Mikrobiologi Bab1-9

Hak Cipta dan Hak Penerbitan dilindungi Undang-undang
Cetakan pertama, Oktober 2017
Penulis : 1. Rr. Meganada Hiaranya Putri, M.Kes

2. Sukini, S.SiT, MH.Kes
3. Yodong, S.St., MH.Kes.
Pengembang Desain Instruksional : Mutimanda Dwisatyadini, M.Kep.
Desain oleh Tim P2M2 :

Kover & Ilustrasi : Dra. Suparmi
Tata Letak : Andy Sosiawan, S.Pd.
Jumlah Halaman : 401

 Mikrobiologi Keperawatan Gigi 
DAFTAR ISI
BAB I: MIKROBIOLOGI DAN BAKTERIOLOGI 1
Topik 1.
Pengantar Mikrobiologi .......................................................................................... 3
Latihan ………….……………………………………....................................................................... 8
Ringkasan ……...………………………………….......................................................................... 8
Tes 1 ……………………………………..……................................................................................ 8
Topik 2.
Bakteriologi Dasar ................................................................................................... 10
Latihan ……………………………………..............................................……............................... 39
Ringkasan ..…………………………………................................................................................. 40
Tes 2 ……………………….…………………..……......................................................................... 40
Topik 3.
Patogenesis Penyakit Infeksi ................................................................................... 42
Latihan ……………………………………..............................................……............................... 47
Ringkasan ..…………………………………................................................................................. 47
Tes 3 ……………………….…………………..……......................................................................... 48
Topik 4.
Flora Normal Rongga Mulut, Ekosistem Mulut, dan Plak Dental ............................. 49
Latihan ……………………………………..............................................……............................... 62
Ringkasan ..…………………………………................................................................................. 63
Tes 4 ……………………….…………………..……......................................................................... 63
PETUNJUK JAWABAN TES ........................................................................................ 65

GLOSARIUM ............................................................................................................ 66
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................... 69
BAB II: VIROLOGI DAN IMUNOLOGI 70
Topik 1.
Virologi Dasar ……..…............................................................................................... 72
Latihan ……….………………………………………....................................................................... 108
Ringkasan …..…………………………………........................................................................... 109
Tes 1 .……………………….…………………..……......................................................................... 110
iii
Topik 2.
Fungi yang Berhubungan dengan Bidang Kesehatan Gigi …………………………………….. 111
Latihan ……………………………………..............................................……............................... 120
Ringkasan ………………………………….................................................................................. 120
Tes 2 ……………………….…………………..……......................................................................... 122
Topik 3.
Imunologi ………………………………………………………………………………………………………….. 123
Latihan ……………………………………..............................................……............................... 138
Ringkasan ………………………………….................................................................................. 138
Tes 3 ……………………….…………………..……......................................................................... 139

GLOSARIUM ............................................................................................................ 142
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................... 145
BAB III: INFEKSI NOSOKOMIAL DAN TEKNIK PENCEGAHAN INFEKSI SILANG 146
Topik 1.
Infeksi Nosokomial ................................................................................................. 148
Latihan ………………………………………….............................................................................. 155
Ringkasan ………………………………….................................................................................. 155
Tes 1 ……………………….…………………..……......................................................................... 156
Topik 2.
Sterilisasi dan Desinfeksi di Bidang Kedokteran Gigi ................................................ 158
Latihan ……………………………………..............................................……............................... 180
Ringkasan ………………………………….................................................................................. 181
Tes 2 ……………………….…………………..……......................................................................... 182

GLOSARIUM ........................................................................................................... 185
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................... 187
iv
BAB IV: PENGENALAN ALAT DAN BAHAN PRAKTEK LABORATORIUM 188

MIKROBIOLOGI
Topik 1.
Pengenalan Alat-alat Praktek .................................................................................. 192
Latihan ………………………………………………....................................................................... 216
Ringkasan ……..………………………………….......................................................................... 217
Tes 1 ……………………….…………………..……......................................................................... 217
Topik 2.
Pengenalan Bahan Praktikum Media Pertumbuhan Mikroorganisme ..................... 220
Latihan ……………………………………..............................................……............................... 229
Tes 2 ……………………….…………………..……......................................................................... 231

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................... 233
BAB V: PRAKTEK MIKRIBIOLOGI PEMBUATAN MEDIA DAN STERILISASI 234
Topik 1.
Pembuatan Media Biakan Mikroorganisme ............................................................ 235
Topik 2.
Sterilisasi ……..……………............................................................................................ 247
Latihan ……………………………………..............................................……............................... 257
Ringkasan …………………………………................................................................................... 257
Tes 2 ……………………….…………………..…….......................................................................... 258
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................... 260
BAB VI: MEKANISME PEMBIAKAN MIKROORGANISME 261
Topik 1.
Isolasi Bakteri ......................................................................................................... 266
Topik 2.
Inokulasi Bakteri ..................................................................................................... 282
Topik 3.
Perhitungan Jumlah Koloni ..................................................................................... 290
v
Topik 4.
Uji Kualitas Air ........................................................................................................ 299
BAB VII: PEWARNAAN BAKTERI 307
Topik 1.
Pewarnaan Sederhana ............................................................................................ 313
Topik 2.
Pewarnaan Diferensial ............................................................................................ 317
Latihan ……………………………………..............................................……............................... 337
Ringkasan …………………………………................................................................................. 337
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................... 338
BAB VIII: FLORA NORMAL PADA RONGGA MULUT 339
Topik 1.
Keamanan di Laboratorium ..................................................................................... 342
Latihan ………………………………………………....................................................................... 349
Tes 1 ……………………….…………………..……......................................................................... 349
Topik 2.
Flora Normal pada Rongga Mulut ……..……………....................................................... 350
Latihan ……………………………………..............................................……............................... 368
Tes 2 ……………………….…………………..…….......................................................................... 268
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................... 369
BAB IX: BAKTERI DAN UJI POTENSI SENYAWA ANTIMIKROBA

SECARA DIFUSI SUMURAN DAN DIFUSI PAPER DISK 370
Topik 1.
Bakteri .................................................................................................................... 372
Latihan ……….………………………………………....................................................................... 377
Tes 1 ……………………….…………………..……......................................................................... 377
Topik 2.
Desinfektan ............................................................................................................ 378
Latihan ……………………………………..............................................……............................... 384
Tes 2 ……………………….…………………..……......................................................................... 384
vi
Topik 3.
Uji Potensi Senyawa Antimikroba secara Difusi Sumuran dan Difusi Paper Disk ...... 385
Latihan ……………………………………..............................................……............................... 389
Tes 3 ……………………….…………………..……......................................................................... 389
Topik 4.
Uji Kualitas Median ................................................................................................. 390

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................... 401
vii
BAB I
MIKROBIOLOGI DAN BAKTERIOLOGI
Megananda Hiranya Putri, drg., M.Kes
PENDAHULUAN
Kita mungkin kurang menyadari bahwa mikroorganisme terdapat dimana-mana

disekitar kita. Di lingkungan tanah, diudara, didalam air, disekitar kita, bahkan pada mulut,
hidung, di dalam perut, di dalam jaringan tubuh kita (kulit dan selaput lendir)dijumpai
berbagai mikroorganisme. Mikroorganisme sangat erat kaitannya dengan kehidupan sehari-
hari. Beberapa diantaranya bermanfaat dan yang lainnya merugikan. Mengingat bahwa
mikroorganisme banyak terdapat di alam dan amat besar peranannya, termasuk dalam
bidang kesehatan gigi, maka sudah selayaknya setiap mahasiswa yang belajar ilmu
keperawatan gigi mengetahui hal-hal yang terkait dengan mikrobiologi.
Mikrobiologi adalah ilmu yang mempelajari mengenai organisme yang berukuran
mikroskopis. Sedemikan kecilnya sehingga keberadaan mereka hanya dapat dilihat dengan
alat yang disebut mikroskop. Dunia mikro organisme terdiri dari lima (5) kelompok
organisme, yaitu: bakteri, protozoa, virus, algae serta cendawan (jamur) mikroskopik.
Dengan demikian lingkup mikrobiologi meliputi Bakteriologi, yaitu ilmu yang mempelajari
tentang bakteri, Virologi yaitu Ilmu yang mempelajari tentang virus, Mikologi yaitu ilmu
yang mempelajari tentang jamur dan algae dan Parasitologi yaitu ilmu yang mempelajari
tentang Parasit
Pada Bab I ini kita akan mempelajari mengenai ruang lingkup mikrobiologi dan
bakteriologi. Pelajarilah dengan seksama Bab 1 ini. Setelah mempelajari bab ini, mahasiswa
akan mampu:
1. menjelaskan sejarah perkembangan dan konsep-konsep penting penemuan
mikrobiologi;
2. menjelaskan konsep-konsep dalam lingkup bakteriologi dasar yang meliputi : klasifikasi
taksonomi dan nomenklatur bakteri, morfologi dan struktur bakteri, fisiologi dan
metabolisme bakteri dan media pertumbuhan bakteri
3. menjelaskan tentang patogenesis penyakit infeksi peran bakteri dalam menyebabkan
penyakit pada manusia
4. menjelaskan flora normal pada rongga mulut manusia, ekosistem dalam mulut dan
plak dental
Manfaat mempelajari bab ini adalah membantu Anda untuk dapat memahami lebih
dalam tentang keberadaan bakteri disekitar kita sebagai dasar dalam upaya melaksanakan
asuhan keperawatan gigi dan mulut pada pasien.
1
Untuk lebih memahami kaitan antara mikroorganisme dengan inangnya, sebaiknya Anda
sudah mempelajari tentang anatomi dan jaringan tubuh manusia dalam mata kuliah Histologi dan
Anatomi Fisiologi tubuh manusia.
Agar memudahkan Anda mempelajari bab ini, maka materi yang akan dibahas terbagi
menjadi 4 topik, yaitu:
1. Pengantar Mikrobiologi, yang membahas tentang pengertian, sejarah penemuan
bakteri hingga perkembangan teori dasar mikrobiologi
2. Bakteriologi Dasar yang membahas tentang klasifikasi, taksonomi dan nomenklatur
bakteri, morfologi dan struktur bakteri, fisiologi dan metabolisme bakteri dan
mengenai macam-macam media pertumbuhan bakteri
3. Patogenesis Penyakit infeksi yang terutama membahas tentang aspek umum penyakit
infeksi dan peran bakteri dalam menyebabkan penyakit pada manusia.
4. Flora Normal Rongga mulut, Ekosistem mulut dan Plak Dental yang membahas
tentang jenis dan perkembangan flora normal rongga mulut, lingkungan mulut dan
faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan bakteri di rongga mulut dan
membahas juga tentang komposisi bakteri pada plak dental, dan bagaimana
pembentukan plak dan kalkulus di rongga mulut.
Selanjutnya agar Anda berhasil dalam mempelajari materi yang tersaji dalam Bab 1 ini,
perhatikan beberapa saran sebagai berikut :
a. Pelajari setiap topik materi secara bertahap
b. Usahakan mengerjakan setiap latihan dengan tertib dan sungguh-sungguh.
Kerjakan tes yang disediakan dan diskusikan bagian-bagian yang sulit Anda pahami
dengan teman sejawat atau tutor, atau melalui pencarian di internet.
2
Topik 1
Pengantar Mikrobiologi
Mikrobiologi berasal dari kata dalam Bahasa Yunani yaitu mikros artinya kecil, bios
artinya hidup, dan logos artinya ilmu. Mikrobiologi merupakan suatu ilmu tentang organisme
hidup yang berukuran mikroskopis. adalah bidang keilmuan yang menelaah mengenai
organisme hidup yang berukuran mikroskopis. Dunia mikroorganisme terdiri dari lima
kelompok organisme yaitu : bakteri, protozoa, virus, algae dan cendawan mikroskopis
Dalam bidang mikrobiologi kita mempelajari berbagai segi dari mikroba atau jasad
renik dalam hal dimana keberadaannya, ciri-cirinya, kekerabatan antara sesamanya maupun
organisme yg lain, pengendaliannya, dan peranannya dalam kesehatan dan kesejahteraan
manusia.
Mikroba erat hubungannya dengan kehidupan kita, sebagian bermanfaat dan
menunjang kehidupan dan yang lain dapat menyebabkan penyakit. Contoh : dalam
pembuatan anggur, keju, yogurt, penisilin, dan dalam memproses limbah
Mikrobiologi termasuk bidang ilmu yang masih muda. Dunia mikroba baru ditemukan
sekitar 300 tahun yang lalu dan baru dipahami dan dihargai 200 tahun kemudian. Selama 40
tahun terakhir mikrobiologi muncul sebagai bidang biologi yang sangat berarti
A. SEJARAH MIKROBIOLOGI
Sejarah awal kehidupan dimulai pada tahun 1674 ketika Antoni van Leeuwenhoek
(1632-1723) menemukan adanya kehidupan di dalam setetes air danau yang diamati
menggunakan lensa gelas. Benda-benda yang disebut “animalcules” terlihat dalam berbagi
bentuk, ukuran dan warna.
Dialah yang pertama tama melaporkan pengamatannya dengan keterangan dan
gambar-gambar yang teliti. Pengamatan dilakukan dengan mikroskop dan lensa yang
dibuatnya dengan pembesaran tertinggi hanya 200 sampai 300 kali.
3
Gambar 1.1 : Antony van Leeuwenhoek (1632

(1632-1723)
Ilmuwan pertama yang melihat dan mendeskripsikan mikroorganisme secara
akurat pada tahun 1674.
Sumber : http://www.ucmp.berkeley.edu
http://www.ucmp.berkeley.edu,, diunduh tanggal 7 Agustus 2017.
Gambar 1.2 : Lensa gelas yang digunakan Antoni van Leeuwenhoek yang dapat
mengungkap “animalcules”
Sumber : https://www.pinterest.com
https://www.pinterest.com,, diunduh tanggal 7 Agustus 2017
Tanggal 17 September 1683 Antoni mengirimkan gambarnya yang pertama tentang

bakteri, makhluk ini didapat dalam suspensi yang diambil dari sela
sela-sela
sela giginya. Ia membuat
sketsa bakteri dengan bentuk seperti bola (kini disebut kokus), silindris atau batang (basilus)
dan spiral (spirilum). Meskipun sejak masa Antoni telah terjadi banyak perubahan dalam
mikroskopi, sampai saat ini kita masih mengenal ketiga bentuk umum yang sama pada
bakteri.
4
Teori Abiogenesis (Generatio Spontanea) vs Biogenesis
Ditemukannya dunia organisme yang tidak nampak membangunkan minat terhadap

perdebatan hebat pada masa itu mengenai asal mula kehidupan. Dari manakah datangnya
jasad-jasad renik ini?
Sebelum penemuan, berlaku teori “generatio spontanea atau abiogenesis” (abio =
tidak hidup; genesis = asal). Teori ini mengatakan bahwa makhluk hidup dapat terbentuk
secara spontan dari benda-benda mati atau bahan organik yang sudah mengalami
pembusukan. Pencetus awal adalah bangsa Yunani Kuno yang meyakini bahwa daging yang
membusuk menghasilkan belatung dan bahwa katak dan lalat muncul begitu saja dari
lumpur pada keadaan iklim tertentu.
Tahun 1749 John Needham (1713-1781) melalui percobaannya bahwa pada daging
yang dimasak tetap ada mikroorganisme pada awal percobaan sehingga disimpulkan bahwa
jasad renik berasal dari daging.
Teori generasi spontan kemudian banyak ditentang oleh beberapa ilmuwan lainnya
diantaranya Fransisco Redi (1626-1697). Fransisco Redi membuat percobaan dengan
menutup daging dengan kasa halus untuk mencegah hinggapnya lalat yang dapat bertelur
diatasnya. Setelah didiamkan dalam waktu tertentu, ternyata pada daging yang tidak
ditutupi banyak tumbuh ulat yang berasal dari telur lalat, sedang pada daging yang ditutup
tidak tampak adanya ulat.
Lazzaro Spalanzani (1729-1799), melakukan percobaan dengan membuat suatu
suspensi bahan organik (kaldu daging) di dalam tabung gelas, lalu didihkan selama satu jam
dan ditutupnya rapat-rapat. Ternyata cairan tersebut tidak rusak dan tidak mengandung sel
- sel hidup. Sel hanya hidup jika tabung gelas dibuka, sehingga cairan mengalami kontak
dengan udara yang merupakan sumber kontaminasi mikroorganisme. Hasil percobaan
peneliti tersebut jelas bertentangan dengan teori “generatio spontanea”.
Gambar 1.3 Lazarro Spalanzani menunjukkan bahwa setelah daging dalam labu
dipanaskan dan kemudian ditutup rapat-rapat tidak memunculkan mikroorganisme,
karena udara yang membawa benih kultur tidak dapat masuk ke labu.
Sumber : https://finishwellunbiologi.files.wordpress.com, diunduh tanggal 7 Agustus 17
5
Louis Pasteur (1822-1895)

1895) adalah seorang ilmuwan Perancis yang banyak jasanya
dalam bidang mikrobiologi karena mend
mendapatkan beberapa penemuan dalam percobaannya.
Pendapatnya yang terkenal adalah tidak ada kehidupan baru yang timbul dari barang mati.
Hal ini dikenal dengan istilah ““Omne vivum ex ovo, omne ovum ex vivo”” yang artinya semua
kehidupan berasal dari telur dan telur itu berasal dari sesuatu yang hidup. Antara tahun
1857-1862,
1862, ia menemukan bahwa sel khamir atau ragi dapat menyebabkan terjadinya proses
fermentasi pada anggur dan beer. Pendapat lainnya adalah pemanasan dapat membunuh
khamir yang dapat menyebabkan kkerusakan
erusakan pada minuman tersebut. Penemuan ini dikenal
dengan sebagai pasteurisasi.
Gambar 1.4. Percobaan Louis Pasteur yang terkenal dengan labu leher angsanya.
Mikroorganisme dari udara terperangkap dalam lekukan leher angsa labu sehingga kaldu
yang su
sudah dipanaskan tetap jernih
Sumber : https://www.timetoast.com
https://www.timetoast.com,, diunduh 7 Agustus 2017
Tahun 1879 - 1880 Pasteur membuktikan bahwa hewan (dalam percobaannya

digunakan kambing) dapat diimunisasi terhadap penyakit antraks. Dan pada tahun 1886
memperkenalkan cara pencegahan penyakit rabies
1876 John Tindall seorang Inggris , menemukan bahwa pemanasan yang dilakukan
oleh Pasteur tidak cukup untuk membunuh semua mikroorganisme di dalam suatu bahan
karena diantaranya sangat
angat tahan panas. Ia menyimpulkan bahwa beberapa mikroorganisme
mungkin ada dalam salah satu dari dua bentuk yaitu bentuk vegetatif yang tidak tahan
panas dan bentuk lain yang tidak mati dengan perebusan.
Dalam tahun yang sama Ferdinand Cohn menemukan kan adanya endospora yang
membuktikan sifat ketahanan panasnya. Tyndall kemudian mengembangkan suatu cara
untuk membunuh endospora sekalipun yang sangat tahan panas. Caranya dengan
pemanasan bahan yang mengandung endospora secara bersinambungan atau tid tidak
terputus-putus.
putus. Setelah pemanasan bahan didiamkan sehingga spora bergerminasi menjadi
sel vegetatif, kemudian dipanaskan lagi untuk membunuh sel vegetatif yang tidak tahan
panas tersebut, didiamkan lagi, dipanaskan lagi, dan seterusnya sampai semua endo
endospora
mati. Cara ini kemudian disebut Tyndalisasi.
6
Sekitar tahun 1870 Robert Koch (1842-1910) seorang dokter di Jerman juga meneliti
tentang antraks. Dialah yang mengisolasi bakteri khas berbentuk batang dengan ujung-
ujungnya yang agak persegi ( basilus ) dari darah biri-biri yang mati karena penyakit antraks.
Bakteri tersebut selanjutnya dinamai Bacillus anthracis. Koch menumbuhkan bakteri
tersebut pada media bernutrisi dan menyuntikkan bakteri tersebut pada sapi yang sehat.
Sapi ini kemudian menjadi sakit dan mati. Koch mengisolasi bakteri darah sapi dan
membandingkannya dengan kultur bakteri yang lebih dahulu diisolasi dan kedua kultur berisi
bakteri yang sama. Penemuan Koch ini membuktikan bahwa bakteri adalah penyebab
penyakit. Berdasarkan penemuannya, Koch adalah orang pertama yang menemukan konsep
hubungan antara penyakit menular dan mikroorganisme yang dikenal dengan Postulat Koch
yang kini menjadi standar emas penentuan penyakit menular. Postulat Koch meliputi:
a. Kuman harus selalu dapat ditemukan di dalam tubuh binatang yang sakit, tetapi tidak
dalam binatang yang sehat ;
b. Kuman tersebut harus dapat diasingkan dan dibiakkan dalam bentuk biakkan murni di
luar tubuh binatang tersebut ; dan
c. Biakkan murni kuman tersebut harus mampu menimbulkan penyakit yang sama pada
binatang percobaan. Kuman tersebut dapat diasingkan kembali dari binatang
percobaan tadi.
Menyusul penemuan ini, pada tahun 1900-an, berbagai jenis kuman penyebab
penyakit penting telah dapat diketahui seperti Bacillus antracis, Corynebacterium diptheriae,
Salmonella thyposa, Neisseria gonorrhoeae, Clostridium perfringens, Clostridium tetani,
Sigela dysentriae, Treponema pallidum, dan lai-lain.
Penemuan tentang beberapa prosedur laboratoium mempunyai dampak luar biasa
terhadap perkembangan mikrobiologi. Prosedur laboratorium tersebut antara lain prosedur
untuk mewarnai bakteri agar mudah diamati dan teknik untuk membiakkan mikroba di
laboratorium. Salah satu teknik untuk membiakkan adalah dengan penggunaan media.
Media adalah suatu subtrat untuk menumbuhkan bakteri yang menjadi padat dan
tetap tembus pandang pada suhu inkubasi. Pada awalnya digunakan gelatin, tetapi akhirnya
dianggap tidak memadai karena pada suhu ruang gelatin akan menjadi cair. Kentang dan
wortel juga ditinggalkan karena kandungannya kurang nutrien untuk mikroba. Masalah ini
teratasi dengan adanya ekstrak ganggang laut yang dinamai agar–agar (agar) yang dapat
dilarutkan dalam larutan nutrien dan bila menjadi gel akan tetap berbentuk padat.
7
Latihan
Untuk memperdalam pemahaman Anda mengenai materi di atas, kerjakan latihan

berikut !
Jawablah pertanyaan dibawah ini dengan singkat dan jelas dengan hanya menuliskan
esensinya saja !
1) Jelaskan apa yang dimaksud dengan mikroorganisme dan sebutkan 5 jenis diantaranya!
2) a. Jelaskan apa yang dimaksud dengan teori Generatio Spontanea dana bagaimana Louis
b. Pasteur menyangkal kebenaran teori tersebut ?
3) a. Postulat Koch adalah temuan mengenai konsep antara apa ?
b. Bagaimana isi Postulat tersebut ?
Petunjuk Jawaban Latihan

Untuk membantu Anda dalam mengerjakan soal latihan tersebut silakan pelajari
kembali materi tentang
1) Sejarah mikrobiologi dan
2) Konsep-konsep temuan pentingnya
Ringkasan
Mikrobiologi adalah ilmu yang mempelajari mikroorganisme yang meliputi organisme

bersel satu dan multi sel, yang meliputi: virus, bakteri, jamur, protozoa, dan organisme yang
sangat kecil lainnya. Pemakaian mikroskop dan pewarnaan mikroorganisme merupakan
salah satu teknik untuk mengamati gambaran struktur mikroorganisme.
Tes 1
1) Ilmuwan yang dianggap sebagai cikal bakal penemu mikroskop cahaya adalah :
A. Louis Pasteur
B. Antony van Leeuwenhoek
C. Francesco Redi
D. Lazarro Spalanzani
E. Robert Koch
8
2) Percobaan yang dilakukan oleh Lazarro Spalanzani menyimpulkan bahwa sumber

kontaminasi mikroorganisme pada air kaldu daging yang telah dipanaskan berasal dari :
A. Daging
B. Kaldu Daging
C. Udara
D. Api pemanas
E. Labu pemanas
3) Orang pertama yang menemukan penyebab infeksi pada luka, dan mengambil langkah
pencegahan terhadap infeksi sesudah operasi adalah :
A. Louis Pasteur
B. Joseph Lister
C. Robert Koch
D. Anthony Van Leewenhoek
E. Needham
4) Ilmuwan yang menemukan cara membunuh endospore dengan melakukan pemanasan

yang berkesinambungan, yaitu setelah pemanasan didiamkan untuk memberi
kesempatan spora berubah menjadi bentuk vegetatif, lalu kemudian dipanaskan lagi
berulang-ulang sampai semua endospore mati, adalah :
A. Needham
B. Joseph Lister
C. Tyndall
D. Francesco Redi
E. Robert Koch
5) Bakteri yang pertama kali ditemukan oleh Robert Koch adalah penyebab penyakit
A. TBC
B. Anthrax
C. Diptheriae
D. Typhus
E. Gonorroe
Cocokkanlah jawaban Anda dengan Kunci Jawaban Tes 1 yang terdapat di bagian akhir
Bab 1 ini.
9
Topik 2
Bakteriologi Dasar
Mikroorganisme merupakan suatu kelompok organisme yang tidak dapat dilihat

dengan menggunakan mata telanjang, sehingga diperlukan alat bantu untuk dapat
melihatnya seperti mikroskop, lup dan lain-lain. Cakupan dunia mikroorganisme sangat luas,
terdiri dari berbagai kelompok dan jenis, sehingga diperlukan suatu cara pengelompokan
atau pengklasifikasian.
Menyusun sistematik dalam dunia mikroorganisme bukanlah pekerjaan yang mudah
kesulitan pertama yang kita hadapi ialah menentukan apakah mikroba itu golongan hewan
atau golongan tumbuhan. Setelah Leeuwenhoek menyelami dunia mikroorganisme, sarjana
Zoologi seperti Muller (1773) dan Erlenberg (1838) menggolongkan bakteri pada protozoa.
Baru pada tahun (1873), Cohn sarjana botani bangsa Jerman, mengetahui adanya ciri-ciri
yang menyebabkan ia lebih condong menggolongkan bakteri (salah satu mikroorganisme)
pada tumbuhan. Klasifikasi bakteri secara agak lengkap pada tahun 1875, dan sejak itu
diadakan penyempurnaan secara berangsur-angsur sampai sekarang.
A. TAKSONOMI DAN KLASIFIKASI BAKTERI
Taksonomi berasal dari kata “taksis” artinya aturan atau penjabaran dan kata
“nomos” artinya aturan atau hukum. Taksonomi adalah ilmu mengenai klasifikasi atau
penataan sistematis organisme kedalam kelompok atau kategori yang disebut taksa
(tunggal = takson). Klasifikasi berarti penyusunan organisme kedalam grup taksonomi
(taksa) dengan berdasarkan kemiripan atau hubungannya. Tata nama adalah penamaan
suatu organisme melalui aturan internasional menurut ciri khasnya. Secara keseluruhan,
yakni tentang pengklasifikasian, penamaan dan pengidentifikasian mikroorganisme,
disebut sebagai sistematika mikroba. Untuk klasifikasi dan determinasi bakteri dipakai
buku : Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology yang menggambarkan sifat-sifat
bakteri secara terperinci.
Sel organisme terdiri atas dua golongan utama, yaitu sel prokariotik dan sel
eukariotik. Kelompok organisme berdasarkan golongan prokariotik dan eukariotik dapat
dilihat pada tabel 1.1 sebagai berikut :
10
Tabel 1.1 Dua golongan utama sel organisme
Sumber : https://www.slideshare.net, diunduh tanggal 7 Agustus 2017
Bakteri dan bakteri hijau diklasifikasikan sebagai tanaman primitif karena :

a) Mempunyai dinding sel seperti tanaman
b) Beberapa Jenis bakteri dan semua bakteri hijau bersifat fotosintetik.
1. Klasifikasi Bakteri
Bakteri umumnya berbentuk 1-sel atau sel tunggal atau uniseluler, tidak mempunyai
klorofil berkembangbiak dengan pembelahan sel atau biner. Karena tidak mempunyai
klorofil, bakteri hidup sebagai jasad yang saprofitik ataupun sebagai jasad yang parasitik.
Tempat hidupnya tersebar di mana-mana, yaitu di udara, di dalam tanah, didalam air, pada
bahan-bahan, pada tanaman ataupun pada tubuh manusia atau hewan.
Klasifikasi bakteri dapat didasarkan pada beberapa jenis penggolongan, misalnya :
Klasifikasi Bakteri Patogen
Bergey’s Manual ed. 8 terakhir membagi Prokariota dalam 4 divisi utama, berdasarkan ciri
khas dinding selnya yaitu :
I. Gracilicutes : Bakteri Gram Negatif
II. Firmicutes : Bakteri Gram Positif
III. Tenericutes : Bakteri tanpa dinding sel
IV. Archaebacteria
I, II dan III termasuk kedalam Eubacteria
Klasifikasi Berdasarkan Genetika

Perkembangan-perkembangan dalam biologi molekuler memungkinkan diperolehnya
informasi mengenai kekerabatan organisme-organisme pada tingkat genetic berdasarkan :
I. Komposisi basa DNA
II. Homologi sekuens DNA dan RNA Ribosoma
III. Pola-pola metabolism stabil yang dikontrol oleh gen
11
IV. Polimer-polimer pada sel

V. Struktur organel dan pola regulasinya
Klasifikasi Berdasarkan Ekspresi Fenotipe :

I. Morfologi Sel
II. Morfologi Koloni
III. Sifat terhadap pewarnaan
IV. Reaksi pertumbuhan
V. Sifat pertumbuhan
Klasifikasi Berdasarkan Bentuk Sel :

I. Bentuk bulat (coccus)
II. Bentuk batang
III. Bentuk spiral
IV. Bentuk vibrio
Klasifikasi Terhadap Sifat Pewarnaan :

I. Pewarnaan sederhana
II. Pewarnaan diferensial
III. Pewarnaan khusus
Klasifikasi berdasarkan Sifat Pertumbuhan :

I. Aerob
II. Anaerob
III. Mikroaerofilik
Klasifikasi berdasarkan metabolisme :

I. Bakteri Autotrophic
II. Bakteri Heterotrophic
2. Nomenklatur Bakteri
Seperti halnya tanaman, bakteri juga menggunakan 2 nama yaitu nama binomial
(binomial name), yang diajukan oleh Linnaeus pada tahun 1753 untuk penamaan tanaman.
Kaidah penulisan nama bakteri pada tingkat spesies ditulis dengan cara nama genus
mendahului nama spesiesnya. Huruf awal nama Genus ditulis dengan huruf besar dan nama
spesies ditulis dengan huruf kecil. Keseluruhan nama ditulis dengan dicetak miring.
Contohnya : Staphylococcus aureus.
Penamaan bakteri pada jenjang taksonominya dapat terlihat pada tabel 1.2 dibawah ini.
12
Tabel 1.2 Jenjang Taksonomi
Jenjang Resmi Contoh

Dunia/Kingdom Prokaryotae
Divisi Gracilicutes
Klas Scotobacteria
Ordo Eubacteriales
Famili Entobacteriaceae
Genus Escherichia
Spesies Eschericia coli
Sumber: https://www.slideshare.net, diunduh 7 Agustus 2017
Bakteri yang termasuk kedalam spesies tertentu akan memiliki sifat-sifat struktural,
biokimiawi, sifat fisiologis, ekologi, komposisi basa DNA, homologi dan sifat-sifat genetic
yang sama.
3. Sel Prokariotik dan Sel Eukariotik

Sel organisme terdiri atas dua golongan utama, yaitu sel prokariotik dan sel eukariotik.
Kedua tipe sel secara kimiawi adalah serupa, yakni sama-sama memiliki asam nukleat,
protein, lipid, dan karbohidrat. Kedua tipe sel tersebut juga menggunakan reaksi kimia yang
sama untuk memetabolisme makanan, membentuk protein, dan menyimpan energi.
Perbedaan sel prokariotik dari sel eukariotik adalah struktur dinding sel, membran sel, serta
tidak adanya organel, yaitu struktur seluler yang terspesialisasi yang memiliki fungsi-fungsi
spesifik.
a. Sel Prokariotik
Sel prokariotik secara struktural lebih sederhana dan hanya ditemukan pada organisme
bersel satu dan berkoloni, yaitu bakteri dan archaea. Dapat dikatakan sel prokariotik sebagai
suatu molekul yang dikelilingi oleh membran dan dinding sel karena tidak mempunyai
organel sel, tetapi mempunyai sistem membran dalam dinding selnya.
Suatu sel prokariotik terdiri atas DNA, sitoplasma, dan suatu struktur permukaan
termasuk membran plasma dan komponen dinding sel, kapsul, dan lapisan lendir (slime
layer).
Ciri-ciri sel prokariotik adalah:

1) sitoplasma sel prokariotik bersifat difuse dan bergranular karena adanya ribosom yang
melayang di sitoplasma sel;
2) membran plasma yang berbentuk dua lapis fosfolipid yang memisahkan bagian dalam
sel dari lingkungannya dan berperan sebagai filter dan komunikasi sel;
3) tidak memiliki organel yang dikelilingi membran;
4) memiliki dinding sel kecuali mycoplasma dan thermoplasma;
13
5) kromosom umumnya sirkuler. Sel prokariotik tidak memiliki inti sejati karena DNA tidak
terselubung oleh membran;
6) dapat membawa elemen DNA ekstrakromosom yang disebut plasmid, yang umumnya
sirkuler (bulat). Plasmid umumnya membawa fungsi tambahan, misalnya resistensi
antibiotik;
7) beberapa prokariotik memiliki flagela yang berfungsi sebagai alat gerak;
8) umumnya memperbanyak diri dengan pembelahan biner.
b. Sel Eukariotik
Sel eukariotik mengandung organel seperti nukleus, mitokondria, kloroplas, retikulum
endoplasma (RE), badan golgi, lisosom, vakuola, peroksisom, dan lain-lain. Organel dan
komponen lain berada pada sitosol, yang bersama dengan nukleus disebut protoplasma.
Ciri-ciri sel eukariotik adalah:
1) Sitoplasma sel eukariotik tidak tampak berbutir-butir (bergranular), karena ribosom
terikat pada retikulum endoplasma;
2) Memiliki sejumlah organel yang dikelilingi oleh membran, termasuk mitokondria,
retikulum endoplasma, badan golgi, lisosom, dan kadang terdapat pula kloroplas;
3) DNA eukariotik terikat oleh protein kromosomal (histon dan non histon). Struktur
kromosom bersama protein kromosomal disebut kromosom. Seluruh DNA Kromosom
tersimpan dalam inti sel; dan
4) Sel eukariotik bergerak dengan menggunakan silia atau flagela yang secara struktural
lebih komplek dibandingkan silia atau flagela pada sel prokariotik.
Secara rinci perbedaan sel prokariotik dan sel eukariotik dapat dilihat pada tabel 1.3
berikut ini.
Tabel 1.3 Perbedaan Sel Prokariotik dan Eukariotik
Ciri Sel Prokariotik Sel Eukariotik

Ukuran 1-10 µm 10-100 µm (sel sperma
terpisah dari ekornya,
berukuran lebih kecil)
Tipe inti Daerah nukleosit tanpa inti Inti sejati dengan membran
sejati ganda
DNA Umumnya sirkuler Linear dengan protein histon
Sintesis RNA/protein Berlangsung di sitolasma Sintesis RNA di dalam inti
dan sintesis protein
berlangsung di sitoplasma
Ribosom 50 S dan 30 S 60 S dan 40 S
Struktur sitoplasma Sederhana Terstruktur dengan adanya
membran intraseluler dan
sitoskeleton
14
Ciri Sel Prokariotik Sel Eukariotik

Pergerakan sel Flagela yang tersusun atas Flagela dan silia yang
protein flagelin tersusun atas protein tubulin
Mitokondria Tidak ada Satu sampai beberapa lusin
(beberapa tidak memiliki
mitokondria)
Koroplas Tidak ada Pada alga dan tanaman
Organisasi Umumnya satu sel Sel tunggal, koloni,
organisme tingkat tinggi
dengan sel terspesialisasi
Pembelahan sel Pembelahan biner Mitosis dan sitokenesis
Jenis organisme Bakteri dan archae Protista, fungi, tanaman,
hewan.
Sumber : http://hisham.id, diunduh 7 Agustus 2017
B. MORFOLOGI DAN STRUKTUR BAKTERI
1. Morfologi Bakteri
Arti kata morfologi adalah pengetahuan tentang bentuk (morphos). Morfologi dalam
cabang ilmu biologi adalah ilmu tentang bentuk organisme, terutama hewan dan tumbuhan
dan mencakup bagian-bagiannya. Morfologi bakteri dapat dibedakan menjadi dua yaitu
morfologi makroskopik (morfologi koloni) dan morfologi mikroskopik (morfologi seluler).
a. Morfologi makroskopis
Morfologi makroskopis yaitu bentuk bakteri dengan mengamati karakteristik koloninya
pada lempeng agar. Karakteristik koloni dibedakan atas dasar bentuk koloni, ukuran koloni,
pinggiran (margin koloni), peninggian (elevasi), warna koloni, permukaan koloni,konsistensi
dan pigmen yang dihasilkan koloni. Populasi bakteri tumbuh sangat cepat ketika mereka
ditambahkan dan disesuaikan dengan gizi dan kondisi lingkungan yang memungkinkan
mereka untuk berkembang. Melalui pertumbuhan ini, berbagai jenis bakteri kadang
memberi penampilan yang khas.
Beberapa koloni mungkin akan berwarna, ada yang berbentuk lingkaran, sementara
ada yang bentuknya tidak teratur. Menurut Pradhika (2008), koloni bakteri mempunyai ciri
yang berbeda-beda tergantung jenisnya dan mediumnya.
Ukuran Koloni
Jika dilihat pertumbuhan di petri dish, ukuran koloni bakteri ada yang berbentuk : titik
(pinpoint/punctiform), kecil (small), sedang (moderat) dan besar (large)
15
Gambar 1.5 Ukuran koloni bakteri

Sumber : https://www.pintarbiologi.com
https://www.pintarbiologi.com,, diunduh 7 Agustus 2017
Pigmentasi
Mikroorganisme kromogenik sering memproduksi pigmen intraseluler, beberapa jenis lain
memproduksi pigmen ekstraseluler yang dapat terlarut dalam media. Warna pigmen yang
dihasilkan dapat putih, kuning, merah, ungu dan sebagainya.
Gambar 1.6 Pigmentasi Koloni bakteri. Beberapa bakteri memproduksi pigmen ketika
mereka tumbuh di medium
Sumber: https://www.slideshare.net
https://www.slideshare.net, diunduh 7 Agustus 2017
Karakteristik optik
Berdasarkan jumlah cahaya yang dapat melewati koloni
koloni,, maka koloni ada yang bersifat:
bersifat
opaque (tidak dapat ditembus cahaya), ttranslucent (dapat ditembus cahaya sebagian) dan
transparan (bening)
16
Gambar 1.7 Koloni bakteri yang transparent dan yang opaque

Sumber : http://tol2kit.genetics.utah.edu, diunduh 7 Agustus 2017
Bentuk, Pinggiran dan Peninggian (Elevasi) koloni bakteri

Bentuk koloni bakteri ada yang sirkuler (bulat bertepi) ireguler (tidak beraturan,
bertepi) dan yang rhizoid (berbentuk seperti akar dan pertumbuhannya menyebar.
Sedangkan dilihat dari tepi atau pinggirannya, koloni bakteri ada yang memiliki tepi yang
rata (entire), tepi yang berlekuk (lobate). Tepi yang bergelombang (undulate), tepi yang
bergerigi (serrate) dan tepi yang menyerupai benang (filamentous). Jika dilihat dari elevasi
atau ketinggian pertumbuhan koloni bakteri, maka bentuk koloni dapat dibedakan menjadi :
Koloni flat, jika ketinggian tidak terukur, nyaris rata dengan medium, raised : ketinggian
nyata terlihat, namun rata pada seluruh permukaan, convex, peninggian koloni berbentuk
cembung seperti tetesan air dan umbonate jika peninggian koloni berbentuk cembung
dibagian tengah lebih menonjol. Supaya lebih jelas, gambaran koloni dapat dilihat pada
gambar 1.4 dibawah ini.
17
Gambar 1.8 Bentuk

Bentuk-bentuk Koloni Bakteri
Sumber; https://www.sciencebuddies.org diunduh 7 Agustus 2017
b. Morfologi Mikroskopis
Morfologi mikroskopik adalah karakteristik bakteri yang dilihat melalui pengamatan
dibawah mikroskop. Bentuk bakteri sangat bervariasi, tetapi secara umum aada 3 tipe, yaitu :
bentuk bulat/kokus, bentuk batang/basil dan bentuk spiral/
spiral/spirilium.
Bentuk bulat
Bentuk kokus (coccus = sferis / tidak bulat betul) dapat di bedakan lagi menjadi beberapa
formasi, yaitu :
1. Micrococcus : berbentuk bulat, satu
satu-satu. Contohnya Monococcus gonorrhoe.
2. Diplococcus
cus : berbentuk bulat, bergandengan dua dua-dua.
dua. Contohnya Diplococcus
pneumoniae
3. Staphylococcus : berbentuk bulat, tersusun seperti untaian buah anggur. Contohnya
Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprofiticus.
4. Streptococccus : berbentuk bulat, bergandenbergandengan
gan seperti rantai, sebagai hasil
pembelahan sel kesatu atau dua arah dalam satu garis. Contohnya Streptococcus
faecalis, Streptococcus lactis, dan lain
lain-lain.
5. Sarcina : berbentuk bulat, terdiri dari 8 sel yang tersusun da
dalam
lam bentuk kubus sebagai
hasil pembelahan
embelahan sel ke 3 arah. Contohnya : Thiosarcina rosea
6. Tetracoccus / gaffkya : berbentuk bulat tersusun dari 4 sel berbentuk bujur sangkar,
sebagai hasil pembelahan sel kedua arah. Contohnya Pediococcus
18
Gambar 1.9 Formasi Bakteri berbentuk KKokus

Sumber : https://www.slideshare.net
https://www.slideshare.net,, diunduh tanggal 7 Agustus 2017
Gambar 1.10 Staphylococcus sp dilihat Gambar 1.11 Streptococcus sp dilihat

dibawah mikroskop cahaya dibawah mikroskop SEM
Sumber : http://www.generasibiologi.com
http://www.generasibiologi.com,, diunduh tanggal 7 Agustus 2017
Bentuk Batang
Bakteri bentuk batang dapat dibedakan ke dalam bentuk batang panjang dan batang
pendek, dengan ujung datar atau lengkung. Bentuk batang dapat dibedakan lagi atas bentuk
batang yang mempunyai garis tengah sama atau tidak sama di seluruh bagian panjangnya.
Bakteri bentuk batang dapat membentuk formasi :
1. Sel tunggal (monobasil), contohnya : Escherichia coli
2. Bergandengan dua-duadua ((diplobacil),
diplobacil), contohnya : Diplococcus pneumonia
3. Rantai (streptobacil), atau sebagai jaringan tiang (palisade), contohnya: Bacillus
anthraxis
19
Gambar 1.12 Formasi bakteri berbentuk batang

Sumber : https://www.dekstopclass.com
https://www.dekstopclass.com,, diunduh tanggal 7 Agustus 2017
Gambar 1.13 Bacillus anthraxis dibawah

mikroskop cahaya dengan pewarnaan biru. Gambar 1.14 Diplobacil dibawah Scanning
Daerah kosong adalah spora bakteri Electron Microscope
Sumber : http://textbookofbacteriology.net/Anthrax.html
http://textbookofbacteriology.net/Anthrax.html,, diunduh 7 Agustus 2017
Bentuk lengkung / spiral Bentuk lengkung /spiral pada pokoknya dapat dibagi menjadi :
1. Bentuk Koma (vibrio) jika lengkun
lengkungnya
gnya kurang dari setengah lingkaran. Contohnya
Vibrio cholera, penyebab penyakit kolera.
2. Bentuk Spiral jika lengkungny
lengkungnya lebih dari setengah lingkaran , contohnya Spirillium
minor yang menyebabkan demam dengan perantara gigitan tikus atau hewan pengera
pengerat
lainnya.
3. Bentuk Spirochaeta : berupa spiral yang halus dan lentur, lebih berkelok dengan ujung
lebih runcing. Contohnya Treponema pallidum, penyebab penyakit sifilis.
Bentuk tubuh bakteri dipengaruhi oleh keadaan lingkungan, medium dan usia. Oleh
karena
arena itu untuk membandingkan bentuk serta ukuran bakteri, kondisinya harus sama. Pada
umumnya bakteri yang usianya lebih muda ukurannya relatif lebih besar daripada yang
sudah tua.
20
Gambar 1.15. Tiga macam bakteri berbentuk lengkung

Sumber : http://blogmipa-biologi.blogspot.co.id/bentuk-bakteri.html, diunduh
7 Agustus 2017
Gambar 1.16 Bakteri berbentuk spiral Gambar 1.17 Vibrio cholera, penyebab
dibawah SEM penyakit kolera. Bentuk bakteri seperti koma
Sumber : http://www.gettyimages.com, diunduh tanggal 7 Agustus 2017
2. Struktur Bakteri
Struktur bakteri terbagi menjadi dua yaitu struktur dasar dan struktur tambahan.
Struktur dasar dimiliki oleh hampir semua jenis bakteri, meliputi dinding sel, membran
plasma, sitoplasma, ribosom, DNA, dan granula penyimpanan. Sedangkan struktur tambahan
hanya dimiliki oleh jenis bakteri tertentu. Struktur ini meliputi : kapsul, flagellum, pili,
fimbria, kromosom, vakuola gas dan endospore. Untuk dapat memahami struktur bakteri,
dapat dipelajari gambar 1.18 di bawah ini.
a. Struktur dasar
Dinding sel
Kebanyakan bakteri mempunyai dinding sel. Dinding sel tersebut terdiri dari berbagai
bentuk dan ukuran tertentu pada sel bakteri. Dinding sel bersifat elastik dan terletak
diantara kapsula dan membran sitoplasma. Susunan kimia dinding sel sangat kompleks
dan dapat terdiri dari beberapa macam bentuk seperti selulosa, hemiselulose, khitin
(karbohidrat, protein, lemak yang mengandung unsur N) tergantung dari spesies
bakteri. Dinding sel ditemukan pada semua bakteri hidup bebas kecuali pada
Mycoplasma.
21
Fungsi dinding sel adalah :

 Memberi perlindungan terhadap protoplasma
 Berperan penting dalam perkembangbiakan sel
 Mengatur pertukaran zat dari luar sel dan oleh karena itu dinding sel
mempengaruhi kegiatan metabolisme dan melindungi protoplasma dari pengaruh
zat-zat racun
 Sebagai pertahanan bakteri agar dapat bertahan hidup dalam lingkungannya
 Mempertahankan tekanan osmotik bakteri. Tekanan osmotik di dalam bakteri
berkisar antara 5-20 atmosfir.
Gambar 1.18 Struktur Bakteri

Sumber http://microbiologyconcepts.blogspot.morphology-of-bacteria-part-i.html,
Diunduh tanggal 7 Agustus 2017
Membran Plasma
Membran sel merupakan bungkus dari protoplasma. Membran sel terletak didalam
dinding sel dan tidak terikat dengan dinding sel. Berdasarkan pengujian sitokimia,
membrane sel menunjukkan adanya protein lipida dan asam-asam nukleat.
Membran sel menyerap cat-cat basa lebih kuat dari pada sitoplasma. Membran yang
menyelubungi sitoplasma ini tersusun atas lapisan fosfolipid dan protein.
Fungsi membran sel antara lain :
 Transpor bahan makanan secara selektif.
 Pada spesies aerob merupakan tempat transport elektron dan oksidasi-fosforlasi.
22
 Tempat ekspresi bagi eksoenzim yang hidrolitik.

 Mengandung enzim dan molekul-molekul yang berfungsi pada biosintesa DNA.
 Mengandung reseptor protein untuk system kemotaktik
 Mengatur keluar masuknya zat-zat
 Berperan dalam proses pembelahan sitoplasma menjadi 2 bagian, diikuti dengan
 pembentukan dinding pemisah.
Sitoplasma
Merupakan isi sel yang berupa cairan, disebut juga dengan protoplasma. Protoplasma
merupakan koloid yang mengandung karbohidrat, protein, enzim-enzim, belerang,
kalsium karbonat dan volutin. Komponen-komponen sitoplasma terdiri dari :
1) Inti
Adanya inti pada bakteri dapat dilihat dengan mikroskop electron, ini merupakan
daerah yang tidak tembus cahaya elektron dan di dalamnya terkandung asam
deoksiribonukleat (ADN). Inti bakteri tidak memiliki membrane sehingga
termasuk dalam organisme prokariotik
2) Ribosom
Ribosom merupakan suatu partikel sitoplasma. Kumpulan polyribosom
merupakan rantai ribosom yang menempel pada m RNA. Jumlah ribosom
bervariasi sesuai dengan kondisi pertumbuhan, sel tumbuh cepat dalam medium
yang sesuai, mengandung lebih banyak ribosom dibandingkan dengan sel
tumbuh lambat dalam medium yang kurang memadai. Ribosom bakteri terletak
menyebar di sitoplasma. Hal ini terjadi karena bakteri tidak mempunyai
membrane inti. Organel ini berfungsi sebagai tempat sintesis protein.
3) Granula Sitoplasma / granula penyimpan makanan

Granula berfungsi sebagai tempat penyimpanan cadangan makanan karena
bakteri menyimpan cadangan makanan yang dibutuhkan. Sama seperti ribosom,
granula penyimpanan makanan tersebar pada sitoplasma. Granula penyimpanan
ini berfungsi untuk menyimpan makanan pada beberapa bakteri.
Di dalam sitoplasma sel prokariot, terdapat granula-granula yang mengandung
berbagai substansi, seperti glikogen, metafosfat an organik, asam
polihidroksibutirat, belerang atau senyawa yang mengandung nitrogen, yang
biasanya digunakan sebagai cadangan nutrisi bagi sel, substansi cadangan
tersebut di kenal dengan badan inklusi. Jenis inklusi tertentu terdapat di dalam
satu spesies bakteri, sedangkan pada spesies lain tidak memilikinya. Oleh karena
itu, jenis inklusi sering kali digunakan untuk mengidentifikasi spesies bakteri.
23
4) Plasmid
Kebanyakan bakteri memiliki plasmid. Plasmid dapat dengan mudah didapat
oleh bakteri. Namun, bakteri juga mudah untuk menghilangkannya. Plasmid
dapat diberikan kepada bakteri lainnya dalam bentuk transfer gen horizontal.
b. Struktur Tambahan
Struktur tambahan hanya dimiliki oleh jenis bakteri tertentu. Yang termasuk kedalam
struktur tambahan adalah kapsul, flagelum, pilus/pili, klorosom, vakuola gas dan
endospora.
1) Kapsul atau lapisan lendir

Kapsul atau lapisan lendir adalah lapisan di luar dinding sel pada jenis bakteri
tertentu. Kebanyakan bakteri mempunyai lapisan lendir yang menyelubungi
dinding sel seluruhnya Jika lapisan lender ini cukup tebal maka bungkus ini
disebut kapsula. Kapsul tersusun atas polisakarida dan air.
Fungsi kapsula :
 Melindungi sel terhadap faktor lingkungan (kekeringan)
 Sebagai pengikat antar sel.
Kapsula memiliki arti penting, karena erat hubungannya dengan faktor

virulensi/keganasan bakteri-bakteri patogen. Suatu bakteri patogen apabila
kehilangan kapsulnya, maka akan turun virulensinya. Hilangnya kemampuan
untuk membentuk kapsul melalui mutasi berhubungan dengan kehilangan
virulensi dan kerusakan oleh fagosit namun tidak mempengaruhi kelangsungan
hidup bakteri. Tidak semua bakteri memiliki kapsula. Jika bakteri tersebut
kehilangan kapsulnya sama sekali maka ia akan dapat kehilangan virulensinya
dan dengan demikian akan kehilangan kemampuannya untuk menyebabkan
infeksi.
2) Flagel
Flagel atau bulu cambuk adalah suatu benang halus yang keluar dari sitoplasma
dan menembus dinding sel yang digunakan bakteri sebagai alat pergerakan.
Banyak spesies bakteri yang bergerak menggunakan flagel. Hampir semua bakteri
yang berbentuk lengkung dan sebagian yang berbentuk batang ditemukan
adanya flagel. Sedangkan bakteri kokus jarang sekali memiliki flagel. Ukuran
flagel bakteri sangat kecil, tebalnya 0,02 – 0,1 mikron, dan panjangnya melebihi
panjang sel bakteri. Flagella dilekatkan pada tubuh sel bakteri oleh struktur
kompleks yang mengandung kait dan badan basal. Kait ini berupa struktur
pendek yang melengkung yang berfungsi sebagai sendi antara motor pada
struktur basal dengan flagella
24
Berdasarkan letak dan jumlah flagelnya bakteri dapat dibagi menjadi 5 golongan, yaitu:
1) Bakteri atrich, yaitu bakteri yang tidak mepunyai flagel, contohnya : Klebsiella sp
dan Shigella sp.
2) Bakteri monotrich yaitu bakteri yang memiliki flagel tunggal pada salah satu
ujungnya. Contoh : Vibrio cholerae
3) Bakteri lofotrich yaitu bakteri yang mempunyai seberkas flagel yang terletak
pada salah satu ujungnya. Contoh: Rhodospirillum rubrum.
4) Bakteri amfitrik yaitu bakteri yang mempunyai masing-masing seberkas flagella
atau satu flagel yang terletak pada kedua ujungnya. Contoh : Pseudomonas
aeruginosa
5) Bakteri peritrich yaitu bakteri yang mempunyai flagel yang terletak diseluruh
permukaan sel. Contoh : Salmonella thyposa
Gambar 1.20 Bakteri berflagel Lofotrich

Gambar 1.19 Macam-macam letak
dilihat dengan SEM
flagel
Sumber : http://www.yalescientific.org, diunduh tanggal 7 Agustus 2017
3) Pili
Pili adalah benang-benang halus yang menonjol keluar dari dinding sel. Pili mirip
dengan flagel tetapi lebih pendek, kaku dan berdiameter lebih kecil dan tersusun
dari protein. Kebanyakan terdapat pada bakteri gram negative. Panjang pili
sekitar 0.5-20 mikron. Pili tersusun melingkari sel, dan mempunyai jumlah kurang
lebih 150 buah tiap sel. Seperti flagel, pili juga berpangkal pada protoplasma Pili
mengandung protein yang disebut pillin. Pada garis besarnya pili merupakan alat
untuk melekat, misalnya dengan adanya pili sel-sel beberapa bakteri dapat
melekat dekat dengan permukaan medium cair dimana kadar oksigennya lebih
baik. Pili juga dapat melekatkan sel satu dengan sel lainnya. Fungsi pelekatan sel
ini penting pada peristiwa konjugasi. Konjugasi adalah peristiwa penggabungan
sel-sel jantan dengan betina. Sel-sel bakteri jantan dilengkapi dengan Pili khusus
yang disebut Pili sex.
25
Gambar 1.21 Flagel sebagai alat gerak dan pili sebagai alat perlekatan
Sumber : http://mentarib1ru.blogspot.co.id/pili-bakteri.html, diunduh 7 Agustus 2017
4) Klorosom
Klorosom adalah struktur yang berada tepat dibawah membran plasma dan
mengandung pigmen klorofil dan pigmen lainnya untuk proses fotosintesis.
Klorosom hanya terdapat pada bakteri yang melakukan fotosintesis.
5) Vakuola gas
Vakuola gas terdapat pada bakteri yang hidup di air dan berfotosintesis. Dengan
mengatur jumlah gas dalam vakuola gasnya, bakteri dapat meningkatkan atau
mengurangi kepadatan sel mereka secara keseluruhan dan bergerak ke atas atau
bawah dalam air.
6) Spora (Endospora)
Beberapa bakteri dapat membentuk endospora (spora). Endospora yaitu struktur
berbentuk bulat atau bulat lonjong, bersifat Sangat membias cahaya, sukar dicat
dan sangat resisten terhadap faktor-faktor luar yang buruk. Fungsi spora pada
bakteri bukan sebagai alat reproduksi seperti halnya pada fungi. Spora bakteri
mempunyai arti lain yaitu bentuk bakteri yang sedang dalam usaha
mengamankan diri terhadap pengaruh buruk dari luar. Endospora mengandung
sedikit sitoplasma, materi genetik, dan ribosom. Dinding endospora yang tebal
tersusun atas protein dan menyebabkan endospora tahan terhadap kekeringan,
radiasi cahaya, suhu tinggi dan zat kimia. Jadi, jika kondisi lingkungan tidak
menguntungkan, maka bakteri pembentuk spora akan mengubah bentuk
vegetatifnya menjadi spora. Kondisi tersebut dinamakan fase sporulasi.
26
sebaliknya jika kondisi lingkungan menguntungkan maka spora akan tumbuh

menjadi sel bakteri baru (sel vegetatif). Kondisi ini dinamakan fase germinasi.
Bakteri yang membentuk spora adalah genus Bacillus sp dan Clostridium sp
selain itu juga ada beberapa spesies dari Sarcina sp. dan Vibrio sp. Gambaran
spora dan fase sporulasi dapat terlihat pada gambar dibawah ini.
Gambar 1.22. Endospora (kiri) berwarna biru dan dilihat dibawah SEM
Sumber: https://www.slideshare.net/NnirJhor/microscopy,diunduh 7 Agustus 2017
Gambar 1.23 Fase sporulasi, perubahan bentuk sel vegetative menjadi spora
Sumber : https://thegazeboeffect.wordpress.com,diunduh tanggal 7 Agustus 2017
3. Penggolongan Bakteri Berdasarkan Struktur Dinding Sel

Pewarnaan Gram atau metode Gram adalah salah satu teknik pewarnaan yang paling
penting dan luas yang digunakan untuk mengidentifikasi bakteri. Dalam proses ini, olesan
bakteri yang sudah terfiksasi dikenai larutan-larutan berikut : zat pewarna kristal violet,
larutan yodium, larutan alkohol (bahan pemucat), dan zat pewarna tandingannya berupa zat
warna safranin atau air fuchsin. Metode ini diberi nama berdasarkan penemunya,
ilmuwan Denmark Hans Christian Gram (1853–1938) yang mengembangkan teknik ini pada
tahun 1884 untuk membedakan antara Pneumokokus dan bakteri Klebsiella pneumoniae.
Bakteri yang terwarnai dengan metode ini dibagi menjadi dua kelompok, yaitu bakteri Gram
Positif dan Bakteri Gram Negatif. Bakteri Gram positif akan mempertahankan zat pewarna
kristal violet dan karenanya akan tampak berwarna ungu tua di bawah mikroskop. Adapun
27
bakteri gram negatif akan kehilangan zat pewarna kristal violet setelah dicuci dengan
alkohol, dan sewaktu diberi zat pewarna tandingannya yaitu dengan zat pewarna air fuchsin
atau safranin akan tampak berwarna merah. Perbedaan warna ini disebabkan oleh
perbedaan dalam struktur kimiawi dinding selnya.
Gambar 1.24 Skema Pewarnaan Gram

Sumber : https://www.meromicrobiology.blogspot.com
Karakteristik yang membedakan bakteri Gram positif adalah komposisi dinding selnya –
beberapa lapisan peptidoglikan bergabung bersama membentuk struktur tebal dan kaku.
Terdapat sekitar 40 lapisan peptidoglikan atau disebut juga lapisan Murein/Mukopeptida
yang merupakan 50% dari bahan dinding sel. Sedangkan pada bakteri Gram negative hanya
ada 1 atau 2 lapisan yang merupakan 5-10% dari bahan dinding sel.
Selain itu dinding sel bakteri Gram-positif memiliki asam Teikoat dan Teikuronat, yang
terutama terdiri dari alkohol (seperti ribitol dan alcohol) dan fosfat. Asam Teikoat terdiri dari
2 jenis yaitu: asam lipoteikoat dan dinding asam Teikoat. Kedua jenis asam Teikoat
bermuatan negative karena mengandung gugus fosfat dalam struktur molekul mereka.
28
Gambar 1.25 Perbandingan struktur dinding sel bakteri Gram Postif dan
Gram Negatif
Sumber : https://www.idikmalinzancita.blogspot.com
https://www.idikmalinzancita.blogspot.com,, diunduh tanggal 7 Agustus 2017
Komponen khusus dinding sel Bakteri Gram negatif terdiri dari Lipoprotein dan selaput
Luar. Selaput luar mempunyai saluran khusus yang mengandung molekul protein yang
disebut porin
n yang memudahkan difusi pasif senyawa hidrofil dengan berat molekul rendah
(gula, asam amino, ion-ion
ion tertentu. Molekul antibiotika dapat menembus, tetapi relatif
lambat, sehingga bakteri Gram Negatif relatif lebih resisten terhadap antibiotika.
Gambar 1.26 Susunan molekuler dinding sel bakteri Gram Negatif

Sumber : www.atsu.edu/faculty/chamberlain/Website/Lects/Bacteria.htm
www.atsu.edu/faculty/chamberlain/Website/Lects/Bacteria.htm,
diunduh tanggal 7 Agustus 2017
Bakteri yang termasuk gram negatif adalah Enterobactericeae, Salmonella sp, Shigella
sp, E. Coli dan sebagainya. Sedangkan bakteri gram positif adalah Staphylococci,
Streptococci, Enterococci, Clostridium, Bacillus.
29
C. FISIOLOGI DAN METABOLISME BAKTERI
1. Pertumbuhan
Bakteri, seperti halnya semua mahluk hidup, membutuhkan makanan untuk dapat
bermetabolisme dan untuk dapat melakukan pembelahan sel, dan tumbuh secara optimal
dilingkungan yang menyediakan kebutuhan-kebutuhannya. Secara kimiawi, bakteri
terbentuk oleh unsur-unsur polisakarida, protein, lipid, asam nukleat dan peptidoglikan, yang
keseluruhannya harus dibentuk untuk mencapai pertumbuhan yang baik.
Kebutuhan Nutrisi
Oksigen dan Hidrogen
Oksigen dan Hidrogen didapat dari air; dengan demikian air sangat diperlukan untuk
pertumbuhan bakteri. Kadar oksigen yang tepat sangat dibutuhkan untuk keseimbangan
pertumbuhan. Pertumbuhan bakteri aerob misalnya, sangat ditentukan oleh ketersediaan
Oksigen, sementara Oksigen dengan kadar rendah dapat menghambat pertumbuhan bakteri
yang anaerob
Karbon
Karbon diperoleh bakteri dengan dua cara yaitu :
Bakteri autotroph, bakteri yang hidup bebas dan tidak bersifat parasite, menggunakan
Karbondioksida sebagai sumber karbon-nya
Bakteri heterotroph, yang merupakan bakteri parasite, menggunakan substansi organic
kompleks, seperti sukrosa sebagai sumber karbondiokasida dan sumber energinya.
Ion-ion Anorganik.
Nitrogen, Sulfur, Fosfat, Magnesium, Kalium dan sejumlah trace elemen diperlukan untuk
pertumbuhan bakteri
Nutrien Organik
Nutrien organik sangat diperlukan dalam jumlah yang berbeda-beda, tergantung spesies
bakteri.
Karbohidrat digunakan sebagai sumber energy dan sebagai bahan awal untuk proses
biosintesis beberapa substansi.
Asam amino sangat penting untuk pertumbuhan beberapa bakteri
Vitamin, purin dan Pyrimidin dalam jumlah sedikit diperlukan untuk pertumbuhan bakteri.
2 Reproduksi
Bakteri melakukan reproduksi melalui suatu proses yang disebut pembelahan biner,
dimana sel induk membelah menjadi dua sel dan seterusnya. Hal ini menyebabkan laju
pertumbuhan bakteri mengikuti pertumbuhan logaritme, yaitu satu bakteri akan
menghasilkan 16 bakteri dalam 4 generasi. Rata-rata waktu pembelahan bakteri bisa sangat
bervariasi (misalnya: 20 menit untuk Eschericia coli, 24 jam untuk Mycobacterium
30
tuberculosis), makin pendek waktu pembelahan, makin cepat laju multiplikasinya. Faktor lain
yang mempengaruhi waktu pembelahan antara lain: jumlah nutrient, suhu dan pH
lingkungan.
3. Siklus Pertumbuhan Bakteri

Siklus pertumbuhan bakteri mengalami 4 fase yaitu :
a. Fase Lag: dapat berlangsung selama 5 menit sampai beberapa jam karena
bakteri tidak akan segera membelah diri tetapi mengalami periode adaptasi,
dengan sejumlah aktivitas metabolic
b. Fase Log (Logaritme, eksponensial): pada saat ini terjadi pembelahan sel yang
amat cepat, yang ditentukan oleh kondisi lingkungan.
c. Fase Stasioner : fase ini dialami ketika jumlah nutrisi menurun dengan cepat atau
terbentuknya produk-produk racun yang dapat menyebabkan pertumbuhan
melambat hingga jumlah sel baru yang dihasilkan seimbang dengan jumlah sel
yang mati. Pada saat ini bakteri mencapai kepadatan sel maksimal.
d. Fase Penurunan atau Fase kematian : yang ditandai dengan menurunnya jumlah
bakteri hidup.
Gambar 1.27 Kurva Pertumbuhan Bakteri

Sumber : https://online.science.psu.edu, diunduh tanggal 7 Agustus 2017
4. Regulasi Pertumbuhan Bakteri

Pertumbuhan bakteri sangat dipengaruhi oleh nutrisi di lingkungannya. Meskipun
demikian, kondisi-kondisi intrasel dan ekstraselnya dapat memodifikasi laju
pertumbuhannya. Faktor-faktor intraseluler meliputi :
31
 Produk akhir yang menghambat tumbuh : enzim pertama pada jalur metabolic dihambat
oleh produk akhir dari jalur tersebut.
 Penekanan oleh katabolit : sintesa enzim dihambat oleh produk-produk katabolit
Faktor-faktor ekstrasel yang memodifikasi pertumbuhan bakteri adalah :

a) Suhu: suhu optimal dibutuhkan untuk kerja enzim bakteri yang efektif, meskipun
bakteri dapat tumbuh pada rentang suhu yang sangat lebar. Berdasarkan kemampuan
tumbuh pada suhu lingkungan, bakteri dapat diklasifikasikan sebagai :
 Bakteri Mesofil, yaitu bakteri yang dapat tumbuh baik pada suhu 250 – 400C.
Termasuk dalam golongan ini adalah bakteri-bakteri yang penting secara medis
(yang tumbuh baik pada temperatur badan)
 Bakteri Thermofil, bakteri yang dapat tumbuh baik pada suhu 550 – 800C (Thermus
aquaticus misalnya, tumbuh pada daerah bersuhu tinggi, dan enzimnya seperti
Taq-polimerase, adalah enzim yang tahan panas).
 Bakteri Psikrofil, yang tumbuh pada suhu dibawah 200C
b) pH :konsentrasi ion Hidrogen pada lingkungannya seharusnya antara pH 7,2-7,4 (

misalnya pH fisiologis) untuk pertumbuhan bakteri yang optimal. Meskipun demikian,
beberapa bakteri ( misalnya Lactobacillus sp) dapat mempengaruhi lingkungan
ekologisnya, misalnya menyebabkan proses karies gigi dimana pH dapat diturunkan
sampai 5,0.
5. Pertumbuhan Aerob dan Anaerob

Suplai Oksigen yang baik meningkatkan metabolisme dan pertumbuhan sebagian besar
bakteri. Oksigen bertindak sebagai akseptor Hidrogen pada tahap akhir produksi energy dan
menghasilkan 2 molekul, hydrogen peroksida (H2O2) dan radikal bebas superoksida (O2).
Kedua molekul tersebut bersifat toksik dan perlu untuk dihancurkan. Ada dua enzim yang
digunakan oleh bakteri untuk menghancurkan molekul tersebut: enzim pertama yaitu
superoksida dismutase, yang mengkatalisa reaksi :
2O2 + 2H+  H2O2 + O2
Dan enzim kedua adalah katalase, yang mengubah hydrogen peroksida menjadi air dan
oksigen :
2 H2O2  2 H2O + O2
Bakteri diklasifikasikan menurut kemampuannya untuk hidup di lingkungan dengan oksigen
yang sedikit ataupun dengan oksigen bebas (Lihat gambar 1.24 dan tabel 1.5. Hal ini akan
berdampak praktek penting, karena specimen klinik harus diinkubasikan di laboratorium
pada kondisi keberadaan gas yang tepat bagi pertumbuhan bakteri patogen. Dengan
demikian, bakteri diklasifikasikan sebagai berikut :
 Bakteri obligat aerob (mutlak aerob), yang memerlukan oksigen untuk pertumbuhannya
karena system pembangkit ATP-nya sangat bergantung pada Oksigen sebagai akseptor
hydrogen (misalnya : Mycobacterium tuberculosis)
32
 Bakteri fakultatif anaerob, yang jika ada oksigen mereka menggunakan oksigen untuk
membentuk energy, tetapi jika tidak tersedia cukup oksigen, mereka menggunakan jalur
fermentasi untuk mensintesa ATP (misalnya : bakteri-bakteri rongga mulut seperti
Streptococcus mutans, Eschericia coli).
 Bakteri obligat anaerob, yaitu bakteri yang tidak dapat tumbuh jika ada oksigen karena
bakteri tersebut tidak mempunyai enzim superoksida dismutase atau katalase atau
keduanya (misalnya Porphyromonas gingivalis)
 Microaerophilic , yaitu bakteri yang tumbuh dengan baik pada lingkungan dengan sedikit
oksigen (misalnya Campylobacter fetus).
Gambar 1.28 Kebutuhan atmosferik bakteri,

seperti digambarkan pada perbenihan agar :
1) Obligat aerob, 2) Obligat anaerob, 3) Fakultatif anaerob, 4) Microaerofilic;
5) mikroorganisme Capnofilic (tumbuh pada lingkungan yang diperkaya dengan
karbondioksida).
Sumber : https://lordbroken.wordpress.com, diunduh tanggal 7 Agustus 2017
D. MEDIA PERTUMBUHAN BAKTERI
Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri atas campuran
nutrisi (nutrient) yang digunakan oleh suatu mikroorganisme untuk tumbuh dan
berkembangbiak pada media tersebut. Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi pada media
berupa molekul-molekul kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel-nya. Media
pertumbuhan juga bisa digunakan untuk mengisolasi mikroorganisme, identifikasi dan
membuat kultur murni. Komposisi media pertumbuhan dapat dimanipulasi untuk tujuan
isolasi dan identifikasi mikroorganisme tertentu sesuai dengan tujuan masing-masing
pembuatan suatu media. Media adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat hara
(nutrient) yang berguna untuk membiakkan mikroba. Dengan mempergunakan bermacam-
macam media dapat dilakukan isolasi, perbanyakan, pengujian sifat-sifat fisiologis dan
perhitungan jumlah mikroba.
33
1. Macam-macam Media
Media untuk kultur bakteri dalam mikrobiologi ada banyak jenisnya dan dapat menjadi
tiga kelompok besar berdasarkan bentuk, komposisi/susunannya.
a. Berdasarkan Bentuknya
Bentuk media ada tiga macam yang dapat dibedakan dari ada atau tidaknya bahan
tambahan berupa bahan pemadat seperti agar-agar atau gelatin. Bentuk media tersebut
yaitu:
1) Media Padat
Media padat merupakan media yang mengandung banyak agar atau zat pemadat
kurang lebih 15% agar sehingga media menjadi padat. Media ini dapat dibedakan menjadi
tiga jenis menurut bentuk dan wadahnya yaitu, media tegak, media miring, dan media
lempeng. Media tegak menggunakan tabung reaksi yang ditegakkan sebagai wadahnya,
media miring menggunakan tabung reaksi yang dimiringkan, sedangkan media lempeng
menggunakan petridish (plate) sebagai wadahnya. Media ini umumnya digunakan untuk
pertumbuhan koloni bakteri atau kapang. Ke dalam media ditambahkan antara 10-15 gram
tepung agar-agar per 1000 ml media. Jumlah tepung agar-agar yang ditambahkan tergantung
kepada jenis atau kelompok mikroba yang dipelihara. Kalau ke dalam media tidak
ditambahkan zat pemadat, umumnya dipergunakan untuk pembiakkan mikroalga tetapi juga
mikroba lain, terutama bakteri dan ragi. Ada yang memerlukan kadar air tinggi sehingga
jumlah tepung agar-agar rendah. Tetapi ada pula yang memerlukan kandungan air rendah
sehingga penambahan tepung agar-agar harus sedikit. Media padat umumnya dipergunakan
untuk bakteri, ragi, jamur dan kadang-kadang juga mikroalga
2) Media semi padat

Media semi padat atau semi cair merupakan media yang mengandung agar kurang dari
yang seharusnya kurang lebih 0,3% - 0,4% sehingga media menjadi kenyal, tidak padat dan
tidak begitu cair. Umumnya digunakan untuk pertumbuhan mikroba yang banyak
memerlukan air dan hidup anerobik dan untuk melihat pergerakan mikroba. Kalau
penambahan zat pemadat hanya 50% atau kurang dari yang seharusnya. Ini umumnya
diperlukan untuk pertumbuhan mikroba yang banyak memerlukan kandungan air dan hidup
anaerobic atau fakultatif.
3) Media cair
Media cair merupakan media yang tidak ditambahi bahan pemadat, umumnya
digunakan untuk pertumbuhan mikroalga. Kalau ke dalam media tidak ditambahkan zat
pemadat, umumnya dipergunakan untuk pembiakkan mikroalge tetapi juga mikroba lain,
terutama bakteri dan ragi.
34
Gambar 1.29 Medium solid, semisolid dan cair pada tabung reaksi
Sumber : http://slideplayer.com/slide/5940732/diunduh 7 Agsutus 2017
b. Berdasarkan Komposisi/Susunannya
Berdasarkan komposisinya media di bagi atas :
1. Media alami/non sintetis merupakan media yang disusun dari bahan-bahan alami
dimana komposisinya yang tidak dapat diketahui secara pasti dan biasanya
langsung diekstrak dari bahan dasarnya seperti: kentang, tepung, daging, telur,
ikan sayur, dsb. Contohnya: Tomato juice agar.
2. Media semi sintesis merupakan media yang disusun dari bahan-bahan alami dan
bahan-bahan sintesis. Contohnya: Kaldu nutrisi disusun dari : Pepton 10,0 g,
Ekstrak daging 10,0 g, NaCl 5,0 g, dan Aquadest 1000 ml.
3. Media sintesis, yaitu media yang disusun dari senyawa kimia yang jenis dan
takarannya diketahui secara pasti. Contohnya : Mac Conkey Agar.
c. Berdasarkan bentuk
Berdasarkan bentuk, media perbenihan dapat dikelompokkan menjadi :
1) Media alami, yaitu media yang disusun oleh bahan-bahan alami seperti kentang,
tepung, daging, telur, ikan, umbi-umbian lainnya dan sebagainya. Pada saat
sekarang media alami yang banyak dipergunakan adalah dalam kultur jaringan
tanaman maupun hewan. Media untuk budidaya mikroorganisme memiliki
sumber karbon untuk dimasukkan ke dalam biomasa. Kalau ke dalam media
tidak ditambahkan zat pemadat, umumnya dipergunakan untuk pembiakan
mikroalge tetapi juga mikroba lain, terutama bakteri dan ragi. Contoh media
alami yang paling banyak dipergunakan adalah telur untuk pertumbuhan dan
perkembangbiakan virus
35
2) Media sintetik yaitu media yang disusun oleh senyawa kimia. Contohnya media
untuk pertumbuhan dan perkembangbiakan bakteri Clostridium tersusun oleh :
K2HPO4 : 0,5 g
KH2PO4 : 0,5 g
MgSO4, 7H2O : 0,1 g
NaCl : 0,1 g
FeSO4, 7H2O : 0,01 g
MnSO4, 7H2O : 0,01 g
CaCO3 : seangin
3) Media semi sintetik yaitu media yang tersusun oleh campuran bahan-bahan
alami dan bahan-bahan sintetis.
Berikut ini beberapa media yang sering digunakan secara umum dalam mikrobiologi
Lactose Broth
Lactose broth digunakan sebagai media untuk mendeteksi kehadiran koliform dalam
air, makanan, dan produk susu, sebagai kaldu pemerkaya (pre-enrichment broth) untuk
Salmonellae dan dalam mempelajari fermentasi laktosa oleh bakteri pada umumnya. Pepton
dan ekstrak beef menyediakan nutrien esensial untuk memetabolisme bakteri. Laktosa
menyediakan sumber karbohidrat yang dapat difermentasi untuk organisme koliform.
EMBA (Eosin Methylene Blue Agar)

Media Eosin Methylene Blue mempunyai keistimewaan mengandung laktosa dan
berfungsi untuk memilah mikroba yang memfermentasikan laktosa seperti S. aureus,
P. aerugenosa, dan Salmonella. Mikroba yang memfermentasi laktosa menghasilkan koloni
dengan inti berwarna gelap dengan kilap logam. Sedangkan mikroba lain yang dapat tumbuh
koloninya tidak berwarna.
Nutrient Agar
Nutrien agar adalah medium umum untuk uji air dan produk dairy. NA juga digunakan
untuk pertumbuhan mayoritas dari mikroorganisme yang tidak selektif, dalam arti
mikroorganisme heterotrof. Media ini merupakan media sederhana yang dibuat dari ekstrak
beef, pepton, dan agar. NA merupakan salah satu media yang umum digunakan dalam
prosedur bakteriologi seperti uji air biasa, uji air limbah, produk pangan, untuk membawa
stok kultur, untuk pertumbuhan sampel pada uji bakteri, dan untuk mengisolasi organisme
dalam kultur murni.
Nutrient Broth
Nutrient broth merupakan media untuk mikroorganisme yang berbentuk cair. Intinya
sama dengan nutrient agar.
36
MRSA (de Mann Rogosa Sharpe Agar)

MRSA merupakan media yang diperkenalkan oleh De Mann, Rogosa, dan Shape (1960)
untuk memperkaya, menumbuhkan, dan mengisolasi jenis Lactobacillus dari seluruh jenis
bahan. MRS agar mengandung polysorbat, asetat, magnesium, dan mangan yang diketahui
untuk beraksi/bertindak sebagai faktor pertumbuhan bagi Lactobacillus, sebaik nutrien
diperkaya.
Trypticase Soy Broth (TSB)

TSB adalah media broth diperkaya untuk tujuan umum, untuk isolasi, dan penumbuhan
bermacam mikroorganisme. Media ini banyak digunakan untuk isolasi bakteri dari spesimen
laboratorium dan akan mendukung pertumbuhan mayoritas bakteri patogen. Media TSB
mengandung kasein dan pepton kedelai yang menyediakan asam amino dan substansi
nitrogen lainnya yang membuatnya menjadi media bernutrisi untuk bermacam
mikroorganisme.
Plate Count Agar (PCA)

PCA digunakan sebagai medium untuk mikroba aerobik dengan inokulasi di atas
permukaan. Media PCA ini baik untuk pertumbuhan total mikroba (semua jenis mikroba)
karena di dalamnya mengandung komposisi casein enzymic hydrolisate yang menyediakan
asam amino dan substansi nitrogen kompleks lainnya serta ekstrak yeast mensuplai vitamin
B kompleks.
Potato Dextrose Agar (PDA)

PDA digunakan untuk menumbuhkan atau mengidentifikasi ragi dan kapang. Dapat
juga digunakan untuk enumerasi ragi dan kapang dalam suatu sampel atau produk makanan.
PDA cocok untuk pertumbuhan jamur. PDA mengandung sumber karbohidrat dalam jumlah
cukup yaitu terdiri dari 20% ekstrak kentang dan 2% glukosa sehingga baik untuk
pertumbuhan kapang dan khamir tetapi kurang baik untuk pertumbuhan bakteri.
2. Jenis-Jenis Media Berdasarkan Fungsinya

Berdasarkan fungsinya, media dapat dibedakan menjadi enam yaitu:
1. Media Basal (media dasar) adalah media yang digunakan sebagai bahan dasar untuk
membuat media lain yang lebih kompleks. Media ini dapat mendukung pertumbuhan
hampir semua jenis mikrobia, contohnya adalah nutrient broth, kaldu pepton, dsb.
2. Media Diferensial adalah media yang bila ditumbuhi oleh mikroba yang berbeda,
mikroba tersebut akan tumbuh dengan ciri khusus sehingga dapat dibedakan.
Contohnya: Media Triple Sugar Iron Agar (TSIA), Media Sulfit Indol Motility (SIM), dan
sebagainya. Pada media diferensial ditambahkan bahan-bahan kimia atau reagensia
tertentu yang menyebabkan mikroba yang tumbuh memperlihatkan perubahan-
perubahan spesifik sehingga dapat dibedakan dengan jenis lainnya.
37
3. Media selektif adalah media yang memungkinkan suatu jenis mikroba tumbuh dengan
pesat, sementara jenis mikroba yang lain terhambat. Contohnya: Media Salmonella
Shigella Agar (SSA), Thiosulphate Citrate Bile Salt (TCBS), dan sebagainya. Media
selektif merupakan media yang ditambahkan bahan-bahan tertentu yang akan
menghambat pertumbuhan mikroba yang tidak diinginkan yang ada dalam suatu
spesimen. Inhibitor yang digunakan berupa antibiotik, garam dan bahan-bahan kimia
lainnya.
4. Media diperkaya (enrichment) adalah media yang dirancang untuk mendukung

pertumbuhan mikroorganisme. Media tersebut memiliki konstituen nutrisi yang
mendorong pertumbuhan mikroba tertentu. Contohnya: kaldu selenit, atau kaldu
tetrationat untuk memisahkan bakteri Salmonella thyposa dari tinja. Pada media
diperkaya (enrichment media) ditambahkan bahan-bahan tertentu untuk menstimulasi
pertumbuhan mikroba yang diinginkan. Hal ini dilakukan untuk menstimulasi
pertumbuhan mikroba yang jumlahnya sedikit dalam suatu campuran berbagai
mikroba contoh Chocolate media dan Yeast-Extract-poptasium Nitrat Agar.
5. Media pengkayaan adalah media yang mengandung bahan-bahan tertentu yang di

satu pihak dapat menghambat pertumbuhan bakteri tertentu, tetapi di lain pihak
sebaliknya dapat menunjang pertumbuhan bakteri tertentu lainnya. Misalnya media
Muller-Kauffman mengandung natrium tetrationat yang menunjang pertumbuhan
Salmonella tetapi menghambat pertumbuhan Escherichia.
6. Media uji (identifikasi) adalah media yang digunakan untuk identifikasi mikroba,
misalnya Medium Litmus Milk umumnya ditambah dengan substansi tertentu yang
bisa menjadi indicator.
7. Medium umum, media yang ditambahkan bahan-bahan yang bertujuan menstimulasi

pertumbuhan mikroba secara umum. Contoh Nutrien Agar (NA) untuk menstimulasi
pertumbuhan bakteri, Potato Dextose Agar (PDA) untuk menstimulir pertumbuhan
fungi.
8. Medium khusus (spesifik), merupakan medium untuk menentukan tipe pertumbuhan

mikroba dan kemampuannya untuk mengadakan perubahan-perubahan kimia tertentu
misalnya, medium tetes tebu untuk Saccharomyces cerevisiae.
9. Medium penguji (Assay medium), yaitu medium dengan susunan tertentu yang
digunakan untuk pengujian senyawa-senyawa tertentu dengan bantuan bakteri
misalnya medium untuk menguji vitamin-vitamin, antibiotika dan lain-lain.
38
10. Medium perhitungan jumlah mikroba yaitu medium spesifik yang digunakan untuk
menghitung jumlah mikroba dalam suatu bahan, misalnya medium untuk menghitung
jumlah bakteri E. coli air sumur.
Latihan
Untuk memperdalam pemahaman Anda mengenai materi pada Topik 2 di atas,

kerjakan latihan berikut !
esensinya saja !
A. Jelaskan 7 dasar penggolongan / klasifikasi bakteri
B. Bagaimana cara menuliskan nama bakteri dengan benar ?
C. Apa perbedaan antara sel prokariota dan sel eukariota ?
D. Pada morfologi makroskopis, koloni bakteri dapat diperiksa berdasarkan apa saja?
E. Ada berapa macam bakteri bentuk kokus berdasarkan formasinya ?
F. Ada berapa macam bekteri bentuk batang berdasarkan formasinya ?
G. Sebutkan 3 struktur utama bakteri! Apa fungsi dinding sel bakteri ?
H. Berdasarkan letak flagel, bakteri dapat dikelopokkan menjadi 5 golongan. Sebutkan!
I. Apa perbedaan dinding sel bakteri Gram (+) dan Gram (-) ?
J. Jelaskan 4 fase siklus pertumbuhan bakteri !
K. Berdasarkan fungsinya media pertumbuhan bakteri dibagi menjadi 6 macam. Untuk
apa saja ?

kembali materi tentang
1. Klasifikasi bakteri
2. Nomenklatur bakteri
3. Sel prokaryotic dan sel eukaryotic
4. Morfologi makroskopis dan morfologi mikroskopis
5. Penggolongan bakteri berdasarkan struktur dinding sel.
6. Siklus pertumbuhan bakteri
7. Media pertumbuhan bakteri
39
Ringkasan
Penggolongan bakteri dapat didasarkan pada sifat patogenitas, genetika, ekspresi

fenotipe, bentuk sel, sifat pewarnaan, sifat pertumbuhan dan metabolisme.
Bakteri diberi nama secara binomial, nama genus mendahului nama spesies, nama
genus ditulis dengan huruf besar, nama spesies ditulis dengan huruf kecil dan dicetak miring.
Contoh penamaan bakteri : Staphylococcus aureus.
Sel organisme terdiri dari 2 golongan utama, yaitu prokaryota dan eukaryote. Bakteri
termasuk sel prokaryota. Mempelajari bentuk bakteri dapat secara makroskopis, yaitu
melihat bentuk koloni dan secara mikroskopis, yaitu bentuk bakteri dibawah mikroskop.
Struktur bakteri meliputi struktur dasar (dinding sel, membrane plasma dan sitoplasma) dan
struktur tambahan (kapsul, flagella, pili, vakuola gas dan endospore). Struktur tambahan
dimiliki oleh spesies-spesies tertentu.
Pewarnaan Gram adalah cara utama identifikasi bakteri berdasarkan perbedaan pada
struktur dinding selnya. Pada pewarnaan ini bakteri dibagi dalam 2 golongan besar, yaitu
bakteri Gram (+) dan bakteri Gram (-).
Untuk pertumbuhannya, bakteri membutuhkan nutrisi berupa bahan anorganik dan
bahan organic. Reproduksi bakteri melalui pembelahan biner. Siklus pertumbuhannya
mengalami 4 fase, yaitu : fase Lag, fase Log, fase stasioner dan fase kematian. Faktor-faktor
eksternal yang mempengaruhi pertumbuhan bakteri yaitu : suhu, pH dan potensial reduksi
oksidasi ( pertumbuhan aerob dan anaerob).
Berdasarkan bentuknya, media perbenihan bakteri dibagi menjadi : media padat,
semi cair dan cair. Berdasarkan komposisinya : medium alami, medium semi sintesis dan
medium sintesis. Berdasarkan fungsinya, media pertumbuhan bakteri dapat dibagi menjadi :
medium basal, medium diferensial, medium selektif, medium diperkaya, medium
pengkayaan, medium uji dan medium umum, medium khusus, medium penghitungan jumlah
mikroba dan medium penguji.
Tes 2
1) Hal-hal tentang bakteri berikut ini adalah benar, kecuali :

A. Makhluk hidup bersel tunggal
B. Termasuk dalam golongan prokaryota
C. Mempunyai bentuk tubuh (morfologi) dan struktur tertentu
D. Ditemukan pertama kali oleh Anthony van Leewenhoek
E. Termasuk dalam golongan eukaryote
40
2. Yang bukan morfologi bakteri secara mikroskopik adalah :

A. Bentuk Vibrio (koma)
B. Bentuk Kokus
C. Bentuk Spirochaeta
D. Bentuk bulat bergerigi
E. Bentuk Streptobasil
3 Menurut kurva pertumbuhan bakteri, periode penyesuaian pada lingkungan yang

memakan waktu satu jam hingga beberapa hari terjadi pada :
A. Fase lag
B. Fase logaritme
C. Fase stasioner
D. Fase penurunan
E. Fase kematian
4. Fungsi dinding sel bakteri adalah :

