Jurnal Isolasi Enzim Amilase

JURNAL PRAKTIKUM BIOKIMIA Nama : Nurjannah
SEMESTER GENAP
TAHUN 2020 : H031181002
Nim
LABORATORIUM BIOKIMIA DEPARTEMEN KIMIA
UNIVERSITAS HASANUDDIN
PERCOBAAN X
ISOLASI ENZIM AMILASE
Jurnal kerja laboratorium ini merupakan laporan sementara dari hasil pengamatan yang dilakukan di
dalam laboratorium. Mahasiswa diharapkan menyelesaikan lembar kerja ini sesuai dengan pengamatan
yang dilakukan dan membahas dengan baik.
1. Persiapan Medium dan Peremajaan Bakteri Penghasil Enzim Amilase
Bakto agar
Pepton
Yeast Ekstrak
NaCl
CaCl2
K2HPO4
MgSO4.7H2O
Amilum
Akuades
Komposisi Medium Medium Cair Cawan Petri
Medium Padat
jarum ose
Isolat Aktif Pengkulturan Isolat Aktif 2-3 ose koloni mikroba

Mengapa harus di gores secara zig zag : ini merupakan salah satu teknik dalam penggoresan yang
berguna untuk mengkultur mikroba sehingga memperluas bidang
permukaan koloni mikroba.
Diinkubasi (24 jam, 50 oC)

Mengapa harus di inkubasi : dilakukan inkubasi untuk menstabilkan suhu agar mendekati suhu
optimum sehingga enzim bekerja dengan optimum dan untuk melihat
perkembangan dari pertumbuhan bakteri yang ada.
SEMESTER GENAP
TAHUN 2020 : H031181002
Nim
Isolat Hasil Peremajaan

Pembahasan : Percobaan ini dilakukan dimulai dengan persiapan medium dan peremajaan
bakteri penghasil enzim amilase. Sampel yang akan digunakan diletakkan diatas
cawan petri. Ketika sudah diatas cawan petri, dilakukanlah penggoresan secara
zig-zag. Hal ini dilakukan dengan tujuan untuk mengkultur mikroba sehingga
memperluas bidang permukaan koloni mikroba. Selanjutnya diinkubasi selama 24
jam dengan suhu 50̊ C. inkubasi ini dilakukan untuk menstabilkan suhu agar
mendekati suhu optimum sehingga enzim bekerja dengan optimum serts untuk
melihat perkembangan dari pertumbuhan bakteri yang ada
Kesimpulan
Adapun kesimpulan dari percobaan ini yaitu peremajaan bakteri penghasil enzim amylase dapat
dilakukan dengan proses pencampuran bahan, penggoresan sampel dan inkubasi.
SEMESTER GENAP
TAHUN 2020 : H031181002
Nim
2. Produksi Enzim Amilase

Erlenmeyer 1 Erlenmeyer 2 Erlenmeyer 3 Erlenmeyer 4 Erlenmeyer 5
20 mL 20 mL 20 mL 20 mL
20 mL
20 mL 20 mL 20 mL
20 mL 20 mL
Diinkubasi (180 rpm, 16-20 jam, 37 oC)

20
20
20
20
20
mL
mL
mL
mL
mL
100 mL 100 mL 100 mL 100 mL

100 mL
Dipindahkan
100 mL 100 mL 100 mL
100 mL 100 mL
Diinkubasi (180 rpm, 72 jam, 37 oC)
Dimasukkan ke dalam kuvet Dilakukan pengukuran OD, λ = 600 nm

SEMESTER GENAP
TAHUN 2020 : H031181002
Nim
100 mL 100 mL 100 mL
100 mL 100 mL
Sisa medium produksi disentrifuge 3500 rpm selama 15 menit

