LAPORAN PRAKTIKUM KARYOTYPING

MODUL SEL DAN GENETIKA

DISUSUN OLEH
MAKHRUZAL
I1011191082
KELOMPOK C

PROGRAM STUDI KEDOKTERAN

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNVERSITAS TANJUNGPURA
PONTIANAK
2020
 BAB I
PENDAHULUAN

Kehidupan bergantung pada kemampuan sel untuk menyimpan, mengambil, dan

menerjemahkan instruksi genetik yang diperlukan untuk membuat dan mempertahankan
kehidupan suatu organisme. Instruksi ini disimpan oleh setiap sel hidup didalam gen - elemen-
elemen pembawa informasi yang menentukan karakteristik suatu spesies secara keseluruhan dan
individu-individu di dalamnya. [1]
Pada awal abad kedua puluh, ketika genetika muncul sebagai bagian sains, para ilmuwan
tertarik dengan sifat kimiawi gen. Informasi dalam gen disalin dan ditransmisikan dari sel ke sel
keturunannya jutaan kali selama kehidupan organisme multiseluler, dan diturunkan dari generasi
ke generasi melalui sel-sel reproduksi — telur dan sperma. Gen pada dasarnya tidak berubah dan
bertahan dari proses replikasi dan transmisi yang panjang. [1]
Kemajuan penting dalam genetika pada tahun 1940-an adalah penemuan asam
deoksiribonukleat (DNA) seagai pembawa informasi genetik sel. Tetapi mekanisme di mana
informasi dapat disalin untuk ditransmisikan dari satu generasi sel ke generasi berikutnya, dan
bagaimana protein dapat ditentukan dengan instruksi dalam DNA masih belum diketahui hingga
1953, ketika struktur DNA ditemukan oleh James Watson dan Francis Crick. Struktur DNA
yang ditemukan memberi petunjuk bagaimana DNA dapat disalin, atau direplikasi, dan
memberikan petunjuk pertama tentang bagaimana molekul DNA dapat mengkodekan instruksi
untuk membuat protein. Saat ini, fakta bahwa DNA adalah bahan genetik sangat mendasar bagi
pemahaman kita tentang kehidupan sehingga sulit untuk menghargai betapa besar kesenjangan
intelektual yang ditemukan oleh penemuan ini. [1]
Jauh sebelum peneliti memahami struktur DNA, telah diketahui bahwa sifat bawaan dan
gen yang menentukan terkait dengan kromosom. Kromosom (dinamai dari bahasa Yunani
chroma, “warna,” karena sifat pewarnaannya) ditemukan pada abad ke-19 sebagai struktur
seperti benang di dalam inti sel eukariotik yang menjadi terlihat ketika sel mulai membelah. [1]
Molekul asam deoksiribonukleat (DNA) terdiri dari dua rantai panjang nukleotida. Setiap
rantai, atau untaian, terdiri dari empat jenis subunit nukleotida, dan kedua untai tersebut
disatukan oleh ikatan hidrogen antara bagian dasar nukleotida. [1]
Diperlukan sejumlah besar DNA untuk menyandikan semua informasi yang diperlukan
untuk membuat bakteri bersel tunggal, dan jauh lebih banyak DNA diperlukan untuk
menyandikan informasi untuk membuat organisme multiseluler. Setiap sel manusia mengandung
sekitar 2 m (meter) DNA; namun inti sel hanya berdiameter 5-8 μm. Menyelipkan semua bahan
tersebut ke dalam ruang sekecil itu sama dengan mencoba melipat 40 km (24 mil) dari benang
yang sangat halus menjadi bola tenis. [1]