A. Memberi perlindungan kepada lapisan protoplasma
B. Pengikat antar sel
C. Tempat ekspresi eksoenzim
D. Pergerakan bakteri
E. Berperan dalam pembelahan sel
5. Untuk melihat pergerakan bakteri, sebaiknya bakteri ditanam dalam medium yang :
A. Solid
B. Semi solid
C. Cair
D. Alamiah
E. Diperkaya
Bab 1 ini.
41
Topik 3
Patogenesis Penyakit Infeksi
Jika mikroorganisme dapat menyebabkan penyakit, maka disebut pathogen. Diantara

mikroorganisme pathogen tersebut, ada yang bersifat virulen (ganas) karena mereka dapat
menyebabkan penyakit pada individu yang sehat, walaupun dalam jumlah inokulum kecil.
Sementara mikroorganisme lainnya hanya dapat menyebabkan sakit pada individu yang
mengalami penurunan daya tahan tubuh. Mikroorganisme yang disebut terakhir disebut
mikroorganisme oportunistik, yang maksudnya disaat ada kesempatan, dalam hal ini
menurunnya daya tahan tubuh inang, maka ia dapat menyebabkan penyakit. Kelompok
mikroorganisme oportunistik seringkali merupakan flora normal tubuh manusia.
Infeksi disebut “penyakit yang dapat ditularkan” jika penyakit tersebut disebarkan dari
inang satu ke inang lainnya. Banyak penyakit infeksi yang dapat ditularkan; misalnya
tuberculosis adalah penyakit menular, karena penyakit tersebut dapat disebarkan melalui
percikan ludah yang dihasilkan ketika batuk misalnya, tetapi keracunan makanan oleh
bakteri Staphylococcus bukan penyakit menular, karena racun (toksin) yang dihasilkan oleh
bakteri tersebut dan berada di makanan yang dikontaminasi, hanya mempengaruhi individu
yang makan makanan tersebut. Kalau suatu penyakit sangat mudah disebarkan, maka
disebut penyakit yang sangat menular ( misalnya cacar air).
A. ASPEK UMUM PENYAKIT INFEKSI
Bergantung pada tingkat insidensi dan prevalensi suatu penyakit infeksi di masyarakat,
suatu penyakit dapat bersifat endemik, epidemik dan pandemik.
 Penyakit infeksi endemic secara menetap terjadi dengan kadar rendah di suatu populasi
yang spesifik (misalnya penyakit endemic malaria di Papua).
 Penyakit infeksi dinamakan epidemic jika penyakit tersebut terjadi lebih sering
dibandingkan dengan kondisi biasa (misalnya epidemic influenza pada musim dingin)
 Penyakit infeksi dinamakan pandemic jika menyebar secara luas hampir diseluruh dunia
(misalnya infeksi HIV).
1. Riwayat Penyakit Infeksi

Infeksi akut pada umumnya berkembang dengan melalui empat tahapan :
1) Periode inkubasi : waktu antara masuknya mikroorganisme atau toksinnya
sampai timbulnya symptom/gejala ( hal ini dapat berlangsung dari beberapa jam
sampai beberapa minggu)
2) Periode prodromal : pada periode ini individu mengalami symptom-simptom
yang non-spesifik seperti demam, malaise dan hilangnya nafsu makan
3) Periode sakit spesifik akut : gejala dan tanda penyakit yang karakteristik / khas
terlihat nyata pada periode ini
4) Periode penyembuhan: sakit berangsur-angsur hilang dan pasien kembali sehat
pada fase akhir tahap ini.
42
Sejumlah mikroorganisme menyebabkan infeksi yang subklinis atau tidak nyata, yaitu
tanpa gejala yang terlihat nyata, dan individu yang terkena tidak memperlihatkan simptom
walaupun dia terinfeksi dengan mikroorganisme tersebut. Pada kondisi lain, ada individu
yang terinfeksi, dan tubuhnya tidak mampu menghilangkan keberadaan mikroorganisme
pathogen tersebut setelah periode penyembuhan, sehingga dia menjadi karier kronik
mikroorganisme tersebut (misalnya : Salmonella typhi, Hepatitis B virus); sehingga tubuhnya
tetap menyimpan organisme tersebut sementara dia tetap sehat.
Beberapa infeksi dapat menjadi periode laten, dan suatu ketika dapat terjadi reaktivasi
pertumbuhan mikroorganisme dan berulangnya gejala pada tahap late (misalnya setelah
infeksi herpes primer, virus dapat menetap di ganglion saraf trigerminal, dan menyebabkan
herpes labialis yang berulang sewaktu waktu).
B. PATOGENESIS PENYAKIT YANG DISEBABKAN BAKTERI
1. Faktor-faktor Penentu Patogenitas Bakteri

Patogenesis bakteri adalah pembahasan yang cukup luas. Berikut akan dibahas
bagaimana cara bakteri bisa menyebabkan seseorang sakit. Tahapan bakteri menyebabkan
sakit adalah melalui transmisi (penularan/pemindahan bakteri), perlekatan pada permukaan
sel inang, menyerang (invasive) dan toksigenitas (melepaskan toksin / racun).
a. Transmisi atau Penularan

Kebanyakan penyakit infeksi adalah akibat bakteri pindah dari sumber luar, sehingga
disebut bersumber dari eksogen. Penyakit lain disebabkan oleh flora normal dari tubuh
inangnya sendiri yang bertindak selaku bakteri oportunistik, sehingga disebut bersumber
endogen. Penularan dapat terjadi secara :
 Inhalasi : melalui jalur udara
 Ingesti : melalui jalur penelanan makanan dan minuman yang terkontaminasi
 Inokulasi : melalui kontak seksual, jarum suntik terkontaminasi, kontak kulit, transfusi
darah atau gigitan serangga.
Ada 4 pintu masuknya mikroorganisme, yaitu : kulit, saluran pernafasan, saluran

pencernaan dan saluran genitourinaria. Beberapa contoh pintu masuk beberapa bakteri
pathogen dapat terlihat pada tabel 1.5 dibawah ini.
43
Tabel 1.5 Pintu masuk beberapa bakteri patogen
Pintu masuk bakteri Nama bakteri pathogen Penyakit
Kulit Clostridium tetani Tetanus

Hepatitis B virus Hepatitis B
Saluran Pernafasan Streptococcus pneumoniae Pneumonia
Neisseria meningitides Meningitis
Haemophilus influenza Meningitis
Mycobacterium tuberculosis Tuberkulosis
Influenza virus Influenza
Rhinovirus Flu
Epstein-Barr virus Infeksius Mononukleosus
Saluran pencernaan Shigella dysentriae Disentri

Salmonella typhi Demam typhoid
Vibrio cholera Cholera
Hepatitis A virus Infeksi hepatitis
Poliovirus Poliomyelitis
Saluran genital Neisseria gonorrhoeae Gonoroe

Treponema pallidum Sifilis
HIV AIDS
Candida albicans (fungi) Vaginitis
Sumber : Samaranayake,2002 hal 30
b. Perlekatan pada permukaan sel/jaringan inang

Ini adalah tahap awal infeksi. Beberapa bakteri dan fungi mempunyai struktur khusus
atau menghasilkan bahan khusus yang memfasilitasi perlekatan pada permukaan sel inang
(termasuk pada protesa gigi, katup jantung buatan dan lain-lain), dengan demikian
menambah kemampuan mereka untuk berkolonisasi dan menyebabkan penyakit.
Mekanisme perlekatan ini adalah hal penting bagi mikroorganisma untuk melekat pada
membrane mukosa (misalnya rambut yang menyerupai pili pada Neisseria gonorrhoeae dan
Eschericia coli menjadi alat lekat bagi kedua bakteri itu pada sel-sel epitel saluran kencing;
polisakarida ekstraseluler yang dihasilkan oleh Streptococcus mutans membantunya
menempel pada permukaan email gigi).
44
c. Daya serang Bakteri (Invasiv)

Daya invasive bakteri berperan penting dalam patogenesis; daya serang ini
berhubungan dengan enzim yang disekresikan oleh bakteri. Beberapa diantara enzim
tersebut adalah :
 Kolagenase atau hialuronidase yang dapat merusak substansi interseluler jaringan inang,
sehingga memungkinkan bakteri mudah masuk dan menyebar di jaringan, khususnya
pada infeksi di kulit yang disebabkan oleh Streptococcus pyogenes.
 Koagulase, enzim yang dihasilkan oleh Staphylococcus aureus, mempercepat
pembentukan bekuan fibrin (dari fibrinogen). Kondisi ini melindungi bakteri dari proses
fagositosis (yaitu proses sel darah putih manusia memakan bakteri tersebut) yaitu
dengan cara membentengi daerah yang terinfeksi dan melingkupi bakteri dengan lapisan
fibrin.
 Immunoglobulin A (IgA) protease, enzim yang dihasilkan bakteri yang dapat merusak IgA
inang pada permukaan mukosa, sehingga memungkinkan bakteri-bakteri seperti N.
gonorrhoeae, Haemophilus influenza dan Streptococcus pneumonia melekat pada
membrane mukosa.
 Leukosidin, yaitu racun yang dihasilkan bakteri yang dapat menghancurkan sel-sel darah
putih manusia jenis netrofil dan makrofaga. Toksin ini dimiliki oleh bakteri-bakteri
penyebab penyakit periodontal seperti Actinobacillus actinomycetemcommitans.
d. Toksigenitas
Produksi toksin atau toksigenitas adalah salah satu factor penentu patogenesis bakteri.
Toksin yang dihasilkan bakteri dapat digolongkan menjadi 2 kelompok utama yaitu :
eksotoksin dan endotoksin. Endotoksin adalah komponen lipopolisakarida (LPS) dinding sel
bakteri Gram negative (kokus maupun basil) yang tersimpan dan tidak secara aktif
dikeluarkan oleh bakteri. Bakteri Gram positif tidak menghasilkan toksin ini. Endotoksin
dapat menyebabkan demam, syok dan gejala umum lainnya. Endotoksin baru dilepaskan dari
tubuh bakteri jika bakteri mengalami lisis (hancur, mati).
Eksotoksin adalah toksin yang dihasilkan dan dikeluarkan dari badan bakteri Gram
positif dan Gram negative. Eksotoksin dapat menyebabkan penyakit dibagian tubuh tertentu
setelah menyebar atau terbawa melalui jalur sistemik (misalnya bakteri penyebab
tetanusyang masuk melalui luka di kaki menghasilkan eksotoksin yang dapat menyebabkan
rahang terkunci atau kejang otot masseter (pengunyahan) di daerah wajah).
Eksotoksin labih toksik dibandingkan dengan endotoksin. Misalnya toksin tetanus
dapat menyebabkan kematian pada kadar < 1 µg. Polipeptida eksotoksin merupakan antigen
kuat yang dapat merangsang antibody tubuh membentuk antitoksin, yang dapat berguna
dalam mencegah atau mengobati penyakit, misalnya tetanus. Toksisitas eksotoksin tersebut
dapat dinetralisir oleh formaldehyde (atau oleh asam, atau oleh pemanasan) dan toksoid ini
dapat dimanfaatkan untuk pembuatan vaksin.
45
Eksotoksin bakteri secara umum dapat dikelompokkan sebagai :

 Neurotoksin, yaitu toksin yang berpengaruh terhadap saraf. Contohnya : toksin tetanus
(dihasilkan oleh Clostridium tetani), toksin difteria (dihasilkan oleh Corynebacterium
diptheriae) dan toksin botulinum (yang dihasilkan oleh Clostridium botulinum).
 Enterotoksin, yaitu toksin yang berefek racun terhadap mukosa usus dan dapat
menyebabkan gangguan gastrointestinal). Contohnya toksin yang dihasilkan oleh
Eschericia coli, Vibrio cholera dan Bacillus cereus.
 Eksotoksin lainnya, contohnya toksin yang dihasilkan oleh bakteri Clostridium
perfringens yang dapat menyebabkan gas gangrene pada luka.
 Perbandingan antara endotoksin dan eksotoksin dapat terlihat pada Tabel 1.6 dibawah
ini :
Tabel 1.6. Perbandingan antara Endotoksin dan Eksotoksin
EKSOTOKSIN ENDOTOKSIN
Sumber Beberapa spesies bakteri Gram Dinding sel bakteri Gram
Positif dan Gram Negatif negative
Asal Dikeluarkan dari dalam sel Komponen dinding sel
Kimia Polipeptida Lipopolisakarid
Toksisitas Tinggi (dosis fatal pada 1µg) Rendah (dosis fatal jika
dihasilkan oleh ratusan
mikrooranisme)
Efek klinis Bervariasi Demam, syok
Antigenitas Menghasilkan antibody dengan Bersifat antigen lemah
titer tinggi yang disebut antitoksin
Vaksin Toksoid dapat digunakan sebagai Tidak ada pembentukan
vaksin toksoid dan tidak dapat
dibuat vaksin
Stabilitas terhadap Sebagian besar bersifat Thermostabil pada 100 0 C
panas thermolabil (cepat rusak pada selama 1 jam
pemanasan 600C)
Macam penyakit Kolera, tetanus, difteria Sepsis oleh bakteri batang
Gram Negatif, syok
endotoksin
Sumber : Samaranayake, 2002 hal 31
46
Latihan

esensinya saja !
1) Jelaskan 4 tahapan infeksi akut ! Apa yang dimaksud dengan karier kronik ?
2) Sebutkan 4 pintu masuk bakteri pada tubuh inang, dan beri contoh masing-masing
bakteri berdasarkan pintu masuknya !
3) Apa pengaruh enzim kolagenase dan koagulase yang dihasilkan bakteri terhadap
jaringan inang ?
4) Jelaskan perbedaan antara eksotoksin dan endotoksin !
5) Neurotoksin adalah toksin yang berpengaruh terhadap………………….contoh bakteri
penghasil toksin ini adalah ………………………….
Enterotoksin adalah toksin yang berpengaruh terhadap ………………………..contoh bakteri
penghasil toksin ini adalah ………………………….

kembali materi tentang :
A. Tahapan infeksi akut
B. Transmisi atau penularan penyakit
C. Daya invasive bakteri
D. Toksigenitas bakteri
E. Perbedaan antara endotoksin dan eksotoksin
Ringkasan
Mikroorganisme dapat bersifat patogen, virulen dan oportunistik. Infeksi akut

berkembang melalui 4 tahapan, yaitu : periode inkubasi, periode prodromal, periode sakit
spesifik akut dan periode penyembuhan.
Faktor-faktor penentu patogenitas bakteri yaitu : transmisi/penularan, perlekatan
bakteri pada sel atau jaringan inang, daya invasive bakteri dan toksigenitas. Penularan dapat
terjadi secara inhalasi (penghirupan), ingesti (penelanan) dan inokulasi (tusukan, gigitan
serangga). Ada 4 pintu masuk bakteri kedalam tubuh manusia, yaitu : melalui kulit, saluran
pernafasan, saluran pencernaan dan saluran genital.
Daya invasive bakteri berhubungan dengan enzim yang dihasilkan, sedangkan
toksigenitas adalah daya rusak bakteri, yang ditentukan oleh toksin / racun yang dihasilkan.
Ada 2 macam toksin yang dihasilkan bakteri yaitu endotoksin dan eksotoksin. Eksotoksin
dapat dikelompokkan menjadi neurotoksin, enterotoksin dan eksotoksin lainnya.
47
Tes 3
1) Enzim yang dapat merusak ikatan sel-sel pada jaringan ikat sehingga disebut sebagai
spreading factor adalah :
A. Koagulase
B. Katalase
C. Hialuronidase
D. DNA-ase
E. Penisilinase
2) Kemampuan mikroorganisme untuk menimbulkan penyakit disebut

A. Virulensi
B. Patogenesis
C. Toksigenitas
D. Daya invasive
E. Afinitas jaringan
3) Bakteri yang masuk ke tubuh manusia melalui saluran pencernaan adalah :

A. Streptococcus pneumonia
B. Treponema pallidum
C. Shigella dysentriae
D. Mycobacterium tuberculosis
E. Clostridium tetani
4) Pernyataan berikut mengenai eksotoksin adalah benar , kecuali :

A. Hanya dihasilkan oleh bakteri Gram negatif
B. Merupakan molekul polipeptida
C. Mampu merangsang tubuh menghasilkan antitoksin
D. Bersifat thermolabil
E. Bakteri tetanus menghasilkan toksin ini
5) Waktu antara masuknya mikroorganisme atau toksinnya sampai timbul symptom/

gejala sakit dinamakan :
A. Periode inkubasi
B. Periode prodormal
C. Periode sakit akut
D. Periode penyembuhan
E. Periode jendela (window periode)
Bab 1 ini.
48
Topik 4
Flora Normal Rongga Mulut, Ekosistem Mulut,
dan Plak Dental
Flora normal rongga mulut terdiri dari mikroorganisme yang amat beragam yang
meliputi bakteri, fungi, mycoplasma, protozoa dan kemungkinan virus yang hidup
berdampingan dari waktu ke waktu. Bakteri merupakan kelompok yang utama yang dapat
mencapai 350 jenis spesies. Hal ini dapat terjadi karena pada kenyataannya rongga mulut
memiliki tempat-tempat (habitat) dengan kondisi lingkungan yang berbeda-beda.
Menariknya, disamping dihuni oleh mikroorganisme yang beragam, tetapi banyak juga
macam organisme yang bisa diisolasi dari ekosistem tubuh yang berdekatan dengan mulut,
misalnya di usus dan di kulit, tapi ternyata tidak ditemukan di rongga mulut. Hal ini
menunjukkan adanya hal yang bersifat unik dan selektif di rongga mulut sehingga
menentukan kolonisasi mikroorganismenya.
Bakteri rongga mulut dapat diklasifikasikan utamanya pada kelompok bakteri Gram
positif dan bakteri Gram negative, dan selanjutnya dikelompokkan pada bakteri anaerob
atau fakultatif anaerob menurut kebutuhan oksigen-nya. Penjelasan berikut adalah
gambaran tentang genus bakteri utama yang dapat diisolasi dari rongga mulut.
A. JENIS BAKTERI RONGGA MULUT
Pada tabel 1.7 berikut akan dapat dilihat beragam jenis bakteri yang terdapat pada
rongga mulut manusia.
Tabel 1.7 Ragam Bakteri dan Mikroorganisme Rongga Mulut Lainnya

Beserta Karakteristiknya
BAKTERI GRAM POSITIF KOKUS

Genus Karakteristik bakteri Kelompok dan Habitat di Penyakit yang
spesies rongga ditimbulkannya
mulut
Streptococcus Gram positif, formasi  Kelompok Permukaan Karies gigi
rantai, tidak Mutans : gigi
bergerak, mempunyai Streptococcus
benang fibril di mutans
permukaan selnya, S. sobrinous
kadang-kadang  Kelompok Dorsum
berkapsul, fakultatif Salivarius : lidah,
anaerob, sifat S. salivarius Saliva,
perbenihan α- S. vestibularis mukosa
hemolisis, medium  Kelompok vestibulum Infeksi
selektifnya : Agar Mitis endocarditis
49
Mitis Salivarius (MSA)

S. mitis Plak dental (kecuali S. mitis)
S. sanguis Lidah
S. gordonii Pipi, Kavita
S. oralis gigi
S crista Infeksi dento
 Kelompok alveolar
anginosus Infeksi pulpa gigi
S. constellatus,
S. intermedius, Saku gusi
S. anginosus
Streptococcus Anaerob mutlak, P. anaerobicus Gigi, Karies dentin,
anaerob pertumbuhan lambat, P. micros periodontal abses
(Peptostreptococcus) biasanya non- P. magnus periodontal.
hemolitik Abses
dentoalveolar
Stomatococcus Koagulase negatf, Micrococcus Lidah, --
membentuk koloni mucilagenosus Saku gif,usi
besar yang melekat
pada permukaan agar
darah, fakultatif
anaerob
BAKTERI GRAM POSITIF BATANG DAN FILAMEN (BENTUK PITA)
Actinomyces Fermentasi glukosa, A. israelii, Karies awal, Karies awal,
Anaerob mutlak atau A. greencseriae karies akar, karies akar,
fakultatif anaerob A. odontolyticus gingiva gingivitis
A.naeslundii
dll
Lactobacillus Katalase L.casei, Plak Gigi Karies

negative,mikroaero- L.fermentum,
filik, membutuhkan l.acidophilus,
nutrisi yang L.salivarius
kompleks, L.rhamnosus
pembentuk asam,pH
optimal 5,5-5,8,
Eubacterium Pleomorfik E.brachi, Plak gigi Karies,
(mempunyai banyak E. timidum, Kalkulus, periodontitis
bentuk, bisa batang, E.nodatum,
bisa filamen E.saphenum
Propionibacterium Anaerob mutlak, P.acnes Karies akar, Infeksi

bentuk mirip sekali plak dental dentoalveolar
dengan A.israelii, tapi
dapat menghasilkan
asam propionate dari
glukosa
50
BAKTERI GRAM NEGATIF KOKUS

Neisseria Diplococcus (formasi N.subflava, Lidah, saliva,
dua-dua), N.mucosa, mukosa
Fakultatif anaerob N.sicca mulut, plak
usia muda
Veillonella Kokus Gram negative V.parvula, Permukaan Tidak
yang berukuran kecil, V.dispar lidah, saliva, berhubungan
anaerob mutlak, tidak V.atypica plak dental dengan penyakit
bisa memetabolisme
karbohidrat,
menggunakan asam
laktat sehingga dapat
menaikan pH plak
BAKTERI GRAM NEGATIF BATANG (FAKULTATIF ANAEROB DAN KAPNOFILIK)
Haemophilus Kokobasil, fakultatif H.parainfluenzae Plak dental, Infeksi
anaerob H.haemolyticus saliva, dentoalveolar,
H.parahaemolytic mukosa lain, sialadenitis akut,
us infeksi
endocarditis
Actinobacillus Kokobasil, A.actinomycetemc Saku Periodontitis
mikroaerofilik atau omitans periodontal yang progresif
Kapnofilik (perlu CO2)
Eikenella Kokobasil, E.corrodendens Plak dental, Abses
mikroaerofilik, pada dentoalveol dentoalveolar,
agar darah koloni ar infeksi
mengeluarkan endocarditis,
pigmen berwarna periodontitis
karat kronik
Capnocytophaga Tergantung CO2 C.gingivalis, Plak, Periodontitis
(kapnofilik) bentuk C.sputigena, permukaan yang destruktif
batang fusiform, C.ochracea, mukosa
ukuran koloni C.granulosa, mulut, saliva
medium dan C. haemolytica
pinggiran meluas
tidak beraturan,
gerakan
menggelinding
BAKTERI GRAM NEGATIF BATANG (ANAEROB OBLIGAT / ANAEROB MUTLAK)
Genus secara umum Kelompok terbanyak
penghuni plak.
Dahulu, kesemuanya
diklasifikasikan
sebagai Genus
Bacteroides, tetapi
sekarang
dikelompokkan dalam
2 grup besar yaitu :
51
Porphyromonas dan
Prevotella. Perbedaan
keduanya dalam
metabolisme glukosa.
Beberapa
menghasilkan koloni
warna hitam-=black
pigmented anaerob
Porphyromonas Bentuk Batang P.gingivalis, Saku gusi, Periodontitis
pleomorfik, tidak P.endodontalis plak kronis,
dapat bergerak, P. catoniae subgingiva Abses
anaerob mutlak, dentoalveolar,
perlu vit K dan Hemin Infeksi saluran
untuk akar
pertumbuhannya
Prevotella Batang pleomorfik, Koloni berpigmen: Saku Periodontitis
tidak bergerak, P. intermedia, periodontal, kronik, abses
anaerob mutlak, P. nigrescens, plak gigi, dentoalveolar
perlu vit.K dan hemin P.loeschii,
untuk P.corporis,
pertumbuhannya P.melaninogeni-ca
Koloni tak
berpigmen :
P.buccae,
P oralis,
P.oris,
P. dentalis dll
Fusobacterium Batang ramping, F.nucleatum, Saku gusi, Periodontitis,
seperti cerutu, ujung F. alocis, tonsil, saku ANUG, abses
membulat F.sulci, periodontal dentoalveolar
Koloni anaerob F.periodonticum
mutlak, non-
hemolitik, produksi
ammonia dan H2S,
menyebabkan
halitosis
Leptotrichia Batang Filamen L.buccalis Plak gigi --
(seperti pita),
anaerob mutlak,
Wolinella Berbentuk kurva, W.succinogenes, Saku gusi Periodontitis
bergerak dengan destruktif
flagella, anaerob
mutlak
Selenomonas Berbentuk kurva, S. sputigena, Saku gusi --
mempunyai berkas S.noxia,
flagella, anaerob S.flueggei,
mutlak S. inflexi, S.diane
52
Treponema Bentuk batang heliks, T.denticola, Saku gusi ANUG,

bergerak. Koloni ada T.macrodentium, Periodontitis
yang berukuran T.skoliodentium, destruktif
besar, medium, kecil, T.socranskii
anaerob mutlak, T.maltophilum’
T.amylovarum’
T,vincentii
PROTOZOA RONGGA MULUT
Entamoeba Amoeba bergerak, E.gingivalis Jar --
berukuran besar, periodontal
diameter 12 µm. pasien yang
Anaerob mutlak, sulit menerima
dikultur terapi
radiasi
Trichomonas Protozoa berflagel, T.tenax Saku gusi --
diameter 7,5 µm.
Anaerob mutlak, sulit
dikultur pada biakkan
murni
Sumber : Samaranayake, 2002 , hal.207-10
B. PERKEMBANGAN FLORA NORMAL RONGGA MULUT
1. Kondisi mulut bayi pada saat lahir adalah steril, tetapi kemungkinan ada beberapa
bakteri yang didapat dari jalan lahir ibunya.
2. Beberapa jam setelah lahir, dijumpai bakteri pada mulut bayi yang mungkin didapat
dari mulut ibu atau dari mulut perawat dan bisa juga dari lingkungan
3. Spesies pelopor biasanya adalah Streptococcus, yang melekat pada mukosa epitel bayi
(misalnya S. salivarius)
4. Aktivitas metabolic dari bakteri pelopor selanjutnya akan mengubah lingkungan mulut
untuk memfasilitasi kolonisasi oleh bakteri-bakteri dari genus dan spesies lainnya.
Misalnya : S. salivarius memproduksi polimer ekstraseluler dari sukrosa, sehingga
bakteri lain seperti Actinomyces Sp dapat melekat padanya.
5. Ketika komposisi dari ekosistem bakteri ini sudah sangat komplek (dihuni oleh berbagai
spesies dan genus bakteri, sehingga terjadi suatu keseimbangan, dikatakan bahwa
telah terjadi komunitas klimaks.
6. Flora normal pada bayi pada ulang tahun pertamanya biasanya meliputi Streptococcus,
Staphylococcus, Neisseria, Lactobacillus, yang hidup berbarengan dengan bakteri
anaerob seperti Veillonella dan Fusobacteria. Bakteri lain yang dapat diisolasi dalam
jumlah sedikit adalah Actinomyces, Prevotella dan Fusobacterium
7. Perubahan yang bermakna selanjutnya adalah ketika gigi-gigi erupsi, dimana ada dua
habitat tempat kolonisasi bakteri, yaitu permukaan email gigi dan saku gusi. Bakteri
yang senang mendiami permukaan keras gigi adalah S. mutans, S. sanguis dan
Actinomyces sp, dan mikroorganisme yang menyenangi tempat yang lebih anaerob di
53
dalam saku gusi adalah Prevotella sp, Porphyromonas sp, dan Spirochaeta. Tetapi
bakteri anaerob pada anak-anak tidak berada dalam jumlah yang banyak. Setelah masa
dewasa baru jumlahnya bertambah. Contohnya : hanya 18-40% anak usia 5 tahun yang
memiliki Spirochaeta dan Black Pigmented Anaerob, bandingkan dengan 90 % pada
usia 13-16 tahun.
8. Perubahan berikutnya dalam hal kolonisasi bakteri adalah ketika gigi-gigi mulai hilang
akibat proses penuaan. Bakteri yang berkoloni pada saat ini sangat mirip dengan
bakteri pada masa anak2 sebelum gigi erupsi.
9. Pada masa ini, penggunaan protesa sekali lagi mengubah komposisi bakteri. Jamur
Candida sp meningkat jumlahnya ketika ada pemakaian gigi tiruan akrilik. Dan sekarang
diketahui bahwa prevalensi Staphylococcus aureus dan Lactobacillus tinggi jumlahnya
pada manula usia 70 tahun. Plak yang terbentuk pada gigi tiruan mirip dengan plak
yang tumbuh di enamel; dan juga banyak dihuni oleh jamur.
C. EKOSISTEM RONGGA MULUT
Ekologi adalah ilmu yang mempelajari hubungan antara organisme hidup dengan
lingkungannya. Memahami ekologi rongga mulut penting untuk mempelajari patogenesis
penyakit di rongga mulut, seperti karies dan penyakit periodontal yang disebabkan oleh
bakteri mulut.
1. Lingkungan Mulut
Mukosa mulut dibentuk oleh epitel skuamous bertingkat. Pada beberapa bagian mulut,
epitel tersebut termodifikasi sesuai dengan fungsinya ( misalnya di lidah), dan diselingi oleh
struktur seperti gigi dan kelenjar ludah. Jaringan gusi membentuk kantung disekitar gigi-gigi
dan terdapat eksudat cairan gusi yang terus-menerus keluar dari saku gusi. Lapisan tipis
saliva membasahi mukosa mulut.
Mulut memiliki mikroorganisme alamiahnya. Flora yang sifatnya komensal ini akan
berada dalam keseimbangan dengan inangnya, yaitu bagian-bagian mulut, tetapi akan
terjadi penyakit jika keseimbangan tersebut terganggu, misalnya pada kondisi karies dan
penyakit periodontal. Di mulut, juga dijumpai flora komensal lain yang berasal dari luar
(misalnya coliform) yang berada dan bertahan di rongga mulut dalam waktu yang singkat,
dan mereka disebut flora singgahan (transient flora).
Ekosistem rongga mulut meliputi flora / bakteri mulut, tempat-tempat bakteri itu
tumbuh (habitat) dan lingkungan sekitarnya. Habitat utama bakteri di rongga mulut adalah :
 Mukosa bukal
 Dosrsum lidah
 Permukaan gigi (baik disupragingiva dan subgingiva)
 Epitel crevicular gusi
 Peralatan prostodonti maupun orthodonti, jika ada
54
a. Mukosa Bukal dan Dorsum Lidah

Pada mukosa bukal, sifat koloni bakteri terpisah-pisah. Tetapi di dorsum (punggung)
lidah, dimana terdapat papilla-papila lidah, kolonisasi bakteri bersifat padat, karena sela-sela
papilla lidah merupakan tempat yang baik untuk kolonisasi bakteri. Dasar papilla lidah adalah
daerah yang memiliki potensial redoks yang rendah, sehingga bakteri anaerob dapat tumbuh
dengan baik. Adanya mukosa yang berkeratin dan tidak berkeratin juga mempengaruhi
variasi bakteri mulut yang mendiaminya.
b. Gigi
Permukaan gigi adalah tempat terbuka yang dipenuhi oleh populasi bakteri. Sejumlah
besar bakteri dan produk-produknya berakumulasi dipermukaan gigi untuk membentuk plak.
Plak adalah contoh biofilm alamiah dan bahan utama untuk mengawali terjadinya karies dan
penyakit periodontal. Ada beberapa habitat di permukaan gigi yang dihubungkan dengan
bentuk permukaannya. Permukaan licin akan dihuni oleh mikroorganisme dalam jumlah
kecil, tapi di pit dan fisur gigi akan lebih banyak koloni bakteri. Plak didaerah subgingiva akan
dihuni oleh mikroorganisme yang lebih anaerob dibandingkan permukaan gigi di
supragingiva. Habitat bakteri pada plak permukaan gigi dapat terlihat pada gambar 1.25
berikut ini.
Gambar 1.30 Habitat yang berhubungan dengan permukaan gigi

beserta plak yang terbentuk.
Sumber: Samaranayake, 2002, hal 210
c. Epitel Saku Gusi

Meskipun habitat ini adalah tempat yang sempit di rongga mulut, tetapi bakteri yang
berkoloni di epitel saku gusi berperan penting dalam memulai dan berkembangnya penyakit
gingiva dan periodontal.
55
d. Peralatan Prostodonti dan Ortodonti

Jika pasien memakai protesa maupun peralatan ortodonti dan tidak menjaga
higienisnya, maka protesa dapat menjadi gudang bagi pertumbuhan bakteri dan jamur. Ragi
jamur di permukaan protesa yang menekan jaringan mukosa dapat merangsang Candida
untuk menimbulkan infeksi yaitu stomatitis akibat protesa (denture stomatitis).
2. Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisme

Kondisi lingkungan mikro yang berbeda-beda di rongga mulut akan mendukung
mikroflora yang tumbuh didalamnya secara kualitas maupun kuantitas. Hasil dari variasi
tersebut sangat kompleks dan meliputi anatomi, keberadaan saliva, cairan gusi dan factor
interaksi mikroba yang satu dengan mikroba lainnya.
a. Faktor Anatomi
Terdapat tempat-tempat yang merupakan retensi bakteri sebagai akibat dari :
 Bentuk gigi
 Topografi pada gigi (misalnya adanya fisur-fisur di oklusal)
 Ketidakteraturan susunan gigi
 Kualitas restorasi yang tidak baik (misalnya tambalan, bentuk mahkota dan bridge)
 Epitel sulkus gusi yang tidak berkeratin
Daerah yang disebut diatas sulit untuk dibersihkan, baik oleh aksi pembersihan aliran
saliva maupun dengan menyikat gigi.
b. Saliva
Keseluruhan saliva yang membasahi permukaan mukosa mulut berasal dari kelenjar
ludah mayor (parotid, submandibular dan sublingual) dan kelenjar ludah minor (di labial,
lingual, bukal dan palatal). Kandungan saliva adalah campuran ion-ion anorganik meliputi
natrium, kalium, calcium, klorida, bicarbonate dan fosfat. Konsentrasi ion-ion tersebut
bervariasi dari waktu ke waktu, dan pada kondisi saliva istirahat atau saliva yang terstimulasi.
Kandungan saliva yang utama adalah protein dan glikoprotein (seperti musin), yang
mendukung pertumbuhan bakteri melalui cara sebagai berikut :
 Penyerapan saliva pada permukaan gigi membentuk pellicle salivary, suatu lapisan tipis
yang memfasilitasi perlekatan bakteri
 Pellicle akan bertindak sebagai penyedia / sumber awal bagi nutrisi bakteri (karbohidrat
dan protein)
 Agregasi (penimbunan) bakteri, disamping memfasilitasi aksi pembersihan mulut, saliva
juga menyebabkan deposisi di permukaan gigi, yang akan membentuk plak
 Menghambat tumbuh mikroorganisme eksogen (yang rumahnya bukan di mulut) dengan
faktor-faktor pertahanan non-spesifiknya (seperti lisosim, laktoferin dan histatin yang
bersifat bakterisidal dan fungisidal atau dapat membunuh bakteri dan fungi), juga factor-
faktor pertahanan spesifik (yaitu Imunoglobulin, terutama IgA)
 Mempertahankan pH dengan aksi terbaiknya yaitu kapasitas buffer. ( Ingat : saliva yang
bersifat asam akan mendukung pertumbuhan bakteri kariogenik).
56
c. Cairan Saku Gusi

Pada gusi yang sehat, cairan gusi secara terus menerus mengalir dengan lambat, tapi
selama inflamasi alirannya meningkat (misalnya pada kondisi gingivitis). Komposisi cairan
gusi mirip dengan serum darah dan dengan demikian saku gusi terproteksi dengan factor-
faktor pertahanan yang spesifik dan non spesifik yang terkandung dalam serum. Cairan saku
gusi dapat mempengaruhi ekologi saku gusi dengan cara :
 Menyapu mikroba keluar dari seku gusi
 Bertindak sebagai sumber nutrisi utama : bakteri proteolitik dan sakarolitik di saku gusi
dapat menggunakan cairan gusi untuk menyediakan peptide, asam amino, dan
karbohidrat untuk pertumbuhannya; faktor-faktor esensial (seperti hemin) mudah
didapat dengan cara memecah molekul yang mengandung haem, seperti hemoglobin.
 Mempertahankan kondisi pH
 Menyediakan factor-faktor spesifik dan non spesifik : yang paling banyak adalah IgG (IgM
dan IgA keduanya berada dengan kondisi yang lebih sedikit).
 Fagositosis : 95% lekosit didalam saku gusi adalah netrofil yang punya kemampuan untuk
memfagosit (memakan benda asing).
d. Faktor Mikroba
Mikroba di lingkungan mulut dapat berinteraksi satu dengan lainnya dan berakibat
membantu tumbuh atau menekan tumbuh mikroba tetangganya. Mekanisme yang
menjelaskan hal ini adalah sebagai berikut :
 Kompetisi dalam hal perlekatan awal oleh bakteri-bakteri yang lebih duluan mengkoloni
tempat-tempat awal dan mencegah perlekatan bakteri yang “datang lebih lambat”.
 Produksi toksin seperti “bakteriosin” yang dapat membunuh bakteri lain dari spesies
yang sama ataupun berbeda. Misalnya : Streptococcus salivarius memproduksi enosin,
yang menghambat tumbuh S.pyogenes.
 Memproduksi produk akhir metabolic, seperti asam karboksilat rantai pendek yang dapat
menurunkan pH, dan juga bertindak sebagai bakteri antagonis
 Menggunakan produk akhir metabolic bakteri lain sebagai sumber nutrisinya ( misalnya
Veillonella sp menggunakan asam yang dihasilkan oleh Streptococcus mutans).
 Koagregasi dengan bakteri yang spesiesnya sama (homotipik) atau spesies yang berbeda
(heterotipik) misalnya pada pembentukan formasi corncob.(Gambar 1.27)
57
Gambar 1.31 Gambaran mikroskop Electron Scanning dari supragingival plak

menunjukkan formasi corncob yang sebetulnya adalah bakteri kokus yang menumpuk
pada bakteri berbentuk filamen (didalamnya). Jadi seperti bentuk bonggol jagung.
Sumber: Samaranayake, 2002, hal 212
e. Faktor-Faktor lainnya
pH Lingkungan
Banyak mikroba membutuhkan pH netral untuk pertumbuhannya. Tingkat keasaman
beberapa permukaan di rongga mulut diatur oleh saliva (pH rata-ratanya 6,7). Bergantung
pada asupan karbohidrat harian, pH plak dapat turun sampai 5,0 sebagai akibat dari
metabolisme bakteri. Pada keadaan ini, bakteri asidofilik dapat tumbuh dengan baik
(misalnya Lactobacillus sp), tapi bakteri lain yang tidak tahan suasana asam akan mati.
Potensi Reduksi – Oksidasi

Potensi reduksi-oksidasi lingkungan (redoks = Eh) bervariasi pada tiap bagian mulut.
Misalnya selama proses pembentukan plak, potensi redoks bisa turun dari yang tadinya
sanagt oksidatif (+200mV) menjadi sanat reduktif (-141mV). Kondisi ini memungkinkan
pertumbuhan kelompok bakteri yang berbeda-beda.
Terapi Antimikroba
Antibiotika sistemik atau topical mempengaruhi flora mulut, misalnya antibiotic
berspektrum luas, seperti Tetrasiklin, dapat membunuh sebagian besar bakteri endogen
(flora normal) dan memicu pertumbuhan spesies jamur (fungi).
58
Diet
Karbohidrat yang dapat difermentasi adalah senyawa utama yang dapat mengubah
ekologi mulut. Mereka bertindak sebagai sumber nutrisi utama, yang mendorong
pertumbuhan bakteri asidogenik ( bakteri yang hidup pada suasana asam). Produksi
polisakarida ekstraseluler memfasilitasi perlekatan mikroorganisme pad permukaan gigi,
sementara polisakarida intraseluler menjadi sumber nutrisi utamanya.
f. Faktor Iatrogenic
Prosedur perawatan seperti skeling dapat mengubah komposisi mikroba di saku
periodontal dari yang tadinya dominan bakteri penyebab periodontitis menjadi komposisi
bakteri pada jaringan periodontal yang lebih sehat.
3. Nutrisi Bakteri Rongga Mulut

Bakteri rongga mulut memperoleh nutrisi dari sejumlah sumber. Sumber-sumber
tersebut meliputi :
Dari inangnya :
 Partikel sisa – sisa makanan inang yang selalu tersedia di rongga mulut (misalnya sukrosa,
tepung-tepungan)
 Kandungan saliva (glikoprotein, mineral, vitamin)
 Eksudat saku gusi ( misalnya beberapa protein)
 Lingkungan udara ( sebagian besar bakteri membutuhkan kadar oksigen yang rendah)
 Dari bakteri lainnya:
 Produk-produk ekstraseluler bakteri tetangganya, terutama pada komunitas yang padat
bakteri seperti plak
 Granula intraseluler tempat cadangan makanan (biasanya menyimpan glikogen).
D. PLAK GIGI
Plak gigi merupakan endapan bakteri yang terbentuk pada permukaan jaringan keras
gigi di rongga mulut, yang berisi bakteri yang hidup, bakteri mati dan yang setengah hidup
beserta produk-produknya, bersama-sama dengan senyawa inang yang terutama berasal
dari saliva.
1. Komposisi Plak Gigi

Mikroorganisme didalam dental plak dikelilingi oleh matriks anorganik, yang terdiri dari
30% total volume plak. Matriks berasal dari bahan-bahan dari inang dan dari kandungan
plaknya. Pada daerah gingiva, protein dari eksudat saku gusi bersatu kedalam plak. Matriks
plak bertindak sebagai cadangan makanan dan sebagai semen perekat, yang melekatkan
bakteri satu dengan lainnya dan pada bermacam-macam permukaan.
Komposisi mikroba dalam plak dapat sangat bervariasi antar satu orang dengan orang
lain, seseorang bisa membentuk plak dengan sangat cepat, sementara yang lain lambat.
59
2. Pembentukan Plak
Perlekatan mikroba pada permukaan gigi adalah syarat utama untuk terjadinya
kolonisasi dan merupaka langkah awal yang nantinya dapat mengarah pada infeksi dan invasi
bakteri pada jaringan. Pembentukan plak adalah suatu mekanisme yang kompleks yang
meliputi beberapa tahapan
a. Pembentukan pellicle
Terserapnya molekul dari inang dan bakteri pada permukaan gigi dapat membentuk
acquired pellicle. Selapis tipis glikoprotein saliva diendapkan pada permukaan gigi
dalam waktu beberapa menit setelah permukaan gigi tersebut terpapar dengan saliva
(kita bayangkan sesaat setelah gigi tersebut disikat). Bakteri mulut pelopor dengan
demikian akan menempel pada pellicle tersebut dan tidak langsung pada permukaan
enamel (hidroksiapatit).
b. Transpor bakteri
Sebelum perlekatan, bakteri mendekati sekitar permukaan gigi, dengan dibawa aliran
saliva, gerak Brown dan kemotaksis
c. Interaksi antara bakteri dan permukaan gigi seterusnya berlangsung dalam 2 fase
yaitu: interaksi kisaran panjang, yaitu antara interaksi fisikokimiawi antara dinding sel
bakteri dan pellicle yang melapisi gigi, dengan melalui tekanan van der Waals’. Dan
interaksi kisaran pendek yaitu reaksi antara adhesion yang dihasilkan oleh bakteri
dengan reseptor pellicle. Interaksi ini membentuk ikatan yang kuat dan ireversibel,
yang memfasilitasi mikroorganisme selanjutnya untuk bermultiplikasi (memperbanyak
diri). Dari menit ke jam berikutnya terjadi multiplikasi yang berlipat baik antara bakteri
dengan spesies yang sama maupun antar bakteri dengan spesies yang berbeda.
d. Koagregasi dan koadhesi
Sekarang bakteri lapis berikutnya akan menempel pada bakteri generasi pertama yang
sudah lebih dahulu menempel, bisa terjadi antar genus yang sama atau genus yang
berbeda tetapi yang kompatibel.
e. Pembentukan biofilm
Dengan terus terjadinya proses diatas, yang dapat dilihat secara klinis adalah
pembentukan biofilm. Jadi kelompok bakteri yang menjadi pelopor kolonisasi pada
pellicle saliva adalah Gram positif kokus dan batang. Kemudian diikuti oleh Gram
negative kokus dan batang, dan yang terakhir adalah filament, fusobacteria, spiral dan
spirochaeta.
Selain bakteri, salah satu komponen utama adalah matriks ekstraseluler. Matriks ini
meliputi polisakarida ekstraseluler (PES) yang dihasilkan bakteri yang terlapisi oleh
glikoprotein saliva ( atau cairan gusi tergantung dimana plak berada). Produk metabolic
bakteri yang menempel pada generasi pertama, juga secara cepat akan mengubah
lingkungan (misalnya mengurangi potensi redoks yang akan menguntungkan untuk
tumbuhnya mikroorganisme anaerob), yang malah dapat menghambat tumbuh bakteri
lainnya, dan terjadi kompleksitas mikroba, ketebalan dan biomassa pada plak. Hasil
dari proses yang amat dinamik ini , masa plak akan mencapai ukuran kritis yang akan
terjadi keseimbangan antara bakteri yang terdeposisi dan bakteri yang mati. Komunitas
bakteri yang ada pada saat ini disebut komunitas klimaks.
60
Gambaran pembentukan plak sebagai biofilm dapat terlihat dibawah ini.
Gambar 1.32 Pembentukan plak sebagai biofilm dengan proses perlekatan bakterinya
pada tahap awal dan tahap akhir kolonisasi.
Sunber: http://www.childrensoralcare.ca/tag/dental-caries, diunduh 7 Agustus 2017
f. Pelepasan Bakteri
Bakteri yang mengkolonisasi komunitas klimaks ini dapat terlepas dan memasuki fase
planktonisasi (misalnya tersuspensi didalam saliva) dan mungkin dapat ditransportasi-
kan pada tempat-tempat koloni barunya, sehingga akan memulai siklus keseluruhan
diatas.
3. Pembentukan Kalkulus
Ion-ion Fosfat dan Kalsium yang berasal dari saliva dapat terdeposisi didalam lapisan
plak gigi yang paling dalam (karena saliva bersifat amat jenuh/supersaturasi oleh ion-ion
tersebut). Jika plak dibiarkan tidak tergosok, maka bakteri-bakteri yang mati pada komunitas
klimaks akan menjadi bahan tempat mineralisasi. Proses ini dipercepat dengan adanya enzim
fosfatase dan protease yang bersifat merusak inhibitor kalsifikasi yang terkandung di saliva
(yaitu statherin dan protein kaya prolin). Proses deposisi ini mengarah pada terbentuknya
61
kristal Kalsium fosfat yang tidak larut didalam masa plak yang terkalsifikasi, yang dinamakan
kalkulus. Gambar proses mineralisasi plak oleh ion-ion Kalsium dan Fosfat dengan kalkulus
sebagai hasilnya dapat terlihat dibawah ini.
Gambar 1.33 Proses deposisi oleh ion-ion Calcium dan Fosfat pada plak (kiri) dan
kalkulus sebagai hasil mineralisasi yang terlihat secara klinis (kanan)
Sumber: https://en.wikipedia.org/wiki/Calculus_(dental), diunduh 7 Agustus 2017
Latihan

esensinya saja !
1) Ragam bakteri di rongga mulut dapat dikelompokkan kedalam 5 golongan berdasarkan
pewarnaan Gram. Sebutkan !
2) Jelaskan karakteristik genus Streptococcus !
3) Pada perkembangan flora normal rongga mulut, jelaskan apa pengaruh erupsi gigi
terhadap kolonisasi bakteri rongga mulut !
4) Sebutkan 5 habitat bakteri di rongga mulut !
5) Jelaskan 2 sumber nutrisi bakteri rongga mulut !
6) Jelaskan dengan singkat 6 tahap pembentukan plak
7) Jelaskan proses pembentukan kalkulus !

Untuk membantu Anda dalam mengerjakan soal latihan tersebut silakan pelajari kembali
materi tentang :
A. Jenis-jenis bakteri rongga mulut
B. Karakteristik bakteri rongga mulut
C. Perkembangan flora normal rongga mulut
62
D. Lingkungan mulut, habitat bakteri

E. Lingkungan mulut, Sumber nutrisi bakteri rongga mulut
F. Plak Dental
G. Pembentukan kalkulus
Ringkasan
Berdasarkan pewarnaan Gram, ragam bakteri rongga mulut dapat dikelompokkan

menjadi 5 kelompok, yaitu : bakteri Gram positif kokus, bakteri Gram positif batang dan
filamen, bakteri Gram negative kokus, bakteri Gram negative batang (fakultatif anaerob dan
kapnofilik), Gram negative batang (anaerob obligat).
Flora normal rongga mulut mengalami perkembangan yang dinamik dari mulai bayi
lahir sampai usia tua. Perubahan yang signifikan adalah ketika belum ada gigi, ketika gigi
mulai erupsi sampai lengkap ada di rongga mulut, ketika gigi mulai hilang akibat proses
penuaan dan ketika memakai protesa.
Habitat flora rongga mulut adalah di mukosa bukal, dorsum (punggung) lidah,
permukaan gigi, epitel saku gusi dan di protesa bila memakai. Faktor-faktor yang
mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisme adalah : factor anatomi, saliva, cairan dsaku
gusi, factor mikroba dan factor lingkungan lainnya (pH, tingkat aerob/anaerob jaringan,
terapi antimikroba, diet dan faktor iatrogenik).
Nutrisi bakteri rongga mulut berasal dari 2 sumber, yaitu dari inang dan dari bakteri
lainnya. Pembentukan plak dental melalui 6 tahapan, yaitu : pembentukan pellicle, transport
bakteri, interaksi bakteri dengan pellicle, koagregasi dan koadhesi, pembentukan biofilm dan
pelepasan bakteri dari plak.
Kalkulus adalah massa plak yang terkalsifikasi. Kalkulus dibentuk melalui proses
deposisi (pengendapan) ion-ion Kalsium dan Fosfat yang bersumber dari saliva. Ion-ion
tersebut mengendap pada bakteri yang mati didalam plak.
Tes 4
1) Sumber nutrisi flora normal rongga mulut berasal dari bagian-bagian tersebut dibawah
ini kecuali :
A. Partikel sisa makanan inang
B. Hasil metabolisme mikroba lainnya
C. Kandungan saliva
D. Cairan saku gusi
E. Antibiotika yang diminum inang
63
2) Gram (+) kokus, formasi seperti rantai, tidak bergerak, fakultatif anaerob, sifat
perbenihan α-hemolitik adalah karakteristik bakteri :
A. Actinomyces
B. Lactobacillus
C. Streptococcus
D. Staphylococcus
E. Peptostreptococcus
3) Yang bukan merupakan habitat bakteri di rongga mulut adalah

A. Dorsum lidah
B. Mukosa bukal
C. Plak subgingiva
D. Tulang alveolar
E. Epitel saku gusi
4) Bila lingkungan mulut potensial reduksi oksidasinya rendah , maka bakteri yang
tumbuh baik adalah bakteri yang bersifat :
A. Aerob obligat
B. Anaerob obligat
C. Fakultatif anaerob
D. Kapnofilik
E. Asidofilik
5) Tempat-tempat yang memudahkan retensi plak di rongga mulut seperti tersebut

dibawah ini, kecuali :
A. Pit dan fisur pada permukaan gigi
B. Saku gusi
C. Daerah servikal gigi
D. Cangkolan protesa
E. Permukaan licin gigi
Bab 1 ini.
64
Kunci Jawaban Tes
Tes 1 ( Sejarah Mikrobiologi )

1. B
2. C
3. B
4. C
5. B
Tes 2 ( Bakteriologi Dasar )

1. E
2. D
3. A
4. A
5. B
Tes 3 ( Patogenesis Penyakit Infeksi)

1. C
2. B
3. C
4. A
5. A
Tes 4 ( Flora Normal Rongga Mulut, Ekosistem Mulut dan Plak Dental)
1. E
2. C
3. D
4. C
5. E
65
Glosarium
Abiogenesis : Teori yang mengatakan bahwa mahluk hidup dapat terbentuk secara
spontan dari benda-benda mati atau bahan organik yang sudah
mengalami pembusukan
Antibiotika sistemik : Obat antibiotika yang diminum
Antibiotika topikal : Obat antibiotika yang diaplikasikan pada permukaan tubuh yang sakit
Bakteriologi : Bidang ilmu yang mempelajari tentang bakteri

Bakteri aerob : Bakteri yang untuk hidupnya memerlukan oksigen
Bakteri anaerob : Bakteri yang mati jika ada oksigen
Bakteri : Bakteri yang untuk hidupnya memerlukan oksigen berkadar rendah
mikroaerofilik
Bakteri autotrof : Bakteri yang dapat membuat makanannya sendiri dari senyawa
anorganik. Untuk membuat makanannya bakteri memerlukan energi.
Bakteri fotoautotrof : Bakteri yang membuat makanannya sendiri dengan menggunakan
energi yang berasal dari cahaya matahari/proses fotosintesis.
Bakteri : Bakteri yang membuat makanannya sendiri dengan menggunakan
kemoautotrof energi kimia. Energi kimia berasal dari reaksi oksidasi senyawa
anorganik, misalnya ammonia (NH3), Nitrit (HNO2), belerang (S) dan
FeCO3
Bakteri heterotroph : Bakteri yang mendapatkan makanan berupa senyawa organik dan
organisme lainnya. Bakteri heterotroph dapat hidup secara : saproba
(pengurai), parasite dan simbiosis mutualisma.
Bakteri proteolitik : Bakteri yang mampu memproduksi enzim protease (= peptidase =
proteinase), yaitu enzim yang mempu memecah protein menjadi
: molekul yang lebih sederhana, seperti asam amino.
Bakteri sakarolitik Bakteri yang mampu memecah disakarida dan polisakarida menjadi
gula yang lebih sederhana
Batang pleomorfik : Bentuk tubuh bakteri yaitu batang dengan berbagai variasinya
misalnya batang ramping, batang yang menyerupai pita (batang
filamen), batang pendek dan sebagainya
Black pigmented : Kelompok bakteri yang banyak menghuni saku gusi atau saku
anaerob periodontal, yang terdiri dari genus Porphyromonas dan genus
Prevotella. Dalam perbenihan terlihat koloni keduanya menghasilkan
pigmen warna hitam
Dento alveolar : Bagian gigi dan tulang alveolus penyangganya
Dorsum lidah : Punggung lidah
Endokarditis : Infeksi pada lapisan jantung yang paling dalam (= lapiasn
endocardium), dimana terdapat katup jantung
66
Eukariotik : Sel yang mempunyai membran (selaput) inti sehingga materi genetic
dalam intinya terbungkus dan tidak tersebar
Faktor iatrogenik : Perawatan oleh tenaga kesehatan terhadap kondisi tertentu yang
dapat mempengaruhi flora normal dibagian tubuh yang dirawat
Flora normal : Mikroorganisme yang menghuni bagian tubuh tertentu inangnya
Generatio- : Lihat Abiogenesis
spontanea
Kemotaksis : Kemotaksis adalah gerakan
dari sel tubuh, bakteri atau organisme sebagai respon akibat
terpapar zat kimiawi tertentu dalam lingkungannya.
Klasifikasi : Penyusunan organisme kedalam grup taksonomi (taksa) dengan
berdasarkan kemiripan atau hubungannya.
Koloni bakteri : Kumpulan masa satu jenis sel bakteri yang dapat dilihat mata
langsung. Koloni tumbuh pada medium perbenihan.
Komunitas klimaks : Komunitas bakteri yang sudah sangat kompleks dan terdiri dari
beragam bakteri didalam plak, sehingga terjadi keseimbangan antara
bakteri yang hidup dan bakteri yang mati
Mikrobiologi : Bidang ilmu yang mempelajari tentang organisme hidup yang
berukuran mikroskopis
Mikologi : Bidang ilmu yang mempelajari tentang jamur
Morfologi bakteri : Bentuk sel bakteri yang dapat berbentuk kokus (bulat), basilus
(batang), spiral (bentuk seperti per) dan vibrio (bentuk koma)
Omne vivum ex ovo, : Teori Louis Pasteur, artinya Semua kehidupan berasal dari telur, dan
omne ovum ex vivo telur berasal dari sesuatu yang hidup
Parasitologi : Bidang ilmu yang mempelajari tentang semua organisme parasit
Pasteurisasi : Teori dari Louis Pasteur(1857-1862) bahwa pemanasan dapat
membunuh ragi yang dapat merusak minuman anggur/bir
Periodontitis : Infeksi pada jaringan periodontal yang berkembang dengan cepat
destruktif dan menyebabkan kerusakan jaringan tersebut.
Potensi reduksi : Atau potensi redoks, tingkat oksigenisasi jaringan
oksidasi
Postulat Koch : 4 kriteria yang dirumuskan Robert Koch (1884) yang harus dipenuhi
untuk menentukan sebab akibat antara bakteri dan suatu penyakit.
Ia menerapkannya untuk menentukan etiologi antraks dan TBC,
namun semuanya telah diterapkan pada penyakit lain.
Prokariotik : Sel yang tidak mempunyai membran (selaput) inti sel sehingga
materi genetic yang terkandung didalam init tidak terbungkus
Taksonomi : Ilmu mengenai klasifikasi atau penataan sistematis organisme
kedalam kelompok atau kategori yang disebut taksa
Toksin : Racun yang dihasilkan oleh bakteri atau mikroorganisme lain
Toksik : Bersifat racun
67
Tyndalisasi : Teori dari John Tyndall (1876) bahwa spora bakteri yang sifatnya
tahan panas dpat dibunuh dengan cara pemanasan berulang yang
diselingi dengan periode didiamkan.
Vestibulum : Bagian mulut yang merupakan perbatasan antara mukosa bibir/pipi
dengan gusi
Virologi : Bidang ilmu yang mempelajari tentang virus
68
Daftar Pustaka
Bagg J, Mac Farlane TW, Poxton I, Miller CH, Smith AJ. 2002. Essentials of Microbiology for
Dental Students. New York: Oxford Universitu Press.
Murray PR, Rosenthal KS, Kobayashi GS, Pfaller MA. Medical Microbiology.3rd ed.1998,
Mosby,Inc St.Louis.
Samaranayake LP. 2002. Essential Microbiology for Dentistry. 2nd Ed. Churchill Livingstone,
London.
69
BAB II
VIROLOGI, MIKOLOGI DAN IMUNOLOGI
Drg. Megananda Hiranya Putri, M.Kes
PENDAHULUAN
Virus adalah makhluk hidup yang sangat kecil, tetapi berperan penting karena dapat
menyebabkan penyakit pada manusia. Tenaga kesehatan dalam lingkup kedokteran dan
kesehatan gigi relevan untuk mempelajari virus ini karena virus dapat menjadi penyebab
penyakit yang langsung (misalnya Herpes simpleks virus) atau tidak langsung (misalnya
manifestasi oral penyakit HIV) di rongga mulut maupun di bagian tubuh lain. Selain hal
tersebut, selama perawatan gigi, kemungkinan dapat terjadi infeksi silang dari pasien pada
tim kesehatan gigi, dan penyakit yang dapat ditularkan antara lain penyakit yang disebabkan
oleh virus. Bidang ilmu yang mempelajari segala sesuatu mengenai virus disebut Virologi
Selain oleh bakteri dan virus, penyakit-penyakit di rongga mulut maupun dibagian
tubuh lainnya dapat juga disebabkan oleh jamur. Di lingkungan alam, jamur tumbuh dimana-
mana. Jamur dapat berperan sebagai organisme pengurai dan juga mempunyai peran
komersial dalam industri farmasi, pembuatan bir dan banyak industri lainnya. Ada sekitar
500.000 spesies jamur, tetapi hanya sekitar 200 spesies yang bersifat patogen pada manusia.
Cabang mikrobiologi yang khusus mempelajari tentang jamur disebut Mikologi.
Jika tubuh kita diserang oleh mikroorganisme, baik oleh bakteri, virus maupun jamur
tidak lantas kita akan menjadi sakit. Hal ini karena dalam tubuh seseorang terdapat benteng
yang berlapis-lapis, yang akan melindungi dan memproteksi tubuh manusia. Seperti
keberadaan benteng dan tentara didalam suatu negara, tubuh kitapun memiliki alat
pertahanan dan kelengkapan-kelengkapan, sehingga ada upaya mempertahankan diri
terhadap serangan mikroorganisme tersebut. Kulit yang utuh, sistem pembentukan lendir di
sepanjang saluran pernafasan, kondisi keasaman lambung merupakan benteng-benteng
pertahanan didalam tubuh, dan keberadaan sel darah putih dalam tubuh manusia adalah
alat-alat kelengkapan mirip tentara dalam suatu negara yang akan membunuh dan mengusir
mikroorganisme patogen yang menyerang manusia. Kesemuanya akan kita pelajari dalam
topik imunologi, ilmu yang mempelajari tentang daya pertahanan tubuh manusia.
Setelah pada Bab I kita mempelajari tentang kehidupan bakteri, termasuk bakteri yang
ada di rongga mulut kita, maka pada Bab II ini kita akan mempelajari mengenai virus dan
jamur secara umum maupun yang berhubungan dengan bidang kesehatan gigi, dan akan
dibahas pula mengenai sistem pertahanan tubuh manusia.
Pelajarilah dengan sungguh-sungguh Bab II ini. Setelah mempelajarinya mahasiswa
akan mampu :
1) Menjelaskan mengenai karakteristik, struktur, klasifikasi, replikasi, pengaruh virus pada
sel tubuh dan patogenitas virus yang berkaitan dengan bidang kedokteran gigi
70
2) Menjelaskan mengenai struktur dan pertumbuhan jamur dan penyakit akibat jamur
yang berkaitan dengan bidang kedokteran gigi
3) Menjelaskan mengenai baris pertahanan tubuh manusia, sel-sel pertahanan dalam
sistem imunitas dan komunikasi antar sel dalam sistem pertahanan tubuh manusia.
MK atau materi prasyarat (jika ada)Untuk membantu Anda memahami topik-topik

pada Bab II ini, sebaiknya Anda sudah memahami dahulu mengenai Anatomi Histologi dan
Fisiologi tubuh manusia sebagai mata kuliah prasyarat. Kegunaan bab bagi mahasiswa.
Dengan mempelajari topic mengenai Virus, Jamur dan Imunologi maka Anda sebagai calon
tenaga kesehatan gigi akan semakin menyadari keberadaan virus dan jamur di lingkungan
sekitar kita, dan bagaimana mikroba tersebut dapat masuk dan mempengaruhi kesehatan
kita. Sementara ada mekanisme pertahanan tubuh yang dapat memblokir aktivitas mikroba
tersebut, namun disisi lain bagaimana mikroba tersebut berhasil melawan mekanisme
pertahanan tubuh sehingga seseorang dapat menjadi sakit.
Urutan sub bab
Apakah Anda sudah siap untuk mempelajari dan menelaah hal tersebut ?
71
Topik 1
Virologi Dasar
Apa kabar Bapak/ibu/saudara? Selamat bertemu pada Topik Virologi Dasar yang
merupakan topik pertama dari Bab II Modul Mikrobiologi. Pada topic ini Anda akan kami ajak
untuk mengenal Virus, sebagai salah satu mikroorganisme dan kaitannya dengan bidang
kesehatan gigi. Dengan mempelajari topic ini dengan sungguh-sungguh, maka Anda akan
mengetahui perbedaan virus dengan bakteri yang telah kita pelajari di Bab I. Sudah siapkah
anda untuk hal ini ?
Virus pertama kali digambarkan sebagai “agensia yang dapat melewati filter”.
Ukurannya yang amat kecil memungkinkan virus melewati filter, yang didesain untuk
menyaring bakteri. Tidak seperti bakteri, fungi dan parasite, virus bersifat parasite obligat
intraseluler. Dengan istilah tersebut diartikan virus hanya dapat hidup didalam sel hidup.
Virus sangat bergantung pada alat-alat kelengkapan sel inangnya untuk memperbanyak diri
(bereplikasi). Jadi cara virus berkembang biak adalah dengan cara merakit komponen-
komponen tubuhnya, bukan dengan cara membelah diri seperti bakteri. Karena bersifat
parasit, virus mampu menimbulkan berbagai ragam penyakit. Penyakit oleh virus bisa
menular dan menimbulkan kematian, seperti rabies, demam berdarah, cacar, hepatitis dan
influenza.
A. STRUKTUR VIRUS
Ukuran virus dinyatakan dengan nanometer (nm), dimana 1 nanometer adalah satu
perseribu micron. Virus yang penting secara klinis berukuran antara 18 nm (Parvovirus)
hingga 300 nm (Poxvirus). Ukuran Poxvirus tersebut kira-kira adalah ¼ ukuran
Staphylococcus.
Virion (partikel virus) terdiri dari genom asam nukleat yaitu DNA atau RNA yang
dibungkus oleh lapisan protein (kapsid) atau dibungkus oleh amplop virus (envelope). Virion
juga mengandung enzim esensial tertentu atau enzim tambahan atau protein lainnya.
Kesatuan antara kapsid dengan genomnya membentuk nukleokapsid yang dapat sama
dengan virion atau dikelilingi oleh amplop virus. Struktur dan anatomi virus dapat terlihat
pada gambar 2.1 dibawah ini.
72
Gambar 2.1 Struktur virus dan perbedaan antara virus yang telanjang (naked virus)
dan virus yang beramplop (enveloped virus).
Sumber: https://www.quora.com, diunduh tanggal 8 September 2017
Jadi selubung luar dari virion dapat berupa kapsid atau envelope (amplop). Struktur
tersebut melindungi dan sebagai sarana yang membawa virus bertransmisi dari satu sel
inang ke sel inang lainnya. Struktur permukaan kapsid maupun amplop akan memperantarai
perlekatan dengan sel target. Jika kapsid atau amplop virus rusak akan membuat virus
menjadi inaktif. Antibodi yang terbentuk untuk melawan struktur permukaan virus akan
mencegah infeksi oleh virus tersebut.
Kapsid adalah struktur yang kaku untuk melindungi virion dari lingkungan yang
mengancam. Virus berkapsid biasanya tahan terhadap pengeringan, asam dan deterjen,
termasuk asam dan empedu pada saluran pencernaan. Bentuk kapsid dapat berupa bentuk
batang atau heliks, ikosahedral atau lebih kompleks. Kapsid dibentuk oleh sejumlah
kapsomer yang terikat satu sama lain dengan ikatan non-kovalen. Bentuk kapsid dapat
terlihat pada gambar 2.3 dibawah ini.
Amplop virus adalah selaput yang komposisinya terdiri dari lipid, protein dan
glikoprotein. Struktur membrane hanya bisa bertahan pada kondisi lingkungan yang cair.
Amplop virus mudah sekali rusak oleh pengeringan, suasana asam, deterjen, dan pelarut
seperti eter, sehingga membuat virus menjadi inaktif. Akibatnya virus-virus beramplop
biasanya ada pada lingkungan yang cair dan biasanya ditularkan dalam bentuk cair, droplet
pernafasan, darah dan jaringan. Sebagian besar, virus beramplop tidak bisa bertahan hidup
pada kondisi mengancam misalnya di saluran pencernaan.
73
Gambar 2.2 Kapsid dengan bentuk Heliks (Virus mosaic tembakau) dan ikosahedral
(Adenovirus) dan bentuk yang lebih kompleks (Bakteriofaga)
Sumber : http://slideplayer.com/slide/9291732/diunduh tanggal 9 September 2017
Genom dari virus dapat berupa DNA atau RNA, ttetapi api tidak keduanya. DNA dapat
berutas tunggal atau utass ganda, linear (lurus) atau sirkuler (melingkar). RNA
RNA-nya dapat
positif sense (+) seperti NA messenger (mRNA) atau negatif sense ((-)) (analog dengan negatif
fotografi), bisa berutas ganda (+/
(+/-)) atau ambisense (terdiri dari region + atau – RNA yang
ujung-ujungnya
ungnya saling menempel).
B. UKURAN VIRUS
Untuk mengetahui ukuran tubuh virus, ada beberapa cara yang dapat dilakukan,
antara lain sebagai berikut :
1. Observasi langsung menggunakan mikroskop
Mikroskop electron berbeda dengan mikroskop cahaya yang biasa d digunakan di
laboratorium. Mikroskop electron menggunakan berkas elektron dan lensa
elektromagnetik, sedangkan mikroskop cahaya menggunakan gelombang cahaya dan
lensa kaca. Pengamatan virus dengan mikroskop electron pertama kali dilakukan
sekitar tahun 1930.. Untuk pengamatan virus digunakan ekstrak atau sayatan ultratipis
dan jaringan makhluk hidup yang terinfeksi.
2. Filtrasi melalui selaput Kolodion yang mempunyai porositas bertingkat

Sediaan virus dilewatkan melalui serangkaian selaput yang ukurannya berbeda-beda.
Ukuran virus dapat diperkirakan berdasarkan selaput mana yang bisa dilewati dan
selaput mana yang menahan partikel virus.
3. Sedimentasi dalam Ultrasentrifugasi

Partikel virus disuspensikan kedalam suatu cairan, kemudian partikel akan mengenda
mengendap
dengan kecepatan yang sebanding ukuran partikel. Hubungan antara partikel dan
bentuk partikel dengan laju pengendapan memungkinkan penentuan ukuran partikel.
74
4. Pengukuran Perbandingan
Metode ini menggunakan teknik acuan, yaitu membandingkan ukuran suatu virus
dengan ukuran virus tertentu yang dijadikan sebagai acuan. Contoh virus acuan antara
lain bakteriofaga yang memiliki ukuran 10 – 100 nm.
Virus memiliki ukuran tubuh yang sangat kecil, antara 20 nm – 300 nm (1 nm –

1/1.000.000 mm). Virus yang berukuran kecil memiliki diameter tubuh kurang lebih 20
nm (lebih kecil dari ribosoma). Misalnya Poliovirus yang menyerang susunan saraf
pusat. Apthovirus yang menyebabkan penyakit kaki dan mulut p pada sapi dan
Coksackie B Virus yang menyerang jantung, hati, pancreas dan selaput pleura manusia.
Sementara itu, virus yang berukuran besar memiliki ukuran tubuh antara 150
150-300 nm
atau lebih, misalnya Parainfluenza virus yang menyerang saluran pernafasan.
Paramyxovirus yang menyebabkan penyakit gondong. Morbilivirus yang menyebabkan
penyakit campak dan TMV yang menyebabkan penyakit mosaic pada tembakau.
Untuk melihat perbandingan ukuran virus dengan sel inang dan ukuran bakteri, dapat
dilihat pada gambar 2.3 berikut.
Gambar 2.3 Perbandingan ukuran virus dengan sel inang dan bakteri
SUMBER : http://www.slideserve.com/kevork
http://www.slideserve.com/kevork,, diunduh tanggla 8 September 2017
75
C. KLASIFIKASI VIRUS
Virus amat beragam, dari mulai virus yang memiliki struktur yang sederhana dan kecil
(misalnya Parvovirus dan Picornavirus) hingga virus yang relative berukuran besar dan
kompleks seperti Poxvirus dan Herpesvirus). Penamaannya dapat menggambarkan ciri
karakteristiknya, penyakit yang ditimbulkannya, atau bahkan jaringan atau letak geografis
dimana virus tersebut pertama kali ditemukan.
Picornavirus, misalnya pico artinya “kecil” ; rna “asam ribonukleat” karena virus ini
berukuran kecil dan asam nukleatnya RNA. Togavirus (bahasa Yunani ‘Toga” artinya mantel,
yang merujuk pada amplop virus yang membungkus virionnya). Nama Papovavirus
menggambarkan kelompok family virus tersebut (papilloma, polyoma dan vakuolating virus).
Nama “Retrovirus (“retro” artinya “terbalik) menggambarkan sintesa langsung DNA dari
template RNA nya, sedangkan Poxvirus dinamakan dari penyakit yang ditimbulkannya yaitu
Smallpox atau cacar air. Adenovirus (dari adenoid / tonsil) dan Reovirus (saluran
pernafasan=respiratory tract, enteric dan orphan) adalah nama organ tubuh dimana virus
pertama kali ditemukan. Coxsackievirus ditemukan pertama kali di Coxsackie New York. Juga
nama Togavirus, Bunyavirus adalah tempat-tempat di Afrika dimana virus tersebut pertama
kali diisolasi. Virus juga dapat diklasifikasikan berdasarkan penyakit (misalnya Hepatitis),
jaringan target, yang menjadi tempat penularannya (misalnya enteric, respiratory) atau
vector pembawanya (misalnya Arbovirus; dari kata Arthropod – borne virus = virus yang
ditularkan oleh vector arthropoda).
Klasifikasi yang paling konsisten dan terkini adalah klasifikasi yang didasarkan pada
karakteristik fisik dan biokimiawi seperti ukuran, morfologi (misalnya ada atau tidak adanya
amplop virus), macam genom, dan replikasinya. Virus DNA yang berhubungan dengan
penyakit manusia ada 6 famili, dan Virus RNA dapat dibagi menjadi sedikitnya 13 famili.
Salah satu penggolongan virus berdasarkan Asam Nukleatnya dapat terlihat pada gambar 2.3
dibawah ini.
76
Gambar 2.4 Penggolongan virus penyebab penyakit pada manusia

berdasarkan Asam Nukleatnya
Sumber : http://ezzahhidayati.blogspot.co.id/2011/04/sistem-taksonomi-virus-
universal.html, diunduh 8 September 2017
D. REPRODUKSI VIRUS
Virus hanya dapat berkembang biak pada sel atau jaringan hidup. Oleh karena itu, virus
menginfeksi sel bakteri, sel hewan, atau sel tumbuhan untuk bereproduksi. Cara reproduksi
virus disebut replikasi. Tahapan replikasi virus (Gambar 2.5) terdiri atas:
a. Mengenali sel target
b. Perlekatan pada sel target
c. Penetrasi ( masuk kedalam sel target)
77
d. Pelepasan selubung
e. Replikasi dan sintesa komponen virus yang terdiri dari :
1. Sintesa mRNA awal dan protein nonstructural : gen untuk sintesa enzim dan
protein pengikat asam nukleat
2. Replikasi genom
3. mRNA akhir dan sintesa protein struktural
4. Modifikasi protein pasca translasi
f. Perakitan virus
g. Bertunas dan pelapisan dengan selubung amplop
h. Pelepasan virus
Model reproduksi virus yang beramplop maupun yang tidak beramplop dapat terlihat
pada gambar 2.5 dan 2.6 dibawah ini :
Gambar 2.5 Model reproduksi virus yang tidak beramplop (kiri) dan yang beramplop (kanan)
Sumber : http://www.scienceprofonline.com/vmc/virus-life-cycle-main.html, diunduh
tanggal 8 September 2017
Perlekatan dan penetrasi merupakan interaksi spesifik virus dan inang. Dalam hal ini
virus akan mengenali dan akan melekat pada sel targetnya. Terdapat reseptor khusus yang
memperantarai pengenalan virus oleh sel inang. Ligan pada virus akan dikenali oleh reseptor
ada inang dan menempel pada reseptor sel inang dapat berupa pili, flagella, komponen
membran atau protein pengikat pada bakteriofag. Pada virus influensa, ligan berupa
glikoprotein dan pada eritrosit dan virus polio, ligan berupa lipoprotein. Virus yang
beramplop biasanya masuk kedalam sel inang melalui fusi (penyatuan) antara lipid di
membrane sitoplasma sel dengan amplop virus, sementara virus yang tidak beramplop
masuk melalui proses yang disebut viropexis, yang mirip dengan fagositosis.
78
Perasukan dan pelepasan selubung merupakan tahap lanjut setelah virus menempel
pada permukaan sel inang. Pada bakteriofag, perasukan berlangsung melalui ekor fag yang
berkontraksi sehingga terjadi cengkraman pada bagian ekor membran sel bakteri. Selaput
ekor berkontraksi dan DNA virus masuk melalui pori-pori pada ujung ekor. Setelah masuk sel
target, kapsid virus akan terurai dan mengeluarkan asam nukleatnya kedalam sel inang.
Replikasi dan Sintesis komponen virus

Proses selanjutnya yaitu produksi messenger RNA (=mRNA) terjadi dalam beberapa
cara tergantung pada sifat genom virusnya.
 Pada virus DNA , mRNA dapat dibuat dengan menggunakan RNA polymerase sel inang
untuk mentransrip langsung DNA virus.
 Pada virus RNA, tidak dapat dilakukan transkrip langsung, karena enzim polymerase sel
inang tidak dapat bekerja pada molekul RNA. Virus RNA memproduksi mRNA melalui
beberapa cara. Pada virus RNA yang berutas ganda, mula-mula satu utas akan ditranskrip
oleh enzim polymerase virus menjadi mRNA. Pada virus RNA yang berutas tunggal, ada 3
jalur membentuk mRNA, yaitu :
1) Kalau utas tunggalnya berkonfigurasi (+) sense, utas tersebut dapat berfungsi
langsung sebagai mRNA.
2) Kalau konfigurasinya (-) sense, mula-mula harus ditranskrip, dengan memakai
enzim polymerase virus, kedalam (+) sense yang kemudian dapat bertindak sebagai
mRNA.
Setelah memproduksi mRNA virus, sel inang akan menghasilkan protein virus.
Beberapa diantara protein tersebut adalah enzim (terutama polymerase asam nukleat) yang
memungkinkan terjadinya replikasi asam nukleat virus lebih banyak lagi. Protein lain adalah
protein structural yang nantinya akan membentuk kapsid virus. Elemen yang terpisah
tersebut selanjutnya akan dirakit untuk membentuk partikel-partikel virus.
Perakitan virus pada virus DNA berlangsung di dalam nukleus, sedangkan pada virus
RNA berlangsung dalam sitoplasma sel inang.
Pelepasan virus
Partikel-partikel virus akan dilepaskan dari sel inang dengan cara pelepasan lytic, dan
sel inang akan mati, atau dalam proses yang disebut pertunasan (budding)dimana
nukleokapsid bergabung dengan membrane sel inang, yang nantinya akan menjadi amplop
virus.
E. EFEK VIRUS PADA SEL INANG
Sel inang yang telah dimasuki dan digunakan sebagai pabrik penghasil virus akan
mengalami beberapa macam kondisi. Efek virus pada sel inang sebagai sel targetnya dapat
berupa :
79
a. Mengalami lisis dan kematian (infeksi sitosidal)

b. Mengalami infeksi yang persisten (menetap)
c. Mengalami infeksi laten
d. Mengalami infeksi yang mengubah sifat sel (transforming infection)
e. Mengalami infeksi yang abortif
Efek yang paling sering terjadi adalah kematian sel atau sel lisis. Pada infeksi tersebut,
terjadi kematian sel inang, sel pecah atau lisis. Bersamaan dengan peristiwa tersebut,
keluarlah ribuan virus baru yang sudah terakit dengan utuh (progeni). Pada infeksi yang
menetap (persisten), sel inang masih bisa memperbanyak diri dan terus-menerus
membentuk virus baru hingga beberapa generasi. Contoh hal ini terjadi pada infeksi
Paramyxovirus, seperti virus penyakit mumps (gondongan), juga pada virus penyebab tumor,
dimana sel-sel neoplasma terus menghasilkan virus-virus baru.
Kemungkinan ketiga adalah infeksi laten dimana asam nukleat virus terus ada dan
terintegrasi didalam sel inang, tapi virus-virus baru yang matang tidak terdeteksi. Virus juga
dapat mengubah sel-sel target yang rentan. Sel-sel yang ditransformasi oleh virus ini akan
memperbanyak diri (berproliferasi), yang hasilnya adalah pembentukan tumor. Virus-virus
penyebab tumor biasanya mengintegrasikan genomnya pada DNA sel inang.
Perlu pula diperhatikan bahwa beberapa interaksi antara virus dengan sel inangnya tidak
sampai pada penyelesaian akhir. Hal ini dapat terjadi karena misalnya enzim yang diperlukan
tidak cukup tersedia didalam sel inang. Infeksi sel demikian disebut infeksi yang abortif.
F. JALUR INFEKSI VIRUS
Jalur infeksi virus mirip dengan jalur infeksi mikroorganisme lainnya, dan disimpulkan
pada Tabel 2.1 dibawah ini.
Kulit yang utuh adalah benteng pertahanan yang baik terhadap infeksi virus, kerusakan
pada kulit atau adanya perforasi kulit akan memungkinkan kulit dimasuki virus. Misalnya
virus penyebab penyakit bloodborn (HBV, HCV, HDV dan HIV-AIDS) dapat menginfeksi tenaga
kesehatan gigi yang tadinya sehat melalui tusukan jarum suntuk yang terkontaminasi virus.
Saluran pernafasan adalah jalur utama bagi infeksi virus. Hal ini meliputi infeksi-infeksi
di saluran pernafasan, seperti influenza, maupun infeksi yang bersifat umum seperti cacar
air. Infeksi terjadi karena virus penyebabnya terhirup melalui droplet terkontaminasi virus.
Beberapa virus menginfeksi melalui saluran cerna, dan beberapa menyebar melalui
orofaring, misalnya melalui saliva. Jalur ini terutama digunakan oleh kelompok virus herpes,
dan bisa menjadi ancaman bagi tenaga kesehatan gigi yang sehari-hari dalam pekerjaannya
berhubungan dengan saliva dan darah.
Penularan virus juga dapat melalui jalur saluran genital, baik melalui hubungan seksual
atau penyebaran lewat transplasental. Penyebaran Cytomegalovirus melalui transplasental
berisiko pada infeksi janin yang menyebabkan kelahiran bayi dengan abnormalitas atau cacat
kongenital.
80
Tabel 2.1 Jalur Infeksi Virus
Jalur Contoh Virus

Kulit
Trauma mekanis Virus Cowpox
Injeksi Hepatitis Virus, HIV
Gigitan Virus Rabies
Saluran Pernafasan
Droplet infeksi (percikan)
Infeksi pernafasan lokal Virus Influenza, Flu
Infeksi Umum Virus Chikenpox (cacar air)
Saluran Pencernaan / Orofaring
Fekal – oral Virus Hepatitis A
Saliva Virus Mumps (gondongan)
Virus Herpes Simpleks
Virus Epstein-Barr
Saluran Genital
Hubungan seksual Virus HIV, Hepatitis B
Transplasental Virus Rubella
Cytomegalovirus
Sumber : Bagg, 2002, hal 52
G. VIRUS YANG BERKAITAN DENGAN BIDANG KEDOKTERAN GIGI :

HEPATITIS B
1. Gambaran Virus Hepatitis B

Hepatitis B termasuk dalam family Hepadnavirus. Ada 3 partikel yang berbeda yang
dapat terlihat dari pemeriksaan darah tepi pasien berkaitan dengan infeksi ini. Partikel yang
terbesar dinamai partikel Dane, yang merupakan virion yang lengkap. Partikel virus yang
utuh ini memiliki struktur lapisan ganda, dengan struktur luar adalah selubung Hepatitis B
Surface Antigen (HBsAg) yang melingkupi Hepatitis B Core Antigen (HBcAg), DNA dan
komponen lainnya termasuk enzim DNA polymerase dan protein kinase. Bentuk DNA
sirkuler, sebagian besarnya berutas ganda, hanya sebagian kecilnya berutas tunggal.
Melengkapi partikel dane, virus juga memiliki partikel berbentuk bundar (sferikal) dengan
diameter 22nm dan partikel berbentuk tabung dengan diameter yang sama. Partikel yang
lebih kecil tersebut mengandung HBsAg dalam jumlah banyak dan tidak infektif.
81
Gambar 2.6 Virus Hepatitis B dengan organ hati yang menjadi sel targetnya
Sumber : http://www.authorstream.com, diunduh 8 September 2017
Gambar 2.7 .A. Diagramatis Virus Gambar 2.7.B. : Partikel Dane

Hepatitis B yang merupakan virus yang meliputi HBsAg, HBcAg
bergenom DNA sirkuler yang sebagian dan DNA
besar berutasganda dengan sebagian
kecil berutas tunggal
tunggal.
Sumber : https://www.slideshare.net
https://www.slideshare.net,, diunduh tanggal 8 September 2017
82
 MIKROBIOLOGI KEPERAWATAN GIGI 
2) Epidemiologi dan Penularan (Transmisi)

Virus Hepatitis B berada didalam darah, sekresi serviks rahim dan semen. Juga terdapat
dalam jumlah kecil dicairan tubuh yang lain termasuk saliva. Penyebarannya dapat lewat
jalur parenteral (suntikan) tapi penularannya lewat hubungan seksual. Tidak ditularkan lewat
jalur pernafasan. Dikalangan populasi, banyak indidvidu bertindak sebagai karier (pembawa
virus). Jika pasien positif terkena Hepatitis, maka didalam ml darahnya mengandung 1010
partikel Dane, sehingga tertular dengan 0,0001 ml darah saja sudah mampu memindahkan
virus tersebut. Karena penularan dapat melalui jarum yang membawa sedikit saja darah yang
mengandung partikel Dane tadi, maka infeksi silang antara pasien dan petugas kesehatan
menjadi sangat berisiko, kecuali jika tindakan preventif sudah dilakukan dengan yang tepat.
3) Dampak Infeksi
Individu yang terkena infeksi Hepatitis B dapat mengalami beberapa tingkatan penyakit
sebagai berikut :
 Akut : berlangsung dalam waktu singkat dan / atau parah.
 Kronik : berlangsung lambat , dapat menjadi parah tetapi dapat juga tidak parah
 Fulminant : Berkembang dengan cepat, dengan tingkat kematian tinggi
 Sirosis : pengerasan hati, juga dapat disebabkan karena proses infeksi atau toksin/ racun,
misalnya Hepatitis karena alkohol.
 Jaundice : timbulnya warna kekuningan pada kulit, mata dan lain-lain karena
meningkatnya kadar bilirubin darah akibat kerusakan pada hati.
 Karsinoma hepatoseluler ： berhubungan erat dengan virus hepatitis B, dan dibeberapa
negara dihubungkan dengan virus hepatitis C.
Periode inkubasi bervariasi antara 2 sampai 3 bulan. Kira-kira 65% individu yang
terkena mengalami infeksi yang subklinis (gejala samar), sementara 30% nya mengalami
Hepatitis B akut. 9% pasien dewasa bisa menjadi karier kronik virus, dan sebagian
daripadanya bisa berkembang menjadi sirosis hati, gagal hepar dan karsinoma hepatoseluler.
Pasien-pasien demikian juga berisiko menginfeksi petugas kesehatan dan pasien lainnya,
terutama jika hasil laboratorium darahnya menunjukkan HBsAg (+). Kemungkinan
perkembangan infeksi Hepatitis B secara klinis dapat terlihat pada gambar 2.8 dibawah ini :
106
 Mikrobiologi Keperawatan Gigi 
Gambar 2.8 Diagram yang menggambarkan kemungkinan kondisi klinis individu yang
terinfeksi virus Hepatitis B.
Sumber : http://medchrome.com/basic-science/microbiology/hepatitis-virus-hbv, diunduh
tanggal 8 September 2017
Infeksi yang dialami bayi baru lahir merupakan masalah yang serius dibeberapa bagian
negara, seperti Asia Timur, Asia Tenggara, pulau-pulau di Pasifik, dan Negara-negara Afrika.
Bayi yang dilahirkan oleh ibu yang mengidap HBsAg (+), 95 % berpeluang terkena infeksi, dan
hampir semua bayi tersebut menjadi karier HBsAg, dan dimasa dewasanya mengalami sirosis
maupun kanker hati. Distribusi penyebaran virus Hepatitis B dinegara-negara di dunia dapat
terlihat pada gambar 2.9 dibawah ini.
Gambar 2.9 Distribusi Infeksi Hepatitis B Kronik

Sumber : http://virology-online.com/viruses/HepatitisB.htm, diunduh 8 September 2017
107
4) Pencegahan Infeksi
Mengontrol infeksi HBV dapat dilakukan dengan beberapa cara. Modifikasi perilaku
dapat mengurangi risiko terinfeksi, dan ditataran klinik, hal ini meliputi kontrol infeksi yang
tepat terhadap infeksi silang.
Imunisasi pasif disediakan dalam bentuk Imunoglobulin Hepatitis B, yang digunakan
pada seseorang yang terpapar secara akut pada individu yang belum terproteksi.
Imunoglobulin ini efektif diberikan dalam waktu maksimal 48 jam sesudah paparan.
Imunisasi aktif dengan vaksin Hepatitis B juga sudah tersedia cukup banyak. Vaksin
yang ada sekarang ini dibuat dengan rekayasa genetika. Dosisnya adalah 20 µg HBsAg secara
intra muscular pada 0, 1, dan 6 bulan. Booster direkomendasikan pada selang waktu 5 tahun.
Proteksi baik dilakukan pada individu yang respon terhadap vaksin, tetapi ada sekitar 5%
individu yang tidak respond dan tidak membentuk antibodi proteksi pada tubuhnya.
Sehingga setelah prosedur vaksinasi, perlu diperiksa kadar antibodi yang terbentuk. Jika
individu yang tidak respon tersebut adalah anggota tim kesehatan, maka perlu diperiksa
serologisnya untuk melihat apakah yang bersangkutan sudah menjadi karier HBV (jika hasil
HBsAg nya positif).
Sejumlah agensia antivirus telah diteliti untuk digunakan sebagai pengobatan infeksi
Hepatitis B kronik. Diantara bahan-bahan tersebut, yang terbukti paling efektif adalah
Interferon.
Latihan

esensinya saja !
1) Jelaskan perbedaan struktur virus yang beramplop dan tidak beramplop !
2) Sebutkan 4 cara untuk dapat mengukur virus !
3) Sebutkan 3 contoh virus yang memiliki genom DNA utas ganda !
4) Jelaskan bagaimana virus beramplop bereproduksi didalam sel inang
5) Sebutkan 5 macam kemungkinan yang terjadi pada sel inang setelah diinfeksi oleh
virus!
6) Sebutkan 4 pintu masuk virus kedalam tubuh manusia dan beri masing-masing contoh
virusnya !
7) Deskripsikan struktur virus Hepatitis B !
108

1) Struktur virus
2) Ukuran virus
3) Klasifikasi virus
4) Reproduksi virus
5) Efek virus pada sel inang
6) Jalur infeksi virus
7) Virus hepatitis B
Ringkasan
1 Virus adalah parasit obligat intraseluler yang hanya dapat hidup dan berreplikasi
didalam sel hidup.
2 Virus memiliki struktur tertentu, yang dapat berbentuk icosahedral atau heliks
3 Genom virus dilindungi oleh lapisan protein (kapsid) dan beberapa virus juga memiliki
amplop yang terbentuk dari lipid
4 Genom virus bisa DNA atau RNA, tetapi tidak pernah keduanya
5 Infeksi virus dapat didiagnosis dengan mikroskop electron, kultur pada sel hidup,
spemeriksaan serologis, deteksi langsung antigen atau deteksi asam nukleatnya
6 Virus dapat mencapai sel target inang melalui kulit, membran mukosa, dan melalui
saluran pernafasan, saluran pencernaan dan saluran genitalia.
7 Tahapan virus menginfeksi sel adalah mengenali sel target, adsorpsi, penetrasi,
pelepasan selubung virus, transkripsi genom untuk membentuk mRNA, translasi mRNA
untuk membentuk protein virus, replikasi genom, perakitan komponen-komponen
virus dan pelepasan dari sel inangnya.
8 Efek infeksi pada sel bisa berupa infeksi sitosidal (sel lisis), infeksi persisten, infeksi
laten, transformasi sel, atau infeksi abortif.
9 Virus Hepatitis B adalah virus DNA berutas ganda dan sebagian berutas tunggal
10 HBV ditularkan melalui cairan tubuh, secara kontak dengan darah, hubungan seksual
dan penularan pada bayi baru lahir.
11 Selama terinfeksi Hepatitis B, darah mengandung virion utuh (partikel Dane) dan
HBsAg (antigen permukaan) yang berbentuk bundar dan seperti tabung (sferikal dan
tubular)
12 Individu terinfeksi virus Hepatitis B bisa mengalami infeksi subklinis (65%), hepatitis B
akut (30%), dan fatal fulminant (kematian) sebesar 1%. Antara 5 – 10% pasien menjadi
karier kronik.
13 Karier kronik Hepatitis B bersifat infeksius dan beresiko tinggi terkena sirosis dan
karsinoma hepar.
14 Diagnosis infeksi HBV adalah secara serologis, dengan skrening awal HBsAg.
15 Pencegahan infeksi HBV didasarkan pada membatasi/ memblokir penularan orang
dengan orang dan dengan imunisasi.
109
Tes 1
1) Selubung protein yang membungkus genom virus dinamakan :

A. Envelope
B. Asam nukleat
C. Kapsid
D. Heliks
E. Retikuloendotelial
2) Virus disebut organisme parasit obligat intra sel karena sifat-sifatnya sebagai berikut,
kecuali :
A. Virus tidak dapat tumbuh pada benda mati
B. Untuk pertumbuhannya perlu sel hidup
C. Strukturnya sangat sederhana
D. Virus berkembang biak dengan cara membelah diri
E. Virus dapat berkembang biak hanya dalam sel inang
3) Pintu masuk virus Varicella penyebab cacar air adalah :

A. Saluran pencernaan
B. Saluran pernafasan
C. Kulit
D. Plasenta
E. Mukosa genitalia
4) Jika seseorang terinfeksi virus Hepatitis B dan menyebabkan pengerasan pada

heparnya, maka tahap penyakit ini disebut :
A. Hepatitis akut
B. Hepatitis kronis
C. Hepatitis fulminant
D. Sirosis hepatis
E. Jaundice
5) Penyakit dibawah ini yang mikroorganisme penyebabnya virus adalah :

A. Rabies
B. Kandidiasis
C. Pertusis
D. TBC
E. Typhus
Cocokanlah jawaban Anda dengan Kunci Jawaban Tes 1 yang terdapat di bagian akhir
Bab 2 ini.
110
Topik 2
Fungi yang Berhubungan dengan Bidang Kesehatan Gigi
Ilmu yang mempelajari tentang fungi disebut Mikologi. Fungi adalah mikroorgansime
eukaryotic, tidak seperti bakteri yang termasuk prokaryotic. Sejauh ini, fungi yang
berhubungan dengan bidang kedokteran gigi adalah ragi, yang termasuk genus Candida.
Candida adalah mikroorganisme komensal di rongga mulut, dan merupakan setengah dari
jumlah populasi mikrorganisme di mulut. Bab ini akan membahas karakteristik umum dari
sejumlah fungi yang penting secara klinis, tetapi penekanannya pada infeksi fungi di rongga
mulut, yaitu mikosis rongga mulut, terutama yang disebabkan oleh Candida sp.
A. GAMBARAN UMUM FUNGI
1. Morfologi
Fungi mempunyai 2 bentuk dasar, yaitu dapat berada pada bentuk ragi (yeast) dan
bentuk mould (kapang). Beberapa fungi dapat berada dalam dua kondisi tersebut dalam
waktu yang berbeda (dimorfik), sementara fungi yang lain hanya satu bentuk. Perubahan
morfologi tersebut bergantung pada kondisi lingkungan dan suplai nutrisinya. Secara umum
fungi yang dimorfik ada pada bentuk mould (kapang) pada lingkungan alamiahnya (dan di
lingkungan laboratorium) dan berada dalam keadaan ragi (yeast) jika ada di jaringan.
Ragi bersifat uniseluler, dengan bentuk tubuh yang bulat (sferikal) atau ovoid; semua
ragi mempunyai bentuk yang sama jika dilihat di bawah mikroskop cahaya. Moulds (kapang)
bersifat multiseluler dan mempunyai struktur yang bervariasi yang menunjukkan fungsi
spesifiknya. Ukuran dan sifat struktur ini bervariasi pada genus yang berbeda-beda. Hyphae
(bentuk tunggalnya hifa atau hifum) berbentuk seperti tabung yang meliputi sitoplasma fungi
beserta organela lainnya). Hifa adalah unit struktural kapang. Hifa terbagi menjadi unit-unit
sel dengan dinding pemisah yang disebut septa. Septa mempunyai pori-pori yang
memungkinkan pergerakan sitoplasma, bahkan organela antar sel. Istilah myselium
dimaksudkan dengan masa sejumlah hifa yang membentuk koloni mould.
2. Reproduksi
Fungsi berkembang biak secara seksual dan aseksual. Diyakini bahwa bentuk seksual fungi
tidak ditemukan di bahan klinik.
3. Klasifikasi
Taksonomi fungi cukup kompleks. Sebagian besar fungi yang mempunyai arti penting
bagi klinik diklasifikasikan sebagai fungi imperfecti karena bentuk seksual mereka tidak
teridentifikasi.
111
Gambar 2.10 Gambaran yeast, mould dan hifa pada beberapa fungi
Sumber : http://yeastinfectioncause.net/candida-albicans, diunduh 8 September 2017
Untuk kepentingan medik, fungi diklasifikasikan menjadi :

 Ragi
 Fungi yang berfilamen
 Fungi dimorfik
Metode berikut digunakan untuk mengklasifikasikan fungi :

1) Yeast (ragi) diidentifikasi dengan reaksi biokimiawi berdasarkan pada fermentasi dan
asimilasi terhadap karbohidrat, penggunaan substrat enzim atau aktivitas metabolik
lainnya.
2) Mould diidentifikasi dengan melihat warna, tekstur dan koloni dan morfologi secara
mikroskopik. Struktur khusus untuk reproduksi aseksual mould digunakan untuk
membedakan macam-macam spesies mould
4) Kebutuhan untuk pertumbuhan biakkan

Fungi yang berperan penting dalam medis membutuhkan biakkan yang khusus untuk
pertumbuhannya, dibandingkan dengan bakteri. Sebagian besar tumbuh secara aerob. Agar
Dekstrose Sabouraud (SAB) dan variasinya, misalnya ditambah dengan bahan anti bakteri,
dan Agar Dekstrosa Kentang (PDA) biasa digunakan untuk kultur di laboratorium untuk fungi
patogen.
Perbedaan biakkan ini dengan biakkan untuk bakteri adalah biakkan fungi butuh
kandungan karbohidrat yang tinggi (SAB biasanya mengandung 3% dekstrosa atau sukrosa)
dan pH yang asam (kira-kira pH 4). Kedua kondisi diatas menghambat tumbuh sebagian
besar bakteri. Media SAB juga ditambahkan antibiotic untuk menekan pertumbuhan bakteri.
112
5) Patogenitas
Secara umum, fungi yang penting secara medis tidak memiliki faktor-faktor virulensi
seperti eksotoksin atau endotoksin pada bakteri (pengecualiannya adalah Aflatoksin yang
dihasilkan oleh spesies Aspergillus), sehingga jamur menimbulkan infeksi kronik progresif
yang lambat, tidak seperti bakteri maupun virus yang sering menimbulkan infeksi akut.
Tetapi, fungi dapat menimbulkan infeksi yang mengancam jiwa pada pasien-pasien yang
daya tahan tubuhnya turun (misalnya : para penderita AIDS).
Fungi patogen rongga mulut yaitu Candida memiliki sejumlah komponen virulen,
meliputi :
 Kemampuan untuk melekat pada jaringan inang dan protesa (misalnya gigi tiruan)
 Potensi untuk berubah ( misalkan dari koloni yang kasar menjadi koloni yang halus) dan
memodifikasi antigen permukaan
 Kemampuan untuk membentuk hifa yang membantu daya invasive (daya serang) pada
jaringan
 Kemampuan untuk membentuk enzim Fosfolipase ekstraseluler dan proteinase yang
dapat merusak benteng pertahanan fisik inangnya.
6) Mikosis pada Manusia

Infeksi pada manusia yang disebabkan oleh fungi dapat dibagi menjadi :
 Mikosis superfisial
 Mikosis subkutan
 Mikosis sistemik
Mikosis Superfisial
Mikosis superfisial mengenai permukaan-permukaan mukosa dan struktur tubuh yang
mengandung keratin (kulit, kuku dan rambut). Infeksi ini relative sering terjadi di Negara-
negara barat dan menjadi masalah estetik tetapi tidak mematikan.
Mikosis superfisial meliputi :
a. Infeksi oleh ragi pada mukosa yang dapat mengarah pada terjadinya thrush dan
manifestasi lainnya yang mirip
b. Infeksi Dermatofita pada kulit, rambut dan sebagainya, yang dapat menyebabkan
kurap atau penyakit yang mirip dengannya.
Mikosis Subkutan
Mikosis subkutan mengenai jaringan subkutan dan jarang menyebar. Infeksi ini terjadi
karena masuknya fungi dari lingkungan kedalam jaringan subkutan dan menimbulkan
penyakit yang kronik progresif, merusak jaringan dan pembentukan sinus. Misalnya
Sporotrichosis dan Mycetoma (kaki Madura) yang biasa terjadi di Negara-negara tropis
tetapi jarang di Negara Barat.
113
Mikosis Sistemik (Mikosis Dalam)

Mikosis ini paling serius, sering kali fatal karena melibatkan organ-organ
organ sistem internal
tubuh.. Organisme biasanya didapat melalui saluran pernafasan dan menyebar melalui
pembuluh darah. Pada negara maju, kejadian ini sering pada pasien pasien-pasien
pasien yang mengalami
daya tahan tubuh yang menurun dimana organisme adalah patogen oportunistik.
Pada negara maju, u, mikosis sistemik (misalnya histoplasmosis, blastomycosis dan
coccidioidomycosis) dapat mengenai individu sehat.
7) Ragi
Ragi adalah organisme uniseluler, berbentuk oval atau sferikal (bulat), diameter 22-5
µm,
m, dengan pengecatan Gram bersifat Gram positif. Sering terlihat bertunas sehingga
disebut sel anak. Sel anak tumbuh dan ukurannya menjadi besar sampai sel sel-sel tersebut
memisahkan diri dari sel induknya untuk meneruskan generasinya. Kebanyakan ragi
berkembang menjadi pseudohifa (rangkaian sel sel-sel tunas yang
ang memanjang yang disekat oleh
septa) tetapi
api hanya sedikit yang membentuk hifa sesungguhnya (true hypha). Dapat terlihat
pada gambar 2.2 dan 2.3 dibawah ini.
Ragi dari genus Candida, patogen paling penting di rongga mulut, juga membentuk
pseudohyphae. Ragii yang mendiami rongga mulut adalah setengah dari jumlah populasi
mulut dan juga merupakan mikroorganisme komensal penghuni usus. Infeksi yang
ditimbulkannya adalah kandidiasis superfisial atau sistemik (Candidosis).
Gambar 2.11 Ragi, pseudohypha dan true hyphae

Sumber : http://yeastinfectioncause.net
http://yeastinfectioncause.net,, diunduh tanggal 8 September 2017
114
Gambar 2.12 Candida albicans.