Jelaskan mengapa harus disentrifuge : agar dapat memisahkan organel berdasarkan massa jenisnya
melalui proses pengendapan.
Crude amilase
 Jelaskan mengapa disebut crude : disebut amilase kasar (crude amilase) karena mengandung
bahan yang sudah tidak tersaring sepenuhnya atau dengan
kata lain disebut sudah tidak murni berisi amilase. Masih ada
zat pengotor didalamnya.
Pembahasan : Percobaan ini dilakukan produksi enzim amilase. Hal pertama yang
dilakukan yaitu isolat yang dihasilkan pada tahap sebelumnya dimasukkan pada 5
buah erlenmeyer yang telah berisi 20 mL akuades dan diinkubasi (180 rpm, 16-20
jam, 37 oC). Kemudian dipindahkan pada erlenmeyer lain untuk membuat larutan
100 mL dan diinkubasi (180 rpm, 72 jam, 37 oC). Proses inkubasi ini berfungsi
untuk menstabilkan suhu agar mendekati suhu optimum sehingga enzim bekerja
dengan optimum. Selanjutnya sampel dimasukkan pada kuvet dan dilakukan
pengukuran OD, λ = 600 nm.
Setelah itu, sisa medium produksi disentrifuge pada 3500 rpm selama 15
menit. Disentrifuge ini dilakukan untuk memisahkan organel berdasarkan massa
jenisnya melalui proses pengendapan. Dari percobaan ini diperoleh crude amilase
atau amilase kasar artinya mengandung bahan yang sudah tidak tersaring
sepenuhnya atau dengan kata lain disebut sudah tidak murni berisi amilase. Masih
ada zat pengotor didalamnya. Hal ini menandakan isolasi enzim amilase dapat
dilakukan dari mikroba.
SEMESTER GENAP
TAHUN 2020 : H031181002 Nim
Kesimpulan
Kesimpulan dari percobaan ini yaitu enzim amilase (crude amylase) dapat diisolasi atau diproduksi dari
suatu mikroba.
3. Uji Aktivitas Enzim Amilase

Tabung 1
1 mL pati 2% + 1 mL buffer fosfat + 1 mL ekstrak

Inkubasi 50 oC selama 60 menit
pH 7, enzim amilase
5 6 5 6
4 7 4 7
3 8 3 8
2 9 2 9
1 11 1 10
Dinonaktifkan pada suhu 100 oC selama 5 – 10 menit Larutan campuran enzim didinginkan
5 6 5 6
4 7 4 7
3 8 3 8
2 9 2 9
1 11 1 10
1 mL campuran + 1 mL reagen Dipanaskan 100 oC Didinginkan

enzim Nelson-Somogy selama 20 menit
SEMESTER GENAP
TAHUN 2020 : H031181002
Nim
Sampel yang telah + 1 mL reagen 7 mL akuades dihomogenkan

didinginkan arsenomolibdat
Sampel setelah di Kontrol  Dilakukan pengukuran pada panjang gelombang maksimum

homogenkan amilase(dengan
preparasi yang sam
dengan sampel
 Jelaskan mengapa mesti dibuat : agar dapat dilakukan perbanding atau sebagai acuan pada
larutan kontrol sampel yang diuji.
Hasil Data hasil pengukuran blanko, standar dan sampel (pengukuran

blanko dan sampel dilakukan bersamaan dengan standar)
Konsentrasi glukosa (μmol/mL) Absorbansi
Blanko 0.00
Sampel 0.375
Kontrol amilase 0.426
Pembuatan Larutan Standar
Tabung 1 Tabung 2 Tabung 3 Tabung 4 Tabung 5
0,02 μmol/mL 0,04 μmol/mL 0,06 μmol/mL 0,08 μmol/mL 0,1 μmol/mL
SEMESTER GENAP
TAHUN 2020 : H031181002 Nim
Larutan standar Larutan standar Larutan standar Larutan standar Larutan

glukosa glukosa glukosa glukosa standar glukosa
+ 1 mL Cu-alkalis + 1 mL Cu-alkalis + 1 mL Cu-alkalis + 1 mL Cu-alkalis + 1 mL Cu-

alkalis
5 6 5 6
7 7 5 6 5 6 6 6 6 6 6 6
4 4 7 7 5 5 5 5 5 5
4 4 4 7 4 7 4 7 4 7 4 7 4 7
3 8 3 8
3 8 3 8 8 8 8 8 8 8
3 3 3 3 3 3
2 9 2 9
2 9 2 9 9 9 9 9 9 9
11 10 2 2 2 2 2 2
1 1 11 10
1 1 1 11 1 10 1 11 1 10 1 11 1 10
Dipanaskan
 Jelaskan fungsi pemanasan : Untuk mempercepat jalannya reaksi, yang ditandai dengan
terbentuk endapan merah bata yang akan menandakan
adanya glukosa.
Didinginkan
Jelaskan fungsi pendinginan sampel Adapun fungsi dari pendinginan sampel yaitu untuk
menghentikan proses reaksi setelah proses pemanasan.
+ 1 mL arsenomolibdat + 1 mL
+ 1 mL arsenomolibdat + 1 mL arsenomolibdat + 1 mL arsenomolibdat
arsenomolibdat
SEMESTER GENAP
TAHUN 2020 : H031181002
Nim
+ 7 mL H2O + 7 mL H2O + 7 mL H2O + 7 mL H2O + 7 mL H2O
 Dilakukan pengukuran pada panjang gelombang maksimum dengan larutan glukosa standar 0,06 μmol/mL
 Dilakukan pengukuran larutan standar glukosa
Hasil : 1. Data penentuan panjang gelombang maksimum