Dalam sel eukariotik, molekul DNA beruntai ganda yang sangat panjang dikemas ke
dalam kromosom. Bakteri biasanya membawa gen mereka pada satu molekul DNA sirkular.
Molekul ini juga dikaitkan dengan protein yang memadatkan DNA, tetapi protein bakteri ini
berbeda dengan protein yang mengemas DNA eukariotik. [1]
Pada eukariota, seperti manusia, nuclear DNA didistribusikan di antara kromosom yang
berbeda. DNA dalam nukleus manusia dibagi menjadi 23 atau 24 jenis kromosom yang berbeda,
tergantung pada jenis kelamin individu (laki-laki dengan kromosom Y, memiliki jenis
kromosom ekstra yang tidak dimiliki perempuan). Masing-masing kromosom ini terdiri atas
molekul DNA linier tunggal yang sangat panjang yang terkait dengan protein yang melipat dan
mengemas benang halus DNA ke dalam struktur yang lebih kompak. Kompleks DNA dan
protein ini disebut kromatin. Selain protein yang terlibat dalam pengemasan DNA, kromosom
juga berhubungan dengan banyak protein lain yang terlibat dalam replikasi DNA, perbaikan
DNA, dan ekspresi gen. [1]
Dengan pengecualian sel gamet (sperma dan telur) dan sel-sel khusus yang secara
keseluruhan kekurangan DNA (seperti sel darah merah yang sudah deawasa), sel manusia
masing-masing mengandung dua salinan dari setiap kromosom, satu diwarisi dari ibu dan satu
dari ayah. Versi ibu dan ayah dari masing-masing kromosom disebut kromosom homolog
(homolog). Satu-satunya pasangan kromosom nonhomolog pada manusia adalah kromosom seks
pada laki-laki, dimana kromosom Y diwarisi dari ayah dan kromosom X dari ibu. Wanita
mewarisi satu kromosom X dari kedua orangtua dan tidak memiliki kromosom Y. Setiap set
kromosom manusia yang lengkap mengandung total sekitar 3,2 × 10 9 pasang nukleotida DNA
— yang bersama-sama membentuk genom manusia. [1]
Tampilan teratur dari 46 kromosom yang lengkap manusia disebut kariotipe manusia.
Jika bagian dari kromosom hilang, atau berpindah di antara kromosom, perubahan tersebut dapat
dideteksi. Sitogenetik menganalisa kariotipe untuk mendeteksi kelainan kromosom yang
berhubungan dengan beberapa kelainan bawaan. [1]
Fungsi paling penting dari kromosom adalah untuk membawa gen — unit fungsional dari
pewarisan sifat. Gen sering didefinisikan sebagai segmen DNA yang berisi instruksi untuk
membuat protein tertentu atau molekul RNA. Sebagian besar molekul RNA yang dikodekan
oleh gen selanjutnya digunakan untuk menghasilkan protein. Namun dalam beberapa kasus,
molekul RNA adalah produk akhir. Bersama-sama, informasi genetik total yang dibawa oleh
satu set lengkap kromosom yang ada dalam sel atau organisme disebut genome. [1]
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Sindrom Turner
2.1.1 Definisi
Turner syndrome (TS) adalah fenotipe kompleks yang terkait dengan monosomi
lengkap atau parsial dari kromosom X, biasanya hasil dari nondisjungsi kromosom
sporadis. Sindrom Turner adalah salah satu kelainan kromosom seks yang paling
umum, mempengaruhi sekitar 1 dari 2000 anak perempuan yang lahir hidup.[4]

