LAPORAN PRAKTIKUM FARMAKOLOGI – TOKSIKOLOGI

PERCOBAAN II
PENGARUH INDUKTOR DAN INHIBTOR
TERHADAP EFEK FARMAKOLOGI

Disusun Oleh :
1.

Virnalia Nada Utari (1041611146)

2. Wamelinda Dwi.W (1041611149)
3. Winda Nurliana.M (1041611151)
4. Surya Hadi Pranata (1041511236)

PROGRAM STUDI S1 FARMASI

STIFAR "YAYASAN PHARMASI" SEMARANG
2018

Pengaruh Cimetidine dan Phenobarbital pada Kinetika Metabolit

Omeprazol Pada Tikus
A. PENDAHULUAN
Omeprazole (OMP) adalah obat penghambat pompa proton yang digunakan untuk
gangguan gastrointestinal terkait dengan asam. Dimetabolisme di hati oleh sitokrom P-
450 (CYP450) isoenzim seperti CYP2C19 dan CYP3A4. 5-Hyroxyomeprazole (5-
OHOMP) dan omeprazole sulfone (OMP-SFN) adalah dua metabolit utama OMP pada
manusia. Simetidin (CMT) menghambat pemecahan obat yang dimetabolisme oleh
CYP450 dan mengurangi pembersihan obat coadministered yang dihasilkan dari kedua
CMT yang mengikat CYP450 dan penurunan aliran darah hepatik karena CMT.
Phenobarbital (PB) menginduksi metabolisme obat pada hewan uji dan manusia. Induksi
PB terutama melibatkan bentuk CYP mamalia dalam keluarga gen 2B dan 3A. PB telah
banyak digunakan sebagai inducer prototipe untuk penyelidikan biokimia terhadap
metabolisme obat dan enzim yang mengkatalisis metabolisme ini, juga untuk
penyelidikan genetik, farmakologis, dan toksikologi.

B. TUJUAN
Mempelajari pengaruh beberapa senyawa kimia terhadap enzim pemetabolisme obat
dengan mengukur efek farmakologinya.

C. DASAR TEORI
Metabolisme atau biotransformasi adalah reaksi perubahan zat kimia dalam jaringan biologi
yang dikatalis oleh enzim menjadi metabolitnya. Jumlah obat dalam tubuh dapat berkurang
karena proses metabolisme dan ekskresi. Hati merupakan organ utama tempat metabolisme
obat. Ginjal tidak akan efektif mengeksresi obat yang bersifat lipofil karena mereka akan
mengalami reabsorpsi di tubulus setelah melalui filtrasi glomelurus. Oleh karena itu, obat yang
lipofil harus dimetabolisme terlebih dahulu menjadi senyawa yang lebih polar supaya
reabsorpsinya berkurang sehingga mudah diekskresi.

Proses metabolisme terbagi menjadi beberapa fase:

1. Reaksi Fase I merubah senyawa lipofil menjadi senyawa yang mempunyai gugus
fungsional seperti OH, NH2, dan COOH. Ini bertujuan agar senyawa lebih mudah
mengalami proses perubahan selanjutnya. Hasil metabolisme fase I mungkin
mempengaruhi efek farmakologinya. Metabolisme fase I kebanyakan menggunakan
enzim sitokrom P450 yang banyak terdapat di sel hepar dan GI. Enzim ini juga
 berperan penting dalam memetabolisme zat endogen seperti steroid, lemak dan
detoksifikasi zat eksogen. Namun demikian, ada juga metabolisme fase I yang tidak
menggunakan enzim sitokrom P450, seperti pada oksidasi katekolamin, histamine
dan etanol.
2. Reaksi Fase II atau reaksi konjugasi terjadi jika zat belumcukup polar setelah
mengalami metabolisme fase I, ini terutama terjadi pada zat yang sangat lipofil.
Konjugasi ialah reaksi penggabungan antara obat dengan zat endogen seperti asam
glukoronat, asam sulfat, asam asetat dan asam amino. Hasil reaksi konjugasi berupa
zat yang sangat polar dan tidak aktif secara farmakologi. Glukoronidasi adalah reaksi
konjugasi yang paling umum dan paling penting dalam ekskresi dan inaktifasi obat.
Untuk obat yang sudah mempunyai gugus seperti OH, NH2, SH dan COOH mungkin
tidak perlu mengalami reaksi fase I untuk dimetabolisme fase II. Dengan demikian tidak
semua zat mengalami reaksi fase I terlebih dahulu sebelum reaksi fase II. Bahkan zat
dapat mengalami metabolisme fase II terlebih dahulu sebelum mengalami metabolisme
fase I.
(Mycek,2001)
Tujuan metabolisme obat adalah mengubah obat yang non polar (larut lemak)
menjadi polar (larut air)agar dapat diekskresikan melalui ginjal atau empedu.dengan
perubahan ini obat aktif umumnya diubah menjadi inaktif.Tapi sebagian berubah menjadi
lebih aktif(jika asalnya prodrug),kurang aktif,atau menjadi toksik.
Reaksi metabolisme yang terpenting adalah oksidasi oleh enzim cytocrome P450
(cyp)yang disebut juga enzim monooksigenase atau MFO (Mixed Fungtion Oxidase)
dalam endoplasmic reticulum (mikrosom)hati.Interaksi dalam metabolisme obat berupa
induksi atau inhibisi enzim metabolisme,terutama enzim cyp.
Induksi berarti peningkatan sistem enzim metabolisme pada tingkat transkripsi
sehingga terjadi peningkatan kecepatan metabolisme obat yang menjadi substrat enzim
yang bersangkutan.
Inhibisi enzim metabolisme berarti hambatan yang terjadi secara langsung dengan
akibat peningkatan kadar substrat dari enzim yang dihambat juga terjadi secara langsung.
(Mardjono,2007,hal 8)
Faktor-faktor yang mempengaruhi metabolisme obat antara lain:
1. Faktor Genetik atau keturunan
Perbedaan individu pada proses metabolisme sejumlah obat kadang-kadang terjadi dalam
system kehidupan.Hal ini menunjukkan bahwa factor genetic atau keturunan ikut
berperan terhadap adanya perbedaan kecepatan metabolisme obat.
2. Perbedaan spesies dan galur
Pada proses metabolisme obat,perubahan kimia yang terjadi pada spesies dan galur
kemungkinan sama atau sedikit berbeda,tetapi kadang-kadang ada perbedan uang
cukup besar pada reaksi metabolismenya.
3. Perbedaan jenis kelamin
Pada spesies binatang menunjukkan ada pengaruh jenis kelamin terhadap kecepatan
metabolisme obat