Sumber : http://yeastinfectioncause.net, diunduh tanggal 8 September 2017
Pewarnaan Gram dari apus permukaan gigi tiruan pasien yang mengalami stomatitis
denture memperlihatkan blastospora dan pembentukan hifa C. albicans
Infeksi superfisial dapat mengenai : mukosa (mucosal kandidiasis), kulit (cutaneous

kandidiasis), kulit maupun mukosa (mucocutaneus kandidiasis). Infeksi biasanya berasal dari
bakteri endogen (komensal di tubuh manusia). Beberapa spesies dari genus Candida
ditemukan di tubuh manusia, termasuk : C. albicans, C.glabrata, C.krusei dan C. tropicalis tapi
C.albicans adalah penyebab dari > 90% infeksi. Candida dubliniensis adalah spesies Candida
yang relative baru ditemukan dan mirip dengan C. albicans. Pertama kali diisolasi dari mulut
seorang penderita HIV. C.dubliniensis ini menjadi flora rongga mulut yang sering ditemukan
pada orang sehat maupun orang sakit
8) Candida albicans
Habitat dan Transmisi
Candida albicans adalah flora normal rongga mulut, saluran pencernaan, saluran
genitalia wanita dan kadang-kadang menghuni kulit, dengan demikian infeksi seringkali
berasal dari endogen meskipun dapat terjadi infeksi silang, misalnya dari ibu ke bayi atau
antara bayi dengan saudar sekandungnya.
Karakteristik
Candida albicans tumbuh sebagai sel-sel ragi yang berbentuk oval atau sferikal,
berukuran 3-5 µm x 5-10 µm. Sel-sel ini sering disebut blastospora, tapi jangan
disalahartikan dengan spora bakteri. Akan terlihat pseudohifa (pemanjangan sel-sel ragi
berbentuk pita dan ujung-ujungnya saling berkaitan) terutama jika biakkan diinkubasikan
pada suhu yang lebih rendah atau pada media yang nutrisinya sedikit.
115
Biakkan dan Identifikasi

Biakkan tumbuh pada medium Sabouraud dan terlihat koloni-koloni yang berwarna
putih krem, bentuk koloni rata agak bulat dan koloni tercium bau seperti bir. Candida
albicans dan C. dubliniensis dibedakan dengan Candida lain dari kemampuannya
menghasilkan tabung germ dan klamidospora :
 Jika ragi diinkubasikan selama 3 jam suhu 370C di serum C albicans dan C dubliniensis
membentuk tabung germ (hifa insipien) tapi Candida yang lain tidak
 Candida albicans dan C. dubliniensis membentuk struktur istirahatnya berbentuk bulat,
berdinding tebal yang disebut klamidospora jika diinkubasikan pada suhu 22-25 0C
dengan kadar Oksigen rendah pada medium yang nutrisinya dikurangi (misalnya agar
cornmeal).
Tetapi identifikasi spesies yang paling menentukan adalah berdasarkan reaksi asimilasi
karbohidrat (metabolisme aerob) dan fermentasi (metabolisme anaerob) dan tes-tes
biokimiawi lainnya.
Patogenitas
Spesies Candida jarang menyebabkan penyakit jika tidak ada factor predisposisi, baik
pada kandidiasis yang superfisialis maupun yang sistemik. Factor predisposisi yang
memungkinkan terjadinya kandidiasis di rongga mulut dapat terlihat pada tabel 2.2 dibawah
ini.
Tabel 2.2 Faktor predisposisi pada Kandidiasis oral
Iritan lokal yang kronis

Peralatan di rongga mulut yang menekan
Peralatan dirongga mulut yang tidak pas
Gangguan keseimbangan mikroba mulut karena pemakaian antibiotika, kortikosteroid dan
xerostomia
Faktor makanan
Gangguan daya tahan tubuh dan gangguan endokrin
Penyakit keganasan dan penyakit kronis
Penyakit gangguan darah/pembuluh darah
Radiasi pada daerah leher dan kepala
Nutrisi yang abnormal
Usia (terlalu muda atau terlalu tua)
Perawatan di rumah sakit
Displasia epitel mulut
Perokok berat
Sumber : Samaranayake, 2002, hal.145
116
Kandidiasis Superfisial
1. Infeksi Mukosa : karakteristik lesi mukosa Candida adalah thrush. Secara klasik terlihat
sebagai pseudomembran yang berwarna putih pada mukosa bukal dan vagina yang
dapat terangkat dengan mudah ketika dilakukan apusan. Manifestasi oral lainnya
meliputi lesi kemerahan (erythematous) dan variasinya yang berupa hiperplastik.
Vulvovaginitis candida biasa ditemukan pada wanita yang minum obat kontrasepsi
oral, dan biasanya disertai dengan secret yang kental dan berbau ragi, rasa gatal dan
rasa tidak nyaman di vagina.
Gambar 2.13 Oral Thrush akibat Candida albicans

Sumber : http://thrushtreatmentcenter.com/oral-thrush-pregnant, diunduh 8
September 2017
2. Infeksi Kulit terutama terlihat di permukaan kulit yang hangat dan lembab. Candidal
interrigo terdiri dari pustule vesicular yang membesar, rupture dan menyebabkan fisur,
terutama terlihat pada orang yang mengalami obesitas.
Gambar 2.14 Candidal interrigo

Sumberhttps://www.studyblue.com/fungal-infection, diunduh 8 September 2017
3. Nappy rash, biasanya pada anak-anak disebabkan oleh C. albicans yang berasal dari
saluran pencernaan bawah. Ditandai dengan adanya makula atau lesi lepuh yang
mengeras, disertai rasa terbakar dan sangat gatal.
117
Gambar 2.15 Nappy rash

Sumber : http://postpartumperiod.com,nappy-rash, diunduh 8 September 2017
4. Candidal paronychia yaitu inflamasi terlokalisir disekitar dan dibawah kuku,

disebabkan oleh Candida jika tangan sering terendam air (misalnya pada pekerja di
laundry atau yang sering mengerjakan pencucian piring).
Gambar 2.16 Candidal paronychia

Sumber : http://www.primehealthchannel.com/paronychia-pictures-html,
diunduh * September 2017
118
Kandidiasis Mucocutaneus
Kandidiasis mucocutaneus melibatkan kulit dan mukosa oral/vaginal. Penyakit yang
jarang terjadi ini disebabkan oleh factor keturunan atau defek dapatan akibat
gangguan sistem kekebalan tubuh atau metabolisme. Candidasis mucocutaneus kronis
adalah kondisi yang jarang terjadi yang dihubungkan dengan defisiensi sel-Limfosit T.
Kandidiasis sistemik
Infeksi ini melibatkan saluran pernafasan bagian bawah dan saluran urinaria, yang
menyebabkan candidiemia (Candida berada didalam darah), lokasinya biasanya di
endocardium, selaput otak, tulang, ginjal dan di mata. Jika tidak diobati dan menyebar,
infeksi ini bisa berakibat fatal. Yang rentan kena adalah individu yang mengalami
transplantasi organ, bedah jantung, implantasi protesa, dan pengguna steroid jangka
lama atau terapi imunosupresi (yang dapat menekan daya tahan tubuh). Kadang-
kadang infeksi superfisial dapat menyebabkan penyakit yang menyebar.
Diagnosis
1. Terlihat adanya ragi pada apusan yang diwarnai dengan pengecatan Gram, diikuti
dengan biakkan specimen pada agar Sabouraud
2. Pemeriksaan serologi sangat membantu pada diagnosis kandidiasis yang
menyebar
3. Pemeriksaan histopatologis terhadap biopsy lesi menunjukkan adanya invasi hifa
fungi ke jaringan.
Pencegahan
Kandidiasis hampir selalu bersumber dari fungi endogen (dari dalam tubuh inang),
sehingga pencegahan harus meliputi factor predisposisinya. Individu yang mengalami
penurunan daya tahan tubuh mungkin membutuhkan terapi profilaksis anti fungi
jangka lama, baik secara terus-menerus maupun secara intermiten.
Lesi oral yang disebabkan oleh fungi selain Candida jarang terjadi. Lesi ini seperti yang
disebabkan oleh crptococcosis, histoplasmosis, dan penicilliosis, dapat terlihat pada
pasien HIV dan biasanya menunjukkan respon positif dengan terapi Amphotericin yang
diberikan Intra Vena.
119
Latihan

esensinya saja !
1) Apa perbedaan fungi dalam bentuk ragi dengan bentuk hifa ?
2) Sebutkan 2 macam agar yang biasa dipakai untuk mmbiakkan fungi pathogen di
laboratorium !
3) Jelaskan 4 komponen yang dimiliki oleh Candida sehingga dapat berperan sebagai fungi
virulen di rongga mulut !
4) Jelaskan 3 kondisi mikosis akibat Candida pada manusia !
5) Sebutkan 5 macam faktor predisposisi yang memungkinkan terjadinya Candidiasis di
rongga mulut.
6) Infeksi kulit akibat Candida disebut………………….biasanya mengenai kulit
yang………………..dimana lesi yang tampak berupa…………………………dan yang sering
terkena adalah orang yang mengalami ……………………………
7) Infeksi oleh Candida biasanya merupakan infeksi oportunistik yang mikroorganismenya
bersumber dari endogen. Jelaskan pernyataan tersebut !

1) Morfologi fungi
2) Kebutuhan untuk perkembangbiakan
3) Patogenitas fungi
4) Mikosis pada manusia
5) Factor-faktor predisposisi Kandidiasis oral
6) Kandidiasis superfisialis
7) Patogenitas fungi
Ringkasan
1. Fungi adalah mikroorganisme eukaryotic, berbeda dengan bakteri yang prokaryotic

2. Fungi menunjukkan dua struktur dasar yaitu bentuk ragi (yeast) dan bentuk kapang
(mould). Ragi adalah uniseluler dengan bentuk sel yang sferikal atau ovoid, mould
adalah multiseluler dengan variasi pada struktur khususnya.
3. Hyphae (tunggal = hypha atau hyphum)adalah tabung menyerupai benang yang berisi
sitoplasma fungi dan oragnelanya (mycelium = masa hifa)
120
4. Fungi yang menyebabkan penyakit diklasifikasikan menjadi ragi, fungi berbentuk

filament dan fungi dimorfik.
5. Kebanyakan fungi yang menyebabkan penyakit tumbuh secara aerob pada Agar
Sabouraud Dekstrosa (SAB) atau variasinya.
6. Candida albicans mempunyai sejumlah komponen virulen yang meliputi : kemampuan
untuk melekat pada jaringan/protesa inang dan membentuk hifa, melakukan
perubahan bentuk koloni dan dapat menghasilkan enzim ekstraseluler fosfolipase dan
proteinase.
7. Infeksi manusia oleh fungi secara umum dapat dibagi menjadi mikosis superfisial,
subkutaneus dan mikosis dalam (sistemik).
8. Ketika fungi ( seperti Candida albicans) yang secara umum tidak berbahaya pada
individu sehat tapi dapat menyebabkan penyakit infeksi pada individu yang mengalami
penurunan daya tahan tubuh, kondisi itu disebut infeksi oportunistik.
9. Candida, yang menghuni rongga mulut dengan jumlah antara 50-60% dari populasi
mikroorganisme, dapat menyebabkan kandidiasis superfisial (mukosa, kutaneus atau
mukokutaneus) atau kandidiasis sistemik.
10. Spesies dalam genus Candida yang ditemukan didalam tubuh manusia meliputi C.
albicans, C.glabrata, C.krusei dan C. tropicalis. C.albicans bertanggung jawab terhadap
sebagian besar infeksi (>90%).
11. C.albicans adalah mikrorganisme penghuni rongga mulut, saluran pencernaan, saluran
genital wanita dan kadang-kadang di kulit, sehingga infeksi biasanya endogenous.
12. C. albicans dan C.dubliniensis dapat dibedakan dari spesies Candida lainnya karena
mempunyai kemampuan untuk membentuk tabung germ dan klamidospora.
13. Spesies Candida jarang menyebabkan infeksi di rongga mulut tanpa adanya factor
predisposisi, seperti perubahan-perubahan intra oral (misalnya protesa yang tidak
higienis, xerostomia) dan/atau factor sistemik seperti diabetes dan penurunan daya
tahan tubuh.
14. 3 manifestasi klinik utama kandidiasis oral yaitu pseudomembranous, erythematous
dan varian hiperplastik.
15. Diagnosa Kandidiasis ditegakkan dengan adanya apus yang diwarnai Gram, kultur pada
SAB positif dan konfirmasi lanjut dengan tes biokimiawi atau teknik genetika.
16. Perawatan kandidiasis adalah dengan obat-obatan antifungi yang diberikan secara oral
atau sistemik, atau tanpa obat antifungi. Tetapi juga meliputi koreksi pada factor
predisposisi.
121
Tes 2
1) Sifat ragi adalah :

A. Multiseluler
B. Mempunyai hifa
C. Mempunyai dinding pemisah antar sel
D. Terlihat berbentuk batang dibawah mikroskop
E. Uniseluler
2) Medium yang dipakai untuk pembiakan fungi adalah :

A. Agar Mitis Salivarius
B. Agar nutrient
C. Agar darah
D. Agar Dekstrose Saboraud (SAB)
E. Agar garam manitol (MSA)
3) Mikosis superfisialis dapat mengenai bagian tubuh dibawah ini, kecuali :

A. Kulit
B. Mukosa
C. Kuku
D. Rambut
E. Paru-paru
4) Candida albicans adalah flora normal pada sejumlah tempat di tubuh manusia, kecuali :
A. Usus
B. Alveoli paru
C. Mukosa mulut
D. Kulit
E. Mukosa vagina
5) Candidal paronychia adalah infeksi Candida yang mengenai :

A. Vagina
B. Kuku
C. Kulit bayi pemakai pampers
D. Lipatan-lipatan kulit pada individu obese
E. Mukosa mulut pemakai protesa
Bab 2 ini.
122
Topik 3
Imunologi
Kita hidup didunia yang dipenuhi oleh mikroba, dan tubuh kita terus menerus
terpapar dengan bakteri, fungi, parasite dan berbagai virus. Pertahanan tubuh kita terhadap
serangan mikroba tersebut mirip dengan pertahanan yang dilakukan oleh tentara didalam
suatu negara. Mekanisme pertahanan pertama adalah benteng seperti kulit, yang menahan
masuknya agensia asing. Jika benteng ini berhasil dilalui atau mikroba tersebut berhasil
masuk, maka “tentara” lokal seperti (sel-sel pembunuh, netrofil dan sel-sel pemakan/
makrofaga) akan dengan cepat menghadapi agnesia yang menyusup tersebut dan
memberikan perlawanan. Pada akhirnya, jika hal inipun kurang efektif, alat pertahanan
selanjutnya akan diarahkan untuk membendung agensia penyusup tersebut (antibodi dan sel
Limfosit T/Sel T). Pengetahuan tentang sifat-sifat musuh (antigen) sebelum serangan
memungkinkan untuk membentuk respon tubuh yang lebih efektif dan cepat (aktivasi sel
memori yaitu sel B dan sel T pada serangan berikutnya).
Elemen-elemen sistem pertahanan berinteraksi dan berkomunikasi melalui molekul2
terlarut, juga melalui interaksi antar sel. Interaksi antar sel-sel pertahanan tersebut
menghasilkan mekanisme untuk aktivasi dan mengontrol respon pertahanan tubuh. Untuk
lebih jelasnya memahami mengenai sistem pertahanan tubuh manusia, mari kita mulai
membahasnya.
A. GAMBARAN UMUM SISTEM IMUN
Sistem imun adalah sistem pertahanan tubuh melawan penyakit yang disebabkan oleh
mikroorganisme, sel-sel yang malfungsi dan partikel asing. Sistem ini cukup rumit, yang
terdiri dari beberapa tipe dari sel-sel yang menetap, melekat pada jaringan atau yang
mampu bergerak (mobile) yang berinteraksi didalam jaringan getah bening (jaringan limfoid)
yang tersebar diseluruh tubuh. Mikroorganisme atau benda asing (yang disebut antigen)
masuk kedalam tubuh dan merangsang aksi sistem ini, yang fungsinya adalah untuk
mengusir /melenyapkan mikroba atau benda asing tersebut.
Ada 2 macam kekebalan atau imunitas pada tubuh manusia, yaitu :
 Kekebalan alamiah (innate, native immunity)
1) Bersifat nonspesifik dan sudah ada sejak lahir
2) Mencakup factor-faktor protektif yang terdapat pada individu yang tidak tergantung
pada rangsangan antigen (misalnya : kulit, selaput mukosa, sekresi lemak, fagositosis
atau peristiwa sel darah putih makan bakteri/mikroba yang masuk kedalam tubuh)
3) Ini adalah sistem pengenalan awal yang cepat untuk mendeteksi patogen
123
 Kekebalan didapat atau Imunitas adaptif (adaptive immunity)

1) Bersifat spesifik
2) Didapat secara aktif setelah seseorang terkena infeksi atau divaksinasi.
3) Didapat secara pasif dengan penyaluran melalui plasenta dan suntikan antibodi yang
spesifik
B. BARIS PERTAHANAN PERTAMA TERHADAP INFEKSI
Kulit dan membran mukosa adalah benteng bagi kebanyakan mikroba yang infeksius.
Pengecualian untuk hal ini adalah bagi virus papilloma, dan dermatophyta (fungi yang “suka
pada kulit”). Asam lemak bebas yang dihasilkan di kelenjar lemak pada permukaan kulit,
asam laktat di keringat, dan pH yang rendah dan kelembaban kulit yang relative kering,
kesemuanya menjadi hal-hal yang tidak menguntungkan bagi pertumbuhan mikroorganisme.
Epitel mukosa yang melapisi pintu-pintu masuk mikroba di tubuh manusia (seperti
mulut, saluran hidung dan pernafasan, saluran pencernaan, saluran genital), semua
dilindungi oleh sekresi mukus (lendir) dan silia (rambut getar). Contohnya : saluran
pernafasan dilapisi oleh lendir, yang secara berkala disapu kearah mulut oleh gerakan silia di
sel-sel epitel sepanjang saluran tersebut. Partikel udara yang agak besar akan dibungkus oleh
mukus, tetapi partikel yang lebih kecil (0,05-3µm, ukuran virus atau bakteri) yang berhasil
mencapai alveoli paru, akan dimakan oleh sel-sel makrofaga dan dibuang keudara luar.
Gambar 2.17 Sel-sel epitel bersilia (berambut getar) yang terdapat sepanjang
saluran pernafasan. Diantaranya terlihat sel-sel Goblet, yaitu sel-sel berbentuk piala yang
memproduksi mukus/lendir
Sumber : http://www.accessmedicine.com, diunduh 8 September 2017
124
Gambar 2.18 Batuk atau bersin adalah salah satu mekanisme tubuh mengeluarkan
benda asing yang masuk kedalam saluran pernafasan.
Sumber : http://preventdisease.com/html, diunduh tanggal 8 September 2017
Asap rokok atau polutan lain, seperti halnya beberapa bakteri dan virus (misalnya
Bordetella pertussis yang menyebabkan penyakit pertussis), dapat melawan mekanisme
pembersihan mikroba ini dengan cara merusak sel-sel bersilia, dengan demikian membuat
pasien rentan kena bakteri penyebab pneumonia. Substansi antimikroba (lisosim, laktoferin
dan sekretori Imunoglobulin A) yang ditemukan di sekresi pada permukaan mukosa
(misalnya pada air mata, mukus, saliva), juga memberikan perlindungan. Lisosim bisa
membunuh bakteri. Laktoferin, yang merupakan protein yang terikat pada zat besi, akan
mengambil ion besi yang bebas, yang amat diperlukan bakteri untuk tumbuh.
Lingkungan asam di lambung, kandung kencing dan ginjal dan empedu dari saluran
pencernaan dapat menginaktivasi sebagian besar virus dan bakteri. Aliran urin juga menyapu
mikroba yang akan melekat, sehingga mengganggu proses infeksi.
Suhu tubuh, apalagi jika meningkat pada saat demam membatasi atau mencegah
pertumbuhan banyak mikroba. Lagi pula, respon imun lebih efisien pada suhu yang
meningkat. Gambar dibawah ini menggambarkan benteng pertahanan yang ada ditubuh
manusia.
125
Gambar 2.19 Benteng pertahanan tubuh manusia

Sumber : Murray, 1998, hal.110
C. BARIS PERTAHANAN KEDUA (RESPON ANTI BAKTERI )
Bila mikroba bisa melalui baris pertahanan pertama, maka akan ada serangkaian
respon proteksi melawan bakteri. Proteksi diawali oleh aktivasi imunitas alamiah di lokasi
masuknya bakteri pada fase akut dan akan dilanjutkan dengan respon spesifik terhadap
antigen tersebut pada skala sistemiknya. Aktivasi respon yang cepat yaitu melalui tiga
mekanisme dibawah ini.
126
1. Inflamasi akut
Inflamasi akut adalah mekanisme pertahanan untuk menahan infeksi, yang mencegah
penyebarannya pada lokasi awalnya dan memberi sinyal untuk respon imun spesifik
berikutnya. Respon inflamasi itu menguntungkan, tetapi di lain pihak juga dapat
menyebabkan kerusakan jaringan dan bisa membuat symptom sakit. Sel tubuh yang terluka
akan mengeluarkan bahan kimia yang dinamakan Histamin, dan akan memulai respon
inflamasi
Ada 3 peristiwa utama pada inflamasi akut, yaitu : (1) pelebaran pembuluh kapiler
untuk meningkatkan aliran darah kejaringan yang luka (terlihat sebagai rash atau
kemerahan); meningkatnya permeabilitas struktur pembuluh darah kapiler yang
memungkinkan keluarnya cairan, protein plasma dan lekosit dari sirkulasi darah (ini adalah
penyebab jaringan yang sedang radang terlihat bengkak/odem); dan (3) keluarnya sel-sel
darah putih atau lekosit dari pembuluh darah kapiler dan terlokalisir di jaringan yang
mengalami luka).
Pada saat yang bersamaan, terjadi pelepasan pirogen di jaringan yang akan mencapai
hipotalamus dan menyebabkan peningkatan suhu tubuh. Reseptor rasa sakit juga teraktivasi,
sehingga individu yang mengalami radang akan merasa sakit. Jadi secara klinis, pada kejadian
inflamasi akut akan terdapat 5 gejala khas yaitu: (1) rubor artinya warna jaringan kemerahan,
(2) kalor, yaitu suhu tubuh disekitar luka maupun secara sistemik akan meningkat, (3) Dolor,
rasa sakit, (4) tumor, yaitu jaringan menjadi bengkak karena odem, dan (5) fungsio lesa, yaitu
jaringan atau organ yang terkena akan mengalami gangguan fungsi. Untuk memperjelas
gambaran radang, dapat terlihat pada gambar berikut.
Gambar 2.20 Reaksi inflamasi akut. Individu akan mengalami 5 gejala khas yaitu
rubor, kalor, dolor, tumor dan fungsiolesa
Sumber : http://www.slideshare.net, diunduh 8 September 2017
127
2. Sistem Komplemen
Komponen dinding sel bakteri adalah aktivator utama bagi respon proteksi bagi
antigen yang bersifat non-spesifik. Komponen tersebut meliputi lapisan peptidoglikan pada
dinding sel bakteri Gram positif dan Lipopolisakarida (LPS) yang terdapat pada dinding sel
bakteri Gram negatif. Yang teraktivasi disini adalah sistem pertahanan tubuh yang disebut
sistem komplemen. Sistem komplemen akan merangsang sel-sel mast untuk melepaskan
histamine, yang dapat meningkatkan permeabilitas pembuluh darah kapiler. Sistem
komplemen juga akan menarik sel-sel netrofil dan makrofaga ke jaringan yang mengalami
radang. Sel-sel netrofil dan makrofaga adalah yaitu bagian sel-sel darah putih yang bertugas
memakan atau membunuh bakteri asing yang masuk. Sistem komplemen juga membuat
bakteri mudah dimakan (difagosit) oleh sel-sel netrofil-makrofaga di atas.
3. Fagositosis
Sel-sel darah putih yaitu dari jenis netrofil PMN (polimorfonuklear = PMNs), monosit
dan kadang-kadang eosinofil adalah sel-sel pertama yang menunjukkan respon pada
inflamasi akut, kemudian diikuti oleh sel-sel makrofaga.
Netrofil ditarik kearah tempat infeksi dan memfagosit atau memakan bakteri dan
membunuh bakteri didalam badan sel netrofilnya. Peningkatan jumlah netrofil didalam
darah, cairan tubuh (seperti di cairan serebrospinal), atau dijaringan menunjukkan adanya
infeksi oleh bakteri.
Fagositosis adalah proses sel-sel netrofil dan makrofaga memakan bakteri. Fagositosis
berlangsung dalam 3 tahap, yaitu: proses perlekatan pada bakteri, memasukkan bakteri
kedalam badan sel netrofil atau makrofaga dan mencerna / membunuh bakteri. Proses
mencerna bakteri berlangsung didalam organel lisosom didalam badan sel makrofaga.
Gambar 2.21 Dalam proses fagositosis, sel makrofaga akan mendekati bakteri,
melingkupi dan memakan bakteri dan membunuh bakteri.
Sumber : http://www.alamy.com .phagocyte- macrophage cell .html,
diunduh 8 September 2017
128
D. PERTAHANAN TUBUH MELAWAN INFEKSI VIRUS
Virus masuk kedalam sel tubuh, membajak organel sel tubuh dan mengubah sel
tubuh tersebut menjadi pabrik virus. Pada akhirnya sel yang terinfeksi akan mati, dan
melepas ribuan virus baru untuk menginfeksi sel tubuh lainnya. Respon imun adalah cara
terbaik untuk mengontrol infeksi virus. Tidak seperti infeksi bakteri, tujuan utama respon
imun melawan virus adalah untuk menghilangkan virusnya sendiri dan sel-sel inang yang
menjadi pabrik produksi virus (tempat virus bereplikasi). Komponen sistem pertahanan
tubuh yang penting untuk memutus infeksi virus adalah interferon, sel-sel “natural killer”,
sel-sel Limfosit T CD8.
Sel tubuh yang terinfeksi virus akan melepaskan interferon. Interferon adalah suatu zat
kimia yang dapat menghambat replikasi (perbanyakan) virus di dalam sel inang. Protein yang
dapat larut ini akan memicu respon lokal dan sistemik. Timbulnya demam dan stimulasi
sistem kekebalan adalah dua macam efek sistemiknya.
Gambar 2.22 Sel yang telah disinfeksi virus yang dikenal oleh sel-sel makrofaga
sebagai sel-sel yang malfungsi. Sel-sel ini selanjutnya akan difagosit oleh sel-sel makrofaga
dan sel-sel “natural killer”
Sumber : https://www.utmb.edu/virusimages.html, diunduh 8 September 2017
Peningkatan suhu tubuh dan demam dapat menghambat replikasi dan menurunkan
stabilitas virus. Beberapa virus bersifat tidak stabil ( contohnya virus Herpes Simpleks) atau
tidak dapat bereplikasi (contohnya Rhinovirus) pada suhu 370 atau lebih tinggi. Sel-sel fagosit
akan memakan virus dan sel-sel yang terinfeksi virus. Makrofaga di dalam hepar (Sel-sel
Kupffer) dan limpa dengan cepat akan menyaring virus dari aliran darah. Antibodi dan
komplemen yang terikat pada virus akan membuat virus tersebut mudah untuk difagosit
oleh sel-sel makrofaga. Sel-sel “natural killer” juga diaktivasi oleh interferon dan tugasnya
membunuh sel-sel yang telah diinfeksi oleh virus.
129
Interferon pertama kali dideskripsikan oleh Isaacs dan Lindenmann sebagai factor yang
“mengganggu” replikasi beberapa macam virus. Interferon adalah pertahanan pertama
tubuh melawan infeksi virus, dan “sistem alarm pertama” pada tingkat lokal dan sistemik.
Ketika interferon mengaktivasi sel-sel makrofaga untuk membunuh sel inang yang telah
terinfeksi virus dalam rangka memblokade replikasi virus, sekaligus interferon mengaktivasi
respon imun dan meningkatkan sel Limfosit –T untuk mengenal sel-sel yang telah terinfeksi
virus. Interferon adalah pertahanan paling penting terhadap infeksi, tetapi interferon juga
menjadi penyebab rasa lelah, sakit pada otot-otot, menggigil dan demam (yang merupakan
gejala mirip influenza yang non spesifik) yang banyak dijumpai pada infeksi virus.
E. RESPON IMUN SELULER DAN RESPON IMUN HUMORAL
Didalam tubuh berlangsung 2 macam respon imun, yaitu respon imun seluler dan
respon imun humoral.
 Respon imun seluler adalah sistem kekebalan yang diperantarai oleh sel-sel darah putih
sebagai sel-sel pertahanan tubuh. Yang dideskripsikan pada bagian terdahulu, seperti
upaya sel-sel makrofaga dan sel-sel netrofil memfagosit bakteri, juga bagaimana sel-sel
“natural killer” mengenal sel-sel tubuh inang yang sudah terinfeksi virus dan kemudian
membunuh sel-sel target tersebut, semuanya termasuk dalam kategori respon imun
seluler.
 Respon imun humoral adalah sistem kekebalan yang dikontrol oleh antibodi. Hal ini
termasuk baris pertahanan ketiga dalam sistem imun.
F. BARIS PERTAHANAN KETIGA TERHADAP INFEKSI
1. Antibodi
Sebagian besar infeksi dapat melewati baris pertahanan pertama dan kedua. Infeksi
demikian yang dapat memicu produksi dan pelepasan antibodi. Antibodi disebut juga
imunoglobulin (Ig) atau serum protein globulin, yaitu suatu substansi kimia berupa
glikoprotein dengan struktur tertentu yang dihasilkan oleh sel-sel kekebalan tubuh sebagai
respon terhadap keberadaan benda-benda asing atau antigen yang masuk kedalam tubuh.
Contoh benda asing seperti bakteri, virus, jamur, parasite dan racun
Molekul antibodi berbentuk huruf Y. Tiap antibodi mengandung 2 “rantai berat” (H)
yang identik dan 2 “rantai ringan” (L) yang identik. Antibodi mempunyai kemampuan
mengikat antigen yang ditentukan oleh rangkaian H dan L spesifiknya. Tempat perlekatan
antigen adalah pada ujung huruf Y-nya (antigen binding site). Setiap antibodi spesifik
terhadap antigen tertentu. Jika pembentukan antibodi tidak sesuai dengan antigennya, maka
akan timbul masalah dimana sistem kekebalan tubuh tidak akan bekerja dengan baik dan
tubuh akan rentan terhadap penyakit.
130
Gambar 2.23 Struktur Antibodi dengan rantai berat (Heavy Chain)dan rantai ringanny
(Light Chain). Ujung antibodi adalah tempat melekatnya antigen
Sumber : https://www.fastbleep.com/biology-notes, diunduh 8 September 2017
Selama kehamilan, janin dalam kandungan menerima antibodi ini melalui imunisasi
pasif oleh sang ibu. Kemampuan pada sistem kekebalan tubuh bayi untuk secara mandiri
mengembangkan antibodi ini kemudian berkembang selama satu atau dua tahun pertama
kehidupan. Ada lima kelas antibodi yang terbentuk didalam tubuh manusia, yaitu : IgA, IgE,
IgD, IgG dan IgM.
 Imunoglobulin A (IgA) : terdapat pada beberapa bagian tubuh yang dilapisi oleh selaput
lendir, misalnya hidung, mata, paru-paru, dan usus. Imunoglobulin A (IgA) juga
ditemukan di dalam darah dan cairan tubuh lainnya, seperti air mata, air liur, ASI, getah
lambung, dan sekresi usus. Jenis antibodi ini juga melindungi janin dalam kandungan dari
berbagai penyakit. IgA yang terdapat dalam ASI akan melindungi sistem pencernaan bayi
terhadap mikroba karena tidak terdapat dalam tubuh bayi yang baru lahir
 Imunoglobulin D (IgD) : Jenis antibodi Imunoglobulin D atau IgD merupakan antibodi
yang jumlahnya yang sangat sedikit terdapat dalam darah, getah bening, dan pada
permukaan sel-sel B. Fungsi IgD adalah untuk mengaktifkan sel B. IgD ini bertindak
dengan menempelkan dirinya pada permukaan sel T dan membantu menangkap antigen.
 Imunoglobulin E (IgE): Immunglobulin E atau IgE merupakan jenis antibodi dalam
tubuh yang beredar dalam aliran darah dan terlibat dalam mempertahankan tubuh
terhadap parasit dan alergen. Jenis antibodi ini kadang juga menimbulkan
reaksi alergi akut pada tubuh. Oleh karena itu, tubuh seorang yang sedang mengalami
alergi biasanya memiliki kadar IgE yang tinggi. IgE penting melawan infeksi parasite.
131
 Imunoglobulin G (IgG) : Jenis antibodi IgG beredar dalam tubuh dan banyak terdapat
pada darah, sistem getah bening, dan usus. IgG terbentuk 2-3 bulan setelah infeksi,
kemudian kadarnya meninggi dalam satu bulan, menurun perlahan-lahan, dan terdapat
selama bertahun-tahun dengan kadar yang rendah. Senyawa ini akan terbawa aliran
darah langsung menuju tempat antigen berada dan menghambatnya begitu terdeteksi.
Jenis antibodi dalam tubuh ini memiliki efek kuat sebagai anti bakteri maupun virus, serta
menetralkan racun. IgG juga mampu menyelinap diantara sel-sel dan menyingkirkan
mikroorganisme yang masuk ke dalam sel-sel dan kulit.
Jenis antibodi dalam tubuh IgG merupakan satu-satunya antibodi yang dapat
dipindahkan melalui plasenta dari ibu hamil ke janin dalam kandungannya untuk
melindungi janin dari kemungkinannya infeksi yang menyebabkan kematian bayi
sebelum lahir. Selanjutnya immunoglobulin dalam kolostrum (air susu ibu atau ASI yang
pertama kali keluar), memberikan perlindungan kepada bayi terhadap infeksi sampai
sistem kekebalan bayi dapat menghasilkan antibodi sendiri.
 Imunoglobulin M (IgM) : Antibodi ini terdapat pada darah, getah bening, dan pada
permukaan sel-sel B. Pada saat antigen masuk ke dalam tubuh, Immunoglobulin M (IgM)
merupakan antibodi pertama yang dihasilkan tubuh untuk melawan antigen tersebut.
IgM terbentuk segera setelah terjadi infeksi dan menetap selama 1-3 bulan, kemudian
menghilang.
Janin dalam kandungan mampu memproduksi IgM pada umur kehamilan enam bulan.
Jika janin terinfeksi kuman penyakit, produksi IgM janin akan meningkat. Jenis
antibodi IgM banyak terdapat di dalam darah, tetapi dalam keadaan normal tidak
ditemukan dalam organ maupun jaringan. Untuk mengetahui apakah janin telah
terinfeksi atau tidak, dapat diketahui dari kadar IgM dalam darah.
Beberapa orang mengalami sistem antibodi dalam tubuh yang dimiliki keliru mengenali
jaringan tubuh sendiri yang sehat sebagai zat berbahaya dan menghasilkan antibodi
sebagai respon. Sehingga menjadi sejumlah gangguan autoimun seperti penyakit lupus
eritematosus, penyakit Grave, dan tiroiditis Hashimoto, dan penyakit lainnya. (Berbagai
sumber : ilustrasi:scienceclarified.com)
132
Gambar 2.24 Lima kelas antibodi dalam tubuh manusia

Sumber : http://www.wisegeekhealth.com, diunduh 8 September 2017
2. Mekanisme Respon Imun Humoral

Antibodi dapat menyebabkan kekebalan karena :
 Antibodi menghasilkan antitoksin ( anti racun). Toksin yang dihasilkan bakteri akan
dinetralisir oleh antibodi.
 Antibodi akan menempel pada dinding sel bakteri maupun pada pecahan bakteri
(pada tempat perlekatan antigennya), sehingga : a) bakteri bisa difagositosis, b)
bakteri tidak bisa melekat pada sel tubuh manusia (= sel target) dan c) antibodi juga
akan mengaktifkan sistem kekebalan komplemen yang akan membunuh bakteri
(bakteri lisis).
3. Pembentukan Antibodi
Antibodi dihasilkan oleh sel-sel Limfosit B. Jika ada mikroorganisme asing (bakteri atau
virus) masuk kedalam tubuh karena berhasil menembus baris pertahanan pertama,
maka mikroorganisme asing tersebut akan dimakan (difagosit) oleh sel darah putih
(sel-sel netrofil PMNs dan sel-sel makrofaga lainnya). Mikroorganisme tersebut akan
dipecah-pecah di dalam sel fagosit tersebut, dan partikel pecahannya akan
dipresentasikan oleh sel-sel fagosit tersebut pada sel Limfosit T. Selanjutnya sel
Limfosit T akan mengidentifikasi pecahan tersebut dan mencari sel Limfosit B untuk
membantunya. Sel B akan menghasilkan antibodi yang sesuai/ spesifik untuk antigen
yaitu bakteri dan virus tersebut. Selanjutnya antibodi yang terbentuk akan mencari
antigen (bakteri dan virus tersebut), menempel padanya dan menghancurkannya
melalui respon imun humoral yang dijelaskan pada bagian terdahulu. Antibodi yang
terbentuk hanya dapat menghancurkan bakteri/ virus tertentu dan tidak bisa untuk
133
bakteri lain. Dengan demikian kekebalan disini bersifat spesifik. Pada saat
menghasilkan antibodi, sel-sel Limfosit B berkembang sebagai sel plasma dan
mengeluarkan sejumlah besar antibodi yang spesifik atau beredar didalam darah
sebagai sel memori. Disebut sebagai sel memori karena sel plasma tersebut
mempunyai ingatan yang panjang. Suatu ketika, jika tubuh kemasukan lagi bakteri atau
virus yang sejenis, maka sel memori telah mengenal bakteri atau virus tersebut sebagai
antigen, dan bisa langsung menghasilkan antibodi untuk memblokirnya sehingga
individu yang kemasukan tidak menjadi sakit. Berdasarkan hal inilah dibuat berbagai
macam vaksin untuk bakteri maupun virus patogen yang akan merangsang tubuh
membentuk antibodi.
Aktivasi sel Limfosit B untuk membentuk antibodi dapat diilustrasikan dalam gambar
berikut :
Gambar 2.25 Aktivasi sel Limfosit B dalam membentuk antibodi

Sumber : http://www.freelearningchannel.com.activation-Lymphocyte B,html, diunduh 8
September 2017
134
G. SEL-SEL
SEL PERTAHANAN PADA SISTEM IMUN
Seluruh jenis sel pada sistem imun berasal dari regenerasi stem cell (sel induk) sel sel-sel
darah (hematopetik) yang terdapat di sumsum tulang dan hepar janin. Diferensiasi ini
berkembang dalam 2 seri yaitu sari myeloid dan seri lymphoid. Prekusor myeloid aka akan
menjadi sel-sel
sel mast, eritrosit (sel darah merah), platelet (trombosit), sel
sel-sel
sel dendritic, sel-sel
sel
polimorf (eosinophil, basophil dan netrofil) dan sel sel-sel
sel fagosit mononuclear (monosit di
pembuluh darah dan makrofaga di jaringan). Prekusor Limfoid akan berkembang menjadi
Limfosit T (pematangannya di organ thymus) dan Limfosit B (pematangannya di Bone
marrow atau sumsum-sumsum
sumsum tulang) dan selsel-sel Natural Killer (NK).
Gambar 2.26 Pembentukan Sel Sel-sel

sel darah hematopoetik.
Selain eritrosit dan platelet, keseluruhan sel adalah termasuk sel
sel-sel
sel darah putih
yang berfungsi sebagai sel
sel-sel pertahanan
Sumber : https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmedhealth
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmedhealth,, diunduh 8 September 2017 20
Sel-sel
sel dendriti dan monosit/makrofaga memainkan peranan penting sebagai sel sel-sel
penyaji antigen. Sel-sel
sel tersebut akan memfagosit bakteri, menghancurkannya didalam
badan sel dan mempresentasikan /menyajikan pecahan bakteri (antigen) tersebut kepada se sel
Limfosit T. Limfosit B bertanggung jawab untuk menghasilkan antibodi (immunoglobulin) dan
juga dapat berfungsi sebagai sel penyaji antigen yang efektif pada sel Limfosit T. Limfosit T
dibagi menjadi 2 seri yaitu sel Limfosit T helper atau biasa disebut ssebagai
ebagai Limfosit T CD4 dan
sel Limfosit T sitotoksik atau sel Limfosit T CD8. Sel Limfosit T CD4 atau T helper dibutuhkan
135
untuk mengaktivasi : sel Limfosit B, sel

sel-sel T lainnya, sel-sel
sel Natural Killer dan sel-sel
sel
makrofaga. Aktivasi dilakukan dengan mentran
mentransmisi sinyal-sinyal
sinyal melalui interaksi kontak sel
dengan sel atau melalui protein terlarut yang dinamai Limfokin. Sel T Sitotoksik CD8
berfungsi membunuh sel target, seperti sel
sel-sel
sel tubuh yang telah terinfeksi virus atau sel-sel
sel
kanker. Sel semacam ini disebut
but sebagai sel yang malfungsi. Untuk memperjelas mengenai
komunikasi antar sel dalam rangka aktivasi sistem imun, dapat terlihat pada gambar berikut.
Gambar 2.27 Komunikasi antar sel dalam sistem imun

Hasilnya adalah pembentukan antibodi oleh sel Limfosit B, aktifasi sel-sel
sel makrofaga
dan aktivasi sel- sel Limfosit pembunuh (sel
(sel-sel
sel NK dan Limfosit T CD8)
Sumber : https://en.wikipedia.org/wiki/T_helper_cell,html
https://en.wikipedia.org/wiki/T_helper_cell,html.. Diunduh 8 September 2017
201
I ORGAN LIMFOID
Tempat utama pembentukan Limfosit adalah sumsum tulang dan thymus. Limfosit
yang belum matang dihasilkan oleh stem sel di sumsum tulang dan melanjutkan
pematangannya di sumsum tulang tersebut (Limfosit B dan sel sel-sel
sel NK) atau pindah ke organ
thymus dan berkembang menjadi Limfosit T. karena merupakan tempat pembentukan awal
dan tempat pematangan, maka thymus dan sumsum tulang disebut sebagai organ limfoid
primer.
Setelah mengalami pematangan, sel sel-sel
sel tersebut berpindah melalui pembuluh darah da
dan pembuluh limfa ke organ limfoid sekunder. Organ limfoid sekunder meliputi limpa,
nodus limfatikus dan jaringan limfoid didalam mukosa (MALT) di saluran pencernaan, saluran
pernafasan, dan saluran urogenital. Disini limfosit menghadapi antigen dari luar dan menjadi
sel efektor yang aktif pada sistem imun.
Limfa bertindak sebagai filter (penyaring ) darah dan merupakan tempat utama untuk
membersihkan partikel-partikel
partikel yang dimakan oleh sel
sel-sel
sel fagosit. Limfa juga menjadi tempat
penting produksi antibodiodi untuk melawan antigen yang masuk kedalam pembuluh darah
136
vena. Nodus limfatikus mengalirkan cairan limfa dari jaringan dan antigen asing yang
tersaring pada sel-sel makrofaga (sebagai penyaji antigen) dan selanjutnya ke Limfosit . Limfa
dan nodus limfatikus adalah organ yang berkapsul, tetapi MALT adalah jaringan yang tidak
berkapsul yang tersebar dan merupakan tempat penumpukan sel-sel Limfoid yang
menangkap mikroorganisme yang masuk ke tubuh. Jaringan limfoid yang terletak di usus
(GALT= Gut associated Limfoid Tissue) meliputi Peyer’s Patches di usus halus bagian bawah,
jaringan limfoid yang terakumulasi di lamina propia dinding sel usus halus, dan tonsil.
Sel-sel seri Limfoid yang telah matang terus-menerus bersirkulasi antara darah, limfa,
organ limfoid, dan jaringan hingga mereka menemukan antigen yang akan mengaktivasi sel-
sel tersebut. Respon imun seluler dan respon imun humoral terjadi di organ limfoid sekunder
dan di jaringan.
Gambar Organ limfoid primer dan sekunder pada manusia.

Dikutip dari : Murray, 1998hal 86.
137
Latihan

esensinya saja !
1) Sebutkan 2 macam kekebalan pada tubuh manusia !
2) Sebutkan 4 komponen yang termasuk baris pertahanan pertama terhadap infeksi !
3) Jelaskan 3 peristiwa utama pada inflamasi akut !
4) Jelaskan 3 mekanisme imun yang dilakukan oleh sistem komplemen setelah teraktivasi
oleh komponen dinding sel bakteri Gram (+) maupun (-) !
5) Apa yang dimaksud dengan fagositosis ? Sel-sel pertahanan mana saja yang dapat
melakukan fagositosis dan bertindak sebagai sel penyaji antigen ?
6) Bagaimana produksi interferon memicu sistem imun tubuh ?
7) Apa yang dimaksud dengan antibodi ? Mengapa antibodi dapat menyebabkan
kekebalan pada tubuh manusia ?
8) Sebutkan sel-sel pertahanan yang termasuk seri Myeloid !
Sebutkan sel-sel pertahanan yang termasuk seri Limfoid !
9) Sebutkan 2 macam organ limfoid pada manusia dan jelaskan peranannya masing-
masing dalam sistem imun !

1) Macam kekebalan
2) Baris pertahanan pertama terhadap infeksi
3) Inflamasi akut
4) Sistem komplemen
5) Fagositosis, sel-sel pertahanan
6) Pertahanan tubuh melalui infeksi virus
7) Antibodi
8) Sel-sel pertahanan
9) Organ limfoid
Ringkasan
Sistem imun adalah sistem pertahanan tubuh melawan penyakit yang disebabkan oleh
mikroorganisme, sel-sel yang malfungsi dan partikel asing. Sepanjang hidupnya, manusia
memiliki 2 macam kekebalan, yaitu kekebalan alamiah dan kekebalan yang didapat.
Kekebalan alamiah sudah ada sejak lahir bersifat non spesifik, sedangkan kekebalan dapatan
diperoleh setelah seseorang sembuh dari sakit, didapat oleh janin melalui plasenta ibunya,
dibuat oleh tubuh setelah seseorang divaksin atau mendapat suntikan immunoglobulin.
138
Kita mengenal 3 baris pertahanan dalam sistem imun. Baris pertahanan pertama
berupa kulit yang utuh beserta produksi lemak dan keringat, lendir (mukus) dan sel-sel epitel
bersilia di sepanjang saluran napas dan dimukosa tubuh lainnya, tingkat keasaman lambung
dan vagina, kandungan lisosim, laktoferin dan IgA pada saliva dan air mata, aliran urin dan
lain-lain. Baris pertama akan menahan bakteri atau antigen lain masuk kedalam tubuh. Baris
pertahanan kedua akan bekerja bila baris pertahanan pertama dapat ditembus oleh mikroba
asing atau antigen tersebut. Bentuknya yaitu : reaksi inflamasi, sistem komplemen,
fagositosis yang dilakukan oleh kelompok sel-sel darah putih, produksi interferon oleh sel
yang diinfeksi oleh virus. Bila baris pertahanan kedua dapat dilampaui, maka tubuh akan
membuat antibodi.
Respon imun seluler adalah respon imun yang diperantarai oleh sel-sel pertahanan,
sedangkan respon imun humoral adalah respon imun yang diperantarai oleh antibodi.
Antibodi atau imunoglobulin adalah protein yang menempel pada, menghancurkan,
melingkupi, dan menghambat partikel asing. Tiap antibodi bersifat spesifik pada satu macam
antigen saja. Ada 5 kelas antibodi didalam tubuh, yaitu : IgA, IgD, IgG, IgM dan IgE.
Sel-sel pertahanan dalam sistem imun pada dasarnya adalah sel-sel darah putih yang
berasal dari stem sel nya dan mengalami pematangan di organ limfoid primer, yaitu di
sumsum tulang belakang dan thymus. Ada 2 seri sel pertahanan yaitu seri myeloid dan seri
limfoid. Setelah mengalami pematangan, sel-sel seri limfoid tersebut berpindah melalui
pembuluh darah dan pembuluh limfa ke organ limfoid sekunder, yaitu limpa, nodus
limfatikus dan jaringan limfoid didalam mukosa (MALT) di saluran pencernaan, saluran
pernafasan, dan saluran urogenital. Respon imun seluler dan respon imun humoral terjadi di
organ limfoid sekunder dan di jaringan.
Tes 3
1) Sel yang dapat menghasilkan antibodi adalah :

A. Eritrosit
B. Lekosit
C. Trombosit
D. Sel Limfosit B
E. Sel Limfosit T
2) Bayi yang mendapat suntikan hepatitis B Imunoglobulin sehari setelah kelahiran karena
ibunya menderita Hepatitis B kronis, maka dikatakan bayi tersebut mendapat :
A. Kekebalan alamiah
B. Kekebalan yang didapat secara aktif
C. Kekebalan yang didapat secara pasif
D. Kekebalan spesifik
E. Kekebalan non spesifik
139
3) Pertahanan tubuh terjadi di sepanjang saluran pernafasan karena adanya :

A. Lisosim dan silia
B. Silia dan lendir
C. Silia dan kondisi jaringan yang asam
D Lisosim dan lendir
E. Keringat dan lemak
4) Organ limfoid primer pada manusia yaitu :

A. Nodus limfatikus di aksila
B. Tonsil
C. Sumsum tulang
D. Limfa
E. Peyer’ patches
5) Jika jaringan mengalami radang, maka akan terjadi peningkatan vaskularisasi untuk
mengirim sel-sel pertahanan kedaerah luka. Peningkatan vaskularisasi ini akan
menyebabkan kemerahan di daerah luka yang disebut :
A. Rubor
B. Kalor
C. Dolor
D. Tumor
E. Fungsiolaesa
6) Yang bukan termasuk sel darah putih adalah :

A. Sel Limfosit T-CD4
B. Sel netrofil
C. Sel trombosit
D. Sel makrofaga
E. Sel Basofil
7) Sel-sel pertahanan yang fungsi utamanya fagositosis adalah :

A. Sel Limfosit T-CD4
B. Sel Limfosit B
C. Sel platelet
D. Sel makrofaga
E. Sel Basofil
8) Bila sel tubuh diserang oleh virus, maka sel tubuh akan mengeluarkan bahan yang
dapat menghambat perbanyakan virus. Zat tersebut adalah :
A. Antigen
B. Alergen
C. Imunoglobulin
D. Interferon
E. Pyrogen
140
Kunci Jawaban Tes
Tes 1 (Virologi)
1. C
2. D
3. B
4. D
5. A
Tes 2 (Mikologi)
1. E
2. D
3. E
4. B
5. B
Tes 3 ( Imunologi)
1. D
2. C
3. B
4. C
5. A
6. C
7. D
8. D
141
Glosarium
Alergen : Substansi yang mampu memicu respon imun berupa reaksi

hipersensitivitas
Antigen : Molekul atau substansi yang dapat membangkitkan respon imun.
Antigen ini dikenal oleh antibody spesifik atau oleh sel-sel T
Blastospora : Sel-sel ragi Candida albicans
Booster : Vaksinasi ulang untuk membentuk lebih banyak antibody
Cacat kongenital : Cacat yang menyertai kelahiran bayi
Dimorfik : Fungi yang dalam kondisi tertentu berbentuk ragi tapi dalam
kondisi lain berbentuk kapang
Droplet : Percikan, misalnya yang dihasilkan ketika batuk, bersin, percikan
air ludah
Envelope : Selubung (amplop) pembungkus kapsid pada virus yang
beramplop, yang komposisinya terdiri dari lipidprotein dan
glikoprotein
Fagositosis : Proses sel-sel netrofil dan sel-sel makrofaga memakan bakteri
Faktor predisposisi : Faktor yang memungkinkan suatu mikroorganisme menyebabkan
penyakit
Fungi imperfecti : Fungi yang bentuk seksualnya tidak teridentifikasi, biasanya
merupakan jenis fungi yang menyebabkan penyakit
Heliks : Bentuk kapsid virus yang menyerupai silinder atau tabung
Hifa : Bentuk seperti tabung yang terdiri dari sitoplasma fungi dan
organela lainnya. Hifa adalah unit structural kapang.
Ikosahedral : Bentuk kapsid virus yang strukturnya menunjukkan 20
permukaan segitiga yang ekuilateral
Imunitas alamiah : Kekebalan yang sudah ada sejak lahir, bersifat non-spesifik dan
tidak tergantung dari rangsangan antigen
Imunitas adaptif : Kekebalan yang didapat secara aktif (misalnya setelah divaksin
atau setelah kena infeksi tertentu) maupun secara pasif (
misalnya penyaluran antibody lewat plasenta atau suntikan
antibody tertentu). Kekebalan ini bersifat spesifik.
Infeksi sitosidal : Sel inang yang telah dimasuki dan digunakan sebagai pabrik
penghasil virus mengalami pecah (lisis) dan kematian
Infeksi kronik : Infeksi kronik yang berkembang secara lambat
prograsif
Kapsid : Lapisan protein yang membungkus genom (asam nukleat) virus

Kapsomer : Partikel-partikel yang membentuk kapsid
Ligan : Komponen pada permukaan virus yang akan dikenali oleh
reseptor pada sel inang. Ligan dapat berupa glikoprotein atau
lipoprotein
Makula : Kelainan kulit yang mengalami perubahan warna, tidak disertai
penonjolan pada kulit, dan tidak ada lekukan pada kulit
142
Mikosis superfisial : Infeksi fungi yang mengenai mukosa dan struktur tubuh yang
mengandung keratin (kulit, kuku, rambut)
Mikosis subkutan : Infeksi fungi yang mengenai jaringan subkutan
Mikosis sistemik : Infeksi fungi yang mengenai organ-organ system internal tubuh
Mould : Bentuk fungi bersel banyak (=kapang)
Myselium : Massa sejumlah hifa yang membentuk koloni kapang
Nukleokapsid : Kesatuan antara kapsid dengan genomnya, merupakan sebutan
lain dari virion
Parasit obligat : Sebutan untuk sifat virus yang mutlak / harus hidup didalam sel
seluler yang hidup
Partikel Dane : Virion utuh virus Hepatitis B
Patogen : Mikroorganisme yang dalam kondisi sehat merupakan flora
oportunistik normal, tapi pada kondisi tertentu, misalnya daya tahan tubuh
pasien rendah, dapat menyebabkan penyakit
PDA : Agar Dkstrosa Kentang, medium perbenihan fungi patogen
Penyakit : Penyakit yang virus atau mikroorganismenya ditularkan melalui
bloodborne darah atau cairan tubuh lainnya (misalnya Hepatitis B, C, D dan
HIV/AIDS)
Pirogen : Zat yang dapat menyebabkan demam, berasal dari luar tubuh
(seperti toksin atau produk bakteri atau bakteri) yang dapat
merangsang pirogen endogen (sitokin) yang merangsang
hipotalamus uantuk meningkatkan suhu tubuh
Pseudomembran : Selaput palsu (selaput yang mudah terangkat ketika dilakukan
apusan)
Pustula vesikular : Penyakit kulit yang berupa lepuhan dan berisi pus (nanah)
Replikasi : Cara virus memperbanyak diri
Respon imun Respon imun yang diperantarai oleh sel-sel pertahanan
seluler
Respon imun : Respon imun yang diperantarai oleh antibodi
humopral
Ruptur : Robek
SAB : Agar Dekstrosa Saboraud, medium perbenihan fungi patogen
Sel makrofaga : Sel-sel darah putih yang bertugas memakan atau membunuh
bakteri atau mikroorganisme asing yang masuk tubuh
Sel malfungsi : Sel-sel yang telah diinfeksi virus atau sel-sel kanker (sel yang
fungsinya salah)
Sel memori : Sebutan lain untuk sel plasma, yang pada dasarnya adalah sel
Limfosit B yang sedang menghasilkan antibody. Sel memori
beredar dalam darah dan mempunyai ingatan yang panjang,
dalam arti jika tubuh kemasukan bakteri atau virus sejenis, maka
sel memori langsung menghasilkan antibody untuk antigen
tersebut.
Septa : Dinding pemisah yang memisahkan unit-unit sel hifa
Simptom : Gejala, keluhan subyektif yang dirasakan seseorang
143
Stem cell : Sel-sel induk, misalnya stem cell sel darah (hematopoetik)
terdapat di sumsum tulang dan hepar janin
Terapi : Terapi yang dapat menekan/ menurunkan daya tahan tubuh
imunosupresif
Terapi profilaksis : Terapi untuk menjaga atau mencegah suatu penyakit
Thrush : Sariawan
Transplasental : Melalui plasenta
Virion : Pertikel virus yang terdiri dari genom (asam nukleat : DNA/RNA)
dan kapsid
Viropexis : Virus masuk kedalam sel inang
Xerostomia : Kekeringan rongga mulut
Yeast : Bentuk fungi bersel tunggal (= ragi)
144
Daftar Pustaka
Dental Students. New York: Oxford Universitu Press.
Mosby,Inc St.Louis.
London.
Surjawidjaja JE, Saputra L.2002. Buku Saku Imunologi. Berorientasi pada Kasus Klinik.
Tanggerang: Binarupa Aksara Pub.
145
BAB III
INFEKSI NOSOKOMIAL DAN TEKNIK PENCEGAHAN
INFEKSI SILANG
Drg.Rr. Megananda Hiranya Putri, M.Kes
PENDAHULUAN
Infeksi nosokomial adalah infeksi yang didapat dan berkembang saat seseorang berada
di lingkungan rumah sakit. Contoh dari infeksi nosokomial adalah pasien tertular infeksi dari
staf rumah sakit atau saat berkunjung ke rumah sakit. Infeksi nosokomial ini terjadi di
seluruh dunia dan berpengaruh buruk pada kondisi kesehatan di negara-negara miskin dan
berkembang. Infeksi nosokomial ini termasuk salah satu penyebab kematian terbesar pada
pasien yang menjalani perawatan di rumah sakit.
Menurut data WHO tahun 2005, lebih dari separuh bayi baru lahir yang dirawat di
bagian perawatan bayi di rumah sakit di Brasil dan Indonesia tertular infeksi nosokomial.
Angka kematian kasus tersebut mencapai 12-52 %. Infeksi nosokomial bisa menyebabkan
pasien terkena bermacam-macam penyakit. Beberapa penyakit yang paling sering terjadi
akibat infeksi nosokomial adalah : infeksi saluran kemih, infeksi aliran darah, pneumonia dan
iInfeksi pada luka operasi (infeksi tempat pembedahan).
Infeksi nosokomial terjadi ketika pasien di sebuah rumah sakit tertular infeksi yang
berasal dari bakteri. Bakteri tersebut bisa menulari pasien karena keteledoran staf rumah
sakit dan tidak berjalannya prosedur kebersihan dengan benar.
Infeksi silang adalah penularan mikroorganisme penyebab infeksi antar pasien, atau
antara pasien dengan staf rumah sakit atau antar staf didalam lingkungan rumah sakit/
sarana pelayanan kesehatan lainnya. Salah satu cara untuk memutus mata rantai infeksi
silang adalah dengan melaksanakan prosedur sterilisasi atau disinfeksi peralatan maupun
sarana penunjang kesehatan dengan tepat.
Setelah kita mengenal berbagai macam mikroorganisme pathogen (bakteri, virus,
jamur) pada Bab I dan II, maupun mikroorganisme yang menjadi flora normal ditubuh
manusia, maka pada Bab III ini kita akan membahas salah satu dampak infeksi yang terjadi di
lingkungan rumah sakit dan cara pencegahannya melalui penerapan prosedur sterilisasi dan
disinfeksi yang benar.
Pelajarilah dengan sungguh-sungguh Bab III ini. Setelah mempelajarinya mahasiswa
akan mampu :
1) Menjelaskan mengenai pengertian, frekuensi dan jenis infeksi nosocomial, dampak
infeksi, pencegahan infeksi nosocomial dan 3 macam kewaspadaan berdasarkan
penularan yang dapat diupayakan untuk mencegah terjadinya infeksi nosocomial.
2) Menjelaskan mengenai pengertian sterilisasi, penanganan instrument sebelum
sterilisasi, teknik sterilisasi instrument dan penanganan instrument steril.
146
3) Menjelaskan mengenai pengertian, metode disinfeksi, sifat disinfeksi yang ideal, cara
kerja dan kondisi yang mempengaruhi disinfeksi dan potensi disinfektan.
4) Menjelaskan mengenai macam-macam disinfektan dan antiseptic yang digunakan di
kedokteran gigi.
147
 MIKROBIOLOGI KEPERAWATAN GIGI 
Topik 1
Infeksi Nosokomial
Infeksi nosokomial adalah infeksi yang didapat dari rumah sakit. Kondisi ini merujuk
pada keadaan bahwa pada saat pasien masuk ke rumah sakit, pasien tidak sedang
mengalami infeksi atau tidak dalam masa inkubasi. Nosokomial menunjukkan hubungan
antara perawatan dan timbulnya infeksi. Hal itu adalah kriteria yang berkaitan dengan
waktu, bukan hubungan sebab – akibat.
Infeksi nosokomial merupakan fokus penting pencegahan infeksi di semua negara,
namun dinegara berkembang infeksi ini adalah penyebab utama penyakit dan kematian yang
dapat dicegah. Jenisnya yang paling penting adalah :
 Infeksi saluran kencing, pneumonia dan diare,
 Infeksi sesudah pembedahan dan prosedur medis invasif, dan
 Infeksi maternal dan neonatal
Organisme yang menyebabkan infeksi nosokomial biasanya datang dari tubuh pasien
sendiri (flora endogen). Juga dapat diperoleh dari kontak dengan staf (kontaminasi silang),
instrumen dan jarum terkontaminasi dan lingkungan (flora eksogen). Karena pasien
umumnya selalu berpindah-pindah dan waktu rawat di rumah sakit lebih pendek, pasien
sering dipulangkan sebelum infeksi menjadi nyata (timbul gejala). Kenyataannya sebagian
besar infeksi nosokomial pada pasien rawat inap –dan rawat jalan- menjadi nyata setelah
mereka pulang. Akibatnya seringkali susah menentukan apakah sumber organisme yang
menyebabkan infeksi itu endaogen atau eksogen.
Kejadian infeksi nosokomial di negara berkembang jauh lebih tinggi, terutama infeksi
yang umumnya dapat dicegah (misalnya infeksi pasca bedah seperti seksio sesarea). Di
negara-negara ini terjadinya infeksi nosokomial tinggi karena kurangnya pengawasan, praktik
pencegahan infeksi yang buruk, pemakaian sumber terbatas yang tidak tepat, dan rumah
sakit yang penuh sesak.
Faktor-faktor yang berperan adalah : (1) Standar dan praktik pelayanan transfusi darah
yang tidak mencukupi, (2) Meningkatnya penggunaan alat-alat medik invasif ( misalnya,
ventilator mekanik, kateter urin dan selang intravena sentral) tanpa pelatihan atau
dukungan laboratorium yang cukup, (3) Penggunaan cairan intravena yang terkontaminasi,
terutama buatan rumah sakit sendiri, (4) Resistensi antibiotika karena penggunaan
antibiotika spektrum luas secara berlebihan, dan (5) Suntikan yang tidak aman dan tidak
perlu.
148
A. FREKUENSI DAN JENIS INFEKSI NOSOKOMIAL
Infeksi nosokomial merupakan suatu masalah yang nyata di seluruh dunia dan terus
meningkat (Alvarado, 2000).Contohnya, kejadian infeksi nosokomial berkisar dari terendah
sebanyak 1% di beberapa negara Eropa dan Amerika, hingga 40% di beberapa tempat di
Asia, Amerika Latin, dan Sub-Sahara Afrika (Lynch , 1997). Pada 1987, suatu survei prevalensi
yang meliputi 55 rumah sakit di 14 negara berkembang pada empat wilayah WHO (Eropa,
Mediterania Timur, Asia Tenggara dan Pasifik Barat) menemukan rata-rata 8,7% dari seluruh
pasien rumah sakit menderita infeksi nosokomial (Thikomirov, 1987). Angka kejadian ini
belum mencerminkan keadaan saat ini, karena pada saat itu pandemik HIV / AIDS baru saja
mulai. Terlebih lagi, survey tidak mengikutkan negara di Afrika, dimana kejadian infeksi
nosokomial jauh lebih tinggi. Walaupun demikian, survei memberikan beberapa pedoman
tentang infeksi nosokomial apa yang sering terjadi di negara berkembang.
Infeksi tempat pembedahan (ITP), infeksi saluran kencing dan infeksi saluran napas
bawah (pneumonia) merupakan jenis utama infeksi nosokomial yang dilaporkan terjadi di
negara berkembang. Urutan ini berbeda dengan yang dilaporkan di AS, misalnya, infeksi
saluran kencing dan saluran pernafasan lebih umum, diikuti oleh infeksi tempat pembedahan
(Emori dan Gaynes, 1993).
Penelitian WHO dan lain-lain, juga menemukan bahwa prevalensi infeksi nosokomial
yang tertinggi terjadi di ICU, perawatan bedah akut, dan bangsal ortopedi. Tidak
mengherankan apabila kejadian infeksi lebih tinggi diantara pasien yang lebih rentan karena
usia tua, dan beratnya penyakit yang sedang diderita.
B. DAMPAK INFEKSI NOSOKOMIAL
Infeksi nosokomial menambah ketidakberdayaan fungsional, tekanan emosional, dan

kadang-kadang pada beberapa kasus akan menyebabkan kondisi kecacatan sehingga
menurunkan kualitas hidup. Infeksi nosokomial saat ini juga merupakan salah satu penyebab
kematian (Ponce-de-Leon, 1991).
Dampak infeksi nosokomial lebih jelas di negara miskin, terutama yang dilanda HIV /
AIDS, karena temuan terakhir membuktikan bahwa pelayanan medis yang tidak aman
merupakan faktor penting dalam transmisi HIV ( Gisslquist , 2002).
Selama 10 -20 tahun terakhir belum banyak kemajuan dalam mengatasi masalah
mendasar yang menjadi penyebab meningkatnya kejadian infeksi nosokomial. Infeksi
nosokomial meningkatkan biaya pelayanan kesehatan di negara-negara yang kurang mampu,
karena meningkatnya :
 lama perawatan di rumah sakit
 terapi dengan obat-obat mahal (seperti obat antiretroviral untuk HIV / AIDS, dan
antibiotika), dan
 penggunaan pelayanan lain (seperti pemeriksaan laboratorium, rontgen, transfusi).
149
C. PENCEGAHAN INFEKSI NOSOKOMIAL
Sebagian besar infeksi dapat dicegah dengan strategi yang telah tersedia, secara relatif
murah, yaitu :
 mentaati praktik pencegahan infeksi yang dianjurkan, terutama kebersihan dan
kesehatan tangan serta pemakaian sarung tangan.
 memperhatikan dengan seksama proses yang telah terbukti bermanfaat untuk
dekontaminasi dan pencucian peralatan dan benda lain yang kotor, diikuti dengan
sterilisasi atau disinfeksi tingkat tinggi ; dan
 meningkatkan keamanan dalam ruang operasi dan area berisiko tinggi lainnya ( ICU, Poli
Bedah, Poli Penyakit Menular, Unit Stroke, Unit Kanker, Laundry, Tempat Pembuangan
Sampah, dan lain-lain) , dimana kecelakaan perlukaan yang sangat serius dan paparan
pada agen penyebab infeksi sering terjadi.
Sayang sekali tidak semua infeksi nosokomial dapat dicegah. Contohnya, beberapa
merupakan pengaruh bertambahnya usia, penyakit kronis seperti diabetes yang tidak
terkontrol, penyakit ginjal berat atau emfisema pulmonum berat, kekurangan gizi berat,
perawatan dengan obat-obatan tertentu (seperti antimikroba, kortikosteroid dan obat-obat
lainnya yang dapat menurunkan imunitas), bertambahnya dampak AIDS (misalnya, infeksi
oportunistik) dan radiasi.
D. KEWASPADAAN BERDASARKAN PENULARAN
Walaupun penyebaran penyakit infeksi di rumah sakit telah dikenal sejak lama,
pemahaman bagaimana mencegah infeksi nosokomial ( infeksi yang didapat di rumah sakit )
dan implementasi secara baik masih sulit. Penularan infeksi nosokomial memerlukan 3
unsur, yaitu sumber mikroorganisme, sasaran yang sensitif, dan cara penularan. Jika
digambarkan dalam satu bagan, unsur infeksi nosokomial dapat ditulis sebagai berikut :
150
Gambar 3.1 Unsur

Unsur-unsur Infeksi Nosokomial
Sumber: Mulyanti, 2011 hal.133
Panduan isolasi baru yang dikeluarkan oleh CDC tahun 1996 mencakupi pendekatan 2
tingkat, yaitu : Kewaspadaan Baku yang berlaku pada semua pasien dan klien yang
mengunjungi fasilitas kesehatan, dan Kewaspadaan Berdasarkan Penularan, berlaku
terutama
ama untuk pasien di rumah sakit (Garner dan HICPAC, 1996).
1. Kewaspadaan Melalui Udara

Kewaspadaan ini dirancang untuk mengurangi penularan nosokomial dari partikel < 5
µm dapat berada di udara beberapa jam dan dapat menyebar dengan luas. Mikroorganisme
menyebar
yebar melalui udara, termasuk tuberkulosis (TBC), cacar air (Virus varisela) dan Campak
(Rubeola). Kewaspadaan melalui udara perlu dianjurkan pada pasien-pasien pasien yang sudah
diketahui atau tersangka menderita penyakit
penyakit-penyakit
penyakit ini. Sebagai contoh, seorang pasien
HIV yang batuk, berkeringat malam atau demam perlu kewaspadaan melalui udara sampai
TB dapat disingkirkan.
Upaya kewaspadaan melalui udara dapat terlihat dalam tabel 3.1 berikut ini :
151
Tabel 3.1 Kewaspadaan Melalui Udara
Perawatan Pasien  Kamar khusus

 Tutup pintu
 Udara di kamar dialirkan keluar
(tekanan negatif, pakai kipas /
exhaust)
 Jika tidak ada kamar khusus,
rawat bersama pasien-pasien
yang berpenyakit sama, tp tidak
dengan infeksi lain ( = Kohor)
 Periksa kerentanan tamu
sebelum berkunjung ke pasien
(besuk).
Perlindungan pernafasan  Pakai masker
 Jika tersangka TBC, pakai alat
bantu napas
 Jika campak atau cacar air : tidak
perlu masker, orang yang sensitif
jangan dekat-dekat
 Masker dilepas setelah keluar
kamar, buang ke tempat sampah
khusus / tertutup
Transportasi Pasien  Batasi transportasi pasien
 Selama transportasi, pasien pakai
masker
 Beritahu penerima pasien
Diadaptasi dari Etna Communication 2000
2. Kewaspadaan Percikan
Kewaspadaan ini mengurangi risiko penularan nosokomial patogen melalui butir-butir
percikan dengan ukuran > 5µm (misalnya H. Influenzae, N.meningitidis, flu, campak dan
cacar air). Kondisi lain misalnya difteri, pertusis (batuk rejan), pneumonia dan faringitis (
demam pada bayi atau anak-anak).
Kewaspadaan percikan merupakan kewaspadaan yang lebih sederhana daripada
kewaspadaan melalui udara karena sisa partikel berada di udara dalam waktu singkat. Oleh
karena itu kontak dengan sumber harus tertutup untuk penjamu yang rentan.
Upaya kewaspadaan melalui percikan dapat terlihat dalam tabel 3,2 berikut ini :
152
Tabel 3.2 Kewaspadaan Melalui Percikan
Penempatan pasien  Kamar khusus

 Jika tidak ada kamar khusus, rawat
bersama pasien-pasien yang berpenyakit
sama, tetapi tidak dengan infeksi lain
( = Kohor)
 Jika tidak ada fasilitas, pisahkan dengan
jarak 1 meter diantara pasien
Perlindungan  Pakai masker jika berjarak ≤ 1 meter dari
pernafasan pasien
Transportasi Pasien  Batasi hanya jika perlu
 Selama transportasi, pasien pakai masker
 Beritahu penerima pasien
3. Kewaspadaan Kontak
Kewaspadaan ini mengurangi risiko penularan organisme dari pasien terinfeksi atau
terkoloni baik langsung maupun tidak langsung. Hal ini merupakan indikasi bagi pasien
terinfeksi ataupun terkoloni dengan masuknya patogen (Hepatitis A atau virus Echo), Herpes
Simpleks dan virus Demam Berdarah dan bakteri yang resisten terhadap beberapa obat
(antibiotik).
Cacar air disebarkan melalui udara dan kontak pada berbagai stadium penyakit.
Penularan virus adalah salah satu penyebaran secara kontak langsung di antara anak-anak.
Sebagai tambahan, kewaspadaan kontak harus diimplementasikan pada pasien dengan
infeksi basah atau memakai drain (abses, herpes zoster impetigo, konjungtivitis, skabies dan
luka basah ).
Upaya kewaspadaan kontak dapat terlihat dalam tabel 3.3 berikut ini :
153
Tabel 3.3 Kewaspadaan Kontak
Penempatan pasien  Kamar khusus, pintu boleh terbuka

 Kohor
Sarung Tangan  Pakai sarung tangan bersih, baru masuk
ruangan
 Ganti sarung tangan setelah kontak
dengan barang-barang terinfeksi ( faeses,
luka yang terpasang drain )
 Buka sarung tangan sebelum
meninggalkan pasien
Cuci Tangan  Cuci tangan setelah melepas sarung

tangan, sesuai prosedur, memakai sabun
anti bakteri atau larutan antiseptik.
 Jangan sentuh permukaan atau benda-
benda yang potensi menularkan sebelum
meninggalkan ruangan
Pakaian dan  Gunakan pakaian bersih, tidak perlu

perlengkapan steril waktu masuk ke ruangan pasien
pelindung  Ganti pakaian sebelum meninggalkan
ruangan
Transportasi Pasien  Batasi hanya jika perlu

 Selama transportasi, jaga supaya
risiko penularan dari mikroorganisme
minimal
Perlengkapan  Jika mungkin 1 pasien, 1 alat

perawatan pasien  Bersihkan dan disinfeksi semua
peralatan sesudah dipakai
154
Latihan

esensinya saja !
1) Apa yang dimaksud dengan infeksi nosokomial ? Sebutkan 3 contohnya !
2) Faktor-faktor apa yang berperan untuk terjadninya infeksi nosokomial ?
3) Sebutkan 5 macam sumber infeksi nosokomial !
4) Jelaskan 3 cara penularan infeksi nosocomial !
5) Jelaskan apa yang dimaksud dengan Kewaspadaan melalui udara !
6) Jelaskan apa yang dimaksud dengan Kewaspadaan melalui percikan !
7) Jelaskan apa yang dimaksud dengan Kewaspadaan melalui kontak !

