LAPORAN PRAKTIKUM BIOFARMASI-FARMAKOKINETIKA

MODUL VI

UJI BIOEKIVALENSI

Disusun Oleh:

Achmad Khusaerie 10060314165

Fatya Najah Effendi 10060314166

R. SyifaYaumi Tsuraya 10060314167

Neti Afriyani 11060314174

Deska Andriani 11060314175

Rifki Maulana Ramadhan 10060313042

Tanisa Maghfira Syarza 10060313104

Shift :D

Kelompok :5

LABORATORIUM FARMASI TERPADU UNIT E

PROGRAM STUDI FARMASI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS ISLAM BANDUNG
2017 M / 1439 H
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar belakang

Badan Pengawasan Obat dan Makanan (BPOM) berkewajiban untuk

menilai semua produk obat sebelum dipasarkan, memberikan izin pemasaran, dan

selanjutnya melakukan pengawasan terhadap produk obat tersebut setelah

dipasarkan untuk memberikan jaminan kepada masyarakat bahwa obat tersebut

memenuhi standar efikasi, keamana dan mutu yang dibutuhkan. (BPOM,2004)

Sehingga produk obat yang mengandung zat aktif berupa zat kimia baru

(new chemical Entity =NCE) dibutuhkan penilaian mengenai efikasi, keamanan

dan mutu secara lengkap. (BPOM,2004)

Baru-baru ini dalam penggunaan klinis ketokonazol tertentu, infeksi akut

pada pasien yang immuno akibat pengaruhnya, untuk mencegah metastase dari

jenis kanker tertentu dan meningkatkan bioavailabilitas obat lain. Absorbs oral

ketokonazol sangat tergantung pada pH lambung. Hal ini 99% terikat pada protein

plasma distribusikan secara luas dalam organisme. Selama perjalanan melalui hati

dimetabolisme menjadi produk samping yang tidak aktif, yang diekskresikan

masuk kotoran dan urin. Namun, telah dilaporkan bahwa bioavailabilitas

ketokonazol yang diberikan dalam bentuk tablet tidak menunjukkan inter

variabilitas subjek.
1.2 Tujuan pengujian

Penentuan bioekivalensi dan parameter farmakokinetik dari dua

formulasi oral yang mengandung ketokonazol 200 mg ditentukan pada 24 orang

India yang relawan sehat relawan laki-laki Penelitian ini dirancang sebagai dosis

tunggal, dua fase, dua urutan cross-over study dengan wash out periode satu

minggu Kandungan ketokonazol dalam plasma ditentukan dengan metode HPLC

 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Monografi ketokonazol

Ketokonazol adalah zat anti jamur sintetik golongan azol dan merupakan

turunan imidazol. Ketokonazol mengandung tidak kurang dari 98,0% dan

tidak lebih dari 102,0% C26H28Cl2N4O4, dihitung terhadap zat yang telah

dikeringkan. Rumus molekulnya adalah C26H28Cl2N4O4 dan memiliki bobot

molekul 531,44 (Farmakope Indonesia IV, 1995).

Karakter ketokonazol adalah serbuk putih atau hampir putih, praktis tidak

larut dalam air, mudah larut dalam metilen klorida, larut dalam metanol, dan

agak sukar larut dalam etanol (British Pharmacopoeia, 2002). Ketokonazol

memiliki titik lebur antara 148oC – 152oC, rotasi jenis antara -1o dan +1o,

dihitung terhadap zat yang telah dikeringkan (Farmakope Indonesia IV, 1995).

Absorbansi maksimum pada panjang gelombang 220 nm.

Gambar 1.1 Struktur ketokonazol

2.2 Aspek farmakologi

Ketokonazol adalah suatu antijamur golongan imidazol yang

mempengaruhi sintesis ergosterol dan dengan demikian mengubah

permeabilitas membran sel dari jamur yang sensitif terhadap ketokonazol.

Telah ada penelitian yang mengatakan bahwa ketokonazol bersifat fungistatik

pada konsentrasi terapetiknya.

