, S.SI., M.SC 27

AMC PROTOKOL H.E. AUTOMATIC STAINING / RS SARDJITO VARIASI PROTOKOL H.E. LAB. PA FK UGM

No Tabung Reagen Waktu

No No Tabung Reagen Waktu
1 - OVEN 5 menit
1 Hot Plate 5 menit (lalu diangin-anginkan)
2 1 XYLENE 1 menit
2 XYLENE 4 menit
3 2 XYLENE 2 menit
3 XYLENE 4 menit
4 3 XYLENE 2 menit
4 XYLENE 4 menit
5 4 ALKOHOL 100% 2 menit 5 ALKOHOL 96 % 3 menit
6 5 ALKOHOL 96 % 2 menit 6 ALKOHOL 96 % 3 menit
7 6 ALKOHOL 70 % 1 menit 7 ALKOHOL 96 % 3 menit
8 - Water I 1 menit 8 ALKOHOL 70 % 3 menit
9 7 MAYER HEMATOXYLIN 7,5 menit 9 Water I 3 menit (mengalir)
10 - Water II 7,5 menit 10 MAYER HEMATOXYLIN 7 menit
11 8 EOSINE (Alkohol) 1 menit 11 Water II 7 menit (mengalir)

12 - Water III 15 detik 12 EOSINE (Alkohol) 10 dip (kalo baru)-2 menit (kalo lama)

13 9 ALKOHOL 80 % 15 detik 13 Water III beberapa dip

14 10 ALKOHOL 96 % 15 detik 14 ALKOHOL 96 % 5 dip

15 11 ALKOHOL 100% 30 detik 15 ALKOHOL 96 % 5 dip

16 12 XYLENE 1 menit 16 ALKOHOL 96 % 5 dip

17 13 XYLENE 1 menit 17 ALKOHOL 96 % 5 dip (lalu diangin2kan sampai kering)

18 XYLENE 1 menit, lalu mounting

5
 30/03/2020

VARIASI PAPANICOLOAU LAB. PA FK UGM VARIASI GIEMSA LAB. PA FK UGM

Dari fiksasi kiriman / langsung dari pengambilan sampel
Sediaan setelah benar-benar kering di udara
1. Ethyl Alkohol 95 % 15 menit
1. Fiksasi dengan Metanol 5 – 10 menit
2. Tap Water 5 menit
2. Cuci dengan aquadest/biarkan kering tanpa dicuci
3. Mayer Haematoxylin 3 – 5 menit
4. Tap Water 15 menit 3. Giemsa 5 menit

5. Ethyl Alkohol 95 % 10 dip 4. Cuci dengan aquadest kemudian keringkan di udara

6. Ethyl Alkohol 95 % 10 dip 5. E Z Mount
7. EA 1 – 3 menit
8. Ethyl Alkohol 95 % 10 dip Catatan perbandingan pembuatan giemsa :
9. Ethyl Alkohol 95 % 10 dip Giemsa : Bufer phospat (atau aguades/air hujan, ph asam) = 1 : 4
10. Ethanol Absolute 5 dip
11. Ethanol Absolute 5 dip
12. Xylol quick
13. Xylol quick
14. Examine & Mount (EZ Mount)

PENGECATAN IMUNOHISTOKIMIA (LAB VISION ,LEBIH MURAH ) 12. Tetesi dg Streptavidin Peroksidase selama 5 menit (KIT)
1. Jaringan blok parafin dipotong 3-4µ, letakkan di atas obyek glass (obyek glass sudah 13. Cuci dg PBS 3 kali @5menit
diolesi Poly L Lysin kemudian disimpan semalam di inkubator suhu 45°C), kemudian 14. Tetesi Kromogen/DAB (jgn kena sinar/bungkus dg aluminium foil, saat netesi
dibiarkan semalam di inkubator 45 °C
matikan lampu) selama 5-15 menit ( untuk pengecatan tertentu dg AEC)
2. Deparafinisasi (xylol 3 tempat, sama dg HE)
15. Cuci dg air mengalir 10-15 menit
3. Cuci di air mengalir sebentar (jgn kena air langsung), lalu cuci dengan aquades
beberapa dip 16. Counterstain dg Hematoxylin Mayer (bisa jg Harris utk DAB) 3-4 menit (AEC
harus dg Mayer)
4. Ditetesi H2O2 3% (H2O2 biasanya 30% dpt encerkan dg metanol, 10cc H2O2 30%
tambah 90cc metanol), diamkan 15-20 menit, cuci dengan air mengalir sebentar 17. Cuci dg air mengalir 10-15 menit
5. Cuci aquades beberapa dip, cuci dg PBS 3 kali @5menit, rendam dalam bufer citrat 18. Dehidrasi (alk 80%, 95%, absolut), lalu xylol 3 kali (sama HE) TETAPI kalau AEC
dalam microwave 600 °C selama 20 menit, lalu biarkan dingin 20-30 menit, lalu cuci tanpa xylol
PBS 3 kali @5 menit
6. Bloking dengan Normal Serum 5 menit (KIT) 19. Mounting (DAB dg EZ mount, AEC dg Gliserin)
7. Bersihkan tepi-tepinya saja
8. Inkubasi (dikotak yg bawahnya ada airnya suhu ±25 °C) dengan antibodi selama 1 SEDIAAN SITOLOGI
jam (bisa semalam) Letakkan sampel di obyek glass Poli L Lysin
9. Cuci/rendam dg PBS (pH 7,2-7,4) 3 kali @5 menit Biarkan kering di udara
10. Tetesi dg antibodi sekunder Biotynlated selama 5 menit (KIT) Fixasi dg Acetone 10 menit di frezer
11. Tetesi dg PBS 3 kali @5menit (setiap direndam PBS, diletakkan & goyang/diputar Bersihkan tepi-tepinya, cuci dg PBS 2-3 kali @3-5 menit
diatas Speed Regulator dg kecepatan low)
Teteskan H2O2 3% 20 menit, cuci air mengalir, cuci aquades, PBS/TBS 3 kali @5menit, selanjutnya
sama prosedur diatas mulai nomer 6