1) Gambaran umum infeksi nosokomial
2) Frekuensi dan jenis infeksi nosokomial
3) Pencegahan infeksi nosokomial
4) Kewaspadaan berdasarkan penularan
Ringkasan
Infeksi nosokomial adalah infeksi yang didapat dan berkembang saat seseorang berada
di lingkungan rumah sakit. Jenisnya yang penting adalah : infeksi saluran kencing, infeksi
tempat pembedahan dan prosedur medis invasive, dan infeksi maternal dan neonatal.
Organisme penyebab infeksi bisa bersumber endogen (dari dalam tubuh pasien
sendiri) maupun eksogen (dari lingkungan rumah sakit). Infeksi ini berdampak pada
meningginya biaya perawatan.
Tenaga kesehatan perlu memahami mengenai sumber, sasaran yang sensitif dan cara
penularannya. Cara pencegahan infeksi nosokomial yaitu melalui kewaspadaan berdasarkan
penularan, yaitu kewaspadaan melalui udara, percikan dan kontak
155
Tes 1
1) Seorang pasien yang mengalami radang usus buntu (apendisitis) menjalani operasi
pengangkatan usus buntunya di sebuah rumah sakit type C. Pada hari kedua kateter
kencing masih terpakai. Luka pasca operasi dihari kedua terlihat baik, tapi suhu tubuh
pasien meningkat karena terjadi radang. Jenis infeksi nosokomial yang mungkin dialami
oleh pasien tersebut adalah :
A. Infeksi tempat pembedahan
B. Infeksi dari tangan perawat
C. Infeksi dari ruang operasi
D. Infeksi dari pemakaian kateter kencing
E. Infeksi akibat alat-alat bedah yang kurang steril.
2) Seorang perawat yang melakukan prosedur cuci tangan dengan benar setelah
menangani pasien yang berpenyakit kulit, maka ia telah melaksanakan :
A. Kewaspadaan melalui udara
B. Kewaspadaan melalui percikan
C. Kewaspadaan kontak
D. Kewaspadaan universal
E. Kewaspadaan pribadi
3) Contoh infeksi nosokomial yang bakteri penyebabnya berasal dari tubuh pasien sendiri:
A. Infeksi saluran kencing pada pasien ICU akibat pemakaian kateter kencing
B. Petugas kesehatan terkena demam berdarah pada saat wabah dengue di RS
C. Petugas kebersihan RS terkena Hepatitis B akibat tertusuk waktu mengambil
limbah tajam
D. Bayi-bayi yang akan dilakukan operasi bibir sumbing terkena ISPA pada saat
rawat inap persiapan operasi
E. Bidan terpapar virus HIV akibat terkena cairan ketuban pasien
4) Kemungkinan terjadinya infeksi tempat pembedahan (ITP) adalah :

A. Operasi dalam waktu lama
B. Angka kuman di ruang operasi tinggi
C. Prosedur sterilisasi ruangan dan alat-alat dibawah standar
D. Semua jawaban di atas benar
E. Ada salah satu jawaban yang tidak benar
156
5) Menempatkan pasien-pasien yang berpenyakit sama dalam satu ruang perawatan

dikenal dengan istilah :
A. Imunosupresif
B. Karier kronis
C. Kohor
D. Oportunistik
E. Emfisema
6) Kondisi pasien yang mempermudah terjadinya infeksi nosokomial :

A. Pasien dengan penyakit kronis berat
B. Manula
C. Pasien yang mendapat kemoterapi
D. Semua pernyataan diatas benar
E. Salah satu pernyataan diatas tidak benar
7) Jika merawat pasien dengan infeksi TBC, maka :

A. Pasien sebaiknya tidak dijenguk
B. Pasien harus ditempatkan di kamar khusus
C. Pengunjung pasien tidak perlu memakai masker
D. Exhaust fan dapat diganti dengan AC
E. Pengambilan foto thorax sebaiknya dilakukan di ruang perawatan
157
Topik 2
Sterilisasi dan Disinfeksi di Bidang Kedokteran Gigi
A. STERILISASI
1. Pengertian
Sterilisasi yaitu proses yang menghancurkan semua bentuk kehidupan. Suatu benda
steril dipandang dari sudut mikrobiologi, artinya bebas dari semua bentuk kehidupan. Suatu
benda atau substansi hanya dapat steril atau tidak steril, tidak akan pernah mungkin
setengah steril atau hampir steril.
Ada 3 macam proses sterilisasi yang digunakan di kedokteran gigi yaitu :
a. Sterilisasi panas
Contohnya autoklaf, dry heat , chemiclav
b. Sterilisasi gas
Contohnya gas ethylene oxide
c. Sterilisasi dengan cairan kimia
Contohnya larutan glutaraldehide 2%
Dekontaminasi yaitu suatu proses yang membuat benda mati lebih aman untuk
ditangani oleh petugas sebelum di bersihkan ( misalnya menginaktivasi HBV, HBC, dan HIV)
sehingga dapat mengurangi jumlah bakteri.
2. Penanganan Instrumen Sebelum Sterilisasi

Setiap proses sterilisasi dapat dipengaruhi oleh kotoran yang menumpuk seperti darah
atau saliva. Jadi persyaratan awal untuk penanganan instrumen mencakup pembersihan
menyeluruh dengan menghilangkan semua bahan organik yang terkumpul (dekontaminasi).
Instrumen yang telah terkontaminasi harus di tangani secara hati-hati terutama untuk
alat-alat yang tajam. Untuk menghindari terjadinya infeksi silang seperti tertusuknya atau
luka dari alat –alat yang tajam, alat pelindung diri seperti sarung tangan, masker, kacamata
pelindung dan baju pelindung harus digunakan selama prosedur ini. Sarung tangan kerja
yang tebal, tahan terhadap tusukan harus digunakan selama pembersihan, penyikatan, atau
memegang instrumen. Sarung tangan pemeriksaan dari lateks atau sarung tangan bedah
tidak dapat digunakan sebagai pengganti karena mudah robek dan tidak memberikan
perlindungan yang memadai.
a. Menyimpan instrumen kotor

Instrumen yang telah digunakan letakan pada tempat yang berisi larutan disinfektan
biasanya menggunakan larutan klorin 0,5% , dengan tujuan untuk mencegah mengeringnya
saliva dan darah yang menempel pada instrument dan mengurangi jumlah mikroorganisme.
Perendaman instrumen yang terlalu lama tidak dianjurkan karena dapat menyebabkan karat
pada beberapa instrumen. Larutan disinfektan yang digunakan untuk merendam harus
dibuang sekurang-kurang sehari sekali atau apabila larutan detergen terlihat kotor.
158
Gambar 3.2 Perendaman instrumen dalam larutan disinfektan

Samaranayake LP. 2002.
b. Membersihkan Instrumen
Merupakan tahap yang penting sebelum dilakukan sterilisasi atau disinfeksi. Hal ini
untuk mengurangi jumlah mikroorganisme dan menghilangkan darah, saliva dan material-
material lainnya. Ada 3 macam metode / alat untuk membersihkan instrumen yaitu :
 Pembersihan instrumen dengan alat ultra sonik
Alat ultra sonik menghasilkan gelombang suara berfrekuensi tinggi sehingga dapat
memecahkan sel-sel mikroorganisme serta membersihkan (menghilangkan)
mikroorganisme dari peralatan. Pembersih ultrasonik lebih efisien untuk membersihkan
bahan organik dari peralatan dibandingkan dengan penyikatan secara mekanis.
 Pembersihan instrumen secara manual
Penyikatan dengan menggunakan tangan dapat dilakukan pada tahapan ini, walaupun
harus hati-hati untuk mencegah terjadinya luka.
Penyikatan instrumen yang telah terkontaminasi ini merupakan metode yang efektif
untuk menghilangkan debris dan kotoran dari permukaan alat. Seluruh permukaan alat
harus disikat dan dikerjakannya didalam larutan pembersih jangan dibersihkan /disikat
dibawah kucuran air kran hal ini untuk menghindari timbulnya percikan. Sikat yang
digunakan lebih baik yang bertangkai panjang.
Teknik penyikatan ini sebenarnya tidak dianjurkan untuk dilakukan secara rutin karena,
alat yang terkontaminasi langsung kontak dengan tangan operator sehingga
memungkinkan tertusuknya oleh alat-alat tajam.
159
Gambar 3.3. Pencucian dengan alat ultra sonik

 Pembersihan instrumen dengan mesin pencuci alat

Mesin ini dirancang untuk membersihkan alat –alat medis dan kedokteran gigi. Alat ini
secara otomatis dapat membersihkan dan mencuci instrumen dengan menggunakan air
panas sehingga sekaligus dapat mendisinfeksi alat-alat yang kotor oleh karena itu disebut
“ washer desinfector “
c. Pengemasan Instrumen
Instrumen setelah dicuci dan dikeringkan harus dikemas / dibungkus untuk kemudian
disterilkan. Hal tersebut untuk memudahkan pengambilan alat-alat sesuai kebututuhan
selain itu juga untuk mempertahankan agar instrumen tetap terjaga kesterilannya.
Instrumen yang akan disterilkan dapat dikemas atau di simpan dalam kantong, tas, baki
instrumen ( cassettes ). Untuk menguji apakah alat yang disterilkan sudah steril atau belum,
maka digunakan indikator biologi atau kimia yang dimasukkan kedalam kantong selama
sterilisasi.
160
Gambar 3.4. Pengemasan dengan cara bungkus

161
Gambar 3.5. Tempat instrumen ( cassetes ) Resin (A) ; Metal (B)

Gambar 3.6. Kantung plastik

3. Sterilisasi Instrumen
Pemakaian panas sudah sejak lama dikenal sebagai metode yang paling efisien dan
dapat diandalkan untuk sterilisasi instrumen. Penggunaan suhu tinggi digabung dengan
kelembaban tinggi merupakan salah satu metode paling efektif untuk mematikan
mikroorganisme.
me. Suhu tinggi juga dapat diberikan sebagai panas kering. Panas lembab
mematikan mikroorganisme dengan jauh lebih cepat dan efektif dibandingkan dengan panas
kering.
162
Sel vegetatif bakteri jauh lebih peka terhadap panas dibandingkan dengan sporanya.
Kebanyakan sel bakteri dapat dimatikan dalam waktu 5 sampai 10 menit pada suhu 60
sampai 70 derajat celsius dengan panas lembab. Sedangkan spora bakteri hanya akan
terbunuh oleh suhu yang dipertahankan diatas 100 derajat celsius selama jangka waktu yang
lama.
a. Sterilisasi uap
Pemanasan dengan uap bertekanan merupakan cara sterilisasi yang efektif sebab
dengan adanya kondensasi akan terbebaskan energy dan membentuk air yang berpotensi
mematikan mikroorganisme. Selama kondensasi dalam volume yang tetap akan terjadi
penetrasi panas ke dalam alat atau bahan yang di sterilkan.
Pada pemakaian autoklaf terdapat beberapa hal yang harus di perhatikan, yaitu:
 Autoklaf tidak boleh diisi penuh dengan alat atau bahan yang akan di sterilkan
 Jumlah air dalam autoklaf harus di pantau dan diganti setiap pemakaiannya
 Autoklaf harus diuji sterilitasnya secara berkala dan dirawat untuk mencegah kerusakan
selama penyimpanan
 Indikator mekanik autoklaf di gunakan untuk memonitor kualitas sterilisasinya
 Setelah selesai sterilisasi dengan autoklaf alat-alat harus di keringkan untuk
menghilangkan kelembabannya
Karakteristik sterilisasi autoklaf :

 Temperatur : 121°C (°F)
 Tekanan uap 15 pound
 Waktu putar selama 15-20 menit.
Persyaratan pengemasan menggunakan bahan yang memungkinkan uap dapat

berpenetrasi. Bahan yang cocok digunakan untuk pengemasan adalah kertas, kantung
plastik nilon atau kain tipis dan wadah / tempat yang berlubang-lubang. Sedangkan bahan
tidak cocok adalah wadah logam dan kaca tertutup.
Keuntungan
a. Waktu putaran yang singkat
b. Penetrasi yang baik
c. Dapat digunakan untuk alat dari logam, kain, gelas dan karet
Kekurangan
a. Korosi dari instrumen baja karbon yang tidak terlindung
b. Alat-alat tajam menjadi tumpul
c. Kemasan tetap basah pada akhir putaran
d. Dapat merusak bahan yang peka terhadap panas
163
Pemaparan langsung terhadap uap saturasi pada 121°C selama 10 menit normalnya
dapat merusak semua bentuk kehidupan mikrobial. Waktu sterilisasi dapat bervariasi sesuai
dengan besar beban, pemakaian pembungkus instrumen yang berbeda, dan sifat bahan yang
akan disterilkan. Kebanyakan bahan pembungkus instrumen bedah dan kantung
pembungkus lainnya memungkinkan uap berpenetrasi sehingga dapat membunuh semua
bentuk mikrobial. Bahkan walaupun digunakan bahan pembungkus yang tebal, periode
sterilisasi maksimal 30 menit biasanya sudah cukup.
Korosi atau akumulasi karat pada instrumen logam juga merupakan kendala utama
pada pemakaian autoklaf untuk sterilisasi. Bahkan autoklaf yang terbaik sekalipun
mengandung cukup banyak oksigen untuk mengakibatkan terjadinya korosi baja karbon.
Sebagai pencegahan, bahan kimia yang dapat menguap pada autoklaf dan melindungi logam
dari oksidasi dapat digunakan natrium nitrit 1%.
Gambar 3.7. Autoklaf listrik

b. Pemanasan kering
Prosedur ini dikerjakan dalam oven. Hal ini berlaku bagi peralatan laboratorium seperti
cawan petri, pipet, juga minyak , serbuk serta beberapa peralatan lainnya. Benda-benda ini
disterilkan di dalam oven listrik atau gas.
Oleh karena daya penetrasi panas kering tidak sebaik panas basah, maka waktu yang
diperlukan lebih lama yaitu 1 – 2 jam. Karena daya penetrasinya kurang baik maka alat,
bahan yang disterilkan harus kontak betul dengan udara panas yang dihasilkan artinya alat,
bahan tersebut tidak boleh disimpan dalam wadah tertutup selama sterilisasi. Untuk
mensterilkan perabotan pecah belah di laboratorium, dibutuhkan suhu 160 oC selama 2 jam.
Karena udara kering kurang efisien sebagai konduktor panas ketimbang uap panas pada
temperatur yang sama, diperlukan temperatur yang lebih tinggi untuk sterilisasi. Temperatur
160 °C (320°F) waktu yang dibutuhkan 2 jam sedangkan temperatur 170°C (340°F) waktu
yang dibutuhkan 1 jam.
164
Persyaratan bahan kemasan tidak boleh menutupi alat dari panas. Bahan kemasan
yang cocok adalah kantung plastik dari nilon, kertas, wadah / tempat yang berlubang-lubang
dan aluminium foil.
Keuntungan
a. Efektif dan aman untuk sterilisasi instrument logam
b. Tidak mengakibatkan alat-alat tajam menjadi tumpul
c. Tidak menyebabkan karat/korosi
Kekurangan
a. Diperlukan waktu putaran yang lama untuk sterilisasi
b. Penetrasi buruk
c. Dapat mengubah warna dan merusak kain
d. Merusak benda-benda yang peka terhadap panas
e. Tidak dapat digunakan untuk plastik, karet dan kain
f. Temperatur tinggi dapat merusak beberapa sambungan pada alat-alat yang disterilkan
Banyak dokter gigi lebih suka menggunakan sterlisator pemanasan kering di

praktiknya karena dapat mempertahankan ketajaman ujung potong dari instrumen bedah.
Meskipun demikian, temperatur yang tinggi ini juga dapat merusak banyak bahan karet dan
bahan yang berbahan dasar plastik, melelehkan solder dari kebanyakan sendok cetak dan
melemahkan beberapa kain, serta mengubah warna kain dan bahan kertas.
Salah satu kendala yang paling umum pada pemakaian sterilisator pemanasan kering
adalah kegagalan personel klinis untuk menentukan dengan akurat interval waktu sterilisasi.
Karena penetrasi panas kering ke bagian tengah kemasan instrumen berlangsung lambat dan
tergantung baik pada besar kemasan dan tipe bahan pembungkus, kita harus memastikan
bahwa sudah diperoleh pemanasan pendahuluan dari ruang sebelum memulai siklus
sterilisasi. Kesalahan pemakaian yang umum dari peralatan ini dapat terjadi bila oven dibuka
dan instrumen segera diangkat sebelum siklus waktu sempurna.
Gambar 3.8. Dry heat sterilisator

165
c. Uap Kimia yang Tidak Tersaturasi ( Chemiclave )

Chemiclave adalah alat sterilisasi panas menggunakan cairan kimia yang terdapat dalam
ruang tertutup, uap kimia panas yang dihasilkan dapat membunuh mikroorganisme. Larutan
kimia yang digunakan terdiri dari 0,23 % formaldehid dan 72,38 % ethanol ditambah aseton,
ketone, air dan alkohol. Larutan kimia yang sudah dicampur yang ditambahkan pada unit
reservoir, harus dibeli dari pabrik, karena rasio dari masing-masing larutan berperan penting.
Prinsip kerja dari alat ini hampir sama dengan autoklaf, hanya temperatur dan tekanan yang
diperlukan pada sterilisator uap kimia adalah lebih besar daripada untuk autoklaf.
Temperatur 132°C (270°F) dengan tekanan 20 psi dan waktu yang dibutuhkan 20 menit.
Bahan kemasan yang cocok yaitu baki logam berlubang atau kertas dan bahan yang
tidak cocok adalah baki logam padat dan wadah kaca tertutup.
Sesudah peralatan dipanaskan terlebih dahulu, instrumen yang bersih, kering dan
dibungkus longgar diletakkan dalam ruang. Pembungkus kemasan harus cukup longgar untuk
memungkinkan uap kimia terkondensasi pada permukaan instrumen selama siklus sterilisasi.
Keuntungan
1. Waktu siklus singkat
2. Tidak mengakibatkan karat atau korosi pada instrumen logam, termasuk baja karbon.
3. Tidak membuat alat-alat tajam menjadi tumpul
4. Cocok untuk kawat ortodontik baja tahan karat.
Kekurangan
a. Instrumen harus benar-benar kering sebelum pemrosesan.
b. Dapat merusak plastic yang peka terhadap panas.
c. Bau bahan kimia pada daerah yang kurang ventilasi.
Gambar 3.9. Chemiclave

166
d. Gas Etilen Oksida ( Gas ETO )

Beberapa jenis gas bereaksi mematikan mikroba dengan cara merusak enzim dan
struktur biokimia dari mikroorganisme. Dari beberapa gas yang tersedia untuk sterilisasi,
etilen oksida adalah yang paling umum digunakan
Etilen Oksida pada dasarnya merupakan bahan sterilisasi kimia. Pemakaian dari bahan
gas ini diperkenalkan oleh ADA dan CDC sebagai metode sterilisasi yang akurat, terutama
untuk benda-benda yang dapat rusak akibat panas dan atau cairan. Etilen Oksida adalah gas
yang sangat tinggi daya penetrasinya dan tidak berwarna pada temperatur ruang. Bahan
kimia ini efektif sebagai bahan sporosidal, bersifat virusidal, tidak merusak alat dan menguap
tanpa sisa. Bahan-bahan seperti tube penyedot (suction tube), semua handpiece, pemegang
film radiografi, dapat disterilkan tanpa efek yang merugikan.
Etilen Oksida murni agak toksik, alergenik, aksinya lambat, dan membentuk campuran
yang mudah meledak dengan air. Karena efek toksiknya tidak selektif untuk mikroorganisme
dan potensi eksplosifnya tetap ada selama siklus sterilisasi, bahan harus diproses dalam
wadah khusus, yang ditempatkan pada daerah yang mempunyai ventilasi cukup baik.
Temperatur yang dibutuhkan adalah temperatur ruang (25°C/75°F),waktu yang
diperlukan 10-16 jam (tergantung bahan). Persyaratan bahan kemasan, dimana gas harus
dapat berpenetrasi. Bahan kemasan yang cocok adalah kertas, kantung plastik, sedangkan
bahan yang tidak cocok adalah wadah logam atau kaca yang tertutup.
Keuntungan
a. Kapasitas penetrasi yang tinggi
b. Tidak merusak bahan yang rentan terhadap panas (termasuk karet dan handpiece)
c. Cocok untuk bahan-bahan yang tidak dapat terpapar cairan.
Kekurangan
a. Membutuhkan waktu yang lama
b. Bertahan dalam cairan dan bahan karet untuk waktu yang lama
c. Menyebabkan iritasi kulit bila sisa gas tidak hilang dengan baik
d. Membutuhkan tabir percikan khusus karena dapat meledak bila ada api atau percikan
api.
167
Gambar 3.10. Sterilisator gas ETO

e. Sterilisasi Handpiece ( contra angle / straight angle )

Kemajuan teknologi mempunyai dampak pada bidang sterilisasi handpiece. Sterilisasi
dengan etilen oksida dapat digunakan untuk tujuan tersebut , tetapi masih belum begitu
praktis bila digunakan untuk pemakaian rutin. Sebagai akibat dari dilema ini praktisi
kedokteran gigi biasanya hanya mendisinfeksi permukaan luar dari handpiece. Tidak pernah
dilakukan pembersihan, disinfeksi maupun sterilisasi dari komponen bagian dalam,
walaupun daerah-daerah ini juga terpapar saliva dan darah.
Metode mutakhir yang dianjurkan untuk sterilisasi panas mencakup pemakaian
autoklaf atau chemiklave.
Ketika selesai merawat pasien, bersihkan debris dari permukaan luar alat dengan
kapas beralkohol 70%.Lepaskan bor dan handpiece dari tempatnya. Sikat bagian luar dengan
sikat dan sabun khusus untuk membersihkan sisa-sisa debris yang menempel. Bilas
handpiece dan keringkan. Jangan merendam handpiece dalam ultrasonik atau larutan
disinfektan/ sabun cair. Khusus untuk contra angle berkecepatan tinggi lakukan flushing
selama 20-30 detik untuk membersihkan saluran air. Setelah handpiece dibersihkan dan
dikeringkan lalu diberi pelumas, kemudian masukan kedalam kemasan / tempat yang
tertutup untuk kemudian disterilkan dengan autoklaf atau chemiklave.
Prinsip dasar yang sama dan persyaratan serupa juga berlaku untuk benda-benda yang sama,
seperti three way syring dan ultrasonik skaler.
168
Gambar 3.11 Anatomi bagian dalam high speed handpiece

TC = ruang untuk tekanan udara

AO = saluran tempat keluarnya udara
WO = saluran tempat keluarnya air
MAIL = saluran udara masuk
MAOL = saluran keluar apabila udara berlebih
MAO = saluran tempat keluar udara berlebih
MAI = saluran masuknya udara dari turbin
WI = tempat masuknya air
4. Penanganan Instrumen Steril

Instrumen yang sudah steril harus tetap terbungkus sampai saatnya dipergunakan.
Aturan umum adalah menggunakan pembungkus dan kantung tertutup yang mampu
mempertahankan sterilisitas selama 1 bulan. Dikeluarkannya instrumen yang sudah steril
dari kemasan dan diletakkan dalam lemari kabinet untuk digunakan nantinya adalah tidak
dianjurkan.
169
a. Pengeringan dan Pendinginan Instrumen Steril

Kantung atau wadah sterilisasi yang basah karena proses sterilisasi uap, harus
dikeringkan sebelum penyimpanan. Chemiclave dan dry heat sterilisator dapat digunakan
untuk mengeringkan alat atau kantong yang masih basah setelah di sterilkan dengan
sterilisasi uap.
Pendinginan instrumen harus dilakukan perlahan-lahan untuk menghindari
terbentuknya uap air pada permukaan instrumen. Penggunaan fan atau blower untuk
mengeringkan instrumen tidak dianjurkan karena sangat berpotensi untuk terkontaminasi
oleh udara di ruangan.
Apabila instrumen tidak dibungkus setelah disterilkan maka instrumen harus segera
dilindungi oleh penutup agar tidak terkontaminasi oleh udara di sekitarnya.
b. Penyimpanan instrumen
Tempat penyimpanan alat yang sudah disterilkan harus kering, tertutup, tidak ada
debu dan terlindung dari sumber kontaminasi. Tempat penyimpanan harus jauh dari tempat
cuci dan saluran pembuangan dan harus beberapa inchi dari langit-langit, lantai dan dinding.
Hal ini untuk mencegah keadaan lembab dari tempat penyimpanan, terperciknya oleh air,
bahan pembersih lantai. Begitu juga harus dijauhkan dari sumber panas karena dapat
menyebabkan bahan kemasan menjadi rapuh dan mudah robek.
Penyimpanan instrumen steril harus tetap dalam kantung/ kemasannya tidak boleh
dibuka, baru boleh dibuka pada waktu akan digunakan pasien. Penempatan instrumen yang
tidak dikemas dan langsung disusun di lemari atau laci tidak dianjurkan.
Kantung sterilisasi yang berisi instrumen steril baru dibuka pada saat pasien sudah
duduk di kursi gigi dan siap untuk dilakukan perawatan. Pada waktu membuka kemasan,
tangan harus bersih dan belum kontak dengan pasien.
Lemari penyimpanan atau laci sangat mudah terkontaminasi oleh jari tangan yang
kotor yang tersentuh pada waktu mengambil alat. Penyimpanan instrumen dalam lemari
maksimum 1 bulan, jika lebih dari satu bulan instrumen tidak digunakan maka instrumen
harus disterilkan kembali.
B. DISINFEKSI
Disinfeksi ialah proses yang menghancurkan sel-sel vegetatif yang menyebabkan infeksi
namun tidak mematikan sporanya. Zat kimia yang dapat mematikan sel vegetatif tetapi
belum tentu dapat mematikan bentuk-bentuk spora mikroorganisme penyebab penyakit
dikenal dengan nama disinfektan.
Sterilisasi merupakan metode yang paling aman dan efektif dalam pemrosesan alat,
tetapi peralatan sterilisasi sering tidak tersedia. Dalam keadaan demikian, Disinfeksi Tingkat
Tinggi (DTT) merupakan alternatif yang dapat diterima. Proses DTT membunuh semua
mikroorganisma (termasuk bakteri vegetatif, tuberkulosis, ragi dan virus) kecuali beberapa
endospora bakterial. DTT dapat diperoleh dengan cara merebus (boiling), mengukus (uap
panas), atau merendam alat dalam disinfektan kimiawi.
170
Disinfektan digunakan terhadap benda mati, mengapa tidak digunakan pada benda-
benda hidup karena dapat menyebabkan korosi atau iritasi kulit. Beberapa larutan
disinfektan yaitu fenol sintetik, larutan fenol, iodophor, alkohol-fenol, sodium hipoklorit dan
amonium kuartener. Disinfektan yang paling baik adalah yang bersifat tuberkolosidal dan
virusidal.
Antiseptis ialah mencegah pertumbuhan atau aktivitas mikroorganisme baik dengan
cara menghambat atau membunuh. Istilah ini biasanya digunakan terhadap zat kimia yang
digunakan pada permukaan luar dari tubuh manusia ( kulit dan mukosa) atau hewan dengan
tidak menimbulkan efek samping pada permukaan luar tubuh manusia atau hewan.
Antiseptik ialah zat kimia yang dipakai untuk maksud antisepsis.
1. Metode Panas
a. Boiling/ Merebus
Sel-sel vegetatif mikroorganisme akan terbunuh dalam waktu 10 menit dalam air
mendidih. Sebenarnya organisme ini biasanya mati dalam beberapa menit pada suhu 800 C,
namun beberapa spora bakteri dapat bertahan dalam kondisi seperti ini selama berjam-jam.
Merebus peralatan di dalam air mendidih selama waktu yang singkat lebih memungkinkan
untuk disinfeksi dari pada sterilisasi. Oleh karena itu sangat tidak tepat digunakan untuk
mensterilkan peralatan gigi.
Perebusan dalam air merupakan cara yang efektif dan praktis untuk DTT alat-alat.
Walaupun perebusan dalam air selama 20 menit akan membunuh semua bakteri vegetatif,
virus (termasuk HBV,HCV,HIV),ragi dan jamur, perebusan tidak membunuh semua
endospora.
Caranya
a. Alat yang telah didekontaminasi dan dicuci disimpan dalam wadah/panci, kemudian isi
air sampai alat terendam sekurangnya 2,5 cm air diatas alat.
b. Tutup rapat panci dan biarkan air mendidih
c. Rebus selama 20 menit di hitung dari setelah air mendidih
d. Setelah merebus 20 menit, pindahkan alat dengan korentang. Jangan biarkan alat
terus terendam dalam air karena sewaktu air mulai dingin, kuman akan masuk.
Keuntungan :
a. Alat yang digunakan sederhana
b. Mudah digunakan dan harganya murah
Kerugiannya :
a. Tidak dapat digunakan untuk bahan cair, kain, kapas dan bahan lain yang tidak tahan
panas.
b. Dapat menimbulkan karat pada alat-alat yang terbuat dari logam, oleh karena itu air
yang digunakan harus air suling atau air ledeng yang diberi 1 sendok teh sodium
carbonat 2 %
171
b. Mengukus
Cara
a. Simpan alat-alat dalam kukusan
b. Tutup panci kukusan dan didihkan sampai air mendidih
c. Kukus selama 20 menit dihitung waktunya dari uap mulai keluar
d. Biarkan alat-alat menjadi kering dalam kukusan sebelum dipakai
2. Metode secara kimia

Untuk mencegah terjadinya kontaminasi oleh kuman-kuman yang sifatnya dapat
membahayakan kehidupan manusia baik secara langsung maupun tidak langsung, maka
dilakukan tindakan pencegahan. Salah satu cara pencegahan yang digunakan adalah dengan
menggunakan bahan-bahan kimia berupa cairan disinfektan. Pemilihan disinfektan harus
dilakukan hati-hati sebab disinfektan hanya digunakan untuk satu tujuan.
Bahan-bahan kimia yang dapat menghambat pertumbuhan mikroorganisme adalah
golongan aldehid seperti glutaraldehid dan formaldehid, golongan halogen seperti Yodium,
klor sampai kepada molekul organik yang kompleks seperti persenyawaan amonium
kuartener. Berbagai bahan kimia tersebut menunjukan efek antimikrobial dalam berbagai
cara terhadap berbagai macam mikroorganisme. Efeknya terhadap permukaan benda atau
bahan juga berbeda-beda. Hal ini penting diketahui sebelum digunakan, agar dalam
penerapannya sesuai dengan yang diinginkan.
Pada label larutan anti mikroba, biasanya terlihat macam bahan disinfektan.
 Antiseptik (digunakan untuk membunuh mikroorganisme pada kulit / jaringan tubuh
lainnya)
 Disinfektan (digunakan untuk membunuh mikroorganisme pada lingkungan/ permukaan/
objek benda mati )
 Sterilan (digunakan untuk membunuh semua bentuk mikroorganisme pada lingkungan /
permukaan/objek benda mati)
Berdasarkan macam mikroorganisme yang dapat terbunuh :

 Virusidal (membunuh beberapa macam virus)
 Bakterisidal (membunuh beberapa macam bakteri)
 Fungisidal (membunuh beberapa macam jamur)
 Tuberkuloidal (membunuh bakteri tuberculosis)
 Sporisidal (membunuh spora bakteri, sehingga bisa disebut sterilan)
 Disinfektan rumah sakit (membunuh sedikitnya 3 macam bakteri yaitu Staphylococcus
aureus, Salmonella choleraesuis, Pseudomonas aeruginosa).
Cara :
a. Alat-alat yang telah di dekontaminasi dan dicuci, kemudian di keringkan
b. Rendam dalam larutan kimia lamanya tergantung instruksi dari pabrik
c. Setelah itu bilas dengan air matang/aquadest steril sampai larutan kimianya hilang
d. Keringkan dengan handuk steril
172
3. Sifat disinfektan yang ideal

 Spektrum luas
Harus selalu mempunyai spektrum antimikrobial yang seluas mungkin, artinya
dapat membunuh semua jenis mikroorganisme.
 Bekerjanya cepat
Harus selalu mempunyai aksi letal yang cepat terhadap semua bentuk vegetatif dan
spora bakteri serta jamur, protozoa, dan virus.
 Tidak dipengaruhi oleh faktor-faktor fisik
 Aktif pada keadaan adanya bahan organik seperti darah, dahak, dan feses. Harus
kompatibel (cocok) dengan sabun, deterjen, dan bahan-bahan kimia lain yang
sering digunakan.
 Tidak toksik
 Kecocokan permukaan
 Tidak boleh mengkorosi instrumen dan permukaan lain yang terbuat dari logam.
Tidak boleh merusak pakaian, karet, plastik atau bahan-bahan yang lain.
 Tidak mempunyai efek sisa pada permukaan yang didisinfeksi
 Mudah penggunaannya
 Tidak berbau
 Ekonomis
4. Keadaan yang mempengaruhi kerja disinfektan

Banyak faktor dan keadaan dapat mempengaruhi penghambatan atau pembasmian
mikroorganisme oleh bahan antimikrobial yaitu :
a. Konsentrasi atau intensitas zat antimikrobia
Mikroorganisme makin cepat terbunuh apabila konsentrasi zat antimikrobial lebih
tinggi.
b. Jumlah mikroorganisme
Diperlukan banyak waktu untuk membunuh populasi dan bila jumlah
mikroorganismenya banyak maka perlakuan harus diberikan lebih lama supaya semua
mikroorganisme tersebut mati.
c. Suhu
Kenaikan suhu yang sedang secara besar dapat menaikkan keefektifan suatu
disinfektan atau bahan antimikrobial lain
d. Spesies mikroorganisme
Spesies mikroorganisme menunjukkan kerentanan yang berbeda-beda terhadap bahan
kimia. Spesies yang dapat membentuk spora lebih sukar dibunuh dibandingkan sel
vegetatif yang sedang tumbuh.
e. Adanya bahan organik
Adanya bahan organik asing dapat menurunkan keefektifan zat kimia antimikrobial
dengan cara menginaktifkan bahan-bahan tersebut. Contohnya didalam praktik apabila
ada serum atau darah pada benda yang sedang diberi perlakuan suatu zat
antimikrobial, maka serum atau darah itu dapat menginaktifkan sebagian zat tersebut.
173
f. Keasaman atau kebasaan ( pH )

Aktivitas disinfektan seringkali dipengaruhi oleh pH contohnya glutaraldehid
aktivitasnya lebih baik pada keadaan basa sedangkan fenol lebih baik pada keadaan pH
asam.
5. Cara kerja disinfektan

Sangatlah penting untuk mengetahui bagaimana tepatnya cara kerja zat tersebut
dalam menghambat atau mematikan mikroorganisme.
Suatu sel hidup yang normal memiliki sejumlah besar enzim yang melangsungkan
proses-proses metabolik dan juga protein lainnya, asam nukleat serta senyawa-senyawa lain.
Membran semipermiabel mempertahankan integritas kandungan selular dan secara
selektif mengatur keluar masuknya zat antara sel dengan lingkungan luar. Dinding sel
merupakan pelindung bagi sel. Kerusakan salah satu daerah ini dapat mengawali terjadinya
perubahan-perubahan yang menuju kepada matinya sel tersebut. Kebanyakan disinfektan
kimia akan mengganggu sel target dengan bekerja sebagai racun protoplasma. Setiap bagian
atau semua dari ketiga bagian utama sel mikobial yang dapat terpengaruh yaitu dinding sel,
kandungan sitoplasma (terutama enzim), dan bahan nukleus.
 Merusak dinding sel
Struktur dinding sel dirusak sehingga isi dari sel mudah keluar. contohnya disinfektan
chlorheksidin, quarternary ammonium compounds, alkohol dan fenol.
 Memfiksasi dinding sel
 Pori-pori yang terdapat pada dinding sel ditutup, Contohnya formaldehid dan
glutaraldehid
 Sebagai oksidator
 Contohnya disinfektan dari golongan halogen seperti hypoklorit dan bromides.
6. Potensi disinfektan
Secara garis besar disinfektan digolongkan kedalam 3 kategori tergantung dari
kemampuan disinfektan tersebut didalam membunuh mikroorganisme.
a. High level disinfectan adalah disinfektan yang dapat membunuh bentuk spora,bakteri,
fungi dan virus, disinfektan ini aktif terhadap bakteri gram positip dan gram negatip,
spora dan mycobacterium tuberculosis contohnya glutaraldehid.
b. Intermediate level disinfectan adalah disinfektan yang dapat membunuh
mycobacterium tuberculosis, bakteri vegetatif, sebagian besar virus, dan jamur tetapi
sedikit spora, contohnya derivat klorin, iodofor.
c. Low level disinfectan adalah disinfektan yang dapat membunuh sebagian besar bakteri
dan jamur tetapi tidak dapat membunuh mycobacterium tuberculosis dan spora,
contohnya chlorheksidin, quaternary ammonium compound,fenol sederhana dan
deterjen
Bagaimana memilih disinfektan yang tepat ? ada beberapa panduan untuk memilih
dari ketiga kategori disinfektan tersebut diatas yaitu,
174
a. Berdasarkan kriteria alat kedokteran gigi sbb

 Alat kritis adalah alat-alat yang menembus kulit atau mukosa dan atau berkontak
langsung dengan jaringan terbuka atau tulang contohnya jarum suntik, tang
ekstraksi, skalpel, scaler, bur
 Alat semi kritis adalah alat-alat yang hanya menyentuh membran mukosa tidak
memasuki jaringan atau tulang contohnya kaca mulut, sonde, alat -alat
penambalan.
 Alat non kritis adalah alat-alat yang tidak kontak atau yang menyentuh kulit dan
bagian permukaan dari lingkungan praktik ( dental unit, meja, kursi )
b. Penggunaan teknik yang tepat sebagai berikut.

 Sterilisasi digunakan untuk alat-alat kritis
 Sterilisasi atau high level desinfectant digunakan untuk alat-alat semi kritis
 Intermediate dan low level desinfectant digunakan untuk alat-alat nonkritis
C. DISINFEKTAN DAN ANTISEPTIK YANG DIGUNAKAN DI KEDOKTERAN

GIGI
1. Alkohol
Etil alkohol dan isopropil alkohol sudah dipergunakan secara luas selama bertahun-
tahun sebagai disinfektan permukaan dan antiseptik kulit. Etil alkohol dan isopropil alkohol
70% dalam air untuk antiseptik kulit sebelum penyuntikan dan pencucian tangan pada
waktu operasi. Mekanisme kerja dari alkohol adalah mendenaturasi protein dan pelarut lipid
yang efekif.
Alkohol yang dikombinasikan dengan golongan aldehid dapat digunakan untuk
disinfeksi permukaan, tetapi badan yang berwenang di Amerika tidak menganjurkan hal ini
karena alkohol dapat menguap dengan cepat. Penguapan yang berlangsung cepat dari
permukaan lingkungan yang didisinfeksi dengan alkohol juga membatasi aktivitas alkohol
terhadap bakteri yang diselubungi protein dan virus, yang umum terdapat dalam cairan yang
terpercik selama prosedur perawatan gigi. Kendala lainnya meliputi sifat alkohol yang
mengorosi permukaan logam, kurangnya aktivitas sporisidal, mudah terbakar dan dapat
merusak bahan-bahan tertentu (misalnya plastik dan penutup vinil).
Pada umumnya, akohol mempunyai spektrum aktivitas mikrobial yang luas. Alkohol
tidak efektif bila ada protein jaringan, seperti yang ditemukan di dalam saliva dan darah.
Jadi, alkohol adalah bahan pembersih yang buruk bila ada bioburden.
Bakteri vegetatif dapat dimusnahkan dengan pemajanan terhadap alkohol
berkonsentrasi tinggi (optimal 70%), yang paling patogen adalah Mycobacterium
tuberculosis. Jika digunakan konsentrasi diatas 70%, dehidrasi awal dari protein mikrobial
akan memungkinkan komponen sel ini menghindar dari efek denaturasi yang merusak. Jadi,
mikroorganisme yang terpapar akan mampu tetap hidup untuk waktu yang lebih lama. Etil
alkohol relatif tidak toksik, tidak berwarna, hampir tidak berbau dan tidak berasa, dan dapat
dengan mudah menguap tanpa meninggalkan residu. Oleh karena itu sampai saat ini alkohol
masih digunakan karena murah, mudah didapat dan dapat larut dalam air.
175
2. Aldehide
Glutaraldehid dan formaldehid merupakan dua persenyawaan aldehid yang
mengendalikan populasi mikroorganisme. Mekanisme kerja aldehid adalah memecah ikatan
hidrogen dan mendenaturasi protein.
a. Glutaraldehid
Larutan glutaraldehid 2% memperlihatkan aktivitas antimikrobial berspektrum luas.
Efektif terhadap sel vegetatif bakteri, jamur, spora bakteri serta virus termasuk M.
tuberculosis.
Digunakan untuk mensterilkan peralatan medis, tetapi untuk mencapai keadaan steril
dibutuhkan waktu yang lama. Stafilokokus dan sel vegetatif akan dimatikan dalam
waktu 5 menit, Mycobacterium tuberculosis dan virus dalam waktu 10 menit,
sedangkan untuk membunuh spora diperlukan waktu 6 -10 jam.
Larutan ini bersifat non toksik dan tidak iritatif bagi penderita. Oleh karena itu, bahan
ini merupakan bahan alternatif sebagai sterilisator perendam, untuk benda-benda
yang tidak tahan terhadap sterilisasi panas olehkarena itu disebut cold sterilization.
b. Formaldehid
Persenyawaan ini berbentuk gas, yang stabil hanya pada konsentrasi tinggi dan suhu
yang tinggi. Pada suhu kamar akan mengalami polimerisasi membentuk zat padat.
Polimer yang penting diantaranya paraformaldehid, merupakan zat padat tak
berwarna yang akan segera menghasilkan formaldehid bila dipanaskan. Formaldehide
diperdagangkan dalam bentuk larutan bernama formalin. Formalin memiliki aktivitas
antimikrobial yang sangat tinggi, uap formaldehid akan mensterilkan benda dalam
ruang tertutup. Kekurangan dari formaldehid menyebabkan iritasi pada kulit dan
uapnya berbahaya.
Keuntungan
 Terdaftar pada EPA dan diakui oleh ADA
 Aktivitas biosidal yang tinggi
 Spektrum antimikrobial yang luas
 Sporisidal pada temperatur ruang sesudah 6-10 jam.
 Pada umumnya, tidak korosif
 Menembus darah, eksudat, dan debris organik.
 Daya aktifnya lama
 Bermanfaat untuk bena-benda plastik dan karet
Kekurangan
 Tidak dapat digunakan sebagai antiseptik
 Tidak dapat dipakai sebagai disinfektan permukaan
 Dapat mengiritasi jaringan dan bersifat alergi
 Menyebabkan perubahan warna pada logam
 Bila diencerkan akan bersifat korosif
176
3. Golongan Halogen
Golongan halogen beranggotakan unsur-unsur fluor, klor, brom dan yodium. Klor dan
yodium yang paling luas penggunaanya sebagai antimikrobial. Mereka membunuh sel karena
mengoksidasi protein, dengan demikian merusak membran dan menginaktifkan enzim-
enzim.
Berikut ini akan diuraikan masing-masing golongan halogen sebagai berikut.
a. Yodium
Yodium merupakan salah satu bahan germisidal yang paling tua serta paling efektif,
telah digunakan lebih dari satu abad dan telah tercatat dalam United States
Pharmacopeia sejak tahun 1830. Kelarutan yodium murni dalam air kecil sekali, namun
yodium akan segera larut bila dimasukan ke dalam alkohol, larutan kalium atau
natrium Iodida.
Larutan yodium baik dalam air maupun dalam alkohol bersifat sangat antiseptik dan
telah dipakai sejak lama sebagai antiseptik kulit sebelum proses pembedahan. Secara
tradisional, yodium juga digunakan sebagai bahan germisidal didalam bentuk yang
dikenal sebagai yodium tinktur yang merupakan campuran 2% yodium dan 2% natrium
iodida didalam 50% alkohol. Yodium juga digunakan dalam bentuk iodofor, yaitu
campuran yodium dengan zat aktif permukaan yang bekerja sebagai pembawa dan
pelarut yodium. Iodofor secara lambat melepaskan iodium dari kompleks tersebut dan
dengan demikian memiliki sifat germisidal iodium, selain itu memiliki keuntungan
tambahan yaitu tidak menimbulkan warna dan sifat iritasinya kecil. Antiseptik iodofor
ialah preparat yang bermanfaat untuk mukosa rongga mulut, terutama pada prosedur
anastesi lokal, dan pembedahan. Iodofor juga terbukti efektif sebagai antiseptik untuk
membersihkan tangan
Yodium merupakan zat yang sangat efektif terhadap segala macam bakteri, spora,
jamur dan virus. Larutan yodium terutama digunakan untuk mendisinfeksi kulit,
khususnya sebagai disinfeksi kulit sebelum operasi.
Pada konsentrasi yang tepat, yodium tidak mengganggu kulit, namun penggunaan
tinctura yodii dapat mewarnai jaringan dan iritasi local pada kulit dan kadang-kadang
reaksi alergi.
Bahan ini dapat mengiritasi, menimbulkan reaksi alergi, mengkorosi logam, menodai
kulit dan pakaian .
b. Klor
Klor sebagai gas ataupun dalam kombinasi kimiawi merupakan salah satu disinfektan
yang paling luas penggunaannya. Gas yang dimanfaatkan dalam bentuk cair, gas klor
sukar ditangani, berbahaya, kecuali jika ada peralatan yang khusus sebagai tempat
penyalurannya.
Klorin bebas memiliki warna khas (hijau) dan bau yang tajam. Sudah sejak lama klorin
dikenal sebagai deodoran dan disinfektan yang sangat baik dan dijadikan standard
pengolahan air minum di seluruh lingkungan. Adapun kekurangannya, klor dapat
diinaktifkan oleh bahan organik, keefektifannya tergantung pada pH serta memiliki bau
177
dan rasa tidak sedap. Ada banyak persenyawaan klor yang mudah digunakan dan aman
serta sama efektifnya dengan disinfektan misalnya :
Hipoklorit
Larutan hipoklorit paling banyak dipakai untuk disinfeksi dan menghilangkan bau,
karena bersifat relatif tidak membahayakan jaringan manusia, mudah ditangani, tidak
berwarna dan tidak mewarnai. Hipoklorit dengan konsentrasi tinggi dengan kadar 5 –
12 % digunakan sebagai pemutih. Dirumah-rumah sakit dipakai untuk mendisinfeksi
ruangan, permukaan-permukaan serta alat-alat non bedah. Selain itu derivat klorin
organik juga dipakai untuk mendisinfeksi air.
Hipoklorit dan povidone iodine merupakan oksidator dan dalam keadaan aktif akan
melepaskan ion halogen. Meskipun murah tetapi efektif, kekurangannya golongan ini
dapat memudahkan terjadinya korosi pada alat-alat yang terbuat dari logan dan
menjadi tidak aktif bila ada bahan organik. Contoh disinfektan ini adalah chlorox,
domestos dan betadine.
Keuntungan
 Aksi antimikrobial berlangsung cepat
 Spektrum luas: bakterisidal, tuberkulosidal, dan virusidal
 Ekonomis
 Efektif pada larutan encer
Kekurangan
 Bersifat sporosidal pada konsentrasi tinggi
 Menjadi tidak aktif apabila ada bahan organik
 Menyebabkan iritasi pada kulit dan mata
 Membuat karat logam dan merusak pakaian
 Mendegradasi plastik dan karet
 Larutan harus dibuat baru setiap hari
 Baunya tidak enak dan sukar dihilangkan
4. Fenol Dan Derivatnya

Fenol (asam karbolat ) untuk pertama kalinya dipergunakan oleh Lister sekitar tahun
1860-an didalam ruang bedah sebagai germicide untuk mencegah timbulnya infeksi pasca
bedah. Fenol telah lama digunakan sebagai standard pembanding bagi disinfektan lain guna
mengevaluasi aktivitas bakterisidalnya.
Pada konsentrasi rendah, fenol dapat mempresipitasi/mendenaturasi protein secara
aktif, dan selain itu juga merusak dinding sel dengan menurunkan tegangan permukaannya.
Fenol dan kresol berbau khas dan dapat mengiritasi jaringan. Walaupun demikian mereka
tahan terhadap pemanasan dan pengeringan serta tidak dipengaruhi oleh bahan-bahan
organik. Fenol kurang efektif terhadap spora. Penambahan halogen seperti klorin akan
meningkatkan aktifitas fenol.
178
Fenol dan kresol juga bersifat menghilangkan sakit. Oleh karena sangat toksik mereka
hanya dapat digunakan secara eksternal. Kresol beberapa kali lebih germisida dibandingkan
dengan fenol. Persenyawaan fenol dapat bersifat bakterisidal atau bakteriostatik tergantung
dari konsentrasi yang digunakan. Spora bakteri dan virus terhadap senyawa fenol lebih
resistan dibandingkan dengan sel vegetatif bakteri. Senyawa-senyawa fenol merupakan
salah satu disinfektan permukaan yang terbaik bagi benda-benda mati.
Keuntungan
 Sebagai disinfektan / sterilan instrumen atau lingkungan.
 Daya kerjanya cepat: 3 menit untuk disinfektan, dan 6 jam untuk sterilisasi
Kekurangan
 Harus diganti setiap hari
 Cara kerja sterilisasinya 24 jam
 Tidak dapat dengan mudah menembus debris organik
 Perlu digunakan sarung tangan/kacamata pelindung
 Wadah harus tertutup
 Harus cukup ventilasi untuk disinfektan permukaan
 Mengorosi wadah alumunium
5. Bisguanides
Chlorhexidine adalah salah satu contoh disinfektan bisguanides, secara luas digunakan
di kedokteran gigi sebagai disinfektan. Sebagai contoh 0,4 % Chlorhexidine dilarutkan dalam
cairan detergen dapat digunakan sebagai cairan pencuci tangan (Hibiscrub ), konsentrasi
0,2% glukonat klorheksidin dalam larutan cairan digunakan sebagai obat kumur (Corsodyl)
dan dalam konsentrasi yang besar (2%) digunakan sebagai disinfektan geligi tiruan.
Mekanisme kerjanya adalah dengan merusak permeabilitas dari dinding sel bakteri
sehingga terjadi kebocoran dan isi sel keluar dari sel sehingga sel mati.
6. Sabun dan Detergen

a. Sabun
Sabun dapat mengurangi tegangan permukaan, mengemulsikan dan menghilangkan
lemak dan kotoran. Mikroorganisme menjadi terperangkap didalam busa sabun dan
hilang setelah dibilas dengan air. Berbagai zat kimia dicampurkan dalam sabun untuk
meningkatkan aktivitas germisidalnya.
Kegunaannya dapat membersihkan kotoran dan menghilangkan mikroorganisme
secara mekanis. Efek mekanik ini penting karena bakteri bersama minyak dan partikel
lain menjadi terjaring dalam sabun dan dibuang melalui proses pencucian. Namun
sabun tidak dapat dapat digolongkan sebagai germisida, tetapi merupakan bakterisid
ringan karena kontaknya terlalu singkat untuk menghasilkan banyak efek yang
merusak. Walaupun demikian, bakteri yang lemah seperti gonokokus, meningokokus
dan pneumokokus mungkin segera mati dengan kerja kimia sabun.
179
b. Detergen
Detergen meliputi kelompok besar agen aktif - permukaan. Agen agen ini
biasanya lebih efektif terhadap organisme gram positif daripada gram negatif dan
kelihatannya mengeluarkan pengaruh disinfeksinya dengan perusakan membran
dan denaturasi protein. Detergen yang mempunyai muatan positif disebut kation,
sedangkan yang mempunyai muatan negatif disebut detergen anion, contohnya
ialah sabun.
Kelompok detergen kationik lebih germisidal dibandingkan detergen anionic.
Mekanisme kerjanya mendenaturasi protein, merusak membran sel penghambat
enzim. Contohnya setilpiridinium kloride, benzetonium kloride (phemerol),
benzalkonium kloride (zephiran). Kegunaanya sebagai disinfektan, antiseptik kulit dan
bahan sanitasi tapi kekurangannya tidak efektif terhadap spora, M. tuberculosis.
Persenyawaan amonium kuartener merupakan detergen kationi, lebih germisidal
dari pada persenyawaan anionik. Daya bakterisidal persenyawaan kuartener
sangat baik terhadap bakteri Gram positif , dan hanya sedikit yang kurang
efektif terhadap mikroorganisme Gram negatif . Persenyawaan kuartener juga aktif
terhadap jamur dan protozoa, namun nampaknya lebih resisten terhadap virus.
Namun demikian persenyawaan ini mempunyai kekurangan yaitu tidak dapat
menghambat atau mematikan spora pada bakteri dan juga tidak efektif terhadap
Mycobacterium tuberculosis.
Latihan

esensinya saja !
1) Jelaskan perbedaan pengertian antara sterilisasi, disinfeksi dan antisepsis !
2) Jelaskan 3 metode sterilisasi yang biasa digunakan di bidang kedokteran gigi
3) Penanganan instrument sebelum disterilisasi meliputi hal apa saja ?
4) Bagaimana penanganan instrumen yang sudah steril ?
5) Jelaskan cara sterilisasi contra angle setelah pemakaian !
6) Sebutkan 6 saja sifat disinfeksi yang ideal !
7) Hal-hal apa yang mempengaruhi kerja disinfektan?
8) Jelaskan 3 macam potensi disinfektan !
9) Apa yang dimaksud dengan alat kritis, semi kritis dan non kritis ? Beri contohnya
masing-masing 3 buah !
10) Sebutkan keuntungan dan kerugian larutan Glutaraldehide 2% sebagai bahan
disinfektan !
180

1) Definisi dan pengertian
2) Metode sterilisasi
3) Penanganan instrument sebelum disterilkan
4) Penanganan instrument steril
5) Sterilisasi handpiece dan contra angle
6) Sifat disinfeksi yang ideal
7) Faktor-faktor yang mempengaruhi kerja disinfektan
8) Potensi disinfektan
9) 3 macam alat kedokteran gigi
10) Disinfeksi dan antiseptic yang biasa dipakai di bidang kedokteran gigi.
Ringkasan
Sterilisasi adalah proses yang menghancurkan semua bentuk kehidupan

mikroorganisme (termasuk sporanya) pada satu bahan atau instrument. Dibidang
kedokteran gigi, metoda sterilisasi yang biasa dilakukan adalah: 1) sterilisasi dengan uap
panas bertekanan (otoklaf), 2) sterilisasi dengan udara panas (oven dan dry heat) dan 3)
sterilisasi dengan gas dan kimiawi (gas ETO, chemiclave).
Penanganan alat sebelum sterilisasi meliputi dekontaminasi, pencucian instrument dan
pengemasan. Penanganan instrument steril meliputi pengeringan dan pendinginan
instrument steril dan penyimpanan instrument.
Contra angle perlu disterilkan setelah pemakaian karena instrument ini berpotensi
menjadi sumber infeksi silang.
Disinfeksi yaitu proses menghancurkan sel-sel vegetative yang menyebabkan infeksi
namun tidak mematikan sporanya. Antisepsis adalah mencegah pertumbuhan atau aktivitas
mikroorganisme baik dengan cara menghambat/ membunuh. Biasanya diaplikasikan pada
jaringan hidup.
Metoda disinfeksi bisa melalui pemanasan (merebus, pasteurisasi) dan dengan bahan
kimia (yaitu dengan larutan disinfektan)
Potensi disinfeksi dapat dikategorikan menjadi disinfeksi tingkat tinggi (DTT), disinfeksi
tingkat sedang dan disinfeksi tingkat rendah, tergantung pada kemampuan larutan untuk
membunuh macam-macam kelompok mikroorganisme.
Disinfektan dan antiseptic yang digunakan di kedokteran gigi dapat dikelompokkan
menjadi : golongan Alkohol, Aldehide, Halogen, Fenol dan derivatnya, Bisguanides, Sabun
dan detergent. Masing-masing golongan memiliki keuntungan dan kerugiannya.
181
Tes 2
1) Pernyataan yang benar tentang disinfeksi :

A. Pada disinfeksi dapat tercapai kondisi steril
B. Larutan desinfektan dapat diaplikasikan pada jaringan hidup
C. Disinfeksi dapat dilaksanakan dengan menggunakan bahan kimia maupun
dengan cara fisik
D. Cara mendisinfeksi antara lain : merebus. mengukus dan memanaskan bahan
pada oven
E. Disinfeksi adalah cara yang tepat untuk menghilangkan mikroorganisme pada
hand instrument di kedokteran gigi.
2) Seorang Dokter gigi /perawat gigi melakukan preparasi dan penambalan kepada
seorang pasien yang berumur 40 tahun, metode sterilisasi apa yang tepat untuk
mensterilkan alat-alat penambalan
A. Dry heat sterilisasi
B. Gas Ethylen Oxide
C. Boiling
D. Perendaman dengan Klorin. 0,5 %
E. Glass Bead Sterilisasi
3) Seorang perawat gigi melakukan pemeriksaan gigi dan mulut di desa terpencil, alat-
alat yang telah digunakan di sterilkan dengan sterilisasi kimia. Cairan kimia apakah
yang dapat digunakan untuk sterilisasi alat medis diatas
A. Chlor heksidin 0,4%
B. Glutaradehide 2%
C. Hipoklorit 0,5%
D. Alkohol 70%
E. Yudium.
4) Seorang perawat gigi bekerja di sebuah puskesmas dimana kasus yang ditangani
bermacam-macam seperti pencabutan, penambalan dan pembersihan karang gigi.
Peralatan yang telah digunakan disterilkan dengan menggunakan autoklaf. Salah satu
keuntungan dari autoklaf adalah :
A. Dapat digunakan untuk alat-alat yang peka terhadap panas.
B. Kemasan tetap basah pada akhir putaran.
C. Tidak menyebabkan korosi pada alat logam.
D. Waktu yang diperlukan singkat
E. Tidak menyebabkan alat-alat menjadi tumpul.
182
5) Urutan yang benar dari penanganan instrumen sebelum disterilkan sebagai berikut
A. Merendam dalam larutan hipoklorit 0,5% - mencuci dengan sabun - mengemas
–mensterilkan
B. Merendam dalam larutan sabun – mencuci dibawah air mengalir – mengemas
mensterilkan
C. Mencuci dibawah air mengalir – megeringkan- mengemas- mensterilkan
D. Merendam dalam larutan hipoklorit 0,5% - mencuci dibawah air mengalir –
mengemas – mensterilkan.
E. Merendam dalam larutan sabun - mencuci dengan sabun - mengemas
mensterilkan
183
Kunci Jawaban Tes
Tes 1 (Infeksi Nosokomial)

1. D
2. C
3. A
4. D
5. C
6. D
7. B
Tes 2 ( Sterilisasi dan Disinfeksi )

1. C
2. C
3. B
4. D
5. A
184
Glosarium
ADA : American Dental Association, yaitu asosiasi atau organisasi dokter

gigi yang terbesar di Amerika dan merupakan pusat atau sumber
informasi kesehatan mulut untuk dokter gigi dan organisasi
profesinya.
Antisepsis : Upaya mencegah pertumbuhan atau aktivitas mikroorganisme
baik dengan cara menghambat atau membunuh dengan
menggunakan zat kimia yang digunakan pada permukaan luar
dari tubuh manusia ( kulit dan mukosa) atau hewan dengan tidak
menimbulkan efek samping pada tubuh tersebut.
Antiseptik : Bahan kimia untuk proses antisepsis
CDC : Centres for Disease Control and Prevention, yaitu organisasi yang
merupakan bagian Departemen Kesehatan dan Layanan
Kemanusiaan Amerika yang berkewajiban mengontrol dan
mencegah penyebaran penyakit menular.
Dekontaminasi : Suatu proses yang membuat benda mati lebih aman untuk
ditangani oleh petugas sebelum di bersihkan (misalnya
menginaktivasi HBV, HBC, dan HIV) sehingga dapat mengurangi
jumlah bakteri.
Disinfeksi : Suatu proses yang dapat menghancurkan sel-sel vegetatif yang
menyebabkan infeksi namun tidak mematikan sebagian atau
seluruh jenis sporanya
Disinfektan : Bahan/zat kimia untuk melakukan proses disinfeksi
Indikator biologi : Adalah sediaan berisi populasi mikroorganisme spesifik dalam
bentuk spora yang dimasukkan pada alat sterilisator bersamaan
dengan proses sterilisasi, yang fungsinya untuk proses validasi
dan kontrol proses tersebut.
Infeksi Nosokomial : Infeksi yang didapat dan berkembang saat seseorang berada di
lingkungan rumah sakit.
Infeksi maternal : Infeksi yang dialami oleh ibu hamil atau pasca melahirkan dan
dan neonatal infeksi pada bayi baru lahir
Infeksi tempat : Infeksi yang terjadi pada luka pasca pembedahan
pembedahan
Kewaspadan lewat : Kewaspadaan yang dirancang untuk mengurangi penularan
udara nosocomial dari partikel-partikel berukuran ≤ 5 µ yang berada di
udara dan dapat menyebar dengan luas
Kewaspadaan : Kewaspadaan ini mengurangi risiko penularan nosokomial
percikan patogen melalui butir-butir percikan dengan ukuran > 5µm
Kewaspadaan : Kewaspadaan yang dirancang untuk mengurangi risiko penularan
kontak organisme dari pasien terinfeksi atau terkoloni baik langsung
maupun tidak langsung.
185
Kohor : Tindakan merawat bersama pasien-pasien yang berpenyakit

sama, tetapi tidak dengan infeksi lain
Resistensi : Kondisi ketika suatu galur (strain) bakteri dalam tubuh manusia
antibiotika menjadi resisten (kebal) terhadap antibiotika.
Transportasi pasien : Tindakan memindahkan pasien dari satu tempat ke tempat lain di
rumah sakit untuk keperluan mendiagnosa, merawat atau
tindakan lain baik dengan bantuan kursi roda atau brankar.
Sterilisasi : Suatu proses atau tindakan yang bertujuan untuk
menghancurkan semua bentuk kehidupan mikroorganisme, yaitu
meliputi bakteri (bentuk vegetative maupun sporanya), virus,
fungi dan mikroorganisme lainnya.
186
Daftar Pustaka
Dental Students. New York: Oxford University Press.
Mulyanti S, Putri MH. 2011. Pengendalian Infeksi Silang di Klinik Gigi. 1st ed. EGC, Jakarta
Mosby, Inc St.Louis.
Rosita R et all. 2007. Pedoman Pencegahan dan Pengendalian Infeksi di Rumah Sakit dan
Fasilitas Pelayanan Kesehatan Lainnya. Depkes, JHPIEGO Corp, Perdalin, Jakarta.
London.
187
BAB IV
PENGENALAN ALAT DAN BAHAN PRAKTEK
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Yodong, S,ST, MH.Kes
A. PENDAHULUAN
Selamat Anda sudah selesai mengikuti teori mata kuliah mikrobiologi dengan harapan
Anda dapat mengaplikasikan teori pada praktik laboratorium ditatanan nyata yaitu di Rumah
Sakit, Puskesmas, dan Klinik, dalam mata kuliah, khususnya mata kuliah praktik Mikrobiologi.
Pembelajaran praktik merupakan bagian penting dari proses pendidikan yang kompleks dan
harus terintegrasi dalam seluruh program pendidikan yang mengacu kepada kurikulum,
khususnya untuk pencapaian tujuan akhir program pembelajaran bagi lulusan’ Pembelajaran
laboratorium merupakan suatu alat pembelajaran yang memungkinkan peserta didik
menghubungkan berbagai informasi yang diperoleh dari berbagai macam mata kuliah
teoritis, pembelajaran mandiri dan praktik laboratorium, dimana mahasiswa yang akan
Praktik di laboratorium harus sudah lulus teori terlebih dahulu, sehingga memungkinkan
tumbuhnya rasa percaya diri bagi peserta didik.
Mikrobiologi adalah salah satu cabang ilmu dari biologi yang mempelajari tentang
organisme yang mikroskopik yakni meliputi bakteri, virus, fungi, alga dan protozoa.
Mikrobiologi boleh dikatakan merupakan ilmu yang masih baru. Dunia jasad renik barulah
ditemukan sekitar 300 tahun yang lalu dan makna sesungguhnya mengenai mikroorganisme
itu barulah dipahami sekitar 200 tahun kemudian. Selama 40 tahun terakhir, mikrobiologi
muncul sebagai bidang biologi yang sangat berarti karena mikroorganisme digunakan oleh
para peneliti dalam penelaah hampir semua gejala biologis yang utama.
Sejarah mempelajari mikrobiologi pun diawali oleh rasa ingin tahu manusia untuk
mengenal sifat dan aktivitas mikroorganisme. Pada mulanya mikroorganisme tidak dianggap
perlu untuk dipelajari, karena ukurannya yang sangat kecil dan tidak dapat dilihat dengan
mata telanjang, namun pada akhir abad ke-19, penemuan Pasteur, Koch, dan Lister
mengubah pendapat tersebut. Pada masa itulah manusia baru menyadari betapa pentingnya
pengetahuan tentang mikroorganisme, sehingga keuntungan dan kerugian yang ditimbulkan
oleh mikroorganisme mulai banyak dipelajari.
Mikroorganisme dapat menyebabkan banyak penyakit yang telah melanda peradaban
manusia selama berabad-abad. Sebelum timbulnya pengertian bahwa penyakit menular
disebabkan oleh mikroorganisme, secara berkala populasi dihancurkan oleh wabah penyakit
seperti difteri, pes, dan cacar. Dengan diterapkannya penemuan-penemuan yang dibuat di
dalam bidang mikrobiologi, ilmu kedokteran telah mencapai suksesnya yang paling besar
dalam diagnosis, pencegahan, dan penyembuhan penyakit. Penurunan dramatis jumlah
kematian akibat infeksi, penggandaan panjang hidup rata-rata, dan bertahun hidupnya
sebagian besar anak-anak pada waktu lahir, sebagian besar merupakan buah pengetahuan
yang ditemukan melalui penelaahan mikroorganisme.
188
Untuk mengidentifikasi mikroorganisme diperlukan teknik atau cara – cara khusus

untuk mempelajarinya serta untuk bekerja pada skala laboratorium untuk meneliti
mikroorganisme baik sifat maupun karakteristiknya, tentu diperlukan adanya pengenalan
alat yang akan digunakan serta mengetahui cara penggunaan alat – alat yang berhubungan
dengan penelitian untuk memudahkan dalam melakukan penelitian (Dwidjoseputro, 2003).
Dalam melaksanakan praktikum, biasanya praktikan akan melakukan perhitungan dan
pengukuran. Dalam hal ini, ketelitian praktikan adalah hal yang sangat penting, yang dapat
menentukan hasil akhir dari praktikum. Hal pertama yang harus diperhatikan agar dapat
meningkatkan ketelitian adalah kita harus memperhatikan alat yang kita gunakan. Karena
alat-alat tersebut memiliki skala yang berbeda-beda, dan tentu saja memiliki tingkat
ketelitian yang berbeda pula. Semakin kecil skala alat tersebut maka akan semakin besar
tingkat ketelitiannya. Hal kedua yang harus diperhatikan adalah bagaimana cara kita
membaca skala itu sendiri.
Saudara mahasiswa, Anda tentu sepakat dengan pernyataan berikut, bahwa jika Anda
ingin melaksanakan praktikum di laboratorium mikrobiologi dengan terampil dan
menghasilkan hasil pengujian yang maksimal. maka Anda harus memiliki pengetahuan dan
keterampilan dalam penggunaan alat-alat yang dibutuhkan di setiap unit kompetensi yang
akan dipraktikkan di laboratorium.
B. DESKRIPSI MATA KULIAH
Mata kuliah ini memberi kesempatan kepada peserta didik untuk mengaplikasikan
teori dan konsep dari Mata Ajaran ditatanan nyata dengan melaksanakan praktikum di
laboratorium mikrobiologi khususnya dalam Bab ini tentang pengenalan alat dan bahan
praktik laboratorium mikrobiologi
1. Tata Tertib Laboratorium:
a. Piket harus datang lima belas menit sebelum praktikum dimulai untuk
mempersiapkan alat – alat dan bahan yang dibutuhkan pada praktikum yang
dilaksanakan, berkoordinasi dengan penanggungjawab laboratorium.
b. Praktikan harus datang lima menit sebelum praktikum dimulai yang disesuaikan
dengan kontrak perkuliahan praktikum dari Dosen Pengampu Praktek.
c. Praktikan diwajibkan mengikuti praktikum 100 % sesuai dengan materi yang
tertuang dalam RPP praktek.
d. Praktikan menempatkan tas dan lain-lain (HP, laptop, dompet) pada tempat yang
telah ditentukan dan bertangungjawab atas keberadaan barang–barang
tersebut.
e. Praktikan harus memakai jas praktikum serta pakaian yang sopan dan rapi
selama praktikum berlangsung, tidak boleh memakai sandal jepit dan kaos
oblong.
f. Praktikan dilarang merokok, membawa makanan, minuman, senjata tajam atau
bahan yang sifatnya dapat merusak peralatan gelas maupun peralatan
instrumen.
189
g. Praktikan pria harus berambut pendek dan rapih, sedangkan praktikan wanita
yang berambut panjang harus merapikan rambutnya sehingga tidak mengganggu
jalannya praktikum.
h. Bagi praktikan yang berjilbab. Ujung-ujung jilbab harus diatur sehingga tidak
mengganggu pelaksanaan praktikum.
i. Dalam memakai alat-alat laboratorium, praktikan harus melakukannya dengan
baik dan benar sesuai dengan SOP, untuk itu pelajari dan perhatikan buku
pedoman praktikum dan prosedurnya. Praktikan dilarang memulai praktikum
sebelum mendapat izin dari dosen pengampu praktikum dan atau instruktur.
j. Praktikan diharuskan memiliki buku pedoman/penuntun sesuai materi yang akan
dipraktekkan.
k. Praktikan diharuskan mengikuti Instruksi Kerja (IK) setiap penggunaan alat
laboratoium
l. Praktikan harus menjaga kebersihan, kerapihan dan keutuhan alat laboratorium.
m. Praktikan DILARANG KERAS bermain-main serta bersenda gurau dalam
laboratorium selama kegiatan praktikum berlangsung.
n. Setelah selesai melakukan praktikum, peralatan agar dirapikan seperti semula
dan ruangan laboratorium dibersihkan, semua limbah dibuang pada tempat
pembuangan akhir pada kampus.
o. Praktikan membuat laporan sesuai dengan instruksi dosen pengampu mata
kuliah masing–masing.
p. Jika terjadi kerusakan (pecah) atau hilang alat dalam pelaksanaan praktikum
maka menjadi tanggung jawab praktikan pemakai, dan dilaporkan kepada
penanggunjawab laboratorium.
2. Sangsi pelanggaran tata tertib

a. Melanggar tata tertib praktikum dikenakan sanksi
b. Apabila merusak atau mengambil barang inventaris laboratorium mikrobiologi
maka wajib mengganti dan dikenakan sanksi
c. Mendapat 3 kali sanksi tidak boleh mengikuti praktikum selanjutnya
C. TUJUAN UMUM MATA KULIAH (TIU MK)
Setelah menyelesaikan praktikum pada praktikum ini, mahasiswa diharapkan

memahami:
1. Fungsi dan penggunaan alat dan bahan yang digunakan.
2. Membaca, menginterpretasikan, membahas, dan menyimpulkan hasil praktikum.
3. Membandingkan hasil praktikum dan teori yang bersangkutan.
4. Menerangkan faktor-faktor yang dapat mempengaruhi praktikum.
5. Mengaplikasikan praktikum di laboratorium
190
D. MATA KULIAH DAN MATERI PRASYARAT
Sebelum mengikuti mata kuliah praktikum mikrobiologi peserta didik diharapkan telah
mengikuti mata kuliah teori mikrobiologi dan mata kuliah sterilisasi serta mata kuliah konsep
dasar pelayanan asuhan keperawatan gigi dan mulut sehingga pada pelaksanaan pada
praktikum ini dapat berjalan lancar
E. KEGUNAAN BAB INI BAGI MAHASISWA
Sebelum melangkah ke kegiatan praktikum yang lebih jauh maka yang pertama kali
harus Anda kenali adalah alat-alat yang digunakan beserta fungsinya masing-masing di
laboratorium Mikrobiologi sehingga bab ini sangat penting untuk dilalui.
F. URUTAN SUB BAB
 Pengenalan alat –alat praktikum laboratorium mikrobiologi

 Pengenalan bahan-bahan praktikum mikrobiologi
191
Topik 1
Pengenalan Alat-alat Praktek
A. PENGANTAR
Sebelum Anda melangkah ke kegiatan praktikum yang lebih jauh maka yang pertama
kali harus Anda kenali adalah alat-alat yang digunakan beserta fungsinya masing-masing.
Berikut ini adalah alat-alat yang umum digunakan di laboratorium Mikrobiologi.
Di dalam pekerjaan mikrobiologi sudah pasti kita tidak terlepas dari alat-alat yang
berada dalam laboratorium. Dalam melaksanakan Kegiatan Praktikum Modul 1 ini,
mahasiswa akan dikenalkan beberapa dasar dalam praktik mikrobiologi, antara lain:
pengenalan dan tata cara penggunaan macam-macam alat-alat laboratorium, untuk itu
diperlukan pemahaman tentang fungsi dan sifat-sifat dari alat yang digunakan, serta
bagaimana cara penggunaan alat-alat yang terdapat di dalam laboratorium mikrobiologi.
Peralatan yang digunakan pada laboratorium mikrobiologi hampir sama dengan peralatan-
peralatan yang umumnya digunakan di laboratorium kimia yaitu berupa alat-alat gelas
antara lain : tabung reaksi, cawan petri, pipet ukur dan pipet volumetrik, labu ukur
(tentukur), labu erlenmeyer, gelas ukur, cawan petri, termometer, pipet tetes, pembakar
spiritus, kaki tiga dengan kawat asbes dan objek glass, tabung durham, batang pengaduk,
beacek glass.
Di samping peralatan gelas tersebut pada laboratorium mikrobiologi masih ada
sejumlah alat yang khusus antara lain: otoklaf, oven, mikroskop, jarum ose (inokulasi), jarum
preparat, up, keranjang kawat untuk sterilisasi, inkubator untuk membiakkan
mikroorganisme dengan suhu yang konstan, spektrofotometer untuk mengukur kepekatan
suspensi atau larutan. Penangas air untuk mencairkan medium, maknetik stirrer untuk
mengaduk dan tabung, hot plat, timbangan analog.
Untuk memudahkan mahasiswa dalam melakukan praktek di laboratorium tentu saja
pengenalan media untuk pertumbuhan mikroorganisme sangatlah penting. Termasuk juga
pengenalan reagen yang digunakan dalam melakukan proses pembelajaran praktik
laboratorium mikrobiologi.
B. TUJUAN
1. Mahasiswa mampu menyebutkan nama-nama alat-alat praktikum elektrik

Mikrobiologi dengan baik dan benar
2. Mahasiswa mampu menyebutkan nama-nama alat-alat praktikum gelas dan keramik
laboratorium Mikrobiologi dengan baik dan benar
3. Mahasiswa mampu menyebutkan nama-nama alat-alat praktikum pendukung lainnya
laboratorium Mikrobiologi dengan baik dan benar
192
4. Mahasiswa mampu menjelaskan fungsi alat-alat praktek praktikum elektrik

5. Mahasiswa mampu menjelaskan fungsi alat-alat praktek praktikum gelas dan keramik
6. Mahasiswa mampu menjelaskan fungsi alat-alat praktek praktikum pendukung
lainnya pada laboratorium Mikrobiologi dengan baik dan benar.
C. URAIAN
Prinsip kerja dan fungsi alat – alat laboratorium harus diketahui mahasiswa kesehatan
agar tidak terjadi kesalahan saat pemakaian alat – alat laboratorium. Selain itu keselamatan
dari alat – alat laboratorium harus diperhatikan agar terjaga kualitasnya. Maka dari itu alat –
alat laboratorium dibagi menjadi 2 kelompok besar, yaitu alat – alat ringan dan alat – alat
berat. Alat ringan biasanya terbuat dari kayu, gelas, plastik, karet. Sebagian besar alat – alat
Laboratorium terbuat dari gelas.
Alat gelas yang digunakan di laboratorium umumnya merupakan gelas boroksilikat.
Gelas ini terbuat dari kuarsa / silikat oksida berkualitastinggi, boron oksida, aluminium
oksida, dan natrium oksida. Gelas jenis ini mencair pada suhu agak tinggi dan mempunyai
angka mulai yang kecil, oleh karena itu dapat dipanaskan hingga suhu tinggi dan dapat
direndam didalam air dingin atau es tanpa terjadi keretakan atau pecah. Selain itu gelas
boroksilikat juga tidak bereaksi dengan bahan kimia sehingga cocok digunakan sebagai alat
gelas laboratorium. Di dalam perdagangan jenis gelas ini dikenal dengan berbagai merk
seperti : Pyrex, Yena, Vycor, Duran, Schott, Assistant dan sebagainya.
1. Alat-alat praktek elektrik

a. Mikroskop Elektron
Salah satu alat untuk melihat sel mikroba adalah mikroskop elektron. Dengan
mikroskop dapat diamati sel bakteri yang tidak dapat dilihat dengan mata telanjang.
Pada umumnya, mata tidak mampu membedakan benda dengan diameter lebih kecil
dari 0,1 mm. Berikut merupakan uraian tentang cara penggunaan, bagian-bagian, dan
spesifikasi mikroskop cahaya merek Olympus CH20, sebagai contoh model mikroskop
pada praktikum ini.
193
Gambar 1.1.
Bagian-bagian Mikroskop
Gambar 1.1: Mikroskop

Sumber: http://chyrun.com/pengenalan-alat-dan-teknik-laboratorium diunduh 7 Agustus 17
1) Bagian-bagian mikroskop:
1. Eyepiece/oculars (lensa okuler), untuk memper-besar bayangan yang
dibentuk lensa objektif.
2. Revolving nosepiece (pemutar lensa objektif), untuk memutar objektif sehingga
mengubah perbesaran.
3. Observation tube (tabung pengamatan/tabung okuler)
4. Stage (meja benda), untuk menempatkan spesimen.
5. Condenser (condenser), untuk mengumpulkan cahaya supaya tertuju
ke lensa objektif.
6. Objective lense (lensa objektif), untuk memperbesar spesimen.
7. Brightness adjustment knob (pengatur kekuatan lampu), untuk memperbesar
dan memperkecil cahaya lampu.
8. Main switch (tombol on-off).
9. Diopter adjustmet ring (cincin pengatur diopter), untuk menyamakan fokus
antara mata kanan dan kiri.
10. Interpupillar distance adjustment knob (pengatur jarak interpupillar).
11. Spesimen holder (penjepit spesimen), untuk menjepit spesimen agar tidak
bergerak/berubah tempat.
194
12. Illuminator (sumber cahaya).

13. Vertical feed knob (sekrup pengatur vertikal), untuk menaikkan atau
menurunkan object glass.
14. Horizontal feed knob (sekrup pengatur horizontal), untuk menggeser ke
kanan/kiri objek glass.
15. Coarse focus knob (sekrup fokus kasar), untuk menaikturunkan meja
benda (untuk mencari fokus) secara kasar dan cepat
16. Fine focus knob (sekrup fokus halus), untuk menaikturunkan meja benda secara
halus dan lambat.
17. Observation tube securing knob (sekrup pengencang tabung okuler).
18. Condenser adjustment knob (sekrup pengatur kondenser), untuk
menaikturunkan kondenser.
2) Cara menggunakan mikroskop

1. Menyalakan lampu
a) Tekan tombol on (8).
b) Atur kekuatan lampu dengan memutar bagian (7).
2. Menempatkan spesimen pada meja benda
a) Letakkan object glass di atas meja benda (4) kemudian dijepit (11). Jika
meja benda belum turun, diturunkan dengan sekrup kasar (15).
b) Cari bagian dari object glass yang terdapat preparat ulas (dicari dan
diperkirakan memiliki gambar yang jelas) dengan memutar sekrup vertikal
dan horizontal (13) dan (14).
3. Memfokuskan
a) Putar Revolving nosepiece (2) pada perbesaran objektif 4x lalu putar sekrup
kasar (15) sehingga meja benda bergerak ke atas untuk mencari fokus. b)
b) Setelah fokus perbesaran 4x10 didapatkan maka putar (2) pada perbesaran
selanjutnya, yaitu perbesaran objektif 10x, kemudian putar sekrup halus
(16) untuk mendapatkan fokusnya.
c) Lakukan hal yang sama jika menggunakan perbesaran yang lebih tinggi
(Gambar 1.2).
Gambar 1.2.
Jarak antar Spesimen dengan Lensa Objektif
Sumber: http://chyrun.com, diunduh 7 Agustus 17
195
Berikut adalah tabel yang menunjukkan jarak antara spesimen dengan lensa
objektif jika fokus telah didapatkan:
Perbesaran Objektif 4X 10X 40X 60X
Jarak A (mm) 29 6,3 0,53 0,29
Catatan:
Setelah mendapatkan fokus pada perbesaran tertentu, misal 40x dan ingin
memutar objektif ke perbesaran 100x maka meja benda tidak perlu diturunkan
dan tidak perlu khawatir bahwa lensa objektif akan menggesek cover glass
karena terdapat sisa jarak A yang lebih kecil antara cover glass dengan lensa
objektif (lihat tabel di atas).
4. Tambahan
a) Jika perlu interpupillar distance adjustment knob (10) dapat digeser, hal ini
akan mengubah dua bayangan yang akan diterima oleh 2 mata menjadi
gambar yang tunggal sehingga sangat membantu dalam mengatasi
kelelahan mata.
b) Jika perlu diopter adjustment knob (9) dapat diatur untuk memperoleh
bayangan fokus yang seimbang antara mata kanan dan kiri.
c) Pengaturan condenser (5) akan memperjelas bayangan yang tampak
dengan mensetting pada posisi tertinggi (cahaya penuh).
3) Perbesaran total
Ukuran spesimen yang diamati dapat diperoleh dengan mengalikan perbesaran lensa
okuler dengan lensa objektif. Misal = Okuler (10x) x Objektif (40x) = 400x.
4) Penggunaan minyak imersi

Semakin kecil nilai daya pisah, akan semakin kuat kemampuan lensa untuk
memisahkan dua titik yang berdekatan pada preparat sehingga struktur benda terlihat
lebih jelas. Daya pisah dapat diperkuat dengan memperbesarkan indeks bias atau
menggunakan cahaya yang memiliki panjang gelombang (λ) pendek. Biasanya dapat
digunakan minyak imersi untuk meningkatkan indeks bias pada perbesaran 10X100
(Gambar 1.3).
a) Jika fokus pada perbesaran 10X40 telah didapatkan maka putar ke perbesaran
objektif 100x.
b) Tetesi minyak imersi 1-2 tetes dari sisi lensa.
c) Jika telah selesai menggunakan mikroskop, lensa objektif 100x dibersihkan
dengan kertas lensa yang dibasahi xylol (lihat Gambar berikut).
196
Gambar: 1.3 Fokus Pandang

Sumber: http://chyrun.com, diunduh 7 Agustus 17
b. Autoklaf Elektrik
Autoclave adalah alat untuk mensterilkan berbagai macam alat dan bahan yang
digunakan dalam mikrobiologi menggunakan uap air panas bertekanan. Tekanan yang
digunakan pada umumnya 15 Psi atau sekitar 2 atm dan dengan suhu 121oC (250oF). Jadi,
tekanan yang bekerja ke seluruh permukaan benda adalah 15 pon tiap inchi2 (15 Psi = 15
pounds per square inch). Lama sterilisasi yang dilakukan biasanya 15 menit untuk 121oC.
Diagram autoklaf vertikal (Gambar 1.4.):

Tombol pengatur waktu mundur (timer)
1. Pegangan pintu
2. Katup pengeluaran uap
3. Pengukur tekanan
4. Klep pengaman
5. Tombol on-off
6. Termometer
7. Lempeng sumber panas Gambar: 1.4 Sterilisator autoklaf
8. Aquades (dH2O) Sumber: http://bloguriefmaulana-/jurnal-
9. Sekrup pengaman mikrobiologi pengenalan-alat.html
10. Batas penambahan air diunduh 7 Agust 17
Cara penggunaan autoklaf yaitu sebagai berikut.

a) Sebelum melakukan sterilisasi cek dahulu banyaknya air dalam autoklaf. Jika air
kurang dari batas yang ditentukan maka dapat ditambah air sampai batas
tersebut. Gunakan air hasil destilasi, untuk menghindari terbentuknya kerak dan
karat.
b) Masukkan peralatan dan bahan. Jika mensterilisasi botol bertutup ulir maka
tutup harus dikendurkan.
197
c) Tutup autoklaf dengan rapat lalu kencangkan baut pengaman agar tidak ada uap
yang keluar dari bibir autoklaf. Klep pengaman jangan dikencangkan terlebih
dahulu.
d) Autoklaf dinyalakan, diatur timer dengan waktu minimal 15 menit pada suhu
121oC.
e) Ditunggu sampai air mendidih sehingga uapnya memenuhi kompartemen
autoklaf dan terdesak keluar dari klep pengaman. Kemudian klep pengaman
ditutup (dikencangkan) dan ditunggu sampai selesai. Penghitungan waktu 15
menit dimulai sejak tekanan mencapai 2 atm
f) Jika alarm tanda selesai berbunyi maka tunggu tekanan dalam kompartemen
turun hingga sama dengan tekanan udara di lingkungan (jarum pada preissure
gauge menunjuk ke angka nol). Kemudian klep-klep pengaman dibuka dan
keluarkan isi autoklaf dengan hati-hati.
c. Inkubator
Inkubator adalah alat untuk menginkubasi atau memeram mikroba pada suhu yang
terkontrol. Alat ini dilengkapi dengan pengatur suhu dan pengatur waktu digunakan untuk
tumbuh dan memelihara budaya mikrobiologi atau kultur sel. Inkubator mempertahankan
suhu optimal, kelembaban dan kondisi lain seperti karbon dioksida (CO2) dan kandungan
oksigen dari atmosfer di dalam. Inkubator sangat penting untuk banyak pekerjaan
eksperimental dalam biologi sel, mikrobiologi dan biologi molekuler dan digunakan untuk
kultur bakteri baik serta sel eukariotik.
Gambar: 1.5 Incubator

Sumber: http://bloguriefmaulana-/jurnal-mikrobiologi pengenalan-alat.html
diunduh 7 Agust 17
Langkah - langkah yang harus diperhatikan dalam penggunaan Inkubator Lab :

a) Untuk mengoperasikan incubator, colokkan kabel inkubator pada sumber daya listrik
b) Siapkan sampel yang akan diinkubasi kemudian letakkan pada rak dalam ruang
inkubator kemudian tutup pintu incubator
c) Jika persiapan sampel telah selesai, tekan tombol POWER pada posisi ON, maka alat
akan langsung menyala ditandai dengan display menyala
198
d) Siapkan sampel yang akan diinkubasi kemudian letakkan pada rak dalam
ruang incubator kemudian tutup pintu inkubator
e) Set TIMER dengan memutar tombol TIMER sesuai waktu yang diinginkan, di set awal
per 10 jam , jadi jika ingin menginkubasi selama 24 jam putar tombol pada posisi 2
lebih 4 strip
f) Untuk set suhu, tekan tanda < kemudian digit hijau akan berkedip. Naikkan atau
turunkan dengan menekan ^/v kemudian tekan MD (enter). Catatan: SV : digit hijau
suhu yang diinginkan PV: digit merah, suhu yang ada sekarang
g) Bila inkubasi telah selesai, matikan alat dengan menekan kembali tombol POWER pada
posisi OFF
h) Lepaskan colokan pada sumber daya listrik
d. Hot Plate
Hot plate dan Stirrer bar (magnetic stirrer) berfungsi untuk menghomogenkan suatu
larutan dengan pengadukan. Pelat (plate) yang terdapat dalam alat ini dapat dipanaskan
sehingga mampu mempercepat proses homogenisasi. Pengadukan dengan bantuan batang
magnet Hot plate dan magnetic stirrer
Gambar 1.6 Hot Plate

Sumber: http://seputar-pendidikann.blogspot.co.id/2016/09/mengenal-instrumentasi-
mikrobiologi.html diunduh 7 Agustus 17
Seri SBS-100 dari SBS®, misalnya mampu menghomogenkan sampai 10 L, dengan

kecepatan sangat lambat sampai 1.600 rpm dan dapat dipanaskan sampai 425oC (Gambar
1.6).
Cara penggunaan Hot Plate yaitu sebagai berikut:
a) Pastikan alat pada posisi datar / rata dan aman.
b) Sambung socket kabel ke power.
c) 3 Untuk menghidupkan putar ke posisi ON.
d) Untuk pengadukan putar sampai lampu stir menyala sesuai yang diinginkan, tanda 1
(lambat ) s.d tanda 10 ( cepat ).
199
e) Untuk pemanas putar sampai lampu heat menyala sesuai yang diinginkan, tanda 1
(kurang panas) s.d tanda 10 ( sangat panas ).
f) Kembalikan stir dan heat ke posisi terendah.
g) Putar tombol ke posisi OFF sampai lampunya mati.
h) Kemudian socket kabel dilepas atau dicabut dari power / listrik.
i) Lakukan pengecekan alat setiap akan dipergunakan .
j) Jauhkan alat dari percikan air atau udara panas dan bahan kimia berbahaya ( sifat
korosif )
e. Colony Counter
Alat ini berguna untuk mempermudah penghitungan koloni yang tumbuh setelah
diinkubasi di dalam cawan petri karena adanya kaca pembesar. Selain itu, alat tersebut
dilengkapi dengan skala/kuadran yang sangat berguna untuk pengamatan pertumbuhan
koloni yang sangat banyak. Jumlah koloni pada 1.8 Praktikum Mikrobiologi.
Cawan Petri dapat ditandai dan dihitung secara otomatis yang dapat di-reset (Gambar
1.7).
Bagian-bagian Colony Counter (Gambar 1.7.):
1. Pen jack (tempat memasukkan countpen)
2. Tombol reset ( untuk mengatur tayangan dari indikator hitung dalam keadaan 000 )
3. Power Switch (untuk menghidupkan lampu fluoresen sebelah kiri)
4. Power Switch (untuk menghidupkan lampu fluoresen sebelah kanan)
5. Source Switch (untuk menghidupkan lampu pada count indicator)
6. Tombol hitung (tombol untuk memulai hitungan pada count indicator)
7. Lampu signal Count indicator
8. Pembesar (Loupe)
9. Indikator hitung / Count indicator(maksimal 3 digit/3 angka)
10. Petridish/cawan petri yang akan dihitung jumlah koloninya
11. Penjepit petridish/Cawan petri
12. Pen hitung / Count pen
Gambar 1.7. Colony Counter

200
Cara penggunaan Colony Counter yaitu sebagai berikut:

a) Hubungkan stop kontak dengan sumber tenaga.
b) Nyalakan alat dengan menekan tombol ‘ON’.
c) Reset jumlah perhitungan hingga menunjuk angka ‘0’.
d) Letakkan cawan petri yang berisi koloni bakteri yang akan dihitung di atas meja yang
dilengkapi dengan skala.
e) Tandai koloni dengan mengarahkan pulpen ke meja skala.
f) Hitung koloni bakteri yang terpisah.
g) Lihat koloni dengan bantuan kaca pembesar.
h) Matikan alat dengan menekan tombol ‘OFF’.
f. Biological Safety Cabinet (BSC)

BSC atau dapat juga disebut Laminar Air Flow (LAF) adalah alat yang berguna untuk
bekerja secara aseptis karena BSC mempunyai pola pengaturan dan penyaring aliran udara
sehingga menjadi steril dan aplikasi sinar UV beberapa jam sebelum digunakan.
Gambar: 1.8 Biological Safety Cabinet