λ (nm) Absorbansi
650 1.09
655 1.11
660 1.12
665 1.13
670 1.14
675 1.14
680 1.14
685 1.13
690 1.12
695 1.11
700 1.11
2. Data hasil pengukuran standar
Konsentrasi glukosa (μmol/mL) Absorbansi
0.02 0.006
0.04 0.188
0.06 0.218
0.08 0.464
0.1 0.642
SEMESTER GENAP
TAHUN 2020 : H031181002
Nim
4. Pengukuran kadar protein
Tabung 1 Tabung 2 Tabung 3 Tabung 4 Tabung 5
2 mL aqudest 2 mL BSA 0,01 2 mL BSA 0,04 2 mL BSA 0,08 2 mL enzim

mg/mL mg/mL mg/mL amilase
+ 2,75 mL Lowry B + 2,75 mL Lowry B + 2,75 mL Lowry B + 2,75 mL Lowry B + 2,75 mL Lowry
B
Didiamkan 15 menit
Jelaskan mengapa harus didiamkan selama Didiamkan selama 15 menit agar reaksinya berjalan dengan
15 menit sempurna.
+ 0,25 mL Lowry A + 0,25 mL Lowry A + 0,25 mL Lowry A + 0,25 mL Lowry A + 0,25 mL Lowry
SEMESTER GENAP
TAHUN 2020 : H031181002
Nim
Dikocok dengan vorteks dan Didiamkan (inkubasi) selama 30 menit

 Jelaskan fungsi inkubasi : didiamkan selama 30 menit agar reaksinya berjalan
sempurna sehingga warna yang terbentuk terlihat bagus dan
jelas.
 Dilakukan pengukuran pada panjang gelombang maksimum dengan larutan standar BSA 0,04 mg/mL
 Dilakukan pengukuran kadar protein untuk blanko, standar dan sampel
SEMESTER GENAP
TAHUN 2020 : H031181002
Nim
Data pengukuran panjang gelombang

λ (nm) Absorbansi
600 0.124
610 0.132
620 0.133
630 0.135
640 0.144
650 0.144
660 0.147
670 0.155
680 0.151
690 0.15
700 0.152
Data pengukuran blanko, standar dan

sampel
Konsentrasi BSA (mg/mL) Absorban
Blanko 0
0.01 0.087
0.02 0.123
0.04 0.209
0.06 0.309
0.08 0.392
0.1 0.517
Sampel enzim amilase 0.191
Pembahasan : Penentuan kadar protein yang dilakukan didasarkan pada reaksi protein
dengan asam fosfotungstat-fosfomolibdat pada suasana alkalis. Warna larutan
protein akan berubah menjadi biru setelah ditambahkan dengan reagen Lowry,
dan intensitas warna yang dihasilkan akan berbeda-beda tergantung pada
konsentrasi dari protein itu sendiri. Jika konsentrasi protein lebih tinggi maka
warna biru yang dihasilkan akan tampak kontras dan jika konsentrasi protein
lebih rendah, maka warna biru yang dihasilkan kurang kontras.
ƛ vs Absorbansi
0.2
Absorbansi
0.15
f(x) = 0 x − 0.04
0.1 R² = 0.87
0.05
0
580 600 620 640 660 680 700 720
Aƛ (nm)
SEMESTER GENAP
TAHUN 2020 : H031181002 Nim
Grafik 1. Grafik hubungan absorbansi Vs λ
absorbansi vs konsentrasi
0.6
0.5
0.4
absorbansi f(x) = 0.05 x − 0.01
0.3 R² = 0.57
0.2
0.1
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
konsentrasi
Gambar 2. Grafik hubungan konsentrasi Vs absorbansi
Dari hasil percobaan yang diperoleh berdasarkan metode Lowry dengan
menggunakan alat spektrometer Visible, dapat diketahui bahwa semakin tinggi konsentrasi
maka semakin tinggi pula nilai absorbannya, hal ini dikarenakan konsentrasi dan nilai
absorbansi berbanding lurus (dapat dilihat pada grafik). Nilai absorbansi sampel enzim
amilase yang diperoleh yaitu 0,191, maka berdasarkan hasil perhitungan kadar protein
yang diperoleh dalam sampel enzim amylase dengan slope 0,0523 dan intercept -0,0069
adalah 378,39 mg/mL.
Perhitungan:
y = 0,0523x – 0,0069
Dimana, y = absorbansi = 0,191; x = konsentrasi; Slope (a) = 0,0523; Intercept
(b) = -0,0069.
Konsentrasi Sampel:
y = 0,0523x – 0,0069
0,191 = 0,0523x – 0,0069
-0,0523x = – 0,0069 - 0,191
- 0,1979
x =
-0.0523
SEMESTER GENAP
TAHUN 2020 : H031181002
Nim
x = 3,7839 mg/mL
Kadar Protein pada Sampel Enzim Amilase:
Kadar protein = x X Fp → 3,7839 mg/mL X 100 kali = 378,39 mg/mL.