4. Perbedaan umur
Bayi dalam kandungan atau bayi yang baru lahir jumlah enzim-enzim mikrosom hati
yang diperlukan untuk memetabolisme obat relatif masih sedikit sehingga sangat peka
terhadap obat.
5. Penghambatan enzim metabolisme
Kadang-kadang pemberian terlebih dahulu atau secara bersama-sama suatu senyawa
yang menghambat kerja enzim-enzim metabolisme dapat meningkatkan intensitas efek
obat,memperpanjang masa kerja obat dan kemungkinan juga meningkatkan efek
samping dan toksisitas.
6. Induksi enzim metabolisme
Pemberian bersama-sama suatu senyawa dapat meningkatkan kecepatan metabolisme
obat dan memperpendek masa kerja obat.Hal ini disebabkan senyawa tersebut dapat
meningkatkan jumlah atau aktivitas enzim metabolisme dan bukan Karena permeablelitas
mikrosom atau adanya reaksi penghambatan.Peningkatan aktivitas enzim metabolisme
obat-obat tertentuatau proses induksi enzim mempercepat proses metabolisme dan
menurunkan kadar obat bebas dalam plasma sehingga efek farmakologis obat menurun
dan masa kerjanya menjadi lebih singkat.
Pada metabolisme obat,gambaran secara tepat system enzin yang bertanggungjawab
terhadap proses oksidasi,reduksi,masih belum diketahui secara jelas.Secara umum
diketahui bahwa sebagian besar reaksi metabolik akan melibatkan prpses oksidasi.Proses
ini memerlukan enzim sebagai kofaktor,yaitu bentuk tereduksi dari nikotinamid-adenin-
dinukleotida fosfat (NADPH) dan nikotinamid-adenin-dinukleotida.
Omeprazol (OMP, 5-methoxy-2 - [[4-metoksi-3,5-dimetil-c2 piridinil) metil] sulfinil]
-1H-benzimidazol, Gambar 1) adalah kelas yang disebut sebagai inhibitor pompa proton;
Ini bertindak untuk mengatur produksi asam di perut dan digunakan untuk mengobati
berbagai gangguan gastrointestinal terkait asam (Howden, 1991; Wilde dan McTavish,
1994). Di hati, itu dimetabolisme dengan berbagai tingkat oleh beberapa isoenzim
CYP450, yang selanjutnya dikategorikan ke dalam subfamili produk gen polimorfik
terkait (Petersen, 1994). Metabolisme OMP sangat bergantung pada CYP3A4 dan
CYP2C19. OMP dimetabolisme menjadi dua metabolit utama, 5-hydroxyomeprazole (5-
OHOMP) dan omeprazole sulfone (OMP-SFN), pada manusia.
(Regardh et al., 1985; Andersson et al., 1993, 1994).
Cimetidine (CMT, N-cyano-N'-methyI-N "- [2 - [[5-methyl-1H-imidazol-4-yl)
methyl] thio] etil] guanidin) adalah antagonis reseptor H2 histamin yang Banyak
digunakan untuk mengobati lambung dan duodenum ulkus (Black, 1976). Efek CMT
yang paling banyak dikenal adalah penghambatan metabolisme hati yang dimediasi oleh
isozim CYP450 seperti CYP3A4, 2D6, 1A2, 2C9, dan 2C19, pengurangan darah hati.
aliran, dan penghambatan sekresi tubular proksimal kation organik. (Shiga et al. 2000;
Badyal dan Dadhich, 2001; Yamano et al.2001; Szutowski et al. 2002).
Phenobarbital (PB, 5-etil-5-fenil-2,4,6 (1H, 3H, 5H) - pyrimidinetrione) telah
dikenal untuk menginduksi metabolisme obat pada hewan laboratorium dan manusia
(Carlie et al., 1997). Induksi PB terutama melibatkan bentuk CYP mamalia dalam
keluarga gen 2B dan 3A, namun ekspresi enzim metabolisme obat lain dan gen fungsi
yang tidak diketahui juga dimodulasi. (Sudjana-Sugiaman et al., 1994)