2.1.2 Penyebab
Sindrom Turner (Turner syndrom: TS) adalah penyakit yang menyerang
wanita. Latar belakang genetik fenotip sangat bervariasi, dan analisis kariotipe dapat
meningkatkan pemahaman penyakit. [2]
TS didefinisikan oleh kromosom X yang sebagian atau seluruhnya tidak ada.
Kariotipe "klasik" untuk sindrom Turner adalah 45, X. Dalam penelitian terbaru,
kariotipe klasik hanya ditemukan pada 45% pasien; pasien yang tersisa memiliki
kariotipe mosaik (yaitu 45, X / 46, XX atau 45, X / 47, XXX), kariotipe dengan
kelainan struktural kromosom X (misalnya i (Xq) atau i (Xp)), atau kariotipe yang
termasuk kromosom Y atau potongan-potongan kromosom Y.[2]
Pada seorang gadis yang biasanya berkembang dengan komplemen normal 46
kromosom, salah satu kromosom X tidak aktif selama perkembangan embrionik awal,
sebuah fenomena yang dikenal sebagai kompensasi dosis atau lyonization.[4]
Mekanisme epigenetik ini berfungsi untuk menyamakan dosis gen terkait-X
antara anak perempuan dan anak laki-laki. Beberapa gen pada kromosom X yang
'tidak aktif' pada anak perempuan sebenarnya lolos dari inaktivasi setidaknya sampai
tingkat tertentu. TS dapat dianggap sebagai hasil dari tidak adanya sebagian atau
seluruhnya gen yang lolos dari inaktivasi.[4]