Sumber: http://www.makmursejati.co.id/alat-laboratorium diunduh 7 Agustus 17
Cara penggunaan Laminar Air Flow yaitu sebagai berikut:

a) Hidupkan lampu UV selama 2 jam, selanjutnya segera dimatikan sebelum mulai
bekerja.
b) Kaca penutup dipastikan terkunci dan pada posisi terendah.
c) Lampu neon dan blower dinyalakan dan dibiarkan selama 5 menit.
d) Tangan dan lengan dicuci dengan sabun gemisidal/alkohol 70%.
e) Permukaan interior BSC diusap dengan alkohol 70% atau desinfektan yang cocok dan
dibiarkan menguap.
f) Alat dan bahan yang akan dikerjakan dimasukkan, jangan terlalu penuh (overload)
karena memperbesar risiko kontaminan.
g) Alat dan bahan yang telah dimasukkan ke BSC diatur sedemikian rupa sehingga efektif
dalam bekerja dan tercipta areal yang benar-benar steril.
201
h) Jangan menggunakan pembakar Bunsen dengan bahan bakar alkohol tetapi gunakan
yang berbahan bakar gas.
i) Kerja secara aseptis dan jangan sampai pola aliran udara terganggu oleh aktivitas kerja.
j) Setelah selesai bekerja, biarkan 2-3 menit supaya kontaminan tidak keluar dari BSC.
k) Permukaan interior BSC diusap dengan alkohol 70% dan dibiarkan menguap, kemudian
tangan dibasuh dengan desinfektan.
l) Lampu neon dan blower dimatikan.
g. Sterilisator Oven
Sterilizator Oven atau drying oven merupakan alat yang digunakan untuk sterilisasi
atau pembersihan dengan menggunakan udara kering. Alat sterilisasi ini dipakai untuk
mensterilkan alat-alat gelas seperti Erlenmeyer, Petridish (cawan petri), tabung reaksi dan
gelas lainnya. Bahan-bahan seperti kapas, kain dan kertas juga dapat disterilkan dalam oven
tetapi dalam temperatur tertentu, pada umumnya temperatur yang digunakan pada
sterilisasi cara kering adalah sekitar 140-1700C selama paling sedikit 2 jam. Perlu
diperhatikan bahwa lamanya sterilisasi tergantung pada jumlah alat disterilkan dan
ketahanan alat terhadap panas.
Gambar: 1.9 sterilisazi oven

Cara penggunaan sterilisazi oven yaitu sebagai berikut:

a) Hubungkan drying oven dengan sumber listrik
b) Masukkan peralatan laboratorium yang ingin disterilisasi kemudian
c) Atur dengan rapi dan tutup pintu oven dengan rapat.
d) Hidupkan Drying Oven dengan menekan tombol ON, kemudian lampu di drying oven
akan berkedip.
e) Atur suhu dan waktu yang diinginkan pada drying oven. Jika peralatan terbuat dari
plastic, dan bahan yang mudah berubah volume seperti pipet ukur dan labu ukur
sebaiknya suhu tidak melebihi 100°C.
202
a. Bila suhu 1700C, atur waktu 1 jam

b. Bila suhu 1600C, atur waktu 2 jam
c. Bila suhu 1500C, atur waktu 2,5 jam
d. Bila suhu 1400C, atur waktu 3 jam
f) Bila waktu yang diatur telah selesai, pengatur waktu secara otomatis kemali ke nol.
g) Setelah selesai biarkan terlebih dahulu peralatan laboratorium mendingin didalam
oven, setelah mendingin keluarkan peralatan laboratorium dan tata kembali peralatan
laboratorium dengan rapi.
h) Jangan lupa mencabut kabel oven dari sumber listrik agar tidak terjadi hal yang tidak
diinginkan.
h. Mikropipet
Mikropipet adalah alat untuk memindahkan cairan yang bervolume cukup kecil,
biasanya kurang dari 1.000 μl. Banyak pilihan kapasitas dalam mikropipet, misalnya
mikropipet yang dapat diatur volume pengambilannya (adjustable volume pipette) antara 1-
20 μl atau mikropipet yang tidak bisa diatur volumenya, hanya tersedia satu pilihan volume
(fixed volume pipette) misalnya mikropipet 5 μl. Penggunaan mikropipet memerlukan tip
(Gambar 1.9).
Gambar: 1.10 mikropipet

Cara penggunaan mikropipet yaitu sebagai berikut:

a) Sebelum digunakan Thumb Knob sebaiknya ditekan berkali-kali untuk memastikan
lancarnya mikropipet.
b) Tip bersih dimasukkan ke dalam Nozzle/ujung mikropipet.
c) Thumb Knob ditekan sampai hambatan pertama/first stop, jangan ditekan lebih ke
dalam lagi.
d) Tip dimasukkan ke dalam cairan sedalam 3-4 mm.
e) Tahan pipet dalam posisi vertikal kemudian tekanan dari Thumb Knob dilepaskan maka
cairan akan masuk ke tip.
f) Ujung tip dipindahkan ke tempat penampung yang diinginkan. 1.10 Praktikum
Mikrobiologi
203
g) Thumb Knob ditekan sampai hambatan kedua/second stop atau tekan semaksimal
mungkin maka semua cairan akan keluar dari ujung tip.
h) Jika ingin melepas tip putar Thumb Knob searah jarum jam dan ditekan maka tip akan
terdorong keluar dengan sendirinya, atau menggunakan alat tambahan yang berfungsi
mendorong tip keluar
i. Hair Drayer
Hair Drayer atau Pengering rambut merupakan salah satu alat yang mengubah energi
listrik menjadi energi panas yang biasa di gunakan untuk mengeringkan rambut.dan dapat
pula digunakan untuk mengeringkan preparat pada aktivitas pengecatan dengan pewarnaan
sederhana.
Gambar: 1.11 Hair Drayer

2. Alat-alat gelas dan keramik

a. Cawan Petri (Petri Dish)
Cawan petri berfungsi untuk membiakkan (kultivasi) mikroba. Media dapat dituang ke
cawan bagian bawah dan cawan bagian atas sebagai penutup. Cawan petri tersedia dalam
berbagai macam ukuran, diameter cawan yang biasa digunakan berdiameter 15 cm dan
dapat menampung media sebanyak 15-20 ml, sedangkan cawan berdiameter 9 cm kira-kira
cukup diisi media sebanyak 10 ml
Gambar: 1.12 Cawan petri

204
b. Pipet Ukur (Measuring Pippete)

Pipet ukur merupakan alat untuk memindahkan larutan dengan volume yang
diketahui. Tersedia berbagai macam ukuran kapasitas pipet ukur, di antaranya pipet
berukuran 1 ml, 5 ml, dan 10 ml. Cara penggunaannya adalah cairan disedot dengan pipet
ukur dengan bantuan filler sampai dengan volume yang diinginkan. Volume yang
dipindahkan dikeluarkan mengikuti skala yang tersedia (dilihat bahwa skala harus tepat
sejajar dengan meniskus cekung cairan) dengan cara menyamakan tekanan filler dengan
udara sekitar.
Gambar: 1.13 Pipet ukur

c. Pipet Tetes (Pasteur Pippete)

Fungsinya sama dengan pipet ukur, namun volume yang dipindahkan tidak diketahui.
Salah satu penerapannya adalah dalam menambahkan HCl/NaOH saat mengatur pH media
dan pe-nambahan reagen dalam uji biokimia
Gambar: 1.14 Pipet ukur

205
d. Tabung reaksi (Reaction Tube/Test Tube)

Di dalam mikrobiologi, tabung reaksi digunakan untuk uji-uji biokimiawi dan
menumbuhkan mikroba. Tabung reaksi dapat diisi media padat maupun cair. Tutup tabung
reaksi dapat berupa kapas, tutup metal, tutup plastik, atau alumunium foil. Media padat
yang dimasukkan ke tabung reaksi dapat diatur menjadi 2 bentuk menurut fungsinya, yaitu
media agar tegak (deep tube agar) dan agar miring (slants agar). Pembuatan media agar
miring, perlu diperhatikan tentang kemiringan media, yaitu luas permukaan yang kontak
dengan udara tidak terlalu sempit atau tidak terlalu lebar dan hindari jarak media yang
terlalu dekat dengan mulut tabung karena memperbesar risiko kontaminasi. Media yang
ditambahkan dalam pembuatan agar miring cukup berkisar 10-12 ml tiap tabung, agar lebih
efisien
Gambar 1.15. tabung reaksi

K3:
1. Membawa serta dengan rak tabung sesuai dengan ukuran tabungnya agar tidak
jatuh.
2. Gunakan penjepit tabung saat akan melakukan pemanasan.
e. Labu Erlenmeyer (Erlenmeyer Flask)

Labu Erlenmeyer berfungsi untuk menampung larutan, bahan, atau cairan (Gambar
1.14). Labu Erlenmeyer dapat digunakan untuk meracik dan menghomogenkan bahan-bahan
komposisi media, menampung akuades, dan kultivasi mikroba dalam kultur cair. Terdapat
beberapa pilihan berdasarkan volume cairan yang dapat ditampungnya, yaitu 25 ml, 50
ml, 100 ml, 250 ml, 300 ml, 500 ml, dan 1.000 ml.
206
Gambar 1.16. Labu Erlenmayer

Cara Menggunakan :
Labu Ukur digunakan untuk mencampur larutan. Caranya masukkan larutan ke dalam
labu ukur. Simpan labu ukur di lengan tangan lalu goyangkan ke arah atas dan bawah agar
larutan tercampur.
K3 : Menggunakan lap halus saat mengangkat Erlenmeyer dari kompor listrik.
f. Gelas Ukur (Graduated Cylinder)

Berguna untuk mengukur volume suatu cairan, seperti labu erlenmeyer. Gelas ukur
memiliki beberapa pilihan berdasarkan skala volumenya.
Pada saat mengukur volume larutan, sebaiknya volume tersebut ditentukan
berdasarkan meniskus cekung larutan
Gambar 1.17. Gelas ukur

K3 : perhatikan saat menuangkan larutan, jangan sampai larutannya mengalir pada tepi
gelas ukur..
207
g. Batang L (L Rod)
Batang L bermanfaat untuk menyebarkan cairan di permukaan agar supaya bakteri
yang tersuspensi dalam cairan tersebut tersebar merata. Alat ini juga disebut spreader
(Gambar 1.18).
Gambar 1.18 Gelas ukur

h. Mortar dan Pestle

Mortar dan penumbuk (pastle) digunakan untuk menumbuk atau menghancurkan
materi cuplikan, misal daging, roti atau tanah sebelum diproses lebih lanjut
Gambar 1.19. Mortar dan Pestle

i. Beaker Glass
Beaker glass merupakan alat yang memiliki banyak fungsi. Di dalam mikrobiologi, dapat
digunakan untuk preparasi media media, menampung akuades, dan sebagainya
K3 :
Menggunakan lap halus saat mengangkat beaker gelas dari kompor listrik.
Merendam beaker gelas dalam aquadest atau air saat menuangkan larutan asam dengan
konsentrasi tinggi.
208
Gambar 1.20. Beaker glass

j. Pembakar Bunsen (Bunsen Burner)

Salah satu alat yang berfungsi untuk menciptakan kondisi yang steril adalah pembakar
bunsen. Api yang menyala dapat membuat aliran udara karena oksigen dikonsumsi dari
bawah dan diharapkan kontaminan ikut terbakar dalam pola aliran udara tersebut. Bagian
api yang paling cocok untuk memijarkannya dalam sterilisasi jarum ose atau yang lain adalah
bagian api yang berwarna biru (paling panas). Perubahan bunsen dapat menggunakan bahan
bakar gas atau metanol.
Gambar 1.21. Pembakar Bunsen

209
k. Tabung Durham
Tabung durham berbentuk mirip dengan tabung reaksi, namun ukurannya lebih kecil
dan berfungsi untuk menampung/menjebak gas yang terbentuk akibat metabolisme pada
bakteri yang diujikan. Penempatannya terbalik dalam tabung reaksi dan harus terendam
sempurna dalam media (jangan sampai ada sisa udara).
Gambar 1.22. Tabung durham

l. Objek Glass
Objek glass adalah lembaran kaca tipis untuk meletakkan objek atau benda yang akan
diperiksa di bawah mikroskop
Gambar 1.23. Objek glass

m. Spot Plate (plat tetes)

Tempat untuk mereaksikan zat dalam jumlah kecil
210
Gambar 1.24. Spot Plate

n. Batang Pengaduk (Strirring Rod)

Terbuat dari gelas, polietilen atau logam yang dibungkus dengan polietilen. Batang
pengaduuk mempunyai panjang sesuai dengan keperluan. Batang pengaduk umumnya
bergaris tengah 2 – 4 mm dan mempunyai panjang yang bervariasi 6 – 30 cm.
Prinsip Kerja : Mengaduk larutan atau suspense dalam wadah.
Fungsi :
1. Digunakan untuk mengaduk larutan atau suspensi yang umumnya berada pada
gelas kimia, Erlenmeyer atau tabung reaksi.
2. Digunakan pula sebagai alat bantu untuk memindahkan cairan dari suatu bejana ke
bejana lain.
Gambar 1.25. Batang Pengaduk

Sumber: https://nzaoldyeck.wordpress.com/ diunduh 7 Agustus 17
o. Corong (Funnels)
Terbuat dari jenis boroksiliat atau plastic. Corong mempunyai garis tengah 35 – 300
mm dan ada yang mempunyai tangkai corong panjang, sedang dan pendek.
Prinsip Kerja : membantu memasukkan cairan dalam suatu wadah dengan ukuran mulut
kecil.
Fungsi : digunakan untuk menyaring zat cair atau sampel padat.
K3 : saat menuangkan larutan, corong sebaiknya tidak bersentuhan dengan mulut wadah
usahakan menjauh sedikit.
211
Gambar 1.26. Corong Panjang

Sumber: https://nzaoldyeck.wordpress.com/
diunduh 7 Agustus 17
3. Alat-alat pendukung lainnya

a. Jarum Ose
Ose adalah alat untuk memindahkan kultur dari satu media ke media
lain. Jarum inokulum biasanya terbuat dari kawat nichrome atau platinum sehingga
dapat berpijar jika terkena panas. Cara penggunaan: Jarum Ose disentuhkan pada
bagian mikrobia kemudian menggosokkan pada kaca preparat untuk diamati
Gambar 1.27. Jarum Ose

2. Magnetic Stirrer
Magnetic Stirrer merupakan suatu alat yang digunakan untuk pengadukan cairan kimia
yang menggunakan putaran medan magnet untuk memutar stir bars (juga disebut “flea”)
sehingga membantu proses homogenisasi. Beberapa analisa suatu bahan / sampel kimia,
pembuatan suatu reagent, atau larutan analit terkadang membutuhkan proses pengadukan.
Seperti namanya, alat ini tidak dapat dilepaskan dengan magnetic bar yang berfungsi untuk
melakukan pengadukan tersebut. Pemilihan dari magnetic bar ini juga harus diperhatikan.
Jangan terlalu kecil tetapi juga jangan terlalu besar
212

c. Pinset Anatomi
Pinset Anatomi merupakan instrument operasi yang umumnya digunakan untuk
memegang atau mengambil objek tertentu. sering digunakan dalam tindakan bedah minor,
berfungsi untuk menjepit atau memegang jaringan, alat dan bahan medis lainnya. Pada
penjahitan luka digunakan untuk membantu proses menjahit luka dan menjepit kassa
sewaktu menekan luka.
Gambar 1.29. Pinset Anatomi

mikrobiologi.html diunduh 7 Agustus
d. Pinset Chirurgis
Fungsi utama pinset adalah untuk menjepit, baik benda kecil atau jaringan. Dalam hal
ini, pinset menggantikan fungsi jari manusia misalnya karena benda sangat kecil untuk
dipegang. Selain itu pada operasi pinset digunakan untuk mengurangi paparan mikroba pada
luka operasi sehingga kemungkinan infeksi dapat dikurangi.
Cara Penggunaannya :
Menggunakan ibu jari dan dua atau tiga anak jari lainnya dalam satu tangan tekanan
pegas muncul saat jari-jari tersebut saling menekan kearah yang berlawanan menghasilkan
kemampuan menggenggam alat ini dapat menggenggam objek atau jaringan kecil dengan
213
cepat dan mudah serta memindahkan dan mengeluarkan jaringan dengan tekanan yang
beragam.

e. Rak Tabung
Menyimpan atau meletakkan tabung reaksi ketika sedang atau tidak digunakan.
Cara penggunaan :
Untuk tabung reaksi yang sedang digunakan dalam mereaksikan zat, letakkan tabung
pada lubang yang terdapat pada rak tabung reaksi. Untuk tabung reaksi yang tidak
digunakan, telungkupkan tabung reaksi pada rak tabung reaksi.
Gambar 1.31. Rak Tabung

f. Pipet Filler/Rubber Bulb

Filler adalah alat untuk menyedot larutan yang dapat dipasang pada pangkal pipet
ukur. Karet sebagai bahan filler merupakan karet yang resisten bahan kimia. Filler memiliki 3
saluran, yang masing-masing saluran memiliki katup. Katup yang bersimbol A (aspirate)
berguna untuk mengeluarkan udara dari gelembung. S (suction) merupakan katup yang jika
ditekan maka cairan dari ujung pipet akan tersedot ke atas. Kemudian katup E (exhaust)
berfungsi untuk mengeluarkan cairan dari pipet ukur.
214
Gambar 1.32. Rubber Bulb

g. Penjepit Tabung
Penjepit tabung reaksi berbentuk rahang: persegi. Pegas : dipoles nikel dengan
diameter: 10 -25 mm. Alat Lab ini digunakan untuk menjepit merupakan alat bantu untuk
menjepit suatu tabung reaksi pada saat kita ingin mengangkat atau memindahkannya
Gambar 1.33. Penjepit tabung

h. Timbangan Analog
Timbangan analog adalah alat ukur yang digunakan untuk dapat mengetahui dengan
cepat dan akurat nilai berat suatu barang yang ditimbang.
Cara menggunakan timbangan analog :
1. Bersihkan neraca terutama piring neraca harus bersih dari sisa bahan
2. Setimbangkan neraca sehingga jarum menunjukkan skala nol dengan cara menggeser
sekruppengatur.
3. Timbang tempat bahan, botol kaca arloji atau alas lain dengan meletakkan pada piring
timbangan dan catat beban berat dari tempat bahan tersebut.
4. Masukan bahan yang akan ditimbang kedalam tempat atau wadah yang sudah
ditimbang tadi
5. Pasang beban timbangan seberat tempat atau wadah yang ditambah dengan berat
bahan yang diperlukan. Timbanglah sampai benar seimbang
215
6. Jika selesai menimbang kembalikan semuanya pada posisi awal, yaitu skala beban pada
skala nol dan penahan piring neraca dinaikan agar piring neraca tidak bergoyang,
kemudian bersihkan kembali.
Gambar 1. 34 timbangan analog

Latihan
Kerjakanlah latihan berikut untuk memperdalam pemahaman Anda terhadap materi di

atas!
1. Apakah fungsi dari penggunaan minyak imersi saat mengamati objek di bawah
mikroskop?
2. Sebutkan beberapa alat elektrik beserta fungsinya masing-masing!
3. Sebutkan beberapa alat gelas dan fungsinya masing-masing!
4. Sebutkan beberapa alat non-gelas beserta fungsinya masing-masing!
5. Jelaskan fungsi tabung Durham!

Baca kembali uraian teori di atas dan cermati tentang penggunaan dan fungsi
mikroskop cahaya, berbagai macam alat elektrik, serta alat-alat gelas dan non-gelas yang
digunakan dalam praktikum mikrobiologi.
Kegiatan praktikum ini dimulai dengan acara pengenalan alat beserta fungsinya yang
dibagi dalam tiga kelompok, yaitu alat-alat elektrik, alat-alat gelas dan keramik, serta alat-
alat non-gelas. Masing-masing alat memiliki komponen penyusun yang khusus dibuat sesuai.
216
Ringkasan
Kegiatan praktikum ini dimulai dengan acara pengenalan alat beserta fungsinya yang
dibagi dalam tiga kelompok, yaitu alat-alat elektrik, alat-alat gelas dan keramik, serta alat-
alat non-gelas. Masing-masing alat memiliki komponen penyusun yang khusus dibuat sesuai
Praktikum Mikrobiologi dengan tujuan (kegunaan) sehingga dalam praktik mikrobiologi
selanjutnya semua alat dapat dipakai sesuai fungsi dengan tepat.
Tes 1

atas!
Pilihlah satu jawaban yang paling tepat!
1) Di dalam mikroskop yang berfungsi untuk memperbesar spesimen sehingga

menghasilkan bayangan nyata adalah ....
A. condenser
B. okuler
C. lensa objektif
D. resolving nosepiece
2) Alat untuk memeram mikroba pada suhu tertentu adalah ....

A. colony counter
B. inkubator
C. autoklaf
D. hot plate
3) Berikut adalah alat non-gelas, kecuali ....

A. jarum ose
B. pinset
C. pembakar bunsen
D. pH indikator universal
4) Alat yang digunakan untuk mensterilkan berbagai macam alat dan bahan dengan
menggunakan uap air panas bertekanan adalah ....
A. autoklaf
B. colony counter
C. inkubator
D. BSC
217
5) Berikut adalah alat-alat yang terbuat dari bahan gelas ....

A. mikropipet
B. hot plate
C. colony counter
D. batang L
218
Panduan Penyusunan Laporan Praktikum
1. Masing-masing praktikan diwajibkan membuat dan membawa laporan sementara

praktikum yang mencakup:
a) acara praktikum,
b) tujuan, dan
c) skema kerja.
Laporan sementara ini menjadi syarat praktikan mengikuti praktikum pada hari itu.
Data dan hasil pengamatan praktikum juga ditulis dan/atau digambar dalam laporan
sementara yang telah disetujui oleh asisten pendamping praktikum.
2. Laporan sementara ditulis tangan.
3. Setelah pengamatan hasil, laporan sementara digunakan sebagai acuan pembuatan

laporan resmi. Laporan resmi diketik pada kertas A4 dengan batas tepi 2 cm (atas,
bawah, kanan, dan kiri), yang mencakup:
a. Halaman judul, yang berisi acara praktikum dan identitas praktikan (nama dan
NIM).
b. Halaman isi yang berisi acara dan topik, tujuan praktikum, tinjauan pustaka, alat
dan bahan, skema kerja, hasil pengamatan (berupa data yang telah diolah dan
foto), pembahasan, kesimpulan, daftar pustaka, jawaban pertanyaan, dan
lampiran (fotocopy pustaka yang digunakan).
4. Laporan resmi diketik dan dibuat secara berkelompok (kelompok kecil).
5. Copy paste laporan tidak diperbolehkan. Praktikan dikatakan copy paste apabila
terdapat 2 buah kalimat berurutan yang sama persis. Praktikan yang melakukan copy
paste akan dipanggil oleh tim asisten dan kemungkinan terburuk nilai laporan
bersangkutan sama dengan NOL.
219
Topik 2
Pengenalan Bahan Praktikum Media Pertumbuhan
Mikroorganisme
A. PENGANTAR
Hal yang sangat penting diketahui dan dipahami tentang bahan praktikum laboratium
mikrobiologi adalah jenis-jenis media pertumbuhan mikroorganisme serta cara
pengelolaannya termasuk pembuatan maupun penggunaan dalam Laboratorium
Media adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat hara (nutrient) yang
berguna untuk membiakkan mikroba. Dengan mempergunakan bermacam-macam media
dapat dilakukan isolasi, perbanyakan, pengujian sifat-sifat fisiologis dan perhitungan jumlah
mikroba, media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari
campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk
pertumbuhannya. Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi media berupa molekul-molekul
kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel. Dengan media pertumbuhan dapat
dilakukan isolasi mikroorganisme menjadi kultur murni dan juga memanipulasi komposisi
media pertumbuhannya sesuai kebutuhan bakteri. Oleh karena bakteri yang berbeda
memerlukan kebutuhan akan nutrisi yang berbeda pula , sehingga dikembangkan berbagai
macam media pertumbuhan untuk digunakan dalam diagnosa mikrobiologi. Media
pertumbuhan bakteri atau media kultur bakteri adalah cairan atau gel yang di design untuk
mendukung pertumbuhan mikroorganisme dan sel. Terdapat dua jenis utama media
pertumbuhan yaitu media yang digunakan untuk kultur pertumbuhan sel tumbuhan atau
binatang dan jenis yang kedua yaitu kultur mikrobiologi yang digunakan untuk
menumbuhkan mikroorganisme seperti bakteri dan jamur .
Pertumbuhan mikroorganisme tergantung dari tersedianya air, bahan-bahan yang
terlarut dalam air yang digunakan oleh mikroorganisme untuk membentuk bahan sel dan
memperoleh energi, adalah bahan makanan. Tuntutan berbagai mikroorganisme yang
menyangkut susunan larutan makanan dan persyaratan lingkungan tertentu, sangat
berbeda-beda, oleh sebab itu diperkenalkan banyak resep untuk membuat media biakan
untuk mikroorganisme, pada dasarnya sesuatu larutan biakan sekurang-kurangnya harus
memenuhi syarat-syarat atau semua unsur yang ikut serta pada pembentukan bahan sel
dalam bentuk berbagai senyawa yang dapat diolah.
Media itu sendiri adalah suatu tempat yang terdiri dari campuran zat-zat makanan
(nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya. Media terdiri atas bahan
dasar dari sumber Karbon (C), Nitrogen (N), Oksigen (O), Fosfat (PO4), dan unsur sekelumit
(mikronutrient/trace element).
Dapat disimpulkan media adalah suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi
(nutrient) yang dipakai untuk menumbuhkan mikroba (Sutedjo, 1996). Supaya mikroba dapat
tumbuh baik dalam suatu media, maka medium tersebut harus memenuhi syarat-syarat
antara lain:
220
a. Harus mengandung semua zat hara yang mudah digunakan oleh mikroba .
b. Harus mempunyai tekanan osmosa, tegangan permukaan dan pH yang sesuai dengan
kebutuhan mikroba yang ditumbuhkan
Komposisi media terdiri atas Agar , Peptone , Meat/plant extract , Faktor tumbuh ,
Komponen selektif , Komponen diferensial , Media buffer. Sifat – Sifat Media antara lain
Media dasar/umum , Media diperkaya (enriched media) , Media diferensial/pembeda ,
Media selektif , Media penguji , Media untuk penghitungan sel.
Untuk menelaah mikroorganisme di laboratorium, kita harus dapat menumbuhkan
mereka. Mikroorganisme dapat berkembang biak dengan alami atau dengan bantuan
manusia. Mikroorganisme yang dikembangkan oleh manusia diantaranya melalui substrat
yang disebut media. Untuk melakukan hal ini, haruslah dimengerti jenis-jenis nutrien yang
diisyaratkan oleh bakteri dan juga macam lingkungan fisik yang menyediakan kondisi
optimum bagi pertumbuhannya.
Media berdasarkan sifat terbagi menjadi 3 , yaitu Media padat, Media semi padat semi
cair, Media cair. Media berdasarkan Komposisi/susunannya terdiri atas Media Sintesis , semi
sintesis , dan media non sintesis . Berdasarkan tujuan yaitu media selektif atau penghambat
dan media diperkaya . contoh macam Jenis Media yang sering digunakan ,yaitu Nutrient
Agar , Nutrient Broth (NB) , PDA (Potato Dextrose Agar) , Salmonella Shigella (SS) Agar , Eosin
Methylene Blue Agar (EMBA). Selain ketiga media biakan tersebut di atas ada pula Media
Biak Kompleks untuk banyak mikroorganisme bertuntutan tinggi belum dikenal benar bahan-
bahan makan yang diperlukan. Orang membiakannya dalam larutan biak yang mengandung
ekstrak ragi, otolisat ragi, pepton atau ekstrak daging. Untuk beberapa kelompok organisme
lazim juga digunakan: rempah-rempah, dekok rumput kering, sari buah prem, sari wortel,
santan, dan untuk cendawan koprofil juga sari perasan tahi kuda. Sedangkan Media Biak
Padat yaitu media cair yang ditambahkan dengan bahan pemadat yang memberi konsistensi
seperti selai pada larutan air, hanya untuk keperluan tertentu masih digunakan gelatin,
karena sudah mencair pada suhu 26-30oc dan banyak mikroorgansme mampu mencairkan
gelatin, bahan pemadat yang hampir ideal adalah agar, agar ditambahkan dalam kadar 15-
20g/l. Agar baru mencair pada 100 oc, masih tetap cair kalau didinginkan 45 oc, agar hanya
dipengaruhi oleh sejumlah kecil bakteri, bila diperlukan media biakan padat tanpa
komponen-komponen organik, maka dipakai silika gel sebagai bahan pemadat.
Pada topik ini akan diuraikan sifat-sifat media (medium)
Menurut Pelgzar (1993), klasifikasi medium berdasarkan fungsinya digolongkan
menjadi 7 golongan, yaitu;
1. Medium umum, media yang ditambahkan bahan-bahan yang bertujuan menstimulasi
pertumbuhan mikroba secara umum, contoh Nutrient Agar (NA).
2. Medium khusus, merupakan medium untuk menentukan tipe pertumbuhan mikroba
dan kemampuannya untuk mengadakan perubahan-perubahan kimia tertentu
misalnya, medium tetes tebu untuk Saccharomyces cerevisiae
221
3. Media diperkaya (endrichmen media) yang ditambahkan bahan-bahan tertentu untuk

menstimulasi pertumbuhan mikroba yang diinginkan. $al ini dilakukan untuk
menstimulasi pertumbuhan mikroba yang jumlahnya sedikit dalam suatu campuran
berbagai mikroba, contoh: Chocolate media dan Yeast extract papaasium Nitrat Agar.
4. Media selektif, merupakan media yang ditambahkan bahan-bahan tertentu yang akan
menghambat pertumbuhan mikroba yang tidak diinginkan yang ada dalam suatu
spesimen. inhibitor yang digunakan berupa antibiotik, garam dan bahan-bahan kimia
lainnya.
5. Media diferensial, merupakan media yang ditambahkan bahan# bahan kimia atau
reagensia tertentu yang menyebabkan mikroba yang tumbuh memperlihatkan
perubahan-perubahan spesifik sehingga dapat dibedakan dengan jenis lainnya
6. Medium penguji (assay medium) yaitu medium dengan susunan tertentu yang
digunakan untuk pengujian senyawa-senyawa tertentu dengan bantuan bakteri
misalnya medium untuk menguji vitamin-vitamin, antibiotika dan lain-lain.
7. Media perhitungan jumlah bakteri dalam suatu bahan, misalnya medium untuk
menghitung jumlah bakteri E coli dalam air sumur.
B. TUJUAN
1. Mengetahui jenis media pertumbuhan mikroba

2. Mengetahui fungsi dari setiap media pertumbuhan
3. Mengetahui factor-faktor yang dapat menunjang pertumbuhan mikroba
4. Mengetahui sifat-sifat media
C. MEDIA PERUMBUHAN BAKTERI BERDASARKAN SIFAT
1. Medium cair
a. Medium ini dibuat dengan bahan alami yang sebelumnya harus diekstrak dari
beberapa tempat
b. Medium alami tersebut lebih sukar dilakukan maka sekarang terdapat dalam
bentuk serbuk siap pakai
c. Contoh : NB (nutrien broth), PGY (pepton glucosa extract), MEB (malt extract
broth), dan TSB (trypticase soy broth)
1. Media Brillian Green Lactose Broth (BGLB)

Media yang digunakan untuk mendeteksi bakteri coliform (Gram negatif) di
dalam air, makanan, dan produk lainnya. Media ini dapat menghambat
pertumbuhan bakteri Gram positif dan menggiatkan pertumbuhan bakteri
coliform. Ada atau tidaknya bakteri coliform ditandai dengan terbentuknya asam
dan gas yang disebabkan karena fermentasi laktosa oleh bakteri golongan coli
222
Gambar 2.1 BGLB

Sumber: https://shylesx6.wordpress.com/2012/01/12/the-features-of-brilliant-green-
lactose-bile-broth/
2. Nutrient Broth
Nutrient broth merupakan media untuk mikroorganisme yang berbentuk cair. Intinya
sama dengan nutrient agar. Nutrient broth dibuat dengan cara sebagai berikut.
1. Larutkan 5 g pepton dalam 850 ml air distilasi/akuades.
2. Larutkan 3 g ekstrak daging dalam larutan yang dibuat pada langkah pertama.
3. Atur pH sampai 7,0.
4. Beri air distilasi sebanyak 1.000 ml.
5. Sterilisasi dengan autoklaf
Gambar 2.2 NB
lactose-bile-broth/
223
3. Lactose broth
Lactose broth digunakan untuk menumbuhkan Salmonella dan bakteri koliform
dari makanan, air, dan hasil ternak. Reaksi enzimatis gelatin dan eksekstrak sapi
memberikan sumber karbon dan nitrogen untuk pertumbuhan bakteri pada
lactose broth. Laktosa adalah karbohidrat. Fermentasi laktosa dibuktikan dengan
timbulnya gas.
Komposisi yang dibutuhkan antara lain peptone 5 gr/L, ekstrak daging (sapi) 3
gr/L,
L, laktosa 5 gr/L. campurkan 13 gr atau lebih dalam 1 L air, didihkan 1 menit,
tuangkan dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham, autoklaf 15 menit
pada suhu 121oC. pHnya 6,9 ± 0,2 pada 25oC. Lactose broth ini akan berwarna
kekuningan dan jernih. Deng
Dengan
an menggunakan medium ini, Escherichia coli dan
Klebsiella pneumonia bisa tumbuh baik dan memproduksi gas, Salmonella
typhimurium tumbuh baik namun tidak memproduksi gas, sedangkan Proteus
vulgaris tidak tumbuh dengan baik dan tidak memproduksi gas.
Gambar 2.3 LB
Sumber: https://shylesx6.wordpress.com/2012/01/12/the
https://shylesx6.wordpress.com/2012/01/12/the-features-of
of-brilliant-green-
lactose-bile-broth/
2. Medium Padat
Medium cair bisa dibuat menjadi medium padat yaitu dengan menambahkan agar
dalam jumlah tertentu yaitu sekitar 15 gram
Medium tersebut akan lebih efisien dan efektif, disamping itu bila digunakan medium
padat instan ini maka tidak akan ada endapan
Contoh : NA (nutrien
trien Agar), PCA (Plate Count Agar), PDA (Potato Dextrose Agar)
1. Potato Dextrose Agar (PDA)
Potato dextrose agar merupakan salah satu media yang baik digunakan untuk
membiakkan suatu mikroorganisme, baik itu berupa cendawan/fungsi, bakteri,
maupun sel makhluk hidup. Media PDA merupakan jenis media biakan dan memiliki
bentuk/ konsistensi padat (solid). Potato dextrose agar merupakan paduan yang sesuai
untuk menumbuhkan biakan (Winda, 2009).
224
Media potato dextrose agar (PDA) berfungsi sebagai media kapang (jamur) dan khamir.
Selain itu PDA digunakan untuk enumerasi yeast dan kapang dalam suatu sampel atau
produk makanan. PDA mengandung sumber karbohidrat dalam jumlah cukup yaitu
terdiri dari 20% ekstrak kentang dan 2% glukosa sehingga baik untuk pertumbuhan
kapang dan khamir tetapi kurang baik untuk pertumbuhan bakteri. Komposisinya PDA
berupa kentang (4 g/L (berasal dari 200 gr kentang)), dektrose (15 g/L) dan aquades 1L.
Secara lebih rinci karakteristik media PDA terdiri dari :
Komposisi Media PDA (Potato Dextrose Agar)
Potato extract : 40,0 gram
Dextrose : 20,0 gram
Agar : 15,0 gram
Fungsi Media PDA (Potato Dextrose Agar) di Mikrobiologi:

Dalam mikrobiologi media PDA (Potato Dextrose Agar) digunakan untuk
menumbuhkan atau mengidentifikasi yeast dan kapang. Dapat juga digunakan untuk
enumerasi yeast dan kapang dalam suatu sampel atau produk makanan. PDA
mengandung sumber karbohidrat dalam jumlah cukup yaitu terdiri dari 20% ekstrak
kentang dan 2% glukosa sehingga baik untuk pertumbuhan kapang dan khamir tetapi
kurang baik untuk pertumbuhan bakteri.
Gambar 2.4 PDA

lactose-bile-broth/
2. Nutrien Agar (NA)

Dalam medium NA terkandung pepton, yeast dan beef extract yang berfungsi
sebagai sumber nitrogen dan sumber karbon, sumber vitamin dan beberapa
senyawa lain untuk menyokong pertumbuhan bakteri. Pada medium ini
terkadang juga ditambah dengan garam (NaCl) untuk menyeimbangkan tekanan
osmotik sel bakteri dan medium, agar bakteri yang akan ditumbuhkan tidak mati.
Medium ini juga telah tersedia dalam bentuk bubuk instan yang telah
mengandung semua bahan dalam tabel komposisi medium nutrient agar diatas.
Dengan medium instan ini, Anda dapat langsung melarutkan sejumlah bubuk
media NA instan pada akuades
225
Cara membuat medium NA adalah sebagai berikut:

a. Timbang semua bahan sesuai kuantitas yang dibutuhkan dan larutkan dalam
sejumlah akuades sesuai jumlah yang diinginkan
b. Masukkan dalam wadah tertutup seperti botol kaca schots dan
gunakan magnetic stirer dengan suhu ± 200˚C dan kecepatan 300rpm
c. Medium NA diaduk dan dipanaskan hingga agar larut sepenuhnya atau medium
telah bening
d. Setelah agar larut, medium disteril pada autoklaf pada tekanan 1,5 ATM dan
suhu 121˚C selama kurang lebih 15 menit.
e. Setelah sterilisasi, medium dapat dituang secara aseptis pada cawan petri untuk
penggunaan. Sebelum menuang medium, tunggu hingga suam-suam kuku (±
40˚C).
f. Untuk membuat medium miring, NA yang telah dipanaskan langsung ditransfer
pada tabung reaksi sebanyak ±5ml dan disumbat dengan kapas berbalut kasa
sebelum disterilkan
g. Simpan medium selama 24 jam pada suhu ruang untuk memastikan medium
tersebut memadat sempurna dan tidak ada kontaminan yang tumbuh. Jangan lupa
melapisi pinggiran petri atau sumbat penutup dengan plastic wrap untuk mencegah
kontaminasi.
h. Medium NA siap pakai dapat disimpan dalam suhu dibawah 30˚C dan digunakan
hingga dua minggu. Medium NA yang telah melewati masa penyimpanan akan
mengering, terutama pada medium NA dalam cawan petri.
Gambar 2.5 NA
Sumber: https://shylesx6.wordpress.com/ diunduh 10 Agustus 17
226
3. Plate Count Agar (PCA)

Plate Count Agar (PCA) atau yang juga sering disebut dengan Standard Methods
Agar (SMA) merupakan sebuah media pertumbuhan mikroorganisme yang umum
digunakan untuk menghitung jumlah bakteri total (semua jenis bakteri) yang
terdapat pada setiap sampel seperti makanan, produk susu, air limbah dan
sampel-sampel lainnya yang juga biasanya menggunakan metode Total Plate
Count (TPC). Plate Count Agar (PCA) merupakan media padat, yaitu media yang
mengandung agar sehingga setelah dingin media tersebut akan menjadi padat.
Plate Count Agar (PCA) pertama kali dikembangkan oleh Buchbinder, Baris, dan
Goldstein pada tahun 1953 atas permintaan dari American Public Health
Association (APHA).
Penggunaan Plate Count Agar (PCA) sebagai media untuk menghitung jumlah
total dari bakteri sudah dilakukan sejak lama. Sekarang industri-industri seperti
makanan, produk susu dan juga pengolahan limbah sudah menerapkan
perhitungan jumlah total bakteri pada sampel mereka sesuai dengan standar
yang ada menggunakan Plate Count Agar (PCA). Plate Count Agar (PCA) dibuat
dengan melarutkan semua bahan hingga membentuk suspensi 23,5 g/L
kemudian disterilisasi pada autoklaf.
Prosedur Kerja
a. Alat dan bahan disiapkan.
b. Bubuk media Plate Count Agar Oxoid CM 325 ditimbang sebanyak 17,5
gram kemudian dimasukkan ke dalam botol kaca.
c. Dilarutkan dengan 1000 ml aquades pH ± 7 (netral) kemudian
dihomogenkan.
d. Media yang telah larut dicek pHnya dengan pH stick.
e. Botol kaca yang berisi media ditutup dengan tutup botol yang dilapisi
aluminum foil dan diikat dengan benang.
f. Media disterilisasi dengan autoclave pada suhu 1210C selama 15 menit.
g. Media yang telah steril didinginkan hingga mencapai suhu 45-500C.
h. Media dituang ke dalam plate dan ditunggu hingga padat.
i. Setelah beku media siap digunakan
Gambar 2.6 PCA

Sumber: http://equestrianime.blogspot.co.id/2016/05/prosedur-pembuatan-media-pca-
300ml.html
227
3. Medium Semi Padat semi cair

Medium setengah padat, yaitu media yang mengandung agar 0,3-0,4% sehingga
menjadi sedikit kenyal, tidak padat, tidak begitu cair. Media semi solid dibuat dengan tujuan
supaya pertumbuhan mikroba dapat menyebar ke seluruh media tetapi tidak mengalami
percampuran sempurna jika tergoyang. Misalnya bakteri yang tumbuh pada media NfB
(Nitrogen free Bromthymol Blue) semisolid akan membentuk cincin hijau kebiruan dibawah
permukaan media, jika media ini cair maka cincin ini dapat dengan mudah hancur. Semi solid
juga bertujuan untuk mencegah/menekan difusi oksigen, misalnya pada media Nitrate Broth,
kondisi anaerob atau sedikit oksigen meningkatkan metabolisme nitrat tetapi bakteri ini juga
diharuskan tumbuh merata diseluruh media. Medium padat yang dalam penyiapannya harus
dilakukan pemanasan, menggunakan agar namun jumlah agar yang digunakan hanya
setengah dari medium padat misalnya bila pada medium padat ditambahkan agar sebanyak
15 gram maka dalam medium semi padat ditambahkan agar hanya sebanyak 7 gram.
Selain Medium yang disebutkan di atas, gelatin termasuk salah satu dari medium semi
padat, Gelatin adalah zat kimia padat, tembus cahaya, tidak berwarna, rapuh (jika kering),
dan tidak berasa, yang didapatkan dari kolagen yang berasal dari berbagai produk sampingan
hewan. Gelatin umumnya digunakan sebagai zat pembuat gel pada makanan, farmasi,
fotografi, dan pabrik kosmetik. Gelatin merupakan campuran antara peptida dengan protein
yang diperoleh dari hidrolisis kolagen yang secara alami terdapat pada tulang atau kulit
binatang. Gelatin komersial biasanya diperoleh dari ikan, sapi, dan babi. Dalam industri
pangan, gelatin luas dipakai sebagai salah satu bahan baku dari permen lunak, jeli, dan es
krim.
Gambar 2.7 Medium Semi Padat

Sumber: http://equestrianime.blogspot.co.id/2016/05/prosedur-pembuatan-media-pca-
300ml.html
Catatan :
Untuk mendukung bahan ajar ini, mahasiswa akan dilengkapi deman buku pedoman
praktikum
228
Latihan
Kerjakanlah latihan berikut untuk memperdalam pemahaman Anda terhadap materi

diatas!
1) Sebutkan media biakan pertumbuhan bakteri berdasarkan sifatnya
2) Sebutkan media biakan pertumbuhan bakteri berdasarkan sifatnya dan berikan
contoh-contohnya
3) Sebutkan beberapa alat gelas dan fungsinya masing-masing!
4) Sebutkan beberapa contoh media biakan yang sifatnya medium padat
5) Jelaskan syarat-syarat medium agar mikroba dapat tumbuh dengan baik

Baca kembali uraian teori di atas dan cermati tentang klasifikasi medium dan
fungsinya, serta jenis dan sifat medium pertumbuhan mikroba dalam pelaksanaan
praktikum mikrobiologi.
229
Panduan Penyusunan Laporan Praktikum
1. Masing-masing praktikan diwajibkan membuat dan membawa laporan sementara

praktikum yang mencakup:
a) acara praktikum,
b) tujuan, dan
c) skema kerja.
Laporan sementara ini menjadi syarat praktikan mengikuti praktikum pada hari itu.
Data dan hasil pengamatan praktikum juga ditulis dan/atau digambar dalam laporan
sementara yang telah disetujui oleh asisten pendamping praktikum.
2. Laporan sementara ditulis tangan.
3. Setelah pengamatan hasil, laporan sementara digunakan sebagai acuan pembuatan
laporan resmi. Laporan resmi diketik pada kertas A4 dengan batas tepi 2 cm (atas,
bawah, kanan, dan kiri), yang mencakup:
a. Halaman judul, yang berisi acara praktikum dan identitas praktikan (nama dan
NIM).
b. Halaman isi yang berisi acara dan topik, tujuan praktikum, tinjauan pustaka, alat
dan bahan, skema kerja, hasil pengamatan (berupa data yang telah diolah dan
foto), pembahasan, kesimpulan, daftar pustaka, jawaban pertanyaan, dan
lampiran (fotocopy pustaka yang digunakan).
4. Laporan resmi diketik dan dibuat secara berkelompok (kelompok kecil).
5. Copy paste laporan tidak diperbolehkan. Praktikan dikatakan copy paste apabila
terdapat 2 buah kalimat berurutan yang sama persis. Praktikan yang melakukan copy
paste akan dipanggil oleh tim asisten dan kemungkinan terburuk nilai laporan
bersangkutan sama dengan NOL.
230
Tes 2
Prosedur kerja Plate Count Agar (PCA)
231
Kunci Jawaban Tes

Prosedur Kerja
1. Alat dan bahan disiapkan.
2. Bubuk media Plate Count Agar Oxoid CM 325 ditimbang sebanyak 17,5 gram
kemudian dimasukkan ke dalam botol kaca.
3. Dilarutkan dengan 1000 ml aquades pH ± 7 (netral) kemudian dihomogenkan.
4. Media yang telah larut dicek pH-nya dengan pH stick.
5. Botol kaca yang berisi media ditutup dengan tutup botol yang dilapisi aluminum foil
dan diikat dengan benang.
6. Media disterilisasi dengan autoclave pada suhu 1210C selama 15 menit.
7. Media yang telah steril didinginkan hingga mencapai suhu 45-500C.
8. Media dituang ke dalam plate dan ditunggu hingga padat.
9. Setelah beku media siap digunakan
232
Daftar Pustaka
Ali, Alimuddin. 2005.Mikrobiologi Dasar. Makassar : Jurusan Biologi FMIPA UNM.
Benson, H.J. (1973). Microbiological Applications, A Laboratory Manual in General

Microbiology. 2nd ed. lowa: W.M.C. Brown Co. Publ. Dubuque.
Dwidjoseputro, D. 1994.Dasar dasar mikrobiologi. Jakarta: Djambatan.
Diliello, L.R. (1982). Methods in Food and Dairy Microbiology. Connecticut: Avi Publ. Co. Inc.
Westport
Fardiaz, S. (1994). Analisis Mikrobiologi Pangan. Jakarta: Raja Grafindo Persada
Ginanjar, I. 1981. Some Notes on the Identification of Rhizopus

Molds.ASEAN/UNESCO.Training Course. Identification Techniques of Microorganisms
in Culture Collection, Bangkok MIR-Cen-Tister
Hadietomo, Ratna. 1990. Mikrobiologi Dalam Praktek. Jakarta : PT. Gramedia.
Hans G.Schlegel, Karin Schmidt,1984, Mikrobiologi Umum (edisi keenam), Yogyakarta, Gajah
Mada University Press
Indrawati , G Isworo, RK Wibowo M, Lanita., S 1992 Pedoman Praktikum Mikrobiologi Dasar.

Fakultas MIPI Universitas Indonesia
Jawetz, Melnick & Adelberg’s. Medical Microbiology. Twenty Second. Ed. Penerbit Salemba
Medika. Jakarta.
Yutono, Y., Soedarsono, S Hartadi., S Suhadi, Pelezar,1989. Dasar-Dasar Mikrobiologi Jilid II.
Jakarta : Universitas Indonesia Press.
233
BAB V
PRAKTEK MIKRIBIOLOGI
PEMBUATAN MEDIA DAN STERILISASI
PENDAHULUAN
Dalam bidang penelitian khususnya mikrobiologi dalam mengembangbiakkan mikroba

diperlukan suatu substrat yang disebut medium. Sedangkan medium itu sendiri sebelum
digunakan harus dalam keadaan steril artinya tidak ditumbuhi oleh mikroba lain yang tidak
diharapkan agar mikroba dapat tumbuh dan berkembangbiak dengan baik di dalam medium,
maka diperlukan syarat tertentu yang diantaranya bahwa di dalam medium harus
terkandung semua unsur hara yang diperlukan untuk pertumbuhan dan perkembangan
mikroba kemudian susunan makanannya, tekanan osmosis, derajat, keasaman (p$, dan
temperatur .Deskripsi Mata Kuliah
Dalam melakukan diagnosa Mikrobiologi pembuatan media sterilisasi sangat
diutamakan baik alat maupun medianya. Suatu alat dikatakan steril apabila alat atau bahan
bebas dari mikroba baik dalam bentuk vegetatif maupun spora. Untuk itu dalam melakukan
praktek dalam laboratorium mikrobiologi sangat perlu mengenal metode pembuatan media
dan teknik sterilisasi yang tepat.
TUJUAN INSTRUKSIONAL UMUM
a. Mengetahui !ara pembuatan media dan membedakan berbagai media pertumbuhan

mikroba.).
b. Mengetahui cara dan macam-macam sterilisasi.
Susunan dan keterkaitan antarmodul

Modul ini sangat erat kaitannya dengan Modul I topik 1 dan topik 2
Bahan pendukung lainnya, misalnya video, audio

a. Cara menuang agar plate dengan alamat:
https://www.youtube.com/watch?v=5CzQmccXE4g
b. Cara pembuatan Natrium Agar (NA) alamat:
https://www.youtube.com/watch?v=J-uV_wsrhyg
c. Cara sterilisasi menggunakan autoclave:
https://www.youtube.com/watch?v=9hvBKRj1ZWQ
234
Topik 1
Pembuatan Media Biakan Mikroorganisme
PENDAHULUAN
Medium ialah suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi (zat makanan) yang
dipakai untuk menumbuhkan mikroba termasuk bakteri patogen tanaman. Selain itu
menumbuhkan mikrobia medium dapat digunakan pula untuk isolasi, memperbanyak,
pengujian sifat-sifat fisiologi dan perhitungan jumlah mikroba (Khaeruni dan Satrah, 2014).
Medium harus mengandung nutrien yang merupakan substansi dengan berat molekul
rendah dan mudah larut dalam air. Nutrien ini adalah degradasi dari nutrien dengan molekul
yang kompleks. Nutrien dalam medium harus memenuhi kebutuhan dasar makhluk hidup,
yang meliputi air, karbon, energi, mineral dan faktor tumbuh (Label, 2008)
Sterilisasi merupakan metode praktis yang dirancang untuk membersihkan dari
mikroorganisme, atau sengaja untuk menghambat pertumbuhannya. Mikroorganisme sangat
berbeda, dalam kelemahannya terdapat berbagai macam agen antimikroba. Sterilisasi
dengan panas adalah unit operasi dimana bahan dipanaskan dengan suhu yang cukup tinggi
dan waktu yang cukup lama untuk merusak mikroba dan aktivitas enzim. Sebagai hasilnya,
bahan yang disterilkan akan memiliki daya simpan lebih dari enam bulan pada suhu ruang.
Contoh proses sterilisasi adalah produk olahan dalam kaleng seperti kornet, sarden dan
sebagainya (Irianto, 2006).
DESKRIPSI CAKUPAN MATERI BAHAN AJAR
Mikroorganisme dapat berkembang biak secara alami atau dengan campur tangan
manusia. Mikroorganisme yang dikembangkan oleh manusia diantaranya melalui
pertumbuhan menggunakan media. Pada pembuatan media ini, haruslah dimengerti jenis-
jenis nutrien yang diperlukan oleh bakteri dan juga keadaan lingkungan fisik yang dapat
menyediakan kondisi optimum bagi pertumbuhannya.
TUJUAN INSTRUKSIONAL UMUM DAN KHUSUS
1. Mahasiswa mampu menggunakan alat-alat praktikum pembuatan media biakan

mikrorganisme dengan baik dan benar
2. Mahasiswa mampu menggunakan bahan-bahan praktikum pembuatan media biakan
mikrorganisme dengan dan benar
3. Mahasiswa mampu mengetahui komposisi bahan dasar media pembiakan
mikrorganisme dengan baik dan benar
4. Mahasiswa mampu mengetahui jenis media biakan berdasarkan karakteristik bakteri.
235
A. PEMBUATAN MEDIA
Medium pertumbuhan bakteri merupakan elemen penting dalam praktik mikrobiologi

yang harus Anda ketahui karena dengan menggunakan media pertumbuhan maka dapat
dipelajari aktivitas mikroba yang tumbuh di situ. Aktivitas mikroba akan mengakibatkan
perubahan pada media pertumbuhan yang digunakan sehingga dapat dipelajari. Bahan-
bahan media dapat berupa bahan-bahan yang sudah jadi, bahan-bahan asli, atau bahan
alami. Pada dasarnya bahan-bahan untuk pembuatan media dapat dikelompokkan menjadi
tiga kelompok, yaitu bahan dasar, nutrisi, dan bahan tambahan.
Makhluk hidup yang ada di bumi tidak hanya terdiri dari makhluk hidup yang dapat
dilihat oleh mata telanjang, tetapi ada juga mikroorganisme yang berukuran kecil dan hanya
dapat dilihat dengan menggunakan teknik dan peralatan khusus. Mikroorganisme (jasad
renik) merupakan jasad hidup yang mempunyai ukuran sangat kecil. Mikroorganisme
mempengaruhi kehidupan manusia baik secara langsung maupun tidak langsung yang bisa
berperan sebagai kawan maupun lawan bagi kehidupan manusia.
Mikroorganisme dapat berkembang biak secara alami atau dengan campur tangan
manusia. Mikroorganisme yang dikembangkan oleh manusia diantaranya melalui
pertumbuhan menggunakan media. Pada pembuatan media ini, haruslah dimengerti jenis-
jenis nutrien yang diperlukan oleh bakteri dan juga keadaan lingkungan fisik yang dapat
menyediakan kondisi optimum bagi pertumbuhannya.
Nutrien dan vitamin dalam media pertumbuhan berfungsi untuk membentuk
substansi yang mengaktivasi enzim pada media. Kebutuhan akan nutrien dan vitamin
berbeda-beda pada masing-masing mikroorganisme. Mikroorganisme memperlihatkan
gejala yang berlainan dalam pola pengambilan nutrisi, meskipun semua mikroorganisme
membutuhkan vitamin dalam proses metabolismenya, namun beberapa jenis
mikroorganisme mampu mensintesis kebutuhan vitaminnya sendiri dari senyawa-senyawa
lain di dalam medium (Hadioetomo, 1986).
Pembiakan mikroba secara buatan memerlukan media pertumbuhan untuk menjadi
tempat tumbuh dan penyedia nutrien bagi mikroba. Media pertumbuhan terdiri dari garam
organik, sumber energi (karbon), vitamin dan zat pengatur tumbuh . Pembuatan media ini
dapat pula ditambahkan komponen lain seperti senyawa organik dan senyawa kompleks
lainnya (soeryowinoto, 1985). Media berfungsi untuk tempat tumbuhnya mikroba, isolasi,
memperbanyak jumlah, menguji sfat-sifat fisiologi dan perhitungan jumlah mikroba,
dimana dalam proses pembuatannya harus disterilisasi dan menerapkan metode aseptis
untuk menghindari kontaminasi pada media itu sendiri (Fuad, 2011)
Media juga berperan sebagai wadah atau tempat zat hara yang digunakan oleh
mikroorganisme untuk pertumbuhan, sintesis sel, keperluan energi dalam metabolisme, dan
pergerakan. umumnya, media pertumbuhan berisi air, sumber energi, zat hara sebagai
sumber karbon, nitrogen, sulfur, fosfat, oksigen, hidrogen, serta unsur-unsur lainnya. Variasi
dalam tipe nutrisi, diimbangi oleh tersedianya berbagai macam media yang banyak
macamnya untuk kultivasinya, oleh sebab itu dalam laporan ini akan membahas lebih
lanjut kebutuhan dasar mikroorganisme, macam-macam media pertumbuhan, dan
prosedur umum pembuatan media pertumbuhan guna menunjang kegiatan pembelajaran
mikrobiologi.
236
Media pertumbuhan mikroba adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat
makanan (nutrisi) yang diperlukan mikroba untuk pertumbuhannya. Mikroba memanfaatkan
nutrisi media berupa molekul-molekul kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel.
Komposisi media tumbuh bervariasi tergantung pada jenis mikroorganisme yang akan
ditumbuhkan, namum semua mikroorganisme mempunyai kebutuhan dasar yang sama
dalam media tumbuhnya, yaitu air, karbon, energi, mineral dan faktor tumbuh. Derajat
keasaman (pH) media sangat menentukan pertumbuhan mikroorganisme, pada umumnya
mikroorganisme hidup pada kisaran pH netral (7), tetapi mikroorganisme patogen biasanya
hidup pada pH basa.
Dengan media pertumbuhan dapat dilakukan isolat mikroba menjadi kultur murni dan
juga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya.
B. BAHAN-BAHAN MEDIA PERTUMBUHAN BAKTERI
1. Bahan Dasar
a. Air (H2O) sebagai pelarut.
b. Agar-agar (dari rumput laut) yang berfungsi untuk pemadat media. Agar sulit
didegradasi oleh mikroba pada umumnya dan mencair pada suhu 45oC.
c. Gelatin juga memiliki fungsi yang sama seperti agar. Gelatin adalah polimer asam
amino yang diproduksi dari kolagen. Kekurangannya adalah lebih banyak jenis
mikroba yang mampu menguraikannya dibanding agar.
d. Silica gel, yaitu bahan yang mengandung natrium silikat. Fungsinya juga sebagai
pemadat media. Silica gel khusus digunakan untuk memadatkan media bagi
mikroba autotrof obligat.
2. Nutrisi atau Zat Makanan

Media harus mengandung unsur-unsur yang diperlukan untuk metabolisme sel, yaitu
berupa unsur makro, seperti C, H, O, N, P, dan unsur mikro, seperti Fe, Mg, dan unsur
pelikan/trace element.
Sumber karbon dan energi yang dapat diperoleh berupa senyawa organik atau
anorganik sesuai dengan sifat mikrobanya. Jasad heterotrof memerlukan sumber karbon
organik, antara lain dari karbohidrat, lemak, protein, dan asam organik.
Sumber nitrogen mencakup asam amino, protein atau senyawa bernitrogen lain.
Sejumlah mikroba dapat menggunakan sumber N anorganik, seperti urea.
3. Bahan Tambahan Vitamin-vitamin

Bahan-bahan tambahan yaitu bahan yang ditambahkan ke media dengan tujuan
tertentu, misalnya phenol red (indikator asam basa) ditambahkan untuk indikator perubahan
pH akibat produksi asam organik hasil metabolisme. Antibiotik ditambahkan untuk
menghambat pertumbuhan mikroba nontarget/kontaminan.
237
C. MACAM-MACAM MEDIA PERTUMBUHAN
1. Media berdasarkan Sifat Fisik

a. Media padat
Media yang mengandung agar 15% sehingga setelah dingin media menjadi padat.
b. Media setengah padat
Media yang mengandung agar 0,3-0,4% sehingga menjadi sedikit kenyal, tidak
padat, tidak begitu cair. Media semi solid dibuat dengan tujuan: 1) supaya
pertumbuhan mikroba dapat menyebar ke seluruh media, tetapi tidak mengalami
percampuran sempurna jika tergoyang. Misalnya, bakteri yang tumbuh pada
media Nitrogen free Bromthymol Blue (NfB) semisolid akan membentuk cincin
hijau kebiruan di bawah permukaan media jika media ini cair maka cincin ini
dapat dengan mudah hancur. 2) untuk mencegah/menekan difusi oksigen,
misalnya pada media Nitrate Broth, kondisi anaerob atau sedikit oksigen
meningkatkan metabolisme nitrat, tetapi bakteri ini juga diharuskan tumbuh
merata di seluruh media.
c. Media cair
Media yang tidak mengandung agar, contohnya adalah Nutrient Broth (NB),
Lactose Broth (LB).
2. Media berdasarkan Komposisi

a. Media sintesis
Media yang komposisi zat kimianya diketahui jenis dan takarannya secara pasti,
misalnya Glucose Agar, Mac Conkey Agar.
b. Media semi sintesis
Media yang sebagian komposisinya diketahui secara pasti, misalnya Potato
Dextrose Agar (PDA) yang mengandung agar, dekstrosa, dan ekstrak kentang.
Bahan ekstrak kentang, tidak dapat diketahui secara detail tentang komposisi
senyawa penyusunnya.
c. Media nonsintesis
Media yang dibuat dengan komposisi yang tidak dapat diketahui secara pasti dan
biasanya langsung diekstrak dari bahan dasarnya, misalnya Tomato Juice Agar,
Brain Heart Infusion Agar, Pancreatic Extract
3. Media berdasarkan Tujuan

a. Media untuk isolasi (media umum).
Media ini mengandung semua senyawa esensial untuk pertumbuhan mikroba,
misalnya Nutrient Broth, Blood Agar.
b. Media selektif/penghambat.
Media yang selain mengandung nutrisi juga ditambah suatu zat tertentu sehingga
media tersebut dapat menekan pertumbuhan mikroba lain dan merangsang
pertumbuhan mikroba yang diinginkan. Contohnya, media Luria Bertani yang
238
ditambah Amphisilin untuk merangsang E. coli resisten antibiotik dan

menghambat kontaminan yang peka Amphisilin. Salt broth yang ditambah NaCl
4% untuk membunuh Streptococcus agalactiae yang toleran terhadap garam.
c. Media diperkaya (enrichment).
Media diperkaya adalah media yang mengandung komponen dasar untuk
pertumbuhan mikroba dan ditambah komponen kompleks, seperti darah, serum,
dan kuning telur. Media diperkaya juga bersifat selektif untuk mikroba tertentu.
Bakteri yang ditumbuhkan dalam media ini tidak hanya membutuhkan nutrisi
sederhana untuk berkembang biak, tetapi membutuhkan komponen kompleks,
misalnya Blood Tellurite Agar, Bile Agar, Serum Agar.
d. Media untuk peremajaan kultur.
e. Media umum atau spesifik yang digunakan untuk peremajaan kultur.
f. Media untuk menentukan kebutuhan nutrisi spesifik.
Media ini digunakan untuk mendiagnosis atau menganalisis metabolisme suatu
mikroba. Contohnya, Koser’s Citrate media, yang digunakan untuk menguji
kemampuan menggunakan asam sitrat sebagai sumber karbon.
g. Media untuk karakterisasi bakteri.
Media yang digunakan untuk mengetahui kemampuan spesifik suatu mikroba.
Kadang-kadang indikator ditambahkan untuk menunjukkan adanya perubahan
kimia. Contohnya, Nitrate Broth, Lactose Broth, Arginine Agar.
h. Media diferensial.
Media ini bertujuan untuk mengidentifikasi mikroba dari campurannya
berdasarkan karakter spesifik yang ditunjukkan pada media diferensial, misalnya
Triple Sugar Iron Agar (TSIA) yang mampu memilih Enterobacteria berdasarkan
bentuk, warna, ukuran koloni, dan perubahan warna media di sekeliling koloni.
Media pertumbuhan mikroba adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat
makanan (nutrisi) yang diperlukan mikroba untuk pertumbuhannya. Bahan-bahan
yang diperlukan untuk media pertumbuhan adalah bahan dasar, nutrisi, dan bahan
tambahan. Media pertumbuhan dibagi tiga kelompok berdasarkan sifat fisik,
komposisi, dan tujuan.
D. STERILISASI
Sterilisasi adalah proses penghilangan semua jenis organisme hidup, dalam hal ini
adalah mikroorganisme (protozoa, fungi, bakteri, mycoplasma, virus) yang terdapat dalam
suatu benda. Proses ini melibatkan aplikasi biocidal agent atau proses fisik dengan tujuan
untuk membunuh atau menghilangkan mikroorganisme. Sterilisasi didesain untuk
membunuh atau menghilangkan mikroorganisme. Target suatu metode inaktivasi tergantung
dari metode dan tipe mikroorganisme yaitu tergantung dari asam nukleat, protein atau
membran mikroorganisme tersebut. Agen kimia untuk sterilisasi disebut sterilant
(Pratiwi,2006).
239
Ahli lain mengatakan bahwa sterilisasi adalah proses atau kegiatan menghancurkan
atau memusnahkan semua mikro-organisme termasuk spora, dari sebuah benda atau
lingkungan. Hal ini biasanya dilakukan dengan pemanasan atau penyaringan tetapi bahan
kimia atau radiasi juga dapat digunakan. Sedangkan desinfeksi adalah perusakan,
penghambatan atau penghapusan mikroba yang dapat menyebabkan penyakit atau masalah
lain misalnya seperti pembusukan. Hal ini biasanya dicapai dengan menggunakan bahan
kimia.
Cara sterilisasi dapat dilakukan dengan 2 cara, yaitu:
Terminal Sterlization (sterilisasi akhir). Menurut PDA Technical Monograph
dibagi menjadi 2, yaitu:
a. Overkill Method
yaitu metode sterilisasi menggunakan pemanasan dengan uap panas pada suhu 121C
selama 15 menit. Penggunaan metode ini biasanya dipilih untuk bahan-bahan yang
tahan panas seperti zat anorganik. Dasar pemilihan metode ini adalah karena lebih
efisien, cepat, dan aman.
b. Bioburden Sterilitation
merupakan suatu metode sterilisasi yang dilakukan dengan monitoring terkontrol dan
ketat terhadap beban mikroba sekecil mungkin di beberapa lokasi jalur produksi
sebelum menjalani proses sterilisasi lanjutan dengan tingkat sterilitas yang
dipersyaratkan SAL 10 -6. Dalam metode ini digunakan suatu zat yang dapat
mengalami degradasi kandungan bila dipanaskan pada suhu yang sangat tinggi.
Sebagai contoh adalah penggunaan Dextrose yang bila dipanaskan dapat menghasilkan
senyawa Hidro Methyl Furfural (HMF) yang merupakan suatu senyawa hepatotoksik.
E. ASEPTIC PROCESSING
Metode ini merupakan metode pembuatan produk steril menggunakan saringan

dengan filter khusus untuk bahan obat steril atau bahan baku steril yang diformulasi dan
dimasukkan kedalam kontainer steril dalam lingkungan terkontrol. Suplai udara, material,
peralatan, dan petugas telah terkontrol sedemikian hingga kontaminasi mikroba tetap
berada pada level yang dapat diterima dalam clear zone.
240
PELAKSANAAN PRAKTIKUM PEMBUATAN MEDIA
1. Alat dan Bahan

a. Alat
1. Timbangan analitik.
2. Gelas ukur.
3. Beaker glass.
4. Batang pengaduk.
5. Hot plate dan batang stirrer
6. pH meter/pH indikator.
7. Autoklaf.
8. Cawan petri.
9. Tabung reaksi.
10. Pisau.
11. Kertas saring.
12. Erlenmeyer.
b. Bahan
1. Resep media sintetis NA.
2. Resep media sintetis PDA.
c. Cara Kerja Pembuatan NA

1) Timbang komponen media dengan menggunakan timbangan analitis untuk
volume yang diinginkan sesuai dengan komposisi berikut.
a) Beef extract 3 g
b) Peptone 5 g
c) Agar 15 g
d) Akuades s.d 1000 ml
2) Akuades sebanyak 100 ml dibagi menjadi dua satu bagian untuk melarutkan Beef
extract dan peptone dan sebagian lagi untuk melarutkan agar. Sebaiknya air
untuk melarutkan agar jumlahnya lebih banyak
241
Gambar 2.1. Proses Pelarutan Beef Extract dan Peptone

Sumber; http://www.academia.edu. Diunduh 8/9/17.
3) Agar dilarutkan pada sebagian air tersebut dengan mengaduk secara konstan
sambil dipanaskan dapat menggunakan kompor gas atau hot plate stirrer
(jangan sampai overheat karena akan terbentuk busa dan memuai sehingga
tumpah).
Gambar 2 Proses Pelarutan dan Pemanasan Agar

4) Sementara itu sebagian akuades digunakan untuk melarutkan peptone dan beef
extract, cukup dengan pengadukan.
5) Setelah keduanya larut, larutan dituangkan ke larutan agar dan diaduk sampai
homogen. Kemudian pH media diukur dengan mencelupkan kertas
pH indikator. Jika pH tidak netral maka dapat ditambahkan HCl/NaOH
242
Gambar 3. Larutan pH indicator

6) Setelah itu media dimasukkan ke dalam labu erlenmeyer dan disterilisasi dengan
autoklaf.
7) Tuang media steril ke cawan petri steril secara aseptis. Jika diinginkan media
tegak atau miring pada point ke-5, media langsung dituang ke tabung kemudian
disterilisasi.
d. Cara Kerja Pembuatan Nutrient Broth (NB)

Komposisi untuk media NB sama dengan NA, tetapi tidak memakai agar sebagai
pemadat. Proses pembuatannya pun lebih sederhana, tinggal melarutkan peptone dan
beef extract kemudian ditampung dalam labu erlenmeyer atau tabung reaksi dan siap
disterilisasi. Proses pembuatan ini tidak memerlukan panas, peptone dan beef extract
akan mudah larut sempurna pada air suhu kamar jika diaduk.
e. Cara Kerja Pembuatan Potato Dextrose Agar (PDA)

1) Timbang komponen media dengan menggunakan timbangan analitis untuk
volume yang diinginkan sesuai dengan komposisi berikut.
a) Potato/kentang 3 g
b) Peptone 5 g
c) Agar 15 g
d) Akuades s.d 1.000 ml
e) Sebelum ditimbang, sebaiknya kentang dikupas dan diiris kecil-kecil.
243
2) Kentang direbus dalam sebagian akuades tadi selama 1-3 jam sampai lunak,
kemudian diambil ekstraknya dengan menyaring dan memerasnya menggunakan
kertas saring lalu ditampung di beaker glass baru
Gambar 4 proses perebusan kentang dengan akuades

3) Agar dilarutkan dengan Hot Plate Stirrer dalam 50 ml akuades. Setelah larut
dapat ditambahkan dekstrosa dan dihomogenkan lagi.
Gambar 5 Hot Plate Stirrer

244
4) Setelah semua larut, ekstrak kentang dan agar-dekstrosa dicampur dan

dihomogenkan. pH media diatur menjadi 5-6 dengan meneteskan HCl/NaOH
Gambar 6 pencampuran ekstrak kentang

Gambar 7. pH media diatur

245
5) Media dituang ke dalam erlenmeyer atau ke tabung reaksi kemudian siap untuk
disterilisasi
PETUNJUK PELAKSANAAN PRAKTIKUM
Setiap 8-10 mahasiswa membentuk satu kelompok dalam melakukan kegiatan

praktikum.
PETUNJUK PENULISAN LAPORAN
1. Penulisan laporan Praktikum, laporan praktikum berisikan:

a. Pendahuluan: memuat latar belakang dan tujuan praktikum.
b. Tinjauan pustaka: memuat teori praktikum yang telah diketahui hingga saat ini.
c. Alat, bahan, dan cara kerja: berisikan alat dan bahan yang digunakan, serta
prosedur yang dilakukan.
d. Hasil dan pembahasan: berisikan hasil-hasil yang diperoleh dan membandingkan
hasil-hasil penelitian terdahulu.
e. Kesimpulan.
f. Daftar Pustaka.
2. Penyerahan Laporan
Laporan dikumpulkan sesuai dengan jadwal yang telah ditentukan oleh instruktur.
3. Format Evaluasi Praktikum

Nama :
Hari / tanggal :
Topik Praktikum :
Hasil Praktikum dan Pengamatan
Kesimpulan
Praktikan Dosen
246
Topik 2
Sterilisasi
PENDAHULUAN
Sterilisasi merupakan proses untuk mematikan semua mikroorganisme yang hidup.

"daya pertumbuhan mikro menyatakan bahwa pertambahan bakteri masih berlangsung dan
tidak sempurnanya proses sterilisasi. Jika proses sterilisasi berlangsung sempurna, maka
spora bakteri yang merupakan bentuk paling resikan dari kehidupan mikroba tidak akan
terlihat lagi. Sterilisasi merupakan metode praktis yang dirancang untuk membersihkan dari
mikroorganisme, atau sengaja untuk menghambat pertumbuhannya. Mikroorganisme sangat
berbeda, dalam kelemahannya terdapat berbagai macam agen antimikroba (Suriawiria,)
TUJUAN INSTRUKSIONAL UMUM DAN KHUSUS
1. Mahasiswa mampu menyebutkan nama-nama alat-alat sterilisasi dengan baik dan

benar
2. Mahasiswa mampu menggunakan alat-alat praktikum sterilisasi
3. Mahasiswa mampu melakukan proses sterilisasi dengan cara sterilisasi secara mekanik
4. Mahasiswa mampu melakukan proses sterilisasi dengan cara sterilisasi secara fisik
5. Mahasiswa mampu melakukan proses sterilisasi dengan cara sterilisasi secara kimiawi
A. STERILISASI
Satu tahapan penting yang harus dilakukan dan merupakan aturan standar selama
melaksanakan praktikum atau kerja mikrobiologi adalah sterilisasi. Sterilisasi adalah proses
atau kegiatan membebaskan suatu bahan atau benda dari semua bentuk kehidupan dengan
cara merebus, stoom, panas tinggi, atau menggunakan bahan kimia. Sterilisasi dapat
dilakukan tergantung dari bahan atau alat yang akan disteril.
Mikroorganisme dapat dikendalikan, yaitu dibasmi, dihambat atau ditiadakan dari suatu
lingkungan, dengan menggunakan berbagai proses atau sarana fisik .Proses atau sarana yang
digunakan bergantung kepada banyak faktor dan hanya dapat ditentukan setelah diadakan
evaluasi terhadap keadaan khusus yang bersangkutan. Misalnya untuk membasmi mikroba
penyebab infeksi pada hewan yang mati, mungkin cocok untuk membakar hewan tersebut.
Tetapi bila kita perlu mensterilkan kantung plastik yang akan digunakan untuk menampung
darah, maka kita harus memilih suatu proses sterilisasi yang tidak akan merusak
kantung plastik tersebut. Penelitian serta pengalaman dapat memberikan pengarahan
terhadap pemilihan metode yang paling sesuai.
247
B. ADA BEBERAPA METODE STERILISAZI YAITU:
1. Sterilisasi dengan cara rebus

Mensterikan peralatan dengan cara merebus di dalam air sampai mendidih (1000C) dan
ditunggu antara 15 sampai 20 menit. Misalnya peralatan dari logam, kaca dan karet.
2. Sterilisasi dengan cara stoom
Mensterikan peralatan dengan uap panas didalam autoclave dengan waktu, suhu dan
tekanan tertentu. Misalnya alat tenun, obat-obatan dan lain-lain.
3. Sterilisasi dengan cara panas kering
Mensterikan peralatan dengan oven dengan uap panas tinggi. Misalnya peralatan
logam yang tajam, peralatan dari kaca dan obat tertentu.
4. Sterilisasi dengan cara menggunakan bahan kimia
Mensterikan peralatan dengan menggunakan bahan kimia seperti alkohol, sublimat,
uap formalin, khususnya untuk peralatan yang cepat rusak bila kena panas. Misalnya
sarung tangan, kateter, dan lain-lain.
5. Sterilisasi dengan radiasi
Radiasi sinar gama atau partikel elektron dapat digunakan untuk mensterilkan jaringan
yang telah diawetkan maupun jaringan segar. Untuk jaringan yang dikeringkan secara
liofilisasi, sterilisasi radiasi dilakukan pada temperatur kamar (proses dingin) dan tidak
mengubah struktur jaringan, tidak meninggalkan residu dan sangat efektif untuk
membunuh mikroba dan virus sampai batas tertentu. Sterilisasi jaringan beku
dilakukan pada suhu -40 derajat Celsius. Teknologi ini sangat aman untuk diaplikasikan
pada jaringan biologi.
6. Sterilisasi dengan penyaringan
Sterilisasi dengan penyaringan dilakukan untuk mensterilisasi cairan yang mudah rusak
jika terkena panas atu mudah menguap (volatile). Cairan yang disterilisasi dilewatkan
ke suatu saringan (ditekan dengan gaya sentrifugasi atau pompa vakum) yang berpori
dengan diameter yang cukup kecil untuk menyaring bakteri. Virus tidak akan tersaring
dengan metode ini.
7. Sterilisasi gas
Sterilisasi gas digunakan dalam pemaparan gas atau uap untuk membunuh
mikroorganisme dan sporanya. Meskipun gas dengan cepat berpenetrasi ke dalam pori
dan serbuk padat. Sterilisasi adalah fenomena permukaan dan mikroorganisme yang
terkristal akan dibunuh. Sterilisasi gas biasanya digunakan untuk bahan yang tidak bisa
difiltrasi, tidak tahan panas dan tidak tahan radiasi atau cahaya.
C. JENIS PERALATAN YANG DAPAT DISTERILKAN:
1. Peralatan yang terbuat dari logam, misalnya pinset, gunting, speculum.

2. Peralatan yang terbuat dari kaca, misalnya semprit (spuit), tabung kimia.
3. Peralatan yang terbuat dari karet, misalnya, kateter, sarung tangan, pipa.
4. Peralatan yang terbuat dari ebonit, misalnya kanule rectum, kanule trachea.
248
5. Peralatan yang terbuat dari email, misalnya bengkok (nierbekken), baskom.

6. Peralatan yang terbuat dari porselin, misalnya mangkok, cangkir, piring .
7. Peralatan yang terbuat dari tenunan, misalnya kain kasa, tampon, baju.
Dalam praktek sterilisasi alat-alat dan medium dapat dikerjakan secara mekanik
(misalnya secara penyaringan), secara kimia (misalnya dengan disinfektan) ataupun secara
fisik (misalnya dengan pemanasan, sinar ultra violet, sinar X dan lain-lain). Cara sterilisasi
yang dipakai tergantung pada macamnya bahan dan sifat yang disterilkan.
1. Macam-macam Sterilisazi
Pada prinsipnya sterilisasi dapat dilakukan dengan 3 cara, yaitu cara mekanik, cara fisik,
dan cara kimiawi.
2. Sterilisasi cara mekanik (filtrasi)

Menggunakan suatu saringan yang berpori sangat kecil (0.22 mikron atau 0.45 mikron)
sehingga mikroba tertahan pada saringan tersebut. Proses ini ditujukan untuk sterilisasi
bahan yang peka panas, misalnya larutan enzim dan antibiotik.
3. Sterilisasi secara fisik

Dapat dilakukan dengan pemanasan dan penyinaran.
a. Pemanasan
1) Pemijaran (dengan api langsung): membakar alat pada api secara langsung, contoh
alat: jarum inokulum (jarum ose), pinset, batang L.
2) Panas kering: sterilisasi dengan oven kira-kira 60-180oC. Sterilisasi panas kering cocok
untuk alat yang terbuat dari kaca, misalnya erlenmeyer, tabung reaksi, cawan.
3) Uap air panas: konsep ini mirip dengan mengukus. Bahan yang mengandung air lebih
tepat menggunakan metode ini supaya tidak terjadi dehidrasi.
4) Uap air panas bertekanan: menggunakan autoklaf.
b. Penyinaran dengan Ultra Violet (UV)

Sinar UV juga dapat digunakan untuk proses sterilisasi, misalnya untuk membunuh
mikroba yang menempel pada permukaan interior Safety Cabinet dengan disinari lampu UV.
4. Sterilisasi secara kimiawi

Biasanya menggunakan senyawa desinfektan, antara lain alkohol
5. Teknik Kerja Aseptis

Apabila akan bekerja di atas meja maka persiapan yang harus dilakukan sebelum
bekerja secara aseptis adalah mensterilkan tempat bekerja (meja). Caranya dengan
menyemprotkan alkohol 70% di permukaan meja dan udara di sekitar meja secara merata.
Kemudian bersihkan meja dengan menggunakan kapas/tisu dengan cara digosok satu arah
saja. Setelah itu, letakkan alat dan bahan yang diperlukan di atas meja yang telah bersih.
249
Semprot lagi semua permukaan alat dengan alkohol, kemudian semprot kedua tangan
hingga merata, diamkan hingga kering, dan siap bekerja secara aseptis.
Perlu diingat bahwa untuk mengurangi terjadinya kontaminasi maka harus selalu bekerja
dekat dengan api dari pembakar bunsen. Apabila akan memindahkan biakan dari tabung
reaksi atau erlenmeyer dan cawan petri ke tabung reaksi atau cawan petri lain, pastikan
untuk membuka tutupnya dekat dengan api. Sebelum menutup kembali, mulut tabung reaksi
dan erlenmeyer dibakar terlebih dahulu. Begitu pula setelah menutup cawan petri, bibir
cawan dibakar.
Jarum ose yang digunakan untuk memindahkan biakan, sebelum dan sesudah
digunakan juga harus dibakar pada api bunsen. Apabila menggunakan pinset dan batang L
maka sebelum dan setelah pemakaian dapat dicelupkan pada alkohol kemudian dibakar
pada api bunsen.
6. Prinsip Kerja Sterilisazi Menggunakan Autoclaf

Seperti yang telah dijelaskan pada bahasan pengenalan alat, autoklaf adalah alat untuk
mensterilkan berbagai macam alat dan bahan yang menggunakan tekanan 15 psi (2 atm) dan
suhu 121oC. Suhu dan tekanan tinggi yang diberikan kepada alat dan media yang disterilisasi
memberikan kekuatan yang lebih besar untuk membunuh sel dibanding dengan udara panas.
Biasanya untuk mensterilkan media digunakan suhu 121oC dan tekanan 15 lb/in2 (SI = 103,4
Kpa) selama 15 menit. Alasan digunakan suhu 121oC atau 249,8oF adalah karena air
mendidih pada suhu tersebut jika digunakan tekanan 15 psi. Pada tekanan 0 psi dengan
ketinggian.
Permukaan laut (sea level) air mendidih pada suhu 100oC, sedangkan untuk autoklaf
yang diletakkan di ketinggian sama, menggunakan tekanan 15 psi maka air akan mendidih
pada suhu 121oC. Ingat kejadian ini hanya berlaku untuk sea level, jika di laboratorium
terletak pada ketinggian tertentu maka pengaturan tekanan perlu disetting ulang. Misalnya
autoklaf diletakkan pada ketinggian 2700 kaki dpl maka tekanan dinaikkan menjadi 20 psi
supaya tercapai suhu 121oC untuk mendidihkan air. Semua bentuk kehidupan akan mati jika
dididihkan pada suhu 121oC dan tekanan 15 psi selama 15 menit.
Pada saat sumber panas dinyalakan, air dalam autoklaf lama kelamaan akan mendidih
dan uap air yang terbentuk mendesak udara yang mengisi autoklaf. Setelah semua udara
dalam autoklaf diganti dengan uap air, katup uap/udara ditutup sehingga tekanan udara
dalam autoklaf naik. Pada saat tercapai tekanan dan suhu yang sesuai, maka proses
sterilisasi dimulai dan timer mulai menghitung waktu mundur. Setelah proses sterilisasi
selesai, sumber panas dimatikan dan tekanan dibiarkan turun perlahan hingga mencapai 0
psi. Autoklaf tidak boleh dibuka sebelum tekanan mencapai 0 psi.
250
Gambar 8. Proses Sterilisasi dengan Autoklaf

Autoklaf bekerja dengan sempurna dapat dideteksi dengan menggunakan mikroba

penguji yang bersifat termofilik dan memiliki endospora yaitu Bacillus stearothermophillus,
lazimnya mikroba ini tersedia secara komersial dalam bentuk spore strip. Kertas spore strip
ini dimasukkan dalam autoklaf dan disterilkan. Setelah proses sterilisasi lalu ditumbuhkan
pada media. Jika media tetap bening maka menunjukkan autoklaf telah bekerja dengan baik.
Beberapa media atau bahan yang tidak disterilkan dengan autoklaf adalah sebagai berikut.
Bahan tidak tahan panas, seperti serum, vitamin, antibiotik, dan enzim.
Pelarut organik, seperti fenol. Buffer dengan kandungan detergen, seperti SDS
1. Operasional
a. Bersihkan bagian dalam autoklaf
b. Sambungkan kabel dengan sumber listrik
c. Buka penutup autoklaf dengan memutar stir ke arah kiri, tutup saluran uap dan
tempat keluarnya uap kemudian isi wadah air dengan 2 liter aquadest atau air
kran biasa
d. Masukkan alat/bahan yang akan disterilisasi ke dalam keranjang kemudian
letakkan keranjang diatas wadah air, tutup penutup autuklaf dengan memutar
stri ke arah kanan
e. Tempelkan indikator sterilisasi pada alat/bahan yang akan disterilkan
251
f. Putar tombol temperatur pada suhu 1210C dan putar pengatur waktu ( timer) di
15 menit. Tekan tombol ster ke arah kiri maka lampu hijau akan menyala. 1
menit menjelang berakhirnya proses sterilisasi setiap alat akan berbunyi dan
lampu hijau mati
g. Tekan tombol off ke arah tegak lurus, buka saluran uap sampai suhu dan tekanan
yang ditunjukkan oleh jarum pada skala berada di titik 0 kemudian buka penutup
autoklaf
Pada kasus dimana air di dalam autoklaf kering/habis maka alat akan berbunyi
diikuti oleh menyalanya lampu merah dan proses pemanasan otomatis berhenti.
Penambahan air dilakukan jika suhu dan tekanan yang ditunjukkan olah jarum
pada skala berada di titik 0. Setelah air ditambahkan ulangi proses sterilisasi dari
awal.
Untuk mengeringkan alat/bahan yang telah disterilisasikan, putar sedikit stur ke
arah kiri sehingga penutup agak longgar, set timer pada 20 menit kemudian
tekan tombol dry ke arah kanan maka lampu kuning akan menyala. Setiap satu
menit menjelang proses pengeringan setiap 1 menit alat akan berbunyi dan
lampu kuning mati.
Tekan tombol off arah tegak lurus, buka saluran uap sampai suhu dan tekanan
yang ditunjukkan oleh jarum jam pada skala berada di titik 0 kemudian buka
penutup autoklaf
Perhatikan warna yang ditunjukkan oleh indikator sterilisasi untuk memastikan
proses sterilisasi berlangsung sempurna
h. Catat penggunaan autoklaf pada log book penggunaan autoklaf
2. Perawatan Autoclave
a. Bagian bawah autoklaf harus terisi air bebas mineral sampai setinggi penyangga
b. Pastikan bahwa air akan cukup selama proses sterilisasi
c. Tutup autoklaf dan pasang karet pengunci di lekukannya
d. Katup udara keluar harus terbuka
r. Pastikan autoklaf tersambung dengan sumber listrik
f. Pastikan katup pengaman terpasang selama pemanasan
g. Pastikan proses selesai sebelum melepas tutup atau membuka
h. Pastikan bahan yang disterilisasi cukup lama didiamkan sampai dingin
3. Kalibrasi
Kalibrasi menggunakan :
a. Autoklaf indikator tape
b. Rekatkan indikator tape secara melingkar pada kemasan yang akan disterilkan.
Pada autoklaf yang besar, kemasan diletakkan pada bagian atas dan bagian
bawah autoklaf
c. Atur suhu, waktu dan tekanan
d. Hidupkan autoklaf
252
e. Setelah selesai, baca indikator tape dengan melihat perubahan warna yang terjai
pada garis-garis diagonal. Bila proses sterilisasi berjalan dengan baik, garis-garis
diagonal berubah warna dari putih menjadi coklat kehitam-hitaman.
f. Catat hasil kalibrasi pada formulir kalibrasi alat.
4. Bacilus stearothermophillus
a. Masukkan Bacillus stearothermophillus dalam bentuk liofilisai ke dalam autoklaf
b. Atur suhu, waktu dan tekanan
c. Hidupkan autoklaf
d. Setelah selesai ambil Bacillus stearothermophillus dan tanam pada agar darah
(blood agar) dan inkubasi pada suhu 40-600C selama 48 jam
e. Proses sterilisasi berjalan baik bila tidak ada pertumbuhan Bacillus
stearothermophillus
f. Catat hasil kalibrasi pada formulir kalibrasi alat
7. Oven
Operasional
a. Sambungkan oven dengan sumber listrik
b. Putar pengatur suhu, waktu dan lubang udara sesuai dengan yang diinginkan.
(1600C selama 2 jam atau 1800C selama 1 jam )
c. Masukkan alat yang akan disterilkan sesuai dengan kapasitas oven
d. Tempelkan indikator sterilisasi pada alat/bahan yang disterilkan dingin
e. Tekan tombol ON
f. Setelah proses sterilisasi berakhir, tekan tombol OFF, biarkan alat/bahan yang
disterilkan sampai dingin
g. Periksa warna yang ditunjukkan oleh indikator sterilisasi
h. Keluarkan alat/bahan yang telah disterilkan
i. Catat pada loog book penggunaan oven
Perawatan
Bagian dalam oven harus dibersihkan setiap satu bulan sekali
Jika telah selesai digunakan, pintu oven baru boleh dibuka setelah suhu turun 4000C
Kalibrasi
a. Cek suhu oven setiap bulan dengan menggunakan termometer standar
b. Cocokkan hasil yang didapat antar suhu yang tercantum dalam oven dengan suhu
yang ditunjukkan oleh termometer standar
c. Catat pada formulir kalibrasi alat
253
8. Sterilisasi dengan Penyaringan (Filtrasi)

Sterilisasi dengan penyaringan dilakukan untuk mensterilisasi cairan yang mudah rusak
jika terkena panas atau mudah menguap (volatile). Cairan yang disterilisasi dilewatkan ke
suatu saringan (ditekan dengan gaya sentrifugasi atau pompa vakum) yang berpori dengan
diameter yang cukup kecil untuk menyaring bakteri. Virus tidak akan tersaring dengan
metode ini.
Sterilisasi dengan penyaringan dapat dilakukan dengan berbagai cara yaitu sebagai
berikut.
1. Non-disposable filtration apparatus
a. Disedot dengan pompa vakum
b. Volume 20-1.000 ml
2. Disposable filter cup unit
3. Disposable filtration unit dengan botol penyimpan
4. Syringe filters
a. Ditekan seperti jarum suntik
b. Volume 1-20 ml
5. Spin filters
a. Ditekan dengan gaya setrifugasi
b. Volume kurang dari 1 ml
Berbagai Alat Sterilisasi dengan Penyaringan
254
Gambar 9 Strelisasi dengan penyaringan

Sumber; http://www.academia.edu. Diunduh 8/9/17
255
9. Tyndalisasi
Konsep kerja metode ini mirip dengan mengukus. Bahan yang mengandung air dan
tidak tahan tekanan atau suhu tinggi lebih tepat disterilkan dengan metode ini, misalnya
susu yang disterilkan dengan suhu tinggi akan mengalami koagulasi dan bahan yang berpati
disterilkan pada suhu bertekanan pada kondisi pH asam akan terhidrolisis.
10. Sterilisasi dengan Udara Panas

Sterilisasi dengan metode ini biasanya digunakan untuk peralatan gelas, seperti cawan
petri, pipet ukur, dan labu erlenmyer. Alat gelas yang disterilisasi dengan udara panas tidak
akan timbul kondensasi sehingga tidak ada tetes air (embun) di dalam alat gelas.
11. Prinsip Kerja Biological Saferty Cabinet (Bsc)

BIOLOGICAL SAFERTY CABINET (BSC) aliran udara yang menciptakan aliran udara kotor
(dimungkinkan ada kontaminan) untuk disaring dan diresirkulasi melalui filter.
BSC juga disebut biosafety hood, dan juga dikenal dengan Laminar flow hood atau Class II
vertical flow cabinet yang menyediakan alat filtrasi dan aliran udara yang bersirkulasi di
dalam ruang kerja. Aliran udara diatur untuk menghambat udara luar masuk dan udara di
dalam keluar, untuk mencegah kontaminasi dari luar dan pencemaran bakteri dari ruang
BSC. Udara yang keluar disaring melewati penyaring sehingga sel-sel yang berbahaya tidak
lepas keluar ke ruangan lain. BSC juga dilengkapi dengan lampu UV yang berfungsi sebagai
pembunuh mikroba yang berada pada interior BSC.
Prinsip Kerja BSC
Gambar 10 Prinsip kerja biological saferty cabinet (bsc)

Sumber; http://www.academia.edu. Diunduh 8/9/17LATIHAN
256
Latihan

atas!
1) Jelaskan pengertian dari sterilisasi!
2) Sebutkan jenis sterilisasi yang terbaik untuk digunakan!
3) Bagaimana prinsip kerja secara aseptis? Jelaskan!
4) Sebutkan beberapa cara sterilisasi dengan filtrasi!
5) Jelaskan bagaimana mekanisme kerja BSC!