Interaksi Omeprazol dengan Cimetidine dan Phenobarbital

D. ALAT DAN BAHAN
BAHAN:
OMP, 5-OHOMP dan OMP-SFN,CMT, PB, Phenacetin dan diklorometana, Asetonitril
dan metanol, AST14, ALT14, protein total, dan bilirubin,Normal saline dan heparin.
Hewan Uji: tikus Sprague-Dawley jantan (220-250 g)
ALAT:
Sistem HPLC terdiri dari dua pompa (Model LC-10ADvp), dengan sebuah degasser
(Model DGU-12A) dan sebuah detektor UV (Model SPD-10Avp) pada 302 nm.
Kolomnya (250x4.6 mm, dengan ukuran partikel 5 pm, Phenomenex, Torrance, CA,
A..S.A.).
E. CARA KERJA
Tikus Sprague-Dawley jantan (220-250 g).Hewan ditempatkan terpisah di kandang
di tempat yang berventilasi ruang hewan dengan suhu terkendali (19 + 1 ~ dan
kelembaban relatif (50 + 5%) dan disimpan pada siklus terang / gelap 12 h. Selama
periode ini, hewan memiliki akses terhadap makanan dan air ad libitum kecuali saat
berpuasa semalam sebelum melakukan administrasi OMP. Hewan-hewan tersebut
disesuaikan dengan kondisi di atas paling sedikit 2 minggu sebelum digunakan dalam
percobaan.
Perlakuan Hewan Uji
Tiga kelompok tikus Sprague-Dawley jantan (n = 6 per kelompok), dalam
rancangan paralel, menerima CMT (100 mg / kg, sekali sehari), PB (75 mg / kg, sekali
sehari) dan volume yang sama. masing-masing diberi injeksi intraperitoneal selama
empat hari berturut-turut.
Setelah akhir pengambilan sampel darah, hati dilarutkan dengan larutan garam
isotonik melalui vena porta, dilepas dan ditimbang. Nilai SGOT, SGPT, protein total, dan
bilirubin diukur dengan analisis kimia klinis (SBA300, Gilford, Oberlin, OH, A..S.A.).
Darah dikumpulkan tepat sebelum pemberian OMP dan dipindahkan ke tabung
mikrokapiler. Sampel disentrifugasi (2 menit, 12.000 rpm) dan hematokrit persen yang
ditentukan (persen sel darah merah dalam volume darah total) menggunakan pembaca
tabung mikrokapilator melingkar (Superior ~, 1.1 ~ 1.2x75 mm, Paul Marienfield KG,
Bad Mergenthim, W- Jerman) untuk setiap hewan (Wintrobe, 1974).
Dosis dan pengumpulan sampel
Hewan diberi anestesi dengan dietil eter, dan vena femoralis kiri dan arteri diberi
kateter dengan tabung polietilen PE-50 (Intramedic | Clay Adams Co., Parasippany, N J,
A..S.A.). Setiap tikus menerima OMP (30 mg / kg / 3 mL dalam 2% polyethylene glycol
400) melalui vena femoralis kiri. Darah (0.3 mL) dikumpulkan dari cannula arteri
femoralis kiri pada 2, 5, 10, 15, 30, 45, 60, 90, 120, dan 240 menit setelah pemberian
OMP. Antara setiap pengumpulan sampel darah, 0,3 mL larutan garam normal diberikan
melalui kanula kanalis femoralis kiri sebagai pengganti cairan. Sampel darah langsung
disentrifugasi dan plasma (100 pL) dipisahkan dan segera dibekukan pada suhu -70 ~
sampai dianalisis.
Uji OMP dan metabolit dalam plasma tikus
Plasma yang beku dibiarkan mencair pada suhu kamar. Standar internal (IS,
phenacetin, 100 ~ L larutan stok 250 pg / mL dalam metanol), diklorometana (5 mL), dan
penyangga borat 0,2 M (400 pL, pH 9,0) ditambahkan ke 100 pL plasma dalam tabung
kaca. Setelah di mixer vortex selama 1 menit dan di sentrifugasi pada 2.500 rpm selama
10 menit, lapisan atas berair disedot dan dibuang. Fasa organik yang tersisa dipindahkan
ke dalam tabung gelas baru dan diuapkan sampai kering di bawah aliran nitrogen dalam
evaporator sentrifugal pada suhu 40 ~ (CVE-200D, Tokyo Rikakikai, Tokyo, Jepang).
Residu akhirnya dilarutkan dalam 150 I ~ L fase gerak melalui vorteksmixing, dimana 50
pL kemudian disuntikkan ke dalam sistem HPLC (Kobayashi et aL, 1992; Cheng et al.,
2002).
Uji Validasi
Analisis dilakukan dengan sistem HPLC dengan menggunakan fase gerak adalah
buffer fosfat asetonitril-0,05 M (pH 8,5) (30:70, v / v) pada laju alir 0,5 mL / menit.
Eluate dipantau pada panjang gelombang UV 302 nm. Untuk menguji linearitas
pengujian, disiiapkan kurva kalibrasi untuk OMP, 5-OHOMP, dan OMP-SFN pada
konsentrasi berkisar antara 50 sampai 2000 ng / mL dalam plasma. Sampel standar
disiapkan dengan menambahkan analit ke plasma bebas obat dan diekstraksi dan
dianalisis. Rasio puncak masing-masing analit terhadap I.S. diukur dan kurva kalibrasi
diperoleh dari regresi linier leastsquares. Garis regresi digunakan untuk menghitung
konsentrasi analit masing-masing pada sampel yang tidak diketahui.
Untuk menilai analit yang diambil dari plasma, dibandingkan tinggi puncak
sampel plasma yang diekstrak yang mengandung jumlah yang diketahui dari masing-
masing analit dengan tinggi puncak sampel air yang diekstraksi yang mengandung jumlah
masing-masing analit. Konsentrasi QC akhir OMP, OMP-SFN, dan 5-OHOMP dalam
plasma adalah 100, 500, dan 1000 ng / mL.
Ketepatan pengujian dinilai oleh CVs intra dan inter-assay dan kesalahan relatif
dengan menentukan masing-masing dari ketiga analit pada plasma 100, 500 dan 1000
ng / mL. Untuk menguji stabilitas jangka pendek dan jangka panjang dari OMP, 5-
OHOMP, dan OMP-SFN, sampel QC disimpan dalam kondisi yang berbeda; pada suhu
kamar untuk 0, 4, dan 24 jam pada -70 ~ selama 1 bulan. Dan juga, tiga siklus pencairan
pembekuan (suhu -70 ~) diterapkan pada sampel QC dalam tiga hari berturut-turut.
Senyawa dianggap stabil jika variasi uji (n = 5) kurang dari 10% dari respons waktu awal.

F. PEMBAHASAN
Profil Waktu Konsentrasi Plasma OMP dan Metabolitnya
Profil waktu konsentrasi plasma OMP dan 5-OMP dalam kontrol, tikus dengan
pretreatment CMT dan PB setelah pemberian OMP secara intravena (30 mg / kg)
ditunjukkan pada Gambar 4.