2.1.3 Kelainan yang Terlihat

Kelainan fisik yang paling umum (yaitu, frekuensi R50%) yang
mempengaruhi anak perempuan yang memiliki TS termasuk perawakan pendek,
infertilitas, defisiensi estrogen, hipertensi, peningkatan enzim hati, infeksi telinga
tengah, micrognathia, retardasi usia tulang, penurunan kadar mineral tulang, cubitus
valgus, dan perkembangan yang buruk selama tahun pertama pasca kelahiran.[4]
Anak perempuan yang menderita TS juga memiliki risiko yang secara
signifikan lebih tinggi untuk penyakit tertentu dibandingkan dengan populasi umum,
termasuk hipotiroidisme, diabetes, penyakit jantung, osteoporosis, kelainan bawaan
 (misalnya jantung, sistem kemih, wajah, leher, telinga), penyakit saraf, sirosis hati,
dan kanker kolon dan rectum. [4]
Gangguan kardiovaskular dianggap sebagai masalah paling serius yang terkait
dengan TS. Tingkat morbiditas yang tinggi ada di antara populasi TS, terutama karena
kondisi jantung bawaan dan didapat, seperti koartasio aorta, katup aorta biskuspid,
prolaps katup mitral, hipertensi, penyakit jantung iskemik, dan arteriosklerosis.[2]
Gangguan kardiovaskular merupakan faktor risiko utama dan terjadi pada 41%
pasien. Pasien dengan TS memiliki kelainan kardiovaskular bawaan lebih sering
daripada orang normal. Penyakit katup jantung adalah kelainan yang umum, dan
pasien dengan TS memiliki deformitas bicuspid aorta yang secara signifikan lebih
tinggi. Pasien dengan TS memiliki risiko meninggal terutama dari aneurisma diseksi
aorta, kaum muda dengan TS memiliki diameter aorta yang jauh lebih kecil daripada
populasi umum, dan operasi aorta diindikasikan untuk pasien dengan TS di atas usia
18 dengan indeks ukuran aorta yang naik > 2,5 cm / m 2 untuk mencegah diseksi
aorta. Karena terbatasnya jumlah pasien dan perbedaan etnis, kejadian pasti penyakit
kardiovaskular pada pasien dengan TS tidak jelas dan perlu dipelajari lebih lanjut.[2]
Penyakit autoimun sekunder adalah salah satu fitur yang paling menonjol dari
TS karena aneuploidi kromosom X. TS menyebabkan berbagai penyakit autoimun
seperti tiroiditis, kolitis, penyakit celiac, diabetes tipe 1, dan psoriasis, meskipun yang
paling umum adalah tiroiditis autoimun.[2]
Fraktur dianggap sebagai salah satu komplikasi utama TS. Namun, saat ini
tidak ada bukti peningkatan risiko patah tulang pada anak-anak dan remaja dengan
TS, tetapi ada bukti bahwa wanita dengan TS memiliki sekitar 25% peningkatan risiko
patah tulang, terutama dalam bentuk patah tulang lengan. Diagnosis dan perawatan
yang tepat waktu dapat membantu menjaga kesehatan tulang pada pasien.[2]
2.1.4 Perawatan
Sebuah penelitian telah menunjukkan bahwa terapi hormon pertumbuhan
dapat meningkatkan tinggi badan pasien dewasa dengan TS. Sebuah studi
memberikan hormon pertumbuhan pada 16 anak perempuan dengan TS di India
selama periode yang lama; skor SD tinggi badan dan indeks massa tubuh pasien
menunjukkan bahwa pasien dengan TS tidak mendapat manfaat dari hormon
pertumbuhan. Sejumlah besar penelitian telah menunjukkan bahwa pemberian hormon
pertumbuhan manusia biosintetik dosis tinggi dapat secara signifikan meningkatkan
tinggi badan seumur hidup anak-anak dengan TS, sehingga terapi hormon
pertumbuhan saat ini merupakan pengobatan pilihan. Sensitivitas individu terhadap
hormon pertumbuhan manusia rekombinan (r-hGH) diketahui bervariasi;
menyebabkan pertumbuhan yang dipercepat secara signifikan pada tahun pertama,
tetapi responsnya secara bertahap berkurang seiring waktu. tinggi yang dapat dicapai
seumur hidup pasien terkait dengan usia saat perawatan, waktu, dan dosis dan
pemberian hormon pertumbuhan. Berbagai kombinasi terapi lebih baik daripada terapi
dengan hormon pertumbuhan saja. Terapi hormon pertumbuhan jangka panjang
memiliki efek positif pada perkembangan kraniofasial pada anak perempuan dengan
TS, dan dampak terbesarnya adalah pada tinggi wajah posterior dan tinggi ramus
mandibula.[2]
Pertumbuhan remaja yang mengalami retardasi berkaitan dengan defisiensi
estrogen pada pasien dengan TS, sehingga estrogen diberikan. Di masa lalu, terapi
penggantian estrogen dimulai ketika pasien berusia 15 tahun untuk menghindari
penutupan epifisis prematur, sehingga memengaruhi tinggi seumur hidup pasien.
Rekomendasi umum adalah bahwa pasien harus memulai dengan dosis kecil estrogen
pada usia 12, memungkinkan pasien untuk mulai mengembangkan karakteristik
seksual sekunder dan rahim dan untuk meningkatkan fungsi hati, fungsi kognitif, dan
kualitas hidup. Percobaan baru-baru ini diberikan r-hGH dan estrogen dosis rendah
untuk pasien dengan TS selama 20 tahun. Hasil dengan jelas menunjukkan bahwa
pemberian estradiol dan r-hGH dosis sangat rendah pada masa remaja menghasilkan
kadar estrogen yang mendekati level anak perempuan sehat pada masa pubertas;
sebagai gadis remaja dengan TS matang, meningkatkan dosis estradiol sangat
meningkatkan tinggi dewasa akhir mereka. Banyak bentuk estrogen dapat digunakan
untuk mengobati pasien, yang paling umum adalah estrogen oral diikuti oleh tambalan
transdermal. Namun, apakah pasien muda dengan TS harus menggunakan estrogen
oral atau menggunakan tambalan transdermal estradiol perlu diverifikasi lebih lanjut.
[2]
 BAB III
PROSEDUR KERJA