2.2.1 Efek samping

Gangguan gastrointestinal adalah efek samping yang paling sering

dilaporkan setelah penggunaan ketokonazol secara oral. Mual dan muntah

telah dilaporkan pada sekitar 3% pasien, dan sakit perut sekitar 1%. Efek

samping ini terkait dosis dan dapat diminimalkan dengan memberi

ketokonazol dengan makanan. Asimtomatik, peningkatan transien dalam

konsentrasi serum enzim hati dapat terjadi pada sekitar 10% pasien.

Hepatitis telah dilaporkan dan risikonya nampaknya meningkat jika

pengobatan dengan ketokonazol dilanjutkan lebih lama dari 2 minggu;

Biasanya reversibel saat menghentikan ketokonazol namun kematian telah

terjadi. Ketokonazol mengganggu biosintesis steroid dan efek endokrin yang

merugikan meliputi gynaecomastia, oligospermia, ketidakteraturan haid, dan

penekanan korteks adrenal, terutama pada dosis tinggi.

Efek samping lainnya termasuk reaksi alergi seperti urtikaria dan angioedema,

dan jarang terjadi kasus anafilaksis setelah dosis pertama dilaporkan. Pruritus,

ruam, alopecia, sakit kepala, pusing, impotensi, dan mengantuk juga bisa
 terjadi. Trombositopenia, parestesia, meningkatkan tekanan intrakranial, dan

fotofobia jarang dilaporkan. Setelah penggunaan topikal ketokonazol, iritasi,

dermatitis, atau sensasi terbakar telah terjadi (Sweetman, S.C., 2009: 539)

2.2.2 Efek pada fungsi endokrin.

Ketokonazol oral menghambat sintesis testosteron dan respon adrenal

terhadap kortikotropin, mengakibatkan azospermia dan oligospermia,

gynaecomastia, impotensi dan penurunan libido, dan insufisiensi adrenal.

Sebagai penghambat produksi steroid, ketokonazol sangat berharga dalam

mengendalikan hiperkortisolisme dan digunakan secara terapeutik pada

beberapa kelainan endokrin dan kanker prostat. Untuk diskusi lebih lanjut

lihat di bawah Penggunaan dan Administrasi, di bawah ini. sudah dikenal.1-4

Transient minor elevations dari enzim hati tanpa tanda klinis atau gejala

penyakit hati terjadi pada sekitar 10% pasien dan dapat terjadi pada tahap

pengobatan apapun. Meskipun reaksi ini biasanya tidak penting secara klinis,

gejala ini mungkin menandakan timbulnya luka hati yang serius dan

mengindikasikan perlunya pemantauan fungsi hati secara dekat. Reaksi

hepatik simtomatik jauh lebih jarang (kurang dari 0,1% pasien) namun

berpotensi fatal.

Biasanya ada pola kerusakan hepatoseluler dan terkadang kolestasis.

Pasien dengan peningkatan risiko cedera hati termasuk mereka yang memiliki

riwayat penyakit hati, mereka yang berusia di atas 50, terutama wanita, dan

mereka yang membutuhkan perawatan jangka panjang. Penting untuk

memantau fungsi hati selama perawatan serta untuk membatasi lamanya

 pengobatan. Jika nilai enzim hati terus meningkat atau sakit kuning atau

hepatitis terjadi, ketokonazol harus segera ditarik kembali sejak kematiantelah

terjadi pada pasien yang melanjutkan pengobatan setelahnya.

2.2.3 Tindakan pencegahan

Karena ketokonazol telah dilaporkan menyebabkan hepatotoksisitas

Seharusnya tidak diberikan kepada pasien yang sudah ada sebelumnya

penyakit hati. Pasien yang diberi ketokonazol harus dimonitor untuk gejala

hepatitis; juga, hati. Tes fungsi harus dilakukan sebelum memulai oral

pengobatan dengan ketokonazol yang berlangsung lebih dari 14 hari dan

kemudian setidaknya bulanan selama terapi.

2.2.4 Interaksi

Penggunaan obat-obatan yang mengurangi keasaman lambung, seperti

antimuscarinics, antasida, histamin H2-antagonis, dan penghambat pompa

proton, dapat mengurangi penyerapan ketokonazol Penyerapan ketokonazol

juga mungkin terjadi dikurangi dengan sukralfate Obat yang merangsang

enzim seperti rifampisin, isoniazid, efavirenz, nevirapine, atau fenitoin dapat

mengurangi konsentrasi plasma-ketokonazol. Konsentrasi isoniazid dan

rifampisin mungkin juga terjadi dikurangi ketokonazol.