Gambar 4. Kurva waktu

konsentrasi plasma
spesifik OMP (-0-) dan 5-
OHOMP (-O-) setelah
pemberian OMP secara
intravena (30 mg / kg) ke
kontrol, tikus CMT dan
PB-pretreated. Garis padat
mewakili nilai pas model.
Galat kesalahan berarti standar deviasi rata-rata.
Cle pada tikus PB-dan CMT-pretreated secara signifikan (P <0,05) meningkat.
Hasil ini berarti bahwa PB meningkatkan baik metabolisme dan eliminasi OMP dan 5-
OHOMP dan CMT menurunkan metabolisme OMP, namun meningkatkan eliminasi
OMP karena mekanisme kompensasi CMT, yang mengkompensasi penurunan
metabolisme OMP menjadi 5 -OHOMP (Levy et al., 2003).
Tabel II menunjukkan parameter farmakokinetik OMP dan 5-OHOMP
berdasarkan analisis non-kompartemen. Konsentrasi plasma OMP dan 5 OHOMP secara
signifikan (P <0,05) meningkat setelah perlakuan awal CMT. Daerah di bawah kurva
(AUCo. ~.) OMP dan 5-OHOMP secara signifikan (P <O.05) meningkat pada tikus yang
diobati dengan CMT daripada tikus kontrol. Oleh karena itu, hasil ini menunjukkan
bahwa CMT menghambat CYP2C19 pada tikus, terutama OMP ke 5-OHOMP, bukan
untuk OMP ke OMP-SFN dengan CYP3A4. Sedangkan konsentrasi plasma OMP dan 5-
OHOMP secara signifikan (P <0,05) menurun setelah pengobatan PB. Daerah di bawah
kurva (AUCo_ ~) dari OMP dan 5-OHOMP secara signifikan (P <0,05) menurun pada
tikus PB-pretreated dibandingkan tikus kontrol. Oleh karena itu, hasil ini menunjukkan
bahwa PB meningkatkan eliminasi OMP dan 5-OHOMP karena peningkatan aliran darah

hati dan / atau aliran empedu, karena tidak menginduksi enzim CYP3A4 (Branch et al.,
1974).

G. KESIMPULAN
Pada tikus CMT-pretreated, AUCo_ ~ OMP secara signifikan (P <0,05)
meningkat dan CLt secara signifikan (P <0,05) menurun dibandingkan dengan tikus
kontrol. Sebaliknya, pada tikus PB, CLt OMP meningkat secara signifikan (P <0,05) dan
MRT OMP secara signifikan (P <0,05) menurun dibandingkan dengan tikus kontrol.
Hasil ini menunjukkan bahwa CMT menghambat metabolisme OMP karena keduanya
menurunkan aliran darah hati dan menghambat aktivitas enzim CYP2C19 dan 3A4 dan
PB meningkatkan metabolisme OMP karena stimulasi aliran darah hati dan / atau aliran
empedu, karena tidak menginduksi aktivitas enzim CYP3A4.

I. DAFTAR PUSTAKA
a. Regardh, C. G, Gabrielsson, M., Hoffman, K. J., Lofberg, I., and Skanberg, I.,
Pharmacokinetics and metabolism of omeprazole in animals and man. Scan. J.
Gastroentero
L Suppl., 108, 79- 94 (1985).
b. Shiga, T., Hashiguchi, M., Urae, A., Kasanuki, H., and Rikihisa, T., Effect of
cimetidine and probenecid on pilsicainide renal clearance in humans. Clin Pharmaco
L Ther., 67, 222-228 (2000).
c. Sudjana-Sugiaman, E., Eggertsen, G, and Bjorkhem, I., Stimulation of HMG-CoA
reductase asa consequence of phenobarbital-induced primary stimulation of
cholesterol 7 alpha-hydroxylase in rat liver. J. Lipid Res., 35, 319-327 (1994).
d. Szutowski, M.M., Zalewska, K., Jadczak, M., and Marek, M., In vivo effect of
diallyl sulfide and cimetidine on phenacetin metabolism and bioavailability in rat.
Acta Biochim. Pol., 49, 249-256 (2002).
e. Mardjon, Mahar. 2007. Farmakologi dan Terapi. Jakarta: Universitas Indonesia
Press
f. Mycek, Mary,J. 2001. Farmakologi Ulasan Bergambar Edisi 2. Jakarta: Widya
Medika
Mengetahui Semarang, 29 Maret 2018
Dosen Pembimbing, Praktikan,

Fx. Sulistiyanto, M.Si., Apt. Virnalia Nada Utari (1041611146)

Dhimas Aditya A.,S.Farm.,Apt WamelindaDwi.W (1041611149)

Winda Nurliana.M (1041611151)

Surya Hadi P.(1041511236)