Pelajari kembali uraian teori pada bagian yang relevan tentang pengertian sterilisasi,
macam-macam cara sterilisasi suatu bahan atau alat, teknik kerja aseptis, sterilisasi dengan
penyaringan, dan mekanisme kerja BSC.
Ringkasan
Sterilisasi yaitu proses atau kegiatan membebaskan suatu bahan atau benda dari
semua bentuk kehidupan. Sterilisasi dapat dilakukan dengan 3 cara, yaitu cara mekanik, fisik,
dan kimiawi. Sterilisasi cara mekanik, yaitu menggunakan penyaring (filtrasi), sedangkan cara
fisik dapat dilakukan penyinaran dan pemanasan pada suhu dan lama waktu tertentu.
Sterilisasi cara kimiawi biasanya menggunakan senyawa desinfektan, antara lain
menggunakan alkohol.
Cara kerja menggunakan non-disposable filtration apparatus
a. Saringan disterilkan (dapat menggunakan saringan Bekerfeld, Chamberland, dan Zeitz),
dan membran penyaring (kertas saring) secara Tyndalisasi, sedangkan erlenmeyer
menggunakan autoklaf.
b. Alat-alat tersebut dipasang atau dirakit secara aseptis kemudian corong diisi dengan
larutan yang akan disterilkan. Praktikum ini dicontohkan menggunakan ekstrak enzim
atau media cair.
c. Katup erlenmeyer dihubungkan dengan pompa vakum kemudian pompa dihidupkan.
d. Setelah semua larutan melewati membran filter dan tertampung di erlenmeyer maka
larutan dapat dipindahkan ke dalam gelas penampung lain yang sudah steril dan
ditutup dengan kapas atau alumunium foil yang steril.
Cara kerja tydalisasi

a. Bahan dimasukkan ke dalam erlenmeyer atau botol dan ditutup rapat dengan sumbat
atau alumunium foil.
b. Erlenmeyer/botol kemudian dimasukkan ke dalam alat sterilisasi (alat standar
menggunakan Arnold Steam Sterilizen/dandang).
257
c. Sumber panas dinyalakan dan ditunggu hingga termometer menunjukkan suhu 100oC
kemudian waktu dihitung mundur hingga 30 menit (uap panas yang terbentuk akan
mematikan mikroba).
d. Setelah selesai, alat sterilisasi dimatikan dan bahan yang steril dikeluarkan.
e. Setelah 24 jam, bahan tersebut disterilkan lagi dengan cara yang sama, waktu ini
dimaksudkan untuk memberi kesempatan spora atau sel vegetatif yang belum mati
untuk tumbuh sehingga mudah dibunuh.
PETUNJUK PELAKSANAAN PRAKTIKUM
Setiap 8-10 mahasiswa membentuk satu kelompok dalam melakukan kegiatan

praktikum.
PETUNJUK PENULISAN LAPORAN
1. Penulisan laporan Praktikum

Laporan Praktikum berisikan:
a. Pendahuluan: memuat latar belakang dan tujuan praktikum.
b. Tinjauan pustaka: memuat teori praktikum yang telah diketahui hingga saat ini.
c. Alat, bahan, dan cara kerja: berisikan alat dan bahan yang digunakan, serta
prosedur yang dilakukan.
d. Hasil dan pembahasan: berisikan hasil-hasil yang diperoleh dan membandingkan
hasil-hasil penelitian terdahulu.
e. Kesimpulan.
f. Daftar Pustaka.
2. Penyerahan Laporan
Laporan dikumpulkan sesuai dengan jadwal yang telah ditentukan oleh instruktur.
Tes 2
Pilihlah satu jawaban yang paling tepat!

1) Bahan yang mengandung air dan tidak tahan tekanan atau suhu tinggi lebih tepat
disterilkan dengan metode ....
A. filtrasi
B. uap air panas bertekanan
C. tyndalisasi
D. udara panas
258
2) Enzim, antibiotik, dan serum disterilkan menggunakan metode ....

A. tyndalisasi
B. filtrasi
C. uap panas
D. pemijaran
3) Sterilisasi menggunakan senyawa desinfektan termasuk sterilisasi cara....

A. biologis
B. fisik
C. mekanik
D. kimiawi
4) Salah satu proses yang dilakukan dalam sterilisasi fisik antara lain ....
A. filtrasi
B. penyinaran
C. desinfeksi
D. penyaringan
5) Berikut berbagai cara yang digunakan dalam sterilisasi dengan filtrasi, kecuali ....
A. disposable filter cup unit
B. syringe filter
C. tyndalisasi
D. spin filter
259
Daftar Pustaka
Adams, M.R. 2000. Food Microbiology. University of Surrey. Guildford. New York : The Royal
aaaaaa Society of Chemistry
Anonim, 2006. Lingkungan Pertumbuhan Mikroba
Dwijoseputro, D., 1989, Dasar-dasar Mikrobiologi, Djambatan: Malang.
Fardiaz, S., 1992, Mikrobiologi Pangan 1, Gramedia Pustaka utama, Jakarta.
Gobel, Risco, B dkk. 2008. Mikrobiologi Umum Dalam Praktek. Universitas Hasanuddin.
Makassar.
Hendri, Bustaman, 2006. Selesai Mikroba Risosfer Antagonis terhadap bakteri
Hadioetomo R. 1996. Mikrobiologi Dasar-dasar Dalam Praktek. Jakarta : Gramedia.
Lay B. 1994. Analisis Mikroba di Laboratorium. Jakarta: Raja Grafindo Persada.
Machmud, 2004. Seleksi dan Karakterisasi Mikroba Antogoni.
Michael, 1986. Dasr-dasar Mikrobiologi. UI-press. Jakarta
Pelzcar dan Chan, 1986, Dasar-dasar Mikrobiologi, UI Pres: Jakarta.
Suriawiria,Ul, 2005. Mikrobiologi Dasar. Papas; Jakarta
260
BAB VI
MEKANISME PEMBIAKAN MIKROORGANISME
PENDAHULUAN
Pembiakan adalah proses memperbanyak mikroorganisme dengan memberikan

keadaan lingkungan yang tepat. Menumbuhkan mikroorganisme adalah membuat reflika
dari organisme tersebut, dan memerlukan unsur-unsur yang ada dalam komposisi kimianya.
Zat makanan harus menyediakan unsur-unsur tersebut dalam bentuk yang dapat diakses
secara metabolik untuk menyintesis makromelekul dan mempertahankan gradien kiomia
yang penting pada membrannya.
Faktor-faktor yang harus diatur selama pertumbuhan mikroorganisme adalah zat
makanan, PH, temperatur, aerasi, konsentrasi gara, dan kekuatan ionik pada medium.
Sebagian besar bahan organik berupa makromelekul yang dibentuk oleh ikatan anhiridrda
antar unsur-unsur pembangunnya. Sintesis ikatan anhiridrda memerlukan energi kimi, yang
dihasilkan oleh dua ikatan fosfodiesterdalam ATP (adenosin trifosfat) untuk
mempertahankan komposisi sitoplasma yang relatif konstan selama pertumbuhan dalam
berbagai lingkungan kimia ekstrasel, diperlukan energi tambahan yang dihasilkan dari gaya
gerak proton.
Gaya gerak proton adalah energi potensial yang dapat dihasilkan dari aliran proton
melewati membran. Pada eukariot, membran mungkin merupakan bagian dari mitokonrion
atau kloroplas, Pada prokariot, membran adalah membran sitoplasma sel.
Untuk tumbuh suatu organisme memerlukan semua unsur dalam bahan organiknya
dan seluruh ion pelengkap yang diperlukan untuk proses kerja dan katalis. Selain itu harus
ada sumber energi untuk menghasilkan gaya gerak proton dan memungkinkan terjadinya
sintesis makromelekuler. Kebutuhan zat makanan dan sumber energi metabolik pada
mikroorganisme sangat beragam.
Dalam proses pertumbuhannya mikroorganisme membutuhkan sumber energi
metabolik, mikroorganisme membutuhkan tiga mekanisme utama untuk menghasilkan
energi metabolik yaitu : 1. Fermentasi. 2. Respirasi. 3. Fotosintesis. Jika mikroorganisme
sedang tumbuh setidaknya satu mekanisme tersebut harus digunakan.
DESKRIPSI MATA KULIAH
Mata kuliah ini memberi kesempatan kepada peserta didik untuk mengaplikasikan
teori dan konsep dari Mata Ajaran ditatanan nyata dengan melaksanakan praktikum di
laboratorium mikrobiologi khususnya dalam Bab ini tentang mekanisme biakan bakteri
dengan metode pembiakan isolasi dan inokulasi dan perhitungan jumlah koloni serta uji
kualitas air yang akan digunakan sebagai air kumur pada pasien yang menjalani perawatan
gigi di laboratorium Jurusan Keperawatan Gigi .
261
Setelah praktikan menyelesaikan praktikum ini, mahasiswa diharapkan memahami:

1. Pembiakan bakteri dengan metode isolasi.
2. Pembiakan bakteri dengan metode inokulasi
3. Perhitungan jumlah koloni bakteri
4. Uji Kualitas air.
MATA KULIAH DAN MATERI PRASYARAT
Sebelum mengikuti praktikum pada bab ini peserta didik diharapkan telah mengikuti
praktikum pengenalan alat dan bahan praktek laboratorium mikrobiologi serta praktikum
pembuatan media pembiakan dan sterilisasi sehingga pada pelaksanaan pada praktikum ini
dapat berjalan lancar,
MATERI MENDUKUNG BAB INI
Bahan pendukung lainnya, misalnya video, audio Penanaman Bakteri Pour Plate,
Spread Plate, dan Goresan, alamat: https://www.youtube.com/watch?v=dg3gha_jTDI, isolasi
bakteri, alamat: https://www.youtube.com/watch?v=B9GkBg4cK_c
A. MEKANISME PEMBIAKAN MIROORGANISME
1. Mekanisme Fermentasi
Pembentukan ATP dalam permentasi tidak dibarengi dengan transfer elektreon.
Fermentasi ditandai dengan fosforilasi substrat, suatu proses enzimatik yang secara langsung
memberikan ikatan pirofosfat pada ADP (adensin difosfat) lewat suatu zat antara metabolik
yang terfosforilasi. Zat antara yang terfosforilasi dibentuk oleh penataan ulang metabolisme
suatu substrat yang dapat difermentasi seperti glukosa, laktosa atau arginin. Karena
fermentasi tidak disertai dengan perubahan keseluruhan status oksidasi-reduksi dari substrat
itu, komposisi dasar hasil fermentasi molekul glikosa (C6H12O6) melalui jalur embden-
Meyerhof menghasilkan dua ikatan pirofosfat dalam ATP dan menghasilkan dua molekul
asam laktat (C3H6O3)
2. Respirasi
Respirasi analog dengan serangkaian proses bergantung energi yang terjadi pada
peristiwa pelepasan energi dari suatu baterei. Reduksi kimia dari suatu oksidan (akseptor
elektron) melalui rangkaian khusus pembawa elektron di dalam membran menimbulkan
gaya gerak proton pada membran bakteri. Reduktan (donor elektron) dapat berupa zat
organik: Misalnya, asam laktat bekerja sebagai suatu reduktan untuk beberapa organisme,
dan gas hidrogen adalah suatu reduktan untuk organisme lai, gas oksigen (O2) sering
digunakan sebagai oksidan, tetapi oksidan alternatif yang digunakan oleh beberapa
organisme adalah karbon dioksida (NO3).
262
3. Fotosintesis
Fotosintesis menyerupai respirasi dalam hal reduksi suatu oksidan melalui serangkaian
pembawa elektron khusus yang menimbulkan gaya gerak proton. Pembedaan kedua proses
itu adalah pada fotosintesis, reduktan dan oksidan dibentuk secara fotokimiawi oleh energi
cahaya yang diserap pigmen dalam membran; oleh karena itu , fotosintesis hanya dapat
terus berlangsung selama ada sumber energi cahaya. Tanaman dan beberapa bakteri
mampu menyimpan sejumlah energi cahaya saat memanfaatkan air sebagai reduktan untuk
karbon dioksida. Dalam proses ini, digunakan oksigen dan dihasilkan bahan organi. Respirasi
oksidasi bahan organik oleh akseptir elektron seperti oksigen yang menguntungkan dalam
proses pembentukan energi, dapat memberikan energi bagi organisme fotosintetik dalam
keadaan tanpa cahaya.
Dalam proses pembiakan mikroorganisme selain tiga mekanisme yang perlu diketahui
oleh mahasiswa dalam proses pembelajaran praktik mikrobiologi di laboratorium, hal yang
paling penting juga untuk diketahui adalah kebutuhan nutrisi yang dibutuhkan oleh
mikroorganisme dalam proses pembiakannya. Nutrisi pada medium harus mengandung
semua unsur yang diperlukan untuk sintesis organisme baru secara biologis. Nutrisi
digolongkan berdasarkan unsur-unsur yang disuplainya. Antara lain:
4. Sumber Karbon
Tanaman dan beberapa bakteri mampu menggunakan energi fotosintetik untuk
mereduksi karbon dioksida dengan menggunakan air. Organisme tersebut masuk dalam
kelompok autotrof, makhluk yang tidak memerlukan nutrisi organik untuk pertumbuhannya.
Autotrof jenis lainnya adalah kemolitotrof, organisme yang menggunakan substrat organik
seperti hidrogen atau tiozulfat sebagai suatu reduktan dan karbon dioksida sebagai sumber
karbon. Heterotof memerlukan karbon organik untuk pertumbuhan, dan karbon organik
harus dalam bentuk yang dapat diasimilasi , naftalen, misalnya dapat menyelesaikan semua
karbon dan energi yang diperlukan pada respirasi untuk menumbuhkan pada heterotrofik,
tetapi sangat sedikit mikroorganisme yang memiliki jalur metabolik yang diperlukan untuk
asimilasi naftalen. Di lain pihak glukosa dapat menunjang pertumbuhan fermentatif atau
respiratorik pada banyak organisme. Substarat pada pertumbuhan harus disuplai pada kadar
yang sesuai untuk strain mikroba yang sedang ditumbuhkan; kadar yang akan menunjang
pertumbuhan satu organisme dan menghambat pertumbuhan mikroorganisme lain.
Karbon dioksida perlukan untuk sejumlah reaksi biosintetik. Banyak organisme respiratorik
memenuhi kebutuhan tersebut, tetapi organisme yang lain memerlukan sumber karbon
dioksida dalam medium pertumbuhannya.
5. Sumber Nitrogen
Nitrogen adalah komponen utama dari protein dan asam nukleat, mencakup sekitar
10% dari berat kering el bakteri yang khas. Nitrogen dapat disuplai dalam berbagai bentuk,
dan kemampuan mikroorganisme untuk mengasimilasi nitrogen juga berbeda-beda. Produk
akhir dari semua jalur asimilasi nitrogen adalah bentuk yang paling tereduksi dari unsur
nitrogen, yang ion amonium (NH4+). Banyak mikroorganisme memiliki kemampuan untuk
263
mengasimilasi nitrat (NO3-) dan nitrit (NO2)secara reduktif dengan mengubah ion ini
menjadi aminia (NH2) jalur asimilasi tersebut berbeda dengan jalur yang digunakan untuk
disimilasi nitrat dan nitrit. Jalur disimilasi digunakan oleh organisme yang memakai ion. Ion
tersebut sebagai akseptor elektron terminal dalam respirasi; proses tersebut dikenal sebagai
denitrifikasi, dan hasilnya adalah gas nitrogen (N2), yang dilepaskan ke dalam atmosfer.
Kemampuan mengasimilasi N2 secara reduktif melalui NH3, yang disebut fiksasi nitrogen,
adalah suatu sifat yang unik untuk prokariot, dan relatif sedikit bakteri yang memiliki
kapasitas metabolik ini. Proses ini memerlukan sejumlah besar energi metabolik dan mudah
diinaktivasi oleh oksigen.
Kapasitas untuk fiksasai nitrogen ditemukan pada berbagai bakteri yang telah
mengembangkan strategi biokimia yang berbeda-beda untuk melindungi enzim pemfikasi
nitrogennya dari oksigen. Sebagian besar mikroorganisme dapat menggunakan NH4+
sebagai satu-satunya sumber nitrogen dan banyak organisme memiliki kemampuan untuk
menghasilkan NH4+ dari amina (R-NH2) atau dari asam amino (RCHNH2COOH). Produksi
amonia dari deaminasi asam amino disebut aminifikasi. Amonia dimasukkan ke dalam bahan
organik melalui jalur biokimia yang melibatkan glutamat dan glutamin.
6. Sumber Sulfur
Seperti nitrogen sulfur adalah komponen dari banyak substansi sel organik. Sulfur
membentuk sebagian struktur beberapa koenzim dan ditemukan pada rantai samping
protein, yaitu sisteinil dan metonil. Ulfur dalam bentuk dasar tidak dapat digunakan oleh
tanaman atau hewan. Namun beberapa bakteri autotrofik dapat mengoksidasinya menjadi
zulfat (SO42-). Kebanyakan mikroorganisme dapat menggunakan sulfat sebagai sumber
sulfur, yang mereduksi sulfat menjadi hidrogen sulfida (H2S). Beberapa mikroorganisme
dapat mengasimilasi H2S secara langsung dari medium pertumbuhan, tetapi senyawa
tersebut bersifat toksik bagi banyak organisme.
7. Sumber Fosfor
Fosfat (PO43-) diperlukan sebagai suatu komponen ATP, asam nukleat, dan koenzim-
koenzim seperti NAD, NADP, dan flavin, selain itu, banyak metabolit, lipid (Fosfolipid, lipid A),
komponen dinding sel (asam teokoat), beberapa polisakarida kapsular, dan beberapa protein
mengalami fosforilasi. Fosfat selalu diasimilasi sebagai fosfat anorganik bebas (P1).
8. Sumber Mineral
Berbagai mineral diperlukan untuk fungsi enzim. Ion magnesium (Mg2+) dan ion fero
(Fe2+) juga ditemukan dalam derivat profirin: magnesium dalam molekul klorofil, dan besi
sebagai bagian dari koenzim sitokrom dan proksidase. Mg2+ dan K+ penting untuk fungsi dan
integritas ribosom. Ca2+ diperlukan sebagai komponen dinding sel gram positif, meskipun
mineral kadang-kadang tidak diperlukan oleh bakteri gram negatif. Banyak organisme laut
memerlukan Na+ untuk pertumbuhannya. Dalam memformulasikan suatu medium untuk
pembiakan sebagian besar mikroorganisme, kita harus memberikan sumber kalium,
magnesium, kalsium dan besi, biasanya dalam bentuk ion-ionnya (K+3 Mg2+ Ca2+ dan
264
Fe2+). Yang juga diperlukan; mineral-mineral tersebut sering dijumpai dalam air ledeng atau
sebagai kontaminan pada bahan-bahan medium yang lain. Pada banyak bakteri dan fungi,
ambilan besi yang membentuk hidroksida tak larut pada Ph netra, difasilitasi oleh siderofor
yang dihasilkannya senyawa-senyawa yang dengan besi membentuk kelat sehingga
mempermudah transpornya sebagai sesuatu komleks yang dapat larut. Senyawa-senyawa
tersebut termasuk hidroksamat (-CHNH2OH) yang disebut sideramin, dan derivat katekol
(misalnya 2,3 – dihidroksibenzoilserin). Siderefor yang ditentukan oleh plasmid berperan
penting dalam kemampuan invasi beberapa patogen bakterial.
265
Topik 1
Isolasi bakteri
PENGANTAR
Para mahasiswa yang berbahagia, dalam kegiatan praktikum yang akan anda lakukan
ini diharapkan anda telah memahami topik sebelumnya antara lain topik praktikum
pengenalan alat-alat dan bahan-bahan praktikum laboratorium mikrobiologi dan pembuatan
media biakan serta metode sterilisasi alat dan bahan praktikum praktikum pada topik ini
dapat berjalan lancar di laboratorium Mikrobiologi.
Di dalam pekerjaan isolasi bakteri di laboratorium mikrobiologi sudah pasti kita tidak
terlepas dari alat-alat yang berada dalam laboratorium. Dalam melaksanakan Kegiatan
Praktikum Modul 1 ini, mahasiswa akan menggunakan beberapa alat-alat dan bahan untuk
keperluan isolasi bakteri
Isolasi Bakteri adalah suatu metode pembiakan bakteri dengan menggunakan media
universal atau selektif yang dilakukan dengan proses pembuatan isolat tunggal dari isolat
campuran dengan metode cawan gores dan metode cawan tuang dengan mengencerkan
biakan campuran hingga setiap individu dapat dipisahkan sehingga setiap koloni yang
terbentuk merupakan hasil dari pembelahan satu sel
TUJUAN INSTRUKSIONAL
1. Mahasiswa mampu menyebutkan nama-nama bahan praktikum pembiakan

mikroorganisme dengan baik dan benar
2. Mahasiswa mampu menggunakan alat-alat praktikum pembiakan mikrorganisme
dengan teknik isolasi dengan baik dan benar
3. Mahasiswa mampu melakukan praktikum pembiakan mikrorganisme dengan metode
isolasi
isolasi
5. Mahasiswa mampu melakukan pengambilan sampel biakan mikrorganisme dengan
teknik swab
6. Mahasiswa mampu melakukan pengambilan sampel biakan mikrorganisme dengan
penghancuran
7. Mahasiswa mampu melakukan pengambilan sampel air dengan baik dan benar
8. Mahasiswa mampu melakukan pengambilan sampel dengan teknik pengenceran
(dilution method)
266
KEGUNAAN BAB BAGI MAHASISWA
Dengan menguasai praktikum pada bab ini mahasiswa dapat mengaplikasikan

keterampilannya untuk melakukan penelitian lanjut pada masa tugas akhir dalam menyusun
karya tulis ilmiah untuk menyelesaikan program studi diploma III jurusan Keperawatan Gigi
sehingga bab ini sangat penting untuk dilalui.
A. MIKROBIOLOGI
Di dalam bidang ilmu mikrobiologi, untuk dapat menelaah bakteri khususnya dalam
skala laboratorium, maka terlebih dahulu kita harus dapat menumbuhkan mereka dalam
suatu biakan yang mana di dalamnya hanya terdapat bakteri yang kita butuhkan tersebut
tanpa adanya kontaminasi dari mikroba lain. Biakan yang semacam ini biasanya dikenal
dengan istilah biakan murni. Untuk melakukan hal ini, haruslah dimengerti jenis-jenis
nutrient yang disyaratkan bakteri dan juga macam lingkungan fisik yang ,menyediakan
kondisi optimum bagi pertumbuhan bakteri tersebut (Pelczar, 1986).
Mikroorganisme dapat diperoleh dari lingkungan air, tanah, udara, substrat yang
berupa bahan pangan, tanaman, dan hewan. Jenis mikroorganismenya dapat berupa bakteri,
khamir, kapang, dan sebagainya. populasi dari mikroba yang ada di lingkungan ini sangatlah
beranekaragam sehingga dalam mengisolasi dierlukan beberapa tahap penanaman sehingga
berhasil diperoleh koloni yang tunggal. Koloni yang tunggal ini kemudian yang akan
diperbanyak untuk suatu tujuan penelitian misalnya untuk mengisolasi DNA mikroba yang
dapat mendeteksi mikroba yang telah resisten terhadap suatu antibiotic (Ferdiaz, 1992)
Teknik isolasi mikroorganisme adalah suatu usaha untuk menumbuhkan mikroba diluar
dari lingkungan alamiahnya. Pemisahan mikroorganisme dari lingkungan ini bertujuan untuk
memperoleh biakan bakteri yang sudah tidak bercampur lagi dengan bakteri lainnya dan
disebut biakan murni. Prinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba
dengan mikroba lainnya yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba. Hal ini
dapat dilakukan dengan menumbuhkannya dalam media padat, sel-sel mikroba akan
membentuk koloni sel yang tetap pada tempatnya (Nur dan Asnani, 2007).
Pada umumnya mikroba yang hidup di alam terdapat dalam bentuk populasi
campuran. Sangat jarang mikroba di alam dijumpai sebagai spesies yang tunggal. Dengan
demikian, agar mikroba tersebut dapat diidentifikasikan, sehingga mudah dipelajari sifat
pertumbuhan, morfologis, dan fisiologis masing-masing mikroba maka langkah pertama yang
harus dilakukan yaitu spesies tersebut dipisahkan dari organisme lain yang umum dijumpai
dalam habitatnya, kemudian ditumbuhkan menjadi biakan murni yaitu suatu biakan yang
terdiri dari sel-sel dari satu spesies.
Mikroorganisme tersebar luas di dalam lingkungan baik di tanah, air, maupun udara.
Keberadaan mikroorganisme baru dapat kita rasakan melewati makanan yang kita konsumsi
dan sebagai akibatnya produk pangan jarang sekali yang steril dan umumnya tercemar oleh
berbagai mikroorganisme. Bahan pangan selain merupakan sumber gizi bagi manusia, juga
sebagai sumber makanan bagi perkembangan mikroorganisme. Pertumbuhan atau
267
perkembangan mikroorganisme dalam makanan sangat erat hubungannya dengan

kehidupan manusia.
Mikroorganisme merupakan makhluk hidup yang sangat banyak, baik di tanah, air
maupun udara. Untuk itu perlunya isolasi maupun pemurnian untuk mendapatkan
mikroorganisme tersebut. Populasi yang besar dan kompleks dengan berbagai mikroba
terdapat dalam tubuh manusia termasuk di gigi dan mulut, saluran pencernaan dan kulit.
Isolasi adalah cara untuk memisahkan atau memindahkan mikroba tertentu dari
lingkungannya, sehingga diperoleh kultur murni atau biakan murni. Kultur murni ialah kultur
yang sel-sel mikrobianya berasal dari pembelahan dari satu sel tunggal. Kultur murni atau
biakan murni diperlukan karena semua metode mikrobiologis yang digunakan untuk
menelaah dan mengidentifikasi mikroorganisme, termasuk penelaahan ciri-ciri kultural,
morfologis, fisiologis, maupun serologis, memerlukan suatu populasi yang terdiri dari satu
macam mikroorganisme saja.
Dikenal beberapa cara atau metode untuk memperoleh biakan murni dari suatu biakan
campuran. Dua diantaranya yang paling sering digunakan adalah metode cawan gores dan
metode cawan tuang. Yang didasarkan pada prinsip pengenceran dengan maksud untuk
memperoleh spesies individu. Dengan anggapan bahwa setiap koloni dapat terpisah dari
satu jenis sel yang dapat diamati (Afrianto, 2004).
Biakan murni diperlukan dalam berbagai metode mikrobiologis, antara lain digunakan
dalam mengidentifikasi mikroba. Untuk mengamati ciri-ciri kultural morfologi, fisiologi, dan
serologi dibutuhkan mikroba yang berasal dari satu spesies (Dwijoseputro, 2005). Beberapa
faktor yang perlu diperhatikan dalam melakukan isolasi mikroba yaitu antara lain:
1. Sifat setiap jenis mikroba yang akan diisolasi.
2. Tempat hidup atau asal mikroba tersebut.
3. Medium pertumbuhan yang sesuai.
4. Cara menginkubasi mikroba.
5. Cara menginokulasi mikroba.
6. Cara menguji bahwa mikroba yang diisolasi telah berupa kultur murni dan sesuai
dengan yang dimaksud.
7. Cara memelihara agar mikroba yang telah diisolasi tetap merupakan kultur murni.
8. Untuk mengisolasi mikroorganisme, hal yang tidak kalah pentingnya untuk
diperhatikan pula adalah teknik pengambilan sampel. Mikroorganisme terdapat
dimana-mana di dalam lingkungan kita mereka ada pada tubuh kita, dan di sekeliling
kita. Mereka merupakan komponen penting dalam ekosistem. Di habitat alamiahnya,
mereka hidup dalam suatu komunitas yang terdiri dari berbagai jenis mokroorganisme,
bersama spesies-spesies biologi lainnya. Didalam komunitas ini, satu spesies mikroba
dapat mempengaruhi spesies lain dengan berbagai cara-cara beberapa bersifat
menguntungkan beberapa merugikan ( Pelezar, 198)
9. Dalam suatu analisis mikrobiologi, pengambilan sampel merupakan salah satu kunci
utama yang sangat mendukung keberhasilan suatu analisa, yaitu memindahkan sampel
atau kultur bakterial dari satu tempat ke tempat yang lain secara aseptis (terhindar
dari kontaminasi).
268
Di alam populasi mikroba tidak terpisah sendiri menurut jenisnya, tetapi terdiri dari
campuran berbagai macam sel. Di dalam laboratorium populasi bakteri ini dapat diisolasi
menjadi kultur murni yang terdiri dari satu jenis yang dapat dipelajari morfologi, sifat dan
kemampuan biokimiawinya. Dalam pengaplikasiannya dikenal banyak teknik dalam
pengambilan sampel. Dapat dilihat di bawah teknik-teknik berikut :
Berikut ini merupakan prosedur pengambilan sampel.
1. Sampel tanah
Jika mikroorganisme yang diinginkan kemungkinan berada di dalam tanah, maka cara
pengambilannya disesuaikan dengan tujuan dan kebutuhan. Misal jika yang diinginkan
mikroorganisma rhizosfer maka sampel diambil dari sekitar perakaran dekat
permukaan hingga ujung perakaran.
2. Sampel udara
Jika mikroba yang diinginkan adalah berada di udara sekitar, misalnya di kamar mandi,
di lemari penyimpanan alat atau ruangan laboratorium dan lain-lain, maka caranya
hanya dengan membuka tutup cawan petri yang berisi media steril selama ±5 menit.
3. Sampel air
Pengambilan sampel air bergantung kepada keadaan air itu sendiri. Jika berasal dari air
sungai yang mengalir maka botol dicelupkan miring dengan bibir botol melawan arus
air. Bila pengambilan sampel dilakukan pada air yang tenang, botol dapat dicelupkan
dengan tali, jika ingin mengambil sampel dari air keran maka sebelumya keran dialirkan
dahulu beberapa saat dan mulut kran dibakar.
Gambar 1.1 Sampel Air

Sumber: http://primanandafauziah.blogspot.co.id/2012/09/isolasi-dan-identifikasi-
mikroorganisme.html diunduh 8 Sep 17
4. Swab (ulas) pada suatu permukaan sampel

Metode ini menggunakan cotton bud steril pada sampel yang memiliki permukaan luas
dan pada umumnya sulit dipindahkan atau sesuatu pada benda tersebut. Contohnya
adalah Kulit manusia, meja, batu, batang kayu dll. Caranya dengan mengusapkan
cotton bud memutar sehingga seluruh permukaan kapas dari cotton bud kontak
dengan permukaan sampel. Swab akan lebih baik jika cotton bud dicelupkan terlebih
dahulu ke dalam larutan atraktan semisal pepton water.
269
Gambar 1.2 Metode swab

Gambar 1.2 Swab (ulas)
Sumber: http://biologipedia.blogspot.co.id/2011/01/tehnik-isolasi-mikroorganisme.html
diunduh 8 Sep 17
5. Rinse (bilas) pada bagian tertentu sampel

Metode ini ditujukan untuk melarutkan sel-sel mikroba yang menempel pada
permukaan substrat yang luas tetapi relatif berukuran kecil, misalnya daun bunga dll.
Rinse merupakan prosedur kerja dengan mencelupkan sampel ke dalam akuades
dengan perbandingan 1 : 9 (w/v). Contohnya sampel daun diambil dan ditimbang 5 g
kemudian dibilas dengan akuades 45 ml yang terdapat dalam beaker glass.
Gambar 1.3 Metode rins

diunduh 8 Sep 17
6. Maseration (penghancuran) sampel

Sampel yang berbentuk padat dapat ditumbuk dengan mortar dan pestle sehingga
mikroba yang ada dipermukaan atau di dalam dapat terlepas kemudian dilarutkan ke
dalam air. Contoh sampelnya antara lain bakso, biji, buah dll. Perbandingan antar berat
sampel dengan pengenceran pertama adalah 1 : 9 (w/v). Untuk sampel dari tanah tidak
perlu dimaserasi.
7. Teknik Pengenceran Bertingkat

Tujuan dari pengenceran bertingkat yaitu memperkecil atau mengurangi jumlah
mikroba yang tersuspensi dalam cairan. Penentuan besarnya atau banyaknya tingkat
pengenceran tergantung kepada perkiraan jumlah mikroba dalam sampel. Digunakan
perbandingan 1 : 9 untuk sampel dan pengenceran pertama dan selanjutnya, sehingga
pengenceran berikutnya mengandung 1/10 sel mikroorganisme dari pengenceran
sebelumnya.
270
Gambar 1.4 Metode rins

diunduh 8 Sep 17
1. Metode Isolasi mikroba:

Berbagai macam cara dalam mengisolasi mikroba yaitu :
Isolasi pada medium cair
2. Metode isolasi pada medium cair

Dilakukan bila mikroorganisme tidak dapat tumbuh pada agar cawan (medium
padat), tetapi hanya dapat tumbuh pada kultur cair. Metode ini juga perlu dilakukan
pengenceran dengan beberapa serial pengenceran. Semakin tinggi pengenceran peluang
untuk mendapatkan satu sel semakin besar.
3. Isolasi sel tunggal

Metode isolasi sel tunggal dilakukan untuk mengisolasi sel mikroorganisme berukuran
besar yang tidak dapat diisolasi dengan metode agar cawan atau medium cair, sel
mikroorganisme dilihat dengan menggunakan pembesaran sekitar 100 X, kemudian sel
tersebut dipisahkan dengan menggunakan pipet kapiler yang sangat halus ataupun
micromanipulator yang dilakukan secara aseptik.
4. Isolasi pada agar cawan

Prinsip pada metode isolasi pada agar cawan adalah mengencerkan mikroorganisme
sehingga diperoleh individu spesies yang dapat dipisahkan dari organisme lainnya. Setiap
koloni yang terpisah yang tampak pada cawan tersebut setelah inkubasi berasal dari satu sel
tunggal. Terdapat beberapa cara dalam metode isolasi pada agar cawan, yaitu: metode gores
kuadran, dan metode agar cawan tuang. Metode gores kuadran, merupakan metode yang
dilakukan dengan baik akan menghasilkan isolasi mikroorganisme, dimana setiap koloni
berasal dari satu sel.
Metode agar tuang berbeda dengan metode gores kuadran, cawan tuang
menggunakan medium agar yang dicairkan dan didinginkan (500C) yang kemudian
dicawankan. Pengenceran tetap perlu dilakukan sehingga pada cawan yang terakhir
mengandung koloni-koloni yang terpisah diatas permukaan/di dalam cawan.
271
a. Teknik penanaman
b. Teknik penanaman dark suspensi
c. Teknik penanaman ini merupakan lanjutan dari pengenceran bertingkat. Pengambilan
suspensi dapat diambil dari pengenceran mana saja tetapi biasanya untuk tujuan
isolasi (mendapatkan koloni tunggal) diambil beberapa tabung pengenceran terakhir.
5. Metode cawan gores (streak)

Metode ini Bertujuan untuk mengisolasi mikrorganisme dari campuran atau
meremajakan kultur ke alam medium baru. Metode ini mempunyai dua keuntungan, yaitu
menghemat bahan dan waktu. Metode cawan gores yang dilaksanakan dengan baik
kebanyakan akan menyebabkan terisolasinya mikroorganisme yang diinginkan. Metode ini
terdiri dari beberapa teknik yaitu sebagai berikut :
Goresan sinambung
Cara kerja :
a. Sentuhkan inokulum loop pada koloni dan gores secara kontinyu sampai setengah
permukaan agar.
b. Jangan pijarkan loop, lalu putar cawan 180oC lanjutkan goresan sampai habis. Goresan
sinambung umumnya digunakan bukan untuk mendapatkan koloni tunggal, melainkan
untuk peremajaan ke cawan atau medium baru
Gambar 1.5 : Pembagian Kuadran dalam Teknik Strike

Sumber :Platehttps://mikrobiologilautunpad, 8/9/17
Goresan T
Cara kerja :
a. Bagi cawan menjadi tiga bagian menggunakan spidol marker.
b. Inokulasi daerah 1 streak zig-zag
c. Panaskan jarum inokulum dan tunggu dingin, kemudian lanjutkan streak zig-zag pada
daerah 2 (streak pada gambar).
d. Cawan diputar untuk memperoleh goresan yang sempurna
e. Lakukan hal yang sama pada daerah 3.
272
Gambar 1.6 Pembagian Kuadran dalam Teknik Strike

Sumber : Platehttps://mikrobiologilautunpad, 8/9/17
Cara kerja :
Hampir sama dengan goresan T, namun berpola goresan yang berbeda yaitu dibagi
empat, daerah 1 merupakan goresan awal, sehingga masih mengandun mengandung banyak sel
mikroorganisme, goresan selanjutnya dipotong disilangkan dari goresan pertama sehingga
jumlah semakin sedikit dan akhirnya terpisah
terpisah-pisah
pisah menjadi koloni tunggal.
Metode cawan tuang (pour plate)
Gambar 1.7 : Metode cawan tuang

Cara lain untuk memperoleh koloni murni dari populasi campuran mikroorganisme
adalah dengan mengencerkan specimen dalam medium agar yang telah dicairkan dan
didinginkan (±500C) yang kemudian dicawankan. Karena kkonsentrasi
onsentrasi sel-sel
sel mikroba di
dalam specimen pada umumnya tidak diketahui sebelumnya, maka pengenceran perku
dilakukan beberapa tahap sehingga sekurang
sekurang-kurangnya
kurangnya satu diantara cawan tersebut
mengandung koloni terpisah diatas permukaan ataupun di dalam agar agar. Metode ini
memboroskan bahan dan waktu namun tidak memerlukan keterampilan yang tinggi. Teknik
ini memerlukan agar yang belum padat (>45oC) untuk dituang bersama suspensi bakteri ke
dalam cawan petri lalu kemudian dihomogenkan dan dibiarkan memadat. Hal ini akan
menyebarkan sel-sel
sel bakteri tidak hanya pada permukaan aja melainkan terendam agar (di
dalam agar) sehingga terdapat selsel-sel
sel yang tumbuh di permukaan agar yang kaya oksigen
dan ada yang tumbuh di dalam agar yang tidak begitu banyak mengandung o oksigen.
273
Adapun prosedur adalah sebagai berikut :

a. Siapkan cawan petri steril, tabung pengenceran yang akan ditanamkan dan media
padat yang masih cair (45oC)
b. Teteskan 1 ml secara aseptis suspensi sel ke dalam cawan kosong
c. Tuangkan media yang masih cair ke dalam cawan kemudian putar cawan untuk
menghomogenkan suspensi bakteri dan media. Kemudaan diinkubasi.
d. Teknik sebar (spread plate)
Gambar 1.8 Metode Teknik Sebar

Spread plate adalah Teknik isolasi mikroba dengan cara menyebarkan suspensi bakteri
pada permukaan media yang akan digunakan. Untuk memperoleh kultur murni, adapun
prosedur kerja yang dapat dilakukan adalah sebagai berikut :
Ambil suspensi cair sebanyak 0,1 ml dengan pipet ukur kemudian teteskan di atas
permukaan agar yang telah memadat.
Batang L atau batang drugal diambil kemudian disemprot alkohol dan dibakar di atas
api bunsen beberapa saat, kemudian didinginkan dan ditunggu beberapa detik.
Kemudian disebarkan dengan menggosokkannya pada permukaan agar supaya tetesan
suspesi merata, penyebaran akan lebih efektif bila cawan ikut diputar.
Hal yang perlu diingat bahwa batang L yang terlalu panas dapat menyebabkan sel-sel
mikrorganisme dapat mati karena panas.
Teknik pengenceran (dilution method)
Gambar 1.9 Metode Teknik Pengenceran

Sumber: Platehttps://mikrobiologilautunpad, 8/9/17
274
Suatu sampel dari suatu suspense yang berupa campuran bermacam-macam spesies
diencerkan dalam suatu tabung yang tersendiri. Dari hasil pengenceran ini kemudian diambil
kira-kira 1 mL untuk diencerkan lebih lanjut. Jika dari pengenceran yang ketiga ini diambil 0,1
mL untuk disebarkan pada suatu medium padat, kemungkinan besar kita akan mendapatkan
beberapa koloni yang akan tumbuh dalam medium tersebut, akan tetapi mungkin juga kita
hanya akan memperoleh satu koloni saja.
Dalam hal yang demikian ini dapat kita jadikan piaraan murni. Jika kita belum yakin
bahwa koloni tunggal yang kita peroleh tersebut merupakan koloni yang murni, maka kita
dapat mengulang pengenceran dengan menggunakan koloni ini sebagai sampel.
Teknik micromanipulator
Mengambil satu bakteri dengan mikropipet yang ditempatkan dalam
micromanipulator, kemudian ditempatkan dalam micromanipulator, kemudian dipempatkan
dalam medium encer untuk dibiakkan.
Proses pemisahan/pemurnian dari mikroorganisme lain perlu dilakukan karena semua
pekerjaan mikrobiologis, misalnya telaah dan identifikasi mikroorganisme, memerlukan
suatu populasi yang hanya terdiri dari satu macam mikroorganisme saja Isolasi ke media
padat.
PRAKTIKUM TEKNIK ISOLASI
A. Ose Needle Loops

Dasar teknik penggunaan ose
1. Media diberi label pada tempat yang tepat tidak mengganggu pandangan pada
bagian tabung atau petri.
2. Anda harus bekerja secara efisien, tetapi jangan terburu-buru, karena mikroba
berpotensi berbahaya bagi anda.
3. Semua tabung berisi media harus berada dalam rak tabung reaksi bila tidak
digunakan apakah steril atau tidak steril jangan diletakkan diatas meja kerja bila
tidak digunakan.
4. Pegang pegangan jarum inokulasi seperti anda memegang pensil ditangan yang
biasa anda gunakan untuk menulis (kanan).
5. Sesuaikan Bunsen sehingga nyalanya maksimal dengan api berwarna biru.
6. Sterilkan loop/ jarum dengan membakar dalam api Bunsen berwarna biru.
Dengan sudut kemiringan antara 30-450 pada ujung ose sampai kawat (Nikrom)
berwarna merah kemudian dorong kedepan sampe bagian pangkal jarum ose
berwarna merah juga. Tarik kembali kebelakang sampe pada bagian ujung ose.
(Gambar a)
7. Tabung berisi medium dipegang dengan tangan kiri , buka penutup tabung ambil
koloni bakteri dengan menggunakan ose bulat. minimalkan terjadinya tumpahan
dan produksi aerosol dari gerakan mengisolasi bakteri.
8. Tutup tabung dipegang menggunakan jari kelingking pada saat melakukan isolasi.
(Gambar b)
9. Tabung yang terbuka dengan sudut kemiringan tertentu didekatkan pada Bunsen
untuk meminimalkan kemungkinan kontaminasi udara.
275
10. Tabung dilakukan pemanasan pada ujung tabung melewati api Bunsen sebanyak
dua atau tuga kali. (Gambar c).
11. Suspensi bakteri dalam medium cair dihomogenkan dengan fortex mixer
sebelum dipindahkan (gambar d), pastikan putaran fortex tidak keras.
homogenitas bias dilakukan dengan mengetuk-ngetuk pada tangan kita (gambar
e) jangan sampe cairan menyentuh tutup tabung.
12. Ketika membuka cawan petri, dibuka sedikit tutup digunakan sebagai pelindung
untuk meminimalkan kemungkinan kontaminasi udara (gambar f)
13. Semua tabung yang telah berisi kultur atau isolate dan cawan petri dengan
(NAMA ANDA, TANGGAL, MEDIUM, DAN INOKULUM).
Metode Transfer Khusus ada dua tahap dasar dalam isolasi.

1. Memperoleh sampel yang akan ditransfer
2. Mentransfer ke steril medium.
Gambar a.
pembakaran kawat ose
dilakukan melalui ujung
dalam api berwarna biru,
dimulai pada dasar kawat
dan terus didorong kedepan
sampai warna orange
seragam. Kemudian
didiamkan untuk
mendinginkan kawat
sebelum digunakan
Gambar b. melepaskan tutup

tabung dengan jari kelingking
dengan menarik tabung ke
sisi yang lain, kembali ditutup
bila sudah selesai mengambil
sampel atau isolasi selesai.
276
Gambar c. pegang tabung

yang terbuka pada sudut
kemiringan tertentu didekat
api untuk minimalisir
terjadinya kontaminasi.
Tutup tabung pada jari
kelingking.
Gambar d.
menghomogenkan sampel
dengan menggunakan fortex
mixer, sentuhkan pada posisi
on , putaran dicegah jangan
sampe menyentuh tutup
tabung.
Gambar e. sebuah budaya

kaldu harus selalu dicampur
sebelum mentransfer atau
memindahkan. Mengetuk
tabung dengan jari-jari anda
dilakukan perlahan sampai
terjadi putaran sehingga
homogen.
277
Gambar f. ketika melakukan

isolasi bakteri ke dalam petri
atau dari petri , harus
menjaga permukaan agar
tidak terkontaminasi dengan
menggunakan tutup untuk
meminimalkan udara
kontaminasi.
Gambar g. Pegang tabung
terbuka pada sudut untuk
meminimalkan kontaminasi
udara. Ketika menempatkan
satu lingkaran kedalam
tabung kaldu atau
mengeluarkannya.
1. Petri
Julius Richard Petri (1852 – 1921) bekerja sebagai asisten Robert Koch di Berlin di
kantor kesehatan Imperial yang mengidentifikasi mikroorganisme kolera, antraks,
tuberculosis bersama dengan Pasteur dan lister. Ketika petri tiba di lab Koch pada tahun
1877 asisten lab masih menggunakan piring kaca datar untuk tumbuh koloni. Angelina
Hesse, yang sering dibantu Walter di lab Koch, belajar tentang agar (kata Melayu untuk
polisakarida yang berasal dari ganggang rumput laut merah) bermigrasi dari Jawa. Medium
agar yang telah dilakukan sterilisasi dengan suhu 1210C dengan tekanan 15 psi selama 15
menit kemudian agar didinginkan sampai suhu kira-kira 50 – 55 0C baru medium dituang
pada cawan petri yang telah disterilkan sekitar 25 ml.

278
Untuk mengurangi kondensasi atau embun pada tutup maupun media agar
Keamanan :
1. Laboratorium mikrobiologi berpotensi berbahaya, sehingga harus mengikuti semua
pedoman keselamatan selama praktek.
2. Tidak ada buku atau kertas di meja kerja kecuali peralatan laboratorium yang
dibutuhkan.
3. Tidak ada makanan dan minuman yang berada di meja kerja laboratorium
4. Selalu mencuci tangan dengan desinfektan sabun atau alcohol sebelum meninggalkan
meja kerja.
5. Jangan membuka cawan petri setelah melakukan inokulasi sebelum diinkubasi selama
24 jam.
6. Selalu membuang bahan yang digunakan dalam tempat sampah biohazard kecuali
terdapat instruksi yang lain.
Prosedur :
1. Tuangkan sedikit isopropanol 70% pada permukaan meja kerja dan diusap dengan
handuk kertas (Tissu atau kapas) bersih . pastikan alcohol pada meja anda benar –
benar menguap sebelum menyalakan api. Buang tissue atau kapas ketempat sampah
sebelum memulai langkah berikutnya.
2. Setelah tidak ada upa alcohol di meja tidak ada maka silakan nyalakan api Bunsen.
Streak Metode Plat Isolasi

1. Sterilkan loop inokulasi dengan memegangnya di bagian gagang diatas nyala Bunsen
berwarna biru sampai merah panas.
2. Ambil kaldu pada tabung reaksi yang berisi mikroorganisme secara aseptis. Tutup
tabung berada di jari kelingking.
3. Mulut tabung dilewatkan sebanyak 2-3 kali dan menjaga mulut tabung pada sudut
tertentu didekat api.
4. Perlahan masukkan ose bulat yang telah disterilkan ke dalam mulut tabung sampai
mencapai kaldu. Jangan masukkan ose sampe jauh ke kaldu, karena hanya ujungnya
yang steril karena akan mencemari budaya.
5. Setelah kaldu berisi mikroorganisme berada di ujung loop. Tutup tabung kembali akan
tetapi sebelumnya mulut tabung dipanaskan dahulu.
6. Mulut cawan petri di buka sedikit membentuk sudut 450.

279
7. Lakukan goresan pada median agar kedelai tryptic (TSA) menggunakan salah satu pola
yang ada. Hati-hati jangan sampai menggali dengan cara apapun.
Gambar 1.22 Goresan pada median agar kedelai tryptic (TSA)

8. Lakukan inkubasi pada suhu 370C selama 24 jam sebelumnya beri label dengan
menyebut nama tanggal, jenis inokulasi dan lakukan pengemasan dengan kertas atau
isolative
Gambar 1.23 Inkubasi

280
Format Evaluasi Praktikum

Nama :
Hari / tanggl :
Topik Praktikum :
Kesimpulan
Praktikan Dosen
281
Topik 2
Inokulasi Bakteri
PENGANTAR
Kegiatan praktikum yang akan lakukan pada topik ini diharapkan anda mahasiswa telah
memahami topik sebelumnya antara lain topik praktikum pengenalan alat-alat dan bahan-
bahan praktikum laboratorium mikrobiologi dan pembuatan media biakan serta metode
sterilisasi alat dan bahan praktikum praktikum pada topik ini dapat berjalan lancar di
laboratorium Mikrobiologi.
Di dalam pekerjaan inolasi bakteri di laboratorium mikrobiologi sudah pasti kita tidak
terlepas dari alat-alat yang berada dalam laboratorium. Dalam melaksanakan Kegiatan
Praktikum Modul ini, mahasiswa akan menggunakan beberapa alat-alat dan bahan untuk
keperluan inolasi bakteri. Untuk itu diharapkan mahasiswa telah mengetahui dan dapat
menggunakan alat dan bahan secara benar agar praktikum dapat berjalan lancar.
Inokulasi Bakteri adalah suatu metode pembiakan bakteri dengan menggunakan media
universal atau selektif yang dilakukan dengan proses pemindahan biakan murni ke medium
baru untuk menumbuh atau memperbanyak kultur murni dengan metode cawan gores dan
metode tabur serta metode tusuk dengan mengambil biakan murni untuk
dikembangbiakkan.
1. Mahasiswa mampu menyebutkan nama-nama alat-alat praktikum dengan metode

inokulasi yang baik dan benar
2. Mahasiswa mampu menyebutkan nama-nama bahan praktikum pembiakan
mikroorganisme dengan metode inokulasi yang baik dan benar
3. Mahasiswa mampu menggunakan alat-alat praktikum pembiakan mikrorganisme
dengan metode inikulasi baik dan benar
4. Mahasiswa mampu menggunakan bahan praktikum pembiakan mikrorganisme
dengan metode inokulasi dengan baik dan benar
inokulasi
6. Mahasiswa mampu melakukan pengambilan sampel biakan murni mikrorganisme
dengan jarum inikulum
282
MATA KULIAH ATAU MATERI PRASYARAT
Sebelum mahasiswa melakukan praktikum pada topik ini, diharapkan mahasiswa telah
lulus pada topik pengenalan alat-alat dan bahan-bahan praktikum laboratorium mikrobiologi
dan pembuatan media serta sterilisasi alat dan bahan praktik laboratorium mikrobiologi
KEGUNAAN BAB BAGI MAHASISWA
Dengan menguasai praktikum pada bab ini mahasiswa dapat mengaplikasikan

keterampilannya untuk melakukan penelitian lanjut pada masa tugas akhir dalam menyusun
karya tulis ilmiah untuk menyelesaikan program studi diploma III jurusan Keperawatan Gigi
sehingga bab ini sangat penting untuk dilalui.
A. PENANAMAN BAKTERI (INOKULASI)
Penanaman bakteri atau biasa disebut juga inokulasi adalah pekerjaan memindahkan
bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat
tinggi. Inokulasi dilakukan dalam kondisi aseptik, yakni kondisi dimana semua alat yang ada
dalam hubungannya dengan medium dan pengerjaan, dijaga agar tetap steril. Hal ini untuk
menghindari terjadinya kontaminasi .Ruang tempat penanaman bakteri harus bersih dan
keadaannya harus steril agar tidak terjadi kesalahan dalam pengamatan atau percobaan.
Inokulasi dapat dilakukan dalam sebuah kotak kaca yang biasa disebut sebagai laminar air
flow ataupun dalam ruangan yang terjaga kesterilannya (Pelczar, 1986).
Pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru.
Terlebih dahulu harus diusahakan agar semua alat-alat yang ada sangkut-paut dengan
medium dan pekerjaan inokulasi itu benar-benar steril; ini untuk menghindari kontaminasi,
yaitu masuknya mikroorganisme yang tidak kita inginkan.
Dalam teknik biakan murni tidak saja diperlukan bagaimana memperoleh suatu biakan
yang murni, tetapi juga bagaimana memelihara serta mencegah pencemaran dari luar.
Inokulasi dimaksudkan untuk menumbuhkan, meremajakan mikroba dan mendapatkan
populasi mikroba yang murni.. Media untuk membiakkan bakteri haruslah steril sebelum
digunakan. Pencemaran terutama berasal dari udara yang mengandung banyak
mikroorganisme. Pemindahan biakan mikroba yang dibiakkan harus sangat hati-hati dan
mematuhi prosedur laboratorium agar tidak terjadi kontaminasi. Oleh karena itu, diperlukan
teknik-teknik dalam pembiakan mikroorganisme yang disebut dengan teknik inokulasi
biakan.
Identifikasi biakan mikroorganisme seringkali memerlukan pemindahan ke biakan
segar tanpa terjadi pencemaran. Pemindahan mikroorganisme ini dilakukan dengan teknik
aseptik untuk mempertahankan kemurnian biakan selama pemindahan berulangkali.
Mikroorganisme dapat ditumbuhkan dalam biakan cair atau padat. Kekeruhan dalam kaldu
menunjukkan terjadinya pertumbuhan mikroorganisme. Bila mikroorganisme menumpuk
pada dasar tabung maka akan membentuk sedimen, sedangkan pada permukaan kaldu
pertumbuhannya terlihat sebagai pelikel.
283
Pertumbuhan mikroorganisme dalam kaldu seringkali menggambarkan aktivitas

metabolismenya. Mikroba aerob obligat berkembang biak pada lapisan permukaan karena
pada bagian ini kandungan oksigen tinggi. Selain dalam media cair, mikroorganisme juga
memperlihatkan pertumbuhan dengan ciri tertentu dalam biakan padat seperti agar miring
atau lempengan agar. Agar miring lazimnya digunakan untuk menyimpan biakan murni
sedangkan agar lempengan lazimnya digunakan untuk memurnikan mikroorganisme.
Dalam praktek penanaman bakteri (Inokulasi) harus benar-benar steril; ini untuk
menghindari kontaminasi, yaitu masuknya mikroorganisme yang kita tidak inginkan.
Langkah-langkah yang harus dilakukan adalah:
B. MENYIAPKAN RUANGAN
Ruang tempat inokulasi itu kecil harus bersih dan bebas angin, dinding ruang yang
basah menyebabkan butir-butir debu menempel kepadanya, pada waktu melakukan
inokulasi, baik sekali jika meja tempat inokulasi didasari dengan kain basah. Pekerjaan
inokulasi dapat dilakukan juga di dalam suatu kotak berkaca (ent-kas).
C. PEMINDAHAN BAKTERI
Ujung kawat inokulasi sebaiknya dari platina atau dari nikrom; ujung itu boleh lurus,
boleh juga berupa kolongan yang berdiameter 1-3 mm. Lebih dahulu ujung kawat ini
dipijarkan, sedang sisanya sampai tangkai cukup dilewatkan nyala api saja. Setelah dingin
kembali, ujung kawat itu disentuhkan suatu koloni. Mulut tabung tempat pemiaraan itu
dipanasi juga setelah sumbatnya diambil. Setelah pengambilan inokulum (yaitu sampel
bakteri) selesai, mulut tabung dipanasi lagi kemudian disumbat seperti semula. Ujung kawat
yang membawakan inokulum tersebut digesekkan pada medium baru atau pada suatu kaca
benda, kalau tujuannya memang akan membuat suatu sediaan.
D. PEMINDAHAN DENGAN PIPET
Cara ini dilakukan misalnya pada penyelidikan air minum atau pada penyelidikan susu.
Untuk itu diambillah 1 ml contoh untuk diencerkan dengan 99 ml air murni yang steril.
Kemudian diambil 1 ml dari enceran ini untuk dicampur adukan dengan medium agar-agar
yang masih dalam keadaan cair (susu antara 42-45oC). Lalu agar-agar yang masih ecer ini
dituangkan di cawan petri. Setelah agar-agar membeku, maka cawan petri yang berisi
piaraan baru itu disimpan dalam tempat yang aman, misalnya di dalam almari atau laci.
Penyimpanan cawan dilakukan dengan meletakkan secara terbalik, yaitu permukaan
medium menghadap ke bawah; ini untuk menghindari tetesnya air yang mungkin akan
melekat pada dinding dalam pada tutup cawan. Piaraan yang diperoleh dengan jalan seperti
di atas ini terkenal sebagai piaraan adukan. Dengan cara yang demikian ini bakteri yang
diionokulasikan tadi dapat menyebar ke seluruh medium. Bakteri yang aerob maupun yang
anaerob dapat tumbuh di situ, dan banyaknya koloni dapat dihitung dengan mudah.
Pengenceran 1 mil sampel dengan 99 ml air murni itu tidak mutlak, hal ini tergantung kepada
keadaan air atau susu yang akan diteliti.
284
Macam-macam Teknik Inokulasi
Gambar 2.1 Metode Tabur

Sumber:Platehttps://mikrobiologilautunpad, 8/9/17
Inokulasi mikroba umumnya menggunakan alat yang disebut sebagai jarum ose yang
berfungsi menginokulasi kultur mikrobia serta memindahkan suatu kultur mikroba (koloni)
pada media satu ke media lainnya. Ada beberapa metode yang digunakan untuk
menginokulasi mikroba antara lain:
1. Metode Tebar
Setetes inokolum diletakkan dalam sebuah medium agar nutrien dalam cawan
petridish dan dengan menggunakan batang kaca yang bengkok dan steril. Inokulasi itu
disebarkan dalam medium batang yang sama dapat digunakan dapat menginokulasikan
pinggan kedua untuk dapat menjamin penyebaran bakteri yang merata dengan baik. Pada
beberapa pinggan akan muncul koloni-koloni yang terpisah-pisah.
Gambar 2.2 Metode Tusuk

285
Gambar 2.3 Metode Gores

2. Metode Tusuk
Metode tusuk yaitu dengan cara meneteskan atau menusukkan ujung jarum ose yang
didalamnya terdapat inokolum, kemudian dimasukkan ke dalam media
3. Metode gores
Teknik ini lebih menguntungkan jika ditinjau dari sudut ekonomi dan waktu, tetapi
memerlukan keterampilan-keterampilan yang diperoleh dengan latihan. Penggoresan yang
sempurna akan menghasilkan koloni yang terpisah. Inokulum digoreskan di permukaan
media agar nutrien dalam cawan petri dengan jarum pindah (lup inokulasi). Di antara garis-
garis goresan akan terdapat sel-sel yang cukup terpisah sehingga dapat tumbuh menjadi
koloni. Cara penggarisan dilakukan pada medium pembiakan padat bentuk lempeng. Bila
dilakukan dengan baik teknik inilah yang paling praktis. Dalam pengerjaannya terkadang
berbeda pada masing-masing laboratorium tetapi tujuannya sama yaitu untuk membuat
goresan sebanyak mungkin pada lempeng medium pembiakan.
Cara kerja inokulasi bakteri metode gores dengan media Liquid culture :
Alat :
1. Cawan petri 2 buah
2. Lampu spritus
3. Jarum ose
4. Rak tabung
5. Korek api
6. Kertas buram
7. Kapas
8. Inkubator
Bahan :
1. PCA miring (5 ml)
2. PDA miring (5 ml)
3. PCA 10 ml 1 tabung reaksi
286
4. PDA 10 ml 1 tabung reaksi

5. Alkohol
6. Bakteri
7. Jamur
Cara Percobaan 1
Langkah-langkah
1. Menyiapkan PCA dan PDA masing
masing-masing 10 ml yang sudah disterilkan dan sudah
dipanaskan
2. Menyiapkan 2 cawan petri dan jarum ose
3. Nyalakan lampu spritus
4. Tuangkan PCA dan PDA masingmasing-masing
masing 10 ml ke dalam cawan petri yang sudah
disterilkan dengan alkohol
5. PCA dan PDA tersebut didiamkan sampai menjadi padat seperti gel dan dingin
6. Setelah PCA dan PDA padat dan dingin, lalu kita ambil sampel bakteri dan jamur
dengan jarum ose yang sudah dipanasi sampai membara
7. Kemudian sampel bakteri kita masukkan ke dalam media PCA padat dengan cara dioles
dengan jarum ose pada permukaan media PCA secara zigzig-zag.
8. Sampel jamur kita masukkan ke da dalam
lam media PDA padat dengan cara dioles dengan
jarum ose pada permukaan media PDA secara zig
zig-zag
9. Kemudian cawan petri itu dibungkus dengan kertas buram dan diikat dengan karet
gelang
10. Diberi label identitas
Langkah percobaan 2
Gambar 2.4 Goreng pada Media Miring

1. Menyiapkan PCA dan PDA miring masing

masing-masing 5 ml yang sudah disterilkan dan padat
2. Siapkan sampel bakteri dengan jarum ose yang sudah disterilkan dengan dipanaskan
pada lampu spritus hingga merah, kemudian memindahkan bakteri ke dalam PCA
miring dengan menggores menggunakan metode zig zig-zag
zag dan tetap didekatkan pada
lampu spritus agar tetap steril
3. Ambil sampel jamur dengan jarum ose yang sudah disterilkan dengan dipanaskan pada
lampu spritus
itus hingga merah, kemudian memindahkan ke dalam PDA miring dengan
287
menggores menggunakan metode zig zig-zag dan tetap didekatkan pada lampu spritus
agar tetap steril.
4. Setelah selesai tutup tabung dengan kapas, bungkus dengan kertas dan ikat dengan
karet gelang.
5. Simpan di inkubator
nkubator untuk dikembangkan selama 1 X 24 jam.
Hasil percobaan
Setelah media diinkubasi selam 1 X 24 Jam terdapat banyak jamur pada media PDA dan
bakteri pada Media PCA.
Kesimpulan:
Bakteri dan jamur dapat tumbuh pada media agar yang miring dengan metode zig-zag
zig
yang mana media tersebut terbuat dari bahan dasar glukosa Media PCA dan PDA ini dapat
digunakan untuk mengetahui morfologi sel
4. Metode tuang
Gambar 2.5 Metode tuang

Isolasi menggunakan media cair dengan cara pengenceran. Dasar melakukan

pengenceran adalah penurunan jumlah mikroorganisme sehingga pada suatu saat hanya
ditemukan satu sel di dalam tabung. Cara lain untuk mengembangbiakkan koloni murni dari
populasi campuran
ran mikroorganisme adalah dengan mengencerkan specimen dalam medium
agar yang telah dicairkan dan didinginkan (±500C) yang kemudian dicawankan. Karena
konsentrasi sel-sel
sel mikroba di dalam specimen pada umumnya tidak diketahui ssebelumnya,
maka pengenceran perlu u dilakukan beberapa tahap sehingga sekurang
sekurang-kurangnya satu
diantara cawan tersebut mengandung koloni terpisah diatas permukaan ataupun di dalam
agar.
Metode ini memboroskan bahan dan waktu namun tidak memerlukan keterampilan
yang tinggi. Teknik ini memerlukan
merlukan agar yang belum padat (>45oC) untuk dituang bersama
suspensi bakteri ke dalam cawan petri lalu kemudian dihomogenkan dan dibiarkan
memadat. Hal ini akan menyebarkan sel sel-sel
sel bakteri tidak hanya pada permukaan aja
melainkan terendam agar (di dalam agar) sehingga terdapat sel-sel sel yang tumbuh di
permukaan agar yang kaya oksigen dan ada yang tumbuh di dalam agar yang tidak begitu
banyak mengandung oksigen.
Adapun prosedur adalah sebagai berikut :
288
1. Siapkan cawan petri steril, tabung pengenceran yang akan ditanamkan dan media
padat yang masih cair (45oC)
2. Teteskan 1 ml secara aseptis suspensi sel ke dalam cawan kosong
3. Tuangkan media yang masih cair ke dalam cawan kemudian putar cawan untuk
menghomogenkan suspensi nbakteri dan media. Kemudian diinkubasi.

Nama :
Hari / tanggal :
Topik Praktikum :
Kesimpulan
Praktikan Dosen
289
Topik 3
Perhitungan Jumlah Koloni
PENDAHULUAN
Mikroorganisme adalah makhluk yang sangat kecil dan hanya dapat dilihat dibawah
mikroskop. Salah satu jenis mikroorganisme adalah bakteri. Bakteri merupakan organisme
uniselular yang tumbuh dengan cara pembelahan biner yaitu satu sel membelah secara
simetris. Koloni bakteri adalah sekumpulan dari bakteri-bakteri yang sejenis yang
mengelompok menjadi satu dan membentuk suatu koloni-koloni (Volk, 1993). Pertumbuhan
mikroorganisme yang membentuk koloni dapat dianggap bahwa setiap koloni yang tumbuh
berasal dari satu sel, maka dengan menghitung jumlah koloni dapat diketahui penyebaran
bakteri yang ada pada bahan. Jumlah mikroba pada suatu bahan dapat dihitung dengan
berbagai macam cara, tergantung pada bahan dan jenis mikrobanya (Dwidjoseputro, 2005).
Dalam analisa mikrobiologi, menghitung jasad renik mikroorganisme suatu sediaan,
harus diperhitungkan sifat-sifat dari bahan yang akan diperiksa, terutama: kelarutan,
kemungkinan adanya zat anti mikroba, dan derajat kontaminasi yang diperkirakan. Untuk
mempermudah penghitungan koloni diperlukan pengetahuan mengenai morfologi bakteri
tersebut sehingga media pertumbuhan yang akan digunakan sesuai dengan sifat bakteri
tersebut.
Ada 2 macam cara perhitungan jumlah mikroba/bakteri, yaitu perhitungan secara
langsung dan tidak langsung. Perhitungan jumlah mikroba secara langsung yaitu jumlah
mikroba dihitung secara keseluruhan, baik yang mati atau yang hidup sedangkan
perhitungan jumlah mikroba secara tidak langsung yaitu jumlah mikroba dihitung secara
keseluruhan baik yang mati atau yang hidup atau hanya untuk menentukan jumlah mikroba
yang hidup saja (Volk, 1993).
1. Mahasiswa mampu menyebutkan nama-nama alat-alat praktikum perhitungan jumlah

koloni dengan baik dan benar
2. Mahasiswa mampu menyebutkan nama-nama bahan praktikum perhitungan jumlah
koloni dengan baik dan benar
3. Mahasiswa mampu menggunakan alat-alat praktikum perhitungan jumlah koloni
dengan baik dan benar
4. Mahasiswa mampu menggunakan bahan-bahan praktikum perhitungan jumlah koloni
5. Mahasiswa mampu melakukan prosedur praktikum perhitungan jumlah koloni dengan
baik dan benar
6. Mahasiswa dapat melakukan perhitungan sel mikroba secara langsung
290
A. PERTUMBUHAN KOLONI
Pertumbuhan dapat didefinisikan secara umum yaitu sebagai pertambahan secara

teratur semua komponen di dalam sel hidup. Pada organisme multiseluler, (ber sel satu),
pertumbuhan adalah pertambahan jumlah sel, yang juga berarti penambahan jumlah
organisme yang membentuk populasi atau satu biakan. Pada organisme seonostik (aseluler),
selama pertumbuhan ukuran sel menjadi besar, tetapi tidak terjadi pembelahan sel
(Dwidjoseputro, 2005).
Untuk mengetahui perkembangan atau pertumbuhan suatu bakteri membutuhkan
pembuatan media dengan metode perhitungan bakteri yang ada dalam media. Ada
banyaknya metode yang digunakan dalam menghitung jumlah bakteri secara kuantitatif dari
suatu populasi bakteri. Penentuan jumlah angka mikroorganisme sangat penting dilakukan
untuk menetapkan keamanan suatu sediaan farmasi dan makanan. Berbagai metode telah
dikembangkan untuk menghitung jumlah mikroorganisme. Metode tersebut menghitung
jumlah sel, massa sel, atau isi sel yang sesuai dengan jumlah sel (Volk, 1993).
Koloni adalah kumpulan dari mikrobia yang memiliki kesamaan sifat-sifat seperti
bentuk, susunan, permukaan, dan sebagainya. Sifat-sifat yang perlu diperhatikan pada koloni
yang tumbuh di permukaan medium adalah (Dwidjoseputro, 2005) : Besar kecilnya koloni.
Ada koloni yang hanya serupa suatu titik, namun ada pula yang melebar sampai menutup
permukaan medium. Bentuk. Ada koloni yang bulat, ada yang memanjang. Ada yang tepinya
rata, ada yang tidak rata. Kenaikan permukaan. Ada koloni yang rata saja dengan permukaan
medium, ada pula yang timbul yaitu menjulang tebal di atas permukaan medium. Halus
kasarnya permukaan. Ada koloni yang permukaannya halus, ada yang permukaannya kasar
dan tidak rata. Wajah permukaan. Ada koloni yang permukaannya mengkilat, ada yang
permukaannya suram. Warna. Kebanyakan koloni bakteri berwarna keputihan atau
kekuningan. Kepekatan. Ada koloni yang lunak seperti lendir, ada yang keras dan kering.
Koloni yang tumbuh pada media agar dapat dilihat secara visual dan dihitung. Secara
kuantitatif koloni bakteri dapat dihitung dengan cara menghitung populasinya secara umum
atau dengan kata lain menghitung seluruh sel bakteri yang ada dalam media termasuk sel
yang mati, dan menghitung sel bakteri hidup dengan menggunakan teori pendekatan.
Perhitungan bakteri adalah suatu cara yang digunakan untuk menghitung jumlah
koloni bakteri yang tumbuh pada suatu media pembiakan. Secara mendasar ada dua cara
penghitungan bakteri, yaitu secara langsung dan secara tidak langsung. Ada beberapa cara
perhitungan secara langsung, antara lain adalah dengan membuat preparat dari suatu bahan
(preparat sederhana diwarnai atau tidak diwarnai) dan penggunaan ruang hitung (counting
chamber). Sedangkan perhitungan secara tidak langsung hanya mengetahui jumlah
mikroorganisme pada suatu bahan yang masih hidup saja (viable count). Dalam
pelaksanaannya ada beberapa cara yaitu perhitungan pada cawan petri (total plateco
unt/TPC), perhitungan melalui pengenceran, Perhitungan jumlah terkecil atau terdekat (MPN
methode), calorimete /cara kekeruhan atau turbidimetri (Hadietomo, 1990).
Perhitungan jumlah suatu bakteri dapat melalui berbagai macam uji seperti uji
kualitatif koliform yang secara lengkap terdiri dari tiga tahap yaitu uji penduga (uji
291
kuantitatif, bisa dengan metode MPN), uji penguat dan uji pelengkap. Waktu, mutu sampel,
biaya, tujuan analisis merupakan beberapa faktor penentu dalam uji kualitatif koliform.
Bakteri koliform dapat dihitung dengan menggunakan metode cawan petri (metode
perhitungan secara tidak langsung yang didasarkan pada anggapan bahwa setiap sel yang
dapat hidup akan berkembang menjadi satu koloni yang merupakan suatu indeks bagi
jumlah organisme yang dapat hidup yang terdapat pada sampel) seperti yang dilakukan pada
percobaan ini (Dwidjoseputro, 1994).
Pada tiap perhitungan bakteri ketepatan berkurang dengan meningkatnya konsentrasi
sel-sel. Begitu halnya bila jumlah yang dihitung terlalu kecil. Bahan yang mengandung
sejumlah bakteri (kira-kira lebih dari 104/ml) biasanya diencerkan dari 1:105 atau lebih
tergantung pada bahan pemeriksaan atau metode hitung, sehingga hasil hitungan yang
diperoleh dapat diandalkan dan memudahkan perhitungan. Perhitungan dapat dilakukan
dengan dua cara yaitu perhitungan secara langsung dan perhitungan secara tidak langsung
(Ali, 2005.).
1. Penentuan volume total
Cara ini adalah semacam modifikasi penentuan hematokrit pada pengukuran volume
total butir-butir darah, misalnya 10 ml biakan dimasukkan ke dalam tabung reaksi
khusus (tabung hopklins) yang bagian bawahnya berupa silinder dan bergaris ukuran.
2. Metode turbidometri
Teknik ini sudah dipakai sebagai cara mengukur kekeruhan suspensi atas dasar
penyerapan dan pemencaran cahaya yang dilintaskan, sehingga yang mengandung
lebih dari 107-108 sel/ml, tampak lebih keruh oleh mata telanjang. Suatu volume
biakan yang telah ditakar ditempatkan dalam tabung khusus yang jernih dengan
diameter tertentu.
Prinsip dari perhitungan metode hitungan cawan adalah bila sel mikroba yang masih
hidup ditumbuhkan pada medium, maka mikroba tersebut akan berkembang biak dan
membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dan kemudian dapat dihitung tanpa
menggunakan mikroskop. Metode hitungan cawan dibedakan atas dua cara, yaitu
metode tuang (pour plate) dan metode permukaan (surfacelspread plate). Pada
metode tuang, sejumlah sampel (1 ml atau 0,1 ml) dari pengenceran yang dikehendaki
dimasukkan ke dalam cawan petri, kemudian ditambahkan agar-agar cair yang steril
yang telah didinginkan (47-50oC) sebanyak 15-20 ml dan digoyangkan supaya
sampelnya menyebar.
Metode ini merupakan cara yang paling sensitif untuk menentukan jumlah jasad renik,
dengan alasan :
1. Hanya sel mikroba yang hidup yang dapat dihitung
2. Beberapa jasad renik dapat dihitung sekaligus
3. Dapat digunakan untuk isolasi dan identifikasi mikroba, karena koloni yang
terbentuk mungkin berasal dari mikroba yang mempunyai penampakan spesifik.
Selain keuntungan-keuntungan tersebut di atas, metode hitungan cawan juga memiliki

kelemahan sebagai berikut :
292
1. Hasil perhitungan tidak menunjukkan hasil yang sebenarnya, karena beberapa sel yang
berdekatan mungkin membentuk koloni.
2. Medium dan kondisi inkubasi yang berbeda mungkin menghasilkan jumlah yang
berbeda pula.
3. Mikroba yang ditumbuhkan harus dapat tumbuh pada medium padat dan membentuk
koloni yang kompak, jelas, dan tidak menyebar.
4. Memerlukan persiapan dan waktu inkubasi relatif lama sehingga pertumbuhan
koloni dapat dihitung.
Metode perhitungan cawan didasarkan pada anggapan bahwa setiap sel yang hidup
dapat berkembang menjadi koloni. Jadi jumlah koloni yang muncul pada cawan adalah
indeks bagi jumlah mikroorganisme yang terkandung dalam sampel. Teknik yang harus
dikuasai dari metode ini adalah mengencerkan sampel dan mencawankan hasil pengenceran
tersebut. Setelah inkubasi, jumlah semua koloni diamati untuk memenuhi persyaratan
statistik. Cawan yang dipilih untuk menghitung koloni adalah cawan yang mengandung
antara 30 sampai 300 koloni. Organisme yang terdapat dalam sampel asal ditentukan
dengan mengalikan jumlah koloni yang terbentuk dengan faktor pengenceran pada cawan
yang bersangkutan (Waluyo, 2007).
Salah satu metode cepat yang digunakan untuk menghitung massal sel adalah melalui
perhitungan kekeruhan (turbidity). Kekeruhan dapat diukur dengan menggunakan fotometer
atau spertofotometer. Pengukuran kekeruhan ini didasarkan atas partikel-partikel kecil yang
menyebarkan cahaya langsung secara proporsional (sampai batas-batas tertentu) dengan
konsentrtasinya. Zat cahaya melewati tabung yang berisi suspensi mikroba, maka cahaya
akan dihamburkan (Pelczar, 1989).
Ada dua Metode plate count yang sering digunakan, yaitu metode sebaran dan metode
tuang. Asumsi digunakannya metode ini adalah bahwa setiap satu sel mikroba dapat tumbuh
dan akhirnya membentuk satu koloni yang dapat dilihat dengan kasat mata. Pada metode
sebaran, volume yang dibutuhkan adalah 0.1 ml agar sampel tersebut dapat tersebar,
terendam, dan teresap. Karena jika lebih, maka sampel akan mengendap dan mengumpul
sehingga menyulitkan dalam perhitungan (Ali, 2005).
Menurut Jutono, dkk (1980) ada 2 cara perhitungan jumlah mikrobia yaitu perhitungan
secara langsung (direct method) dan secara tidak langsung (indirect method).
1. Perhitungan secara langsung

Perhitungan jumlah mikrobia secara langsung, dipakai untuk menentukan jumlah
mikrobia keseluruhan baik yang mati maupun yang hidup. Berbagai cara perhitungan
mikroba secara langsung menggunakan (Dwidjoseputro, 2005) :
293
a. Menggunakan cara pengecatan dan pengamatan mikrospis

Pada cara ini mula-mula dibuat preparat mikroskopik pada gelas benda, suspensi
bahan atau biakan mikroba yang telah diketahui volumenya diratakan diatas gelas benda
pada suatu luas tertentu. Setelah itu preparat dicat dan dihitung jumlah rata-rata sel
mikroba tiap bidang pemandangan mikroskopik. Luas bidang pemandangan mikroskopik
dihitung dengan mengukur garis tengahnya.
b. Perhitungan sel langsung

Cara ini menggunakan bilik hitung (hemoci tometer) yang menghasilkan hitungan total,
karena semua sel terhitung, baik sel yang hidup maupun sel yang mati. Karena bakteri itu
kecil, maka perhitungan yang dilakukan secara statistik dapat diterima, namun harus dibuat
suspensi sekurang-kurangnya 107 / ml.
c. Menghitung dengan alat penghitung elektronik

Dengan alat ini dapat dihitung beribu-ribu bakteri dalam beberapa detik. Penggunaan
alat ini banyak didasarkan atas kerja dengan lubang pengintai elektronik (dapat disamakan
dengan mata elektronik) kerjanya tergantung pada interupsi dari berkas cahaya elektronik
yang melintasi suatu ruang antara dua ruang elektron yang berdekatan letaknya. Tiap
partikel yang karena perbedaan konduktivitas sel dan cairan. Interupsi ini dicetak oleh suatu
alat secara elektris.
d. Menghitung dengan filter membrane

Contoh cairan yang disaring dan ditakar dengan filter steril yang terbuat dari membran
berpori. Bakteri yang tertahan oleh filter itu kemudian dihitung langsung. Dalam hal ini
banyak bakteri dalam cairan tersebut tidak boleh terlalu banyak dan tersebar rata.
e. Menggunakan filter membrane (miliphore filter)

Suspensi bahan mula-mula disaring sejumlah volume tertentu kemudian disaring
dengan filter membrane yang telah disterilkan terlebih dahulu. Dengan menghitung jumlah
sel rata-rata tiap kesatuan luas pada filter membran dapat dihitung jumlah sel dari volume
suspensi yang disaring (Jutono dkk, 1980)
f. Menggunakan counting chamber

Dasar perhitungannya ialah dengan menempatkan satu tetes suspense bahan atau
biakan mikroba pada alat tersebut ditutup dengan gelas penutup kemudian diamati dengan
mikroskop yang perbesarannya tergantung pada besar-kecilnya mikroba. Perhitungan ini
dapat menggunakan hemositometer. Peteroff Hauser Bacteria Counter atau alat-alat lain
yang sejenis.
294
2. Perhitungan secara tidak langsung

Jumlah mikroba dihitung secara keseluruhan baik yang mati atau yang hidup atau
hanya untuk menentukan jumlah mikroba yang hidup saja, ini tergantung cara-cara yang
digunakan. Untuk menentukan jumlah mikroba yang hidup dapat dilakukan setelah larutan
bahan atau biakan mikroba diencerkan dengan factor pengenceran tertentu dan
ditumbuhkan dalam media dengan cara-cara tertentu tergantung dari macam dan sifat-sifat
mikroba.
Menurut Hadietomo (1990) menyatakan bahwa perhitungan secara tidak langsung
dapat dilakukan dengan beberapa cara yaitu:
a. Penentuan volume total
b. Cara ini adalah semacam modifikasi penentuan hematokrit pada pengukuran volume
total butir-butir darah, misalnya 10 ml biakan dimasukkan ke dalam tabung reaksi
khusus (tabung hopklins) yang bagian bawahnya berupa silinder dan bergaris ukuran.
B. METODE TURBIDOMETRI
Teknik ini sudah dipakai sebagai cara mengukur kekeruhan suspensi atas dasar
penyerapan dan pemencaran cahaya yang dilintaskan, sehingga yang mengandung lebih dari
107-108 sel/ml, tampak lebih keruh oleh mata telanjang. Suatu volume biakan yang telah
ditakar ditempatkan dalam tabung khusus yang jernih dengan diameter tertentu.
Perhitungan jumlah bakteri secara tidak langsung memiliki kelebihan dan kekurangan.
Kelebihannya adalah dapat digunakan untuk isolasi dan identifikasi bakteri, bakteri yang
dihitung adalah bakteri yang hidup. Sedangkan kekurangannya adalah perhitungannya
kurang akurat karena ada kemungkinan beberapa sel bertumpuk, ada kemungkinan terjadi
spreader, waktu yang dibutuhkan cukup lama, bahan yang digunakan relatif banyak.
Alat dan Bahan

Alat
1. Kaca
2. objek
3. Tisu
4. Jarum ose
5. Mikroskop
6. Api Bunsen
7. Bahan
8. Aquades
9. Metilen blue
10. Gentian violet
11. Iodium
12. Alcohol 96%
13. Bakteri yang akan diuji
295
Cara kerja
Metode hitung langsung
Gambar 2.6 Metode hitung langsung

Siapkan kutur cair bakteri berumur 1×24 jam dan hemasitomer dan kaca penutup yang
bersih dan lekatan di atasnya. Cara membersihkan permukaan hemasitomer dan kaca
penutup dengan secarik kertastas lensa yang dibasahi dengan setetes aquades steril sampai
tidak terdapat sisa minyak pada permukaannya. Homogenkan dulu sampel mikroba yang
akan dihitung. Ambil sampel mikroba pipet steril dari media cair secukupnya
secukupny (0.1-0.5 ml) lalu
masukkan ke dalam parit-parit
parit pada hemasitomer (jangan sampai lebih). Tinggi sampel yang
berbeda diantara kaca benda dan kaca penutup adalah 0.01 mm. Letakkan hemasitomer
yang telah diberi suspensi bakteri diatas meja mikroskop. Amati menggunakan perbesaran
lemah, perhatikan kotak-kotak
kotak skala yang ada pada slide tersebut. Hitunglah jumlah sel
dengan perbesaran kuat, perhitungan sel cukup dilakukan pada 5 kotak besar. Hitunglah
jumlah sel mikroba berdasarkan rumus pada bagian pengamatan.
296
C. METODE HITUNG CAWAN
Gambar 2.7 Menghitung Bakteri

Sumber:Platehttps://mikrobiologilautunpad, 8/9/17
Siapkan kultur cair bakteri uji berumur 1×24 jam. Homogenkan dulu sampel mikroba
yang akan dihitung. Lakukan pengenceran terhadap sampel. Caranya: pengenceran 10-1
diperoleh dengan memasukkan 1 ml sampel ke dalam 9 ml air pepton/ aquades steril.
Pengenceran 10-2 diperoleh memasukkan 1 ml sampel dari pengenceran 10-1 ke dalam 9 ml
air pepton/ aquades steril. Pengenceran 10-3 diperoleh dengan memasukkan 1 ml sampel
dari pengenceran 10-3 ke dalam 9 ml air pepton , dan seterusnya pengenceran dilakukan
tergantung dari kekeruhan sampel. Inokulasikan sebanyak 0,1 ml hasil pengenceran
kepermukaan media NA dengan cara taburan, kemudian ratakan dengan cara memutar-
mutar cawan diatas meja. Inokulasikan ini dapat pula dilakukan dengan metode tuang.
Untuk memperjelas dapat diikuti gambar berikut ini:
Gambar 2.8 Gambar pengenceran dan inokulasi ke media sampel

297
Inkubasikan pada suhu 37 c selama 1×24 jam.

Amati koloni yang tumbuh, dan hitunglah jumlahnya. Perhitungan yang di anggap
benar hanya pada cawan yang terdapat pertumbuhan koloni diantara 30-300 cfu.