PENGECATAN IMUNOHISTOKIMIA (KIT DAKO) 14. Cuci air mengalir sebentar tapi tidak kena air langsung
1. Sampel blok parafin dipotong 3-4µ, dan ditempelkan pada obyek glass Poly L Lysin 15. Teteskan / masukkan ke HE Mayer atau Harris selama 2 menit
(Poly L Lysin yg digunakan utk mengoles obyek glass, PLL diencerkan dg NaCl 9:1,
900µ PLL:100µ NaCl utk semua IHC) 16. Cuci air mengalir selama 5-7 menit
2. Biarkan semalam di incubator suhu 45 °C 17. Dehidrasi lalu pakai Xylol (kalau DAB)
3. Deparafinisasi 18. Mounting EZ mount atau Gliserin, tutup obyek glass
4. Rendam dalam buffer citrate (campuran 2,1 gr citrat acid + 1 lt aquades) pH 6 (kalau
asam naikkan dg 5-10 cc NaOH, campurkan pelan2, kalau menurunkan pH dg HCl)
dan taruh dalam microwave 600 °C selama 5 menit dan lanjutkan dengan suhu 450 SEDIAAN SITOLOGI
°C selama 5 menit
1. Letakkan sampel di obyek glass Poly L Lysin
5. Biarkan dingin ±30 menit
2. Biarkan kering di udara
6. Cuci dg TBS/PBS 2 kali @3-5 menit
3. Fixasi dg Acetone selama 10 menit di frezer pendingin, kalau untuk kultur pakai
7. Teteskan bloking peroxidase selama 5 menit (KIT) Methanol (karena tempatnya dr plastik) di frezer pendingin juga
8. Cuci dg TBS/PBS 2 kali @3-5 menit 4. Bersihkan tepi-tepinya, cuci PBS / TBS 2-3 kali @3-5 menit
9. Inkubasi dg antibodi primer ±30 menit 5. Selanjutnya mulai prosedur no. 7
10. Cuci dg TBS/PBS 2 kali @3-5 menit
11. Teteskan polymer dan inkubasi selama 30 menit (KIT) *Untuk semua: sebelum obyek glass diolesi Poly L Lysin, diolesi/direndam HCl 1% min ½ jam
lalu cuci dg air lalu di tetesi/direndam alkohol bertingkat, lalu dikeringkan, baru
12. Cuci dg TBS/PBS 2 kali @3-5 menit diolesi PLL
13. Teteskan counterstain DAB / AEC dan biarkan selama 20 menit

6
 30/03/2020

HAEMATOXILLIN ACCORDING MAYER

REAGENT
Water (heat to 80 °C and add: .....) 4000mL
ACID ALKOHOL : 99 cc alcohol 70 % + 1 cc HCl PA
Alumunium-kalium sulfate dodecahydrate 200 gr
Haematoxillin (Merck 1.15937) 4 gr
Sodium iodate 0,8 gr HNO3 15 % : 230 cc HNO3 65 % + 770 mL aquadest
Chlorate hydrate 100 gr
Citric acid 2 gr
Buffer formalin : Na H2PO4 H2O 4 gr

Eosine Solution (0,5 %)

Na2 HPO4 6,5 gr
Eosine gelb (Merck 1.15935) 10 gr Aquadest 900 mL
Aquadest 2000mL Formaldehid solution 35 % 100 mL

For use: this 0,5 % eosine solution is diluted with alcohol 96 % (1:1) and a minimal amount of acetic acid is
added EDTA → untuk decalcifikasi dan IHC
1 part eosine 0,5 %
→ 0,37 gr EDTA + 1 L aquadest, pH 8
1 part alcohol 96 %
per 100 mL 1 drops acetic acid glacial

REAGENT IHC
Buffer citrat : 2,1 gr citrat acid + 1 L aquadest
tambahkan 13 mL NaOH2 M, ukur pH 6,0

Buffer phosphat: K H2PO4 6,63 gr

Na2 HPO4 . 2H2O 3,2 gr
dilarutkan dlm 1 L aquadest

PBS 10x 0,5 liter : NaCl (Merck) 43,75 gr

Na2 HPO4 . 2H2O 7,11 gr
K H2PO4 1,05 gr
aquadest 500 mL