Aspek farmakokinetik

Ketokonazol menghambat enzim oksidase hati tertentu, terutama isoenzim

sitokrom P450 CYP3A4, dengan cara yang sama dengan itrakonazol (hal.537)

dan perawatan serupa harus dilakukan untuk menghindari efek samping akibat

meningkatnya konsentrasi plasma yang berinteraksi narkoba. Reaksi seperti

disulfiram dapat terjadi pada pasien yang memakai ketokonazol setelah

minum alkohol.

Penyerapan ketokonazol dari gastrointestinal traktus bervariasi dan

meningkat dengan menurun pH lambung. Konsentrasi plasma puncak rata –

rata sekitar 3,5 mikrogram / mL sudah didapat 2 jam setelah dosis oral 200

mg. Penyerapan sistemik setelahAplikasi topikal atau vagina pada subyek

sehat adalah minimal. Ketokonazol lebih dari 90% terikat Protein plasma,

terutama albumin. Ini didistribusikan secara luas dan muncul di air susu ibu.

Penetrasi ke dalam CSF.

Penghapusan ketokonazol dilaporkan menjadi biphasic, dengan waktu

paruh awal 2 jam dan waktu paruh terminal sekitar 8 jam. Ketokonazol

dimetabolisme di hati sehingga tidak aktif metabolisme. Ini diekskresikan

sebagai metabolit dan tidak berubah obat terutama di beberapa diekskresikan

masuk urin penggunaan dan administrasi. Ketokonazol adalah imidazol

antijamur yang digunakan secara topikal atau oral. Ini diberikan pada

mucocutaneous kronis atau kandidiasis vagina, pada infeksi jamur pada

gastrointestinal saluran, infeksi dermatofit pada kulit dan kuku tidak

merespons pengobatan topikal, dan pada infeksi sistemik termasuk

blastomikosis, kandidiasis, coccidioidomycosis, histoplasmosis, dan

paracoccidioidomycosis. Sudah diberikan profilaksis infeksi jamur dalam

immunocompromised pasien, meskipun flukonazol atau itrakonazol biasanya

lebih disukai dan telah direkomendasikan Itu karena penyerapannya yang

tidak menentu dan terapi yang lambat, ketokonazol tidak boleh digunakan

pengobatan infeksi jamur yang mengancam jiwa, termasuk meningitis jamur,

atau untuk infeksi berat dipasien immunocompromised. Juga, karena risiko

hepatotoksisitas penggunaan ketokonazol di Indonesia Infeksi jamur

nonsistemik cenderung dibatasi infeksi serius resisten terhadap pengobatan

lainnya.

Dosis oral biasa untuk pengobatan dan profilaksis Infeksi jamur 200 mg

sekali sehari dikonsumsi bersama makanan. Hal ini dapat ditingkatkan

menjadi 400 mg setiap hari jika cukup respon tidak diperoleh; pada beberapa

infeksi bahkan lebih tinggi lagi dosis telah digunakan Anak-anak mungkin

diberikan 3 mg / kg sehari atau 50 mg untuk mereka yang berusia 1 sampai 4

tahun dan 100 mg untuk anak usia 5 sampai 12 tahun. Pengobatan biasanya

harus dilanjutkan selama 14 hari dan paling tidak satu minggu setelah gejala

sudah bersih dan budaya telah menjadi negatif Beberapa infeksi mungkin

memerlukan beberapa bulan pengobatan dan pemberian ketokonazol

untuk jangka waktu lama dapat meningkatkan risiko hepatotoksisitas. Dosis

400 mg sekali sehari selama 5 hari digunakan untuk pengobatan kandidiasis

vagina kronis.
Data dari AHFS

Tinjauan pustaka

Dosis yang digunakan orang dewasa yaitu 200 mg perhari. Dosis dapat
ditingkatkan menjadi 400 mg sekali sehari untuk infeksi berat atau jika respons klinis
yang diharapkan tidak tercapai.

Data farmakokinetik

Ketersediaan hayati : Diserap dengan cepat dari saluran pencernaan, konsentrasi

plasma puncak dicapai dalam 1-2 jam.