Nama :
Hari / tanggal :
Topik Praktikum :
Kesimpulan
Praktikan Dosen
298
Topik 4
Uji Kualitas Air
PENDAHULUAN
Air merupakan materi esensial bagi kehidupan makhluk hidup, karena makhluk hidup
memerlukan air untuk mempertahankan kelangsungan hidupnya. Secara umum fungsi air
dalam tubuh setiap mikroorganisme adalah untuk melarutkan senyawa organik,
menstabilkan suhu tubuh dan melangsungkan berbagai reaksi kimia tingkat seluler (Campbell
dkk., 2002).
TUJUAN
1. Mahasiswa mampu menyebutkan nama-nama alat-alat praktikum pengujian uji

kualitas air dengan baik dan benar
2. Mahasiswa mampu menyebutkan nama-nama bahan-bahan praktikum pengujian uji
kualitas air dengan baik dan benar
3. Mahasiswa mampu melakukan prosedur praktikum pengujian kualitas air
4. Agar mahasiswa dapat melakukan perhitungan sel mikroba secara hitung
5. Mahasiswa mampu menggunakan alat-alat praktikum pembiakan mikroorganisme
dengan teknik isolasi dengan baik dan benar
6. Mahasiswa mampu melakukan praktikum pembiakan mikroorganisme dengan metode
isolasi
7. Mahasiswa mampu melakukan pengambilan sampel biakan mikroorganisme dengan
teknik swab
8. Mahasiswa mampu melakukan pengambilan sampel biakan mikroorganisme dengan
penghancuran
9. Mahasiswa mampu melakukan pengambilan air dengan baik dan benar
10. Mahasiswa mampu melakukan pengambilan sampel dengan teknik pengenceran
(dilution method)
A. AIR
Air yang kita gunakan untuk keperluan sehari-hari mengandung berbagai jenis mikroba
(patogen dan nonpatogen) di dalamnya. Seiring dengan berkembangnya industri, penduduk
dan luasnya areal pemukiman, ketersediaan akan air bersih yang layak diminum semakin
langka. Salah satu hal yang perlu diperhatikan dalam menilai kelayakan / kualitas air untuk
menjadi air minum adalah jenis bakteri yang terkandung di dalamnya. Air adalah zat atau
materi atau unsur yang penting bagi semua bentuk kehidupan yang diketahui sampai saat ini
di bumi, tetapi tidak di planet lain. Air menutupi hampir 71% permukaan bumi. Terdapat 1,4
triliun kubik (330 juta mil³) tersedia di bumi. Air merupakan kebutuhan yang paling
299
dibutuhkan di dalam kehidupan manusia. Air merupakan pelarut universal sehingga air yang
ada di sekitar kita bukanlah air murni, melainkan mengandung zat-zat terlarut, sebagaimana
juga mikro organisme. Istilah mikroorganisme indikator sebagaimana digunakan dalam
analisis air, mengacu pada jenis mikroorganisme yang kehadirannya dalam air menyebabkan
bahwa air tersebut terpolusi dengan tinja atau hewan berdarah hangat. Artinya terdapat
peluang bagi organisme patogen yang terdapat pada saluran pencernaan, untuk masuk ke
dalam air dalam skala besar ( Pelczar, 1988).
Pemeriksaan air secara mikrobiologi sangat penting dilakukan karena air merupakan
substansi yang sangat penting dalam menunjang kehidupan mikroorganisme yang meliputi
pemeriksaan secara mikrobiologi baik secara kualitatif maupun kuantitatif dapat dipakai
sebagai pengukuran derajat pencemaran.
Pemeriksaan kualitas air minum dilakukan untuk mengetahui apakah air tersebut
mengandung bakteri Escherichia coli yang membahayakan bagi manusia, sehingga dapat
diketahui layak atau tidaknya digunakan dalam kehidupan sehari-hari. Banyaknya suatu
bakteri Escherichia coli dan coliform dalam air menunjukkan rendahnya kualitas air yang
dimiliki. Menurut Depkes semakin banyak bakteri Escheichia coli dan coliform, kualitas airnya
semakin menurun.
Beberapa ciri penting mikroorganisme indikator menurut Alaerts (1987) antara lain:
1. Terdapat dalam air tercemar dan tidak terdapat dalam air yang tidak tercemar.
2. Jumlah mikroorganisme indikator berkorelasi dengan kehadiran bakteri pathogen.
3. Mempunyai kemampuan hidup yang lebih lama daripada pathogen.
4. Mempunyai sifat yang mantap dan seragam.
5. Tidak berbahaya bagi manusia dan hewan.
6. Terdapat dalam jumlah yang lebih besar daripada patogen, sehingga mudah terdeteksi.
7. Mudah terdeteksi dengan teknik-teknik laboratorium yang sederhana
8. Sifat bakteri ada yang menguntungkan dan ada yang merugikan. Dikatakan
menguntungkan karena bakteri dapat melakukan proses pembusukan sampah agar
tidak menumpuk, sebagai antibiotic, indicator pencemaran, dan sebagainya.
Sedangkan dikatakan merugikan karena bakteri dapat menimbulkan penyakit untuk
beberapa spesies. Walaupun begitu, mikroba khususnya bakteri sengaja ditumbuhkan
pada sebuah medium (Campbell dkk, 2002).
9. Kualitas air didasarkan pada pengujian ada tidaknya coliform dalam air. Keberadaan
bakteri coli merupakan parameter yang dapat digunakan untuk menentukan kualitas
air yang aman, dimana kehadirannya dapat dijadikan indikator pencemaran air.
Ciri-ciri bakteri coliform adalah bersifat gram negatif, bentuk morfologi batang pendek,
dan dapat memfermentasi medium laktosa cair dengan membentuk asam dan gas (Pelczar,
1988). Menurut Fardiaz (1989), sifat-sifat bakteri koliform yang penting adalah :
1. Mampu tumbuh baik pada beberapa jenis substrat
2. Mempunyai sifat dapat mensintesis vitamin
3. Interval suhu pertumbuhan antara 100 0C – 460 0C
4. Mampu menghasilkan asam dan gas
300
Menurut Suraiman (2008), bakteri coliform dapat dibedakan menjadi dua bagian,
yaitu:
1. Coliform fekal, misalnya E. coli, merupakan bakteri yang berasal dari kotoran hewan
atau manusia.
2. Coliform non-fekal, misalnya E. aeroginosa, biasanya ditemukan pada hewan atau
tanaman yang telah mati.
Bakteri coliform dapat dibedakan atas dua kelompok yaitu coliform fecal misalnya
Escherichia coli dan coliform nonfecal misalnya Enterobacter aerogenes. E. coli merupakan
bakteri yang berasal dari kotoran hewan atau manusia, sedangkan E. aerogenes ditemukan
pada hewan atau tumbuhan yang telah mati. Adanya E.coli pada air minum menandakan air
tersebut telah terkontaminasi feses manusia dan mungkin juga mengandung patogen usus
(Dwijoseputro, 2005).
Uji kualitas air dilakukan untuk mengetahui kualitas dari air yang akan kita analisis.
Metode yang digunakan ialah MPN (Most Probable Number) atau APN (Angka Paling
Mungkin). MPN merupakan metode yang paling sederhana yang digunakan untuk menguji
kualitas air. Uji kualitas air terdiri dari beberapa uji yakni uji penduga, uji penguat dan uji
pelengkap. Air sangat perlu untuk diuji sebelum dikonsumsi atau diminum karena air dapat
menjadi sumber penyebaran penyakit (Fardiaz, 1989).
Uji pendugaan (presumptive test)
Gambar 2.9 Pengujian Sampel

Merupakan tes pendahuluan tentang ada tidaknya kehadiran bakteri koliform

berdasarkan terbentuknya asam dan gas disebabkan oleh fermentasi laktosa oleh bakteri
golongan koli. Terbentuknya asam dilihat dari kekeruhan pada media laktosa, dan gas yang
dihasilkan dapat dilihat dalam tabung Durham berupa gelembung udara (Dwijoseputro,
2005). Metode MPN terdiri dari tiga tahap, yaitu uji pendugaan (presumtive test), uji
penetapan (confirmed test), dan uji kelengkapan (completed test). Dalam uji tahap pertama,
keberadaan coliform masih dalam tingkat probabilitas rendah; masih dalam dugaan. Uji ini
mendeteksi sifat fermentatif coliform dalam sampel. Karena beberapa jenis bakteri selain
coliform juga memiliki sifat fermentatif, diperlukan uji konfirmasi untuk mengetes kembali
301
kebenaran adanya coliform dengan bantuan medium selektif diferensial. Uji kelengkapan
kembali meyakinkan hasil tes uji konfirmasi dengan mendeteksi sifat fermentatif dan
pengamatan mikroskop terhadap ciri-ciri coliform: berbentuk batang, Gram negatif, tidak-
berspora.
Output metode MPN adalah nilai MPN. Nilai MPN adalah perkiraan jumlah unit
tumbuh (growth unit) atau unit pembentuk-koloni (colony-forming unit) dalam sampel.
Namun, pada umumnya, nilai MPN juga diartikan sebagai perkiraan jumlah individu bakteri.
Satuan yang digunakan, umumnya per 100 mL atau per gram. Jadi misalnya terdapat nilai
MPN 10/g dalam sebuah sampel air, artinya dalam sampel air tersebut diperkirakan
setidaknya mengandung 10 coliform pada setiap gramnya. Makin kecil nilai MPN, maka air
tersebut makin tinggi kualitasnya, dan makin layak minum. Metode MPN memiliki limit
kepercayaan 95 persen sehingga pada setiap nilai MPN, terdapat jangkauan nilai MPN
terendah dan nilai MPN tertinggi.
Uji penduga merupakan uji positif untuk menentukan bakteri koliform. Media yang
digunakan ialah media lactose broth. Bakteri dapat menggunakan laktosa sebagai sumber
karbon, namun ada pula sebagian bakteri enteric yang tidak dapat melakukannya.
Uji dilakukan dalam medium fermentasi kaldu laktosa (laktosa broth) yang berisi tabung
Durham. Uji dinyatakan positif bila terbentuk gas pada tabung Durham, karena bakteri koli
mampu memfermentasikan laktosa dengan menghasilkan gas yang merupakan khasnya. Uji
pendugaan dapat menunjukkan kuantitas mikroorganisme koli yang merupakan jumlah
perkiraan terdekat (MPN : Most Probable Number).
Alat Bahan
1. Tabung reaksi 1. Aqua
2. Tabung durham 2. Club
3. Pipet ukur 3. Media lactose borth (LB)
4. Bunsen 4. Media Brilliant Green
5. Cawan petri Lactase Bilebroth (BGBL)
6. Rak tabung reaksi 5. Media Losin Methelin
Blue (EMB)
Langkah Kerja :
1. Sediakan 3 tabung berisi LBDS (9 ml tiap tabung) dan 6 tabung berisi LBSS (9 ml tiap
tabung) lengkap dengan tabung durham. Atur kesembilan tabung menjadi 3 seri
seperti di gambar.
2. Kocok botol yang berisi air sampel.
3. Pindahkan suspensi air sampel sebanyak 10 ml ke masing-masing tabung seri pertama
(3 tabung LBDS), secara aseptis
4. Pindahkan suspensi air sampel sebanyak 1 ml ke masing-masing tabung seri pertama (3
tabung LBSS), secara aseptis
302
5. Inkubasi semua tabung pada suhu 37oC selama 48 jam

6. Lihat tabung gas positif (asam dan as ; harus ada keduanya), lalu hitung tabung positif
untuk tiap seri. Tulis kombinasi tabung positif tiap seri (misal ; 3 2 1). Kombinasi angka
tersebut lalu dicocokkan dengan tabel MPN untuk seri 3 sehingga diperoleh jumlah
mikroba sebenarnya;
7. Misal didapatkan kombinasi jumlah tabung positif : 2 1 maka jumlah bakteri coliform
adalah 150 sel/100 ml.
Tabel 1 : Most Probable Number (MPN)
B. UJI PENGUAT
Hasil uji dugaan dilanjutkan dengan uji ketetapan. Dari tabung yang positif terbentuk
asam dan gas terutama pada masa inkubasi 1 x 24 jam, suspensi ditanamkan pada media
Eosin Methylen Biru Agar ( EMBA ) secara aseptik dengan menggunakan jarum inokulasi.
Koloni bakteri Escherichia coli tumbuh berwarna kehijauan dengan kilat metalik atau koloni
berwarna merah muda dengan lendir untuk kelompok koliform lainnya.
Konfirmasi dari uji pendugaan perlu dilakukan, karena nilai positif (gas) dari uji pertama
dapat juga merupakan reaksi dari bakteri non koli yang bukan indicator pencemar fekal. Uji
penentu memerlukan medium selektif atau diferensial. Bila pada tahap ini di dalam kultur uji
masih terbentuk gas, maka sampel air dinyatakan tidak layak minum (Campbell dkk., 2002).
303
C. UJI PELENGKAP
Uji ini merupakan analisis akhir dari sampel air untuk mendeteksi keberadaan bakteri
koli fekal. Metode yang digunakan adalah pengecatan Gram terhadap bakteri yang muncul
atau tumbuh pada media EMB agar pada uji penentu. Bila karakter koloni berwarna hijau
metalik dan hasil pengamatan dengan mikroskop menunjukkan bakteri berbentuk batang
tersebut adalah E. coli dan uji pelengkap bernilai positif (Dwijoseputro, 2005).
Uji pelengkap untuk menentukan bakteri Escherichia coli. Dari koloni yang berwarna pada uji
penguat diinokulasikan ke dalam medium Lactose Broth dan medium agar miring Nutrient
Agar (NA), dengan jarum inokulasi secara aseptik. Dari koloni yang berwarna pada uji
ketetapan diinokulasikan ke dalam medium kaldu laktosa dan medium agar miring Nutrient
Agar ( NA ), dengan jarum inokulasi secara aseptik.
Diinkubasi pada suhu 37oC selama 1 x 24 jam. Bila hasilnya positif terbentuk asam
dan gas pada Lactose Broth, maka sampel positif mengandung bakteri Escherichia coli. Dari
media agar miring NA dibuat pewarnaan Gram dimana bakteri Escherichia coli merupakan
Gram negatif berbentuk batang pendek. Penentuan coliform fekal menjadi indikator
pencemaran dikarenakan jumlah koloninya pasti berkorelasi positif dengan keberadaan
bakteri patogen. Selain itu, mendeteksi Coliform jauh lebih murah, cepat, dan sederhana
daripada mendeteksi bakteri patogenik lain. Jadi, coliform adalah indikator kualitas air.
Makin sedikit kandungan coliform, artinya, kualitas air semakin baik (Fardiaz, 1989).
Alat dan Bahan

Uji penegasan
1. Siapkan tabung kultur yang masing-masing berisi 10 ml media cair BGLB steril yang
sudah dilengkapi dengan tabung durham.
2. Aturlah letaknya pad arak dengan tabung dan masing-masing beri kode yang sesui
dengan kode tabung yang positif pada uji pendugaan misalnya A1, A2, A3, B1, B2, B3,
C1, C2, C3 sehingga jumlahnya sama dengan jumlah tabung yang positif saja.
3. Tuangkan air sampel yang sudah diinkubasi dalam media kultur laktosa mengunakan
pipet steril masing-masing sebanyak 1 ml ke dalam tabung yang positif.
4. Inkubasi tabung kultur yang sudah diperlukan pada suhu C selama1x24 jam.
5. Amati adanya gelembung udara di dalam tabung durham. Catatlah code tabung yang
positif mengeluarkan gas. Mikroba penghasil gas yang tumbuh pada tabung adalah
kelompok mikroba yang mampu memfermentasikan laktosa dan tahan terhadap suhu
tinggi C), mikroba ini disebut kelompok bakteri coliform fekal.
Uji penguat
Uji penguat dapat dilakukan denga mendeteksi adanya bakteri E.coli, caranya ialah :
304
Langkah-langkah:
1. Inokulasi sampel perlakukan dari tabung yang positif pad uji penegasan pada sebanyak
satu ose ke permukaan media EMB secara zig zag inkubasi 37 C selam 1×24 jam.
2. Amati pertumbuhan koloni pada media EMB. Koloni yang menampakkan adanya kilau
metalik adalah koloni bakteri E.coli
3. Selanjutnya dapat dipastikan lagi dengan cara mengamati inolkulum dari koloni
tersebut secara langsung dengan mikroscop.
4. Buatlah sedian yang diwarnai secara gram, kemudian namati di bawah mikroskop.
Bakteri E.coli akan memperlihatkan sebagai bakteri berbentuk batang, gram negative.
5. Setelah semua pengujian selesai tentukanlah nilai MPN. Coliform-nya berdasarkan
table MPN pada lampiran. Nilai MPN ditentukan berdasarkan jumlah tabung yang
positif dari perlakuan, dan dihitung = MPN table x 1/pengenceran tengah.

Nama :
Hari / tanggal :
Topik Praktikum :
Kesimpulan
Praktikan Dosen
305
Daftar Pustaka
aaaaaaSociety of Chemistry
Anonim, 2006. Lingkungan Pertumbuhan Mikroba
Brantas Pada Musim Kemarau. Jurusan Biologi FMIPA Universitas Brawijaya. Malang.
Bukle, KA., 1987, Ilmu pangan, Universitas Jakarta: Jakarta.
Makassar.
Ralstonia solanaceareum Penyebab Penyakit Layu pada Bakteri pada
Sumantri, Debby M, dkk., 2009, Diktat Penuntun Praktikum Mikrobiologi Pangan, Universitas
Padjajaran, bandung.
306
BAB VII
PEWARNAAN BAKTERI
PENDAHULUAN
Bakteri mempunyai morfologi, struktur dan sifat-sifat yang khas. Bakteri merupakan
mikroorganisme yang berukuran mikroskopik. Selain mikroskopik, bakteri juga hampir tidak
berwarna atau transparan dan kontras dengan air. Sehingga melihat dan mengamati bakteri
dalam kedaan hidup sangat sulit. Untuk mengatasi hal tersebut maka dikembangkan suatu
teknik pewarnaan sel bakteri. Ini merupakan salah satu cara yang paling utama dalam
penelitian-penelitian mikrobiologi. Hal itu untuk mempermudah proses identifikasi bakteri.
DESKRIPSIKAN TENTANG BAHASAN PADA BAB INI
Untuk mengamati bentuk atau ciri-ciri suatu mikroba menggunakan mikroskop dapat
digunakan dua cara yaitu mengamati sel mikroba yang masih hidup tanpa diwarnai dan
mengamati sel mikroba yang telah mati dengan diwarnai. Untuk lebih mudah dilihat
sebaiknya bakteri diwarnai dengan zat warna, beberapa zat yang digunakan untuk mewarnai
bakteri juga dapat digunakan untuk mengamati struktur bagian dalam sel. Dengan adanya
pewarnaan terutama bakteri yang mempunyai sel dengan ukuran yang retif kecil akan lebih
mudah terlihat di bawah mikroskop dengan menggunakan lensa objektif minyak imersi yang
mempunyai tingkat pembesaran yang relatif tinggi. Berbagai macam tipe morfologi bakteri
(kokus, basil, spirilum, dan sebagainya) dapat dibedakan dengan menggunakan pewarna
sederhana.
Istilah ”pewarna sederhana” dapat diartikan dalam mewarnai sel-sel bakteri hanya
digunakan satu macam zat warna saja. Kebanyakan bakteri mudah bereaksi dengan
pewarna-pewarna sederhana karena sitoplasmanya bersifat basofilik (suka akan basa)
sedangkan zat-zat warna yang digunakan untuk pewarnaan sederhana umumnya bersifat
alkalin (komponen kromoforiknya bermuatan positif). Faktor-faktor yang mempengaruhi
pewarnaan bakteri yaitu fiksasi, peluntur warna , substrat, intensifikasi pewarnaan dan
penggunaan zat warna penutup. Suatu preparat yang sudah meresap suatu zat warna,
kemudian dicuci dengan asam encer maka semua zat warna terhapus. sebaliknya terdapat
juga preparat yang tahan terhadap asam encer. Bakteri-bakteri seperti ini dinamakan bakteri
tahan asam, dan hal ini merupakan ciri yang khas bagi suatu spesies.
Untuk mengidentifikasi suatu biakan murni bakteri hasil isolasi mula-mula diamati
morfologi sel secara mikroskopik melalui pengecatan atau pewarnaan, salah satunya adalah
dengan pewarnaan gram. Pewarnaan gram merupakan salah satu prosedur yang paling
banyak digunakan untuk mencirikan banyak bakteri. Dari pewarnaan gram dapat diketahui
morfologi sel antara lain sifat gram, bentuk sel, dan penataan sel. Pewarnaan gram atau
metode gram adalah suatu metode empiris untuk membedakan spesies bakteri menjadi dua
307
kelompok besar, Gram positif dan gram negatif, berdasarkan sifat kimia dan fisika dinding sel
mereka, metode ini diberi nama berdasarkan penemunya, ilmuwan Denmark Hans Christian
gram 1884.
Pewarnaan Gram dibagi menjadi dua yaitu pewarnaan majemuk karena menggunakan
lebih dari satu macam zat warna. Dan pewarnaan diferensial karena pewarnaan ini mampu
mendiferensiasi atau membedakan bakteri, sehingga bakteri dapat digolongkan menjadi dua
yaitu Gram negatif dan Gram positif.
Prinsip dasar dari pewarnaan ini adalah adanya ikatan ion antara komponen seluler
dari bakteri dengan senyawa aktif dari pewarnaan yang disebut kromogen. Terjadi ikatan ion
karena adanya muatan listrik baik pada komponen seluler maupun pada pewarnaan.
Berdasarkan adanya muatan ini maka dapat dibedakan pewarna asam dan pewarna basa.
Teknik Pewarnaan bukan pekerjaan yang sulit tapi perlu ketelitian dan kecermatan bekerja
serta mengikuti aturan dasar yang berlaku. Oleh karena itu yang melatarbelakangi praktek ini
yaitu untuk mengetahui teknik pewarnaan mikroorganisme sehingga mempermudah dalam
melihat bagian-bagian bakteri.
1. Mahasiswa dapat memahami mengenai pewarnaan bakteri

2. Mahasiswa dapat memahami mengenai pewarnaan sederhana
3. Mahasiswa dapat memahami mengenai pewarnaan diferensial
A. IDENTIFIKASI BAKTERI DENGAN PEWARNAAN
Identifikasi bakteri pada umumnya bakteri bersifat tembus cahaya, hal ini disebabkan
karena banyak bakteri yang tidak mempunyai zat warna (Waluyo, 2007) . Salah satu cara
untuk mengamati bentuk sel bakteri sehingga mudah untuk diidentifikasi ialah dengan
metode pengecatan atau pewarnaan. Hal tersebut juga berfungsi untuk mengetahui sifat
fisiologisnya yaitu mengetahui reaksi dinding sel bakteri melalui serangkaian pengecatan.
Pewarnaan atau pengecatan terhadap mikroba banyak dilakukan baik secara langsung
(bersama bahan yang ada) ataupun secara tidak langsung (melalui biakan murni).
Tujuan dari pewarnaan tersebut ialah untuk :
1. Mempermudah melihat bentuk jasad, baik bakteri, ragi, ataupun fungi.
2. Memperjelas ukuran dan bentuk jasad.
3. Melihat struktur luar dan kalau memungkinkan juga struktur dalam jasad.
4. Melihat reaksi jasad terhadap pewarna yang diberikan sehingga sifat-sifat fisik dan
kimia yang ada akan dapat diketahui. (Suriawiria, 1999)
Ada tiga macam prosedur pewarnaan, yaitu pewarnaan sederhana (simple stain),
pewarnaan diferensial (differential strain), dan pewarnaan khusus (special strain)
1. Pada pewarnaan sederhana hanya digunakan satu macam zat warna untuk
meningkatkan kontras antara mikroorganisme dan sekelilingnya. Prosedur Pewarnaan
308
sederhana mudah dan cepat, sehingga pewarnaan ini sering digunakan untuk melihat
bentuk ukuran dan penataan pada mikroorganisme bakteri pada bakteri dikenal
bentuk yang bulat (coccus), batang (basil), dan spiral (Lay, 1994).
2. Pewarnaan bakteri yang menggunakan lebih dari satu zat warna seperti pewarnaan
gram dan pewarnaan tahan asam.
3. Pewarnaan gram adalah salah satu teknik pewarnaan diferensial yang paling penting
dan paling luas digunakan untuk bakteri. Bakteri yang diwarnai dengan metode gram
ini dibagi menjadi dua kelompok, salah satu diantaranya bakteri gram positif dan
bakteri gram negatif (Pelczar & Chan, 1986).
Pewarnaan Gram dilakukan untuk mengelompokkan bakteri menjadi 2 yaitu bakteri

Gram positif dan bakteri Gram negative. Pada pewarnaan Gram, hasil yang didapat akan
ditentukan dari komposisi dinding sel bakteri. Pada pewarnaan Gram ini, reagen yang
digunakan ada 4 jenis, yaitu Kristal violet, iodine, alkohol dan safranin. Bakteri Gram positif
akan mempertahankan warna ungu dari kristalviolet sehingga ketika diamati dengan
mikroskop akan menunjukkan warna ungu sedangkan bakteri Gram negative tidak dapat
mempertahankan warna ungu dari Kristal violet tetapi zat warna safranin dapat terserap
pada dinding sel sehingga akan memperlihatkan warna merah. Uji biokimia untuk gram
negative adalah uji oksidasi sedangkan untuk gram positif dapat dilakukan pewarnaan
endospora (Pratita, 2012) .
Pewarnaan gram merupakan salah satu metode untuk mengetahui morfologi bakteri,
yang bermanfaat untuk mengetahui apakah biakan bakteri masuk dalam golongan gram
positif atau gram negative. Bakteri gram negative memiliki ciri – cirri tidak dapat menahan
zat warna setelah dicuci dengan alkohol 95 % selama 5 sampai 10 detik (Samsundari, 2006)
Salah satu pewarnaan yang sering digunakan untuk mengindentifikasi bakteri adalah
pewarnaan Gram. Berdasarkan pewarnaan Gram, bakteri dibagi menjadi dua golongan,
tergantung dari reaksi dinding sel terhadap tinta safranin atau Kristal violet. Bakteri yang
tetap berwarna ungu dengan pewarnaan oleh Kristal violet disebut bakteri Gram positif,
sedangkan bakteri yang warna ungunya hilang jika dibilas dengan alkohol, tetapi tetap
berwarna merah muda karena menahan warna merah safranin disebut bakteri Gram
negative ( James, 2008 ) .
Pewarnaan Gram digunakan untuk mengetahui morfologi sel bakteri serta untuk
membedakan bakteri gram positif dan gram negative. Perbedaan warna pada bakteri gram
positif dan gram negative menunjukkan bahwa adanya perbedaan struktur dinding sel antara
kedua jenis bakteri tersebut. Bakteri gram positif memiliki struktur dinding sel dengan
kandungan peptidoglikan yang tebal sedangkan bakteri gram negative memiliki struktur
dinding sel dengan kandungan lipid yang tinggi (Fitri, 2011).
Ditinjau dari komponen penyusun dinding sel bakteri gram positif relative lebih sederhana
berbanding bakteri gram negative yaitu terdiri dari dua sampai tiga lapis membrane
sitoplasma yang tersusun dari asa teikhik dan asam teikhouronik berupa polimer yang larut
dalam air, sedangkan dinding sel bakteri negative lebih kompleks dan lebih tebal, tersusun
dari peptidoglikon, lipoprotein dan lipopolisakarida, sehingga dinding sel bakteri gram positif
309
lebih permeable terhadap senyawa yang bersifat hidrofil dibandingkan sel bakteri gram
negative (Fatimah, 2006).
Bakteri gram positif memiliki dinding sel yang lebih sederhana, dengan jumlah
peptidoglikan yang relative banyak. Dinding sel bakteri gram negative memiliki peptidoglikan
yang lebih sedikit dan secara structural lebih kompleks. Membrane bagian luar pada dinding
sel gram negative mengandung lipopolisakarida, yaitu karbohidrat yang terikat dengan lipid.
Diantara bakteri patogen, yang menyebabkan penyakit, spesies gram negative umumnya
lebih berbahaya dibandingkan dengan spesies gram positif ( Campbell, 2003 ).
Kelompok bakteri gram negative ditandai dengan sel bakteri yang berwarna merah saat
pengamatan secara mikroskopik. Warna merah tersebut disebabkan karena hilangnya
pewarna Kristal violet pada waktu dekolorisasi dengan alkohol kemudian sel bakteri
menyerap pewarna merah yaitu safranin. Bakteri gram negative mengandung lipid lebih
rendah sehingga dinding sel bakteri akan lebih mudah terdehidrasi akibat perlakuan dengan
alkohol. Dinding sel yang terdehidrasi menyebabkan daya permeabilitasnya berkurang
sehingga zat warna ungu Kristal keluar dari sel kemudian sel akan menyerap safranin
(Jayanti, 2010).
Respon hambatan mikroba gram positif lebih kuat dibandingkan mikroba gram
negative. Hal ini disebabkan oleh perbedaan komponen penyusun dinding sel antara
mikroba gram positif dan gram negative. Dinding sel mikroba gram positif banyak
mengandung teikoronat serta molekul polisakarida. Komponen kimia ini melindungi sel dari
kegiatan lisis enzim, sedangkan zat – zat lain menentukan reaksi sel pada pengecatan gram
dan ada pula yang menarik dan mengikat bakteriofage (Purwani, 2009).
Pengecatan gram dilakukan pada kultur bakteri umur 24 jam yang ditumbuhkan pada
medium MRS padat. Bakteri gram positif akan memberikan warna ungu ketika diberi cat
gram. Warna ungu tersebut terjadi karena dinding sel bakteri mengikat cat Kristal violet yang
diperkuat oleh iodine dan Kristal violet tersebut tidak akan hilang pada waktu diberi cat
peluntur sehingga tidak terpengaruh pada saat diberi cat penutup yang berwarna merah
(Romadhon, 2012).
Pewarnaan dilakukan dengan membuat bekasan isolate digelas objek, kemudian
diwarnai dengan larutan Kristal violet dan yodium secara bergantian selama beberapa menit
dan dicuci dengan aquadest, selanjutnya dicuci dengan alkohol dan ditetesi dengan larutan
cat penutup safranin. Pengamatan dilakukan dengan menggunakan mikroskop, bakteri gram
positif akan Nampak berwarna ungu, sedangkan gram negative berwarna merah
(Purwohadisantoso, 2009).
Pengecatan Gram merupakan salah satu pewarnaan yang paling sering digunakan.
Preparatus bakteri dibuat dengan cara, mencampurkan satu usa biak bakteri dari PAD
dengan NaCl fisiologis yang telah diteteskan pada gelas objek, kemudian dibuat apus setipis
mungkin, dikeringkan dan difikasi diatas lampu spiritus. Preparat apus ditetesi pewarna
pertama dengan karbol gentian violet selama 2 menit, warna dibuang, ditetesi lugol selama 1
menit, kemudian preparat apus dilunturkan dengan alkohol 95 % selama 1 menit.
Selanjutnya alkohol dibuang, preparat dicuci dengan aquadest dan diberi pewarna kedua
dengan fuschine selama 2 menit. Warna kemudian dibuang dan dibersihkan dengan
310
akuades, dikeringkan dan diamati morfologi sel, serta warnanya dibawah mikroskop (Dewi,
2013).
Pewarnaan Ziehl Neelsen. Larutan carbol fuchsin 0,3% dituang pada seluruh
permukaan sediaan, kemudian dipanaskan diatas nyala api sampai keluar asap tetapi tidak
sampai mendidih atau kering selama 5 menit. Sediaan kemudian dibiarkan dingin selama 5-7
menit lalu kelebihan zat warna dibuang dan dicuci dengan air yang mengalir perlahan.
Setelah itu larutan asam alkohol 3% (hydrochloric acid-ethanol) dituang pada sediaan dan
dibiarkan 2- 4 menit kemudian dicuci dengan air mengalir selama 1-3 menit, kelebihan
larutan dibuang. Larutan methylene blue 0,1% dituang sampai menutup seluruh permukaan,
dibiarkan 1 menit lalu larutan dibuang dan dicuci dengan air mengalir (Karuniawati, 2005).
Hasil pewarnaan Gram menunjukkan bahwa isolat – isolate yang diduga S. aureus
secara morfologi ternyata benar – benar termasuk Gram positif karena sel bakterinya
berwarna ungu. Karakteristik isolate S. aureus pada media menunjukkan bentuk koloni bulat
besar, bulat kecil, berkelompok seperti buah anggur dan beberapa ireguler dengan warna
putih dan kuning terdapat zona bening hemolisis (Prasetyo, 2014).
Bakteri Gram negative lainnya yang ditemukan adalah Enterobacter aerogenes dan
E.coli. bakteri ini merupakan flora normal usus, bakteri tersebut ditemukan diudara bersifat
sementara. Jenis bakteri Gram negative yang mengkontaminasi udara dan dapat
menyebabkan bahaya pada saluran pernapasan adalah klebsiella pneumonia dan
Pseudomonas aeruginosa (Imaniar, 2010).
1. Definisi Bakteri
Bakteri adalah mikroorganisme yang sangat sederhana yang tidak bernukleus dan
sifatnya berbeda dengan organisme yang mempunyai inti sel. selain itu bakteri merupakan
organisme yang sangat kecil (yang berukuran mikroscopis) akibatnya pada mikroskop tidak
tampak jelas dan sukar untuk melihat morfologinya maka dari itu dilakukan pewarnaan
bakteri yang biasa disebut pengenceran bakteri. pada umumnya larutan-larutan zat warna
yang digunakan adalah larutan encer yang lebih dari satu persen.
2. Pewarnaan Bakteri
Pewarnaan bakteri pada umumnya bertujuan untuk mempermudah dalam
pengamatan morfologi bakteri dengan bantuan mikroskop. Bakteri umumnya tidak berwarna
dan hampir tidak terlihat karena kurang kontras dengan air dimana mereka mungkin berada.
Pewarnaan sangat dibutuhkan untuk melihat bakteri dengan sangat jelas baik untuk
pengamatan intraseluler maupun morfologi keseluruhan. Pewarnaan terhadap bakteri
secara garis besar, dibagi menjadi dua, yaitu:
3. Pewarnaan bakteri hidup

Pewarnaan bakteri hidup dilakukan dengan menggunakan bahan warna yang tidak
toksis tetapi jarang dikerjakan karena bakteri hidup sukar menyerap warna. Pewarnaan
bakteri hidup dilakukan untuk melihat pergerakan bakteri, serta pemeriksaannya dilakukan
dengan menggunakan tetes gantung (hanging drop)
311
4. Pewarnaan bakteri mati

Pewarnaan terhadap bakteri yang telah dimatikan disebut fixed state.
Pewarnaan bakteri mati bertujuan untuk melihat struktur luar bahkan struktur dalam
bakteri, memperjelas ukuran bakteri dan melihat reaksi bakteri terhadap pewarna yang
diberikan sehingga dapat diketahui sifat-sifat fisik dan kimia dari bakteri tersebut.
Mari kita mulai belajar!!
312
Topik 1
Pewarnaan Sederhana
PENGANTAR
Teknik pewarnaan warna pada bakteri dapat dibedakan menjadi empat macam yaitu
pengecatan sederhana, pengecatan negatif, pengecatan diferensial dan pengecatan
struktural. Pemberian warna pada bakteri atau jasad-jasad renik lain dengan menggunakan
larutan tunggal suatu pewarna pada lapisan tipis, atau olesan, yang sudah difiksasi,
dinamakan pewarnaan sederhana. Prosedur pewarnaan yang menampilkan perbedaan
diantara sel-sel mikroba atau bagian-bagian sel mikroba disebut teknik pewarnaan
diferensial. Sedangkan pengecatan struktural hanya bisa mewarnai satu bagian dari sel
sehingga dapat membedakan bagian-bagian dari sel. Termasuk dalam pengecatan ini adalah
pengectan endospora, flagela dan pengecatan kapsul.
1. Mahasiswa mampu menyebutkan nama-nama alat-alat praktikum pewarnaan

sederhana dengan baik dan benar
2. Mahasiswa mampu menyebutkan nama-nama bahan praktikum pewarnaan
sederhana dengan baik dan benar
3. Mahasiswa mampu melakukan praktikum pewarnaan sederhana untuk
mengidentifikasi bakteri gram negatif
4. Mahasiswa mampu melakukan praktikum pewarnaan sederhana untuk
mengidentifikasi bakteri gram positif
5. Mahasiswa mampu melakukan praktikum pewarnaan sederhana dengan untuk
mengidentifikasi bakteri tahan asam (BTA)
A. PEWARNAAN
Pewarnaan sederhana merupakan teknik pewarnaan yang paling banyak digunakan.

Melihat dan mengamati bakteri dalam keadaan hidup sangat sulit, karena selain bakteri itu
tidak berwarna juga tranparan dan sangat kecil. Untuk mengatasi hal tersebut maka
dikembangkan suatu teknik pewarnaan sel bakteri, sehingga sel dapat terlihat jelas dan
mudah diamat. Oleh karena itu teknik pewarnaan sel bakteri ini merupakan salah satu cara
yang paling utama dalam penelitian-penelitian mikrobiologi.
Pewarnaan sederhana adalah pewarnaan yang menggunakan pewarna tunggal.
Pewarna tunggal yang biasanya digunakan dalam pewarnaan sederhana adalah Methylene
Blue, Basic Fuchsin, dan Crystal Violet . Semua pewarna tersebut dapat bekerja dengan baik
pada bakteri karena bersifat basa dan alkalin (kromoforiknya bermuatan positif), sedangkan
sitoplasma bakteri bersifat basofilik (suka terhadap basa) sehingga terjadilah gaya tarik
313
antara komponen kromofor pada pewarna dengan sel bakteri, hal tersebut menyebabkan
bakteri dapat menyerap pewarna dengan baik. Pewarnaan sederhana bertujuan untuk
memberikan kontras antara bakteri dan latar belakang. Pewarnaan sederhana dilakukan
ketika kita ingin mengetahui informasi tentang bentuk dan ukuran sel bakteri. Gambar
pewarnaan sederhana yang dilihat dibawah mikroskop.
Prinsip dasar dari pewarnaan ini adalah adanya ikatan ion antara komponen selular
dari bakteri dengan senyawa aktif dari pewarna yang disebut kromogen. Terjadi ikatan ion
karena adanya muatan listrik baik pada komponen seluler maupun pada pewarna.
Berdasarkan adanya muatan ini maka dapat dibedakan asam dan pewarna basa.
Pewarna asam dapat terjadi karena bila senyawa pewarna bermuatan negatif. Dalam
kondisi pH mendekati netral dinding sel bakteri cenderung bermuatan negatif, sehingga
pewarna asam yang bermuatan negatif akan ditolak oleh dinding sel, maka sel tidak
berwarna. Pewarna asam ini disebut pewarna negatif. Contoh pewarna asam misalnya: tinta
cina, larutan nigrosin, asam pikrat, eosin, dll.
Pewarna basa bisa terjadi bila senyawa pewarna bersifat positif, sehingga akan diikat
oleh dinding sel bakteri dan sel bakteri ini jadi berwarna dan terlihat. Contoh dari pewarna
basa misalnya metilen biru, kristal violet, safranin, dan lain-lain. Teknik pewarnaan asam
basa ini hanya menggunakan satu jenis senyawa pewarna, teknik ini disebut pewarna
sederhana. Pewarnaan sederhana ini diperlukan untuk mengamati morfologi, baik
bentuknya maupun susunan sel. Teknik pewarnaan yang lain adalah pewarnaan diferensial,
yang menggunakan senyawa pewarna yang lebih dari satu jenis. Diperlukan untuk
mengelompokkan bakteri misalnya, bakteri gram positif dan gram negatif atau bakteri tahan
asam dan tidak tahan asam. Juga diperlukan untuk mengamati struktur bakteri seperti
flagela, kapsula, spora, dan nukleus.
Teknik pewarnaan bukan pekerjaan yang sulit tetapi perlu ketelitian dan kecermatan
bekerja serta mengikuti aturan dasar yang berlaku sebagai berikut:
a. Mempersiapkan kaca objek. Kaca objek ini harus bersih dan bebas lemak, untuk
membuat apusan dari bakteri yang diwarnai. Mempersiapkan apusan, apusan yang
baik adalah yang tipis dan kering, terlihat seperti lapisan yang tipis. Apusan ini berasal
dari biakan cair atau padat. Biakan cair suspensi sel sebanyak satu atau dua mata ose
dan diletakkan ke kaca objek. Lalu diapuskan pada kaca objek, biarkan mengering di
udara atau diatas api kecil dengan jarak 25 cm.
b. Biakan padat. Bakteri yang dikulturkan pada medium padat tidak dapat langsung
dibuat apusan seperti dari biakan cair, tetapi harus diencerkan dahulu. Letakkan
setetes air pada kaca objek, lalu dengan jarum inokulasi ambil bakteri dari biakan
padat, letakkan pada tetesan air dan apusan. Biarkan mengering di udara. Fiksasi
dengan pemanasan. Apusan bakteri pada kaca objek dapat dilakukan diantaranya
dengan cara memanaskan diatas api.
c. Struktur di dalam sel pada tempat-tempat yang dibentuk oleh spesies ini, disebut
endospora. Endospora dapat bertahan hidup dalam keadaan kekurangan nutrien,
tahan terhadap panas, kekeringan, radiasi UV serta bahan-bahan kimia.
314
d. Ketahanan tersebut disebabkan oleh adanya selubung spora yang tebal dan keras.
Sifat-sifat ini menyebabkan dibutuhkannya perlakuan yang keras untuk mewarnainya.
Hanya bila diperlukan panas yang cukup, pewarna yang sesuai dapat menembus
endospora. Tetapa sekali pewarna memasuki endospora, sukar untuk dihilangkan.
Ukuran dan letak endospora di dalam sel merupakan ciri-ciri yang digunakan untuk
membedakan spesies-spesies bakteri yang membentuknya.
Faktor yang mempengaruhi pewarnaan bakteri yaitu fiksasi, peluntur warna, subtrat,
intensifikasi pewarnaan dan penggunaan zat warna penutup. Suatu preparat yang sudah
suatu zat warna, kemudian dicuci dengan asam encer. Bakteri-bakteri seperti ini dinamakan
bakteri tahan asam, dan hal ini merupakan ciri yang khas bagi suatu spesies.
Mikroorganisme yang ada di alam ini mempunyai morfologi, struktur, dan sifat-sifat
yang khas, begitu pula dengan bakteri. Bakteri yang hidup hampir tidak berwarna dan
kontras dengan air, dimana sel-sel bakteri tersebut di suspensikan. Salah satu cara untuk
mengamati bentuk sel bakteri sehingga mudah untuk diidentifikasi adalah dengan metode
pengecatan atau pewarnaan, hal tersebut juga berfungsi untuk mengetahui sifat
fisiologisnya yaitu mengetahui reaksi dinding sel bakteri melalui serangkain pengecetan.
(Jimmo, 2008)
Sel bakteri dapat diamati dengan jelas jika menggunakan mikroskop dengan
perbesaran 100 x 10 yang ditambah minyak emersi. Jika dibuat preparat ulas tanpa
pewarnaan, sel bakteri sulit terlihat. Pewarnaan bertujuan untuk memperjelas sel bakteri
dengan menempelkan zat warna ke permukaan sel bakteri.Zat warna dapat mengabsorbsi
dan membiaskan cahaya, sehingga kontras sel bakteri dengan sekelilingnya ditingkatkan.Zat
warna yang digunakan bersifat asam atau basa. Pada zat warna basa, bagian yang berperan
dalam memberikan warna disebut kromofor dan mempunyai muatan positif.
Sebaliknya pada zat warna asam bagian yang berperan memberikan zat warna
memiliki muatan negatif. Zat warna basa lebih banyak digunakan karena muatan negatif
banyak ditemukan pada permukaan sel. Contoh zat warna asam antara lain cristal violet,
methylen blue, safranin, Base Fuchsin, Malachite Green, dll. Sedangkan zat warna basa
antara lain Eosin, Congo Red dll ( Irawan, 2008).
Kebanyakan bakteri mudah bereaksi dengan pewarnaan-pewarnaan sederhana karena
sitoplasmanya bersifat basofilik (suka akan basa) sedangkan zat-zat warna yang digunakan
untuk pewarnaan sederhana umumnya bersifat alkalin (komponen kromotofiknya
bermuatan positif). Faktor-faktor yang mempengaruhi pewarnaan bakteri yaitu fiksasi,
peluntur warna, subtrat, intensifikasi, pewarnaan dan penggunaan warna penutup. Suatu
preparat yang sudah menyerap zat warna, kemudian dicuci dengan asam encer maka zat
warna terhapus. Sebaliknya terdapat juga preparat yang tahan terhadap asam encer.
Bakteri-bakteri ini disebut bakteri tahan asam, dan ini merupakan ciri khas bagi suatu spesies
(dwidjoeseputro, 1994)
Langkah-langkah utama dalam persiapan spesimen mikroba untuk pemeriksaan
mikroskopis adalah :
a) Penempatan olesan atau lapisan spesiemen pada kaca objek.
b) Fiksasi olesan pada kaca objek
c) Aplikasi pewarnaan tunggal (pewarnaan sederhana) atau serangkaian larutan pewarna
atau reagen (Pelczar,1986)
315
Pada umumnya, olesan bakteri terwarnai mengungkapkan ukuran, bentuk, susunan

dan adanya struktur internal seperti spora dan butiran zat pewarna khusus diperlukan untuk
melihat bentuk kapsul atau pun flagella, dan hal-hal terperinci tertentu di dalam sel. Zat
pewarna adalah garam yang terdiri atas ion positif dan ion negatif, yang salah satu
diantaranya berwarna (Volk dan Whleer, 1998).
B. PROSEDUR KERJA PEWARNAAN BAKTERI
1. Pewarnaan Sederhana
a. Dibersihkan kaca preparat dan cover glass dengan menggunakan alkohol sampai bebas
lemak, lalu dibersihkan lagi dengan tisu. Difiksasi diatas nyala lampu bunsen.
b. Diambil secara aseptik satu ose suspensi bakteri dan diratakan diatas kaca preparat.
c. Dikeringkan kaca preparat dengan diangin-anginkan hingga terbentuk noda.
d. Difiksasi dengan dipanaskan diatas nyala lampu bunsen.
e. Didinginkan lalu diteteskan larutan zat warna crystal violet sebanyak 1 atau 2 tetes,
dan dibiarkan selama 1 atau 2 menit.
f. Dicuci dengan aquades sampai sisa-sisa zat warna tercuci seluruhnya.
g. Dikeringkan dengan diangin-anginkan.
h. Diamati dengan menggunakan mikroskop.
2. Pewarnaan Negatif
Pewarnaan Negatif adalah pewarnaan yang menggunakan pewarna asam seperti
Negrosin, Eosin, atau Tinta India sebagai pewarna utama. Pewarnaan negatif dilakukan pada
bakteri yang sukar diwarnai oleh pewarna sederhana seperti spirochaeta. Pewarnaan negatif
bertujuan untuk memberi warna gelap pada latar belakang dan tidak memberi warna pada
sel bakteri.
Hal tersebut dapat terjadi karena pada pewarnaan negatif, pewarna yang digunakan
adalah pewarna asam dan memiliki komponen kromoforik yang bermuatan negatif, yang
juga dimiliki oleh sitoplasma bakteri. Sehingga pewarna tidak dapat menembus atau
berpenetrasi ke dalam sel bakteri karena negatif charge pada permukaan sel bakteri. Pada
pewarnaan negatif ini, sel bakteri terlihat transparan (tembus pandang). Gambar pewarnaan
negative dilihat dari mikroskop
Cara kerja:
a. Dibersihkan object glass dan cover glass dengan menggunakan alkohol sampai bebas
lemak.
b. Difiksasi diatas nyala lampu bunsen.
c. Diambil secara aseptik satu ose suspensi bakteri dan diratakan diatas object glass.
d. Difiksasi dengan cara dipanaskan diatas nyala lampu bunsen.
e. Diteteskan larutan zat warna tinta cina diatas object glass hingga merata.
f. Dikeringkan dengan diangin-anginkan.
g. Diamati dengan menggunakan mikroskop.
316
Topik 2
Pewarnaan Diferensial
PENDAHULUAN
Pewarnaan diferensial adalah pewarnaan yang mampu mendiferensiasi atau

membedakan bakteri, sehingga bakteri dapat digolongkan menjadi dua yaitu Gram negatif
dan Gram positif. untuk membedakan antara pneumokokus dan bakteri Klebsiella
pneumoniae. Bakteri Gram-negatif adalah bakteri yang tidak mempertahankan zat warna
metil ungu pada metode pewarnaan Gram. Bakteri gram positif akan mempertahankan zat
warna metil ungu gelap setelah dicuci dengan alkohol, sementara bakteri gram negatif tidak.
Pada uji pewarnaan Gram, suatu pewarna penimbal (counterstain) ditambahkan setelah
metil ungu, yang membuat semua bakteri gram negatif menjadi berwarna merah atau merah
muda. Pengujian ini berguna untuk mengklasifikasikan kedua tipe bakteri ini berdasarkan
perbedaan struktur dinding sel mereka.
1. Mahasiswa mampu menyebutkan nama-nama alat-alat praktikum pewarnaan

diferensial dengan baik dan benar
2. Mahasiswa mampu menyebutkan nama-nama bahan praktikum pewarnaan diferensial
3. Mahasiswa mampu menggunakan alat-alat praktikum pewarnaan diferensial
4. Mahasiswa mampu melakukan praktikum pewarnaan diferensial dengan untuk
mengidentifikasi bakteri gram negatif
mengidentifikasi bakteri gram positif
mengidentifikasi bakteri tahan asam (BTA)
7. Mahasiswa mampu melakukan praktikum pewarnaan spora
A. PERWARNAAN GRAM
Pewarnaan Gram atau metode Gram adalah suatu metode empiris untuk membedakan
spesies bakteri menjadi dua kelompok besar, yakni gram positif dan gram negatif,
berdasarkan sifat kimia dan fisik dinding sel mereka. Metode ini diberi nama berdasarkan
penemunya, ilmuwan Denmark Hans Christian Gram (1853–1938) yang mengembangkan
teknik ini pada tahun 1884 untuk membedakan antara pneumokokus dan bakteri Klebsiella
pneumoniae. Bakteri Gram-negatif adalah bakteri yang tidak mempertahankan zat warna
metil ungu pada metode pewarnaan Gram. Bakteri gram positif akan mempertahankan zat
warna metil ungu gelap setelah dicuci dengan alkohol, sementara bakteri gram negatif tidak.
317
Pada uji pewarnaan Gram, suatu pewarna penimbal (counterstain) ditambahkan setelah
metil ungu, yang membuat semua bakteri gram negatif menjadi berwarna merah atau merah
muda. Pengujian ini berguna untuk mengklasifikasikan kedua tipe bakteri ini berdasarkan
perbedaan struktur dinding sel mereka.
1. Bakteri Gram Negatif

Bakteri gram negative adalah bakteri yang tidak mempertahankan zat warna metil
ungu pada metode pewarnaan Gram. Bakteri gram positif akan mempertahankan warna
ungu gelap setelah dicuci dengan alcohol, sementara bakteri gram negative tidak.
Bakteri gram negatif memiliki 3 lapisan dinding sel. Lapisan terluar yaitu lipoposakarida
(lipid) kemungkinan tercuci oleh alkohol, sehingga pada saat diwarnai dengan safranin akan
berwarna merah. Bakteri gram positif memiliki selapis dinding sel berupa peptidoglikan yang
tebal. Setelah pewarnaan dengan kristal violet, pori-pori dinding sel menyempit akibat
dekolorisasi oleh alkohol sehingga dinding sel tetap menahan warna biru (Fitria, 2009).
2. Bakteri Gram Positif

Bakteri gram positif adalah bakteri yang mempertahankan zat warna metil ungu
sewaktu proses pewarnaan Gram. Bakteri jenis ini akan berwarna biru atau ungu di bawah
mikroskop, sedangkan bakteri gram negative akan berwarna merah muda. Perbedaan
klasifikasi antara kedua jenis bakteri ini terutama didasarkan pada perbedaan struktur
dinding sel bakteri (Aditya,2010)
Bakteri gram positif menunjukkan warna biru atau ungu dengan pewarnaan ini,
sedangkan bakteri gram negatif menunjukkan warna merah. Perbedaan respon terhadap
mekanisme pewarnaan gram pada bakteri adalah didasarkan pada struktur dan komposisi
dinding sel bakteri. Bakteri gram positif mengandung protein dan gram negatif mengandung
lemak dalam presentase lebih tinggi dan dinding selnya tipis. Pemberian alkohol (etanol)
pada praktikum pewarnaan bakteri, menyebabkan terekstraksi lipid sehingga memperbesar
permeabilitas dinding sel. Pewarnaan safranin masuk ke dalam sel dan menyebabkan sel
menjadi berwarna merah pada bakteri gram negatif sedangkan pada bakteri gram positif
dinding selnya terdehidrasi dengan perlakuan alkohol, pori – pori mengkerut, daya rembes
dinding sel dan membran menurun sehingga pewarna safranin tidak dapat masuk sehingga
sel berwarna ungu, yang merupakan warna dari Kristal Violet.
318
Tabel 1 Perbedaan relatif sifat bakteri gram positif dan gram negatif.
Sifat Bakteri garam (+) Bakteri gram negatif (-)

Komposisi dinding sel Kandungan lipid rendah (1-4%) Kandungan lipid tinggi
Ketahanan terhadap penisilin Lebih sensitif Lebih tahan

Penghambatan oleh pewarna Lebih dihambat Kurang dihambat
basa (VK)
Kebutuhan nutrisi Kebanyakan spesies relatif Relatif sederhana
kompleks
Ketahanan terhadap Lebih tahan Kurang tahan
perlakuan fisik
Sumber: Gobel, Risco, B dkk. 2008
Adapun ilustrasi kondisi sel bakteri saat pewarnaan Gram tampak seperti pada
Gambar berikut :
Gambar 1. Ilustrasi Kondisi Sel Bakteri
Gambar 1 Ilustrasi kondisi sel bakteri saat pewarnaan Gram

Sumber : https://biobakteri.wordpress.com/2009/06/07/7-pewarnaan-gram-gram-positif-
dan-gram-negatif/ diunduh 4 sept 17
Perwarnaan Gram menggunakan Gram A (cat Kristal violet), Gram B (Lyugol iodine),
Gram C (etanol : aseton = 1:1), Gram D (cat safranin). Cat Gram A berwarna ungu (kristal
violet). Cat Gram A merupakan cat primer yang akan memberi warna mikroorganisme
target. Pada saat diberi cat ini, semua mikroorganisme akan berwarna ungu sesuai warna
cat. Komposisi cat A yaitu
Ø Kristal violet : 2 gram
Ø Alkohol 95% : 20 ml
Ø Aquadest : 80 ml
Ø Amonium oksalat : 0,8 gram
319
Cat Gram B berwarna coklat. Cat Gram B merupakan cat Mordan, yaitu cat atau bahan
kimia yang berfungsi memfiksasi cat primer yang diserap mikroorganisme target. Akibat
pemberian cat Gram B, maka pengikatan warna oleh bakteri akan lebih baik (lebih
kuat). Komposisi cat B yaitu :
Ø Iodium : 1 gram
Ø Kalium iodida : 2 gram
Ø Aquadest : 300ml
Gambar 2. Perwarnaan Gram

Cat Gram C tidak berwarna. Cat ini berfungsi untuk melunturkan cat sebelumnya.
Akibat pemberian cat C akan terjadi 2 kemungkinan : Mikroorganisme (bakteri) akan tetap
berwarna ungu, karena tahan terhadap alkohol. Ikatan antara cat dengan bakteri tidak
dilunturkan oleh alkohol. Bakteri yang bersifat demikian disebut bakteri Gram
positif dan Bakteri tidak akan berwarna, karena tidak tahan terhadap alkohol. Ikatan antara
cat dengan bakteri dilunturkan oleh alkohol. Bakteri yang bersifat demikian dikelompokkan
sebagai bakteri Gram negatif. Komposisi cat C yaitu :
Ø Aceton : 50 ml
Cat Gram D Merupakan cat skunder atau kontras. Cat ini berwarna merah berfungsi
sebagai pemberi warna mikroorganisme non target. Cat Skunder mempunyai spektrum
warna yang berbeda dari cat primer. Akibat pemberian cat gram D yaitu Bakteri gram positif
akan tetap berwarna ungu karena tidak jenuh mengikuti cat gram A sehingga tidak mampu
lagi mengikat cat gram D dan Bakteri gram negatif berwarna merah karena cat sebelumnya
telah dilunturkan oleh cat gram C, maka akan mampu mengikat cat gram D. Komposisi cat
gram D yaitu :
320
Ø Safranin O : 0,25 gram

Ø Aquadest : 90 ml
Perbedaan dinding sel bakteri gram positif dan bakteri gram negatif : Hasil pengamatan
preparat bakteri gram positif dan gram negatif pada mikroskop : S. aureus, gram positif E.
Coli , gram negatif
B. PEWARNAAN TAHAN ASAM
Beberapa spesies bakteri pada genus Mycobacterium, Cryptosporidium dan Nocardia

tidak dapat diwarnai dengan pewarnaan sederhana. Namun, mikroorganisme ini dapat
diwarnai dengan menggunakan Karbol Fuchsin yang dipanaskan. Panas membuat pewarna
dapat terserap oleh sel bakteri karena panas dapat menghilangkan lapisan lilin pada dinding
sel bakteri. Sekali bakteri tahan asam menyerap karbol fuchsin, maka akan sangat sulit untuk
dilunturkan dengan asam-alkohol, oleh karena itu mereka disebut bakteri tahan asam.
Bakteri tahan asam memiliki kadar lemak (asam mycolic) yang tinggi pada dinding sel
mereka.
Pada pewarnaan bakteri asam menggunakan metode Ziehl-Neelsen (juga disebut Hot
Stain), bakteri tahan asam akan berwarna merah karena menyerap pewarna karbol fuchsin
yang dipanaskan, karena pada saat pemanasan dinding sel bakteri yang memiliki banyak
lemak membuka sehingga pewarna dapat terserap. Namun tidak dapat dilunturkan dengan
asam alkohol karena pada saat suhu normal lemak pada dinding sel bakteri kembali
menutup, sehingga ketika diwarnai dengan pewarna tandingan, yaitu Methylene Blue,
warnanya tetap merah.
Berbeda dengan bakteri tidak tahan asam, ia akan menyerap pewarna tandingan yaitu
methylene blue sehingga berwarna biru. Pada metode Kinyoun-Gabbet, tidak perlu
dilakukan pemanasan, maka dari itu metode Kinyoun-Gabbet juga disebut Cold Stain.
Metode Kinyoun-Gabbet tidak perlu dilakukan dengan pemanasan karena pada pewarna
Kinyoun terdapat alkali fuchsin dengan konsentrasi yang tinggi, sehingga walau tanpa
pemanasan dapat menghilangkan lapisan lilin pada dinding sel bakteri tahan asam.
Komposisi Kinyoun antara lain: alkali fuchsin, fenol, alkohol 95%, dan aquades. Sebagai
pewarna tandingan adalah Gabbet, yang memiliki komposisi antara lain : methylene blue,
asam sulfat 96%, alkohol murni, dan aquades. Sama seperti pada metode Ziehl-Neelsen,
bakteri tahan asam akan berwarna merah, sedangkan bakteri tidak tahan asam akan
berwarna biru.
321
Cara Kerja :
Gambar 3 Tata Cara Pewarnaan Ziehl Neelson

1. Buat apusan/ sediaan pad kaca objek dengan ukuran 2x3cm ,fiksasi
2. Warnai dengan karbol fuksin selama 5 menit sambil dipanasi dengan api kecil dibawah
sediaan. Panasnya dipertahankan sampai keluar uap tetapi jangan sampai mendidih
3. Cuci dengan air
4. Cuci dengan asam alkohol selama 20 detik
5. Cuci dengan air mengalir
6. Warnai dengan biru metilen 1% selama 1 menit
7. Cuci dengan air dan keringkan
8. Periksa dengan mikroskop
Hasil
1. Bakteri tahan asam ( BTA), berwarna merah
2. Bakteri tidak tahan asam, berwarna biru
3. Pewarnaan Kinyoouin-Gabbet:
4. Buat apusan/sediaan pada kaca objek, fiksasi
5. Tuangkan larutan Kinyoun pada sediaan tersebut selama 3 menit
6. Cuci dengan air selama 30 menit
7. Tuang dengan larutan Gabbet selama 1 menit
8. Cuci dengan air dan keringkan di udara
9. Amati di bawah mikroskop
10. Hasil : BTA merah dan ( Non BTA) bakteri tidak tahan asam biru
322
Reagensia :
1. Pewarnaan Ziehl Neelson
Karbol fukhsin :
1. Fukhsin Basa 0.3 gram
2. Alkohol 95% 10 ml
3. Feno; kristal 5 gram
4. Aquadest 95 ml
5. Camprkan larutan A dan B
Asam Alkohol :
1. HCL 3 ml
3. Methylen blue :
4. Biru Metilen 0.3 gram
5. Aquadest 100 ml
6. Pewarnaan Kinyoun –Gabbet
7. Larutan Kinyoun :
8. Fukhsin Basa 4 gram
10. Fenol kristal 8 gram
11. Aquadest 100 ml
Larutan Gabbet:
1. Methylen blue 0.3 gram
2. Aquadest 100 ml
Cara pembacaan preparat BTA menurut International Union Againts Tuberculosis Lung
diseases ( IUATLD)
1. Apabila tidak ditemukan BTA dalam 100 Lapang Pandang, maka dilaporkan negatif
2. Apabila ditemukan 1 - 9 BTA dalam 100 lapang pandang, maka dilaporkan dengan
menulis jumlah BTA yang ditemukan
3. Apabila ditemukan 10 - 90 BTA dalam 100 lapang pandang, maka dilaporkan Positif 1
(+)
4. Apabila ditemukan 1-10 BTA dalam 1 Lapang Pandang , maka dilaporkan Positif 2 (++)
5. Apabila ditemukan > 10 BTA dalam 1 lapang Pandang, maka dilaporkan Positif 3 (+++)
323

JURNAL PRAKTIKUM
PEWARNAAN BAKTERI
Nama Praktikan :
Hari/ tanggal :
Judul : Pewarnaan BTA
GAMBAR METODE :…………………………
Bentuk :
Warna :
Susunan :
Sifat :
Contoh Bakteri :
Bentuk :
Warna :
Susunan :
Sifat :
Contoh Bakteri :
Dihitung Berdasarkan Skala Bronkhorst :
Kesimpulan : …………………………………………………………………
Praktikan Dosen
…………………………… …………………………………....
324
C. PEWARNAAN KHUSUS
Pewarnaan struktural ditujukan untuk melihat bagian tertentu bakteri. Yang termasuk
dalam pewarnaan struktural ialah :
1. Pewarnaan Spora
Ada dua genus bakteri yang dapat membentuk endospora, yaitu genus Bacillus dan
genus Clostridium. Struktur spora yang terbentuk di dalam tubuh vegetatif bakteri disebut
sebagai ‘endospora’ (endo = dalam, spora=spora) yaitu spora yang terbentuk di dalam tubuh.
Secara sederhana, dapat dikatakan bahwa endospora merupakan sel yang mengalami
dehidrasi dengan dinding yang mengalami penebalan serta memiliki beberapa lapisan
tambahan. Dengan adanya kemampuan untuk membentuk spora ini, bakteri tersebut dapat
bertahan pada kondisi yang ekstrim.
Menurut Pelczar (1986) bakteri yang dapat membentuk endospore ini dapat hidup dan
mengalami tahapan-tahapan pertumbuhan sampai beberapa generasi, dan spora terbentuk
melalui sintesis protoplasma baru di dalam sitoplasma sel vegetatifnya.
Menurut Volk & Wheeler (1988), dalam pengamatan spora bakteri diperlukan
pewarnaan tertentu yang dapat menembus dinding tebal spora. Contoh dari pewarnaan
yang dimaksudkan tersebut adalah dengan penggunaan larutan Hijau Malakit 5%, dan untuk
memperjelas pengamatan, sel vegetatif juga diwarnai dengan larutan Safranin 0,5% sehingga
sel vegetatif ini berwarna merah, sedangkan spora berwarna hijau.
Dengan demikian ada atau tidaknya spora dapat teramati, bahkan posisi spora di
dalam tubuh sel vegetatif juga dapat diidentifikasi. Namun ada juga zat warna khusus untuk
mewarnai spora dan di dalam proses pewarnaannya melibatkan proses pemanasan, yaitu;
spora dipanaskan bersamaan dengan zat warna tersebut sehingga memudahkan zat warna
tersebut untuk meresap ke dalam dinding pelindung spora bakteri.
Beberapa zat warna yang telah disebutkan di atas, dapat mewarnai spora bakteri,
tidak lepas dari sifat kimiawi dinding spora itu sendiri. Semua spora bakteri mengandung
asam dupikolinat, yang mana subtansi ini tidak dapat ditemui pada sel vegetatif bakteri, atau
dapat dikatakan, senyawa ini khas dimiliki oleh spora. Dalam proses pewarnaan, sifat
senyawa inilah (asam dupikolinat) yang kemudian dimanfaatkan untuk diwarnai
menggunakan pewarna tertentu, dalam hal ini larutan hijau malakit. Sedangkan menurut
Pelczar (1986), selain subtansi di atas, dalam spora bakteri juga terdapat kompleks Ca2+ dan
asam dipikolinan peptidoglikan.
Terdapat beberapa metode pewarnaan spora bakteri, diantaranya yaitu metode
Schaeffer-Fulton dan metode Dorner. Pada metode Schaeffer-fulton, pewarna yang
digunakan adalah hijau malaksit dan safranin, sedangkan pada metode Dorner, pewarna
yang digunakan adalah carbol fuchsin yang dipanaskan dan negrosin.
325
Alat dan Bahan :

Biakan Bacillus subtilis berumur 48-72 jam dalam agar miring AN
Zat warna :
1. Malachite green 5% dalam air
2. Safranin O 0,5% dalam air
Atau
1. Karbol fuchin dan metilen blue
2. Kaca objek bersih
3. Ose
4. Bunsen atau lampu spiritus
5. Mikroskop, minyak emersi, kertas lensa dan xylol
Gambar 4 Tata Cara Pewarnaan Spora

dan-gram-negatif/ diunduh 4 sept 17Metode Schaeffer-Fulton ( Malachite-Green)
Cara Kerja:
1. Buat olesan bakteri pada kaca objek lalu letakkan kertas saring di atasnya. Letakkan
kaca objek tersebut pada besi. Genangi olesan bakteri dengan malachite green sambil
dipanasi dengan nyala api kecil. Pemanasan diatur supaya jangan sampai mendidih
atau mengering. Dapat ditambahkan beberapa tetes malachite green selama
pemanasan untuk mencegah pengeringan. Olesan bakteri tersebut digenangi
malachite green selama 5-10 menit.
2. Biarkan kaca objek sampai dingin selama 1 menit
3. Cuci kelebihan zat warna dengan air mengalir
4. Tetesi olesan bakteri dengan safranin selama 1 menit
5. Cuci dengan air mengalir
6. Keringkan dengan kertas saring
7. Amati dengan mikroskop 1000x menggunakan minyak emersi
326
Hasil Pewarnaan :
1. Spora hijau, bakteri berwarna merah
Metode Klien
1. Buat suspensi bakteri dalam NaCl fisiologis steril, lalu tambahkan karbol fuchin sama
banyak
2. Panaskan campuran tersebut selama 6 menit atau dalam pemanas aur 800 C selama 10
menit
3. Buat sediaan, kemudian celupkan ke dalam larutan H2SO4 1% selama 2-3 detik
4. Cuci dengan air, tuangi metilen blue selama 2-4 menit
5. Cuci dan keringkan
6. Amati dengan mikroskop
Hasil :
1. Spora berwarna merah, sel bakteri berwarna biru
2. Reagen
3. Metoda Schaeffer-fulton
4. Malachite-green :
5. Malachite green 5 gram
6. Aquades 100 ml
Safranin :
1. Sama dengan untuk pewarnaan gram
Metoda Klien
Karbol Fuchin:
1. Larutan jenuh fuksin dalam alkohol 10 ml
2. Fenol 90 ml
H2SO4
1. Metilen Blue 1,48 gram
3. Format Evaluasi Praktikum
4. JURNAL PRAKTIKUM
5. PEWARNAAN BAKTERI
327

JURNAL PRAKTIKUM PEWARNAAN SPORA
Nama Praktikan :
Hari/ tanggal :
Judul : Pewarnaan SPORA
Bentuk :
Warna :
Susunan :
Sifat :
Contoh Bakteri :
Bentuk :
Warna :
Susunan :
Sifat :
Contoh Bakteri :

Kesimpulan : ………………………………………………………………
Praktikan Dosen
……………………………
…………………………………....
328
D. PEWARNAAN KAPSUL
Beberapa jenis bakteri mengeluarkan bahan-bahan yang amat berlendir dan lengket
pada permukaan selnya, dan melengkungi dinding sel. Bila bahan berlendir tersebut kompak
dan tampak sebagai suatu bentuk yang pasti ( bundar/lonjong) maka disebut kapsul, tetapi
bila bentuknya tidak teratur dan kurang menempel dengan erat pada sel bakteri disebut
selaput lendir.
Kapsul dan lendir tidaklah esensial bagi kehidupan sel, tetapi dapat berfungsi sebagai
makanan cadangan, perlindungan terhadap fagositosis (baik dalam tubuh inang maupun
dialam bebas) atau perlindungan terhadap dehidrasi. Kemampuan menghasilkan kapsul
merupakan sifat genetis, tetapi produksinya sangat dipengaruhi oleh komposisi medium
tempat ditumbuhkannya sel-sel yang bersangkutan. Komposisi medium juga dapat
mempengaruhi ukuran kapsul.
Ukuran kapsul berbeda-beda menurut jenis bakterinya dan juga dapat berbeda
diantara jalur-jalur yang berlainan dalam satu spesies. Pada beberapa jenis bakteri adanya
kapsul sebagai petunjuk virulensi. Semua kapsul bakteri tampaknya dapat larut dalam air.
Komposisi kimiawi kapsul ada yang berupa glukosa (misalnya dektrosa pada leokonostok
mesendteroides), polimer gula amino (misalnya asam hialuronat pada Staphylococcus
piogenik), polipeptida (misalnya polimer asam D-glutamat pada Bacillus antraksis) atau
kompleks polisakarida, dan glikoprotein ( misalnya B disentri).
Pewarnaan kapsul tidak dapat dilakukan sebagaimana melakukan pewarnaan
sederhana, pewarnaan kapsul dilakukan dengan menggabungkan prosedur dari pewarnaan
sederhana dan pewarnaan negatif. Masalahnya adalah ketika kita memanaskan preparat
dengan suhu yang sangat tinggi kapsul akan hancur, sedangkan apabila kita tidak melakukan
pemanasan pada preparat, bakteri akan tidak dapat menempel dengan erat dan dapat hilang
ketika kita mencuci preparat. Pewarnaan kapsul menggunakan pewarna Kristal Violet dan
sebagai pelunturnya adalah Copper Sulfate.
Kristal violet memberikan warna ungu gelap terhadap sel bakteri dan kapsul. Namun
kapsul bersifat nonionic, sehingga pewarna utama tidak dapat meresap dengan kuat pada
kapsul bakteri. Copper sulfate bertindak sebagai peluntur sekaligus counterstain, sehingga
mengubah warna yang sebelumnya ungu gelap menjadi biru muda atau pink. Maka dari itu
pada pewarnaan kapsul, kapsul akan transparan sedangkan sel bakteri dan latar belakangnya
akan berwarna biru muda atau pink.
Pewarnaan Kapsul Metode Burry-Gins

Alat dan Bahan :
1. Bahan : Klebsiella pneumonia berumur 36-48 jam
2. Tinta cina
3. Zat warna : Kristal violet/ safranin/metilen blue/ karbol fuchin ( 1:10)
4. Kaca objek bersih
5. Ose
6. Mikroskop, minyak emersi, kertas lensa dan xylol
7. Lampu spirtus/bunsen
329
Cara Kerja Pewarnaan Kapsul Metode Burry-Gins :
Gambar 5 Prosedur Pewarnaan Kapsul

1. Sediakan dua buah kaca objek bersih dan bebas lemak

2. Ambil seujung ose koloni Klebsiella pneumonia dari media Agar Mac Conkey, kemudian
suspensikan dengan larutan NaCl fisiologis di bagian kaca objek
3. Teteskan satu tetes tinta cina pada suspensi bakteri
4. Campurkan dengan tetesan tinta cina tadi sampai homogen
5. Dengan kaca objek kedua, sebarkan campuran tinta cina dan bakteri tersebut
disepanjang permukaan kaca objek pertama
6. Biarkan kering lalu dengan hati-hati fiksasi di atas api supaya apusan melekat pada
kaca objek
7. Genangi olesan bakteri tersebut dengan slah satu zat warna ( Kristal violet 1 menit,
Metilen Blue selama 3 menit, Karbol fuchin (1:10) selama 1 menit, atau safranin selama
1 menit
8. Cuci dengan air mengalir, yang tidak terlalu deras dengan hati-hati
9. Keringkan di udara atau diantara kertas saring lalu amati di bawah mikroskop
Hasil :
1. Kapsul akan tampak sebagai daerah being/jernih mengelilingi bakteri yang berwarna,
sedangkan latar belakangnya gelap.
330

JURNAL PRAKTIKUM
PEWARNAAN BAKTERI
Nama Praktikan :
Hari/ tanggal :
Judul : Pewarnaan Kapsul
Bentuk :
Warna :
Susunan :
Sifat :
Contoh Bakteri :
Bentuk :
Warna :
Susunan :
Sifat :
Contoh Bakteri :

Kesimpulan : …………………………………………………………………
Praktikan Dosen
……………………………
…………………………………....
331
E. PEWARNAAN GRANULLA
Ada beberapa metode pewarnaan granula, di antaranya adalah Loeffler, Albert dan
Neisser. Dari ketiga metode tersebut, metode yang sering digunakan adalah metode Neisser,
sedangkan metode Albert dan Loeffler kurang popular karena tidak diajarkan pada
praktikum mikrobiologi. Tetapi, pewarnaan metode Albert sering dibahas pada buku-buku
terbitan WHO. Granula metakromatik disebut juga granula volutin. Granula metakromatik
tidak hanya ditemukan pada Corynebacterium diphteriae tetapi juga di beberapa bakteri
selain bakteri tersebut, fungi, algae, dan protozoa.
Granula metakromatik mengandung polifosfat, asam ribonukleat, dan protein. Granula
metakromatik sangat mungkin mempunyai fungsi sebagai sumber cadangan energi. Metode
Neisser menggunakan pewarna neisser A, neisser B, dan neisser C. Neisser A mengandung
biru metilen, alkohol 96%, asam pekat dan aquades. Neisser B mengandung kristal violet,
alkohol 96%, dan aquades. Sedangkan neisser C mengandung crysoidine dan aquades. Pada
metode neisser, granula bakteri berwarna biru gelap atau biru hitam (warna dari neisser A
ditambah neisser B), sedangkan sitoplasma bakteri berwarna kuning kecoklatan (warna dari
neisser C).
Granula methakromatik atau volutin merupakan bahan makanan cadangan yang
sangat mudah menyerap cat basa seperti basic fuchin dan kristal violet. Umumnya granula
ini banyak terdapat pada sel-sel tua yang telah terhenti pertumbuhannya. Adanya granula ini
digunakan untuk membantu identifikasi bakteri.
Larutan yang digunakan

1. Neisser A
2. Neisser B
3. Neisser C
4. Albert I
5. Albert II
Bahan
1. Biakan ( kultur) berumur 24-48 jam Corynebacterium diptheriae dalam agar Loeffler
2. Peralatan
Pembakar Bunsen ( lampu spirtus), ose,objek glass bak pewarnaan, mikroskop, kertas
lensa dan lensa serap
Cara pewarnaan
Metode Neisser :
1. Pada sediaan yang telah difiksasi dituangkan larutan Neisser A+B didiamkan selama 1-2
menit
2. Dikeringkan dengan kertas serap
3. Ditambahkan larutan Neisser C selama 1 menit
4. Dikeringkan dengan kertas serap
332
1. Pewarnaan Flagella
Flagel merupakan salah satu alat gerak bakteri. Flagel mengakibatkan bakteri dapat
bergerak berputar. Penyusun flagel adalah sub unit protein yang disebut flagelin, yang
mempunyai berat molekul rendah. Berdasarkan jumlah dan letak flagelnya, bakteri
dibedakan menjadi monotrik, lopotrik, amfitrik, peritrik dan atrik. Prinsip pewarnaan flagella
adalah membuat organel tersebut dapat dilihat dengan cara melapisinya dengan mordant
dalam jumlah yang cukup. Dua metode pewarnaan flagella, yaitu metode Gray dan metode
Leifson.
Metode Gray digunakan untuk mendapat hasil yang lebih baik dan mengena walaupun
dalam metode ini tidak dilakukan pencelupan yang khusus. Pada pewarnaan flagella larutan
kristal violet bertindak sebagai pewarna utama, sedangkan asam tannic dan alumunium
kalium sulfat bertindak sebagai mordant. Kristal violet akan membentuk endapan disekitar
flagel, sehingga meningkatkan ukuran nyata flagel.
2. Pewarnaan Negatif
a. Dibersihkan object glass dan cover glass dengan menggunakan alkohol sampai bebas
lemak.
c. Diambil secara aseptik satu ose suspensi bakteri dan diratakan diatas object glass.
d. Difiksasi dengan cara dipanaskan diatas nyala lampu bunsen.
e. Diteteskan larutan zat warna tinta cina diatas object glass hingga merata.
f. Dikeringkan dengan diangin-anginkan.
g. Diamati dengan menggunakan mikroskop.
3. Pewarnaan Gram
a) Dibersihkan object glass dan cover glass dengan menggunakan alkohol sampai bebas
lemak, lalu dibersihkan lagi dengan tisu.
b) Difiksasi diatas nyala lampu bunsen.
c) Diambil secara aseptik satu ose suspensi bakteri dan diratakan diatas object glass.
d) Dikeringkan object glassdengan diangin-anginkan hingga terbentuk noda.
e) Difiksasi dengan dipanaskan diatas lampu bunsen.
f) Didinginkan, lalu diteteskan zat warna crystal violet sebanyak 2 atau 3 tetes dan
dibiarkan selama 1 menit.
g) Dicuci dengan aquades sampai sisa-sisa zat warna tercuci seluruhnya.
h) Dikeringkan dengan cara diangin-anginkan.
i) Diteteskan larutan lugol dan dibiarkan selama 1 menit.
j) Dicuci dengan aquades dan dikeringkan dengan diangin-anginkan.
k) Dicuci dengan alkohol selama 30 detik.
l) Diteteskan larutan zat warna safranin sebanyak 2 atau 3 tetes.
m) Dicuci dengan aquades.
n) Diamati dengan menggunakan mikroskop.
333
Gambar 6 Tahapan Pewarnaan Gram

334

JURNAL PRAKTIKUM
PEWARNAAN BAKTERI
Hari/ tanggal :
Judul : Pewarnaan GRAM
Gambar Hasil Pewarnaan
Bentuk :
Warna :
Susunan :
Sifat :
Contoh Bakteri :
Bentuk :
Warna :
Susunan :
Sifat :
Contoh Bakteri :
Bentuk :
Warna :
Susunan :
Sifat :
Contoh Bakteri :
335
4. Pewarnaan Spora
a. Dibersihkan object glass dan cover glass dengan menggunakan alkohol sampai
bebas lemak, lalu dibersihkan lagi dengan tisu.
c. Diambil secara aseptik satu ose suspensi bakteri dan diratakan diatas object
glass.
d. Dikeringkan object glass dengan diangin-anginkan hingga terbentuk noda.
e. Ditutup object glass dengan kertas saring.
f. Diteteskan malachite green sebanyak 2 atau 3 tetes.
g. Dilewatkan diatas api lampu bunsen hingga terlihat uap, jangan sampai zat warna
mendidih dan mengering.
h. Didiamkan 1 menit lalu dibuang kertas saring.
i. Dicuci dengan aquades dan dibiarkan selam 30 detik.
j. Diteteskan safranin dan dibiarkan selama 30 detik.
k. Diangin-anginkan hingga zat warna kering.
l. Diamati dengan menggunakan mikroskop.
5. Cat Gram A
a. Timbang kristal violet sebanyak 2 gram menggunakan kertas timbang pada
neraca
b. Amonium oksalat di timbang sebanyak 0,8 gram
c. Kristal violet dan amonium oksalat di campur ke dalam mortir dan dihaluskan
menggunakan stampler
d. Tambahkan 80 ml aquadest dan 20 ml alkohol 95% kedalam mortir
e. Aduk hingga merata
f. Masukkan larutan ke dalam botol reagen menggunakan corong yang telah
dilapisi kertas saring
g. Tutup, beri label, dan simpan botil reagen
h. Keringkan kertas saring
6. Cat Gram B
a. Timbang sebanya 1 gram iodium menggunakan neraca yang telah dilapisi kertas
timbang
b. Timbang sebanyak 2 gram kalium iodida menggunakan neraca yang telah dilapisi
kertas timbang
c. Campurkan iodium dan kalium iodida ke dalam mortir dan haluskan
menggunakan stampler
d. Tambahkan 300 ml aquadest ke dalam mortir
e. Aduk hingga merata
f. Masukkan larutan ke dalam botol reagen menggunakan corong yang telah di
lapisi kertas saring
g. Tutup, beri label, dan simpan botol reagen
h. Keringkan kertas saring
336
7. Cat Gram C
a. Ukur lah sebanyak 50 ml aceton menggunakan gelas ukur
b. Ukurlah sebanyak 50 ml alkohol 95% menggunakan gelas ukur
c. Campurkan keduanya kedalam botol reagen menggunakan corong
d. Tutup, beri label, dan simpan botol reagen
8. Cat Gram D
a. Timbang 0,25 gram safranin O menggunakan neraca yang telah dilapisi kertas
timbang
b. Masukkan safranin ke dalam mortir dan haluskan menggunakan stampler
c. Tambahkan 10 ml alkohol 95% dan 90 ml aquadest ke dalam mortir
d. Aduk hingga merata
e. Masukkan larutan kedalam botol reagen menggunakan corong yang telah dilapisi
kertas saring.
f. Tutup, beri label, dan simpan botol reagen.
g. Keringkan kertas saring
Latihan
Lakukan Uji Pewarnaan Gram

Dengan menggunakan Lembar Evaluasi
Ringkasan
Berdasarkan pembahasan materi diatas dapat disimpulkan bahwa :

1. Bakteri adalah mikroorganisme yang sangat sederhana yang tidak bernukleus dan
sifatnya berbeda dengan organisme yang mempunyai inti sel.
2. Pewarnaan bakteri pada umumnya bertujuan untuk mempermudah dalam
pengamatan morfologi bakteri dengan bantuan mikroskop.
3. Teknik pewarnaan bakteri yaitu Pewarnaan sederhana, Pewarnaan Negatif, Pewarnaan
Diferensial, dan Pewarnaan Khusus.
337
Daftar Pustaka
aaaaaaSociety of Chemistry
Makassar.
Ralstonia solanaceareum Penyebab Penyakit Layu pada Bakteri pada
Sumantri, Debby M, dkk., 2009, Diktat Penuntun Praktikum Mikrobiologi Pangan, Universitas
Pajajaran, bandung.
338
BAB VIII
FLORA NORMAL PADA RONGGA MULUT
Sukini, S.ST., MH.Kes.
A. TATA TERTIB LABORATORIUM BAKTERIOLOGI
Untuk menghindari kecelakaan kerja, penularan penyakit, dan untuk mendapatkan

hasil kerja yang semaksimal mungkin, perlu ditaati tata tertib laboratorium sebagai berikut:
1. Sebelum praktikum yang telah ditetapkan, para mahasiswa tidak diperbolehkan
memasuki ruang praktikum.
2. Datang tepat waktu, bila terlambat lebih dari 15 menit, mahasiswa tidak
diperkenankan mengikuti praktikum dan harus mengganti pada hari lain.
3. Di dalam laboratorium, mahasiswa harus mengenakan jas praktikum dengan pakaian
yang sopan dan rapi, bersepatu tidak diperkenankan memakai sandal dan kaos oblong.
4. Tas dan buku yang tidak diperlukan selama praktikum supaya diletakkan pada locker
yang telah disediakan.
5. Pada waktu praktikum para mahasiswa tidak diperkenankan meninggalkan ruang tanpa
izin dosen atau asisten pembimbing.
6. Praktikum harus dikerjakan dengan sungguh-sungguh, dan bertingkah laku sopan.
7. Apabila praktikan merusakkan atau memecahkan alat-alat laboratorium serta preparat
dengan alasan apapun tetap diwajibkan mengganti alat-alat/ preparat yang rusak.
8. Laporan dikumpulkan 1 minggu/setelah materi praktikum dilakukan.
9. Tidak diperbolehkan makan atau minum diruang laboratorium.
10. Sehabis bekerja atau praktek diharuskan cuci tangan dengan sabun dan gunakan
desinfektan bila perlu.
11. Setelah selesai melakukan praktikum alat harus di cuci dengan bersih.
12. Meja dan alas kerja lain dibersihkan dengan disinfektan.
13. Reagen dan peralatan praktek dikembalikan pada tempatnya.
B. PENDAHULUAN
Modul ini akan membahas tentang pertumbuhan flora pada bagian tubuh tertentu.
Flora ini tumbuh secara normal dan pada umumnya tidak patogen. Mereka hidup sebagai
bagian dari tubuh kita, namun pada kondisi tertentu seperti pada saat tubuh sedang tidak
sehat atau mengalami penurunan daya tahan, ataupun disebabkan pemicu yang
memungkinkannya berubah, maka flora ini berkemampuan untuk menjadi patogen.
Contohnya, didalam mulut kita terdapat bakteri ribuan streptococcus mutans yang pada
kondisi rongga mulut bersih maka bakteri ini bersifat normal. Namun pada saat ada plak
yang menempel pada permukaan gigi bakteri ini bisa berubah menjadi bakteri patogen yang
dapat menyebabkan karies gigi melalui serangkaian proses.
Ada lebih dari 700 spesies mikroorganisme dalam mulut yang merupakan flora normal.
Misalnya streptococcus mutans, stapilococcus aureus, C.albicans, dan lain-lain.
339
Mikroorganisme ini bisa berubah menjadi oportunitik dan menyebabkan masalah infeksi
rongga mulut seperti gingivitis, stomamatitis, glositis dan juga periodontitis.
Pada modul ini mahasiswa akan diajak untuk mengamati pertumbuhan flora normal
yang berada di dalam rongga mulut yaitu jenis kapang. Merupakan mata kuliah praktek yang
diberikan kepada mahasiswa Jurusan Keperawatan Gigi Program Rekognisi Pembelajaran
Lanjut atau RPL untuk menambah pengetahuan dan wawasan mengenai flora normal
didalam ronga mulut. Agar pelaksanaan praktikum berjalan dengan lancar, terlebih dahulu
Anda dapat membaca teori Buku Teori Mikrobiologi yang berkaitan dengan praktikum ini.
Setelah memahami teorinya, diharapkan beberapa praktikum awal seperti pengenalan
alat dan bahan, pembuatan media dan sterilisasi, mekanisme biakan bakteri, pewarnaan
mikroorganisme telah dilakukan dan dipahami dengan baik sehingga sudah ada gambaran
yang lebih mendukung untuk melaksanakan praktikum mengenai pengamatan morfologi
kapang pada rongga mulut.
Secara materi modul ini akan dibagi menjadi beberapa topik:
1. Keamanan Di Dalam Laboratorium
2. Pengamatan Morfologi Kapang Pada Rongga Mulut
Agar Mahasiswa mempunyai gambaran dan pemahaman yang lengkap dan jelas
terhadap materi mata kuliah ini, modul ini akan dilengkapi dengan beberapa gambar.
C. PETUNJUK PENGGUNAAN MODUL
Mahamahasiswa perlu aktif dan kreatif di dalam mempelajari materi Mikrobiologi

dasar yang telah diberikan sebelumnya. Mungkin beberapa istilah yang terdapat didalam
modul ini agak sulit dipahami karena menggunakan nama-nama bakteri dan mikroorganisme
lain dalam bahasa Latin. Yang terpenting adalah mahasiswa mengerti kaitan antara teori
yang sudah diterima untuk kemudian dibuktikan melalui sebuah praktikum secara
sederhana. Apabila ada materi yang kurang dipahami segera didiskusikan dengan teman dan
kemudian ditanyakan kepada dosen yang mengampu mata kuliah ataupun dosen
pembimbing praktikum.
D. KOMPETENSI
1. Mahasiswa mampu menjelaskan macam jamur

2. Mahasiswa mampu menjelaskan bentuk jamur
3. Mahasiswa mampu menjelaskan pertumbuhan jamur
340
E. TUJUAN PEMBELAJARAN
Penulisan modul ini bertujuan untuk meningkatkan pengetahuan dan menumbuhkan

sikap kreatif mahasiswa, serta memberikan pengalaman mahasiswa untuk membuktikan
teori dalam sebuah praktikum sederhana yang menyenangkan. Modul ini penting untuk
diberikan kepada mahasiswa agar mahasiswa memiliki pemahaman yang semakin baik
terhadap adanya berbagai jenis kapang di dalam rongga mulut yang sangat terkait dengan
pekerjaan sebagai seorang perawat gigi.
341
Topik I
Keamanan di Laboratorium
A. PENGANTAR
Melakukan kegiatan eksperimen di laboratorium dapat menjadi suatu kegiatan

menyenangkan dan tetapi bisa juga membahayakan, karena:
1. Melibatkan bahan-bahan kimia yang berbahaya.
2. Menggunakan benda tajam;
3. Menggunakan alat elektrik;
4. Menggunakan api/pemanasan;
Oleh karena itu dosen pembimbing harus mampu mencegahnya. Begitu pun
mahasiswa harus mengetahui bahaya apa saja yang mungkin terjadi agar kecelakaan dapat
dihindari seperti:
1. Kecelakaan di dalam laboratorium karena kurangnya pemahaman tentang sifat dan
karakter bahan-bahan kimia;
2. Kurang jelasnya petunjuk praktikum atau kurang bimbingan dan pengawasan guru
terhadap mahasiswanya ketika praktikum;
3. Kurang tersedianya fasilitas keamanan dan perlengkapan perlindungan yang memadai;
4. Kurang taatnya mahasiswa dalam mematuhi peraturan laboratorium;
5. Tidak menggunakan perlengkapan pelindung yang seharusnya;
6. Kurang bersikap hati-hati selama praktikum.
B. KOMPETENSI
1. Mahasiswa mampu menjelaskan macam-macam alat pelindung diri yang wajib

dikenakan praktikan;
2. Mahasiswa mampu memahami prosedur keselamatan di laboratorium;
3. Mahasiswa mampu menjalankan praktikum secara aman.
C. TUJUAN PEMBELAJARAN
Penulisan modul ini bertujuan untuk meningkatkan pengetahuan mengenai alat

pelindung diri, standar operasional keselamatan kerja di dan pencegahan selama
menjalankan praktikum di laboratorium.
342
D. KEAMANAN LABORATORIUM
Selama dekade terakhir telah terjadi peningkatan dramatis dalam jumlah pedoman,
rekomendasi, peraturan, dan standar yang diperkenalkan untuk keselamatan personil yang
memiliki potensial patogen di laboratorium klinis.
1. Pakaian dan Peralatan Pelindung

Komponen penting dari tindakan pencegahan universal dan praktik kerja yang aman
adalah penggunaan yang efektif dari sarung tangan pelindung, pelindung mata dan gunung,
dan mantel laboratorium, semuanya dianggap sebagai alat pelindung diri. Sarung tangan
pelindung harus dipakai bilamana ada potensi penghitungan langsung dengan bahan infeksi.
Sarung lateks disposabel atau vinil direkomendasikan dan harus segera dibuang dalam
wadah limbah yang ditunjuk saat dilepas.
Keluarkan satu sarung tangan dengan Cabut sarung tangan sepenuhnya dan tahan
menarik bagian luar sarung tangan itu ke sarung tangan yang terkontaminasi ini di
arah telapak tangan dan telapak tangan tangan yang bersarung tangan. Jangan
dengan tangan bersarung lainnya, balikkan menyentuh permukaan luar sarung tangan
sarung tangan ke dalam saat dilepaskan. dengan tangan yang tidak bersarung tangan
Jangan menyentuh kulit Anda dengan
permukaan sarung tangan bagian luar
343
Dengan menggunakan tangan yang tidak Tarik sarung tangan kedua di atas sarung
dicukur, ambil bagian dalam sarung tangan tangan yang terkontaminasi yang dipegang di
kedua dan tarik sarung tangan yang lain tangan, balikkan seluruhnya ke dalam untuk
menahan sarung tangan pertama dan untuk
menghindari kontaminasi tangan yang tidak
dicuci
Kedua sarung tangan harus segera dibuang Penutup mata seperti kacamata harus
ke wadah limbah yang ditujukan untuk diperingatkan setiap kali bekerja dengan
bahan yang terkontaminasi cairan tubuh atau spesimen lain yang bisa
menyiram atau yang bisa menciptakan
aerosol. Kacamata dengan panel samping
harus disediakan untuk
tuk setiap pekerja
Sumber : (Healing,
Healing, T., & WHO. 2006)
344
Masker wajah dipakai untuk melindungi Foto ini menggambarkan topeng wajah yang
selaput lendir hidung dan untuk menyaring tidak pas yang tidak memberikan
partikel aerosol yang mungkin masuk ke perlindungan yang memadai. Ada potensi
saluran pernafasan atau saluran pencernaan. bahan yang terkontaminasi masuk melalui
Masker harus pas di sekitar wajah dan celah dan bersentuhan dengan selaput lendir
berikan tingkat proteksi. Masker wajah harus atau untuk dihirup
selalu dipakai jika ada kemungkinan bahan
klinis. Di beberapa setting Perisai wajah
tahan air mungkin diperlukan untuk
beberapa tugas yang melibatkan serum dan
darah
Perisai wajah penuh melindungi mata, Perisai wajah penuh dikenakan untuk
hidung dan mulut melindungi mata, hidung, dan mulut dari
cipratan
345
Pelapis kulit tahan cairan dengan leher Bulu rajutan melindungi kulit pada lengan
tertutup dan pergelangan tangan harus
dipakai untuk menutupi semua kulit dan
pakaian yang terpapar. Lapisan
laboratorium tahan cairan harus dipakai di
atas pakaian jalanan dan harus dilepas
sebelum meninggalkan laboratorium
Sarung tangan pelindung harus dipakai di atas

manset rajutan untuk memberikan penutupan
lengan dan pelindung tangan yang tepat
Sumber : (Healing, T., & WHO. 2006)
346
Langkah cuci tangan
347
Desinfektan, pembuangan limbah, dan sterilisasi
Dekontaminasi permukaan kerja pada akhir kertas handuk pemutih juga harus digunakan
setiap pergeseran dan pembersihan di kabinet keamanan biologis untuk
tumpahan harus dilakukan dengan solusi menangkap tetesan yang bisa membuat
10% Clorin . aerosol
2. Pembuangan
Bahan yang terkontaminasi harus dibuang dalam wadah yang tepat yang diberi label
dengan benar dan dilengkapi dengan kelopak mata. Wadah terpisah tersedia untuk plastik
dan kaca dan jarum. Penting untuk membuang bahan dalam kontainer yang tepat untuk
menghindari cedera atau penyakit yang berpotensi serius pada orang-orang yang
bersentuhan dengan bahan-bahan ini
348
Pelat agar-agar dibuang dalam wadah yang

diberi label dengan benar.
Jarum dengan jarum suntik terlampir
dibuang ke sisi yang keras. Wadah bukti
tusukan Jarum tidak boleh diulang kecuali
yang dirancang khusus. Pemegang jarum
reswood yang tersedia secara komersial
digunakan untuk tujuan itu.
Tabung gas yang berisi sampel manusia juga

dibuang ke wadah bukti tusuk sisi keras.
Penugasan mahasiswa:
Praktikan dibagi menjadi beberapa kelompok masing-masing kelompok terdiri dari 5
orang untuk melakukan hal-hal ini:
1. Identifikasi Alat Pelindung Diri (APD) laboratorium
2. Simulasikan cara memakai APD
Latihan
Parktikan cara cuci tangan seperti gambar di atas.