Kesimpulan
Berdasarkan percobaan yang telah dilakukan yaitu kadar protein yang dihasilkan dengan menggunakan
metode Lowry yaitu sampel sebesar 378,39 mg/mL.
Makassar, 19 Mei 2020

Dosen/Asisten Mahasiswa
Nama : Abdur Rahman Arif, S.Si, Nama: Nurjannah

M.Si NIM: H031181002

Jurnal Isolasi Enzim Amilase

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Deskripsi Asli:

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Jurnal Isolasi Enzim Amilase

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

JURNAL PRAKTIKUM BIOKIMIA Nama : Nurjannah

Isolat Aktif Pengkulturan Isolat Aktif 2-3 ose koloni mikroba

Diinkubasi (24 jam, 50 oC)

Isolat Hasil Peremajaan

2. Produksi Enzim Amilase

Diinkubasi (180 rpm, 16-20 jam, 37 oC)

100 mL 100 mL 100 mL 100 mL

100 mL 100 mL 100 mL

Diinkubasi (180 rpm, 72 jam, 37 oC)

Dimasukkan ke dalam kuvet Dilakukan pengukuran OD, λ = 600 nm

100 mL 100 mL 100 mL

Sisa medium produksi disentrifuge 3500 rpm selama 15 menit

3. Uji Aktivitas Enzim Amilase

1 mL pati 2% + 1 mL buffer fosfat + 1 mL ekstrak

1 mL campuran + 1 mL reagen Dipanaskan 100 oC Didinginkan

Sampel yang telah + 1 mL reagen 7 mL akuades dihomogenkan

Sampel setelah di Kontrol  Dilakukan pengukuran pada panjang gelombang maksimum

Hasil Data hasil pengukuran blanko, standar dan sampel (pengukuran

Larutan standar Larutan standar Larutan standar Larutan standar Larutan

+ 1 mL Cu-alkalis + 1 mL Cu-alkalis + 1 mL Cu-alkalis + 1 mL Cu-alkalis + 1 mL Cu-

+ 7 mL H2O + 7 mL H2O + 7 mL H2O + 7 mL H2O + 7 mL H2O

Hasil : 1. Data penentuan panjang gelombang maksimum

4. Pengukuran kadar protein

Tabung 1 Tabung 2 Tabung 3 Tabung 4 Tabung 5

2 mL aqudest 2 mL BSA 0,01 2 mL BSA 0,04 2 mL BSA 0,08 2 mL enzim

Dikocok dengan vorteks dan Didiamkan (inkubasi) selama 30 menit

Data pengukuran panjang gelombang

Data pengukuran blanko, standar dan

Grafik 1. Grafik hubungan absorbansi Vs λ

Gambar 2. Grafik hubungan konsentrasi Vs absorbansi

Dari hasil percobaan yang diperoleh berdasarkan metode Lowry dengan

adalah 378,39 mg/mL.

Dimana, y = absorbansi = 0,191; x = konsentrasi; Slope (a) = 0,0523; Intercept

0,191 = 0,0523x – 0,0069

-0,0523x = – 0,0069 - 0,191

Kadar Protein pada Sampel Enzim Amilase:

Kadar protein = x X Fp → 3,7839 mg/mL X 100 kali = 378,39 mg/mL.

Makassar, 19 Mei 2020

Nama : Abdur Rahman Arif, S.Si, Nama: Nurjannah

Anda mungkin juga menyukai