Ketokonazol harus dilarutkan dalam sekresi lambung dan

diubah menjadi garam hidroklorida sebelum diserap dari
lambung. Bioavailabilitas bergantung pada pH isi lambung di
perut; peningkatan pH menyebabkan penurunan penyerapan
obat. (Lihat Penyerapan: Populasi Khusus.)

Makanan Pengaruh makanan terhadap tingkat dan tingkat absorpsi

penyerapan GI ketokonazol belum ditentukan secara jelas

Konsentrasi Plasma Variasi interindividen yang cukup besar pada konsentrasi

plasma puncak dan AUC telah dilaporkan

Populasi Khusus Ketersediaan hayati oral dapat dikurangi pada pasien dengan
achlorhydria, termasuk yang memiliki hipokloridemia gaster
terkait HIV.198, 200 Konsisten larutan asam klorida encer
biasanya menormalkan penyerapan obat pada pasien ini.198
Pemberian minuman asam secara simultan dapat
meningkatkan ketersediaan hayati pada beberapa
individu.273 (Lihat Administrasi Lisan dengan Dosis dan
Administrasi.)

Metabolisme Sebagian dimetabolisme di hati ke beberapa metabolit tidak

aktif dengan oksidasi dan degradasi cincin imidazol dan
piperazin, dengan oksidasi O-dealkilasi, dan dengan
hidroksilasi aromatik.

Rute Eliminasi Rute utama eliminasi ketokonazol dan metabolitnya

tampaknya merupakan ekskresi ke dalam kotoran melalui
empedu.

Pada orang dewasa puasa dengan fungsi ginjal normal,

sekitar 57% dari dosis oral 200 mg tunggal diekskresikan
dalam kotoran dalam 4 hari (20-65% dari obat ini tidak
berubah); sekitar 13% dari dosis diekskresikan dalam urin
dalam 4 hari (2-4% dari obat ini tidak berubah)
 BAB III

Desain Pengujian

Pengujian dilakukan pada obat uji yang dibandingkan dengan obat

inovator Nizoral®, (Produksi Janssen pharmaceutica, Beerse, Belgium) bentuk

sediaan tablet konvensional dengan kekuatan sediaan 200 mg. Caranya yaitu

dengan membandingkan profil farmakokinetika dalam plasma. Uji bioekivalensi

ini didesain secara random dosis tunggal, cross over dengan wash out 2 hari

berdasarkan asumsi waktu paruh pada kisaran 4 jam. Periode washout ditentukan

dari tujuh kali waktu paruh, dimana waktu paruh ketokonazol yaitu 4 jam

sehingga periode washout 28 jam. Kemudian, surat persetujuan diperoleh dari

setiap sukarelawan sebelum pengujian dimulai.

 BAB IV

Subjek Uji

2.1 Kriteria Sukarelawan

Kriteria sukarelawan yang memenuhi persyaratan antara lain adalah:

a. Kriteria Inklusi

 Sukarelawan pria sehat sehat (kriteria sehat berdasarkan uji

laboratorium klinis hematologi rutin, fungsi hati, fungsi ginjal,

gula darah, dan urinalisis), riwayat penyakit, dan pemeriksaan

fisik.

 Usia antara 18 – 55 tahun.

 Berat badan dalam kisaran normal : IMT pada rentang 18-25.

 Tidak kontraindikasi atau hipersensitif terhadap obat yang diuji.

  Uji serologis terhadap gangguan fungsi hati, Hepatitis B

(HBsAg), Hepatitis C (anti-HCV) dan HIV (anti-HIV) optinal

B.

 Tidak ada riwayat penyakit gastrointestinal dan gangguan

saluran cerna.

 Tidak kontra indikasi atau hipersensitif terhadap ketokonazol.

b. Kriteria Eksklusi

 Bukan perokok.

 Bukan mengkonsumsi alkohol.

 Tidak mempunyai riwayat ketergantungan atau penyalahgunaan

obat.
 BAB V

CARA PENGUJIAN

5.1. Pemberian Obat

Semua relawan dikumpulkan di unit farmakologi klinik pada pukul 6

pagi pada setiap sesi pengujian per harinya, setelah berpuasa pada malam

harinya selama 10 jam dengan total denyut nadi dan tekanan darahnya dicatat.