3.1 Preparasi Kromosom

a. Bahan yang diperiksa: darah vena/kapiler yang dimasukkan ke dalam tube heparin.
b. Peralatan yang digunakan: spuit, tabung heparin, tabung falcon 10 cc, laminary flow,
inkubator, pipet ependrof, tip pipet, centrifuge, waterbath, pipet ukur, deck glass,
mikroskop cahaya.
c. Siapkan media MEM (medium dengan sedikit aminoacid dan vitamin) dan RPMI 1640
(medium yang kaya amino acid dan vitamin yang biasa dipakai untuk kultur limfoblas),
kemudian pada masing-masing media ditambahkan PHA 100 μl (yang berfungsi untuk
memacu mitosis) dan FBS 10% pada masing-masing media.
d. Teteskan masing-masing 7 tetes “buffy coat” atau 10 tetes darah dalam 2 tube berisi 5 ml
media yang berbeda (MEM dan RPMI 1640).
e. Tabung diinkubasi pada suhu 37 ᴼ celcius selama 72-96 jam dengan sudut kemiringan
tabung 45ᴼ agar memberi peluang untuk tumbuhnya sel di permukaan dalam incubator
biasa atau incubator yang mengandung 5% CO2.
f. Kemudian ditambahkan 3 tetes colchicines, inkubasi diteruskan selama 30 menit,
kemudian dipusingkan selama 10 menit pada 1000 rpm.
g. Buang supernata, endapan diresuspensikan dan ditambahkan larutan hipotonik hangat
KCl 0,075 M, diresuspensikan sampai homogen dan diinkubasi 37 derajat celcius dalam
waterbath selama 15-30 menit.
h. Pusingkan 1000 RPM selama 10 menit, supernatan dibuang dan ditambahkan 5 ml
larutan fiksasi Carnoy’s (3 metanol: 1 acetic acid) pelan-pelan melalui dinding tabung,
kemudian dikocok. Pemberian larutan fiksasi diulang 3 kali sampai didapatkan presipitat
yang jernih.
i. Residu disuspensikan dengan larutan Carnoy’s secukupnya, sesuai banyaknya pelet,
disebarkan pada gelas obyek dengan meneteskan 2 tetes suspensi pada lokasi yang
berbeda.
j. Dilakukan pengecatan solid dengan Giemsa 10% dalam larutan buffer phospat pH 6,8
selama 1 menit. Pengecatan solid hanya dipakai untuk skrining sel.

3.2 GTG banding (G-banding)

Pengecatan ini menggunakan reagen sebagai berikut:
1. H2O2 30%
2. Larutan Tryspin 1% stok dalam Buffer Hanks
3. Larutan Buffer Hanks (HBSS) pH 6,8-7,2
 4. Phosphate Buffer Saline (PBS) pH 6,8
Pengecatan Trypsin dilakukan tanpa penghangatan, yaitu setelah membiarkan slide
menjadi tua lebih kurang selama 3-5 hari kemudian dicelupkan ke dalam larutan trypsin
0,1% (yang dilarutkan dengan PBS pH 6,8) selama sekitar 10-20 detik, kemudian dicuci
dengan air mengalir selanjutnya dimasukkan ke dalam staining jar yang berisi cat Giemsa
10% dalam phosphate buffer selama 4-10 menit. Setelah dicat, slide dicuci dengan air
mengalir lalu dikeringkan, kemudian siap dianalisis di bawah mikroskop.

3.3 Analisis Kromosom

Siapkan format analisis untuk mencatat koordinat dan jumlah metafase yang dihitung
Analisis untuk semua kasus harus dengan pengecatan G-banding, paling sedikit enam
metafase dan penghitungan untuk 20 metafase. Bila didapatkan kelainan mosaik, analisis
paling sedikit harus didapatkan perbedaan pada 3 metafase dan bila didapatkan hanya 1
metafase yang berbeda maka perhitungan harus ditambah paling sedikit 40 metafase.
 BAB IV
HASIL DAN KESIMPULAN
Terlampirkan
 DAFTAR PUSTAKA

1. Alberts B, Johnson A, Lewis J, et al. Molecular Biology of the Cell. 5th edition. New
York: Garland Science; 2019.
2. Cui X, Cui Y, Shi L, Luan J, Zhou X, Han J. A Basic Understanding of Turner
Syndrome: Incidence, Complications, Diagnosis, And Treatment. Intractable Rare Dis
Res. 2018;7(4):223–228. doi:10.5582/irdr.2017.01056
3. Faradz SMH. Pengantar Sitogenetika, Genetika Molekuler, dan Alat bantu Konseling
Genetika. Laboratorium Bioteknologi FK UNDIP. 2002
4. Kesler SR. Turner syndrome. Child Adolesc Psychiatr Clin N Am. 2007;16(3):709–722.
doi:10.1016/j.chc.2007.02.004