5.2. Pengambilan Sampel Darah

Total dari 15 sampel darah telah diambil pada (0 jam) sebelum obat

mengalami administrasi dan pada 0.5 , 1.0 , 1.5 , 2.0 , 2.5 , 3.0 , 3.5 , 4.0 , 5.0 , 6.0

, 8.0 , 10.0 , 12.0 , 24.0 jam (setelah obat diadministrasikan) di vial dengan

penambahan EDTA pada setiap titik waktu. Sampel darah yang dikumpulkan

disentrifugasi segera, plasma dipisahkan dan disimpan dalam lemari pendingin

bersuhu -20oC yang diberi label yang sesuai nomor kode relawan, tanggal

pengujian dan waktu pengumpulan, sampai tanggal analisis berahir.

5.3. Preparasi Sampel

1,0 mL plasma ditempatkan dalam tabung stopper test. Tambahkan 0,1

mL vorikonazol (5mcg/mL) dan kocok selama 1 menit. Tambakan 7,0 mL

diklorometan ke dalam campuran tersebut dan vortex selama 10 menit. Kemudian

di sentrifugasi selama 5 menit pada kecepatan 5000rpm. Ambil 6mL dari lapisan

organik yang terpisah pada tabung dan uapkan dengan gas nitrogen pada suhu 40-

50C. residu diarutkan dengan fase gerak sebanyak 200 mcL dan diinjeksikan

dalam HPLC

5.4. Analisis Farmakokinetik

Berikut parameter farmakokinetik yang ditentukan secara langsung atau

dihitung menggunakan metode standar non kompartemen. Konsentrasi maksimum

dalam plasma (Cmaks) dan waktu saat konsentrasi maksimal ( Tmaks) keduanya

diperoleh langsung dari data. Waktu paruh eliminasi (t1/2) dihitung dari 0,693/K

eliminasi, K eliminasi adalah laju eliminasi semu yang konstan. K eliminasi

dihitung sebagai kemiringan dari garis regresi linear dari ln Cp. 7 data terahir

kuantitatif digunakan untuk menentukan K eliminasi. AUC0 dihitung dari tingkat

yang terukur dari t0 sampai t terakhir yang terhitung dengan persamaan linear.

AUC~ dihitung denga rumus AUC~ = AUC 0t + Clast/Kel, dimana Clast adalah

konsentrasi plasma yang terakhir diukur.

5.5. Analisis Statistik

 Analisis varian dilakukan pada parameter farmakkinetik seperti Cmax,

AUC~ menggunakan prosedur model linear umum dimana sumber variasi adalah

subyek, formulasi dan periode. Ditentukan Interval kepercayaan 90% dari rasio

uji atau rujukan untuk Cmax, AUC0-24 dan AUC~ . Bioekivalensi antara 2

formulasi tersebut dapat disimpulkan bila interval kepercayaan 90% untuk

parameter farmakokinetik dari kedua produk ditemukan dalam kisaran yang dapat

diterima yaitu dari 80-125%.

BAB VI

SAMPEL UJI dan WAKTU SAMPLING

Sampel darah diambil dari subyek sebanyak 15 kali. 1 kali sebelum

pemberian dosis (t= 0) dan pada 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 5.0, 6.0, 8.0,

10.0, 12.0, 24.0 jam setelah obat diberikan. Sampel dikumpulkan, ditambah

EDTA dan disentrifugasi segera. Sampel plasma dipisahkan dan disimpan dalam

lemari pendingin bersuhu -20oC yang diberi label yang sesuai dengan nomor kode

relawan, tanggal pengujian dan waktu pengujian, sampai analisis yang terakhir.
 BAB VII

SENYAWA YANG AKAN DIGUNAKAN & METODE ANALISIS

7.1. Prosedur Kerja

Konsentrasi ketokonazol dalam plasma ditentukan dengan menggunakan

metode kromatografi cair kinerja tinggi, dikembangkan dan divalidasi dengan

deteksi ultraviolet. Sampel plasma sebanyak 1.0 ml ditempatkan dalam tabung

stopper test. Ditambahkan 0.1 ml vorikonazol (5mcg/ml) dan dicampurkan selama

1 menit. Ditambahkan 7.0 ml diklorometan ke dalam campuran tersebut dan

divortex selama 10 menit. Kemudian di sentrifugasi selama 5 menit pada

kecepatan 5000 rpm. Diambil 6 ml supernatant dan uapkan pada suhu 40-50oC.

Hasil penguapan dilarutkan dengan fase gerak sebanyak 200 µL dan diinjeksikan
dalam KCKT. Penggunaan standar internal, dan metode ekstraksi cair-cair

bertujuan untuk meningkatkan persen perolehan kembali, dan menunjukkan

puncak setelah tercapai waktu retensi.

7.2. Metode Analisis

Ketokonazole dapat dianalisis dengan menggunakan metode analisis

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi atau HPLC. Pelarut yang digunakan harus

memiliki grade for HPLC, kemudian senyawa dan reagen yang digunakan

memiliki grade analitikal grade dan kolom yang digunakannya adalah BDS

Hypersil C18. Fase gerak yang digunakannya 0,1 M Disodium hydrogen

phosphate buffer atau dapar dinatrium hydrogen fosfat (pH disesuaikan menjadi 6

dengan cara menambahkan asam asetat glasial sebagai peng-adjust pH) dan

asetonitril dengan perbandingan 60:40 (v/v) dan dielusi dengan laju alir 1

mL/menit. Mekanisme HPLC yaitu, pemisaham melalui partisi antar cairan yang

berbeda kepolaran, dengan mengguankan fase balik (reversed phase) dimana pada

fase diam yang digunakan bersifat kurang polar dari fase geraknya, sedangkan

fase gerak bersifat lebih polar dari fase diam. Hal ini bertujuan untuk memisahkan

ketokonazole yang bersifat nonpolar dari komponen plasma yang bersifat polar

karena komponen terbesar dari plasma adalah air. Sampel Ketokonazole akan

tertahan lama pada fase diam yang sifatnya kurang polar, sehingga ketokonazole

dapat dipisahkan dari komponen plasma. Setelah ketokonazole terpisah dari

komponen plasma kemudian ketoconazole dapat dideteksi oleh detektor

ultraviolet, sehingga didapat hasil kromatrogram yang menunjukkan nilai AUC

dan waktu retensi ketokonazole.

 BAB VIII

PENGOLAHAN DATA dan PERHITUNGAN

8.1. Pengolahan data

Tujuan utama penilaian bioekivalensi adalah untuk menghitung
perbedaan bioavailabilitas antara produk uji dan produk pembanding, dan
untuk menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan yang bermakna secara
klinik. Parameter farmakokinetik yang ditentukan secara langsung atau
dihitung menggunakan metode standar non kompartemen. Konsentrasi
maksimum dalam plasma (Cmaks) dan waktu saat konsentrasi maksimal
( Tmaks) keduanya diperoleh langsung dari data. Waktu paruh eliminasi
(t1/2) dihitung dari 0,693/K eliminasi, K eliminasi adalah laju eliminasi
semu yang konstan. K eliminasi dihitung sebagai kemiringan dari garis
regresi linear dari ln Cp. 7 data terahir kuantitatif digunakan untuk
 menentukan K eliminasi. AUC0 dihitung dari tingkat yang terukur dari t0
sampai t terakhir yang terhitung dengan persamaan linear. AUC 0-∞
dihitung dengan rumus : AUC0-∞ = AUC0-t + Clast/Ke. (Clast = kadar
plasma yang terakhir dihitung).

BAB IX

ANALISIS STATISTIK DAN INTERPRETASI DATA

Analisi varian dilakukan pada parameter farmakkinetik seperti Cmax,

AUC0-∞ menggunakan prosedur model linear umum dimana sumber variasi
adalah subyek, formulasi dan periode. Ditentukan Interval kepercayaan 90% dari
rasio uji atau rujukan untuk Cmax, AUC0-24 dan AUC~ . bioekivalensi antara 2
formulasi tersebut dapat disimpulkan bila interval kepercayaan 90% untuk
parameter farmakokinetik dari kedua prodak ditemukan dalam kisaran yang dapat
diterima dari 80-125%.
DAFTAR PUSTAKA