Gunakan materi cuci tangan
Tes 1
Lakukan tata cara desinfektan, pembuangan limbah, dan sterilisasi, mintalah

pembimbing anda untuk menilai
349
Topik 2
Flora Normal pada Rongga Mulut
PENGANTAR
Modul ini akan membahas tentang pertumbuhan flora pada bagian tubuh tertentu.
Flora ini tumbuh secara normal dan pada umumnya tidak patogen. Mereka hidup sebagai
bagian dari tubuh kita, namun pada kondisi tertentu seperti pada saat tubuh sedang tidak
sehat atau mengalami penurunan daya tahan, ataupun disebabkan pemicu yang
memungkinkannya berubah, maka flora ini berkemampuan untuk menjadi patogen.
Contohnya, didalam mulut kita terdapat bakteri ribuan streptococcus mutans yang pada
kondisi rongga mulut bersih maka bakteri ini bersifat normal. Namun pada saat ada plak
yang menempel pada permukaan gigi bakteri ini bisa berubah menjadi bakteri patogen yang
dapat menyebabkan karies gigi melalui serangkaian proses.
Ada lebih dari 700 spesies mikroorganisme dalam mulut yang merupakan flora normal.
Misalnya streptococcus mutans, stapilococcus aureus, C.albicans, dan lain-lain.
Mikroorganisme ini bisa berubah menjadi oportunitik dan menyebabkan masalah infeksi
rongga mulut seperti gingivitis, stomamatitis, glositis dan juga periodontitis.
Pada modul ini mahasiswa akan diajak untuk mengamati pertumbuhan flora normal
yang berada di dalam rongga mulut yaitu jenis kapang. Merupakan mata kuliah praktek yang
diberikan kepada mahasiswa Jurusan Keperawatan Gigi Program Rekognisi Pembelajaran
Lanjut atau RPL untuk menambah pengetahuan dan wawasan mengenai flora normal
didalam rongga mulut. Agar pelaksanaan praktikum berjalan dengan lancar, terlebih dahulu
Anda dapat membaca teori Buku Mikrobiologi yang berkaitan dengan praktikum ini.
Setelah memahami teorinya, diharapkan beberapa praktikum awal seperti pengenalan
alat dan bahan, pembuatan media dan sterilisasi, mekanisme biakan bakteri, pewarnaan
mikroorganisme telah dilakukan dan dipahami dengan baik sehingga sudah ada gambaran
yang lebih mendukung untuk melaksanakan praktikum mengenai pengamatan morfologi
kapang pada rongga mulut.
Secara materi modul ini akan dibagi menjadi beberapa topik:
1. Keamanan Laboratorium
2. Pengamatan Morfologi Kapang Pada Rongga Mulut
PETUNJUK PENGGUNAAN MODUL
Mahasiswa perlu aktif dan kreatif di dalam mempelajari materi Mikrobiologi dasar yang
telah diberikan sebelumnya. Mungkin beberapa istilah yang terdapat didalam modul ini agak
sulit dipahami karena menggunakan nama-nama bakteri dan mikroorganisme lain dalam
bahasa Latin. Yang terpenting adalah mahasiswa mengerti kaitan antara teori yang sudah
diterima untuk kemudian dibuktikan melalui sebuah praktikum secara sederhana. Apabila
350
ada materi yang kurang dipahami segera didiskusikan dengan teman dan kemudian
ditanyakan kepada dosen yang mengampu mata kuliah ataupun dosen pembimbing
praktikum.
KOMPETENSI
1. Mahasiswa Jurusan Keperawatan Gigi Program RPL mampu menjelaskan macam jamur
2. Mahasiswa Jurusan Keperawatan Gigi Program RPL mampu menjelaskan bentuk jamur
3. Mahasiswa Jurusan Keperawatan Gigi Program RPL mampu menjelaskan pertumbuhan
jamur
TUJUAN PEMBELAJARAN
Penulisan modul ini bertujuan untuk meningkatkan pengetahuan dan menumbuhkan

sikap kreatif mahamahasiswa, serta memberikan pengalaman mahasiswa untuk
membuktikan teori dalam sebuah praktikum sederhana yang menyenangkan. Modul ini
penting untuk diberikan kepada mahasiswa agar mahasiswa memiliki pemahaman yang
semakin baik terhadap adanya berbagai jenis kapang di dalam rongga mulut yang sangat
terkait dengan pekerjaan sebagai seorang perawat gigi.
A. MIKROFLORA NORMAL
Flora normal menunjukkan populasi mikroorganisme yang mediami kulit dan selaput
lender dari organ normal yang sehat. Ada dua kelompok flora normal yaitu flora normal
resident dan flora normal transient. Resident adalah Flora normal relative tetap berada pada
kulit dan lender membrane dari host. Transient adalah Flora normal sementara yang non
patogenik atau berpotensi pathogen mikroorganisme yang mendiami kulit dan lender untuk
waktu singkat seperti jam, hari dan minggu.
1. Peran (Resident) Flora Normal

1. Mencegah kolonisasi pathogen mikro-organisme dan penyakit yang disebabkan bakteri
pathogen.
a. Kompetisi untuk mendapatkan nutrisi dengan bakteri pathogen
b. Bersaing untuk mengikat situs dengan bakteri pathogen
c. Menghambat metabolisme zat beracun.
d. Menghambat bakteriosin.
2. Sintesis vitamin K dalam saluran pencernaan
3. Membantu dalam penyerapan nutrisi di dalam usus kecil.
Flora normal dapat menyebabkan penyakit ketika mekanisme pertahanan tubuh

mengalami penurunan atau ketika mikroorganisme dalam kondisi yang berlimpah. Flora
normal kulit kaya bakteri flora normal diperkirakan 104 mikrobakteri per inci persegi.
351
Contoh bakteri flora normal.

a. Staphylococcus epidermidis
b. Propionibacterium acne
c. Peptostreptococci and peptococci
d. Diphtheroids
e. Alpha-hemolytic streptococci dan non-hemolytic streptococci
Flora normal mulut dan nasofaring dan atas saluran pernafasan saluran pernapasan
bagian atas yang terdapat flora normal tapi saluran pernapasan bagian bawah adalah steril.
Mulut
a. Viridans streptococci
b. Non-pathogenic Neisseria spp.
c. Diphtheroids
d. Anaerobes like Prevotella spp., Fusobacterium spp. And
e. Capnophaga spp.
f. Commensal Neisseria
g. Spirochetes
h. Actinimyces
Nasofaring dan saluran pernapasan bagian atas.

a. Staphylococcus epidermidis
b. Diphtheroids
c. Alph-hemolytic streptococci
d. Commensal Neisseria
e. Pneumococci
f. Haemophilus spp.
Flora normal pada saluran pencernaan flora normal lambung, duodenum, jejunum dan
usus besar sangat sulit untuk pertumbuhan bakteri. Tinja mengandung sejumlah besar
bakteri.
a. Coliforms kecuali samlmonella spp, Shigella spp, Vibrio spp, Yersinia spp dan
Campylobacter spp,
b. Enterococci
c. Anaerob seperti bacteroides, bifidobacteria, anaerobic lactobacilli, clostridia dan
peptostreptococci
Flora normal pada saluran urogenital untuk alas an anatomi saluran kelamin
perempuan jauh lebih berat terkena infeksi dibandingkan laki-laki.
a. Pada wanita
 Staphylococcus epidermidis
 Diphtheroid
352
 Coliforms
 Yeasts
 Vagina
 Lactobacilli
 Bakteroid
 Diphrheroids
 Grup B beta hemolitik streptokokus
 Mycoplasma spp.
 Yeasts
b. Laki-laki dan perempuan uretra distal.
 Diphtheroid
 Alpha-hemolytic and non-hemolytic streptococci
 Coliforms
Flora normal mata
 Diphtheroids (Corynebacterium xerosis)
 Commensal Neisseria
 Non-hemolytic streptococci
Flora normal dari meatus auditary eksternal
Ini adalah perpanjangan dari flora normal kulit dan sering deras dijajah.
 Diphtheroids
 Alpha-hemolytic and non-hemolyic
2. Infeksi kulit
a. Infeksi kulit superficial . infeksi pada folikel rambut oleh Streptococcus aureus
b. Lesi kulit vesicular dengan remah berwarna kuning yang disebabkan oleh
Streptococcus aureus dan Streptococcus pyogenes.
c. Luka seperti api cepat menyebar selulitis pada wajah dan anggota badan disebabkan
Streptococcus pyogenes.
d. Ulkus kulit disebabkan oleh Streptococcus aureus, Streptococcus pyogenes, bacillus
anthracis, Mycobacterium ulcerans, Corynebacterium diphtheriae
3. Infeksi luka
a. Luka yang terkontaminasi tanah, hal ini terjadi setelah kecelakaan atau terjatuh yang
disebabkan oleh bakteri gram negative batang.
b. Gas gangrene kerusakan jaringan yang luas dengan nekrosis otot, busuk berbau dan
gas di bawah kulit disebabkan oleh Clostridium perfringens.
c. Luka bakar infeksi disebabkan oleh bakteri Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus
aureus, Streptococcus pyogenes dan batang gram negative.
d. Luka bedah
353
3. Infeksi
1. Infeksi saluran pernapasan terdapat mekanisme pertahanan yaitu aktivitas mukosiliar,
reflex batuk, sekretori Ig A, makrofag alveolar, flora mikroba normal.
2. Infeksi telinga tengah dan sinus : sinusitis akut
3. Infeksi akut telinga tengah dan sinus sering karena invasi bakteri sekunder setelah
infeksi virus pernapasan yang disebabkan Haemophilus influenza, Streptococcus
pneumonia
4. Moraxella catarrhalis.
B. JENIS PENYAKIT INFEKSI PERNAFASAN
Bronkitis adalah peradangan akut pada cabang takeobronkila umumnya dari bakteri
Mycoplasma pneumonia , Bordetella pertussis faktor penyebab penyakit bronkopulmoner
kronis adalah polusi udara dan merokok, gejala infeksi saluran pernapasan atas melanjutkan
bronchitis menular akut. Dimulai dengan batuk kering kemudian batuk berlendir atau
mukopurulen dahak, demam dan nyeri dada substernal. Diaknosa laboratorium specimen
dahak dengan prosedur pewarnaan gram, isolasi , uji biokimia dan uji serologis untuk
identifikasi mikroba.
Bronkitis kronis didefinisikan sebagai batuk kronik selama minimal 3 bulan selama
selama dua tahun berturut – turut faktor penyebab merokok, polusi udara , gambaran klinis
batuk kronis dengan dahak berlendir, demam, lemas, sesekali terasa nyeri dada. Bakteri yang
mungkin berperan adalah Streptococcus pneumonia, Haempphilus influenza, Mycoplasma
pneumonia, Catarrhalis branhamella. Diagnosis laboratorium specimen dahak, prosedur
pewarnaan Gram, budaya, biokimia dan uji serologis untuk identifikasi mikroba.
C. METODE PENGAMBILAN SAMPEL PADA RONGGA MULUT
Bakteri yang menimbulkan karies gigi adalah streptococcus sp, diantaranya

adalah streptococcus mutans ,streptococcus salivarius, streptococcus viridians,
peptostreptococcus yang merupakan bakteri penghuni dan penyebab utama karies
gigi. Streptococcus adalah golongan bakteri yang heterogen. Streptococcus adalah bakteri
gram positif berbentuk bulat yang secara khas membentuk pasangan atau rantai selama
masa pertumbuhannya. Beberapa diantaranya golongannya merupakan anggota flora
normal pada manusia. Bakteri streptococcus terutama golongan streptococcus mutans
merupakan strain streptococci yang paling dominan dalam lesi karies dan melekat erat pada
permukaan gigi. Bakteri ini memiliki beberapa karakteristik penting yang dapat dengan
proses terjadinya karies pada gigi. Untuk mendapatkan bakteri pada karies, dilakukan
pengambilan apusan dengan menggunakan sweb, dan dioleskan pada bagian gigi yang
mengalami karies kemudian dilakukan penelitian tahap berlanjut untuk menemukan jenis
bakteri.
Plak gigi memegang peranan penting dalam menyebabkan terjadinya karies. Plak
adalah suatu lapisan lunak yang terdiri atas kumpulan mikroorganisme yang berkembang
biak di atas suatu matriks yang terbentuk dan melekat erat pada permukaan gigi yang tidak
dibersihkan. Hasil penelitian menunjukkan komposisi mikroorganisme dalam plak berbeda-
354
beda. Pada awal pembentukan plak, kukus fram positif merupakan jenis yang paling banyak
dijumpai seperti streptococcus mutans, streptococcus sanguis, streptococcus mitis,
streptococcus salivarius, serta beberapa strain lainnya. Walaupun demikian s. mutans yang
diakui sebagai penyebab utama karies oleh karena s.mutans mempunyai sifat asidogenik dan
asidurik (resisten terhadap asam). Plak lama dan plak baru. Bakteri yang dikandung kedua
daerah itu tidak sama. Pada plak baru terbentuk bakteri yang paling banyak
adalah streptococcus dan neisseria, tetapi sesuai dengan perjalanan waktu terdapat pula
bakteri lain yang berkembang biak terutama Actinomyces dan Veillonella. Dengan demikian
plak yang matang sebagian besar akan menjadi seperti filament yang berisi lebih banyak
kuman anaerob. Untuk mendapatkan bakteri yang terdapat pada plak, dilakukan pula
pengambilan plak dengan menggunakan swab atau excavator pada gigi yang terdapat plak,
kemudian dilakukan pada tahap selanjutnya untuk melihat koloni dan jenis bakteri yang
terbentuk
Peralatan
Koleksi budaya aerobik sekali pakai steril dan
sistem transportasi
Terdiri dari tabung plastik yang berisi dua
penyeka kalengan dan media stuart s
modifikasi termodifikasi dalam ampul
terpisah (sistem mikrobiologi BBL.
Cockeysville.MD). Ampul terletak di dasar
tabung dan ditutupi oleh lengan pelindung di
bagian luar. Ampul ini harus dihancurkan
setelah spesimen dikumpulkan. Dan penyeka
ditempatkan kembali ke dalam wadah untuk
menjaga spesimen di lembab. Penggunaan
kapas harus dihindari karena mengandung
asam lemak yang bisa menghambat
beberapa bakteri.
Nasopharyngeal urogenital swab (jenis
calgiswab IV, diagnostik spektrum, glenwood,
III). Batang kawat fleksibel dan tip kecil ini
memberikan koleksi spesimen yang mudah,
terutama untuk spesimen uretra nasofaring
dan pria. Penyeka kalsium alginat sebaiknya
tidak digunakan untuk pengumpulan
spesimen uretra karena dapat toxix ke
beberapa bintang Neisseria gonorrhaeae,
namun bermanfaat untuk pengumpulan
kultur Chlamydia trachomatis.
355
Steril, koleksi sekali pakai dan sistem

transportasi untuk pemulihan virus (sistem
mikrobiologi BBL, kokeysville, md) swab dan
dudukannya ditampilkan terpisah di bagian
atas dan dirakit di bagian bawah. Tabung
berisi media swab dan media transport yang
mengandung bubuk garam yang
mengandung larutan garam dan antimikrobik
seimbang. Ini mencegah pengeringan
spesimen. Membantu menjaga kelangsungan
hidup virus dan memperlambat pertumbuh-
an kontaminasi mikroba lainnya
Kit koleksi herpes berisi dua ukuran penyeka
kaleng dacron, slide untuk persiapan smear
langsung pada saat pengumpulan, dan fiksasi
slide (syva mikro trak san jose, calif) slide
akan diwarnai kemudian di laboratorium
dengan Noda antibodi fluoresen langsung
Kit koleksi chlamydia trachomatis berisi dua

ukuran penyeka topeng dacron dan
cytobrush, slide untuk persiapan smear
langsung pada saat pengumpulan, dan ampul
dari slide fixative (syva mikro trak san jose,
calif) slide akan diwarnai Kemudian di
laboratorium dengan pewarnaan antibodi
fluorescent langsung.
Brosur kultur darah bactec dibuat dengan

pilihan media, seperti 26 plus, 27 plus dan
peds plus, yang ditunjukkan di sini. Botolnya
digunakan dengan instrumen seri fluoresen
9000 (BDDIS, becton dickinson, percikan api,
Md). Media ini ditujukan untuk pemulihan
mikroorganisme aerob dan anaerobik.
356
Cara Pengambilan
Spesimen dari saluran pernafasan Sampling dari saluran pernapasan berbahaya sangat
dekat dengan pasien dan prosedurnya bisa menghasilkan aerosol dan tetesan. Kendali APD
sangat penting. Pilih posisi duduk untuk orang dewasa dan posisi telentang untuk bayi dan
anak kecil. Anak-anak Sering menemukan sampling dari saluran pernafasan yang sangat
menyusahkan dan perlu diyakinkan. Mereka mungkin juga perlu dikontrol selama proses
pengambilan sampel.
Mengambil swab -
tenggorokan sudah dekat
pasien
antara jempol dan jari

pertama dan kedua dengan
poros yang menonjol di luar
jarring ibu jari (seperti
pensil)
antara jempol dan telunjuk

dengan alas di telapak
tangan tangan
357
Mengambil dengan cara

demikian diwakili dengan
tangan kiri sebagai contoh
Pengambilan sampel
Identifikasi Bakteri
PEMERIKSAAN Staphylociccus sp.
Bahan pemeriksaan :
Nanah, darah, liquor, hapus mata, hapus hidung, hapus tenggorokan dan lain-lain tergantung
dari gejala penyakitnya.
Identifikasi berdasarkan atas :

1. Pemeriksaan mikroskopik Gram
2. Pembiakan
3. Uji plasma coagulase
4. Uji Biokimia
5. Uji resistensi
Cara kerja :
1. Preparat langsung
Pemeriksaan mikroskopik dengan pengecatan Gram dari bahan pemeriksaan (direct-
preparat), hasilnya :
 Gram positip kokus
 Susunan bergerombol seperti buah anggur
358
2. Pembiakan
Perbenihan yang dipakai :
 Agar darah
 TSB (trypticase soy broth) merupakan media penyubur sebagai cadangan untuk
ulangan pemeriksaan.
 MSA (Manit Salt Agar) sebagai media selektif gunanya untuk isolasi koloni
Staphylococcus dari bahan pemeriksaan misalnya tinja dari penderita enteritis atau
bahan dari makanan penyebab keracunan.
 Tioglikolat : untuk Staphylococcus yang anaerob.
Bahan pemeriksaan ditanam pada perbenihan tersebut, kecuali untuk bahan darah
dimasukkan dahulu kedalam TSB lalu eramkan 37oC selama satu malam (18-24 jam).
Staphylococcus yang anaerob (Peptococcus) tumbuh pada tioglikolat atau agar darah yang
dimasukkan kedalam anaerobic-jar dengan ditambah Gas Generating kit.
Pada agar darah setelah tumbuh tampak koloni dengan ciri-ciri sebagai berikut :
Bulat dengan diameter 204 mm, licin mengkilat, smooth, pinggiran rata, membentuk
pigmentasi putih susu (Staph. albus), kuning emas (Staph. aureus), kuning jeruk (Staph.
citreus). Staph. aureus bisa menyebabkan hemolisi pada agar darah.
Pada trypticase soy broth (sebagai media penyubur sebagai cadangan untuk ulangan)
terjadi pertumbuhan ditandai dengan adanya kekeruhan pada media.
Pada MSA bila terjadi peragian manit maka koloni dan perbenihan menjadi kuning
(Staph. aereus), apabila tidak terjadi pertumbuhan atau pertumbuhan yang kurang subur
berarti Staph. epidermidis atau Staph. saprophyticus.
Dari biakan murni maupun campuran dilanjutkan dengan penanaman “suib-cultur”
pada agar darah, eramkan 37oC selama satu malam, kemudian diamati adanya pembentukan
pigmen, reaksi hemolisis dan dilakukan preparat Gram.
3. Uji Koagulase
Plasma yang dipergunakan adalah plasma darah 9citrat) orang normal atau kelinci.
Ada 2 (dua) cara yaitu :
a. Cara object-glass
Satu ose plasma diteteskan pada kaca objek, kemudian diambil satu ujung koloni dan
dicampur dengan plasma. Kaca objek digoyang-goyangkan, kemudian diperiksa adanya
koagulasi (perbandingan plasma dengan koloni kuman hendaknya harus proporsional
optimal). Sebaiknya digunakan kontrol dengan NaCl fisiologis. Jika pada tes ini
didapatkan hasil negatip sebaiknya diulang dengan cara tabung.
b. Cara tabung
Sebanyak 1 cc plasma ditambah koloni bakteri, kemudian diinkubasikan dalam
waterbath pada 37oC. Dibaca setelah 1 jam, 2 jam, 3 jam, 4 jam, sampai 12 jam. Untuk
kontrol pakai yang positip dan negatip. Atau cara lain yaitu 0,5 cc plasma ditambah 0,5
cc biakan Staphylococcus dalam trypticase soy broth, kemudian diinkubasi dalam WB
37oC. Dibaca setelah 1 jam, 2 jam, 3 jam, 4 jam sampai 12 jam.
359
4. Uji biokimia
Koloni kuman ditanam pada glukosa dan manit, kemudian dieramkan secara aerob dan
anaerob, dibaca setelah dieram 37oC selama atau 2 malam.
5. Uji Resistensi Novobiocin

Dari biakan Staphylococcus dibuat suspensi dalam trypticase soy broth dengan
kekeruhan standar kuman 2 milyar kuman/ml. Kemudian digoreskan pada perbenihan
Mueller Hinton, lalu diletakkan antibiotik disk Novobiocin. Dieramkan 37oC selama 1
malam, dan dibaca hasilnya.
Genus Staphylococcus mempunyai 3 spesies yaitu :
a. Staphylococcus aureus
b. Staphylococcus epidermidis
c. Staphylococcus saprophytic
Perbedaan diagnostik dari ketiga spesies tersebut adalah :
Staph. Staph.
Staph. Aureus
epidermidis saprophyticus
- Koagulase + - -
- Manit
aerob + d d
anaerob + - -
360
JURNAL PRAKTIKUM BAKTERIOLOGI KLINIK
PRAKTIKUM : IDENTIFIKASI STAPHYLOCOCCUS NAMA :

TANGGAL : …………………………….. TANDA TANGAN :
NO. BAHAN :
Hari I :
1. Pemeriksaan mikroskopik
Bahan pemeriksaan dibuat preparat, kemudian diwarnai dengan pengecatan Gram.
Hasil pemeriksaan :
Bentuk : coccus
Susunan : bergerombol
Sifat : Gram (+)
Tersangka : Staphylococcus sp x
2. Isolasi
Bahan pemeriksaan ditanam pada media :
a. TSB
b. Agar darah
c. MSA
Dieramkan 37oC selama satu malam (18-24 jam).
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Hari II :
Pengamatan hasil isolasi
Media : MSA Media : Agar Darah Media : TSB
Bentuk koloni : Bulat Bulat Keruh
Warna koloni Kuning Putih keruh
Elevasi Cembung Cembung
Sifat Memecah manitol Menghemolisis
Tepian Rata Rata
Permukaan Licin Licin
361
3. Uji Bio Kimiawi

Koloni tersangka ditanam pada :
 Glukosa (+) ditandai dengan perubahan warna dari ungu berubah menjadi kuning
 Manit (+) ditandai dengan perubahan warna dari ungu berubah menjadi kuning
4. Uji Serologi/Plasma Koagulase

Koloni tersangka dilakukan uji plasma koagulase, yang hasilnya adalah positif.
5. Uji kepekaan (Sensitivity test) dengan Novobiocin 30 mg (Nv 30)
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Hari III :
Pengamatan hasil penanaman pada :
 Uji kepekaan terhadap Novoniocin 30 mg diameter 30 mm (sensitif)
 Pembacaan glukosa (+)
 Manit (+)
 Uji plasma koagulase : (+)
Kesimpulan :
Dari bahan nomor : 15 didapatkan bakteri : Staphylococcus aureus.
DISKUSI :
Pemeriksa / Penguji,
__________________
NIP.
362
PEMERIKSAAN Streptococcus sp.
Bahan pemeriksaan :
Nanah (pus), darah, sputum, sekret (hapus) hidung, hapus tenggorokan, dan lain-lain.
Identifikasi berdasarkan atas :b

1. Pemeriksaan Mikroskopis dengan pengecatan Gram.
2. Pembiakan
3. Basitrasin ( tes taxo A )
4. Tes Phadebact
Cara Kerja
1. Preparat langsung
Pemeriksaan mikroskopis dari bahan pemeriksaan dengan pengecatan Gram hasilnya :
 Gram positip kokus
 formasi tersusun berderet seperti rantai
2. Pembiakan
Perbenihan yang dipakai :
 Agar darah
 TSB
 Tioglikolat
Bahan pemeriksaan ditanam pada perbenihan tersebut, lalu dieramkan 37oC selama 1
malam. Untuk Streptococcus anaerob (Peptostreptococcus) perbenihan agar darah
dimasukkan kedalam anaerobic-jar dengan Gas Generating Kit atau ditanam pada tioglikolat.
Hasil pertumbuhan pada agar darah adalah koloni bulat halus dengan diameter lebih
kurang 1 mm, pinggiran rata dan disekeliling koloni tampak gelanggang (zone) :
 Bening : hemolisis total (Beta Streptococcus)
 Jernih kehijauan : hemodigesti (Alpha Streptococcus)
 Tidak berubah sama sekali : Gamma Streptococcus
dari hasil biakan murni atau campuran dilanjutkan dengan “subkultur” pada agar darah,
eramkan 37oC selama 1 malam. Diperiksa adanya reaksi pada subkultur dan dibuat
preparat Gram kemudian dilanjutkan dengan penentuan lainnya.
3. Tes Basitrasin (tes taxo A)

Gunanya untuk membedakan Streptococcus grup A dari grup lainnya. Streptococcus
haemolyticus grup A dihambat oleh Basitrasin pada konsentrasi rendah (sensitif), sedangkan
grup lainnya resisten.
 Diambil satu ose (sengkelit) biakan kuman, lalu ditanam pada aldu HI/TSB, dieramkan
pada suhu 37oC selama 1 jam.
363
 Dicelupkan usap kapas (swab) steril kedalam biakan kuman tersebut dan hapuskan
secara merata keseluruh lempeng agar darah.
 Dieram pada suhu 37oC selama 24 jam.
 Diamati pertumbuhan kuman diskeitar Basitrasin.
4. Tes Phadebact untuk Streptococcus

Untuk penentuan grup dan tipe Streptococcuss haemolyticus digunakan antiserum
spesifik antara lain dengan tes Phadebact untuk Streptococcus.
Caranya :
 Diambil satu koloni kuman yang terpisah dari biakan murni, disuspensikan dalam kaldu
HI/TSB.
 Dieram pada suhu 37oC selama 24 jam
 Keesokan harinya direaksikan satu tetes kuman dengan satu tetes antisera.
364
JURNAL PRAKTIKUM BAKTERIOLOGI KLINIK
PRAKTIKUM : IDENTIFIKASI STREPTOCOCCUS NAMA :

TANGGAL : …………………………….. TANDA TANGAN :
NO. BAHAN : 15
Hari I :
1. Pemeriksaan mikroskopik
Bahan pemeriksaan dibuat preparat, kemudian diwarnai dengan pengecatan Gram.
Hasil pemeriksaan :
Bentuk : coccus
Susunan : berderet
Sifat : Gram (+)
Tersangka : Streptococcus sp
2. Isolasi
Bahan pemeriksaan ditanam pada media :

a. TSB
b. Agar darah
c. Tioglikolat
Dieramkan 37oC selama satu malam (18-24 jam)

-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Hari II :
Pengamatan hasil isolasi

Media : AD Media : Tioglikolat Media : TSB
Bentuk koloni : Bulat  + 1 mm Tidak tumbuh / Keruh
Warna koloni Putih jernih tidak terjadi gas
Elevasi Cembung aerob
Sifat Menghemolisis
Tepian Rata
Permukaan Licin
365
3. Uji Kepekaan (Sensitivity test)

4. Uji Phadebact
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Hari III :
Pengamatan hasil uji kepekaan
Kesimpulan :
Dari bahan nomor : 15 didapatkan bakteri : Streptococcus.
DISKUSI :
Pemeriksa / Penguji,
__________________
NIP.
Pengamatan pada median
A. A. Hemolisis alfa pada plat darah domba 5%.

Alpha hemolsis adalah zona lisis sel darah
merah yang tidak jelas sehingga menghasilkan
zona berwarna hijau contonya pada
Streptococca viridian.
B. B. Alpha hemolsis streptococca pada perbesaran

10 X
C. Beta hemolsis streptococca perbesaran 10X
366
D. Hemolisis Gamma pada plat darah domba 5%.

Gamma hemolisis adalah tidak ada lisis sel
darah merah yang jelas sehingga tidak
menghasilkan zona jernih contohnya pada
Streptococca
E. Gamma hemolsis streptococca pada

perbesaran 10X
367
Latihan
Amatilah hasil uji area oligodinamik.

Lihat tahapan uji pemeriksaan hasil isolasi.
Tes 2
Jelaskan Cara Uji Phadebact, mintalah pembimbing anda untuk menilai.
368
Daftar Pustaka
Jawetz, and Melnick, 1996, Mikrobiologi Kedokteran, Jakarta : EGC.
Jutono, J. Soedarsono, S. Hartadi, S. Kabirun S., Suhadi D., 1980, Pedoman Praktikum
Mikrobiologi Umum, Departemen Mikrobiologi, Yogyakarta : Fakultas Pertanian UGM.
Radji, M. 2004, Penuntun Praktikum Mikrobiologi Farmasi, Departemen Farmasi Fakultas

MIPA Universitas Indonesia, Jakarta
Panduan Mikrobiologi Sanata Dharma, 2016, diunduh dari

https://www.usd.ac.id/fakultas/farmasi/f1l3/PanduMikroBio.pdf tanggal 7 September
2017
http://yayukandina.blogspot.co.id/2013/04/uji-potensi-antibiotik.html, diunduh tanggal 7

september 2017
369
BAB IX
BAKTERI DAN UJI POTENSI SENYAWA ANTIMIKROBA
SECARA DIFUSI SUMURAN DAN DIFUSI PAPER DISK
Sukini, S.ST., MHKes
PENDAHULUAN
Para mahasiswa, setelah beberapa kali melakukan praktikum di laboratorium kita

semakin memahami cara kerja dari eksperimen yang kita lakukan. Asik ya bisa
bereksperimen dengan teman-teman dibawah bimbingan dosen yang kompeten dan dibantu
para asisten kredibel. Selanjutnya mari kita melakukan praktikum mengenai bakteri dan
mengujinya dengan suatu metode tertentu yang tentunya akan menambah wawasan kita
terhadap bakteri.
Pada ilmu mikrobiologi ini kita mempelajari banyak tentang jasad-jasad renik yang
disebut juga dengan mikroba atau protista. Mikroorganisme sangat erat kaitannya dengan
kehidupan kita, beberapa di antaranya bermanfaat dan yang lain merugikan. Banyak di
antaranya menjadi penghuni dalam tubuh manusia. Beberapa mikroorganisme
menyebabkan penyakit dan yang lain terlibat dalam kegiatan manusia sehari-hari seperti
misalnya pembuatan anggur, keju, yogurt, produksi penicillin, serta proses-proses perlakuan
yang berkaitan dengan pembuangan limbah.
Uji sensitivitas bakteri merupakan cara untuk mengetahui dan mendapatkan produk
alam yang berpotensi sebagai bahan anti bakteri serta mempunyai kemampuan untuk
menghambat pertumbuhan atau mematikan bakteri pada konsentrasi yang rendah.
Metode uji sensitivitas bakteri adalah metode cara bagaimana mengetahui dan
mendapatkan produk alam yang berpotensi sebagai bahan anti bakteri serta mempunyai
kemampuan untuk menghambat pertumbuhan atau mematikan bakteri pada konsentrasi
yang rendah. Uji sentivitas bakteri merupakan suatu metode untuk menentukan tingkat
kerentanan bakteri terhadap zat antibakteri dan untuk mengetahui senyawa murni yang
memiliki aktivitas antibakteri.
Mata kuliah ini merupakan mata kuliah yang dirancang untuk membekali mahasiswa
keterampilan laboratorium dalam hal isolasi mikroorganisme (bakteri), analisis, dan sifat dari
mikroorganisme, daya hambat terhadap beberapa bahan seperti desinfektan dan antibiotik.
Sistem evaluasi yang diberlakukan berupa kehadiran, presentasi, tugas, dan aktivitas
praktikum
370
TUJUAN UMUM
Setelah menyelesaikan praktikum Mikrobiologi ini mahasiswa mampu mengetahui

beberapa bakteri daya hambat desinfektan. dan melakukan masing-masing prinsip dasar dan
teknik dasar analisis mikrobiologi yang meliputi metode aseptis dan sterilisasi, teknik isolasi,
kultivasi, dan preservasi kultur mikroba, teknik enumerasi mikroba, teknik identifikasi
mikroba, serta kurva pertumbuhan mikroba
TUJUAN KHUSUS
1. Untuk mengetahui metode isolasi bakteri

2. Untuk menguji daya hambat pengujian terhadap desinfektan
3. Untuk mengetahui daya hambat pengujian terhadap zat antiseptik
Manfaat: Mahasiswa mengetahui isolasi bakteri secara sederhana, mengetahui cara

kerja daya hambat terhadap desinfektan, antiseptik dan antibiotik.
Target Kompetensi: Mahasiswa mengetahui pengaruh obat terhadap perkembangan
mikroorganisme.
371
Topik 1
Bakteri
PENGANTAR
Selamat datang para mahasiswa, pada kesempatan ini kita akan melakukan
eksperimen mengenai bakteri terutama yang terdapat di dalam mulut. Selain untuk
mengenal beberapa jenis bakteri baik gram positif maupun negatif, kita juga akan belajar
untuk mengambil sampel didalam mulut. Setelah mengikuti praktikum diharapkan
mahasiswa mengetahui sifat umum, cara pertumbuhan, cara reproduksi, morfologi &
struktur serta peran bakteri di dalam tubuh.
Tujuan dari praktikum ini adalah:

1. Mahasiswa mengetahui klasifikasi dan mengidentifikasi beberapa bakteri
2. Mahasiswa mengetahui dan dapat menganalisa morfologi bakteri secara mikroskopis.
Prasyarat: Mahasiswa sudah mendapat teori tentang morfologi bakteri

Target Kompetensi: Mahasiswa mengetahui dan dapat menganalisa morfologi bakteri
secara mikroskopis.
A. BAKTERI
Bakteri tidak memiliki inti sel. Bakteri terdiri atas sitoplasma yang dikelilingi oleh
sebuah dinding sel yang kaku yang terbuat dari suatu zat khusus yang disebut peptidoglikan.
Didalam setoplasma terdapat materi genetic, baik DNA maupun RNA, dan struktur intra sel
yang diperlukan untuk metabolisme energi. Bakteri bereproduksi secara aseksual melalui
replikasi DNA dan pembelahan sel sederhana. Sebagian bakteri membentuk kapsul yang
mengelilingi dinding sel sehingga bakteri tersebut lebih tahan terhadap serangan sistem
imun pejamu. Bakteri lain mengsekresi protein yang menurunkan kerentanan terhadap
antibiotic standar. Bakteri dapat bersifat aerob atau anairob. Seringkali bakteri
mengeluarkan toksin yang secara spesifik merusak pejamu.
Laboratorium sering mengklasifikasikan bakteri sebagai gram negative atau positif.
Bakteri gram positif mengeluarkan toksin (eksotoksin) yang merusak sel-sel pejamu. Bakteri
gram negative mengandung protein di dinding selnya yang merangsang respon peradangan
atau endotoksin. Bakteri gram negative juga mengsekresi eksotoksin. Bakteri gram positif
memberikan warna ungu pada pewarnaan standar laboratorium. Bakteri gram negative
berwarna merah pada pewarnaan laboratorium yang kedua.
372
B. JENIS-JENIS BAKTERI DALAM RONGGA MULUT
Bakteri dibedakan atas dua kelompok berdasarkan komposisi dinding sel, ketahanan
terhadap penisilin, pewarnaan, kebutuhan nutrient, dan ketahanan perlakuan fisik. yaitu
bakteri gram positif dan bakteri gram negatif. Selain perbedaan dalam sifat pewarnaannya,
bakteri gram positif dan bakteri gram negatif berbeda dalam sensifitasnya terhadap
kerusakan mekanis atau fisis, terhadap enzim, desinfektan dan antibiotik.
Tabel.1.1
Perbedaan Bakteri Gram Positif dan Negatif
Perbedaan Relatif
No Sifat
Gram Positif Gram Negatif
1 Komposisi terhadap Kandungan lipid rendah Tinggi11-22
dinding sel (1-4 %)
2 Ketahanan terhadap Lebih sensitif Lebih tahan lama
inisilin
3 Penghambat oleh Lebih dihambat Kurang dihambat
pewarna biasa
4 Kebutuhan nutrient Kebanyakan spesies relatif Relatif sederhana
komplek
5 Ketahanan terhadap Lebih tahan Kurang tahan
perlakuan fisik
Bakteri gram negatif bersifat lebih konstan terhadap reaksi pewarnaan, tetapi bakteri
gram positif, sering berubah sifat pewarnaannya sehingga menunjukkan reaksi gram
vertable. Sebagai contoh, kultur bakteri gram positif sudah tua dapat kehilangan
kemampuannya untuk menyerap pewarna violet Kristal sehingga dapat menyerap pewarna
safranin, dan berwarna merah seperti bakteri gram negatif. Perubahan tersebut juga dapat
disebabkan oleh perubahan kondisi lingkungan atau modifikasi teknik pewarnaan
Beberapa jebis bakteri yang terdapat dalam rongga mulut:
Staphylococcus epidermitis Haemophilus influenza

Staphylococcus aureus Bacterioides fragilis
Peptostreptokokus Actinomyces Bacterioides orali
israelii Bacterioides Fusobacterium nucleatu
melaninogenicus
Berikut adalah pembagian dan contoh dari bakteri gram positif dan bakteri negatif,
antara lain:
373
1. Gram-positive Cocci
a. Staphylococcus
Berukuran 0,8 µm, berbentuk bulat, tidak membentuk spora dan memproduksi
enzyme katalase, fakultatif anaerob serta membentuk asam dari glukosa dalam
suasana aerobik dan anaerobik. Yang membedakan micrococcus dengan yang lain
adalah dalam kemampuan melakukan oxidasi glukosa. Staphylococcus dapat hidup
dan tumbuh dalam air garam dengan kepekatan 7,5 % sampai 15 %, sifat ini digunakan
untuk memisahkannya dari specimen dan merupakan ”vegetative bacteria” sehingga
sering digunakan untuk percobaan kemampuan membunuh kuman penyakit.
b. Peptococcus
Genus peptococcus berbentuk bulat ini bersifat gram positif, berdiameter 0,5 – 1 µm,
pada pewarnaan dijumpai tunggal, berpasangan, berkelompok 4, jarang berkelompok
banyak dan jarang berderet seperti rantai. Tidak bergerak dan tidak membentuk
spora. Semua spesiesnya adalah anaerob dan memanfaatkan peptone dan asam
amino sebagai sumber energy. Mempunyai kemampuan mempermentasi karbohidrat
dengan cepat. Reaksi katalis biasanya negatif atau lemah dan dia tidak memproduksi
koagulase enzim. Walaupun umum anggota spesies adalah beta-haemolytik, banyak
diantaranya tidak menunjukan haemolitik pada media agar darah.
c. Streptococcus
Genus dari streptococcus terdiri dari banyak dan bermacam-macam grup biologI dari
kuman gram positif. Berbentuk bulat atau lonjong dan terdapat berpasangan atau
berbentuk rantai, panjang rantai tergantung kondisi lingkungan dimana dia hidup.
Rantai yang panjang dijumpai pada cocci yang hidup dalam cairan atau semifluid
media.
d. Peptostreptococcus
e. Peptostreptococcus bersifat anaerob, gram-positif, bulat sampai oval dengan ukuran

0,7 – 1 µm. Pada pewarnaan ditemukan berpasangan dan rantai pendek atau panjang,
tidak bergerak dan tidak membentuk spora. Reaksi katalis negatif. Kebanyakan spesies
menyebabkan fermentasi karbohydrat sehingga terbentuk berbagai asam organik dan
gas.
2. Gram – negative cocci

a. Neisseria dan Branhamella Gram-negative
Tidak bergerak, tidak membentuk spora, berbentuk coffee bean/diplococci, aerobik,
membentuk ”enzyme cytochrome oxidase” yang merupakan bakteri yang terdapat
pada mucous membrane dari rongga mulut dan saluran nafas bagian atas. Genus dari
Neisseria dibagi menjadi spesies yang pathogenik yaitu Neisseria gonorrhoeae dan
Neisseria meningitidis dan spesies yang commensal yaitu Neisseria sicca, Neisseria
374
subflava, Neisseria flavescens dan Neisseria mucosa, pembagian ini berdasarkan reaksi
fermentasi karbohydrat.
Spesies yang tadinya disebut Neisseria catarrhalis sekarang disebut Branhamella.
Branhamella catarrrhalis beda dari spesies Neisseria umumnya karena tidak
memproduksi asam dari karbo hidrat seperti glucosa, maltosa, sukrosa dan fruktosa.
Dua spesies yaitu Neisseria gonorrhoeae dan Neisseria meningitidis tidak terdapat
secara normal didalam mulut manusia. Neisseria gonorrhoaea menyebabkan stomatitis
primer, parotitis atau pharyngitis, terjadi karena terjadi kontak antara mulut dengan
alat genital (Metzger, 1970; Schmidt, Hjǿrting, Hansen dan Philipsen, 1961; Wiesner
dkk, 1973 atau autoinoculation dari”primary genital infection” via jari tangan.
b. Veillonella
Genus veillonella dibagi atas dua spesies ; Veillonella alcalescens dan Veillonella
parvula (Holdelman, Cato, dan Moore, 1977). Mempunyai diameter 5µm tidak
bergerak, gram-negatif, oxidase-negatif, anaerob diplococci, tidak memfermentasi
karbo hidrat, memanfaatkan lactic, succinic dan asam2 lain sebagai sumber energi
(Rogosa, 1964). Rogosa (1956) menemukan media khusus untuk membiakan dari
spesimen yang berasal dari klinik. Veillonella adalah flora yang hidup dalam keadaan
normal didalam usus dan sistim urogenital manusia. Ditemukan dalam jumlah yang
banyak diberbagai tempat di dalam mulut.
1. Pengambilan Sampel pada Rongga Mulut

Bakteri yang menimbulkan karies gigi adalah streptococcus sp, diantaranya
adalah streptococcus mutans ,streptococcus salivarius, streptococcus viridians,
peptostreptococcus yang merupakan bakteri penghuni dan penyebab utama
karies gigi. Streptococcus adalah golongan bakteri yang heterogen.
Streptococcus adalah bakteri gram positif berbentuk bulat yang secara khas
membentuk pasangan atau rantai selama masa pertumbuhannya. Beberapa
diantaranya golongannya merupakan anggota flora normal pada manusia.
Bakteri streptococcus terutama masuk kedalam golongan streptococcus
mutans merupakan strain streptococci yang paling dominan dalam lesi karies
dan melekat erat pada permukaan gigi. Bakteri ini memiliki beberapa
karakteristik penting yang dapat dengan proses terjadinya karies pada gigi. Untuk
mendapatkan bakteri pada karies, dilakukan pengambilan apusan dengan
menggunakan sweb, dan dioleskan pada bagian gigi yang mengalami karies
kemudian dilakukan penelitian tahap berlanjut untuk menemukan jenis bakteri.
Plak gigi memegang peranan penting dalam menyebabkan terjadinya karies. Plak
adalah suatu lapisan lunak yang terdiri atas kumpulan mikroorganisme yang
berkembang biak di atas suatu matriks yang terbentuk dan melekat erat pada
permukaan gigi yang tidak dibersihkan. Hasil penelitian menunjukkan komposisi
mikroorganisme dalam plak berbeda-beda. Pada awal pembentukan plak, kukus
fram positif merupakan jenis yang paling banyak dijumpai seperti streptococcus
375
mutans, streptococcus sanguis, streptococcus mitis, streptococcus salivarius,

serta beberapa strain lainnya. Walaupun demikian s. mutans yang diakui sebagai
penyebab utama karies oleh karena s.mutans mempunyai sifat asidogenik dan
asidurik (resisten terhadap asam).
2. Plak lama dan plak baru.

Bakteri yang dikandung kedua daerah itu tidak sama. Pada plak baru terbentuk
bakteri yang paling banyak adalah streptococcus dan neisseria, tetapi sesuai
dengan perjalanan waktu terdapat pula bakteri lain yang berkembang biak
terutama Actinomyces dan Veillonella. Dengan demikian plak yang matang
sebagian besar akan menjadi seperti filament yang berisi lebih banyak kuman
anaerob. Untuk mendapatkan bakteri yang terdapat pada plak, dilakukan pula
pengambilan plak dengan menggunakan swab atau excavator pada gigi yang
terdapat plak, kemudian dilakukan pada tahap selanjutnya untuk melihat koloni
dan jenis bakteri yang terbentuk.
Langkah-langkah eksperimen:
Alat Dan Bahan
Sterile swab Lampu spirtus
Nierbekken Luv
Tabung reaksi Cawan petri
Pipet Tongue scraper
Rak tabung reaksi Sikat gigi
Sp Spidol berwarna (non permanen) Autoklaf
Incubator Cawan petri
BAP (Blood Agar Plate) Spirtus
BPS (Buffer Phospat Solution) pH 7,2 Bahan pemeriksaan (PB) kerukan
Aquadest permukaan dorsal lidah
Masker
Prosedur Penelitian
a. Sebelum penelitian dilakukan, subjek diperiksa terlebih dahulu untuk
mencari sampel yang memenuhi kriteria-kriteria inklusi dan eksklusi
dengan alat diagnostik.
b. Sebelum pengambilan bahan pemeriksaan, sampel diminta untuk tidak
menyikat gigi, makan, dan minum terlebih dahulu.
c. Sampel di instruksikan untuk berkumur dengan aquadest steril
d. Sebelum menggunakan tongue scraper pada sampel, dilakukan
pengambilan BP dari kerokan dorsal lidah dengan menggunakan sterile
swab. BP dimasukkan kedalam tabung reaksi yang berisi BPS (Buffer
Phospat Solution) dengan pH 7,2
376
e. Pengambilan BP berikutnya setelah sampel menggunakan tongue

scraper yang telah disediakan. Lakukan 10 kali pengerokan secara ringan
pada lidah dari papul sirkumvalata sampai ujung lidah.
f. Pada sampel yang berada dilakukan tahapan no 3 dan 4 dengan
menggunakan sikat gigi. Dilakukan pengerokan 10 kali secara ringan pada
lidah. Teknik pembersihan lidah tanpa menggunakan pasta gigi.
g. Setiap selesai pembersihan lidah, dilakukan pengambilan kerokan dorsal
lidah sampel dengan menggunakan sterile swab, masukkan kedalam
tabung reaksi lain yang berisi BPS.
h. Inkubasi BP selama 24 jam
i. Pengenceran BP secara seri : sediakan 4 tabung reaksi berisi 9ml Buffer
Phospat Plate. Pada setiap tabung reaksi diberi nomor satu sampai empat,
tabung nomor satu adalah tabung yang berisi swab dari hasil kerokan
dorsal lidah sampel yang sekaligus terhitung sebagai pengenceran pertama
atau 10 kemudian dihomogonisasikan, setelah suspensi tersebut
homogeny dengan pipet sterile dimasukkan kedalam tabung nomor dua,
dikocok sampai homogen sehingga terjadi pengenceran, dari tabung nomor
dua diambil suspense sebanyak 1ml dengan menggunakan
j. BP yang telah di encerkan dengan konsentrasi 10 sampai 10, diambil
dengan pipet steril sebanyak 1ml, kemudian disebar pada cawan petri
streril. Selanjutnya dimasukkan incubator 37oC dalam suasana anaerob
selama 1 x 24 jam
k. Setelah di inkubasikan dalam inkubator, dilakukan perhitungan koloni
bakteri
l. Perhitungan koloni secara manual yang menggunakan kaca pembesar (lup).
Titik-titik kecil dan halus pada cawan petri menunjukkan koloni bakteri,
untuk mempermudah perhitungan koloni bakteri dapat dibuat garis bantu
pada cawan petri, selain itu hal ini untuk menghindari kesalahan dalam
perhitungan.
Latihan
Lakukanlah pemeriksaan bakteri dalam rongga mulut secara mikroskopis

Tulis hasil praktikum dalam bentuk laporan sebagai tugas individu
Tes 1
Sebutkan perbedaan Bakteri Gram Negatif dan Positif.
377
Topik 2
Desinfektan
PENGANTAR
Mahasiswa praktikan, hampir setiap hari kita berhubungan dengan bahan yang
mengandung disinfektan akan tetapi tidak menyadari bahwa bahan tersebut memiliki
kemampuan untuk membunuh mikroorganisme. Misalnya pada saat mencuci tangan dengan
sabun, tujuan kita yang utama hanyalah membersihkan noda atau kotoran yang menempel
pada telapak tangan, tidak benar-benar bermaksud ingin membunuh mikroorganisme
tertentu.
Pembelajaran praktikum kali ini berkaitan dengan Pengertian dan Jenis Disinfektan
1. Pengertian dan Jenis Disinfektan
Desinfektan didefinisikan sebagai bahan kimia atau pengaruh fisika yang digunakan
untuk mencegah terjadinya infeksi atau pencemaran jasad renik seperti bakteri dan virus,
juga untuk membunuh atau menurunkan jumlah mikroorganisme atau kuman penyakit
lainnya.
Sedangkan antiseptik didefinisikan sebagai bahan kimia yang dapat menghambat atau
membunuh pertumbuhan jasad renik seperti bakteri, jamur dan lain-lain pada jaringan
hidup. Bahan desinfektan dapat digunakan untuk proses desinfeksi tangan, lantai, ruangan,
peralatan dan pakaian
Pada dasarnya ada persamaan jenis bahan kimia yang digunakan sebagai antiseptik
dan desinfektan. Tetapi tidak semua bahan desinfektan adalah bahan antiseptik karena
adanya batasan dalam penggunaan antiseptik. Antiseptik tersebut harus memiliki sifat tidak
merusak jaringan tubuh atau tidak bersifat keras. Terkadang penambahan bahan desinfektan
juga dijadikan sebagai salah satu cara dalam proses sterilisasi, yaitu proses pembebasan
kuman. Tetapi pada kenyataannya tidak semua bahan desinfektan dapat berfungsi sebagai
bahan dalam proses sterilisasi.
Bahan kimia tertentu merupakan zat aktif dalam proses desinfeksi dan sangat
menentukan efektivitas dan fungsi serta target mikroorganisme yang akan dimatikan. Dalam
proses desinfeksi sebenarnya dikenal dua cara, cara fisik (pemanasan) dan cara kimia
(penambahan bahan kimia). Dalam tulisan ini hanya difokuskan kepada cara kimia,
khususnya jenis-jenis bahan kimia yang digunakan serta aplikasinya.
Banyak bahan kimia yang dapat berfungsi sebagai desinfektan, tetapi umumnya
dikelompokkan ke dalam golongan aldehid atau golongan pereduksi, yaitu bahan kimia yang
mengandung gugus -COH; golongan alkohol, yaitu senyawa kimia yang mengandung gugus -
OH; golongan halogen atau senyawa terhalogenasi, yaitu senyawa kimia golongan halogen
atau yang mengandung gugus-X; golongan fenol dan fenol terhalogenasi, golongan garam
amonium kuarterner, golongan pengoksidasi, dan golongan biguanida.
378
Telah dilakukan perbandingan koefisien fenol turunan aldehid (formalin dan

glutaraldehid) dan halogen (iodium dan hipoklorit) terhadap mikroorganisme Staphylococcus
aureus dan Salmonella typhi yang resisten terhadap ampisilin dengan tujuan untuk
mengetahui keefektifan dari disinfektan turunan aldehid dan halogen yang dibandingkan
dengan fenol dengan metode uji koefisien fenol.
Fenol digunakan sebagai kontrol positif, aquadest sebagai kontrol negatif dan larutan
aldehid dan halogen dalam pengenceran 1 : 100 sampai 1 : 500 dicampur dengan suspensi
bakteri Staphylococcus aureus dan Salmonella typhi resisten ampisilin yang telah
diinokulum, keburaman pada tabung pengenceran menandakan bakteri masih dapat
tumbuh.
2. Penggunaan Desinfektan
Desinfektan sangat penting untuk membantu mencegah infeksi terhadap pasien yang
berasal dari peralatan maupun dari staf medis yang ada di rumah sakit dan juga membantu
mencegah tertularnya tenaga medis oleh penyakit pasien. Perlu diperhatikan bahwa
desinfektan harus digunakan secara tepat
a. Desinfektan tingkat rendah dapat dibagi menjadi 2 golongan:
1) Golongan pertama
Desinfektan yang tidak membunuh virus HIV dan Hepatitis B.
Klorhexidine (Hibitane, Savlon).
Cetrimide (Cetavlon, Savlon).
Fenol-fenol (Dettol).
Desinfektan golongan ini tidak aman untuk digunakan :
Membersihkan cairan tubuh (darah, feses, urin dan dahak).
Membersihkan peralatan yang terkena cairan tubuh misalnya sarung tangan yang
terkena darah.
Klorheksidine dan cetrimide dapat digunakan sebagai desinfektan kulit fenol-
fenol dapat digunakan untuk membersihkan lantai dan perabot seperti meja dan
almari namun penggunaan air dan sabun sudah dianggap memadai.
2) Golongan kedua
Desinfektan yang membunuh Virus HIV dan Hepatistis B.
Desinfektan yang melepaskan klorin. Contoh : Natrium hipoklorit (pemutih, eau
de javel), Kloramin (Natrium tosilkloramid, Kloramin T) Natrium Dikloro
isosianurat (NaDDC), Kalsium hipoklorit (soda terklorinasi, bubuk pemutih)
Desinfektan yang melepaskan Iodine misalnya : Povidone Iodine (Betadine,
Iodine lemah)
Alkohol : Isopropil alkohol, spiritus termetilasi, etanol.
Aldehid : formaldehid (formalin), glutaraldehid (cidex).
Desinfektan adalah zat yang digunakan untuk mencegah infeksi dengan
mematikan mikroba misalnya dengan memberikan bahan tertentu yang
mengandung zat antimikroba, yaitu senyawa yang dapat membunuh atau
menghambat pertumbuhan mikroorganisme.
379
b. Antimikroba
Zat antimikroba dapat bersifat membunuh mikroorganisme (microbicidal) atau
menghambat pertumbuhan mikroorganisme (microbiostatic). Disinfektan yaitu suatu
senyawa kimia yang dapat menekan pertumbuhan mikroorganisme pada permukaan
benda mati seperti meja, lantai dan pisau bedah. Adapun antiseptik adalah senyawa
kimia yang digunakan untuk menekan pertumbuhan mikroorganisme pada jaringan
tubuh, misalnya kulit. Efisiensi dan efektivitas disinfektan dipengaruhi oleh beberapa
faktor yaitu
1) Konsentrasi
2) Waktu terpapar
3) Jenis mikroba
4) Kondisi lingkungan: temperatur, pH dan jenis tempat hidup
c. Antiseptik
Zat-zat yang menghambat pembiakan secara bakteri dengan tiada membunuhnya
disebut zat antiseptik atau zat bakteriostatik. Zat yang dapat membunuh bakteri
disebut disenfektan, germisida atau bakterisida. Ada disenfektan yang membunuh
bakteri dengan tidak merusaknya sama sekali, tetapi zat-zat kimia seperti basa dan
asam organik menyebabkan hancurnya bakteri dan mungkin terjadi kehancuran ini
akibat dari suatu hidrolisis. Kerusakan bakteri pada umumnya dibagi atas 3 golongan
yaitu oksidasi, koagulasi atau penggumpalan protein, depresi dan ketegangan
permukaan.
Pada umumnya bakteri yang muda kurang daya tahannya terhadap disenfektan dari
pada bakteri yang tua. Faktor-faktor yang mempengaruhi daya disenfektan antara lain
pekat encernya kosentrasi, kenaikan temperatur menambah daya disenfektan,
medium juga dapat menawarkan disenfektan. Susu , plasma darah dan zat-zat lain
yang serupa protein sering melindungi bakteri terhadap pengaruh disenfektan tertentu
Beberapa disenfektan dan antiseptik, zat-zat yang dapat membunuh atau
menghambat pertumbuhan bakteri dapat dibagi atas gram-gram logam, fenol dan
senyawa-senyawa lain yang sejenis, formal dehida, alkohol, yodium klor dan
persenyawaan klor, zat warna, detergen, sulfona muda, dan antibiotik
Beberapa Disinfektan dan Antiseptik
a. Logam-logam Berat
Logam berat berfungsi sebagai antimikroba oleh karena dapat
mempresipitasikan enzim - enzim atau protein esensial dalam sel. Logam-logam
berat yang umum dipakai adalah Hg, Ag, As, Zr dan Cu. Daya antimikroba dari
logam berat, dimana pada konsentrasi yang kecil saja dapat membunuh mikroba
dinamakan daya oligodinamik. Tetapi garam dari logam berat ini mudah merusak
kulit, merusak alat - alat yang terbuat dari logam, dan harganya mahal
b. Fenol dan Senyawa-senyawa Sejenis
Fenol (asam karbol) untuk pertama kalinya dipergunakan Lister di dalam ruang
bedah sebagai germisida, untuk mencegah timbulnya infeksi pasca bedah. Pada
380
konsentrasi yang rendah (2 - 4%), daya bunuhnya disebabkan karena fenol

mempresipitasikan protein secara aktif, dan selain itu juga merusak membran sel
dengan cara menurunkan tegangan permukaannya. Fenol merupakan standar
pembanding untuk menentukan aktivitas atau khasiat suatu disinfektan.
Kresol (kreolin) lebih baik khasiatnya dari pada fenol. Lisol adalah disinfektan
yang berupa campuran sabun dengan kresol, lisol lebih banyak digunakan
daripada desinfektan lainnya
Karbol adalah nama lain dari fenol. Seringkali orang mencampurkan bau-bauan
yang sedap, sehingga disinfektan menjadi lebih menarik
c. Alkohol
Alkohol merupakan zat yang paling efektif dan dapat diandalkan untuk sterilisasi
dan disinfeksi. Alkohol mendenaturasikan protein dengan jalan dehidrasi, dan
juga merupakan pelarut lemak. Oleh karena itu, membran sel-sel akan rusak, dan
enzim - enzim akan dinonaktifkan oleh alkohol. Etanol murni kurang daya
bunuhnya terhadap mikroba Jika dicampur dengan air murni, efeknya menjadi
lebih baik Alkohol 50 - 70% banyak dipergunakan sebagian disinfektan
Ada 3 jenis alkohol yang dipergunakan sebagai disinfektan, yaitu metanol, etanol,
dan isopropanol. Menurut ketentuan, semakin tinggi berat molekulnya, semakin
meningkat pula daya disinfektannya. Oleh karena itu, diantara ketiga jenis
alkohol tersebut isopropil alkohol adalah yang paling banyak digunakan. Yang
banyak dipergunakan dalam praktek adalah larutan alkohol 70 – 80% dalam air.
Konsentrasi di atas 90% atau dibawah 50% biasanya kurang efektif kecuali untuk
isopropil alkohol yang masih tetap efektif sampai konsentrasi 99%. Waktu yang
diperlukan untuk membunuh sel-sel vegetatif cukup 10 menit, tetapi untuk spora
tidak
d. Aldehid
Cara bekerjanya aldehid ialah dengan cara membunuh sel mikroba dengan
mendenaturasikan protein. Larutan formaldehid (CH2O) 20% dalam 65-70%
alkohol merupakan cairan pensteril yang sangat baik apabila aiat-alat direndam
selama 18 jam. Akan tetapi karena meninggalkan residu, maka alat-alat tersebut
harus dibilas dulu sebelum dipakai. Senyawa lain aldehid, yakni glutaraldehid
merupakan solusi seefektif formaldehid, terutama bila pH-nya 7,5 atau lebih.
Stafilokokus dan Iain-lain sel vegetatif akan dimatikan dalam waktu 5 menit,
Mycobacterium tuberculosis dan virus dalam waktu 10 menit, sedangkan untuk
membunuh spora diperlukan 3-12 jam. Senyawa tersebut bersifat nontoksik dan
tidak iritatif bagi manusia
e. Yodium
Larutan yodium, baik dalam air maupun dalam alkohol bersifat sangat antiseptik
dan telah lama dipakai sejak lama sebagai antiseptik kulit sebelum proses
pembedahan
381
f. Klor dan Senyawa Klor

Klorin bebas memiliki warna khas (hijau) dan bau yang tajam. Sudah lama klorin
dikenal sebagai deodoran dan disinfektan yang sangat baik. Klorin dijadikan
standar pengolahan air minum di seluruh lingkungan. Sayangnya kebanyakan
senyawa klorin diinaktifkan bahan-bahan organik dan beberapa katalisator logam
g. Peroksida
Peroksida hidrogen (H202) merupakan antiseptik yang efektif nontoksik.
Molekulnya tidak stabit dan apabila dipanaskan akan terurai menjadi air dan
oksigen
h. Zat Warna
Beberapa zat warna dapat menghambat pertumbuhan kur (bakteriostatik),
misalnya derivat akridin dan zat warna rosan Akriflavin (campuran derivat akridin
dengan senyawa I mempunyai spektrum aktivitas yang luas, dan telah lama
dipergunakan untuk mengobati infeksi traktus urinar Mekanisme kerjanya
disebabkan karena akridin mampu bereduksi dengan ADN mikrobe
i. Deterjen
Sabun biasa tidak banyak khasiatnya sebagai zat pembunuh bakteri (bakterisida),
tetapi kalau dicampur dengan heksaklorofen daya bunuhnya menjadi besar
sekali. Sejak lama obat pencuci yang mengandung ion (deterjen) banyak
digunakan sebagai pengganti sabun. Deterjen tidak hanya bersifat bakteriostatik,
melainkan juga merupakan bakterisida. Terutama bakteri yang bersifat Gram
positif
j. Suifonamida
Sejak tahun 1937 banyak digunakan persenyawaan-persenyawaan yang
mengandung belerang sebagai penghambat pertumbuhan bakteri dan tidak
memiliki sifat tidak merusak jaringan manusia. Mikroba yang peka terhadap
suifonamida, antara lain Streptococcus yang mengganggu tenggorokan,
Pneumococcus, Gonococcus, dan Meningococcus. Penggunaan obat ini bila tidak
dengan aturan, akan menimbulkan gejala-gejala alergi dan berakibat kekebalan
bagi mikroba-mikroba tertentu
Setelah memahami tentang disenfektan dan mikroba, kita akan melakukan eksperimen
mengenai penentuan potensi antibiotik ini adalah untuk mengukur luas hambatan
pertumbuhan mikroba uji yang disebabkan oleh zat baku standar dan zat yang diuji.
A. ANTIBIOTIK
Pengertian Antibiotik
Suatu bahan diklasifikasikan sebagai antibiotika apabila:
1) Bahan tersebut merupakan produk metabolisme (alami maupun sintesis).
2) Bahan tersebut adalah produk sintesis yang dihasilkan sebagai analog struktur suatu
antibiotika yang terdapat di alam
382
3) Bahan tersebut mengantagonis pertumbuhan atau keselamatan suatu spesies

mikroorganisme atau lebih.
4) Bahan tersebut efektif dalam konsentrasi rendah.
Secara umum antibiotika terbagi atas:

1) Penisilin
Penisilin-G dan turunannya bersifat bakterisid terhadap terutama kuman Gram-positif
(khususnya Cocci) dan hanya beberapa kuman Gram-negatif. Contohnya :
Benzilpenisilin, Fenoksimetilpenisilin Kloksasilin, Asam Klavulanat, Ampisilin.
2) Sefalosporin
Spektrum kerjanya luas dan meliputi banyak kuman Gram-positif dan Gram-negatif
termasuk Escherichia coli. Berkhasiat bakterisid dalam fase pembunuhan kuman,
berdasarkan penghambatan sintesa peptidoglikan yang diperlukan kuman untuk
ketangguhan dindingnya. Contohnya : Sefaleksin, Sefamandol, Sefouroksin, Sefotaksim,
Seftazidim, Aztreonam.
3) Aminoglikosida
Aktivitasnya bakterisid, berdasarkan dayanya untuk mempenetrasi dinding bakteri dan
mengikat diri pada ribosom di dalam sel. Proses translasi (RNA dan DNA) diganggu
sehingga biosintesa proteinnya dikacaukan. Efek ini tidak saja terjadi pada fase
pertumbuhan juga bila kuman tidak membelah diri. Contohnya : Streptomisin,
Gentamisin, Amiksin, Neomisin,Paromomisin
4) Tetrasiklin
Mekanisme kerja berdasarkan diganggunya sintesa protein kuman. Spectrum kerjanya
luas dan meliputi banyak cocci Gram-positif dan Gram-negatif serta kebanyakan bacilli,
kecuali pseudomonas dan proteus. Contohnya : Tetrasiklin, Doksisiklin,
5) Makrolida dan linkomisi
Eritromisin bekerja bakteriostatis terhadap terutama bakteri Gram-positif, dan
spectrum kerjanya mirip penisilin-G. Mekanisme kerjanya melalui pengikatan
reversible pada ribosom kuman, sehingga sintesis proteinnya dirintangi. Contohnya :
Eritromisin, Azitromisin, Spiramisin, Linkomisin
6) Polipeptida
Khasiatnya adalah bakterisid berdasarkan aktivitas permukaannya dan kemampuannya
untuk melekatkan diri pada membran sel bakteri, sehingga permeabilitas sel
meningkat dan akhirnya sel meletus. Contohnya : Polimiksin B, Basitrasin, Gramsidin.
B. UJI POTENSI ANTIBIOTIKA
Uji ini dilakukan dalam dua metode yaitu metode kertas saring (Kirby and Bauer) dan
metode d’Aubert. Metode kertas saring menghambat pertumbuhan mikroorganisme dengan
menggunakan zat-zat kimia seperti fungisida, bakterisida, dan insektisida. Dengan perlakuan
fisik seperti dengan sinar UV, pemanasan yang tinggi, serta dengan perlakuan biologi seperti
menggunakan mikroorganisme lain sebagai antagonis. Metode d’Aubert yaitu metode yang
digunakan untuk memeriksa kadar anibiotika dalam bahan makanan sebagai bahan
pengawet
383
Prosedur Kerja
Alat
Alat yang digunakan pada percobaan ini meliputi botol roux, cawan petri, erlenmeyer, gelas
ukur, spektrofotometer, tabung reaksi, pinset, pencadang, piper disk, vial.
Bahan
Bahan yang digunakan yaitu GNA (glucosa natrium agar), bakteri Sterptococus
Aureus, antibiotik tetrasiklin, ampicilin, amoxicilin, dan cefadroxcil.
Cara Kerja
a. Pertama-tama dibuat pengenceran dengan 5 variasi dosis baku (S1 sampai S5).
b. Dibuat 1 variasi dosis uji (U3) yang sesuai dengan S3 kurva baku.
c. Dibuat suspensi inokulum dengan mencampurkan GNA steril.
d. Dituang kedalam tiap-tiap cawan petri
e. Setelah inokulum padat kemudian diletakkan piper disk yang telah direndam dengan
larutan antibiotik.
f. Diinkubasi selama 1 x 24 jam pada suhu 37°C
g. Diamati zona hambat yang terbentuk dan dilakukan pengukuran garis tengah dengan
menggunakan penggaris.
h. Dihitung potensi antibiotik dari hasil pengukuran
Latihan
Lakukanlah Uji Potensi Antibiotika

Lihat pada cara uji potensi antibiotika pada teori diatas.
Tes 2
Sebutkan dan jelaskan penggunaan Desinfektan ?
384
Topik 3
Uji Potensi Senyawa Antimikroba
Secara Difusi Sumuran dan Difusi Paper Disk
PENGANTAR
Antibiotika sudah banyak digunakan oleh masyarakat untuk pengobatan berbagai

penyakit terutama penyakit infeksi. Akan tetapi akibat pemakaian yang tidak rasional dan
pemakaian yang tidak tuntas dari antimikroba malah dapat membahayakan bagi pasien.
Bakteri penyebab penyakit ini dapat menjadi resistensi terhadap pengobatan dengan
antimikroba. Antibiotik digunakan untuk mengobati berbagai jenis infeksi akibat kuman atau
juga untuk prevensi infeksi, misalnya pada pembedahan besar
Uji potensi antibiotika secara mikrobiologik adalah suatu teknik untuk menetapkan
suatu potensi antibiotika dengan mengukur efek senyawa tersebut terhadap pertumbuhan
mikroorganisme uji yang peka dan sesuai. Efek yang ditimbulkan pada senyawa uji dapat
berupa hambatan pertumbuhan.
Antibiotika adalah suatu substansi kimia yang dibentuk atau diperoleh dari berbagai
spesies mikroorganisme, yang dalam konsentrasi rendah mampu menghambat pertumbuhan
mikroorganisme lainnya. Antibiotika tersebar di dalam alam dan memegang peranan penting
dalam mengatur populasi mikroba dalam tanah, air, limbah, dan kompos. Antibiotika ini
memiliki susunan kimia dan cara kerja yang berbeda-beda sehingga masing-masing
antibiotika memiliki kuman standar tertentu. Dari sekian banyak antibiotika yang telah
berhasil ditemukan, hanya beberapa saja yang cukup tidak toksik untuk dapat dipakai dalam
pengobatan.
TUJUAN
Adapun tujuan praktikum mengenai penentuan potensi antibiotic ini adalah:

1. Mengetahui ada tidaknya potensi antibakteri dari suatu senyawa antimikroba,
misalnya antibiotik, secara difusi sumuran dan difusi paper disk.
2. Untuk mengukur luas hambatan pertumbuhan mikroba uji yang disebabkan oleh zat baku
standard an zat yang diuji.
DASAR TEORI
Uji potensi antimikroba dapat dilakukan dengan 2 macam metode, yaitu metode difusi
dan metode dilusi. Cara pengujian potensi (daya atau kekuatan) senyawa antimikroba ada
bermacam-macam, tergantung pada sifat dan bentuk sediaan senyawa antimikroba. Pada
umumnya digunakan cara pengenceran, cylinder diffusion plate method, paper disk diffusion
method dan agar dillution plate method.
385
Prinsip kerja metode difusi adalah terdifusinya senyawa antimikroba (misalnya

antibiotik) ke dalam media padat di mana mikroba uji (misalnya bakteri patogen) telah
diinokulasikan. Metode difusi dapat dilakukan secara paper disk dan secara sumuran. Pada
metode difusi secara paper disk, kertas disk yang mengandung antibiotik diletakkan di atas
permukaan media agar yang telah ditanam mikroba uji, setelah itu hasilnya dibaca.
Penghambatan pertumbuhan mikroba oleh antibiotik terlihat sebagai zona jernih di
sekitar pertumbuhan mikroba. Metode difusi secara sumuran dilakukan dengan membuat
sumuran dengan diameter tertentu pada media agar yang telah ditanami mikroba uji.
Sumuran dibuat tegak lurus terhadap permukaan media. Antibiotik diinokulasikan ke dalam
sumuran ini dan diinkubasikan, setelah itu hasilnya dibaca seperti pada difusi secara paper
disk. Luasnya zona jernih merupakan petunjuk kepekaan mikroba terhadap antibiotik. Selain
itu, luasnya zona jernih juga berkaitan dengan kecepatan berdifusi antibiotik dalam media.
D. PROSEDUR KERJA
1. Uji Potensi Senyawa Antibiotik Secara Difusi Sumuran

Alat dan Bahan :
a. Alat gelas : petridish steril, tabung reaksi, erlenmeyer, pipet ukur, pipet tetes,
gelas ukur
b. Mikropipet, pelobang gabus no. 4, jangka sorong/penggaris, jarum ose, spidol,
kertas label, vortex mixer, spreader
c. Senyawauji berupa antibiotik (misalnya Amoxycilllin sirup kering) dengan variasi
konsentrasi : 25; 12,5; 6,25 dan 3,125 mg/ml
d. Kultur murni bakteri ujidalam media NB umur 24 jam
e. Media nutrien agar (NA)
f. Deret larutan standar Mac Farland
g. Nutrient Broth (NB) untuk pembuatan suspensi bakteri uji
h. Aquadest steril sebagai pelarut senyawa uji
i. Alkohol 70 %
Cara kerja :
a. Preparasi Senyawa Uji
Preparasi senyawa uji dilakukan sesuai petunjuk dalam kemasan, kemudian
buatlah berbagai variasi konsentrasi senyawa uji. Pada praktikum ini dibuat 4
variasi konsentrasi senyawa uji (konsentrasi 25; 12,5; 6,25 dan 3,125 mg/ml
(Perhatikan cara pembuatan konsentrasi senyawa uji!)
b. Preparasi Mikroba Uji
1) Siapkan kultur murni bakteri uji
2) Siapkan deret larutan standard Mac Farland
3) Buat sebanyak 2 tabung @10 ml suspensi bakteri uji menggunakan media
BPW dan setarakan 41 kekeruhannya dengan larutan standar Mac Farland
II (konsentrasi mikroba 6. 108 CFU/ml).
386
c. Pengujian potensi antibiotik secara difusi sumuran

1) Siapkan beberapa petri berisi 20 ml media nutrient agar (NA), 15 ml NA dan
5 ml NA steril
2) Pembuatan kontrol kontaminasi media
a) Buka petri berisi 20 media NA, secara aseptis buatlah sumuran pada
petri 1) dengan pelobang gabus no. 4.
Ambil bulatan NA pada sumur yang dibuat dengan jarum ose secara
hati-hati sehingga NA di sekelilingnya tidak tergores/rusak.
Masukkan bulatan NA tersebut dalam beker glass berisi alkohol.
b) Beri label pada dasar petri : kel. prakt/tgl/perlakuan
3) Pembuatan kontrol pertumbuhan bakteri uji secara double layer
a) Tuang 5 ml NA steril ke dalam cawan petri steril, biarkan memadat
sebagai base layer agar.
b) Ambil 1 ml suspensi bakteri uji, inokulasikan ke dalam 15 ml media
NA secara pour plate, kemudian tuangkan secara merata sebagai
seed layer agar di atas base layer agar, biarkan memadat.
c) Buat 1 sumuran dengan menggunakan pelubang gabus No. 4.
Pembuatan sumuran dilakukan sampai dasar seed layer agar dan
tidak menembus base layer agar yang berfungsi sebagai dasar
sumuran.
d) Beri label pada dasar petri : kel. prakt/tgl/perlakuan/nama bakteri uji
4) Pembuatan kontrol negatif dan pengujian potensi antibiotik secara difusi
sumuran
a) Buatlah media base layer agar dan seed layer agar seperti pada
tahan. Bagian dasar petri dibuat garis dengan spidol untuk
membaginya menjadi 4 bagian.
b) Buat sumuran pada bagian tengah ke-4 bidang petri tersebut dengan
cara yang sama dengan no. 3).
c) Dengan menggunakan mikropipet, pada masing-masing sumuran
tersebut diinokulasikan 50 µl senyawa uji dengan kontrol
negatif/pelarut dan 4 variasi konsentrasi senyawa uji.
d) Beri label pada dasar petri secara benar
e) Inkubasikan selama 24 jam. Perhatian : inkubasi tidak dilakukan
secara terbalik! Amati zona keruh dan jernih di setiap petri.
f) Amati, gambar pertumbuhannya. Ukur diameter zona jernih di sekitar
sumuran dengan jangka sorong/penggaris. Hitung diameter zona
hambat yang terbentuk.
Catatan :
1. Langkah a dikerjakan untuk 1 golongan praktikum (dikerjakan oleh
2. praktikan meja I untuk dipakai 1 golongan praktikum).
3. Langkah b dikerjakan per meja
4. Langkah c no 2, 3, 4 :
387
5. Kel prakt 1 mengerjakan 2 & 4

2. Uji Potensi Senyawa Antibiotik Secara Difusi Paper Disk

Alat dan Bahan :
a. Alat-alat : petridish , pinset, pipet volume steril
b. Kultur murni bakteri uji dalam media NB umur 24 jam
c. Disk antibiotik (paper disk yang mengandung antibiotik penisilin/ampisilin)
sebagai kontrol positif
d. Disk blank
e. Senyawa uji berupa antibiotik (misalnya Amoxycilllin sirup kering) dengan variasi
f. Media nutrien agar (NA)
g. Deret larutan standar Mac Farland
h. Buffered Pepton Water (BPW) untuk pembuatan suspensi bakteri uji
i. Aquadest steril sebagai pelarut senyawa uji
j. Alkohol 70 %
Cara kerja :
a. Preparasi Mikroba Uji
1) Siapkan kultur murni bakteri uji.
2) Siapkan deret larutan standard Mac Farland
3) Buat 10 ml suspensi bakteri uji menggunakan media BPW dan setarakan
kekeruhannya dengan larutan standar Mac Farland II (konsentrasi mikroba
6. 108 CFU/ml).
b. Pengujian potensi antibiotik secara difusi paper disk
1) Pembuatan kontrol kontaminasi media
a) Siapkan 20 ml media NA dan tuang secara aseptis kedalam petri
steril, biarkan memadat
b) Beri label pada dasar petri : kel. prakt/tgl/perlakuan.
2) Pembuatan kontrol pertumbuhan bakteri uji
a) Ambil 0,2 ml suspensi bakteri uji, inokulasikan ke dalam petri berisi
media NA secara spread plate (harus merata di seluruh permukaan
media) dan biarkan permukaan agar mengering.
b) Beri label pada dasar petri : kel. prakt/tgl/perlakuan/nama bakteri uji
388
3) Pengujian potensi antibiotik secara difusi paper disk

a) Siapkan petri berisi 20 ml media nutrien agar (NA)
b) Ambil 0,2 ml suspensi bakteri uji, inokulasikan ke media NA secara
merata dengan cara spread plate dan biarkan permukaan agar
mengering.
c) Secara aseptik, letakkan 1 disk antibiotik (disk yang mengandung
penisilin/ampisilin) dan 4 disk blank (yang mengandung berbagai
konsentrasi senyawa uji antibiotik sebanyak 20 µl), serta 1 disk blank
kontrol negatif (disk yang mengandung pelarut) pada permukaan
media NA.
d) Setiap paper disk diinokulasikan dengan jarak tertentu secara teratur,
agar supaya tidak terjadi overlapping zona hambat yang terbentuk.
e) Beri label pada dasar petri secara benar
f) Inkubasikan selama 24 jam. Amati zona keruh dan jernih di setiap
petri
g) Amati, gambar pertumbuhannya dan ukur diameter zona jernih yang
terbentuk di sekitar paper disk dengan jangka sorong/penggaris.
Latihan
1) Apa perbedaan metode difusi sumuran dan difusi paper disk yang Anda kerjakan di
atas?
2) Mengapa pada preparasi mikroba uji diperlukan larutan standar?
Petunjuk jawaban latihan

Bacalah prosedur kerja.
Tes 2
Sebutkan Alat dan bahan Uji Potensi Senyawa Antibiotik Secara Difusi Paper Disk
389
Topik 4
Uji Kualitas Median
Sukini,S.ST., MH.Kes
A. Pengantar
Pengendalian kualitas kultur media pada media komersial . Semua media akan
diperiksa secara visual untuk perubahan warna, adanya pengendapan/gumpalan, lisis darah,
kontaminasi semua pengamatan pada media
1. NA (Nutrien Agar)
2. PCA (Plate Count Agar)
3. Endo Agar
4. MC (Mac Conkey)
5. LB (Lactose Broth)
6. BGLB (brilliant green lactose broth)
B. Keterkaitan dengan matakuliah lain adalah ada teknik uji kualitas medan ini akan
diperoleh eksperimen yang terkait dengan uji sensitivitas pada bakteri pada materi
sebelumnya. Uji kualitas media dimulai dari tahap sterilisasi sampai proses berikutnya
sampai media siap untuk digunakan.
1. Dilakukan sterilisasi dengan menggunakan autoclave dengan suhu 1210 C
tekanan 1 atm dengan lama waktu 15 menit
a. Ditambahkan indicator sterilitas pada media atau peralatan yang akan
disterilisasikan dengan autoclave. Catat indicator sebelum melakukan
sterilisasi dan sesudah melakukan sterilisasi.
b. Secara mikrobiologi bila ada
Steam: Geobacillus stearothermophilus ATCC® # 7953
Panas kering: Bacillus atrophaeus ATCC® # 9372
Radiasi: Bacillus pumilus ATCC® # 27142
Ethylene Oxide: Bacillus atrophaeus ATCC® # 9372
Secara biokimia dengan menggunakan selotif indicator sterilitas
2. Dilakukan inkubasi pada suhu 370C selama 24 jam kemudian diamati ada
tidaknya pertumbuhan mikroorganisme.
3. Kemudian dilakukan penyimpanan pada lemari es dengan rentang suhu 2-80C,
sebelum digunakan sebagai media pertumbuhan.
390
C. Quality control media yang sudah disimpan dalam almari es dengan

Yang perlu disiapkan kultur yang di inkubasi pada suhu 35-370C selama 18 – 48 jam.
a. NA dan PCA
Tabel: 1.2
Inoculum
Strains Pertumbuhan %
(cfu/ml)
Staphylococcus aureus 103-105 ≥ 70 %
ATCC 25923
Streptococcus 103-105 ≥ 70 %
pyogenes ATCC 12344
Streptococcus 103-105 ≥ 70 %
pneumoniae ATCC
6301
Escherichia coli ATCC 103-105 ≥ 70 %
25922
Shigella flexneri ATCC 103-105 ≥ 70 %
12022
b. Endo Agar ditumbuhi dengan bakteri sebagai berikut
Tabel:1.3
Strains ATCC Pertumbuhan Warna Coloni

Escherichia coli 25922 Tumbuh Colonni warna pink ,
kemilau hijau metallic.
Salmonella 14028 Tumbuh Koloni tidak berwarna
choleraesuis
Enterococcus 29212 Pertumbuhan Koloni kecil, merah muda
faecalis terhambat
c. MC agar
Tabel: 1.4
Strains ATCC Pertumbuhan Warna Coloni

Escherichia coli 25922 Tumbuh Merah muda dengan
kabut putih
Salmonella 14028 Tumbuh Tanpa warna
choleraesuis
Enterococcus, Tumbuh Berlendir, merah muda
Klebsiella
391
d. Uji kualitas media LB

Tabel:1.5
Strains ATCC Pertumbuhan Gas

Escherichia coli 8739 Tumbuh +
Salmonella 14028 Tumbuh -
choleraesuis
Klebsiella 13883 Tumbuh +
pneumoniae
Tabel:1.6
Inokulasi Jumlah Volume Jumlah Konsentrasi

(ml) Medium di medium dan penimbangan
tabung (ml) inokulum (ml) laktosa (g/l)
1 10 11 13 1 kali lipat
10 10 20 26 2 kali lipat
100 50 150 39 3 kali lipat
Dilakukan inkubasi 24 – 48 jam dengan suhu 350C diamati adanya gelembung gas
pada durham
A. Uji Kualitas Media BGLB

Tabel:1.7
B. Megisi
Tabel 1.7
Strains ATCC Inoculum (cfu/ml) Pertumbuhan Gas

Enterobacter 13048 103-105 Tumbuh +
aerogenes
Enterococcus 19433 103-105 Terhambat -
faecalis
Escherichia coli 25922 103-105 Tumbuh +
Staphylococcus 25923 103-105 Terhambat -
aureus
392
C. UJI SENSITIFITAS BAKTERI

Prinsip pengujian difusi disk telah digunakan di laboratorium mikrobiologi selama lebih
dari 70 tahun. Alexander Fleming menggunakan varian dari teknik ini ketika bekerja
dengan penisilin pada 1950-an. Pada saat itu, ada banyak prosedur yang berbeda
digunakan untuk mikrobiologi.
Langkah yang dilakukan

1. Pilih koloni
2. Siapkan suspensi inokulum
3. Standardisasi suspensi inokulum
4. piring menyuntik
5. Tambahkan disk antimikroba
6. piring Inkubasi
7. Ukur zona penghambatan
8. Menafsirkan hasil
Gambar 4.1-Memilih koloni yang terisolasi untuk inokulum

Sumber : Jawetz, and Melnick, (1996)
Pemilihan koloni sebaiknya dilakukan pada cawan petri yang sudah terpisah koloninya
diambil satu koloni saja dengan menggunakan ose atau kapas seteril.
Mempersiapkan dan Standardisasi inokulum Suspensi Ada dua metode untuk
persiapan inokulum: langsung dari suspense dan pertumbuhan dari pertumbuhan log. Hanya
metode suspensi koloni langsung akan memberikan informasi yang akurat untuk beberapa
organisme. Untuk kedua metode, kekeruhan suspensi uji harus distandardisasi dengan
standar 0,5 McFarland (dengan kisaran 1,5 X 108 CFU / ml). suspensi yang disesuaikan harus
digunakan sebagai inokulum dalam waktu 15 menit.
CATATAN: standar McFarland yang terbuat dari barium sulfat atau partikel lateks, jika
menggunakan barium sulfat, vortex sebelum digunakan, jika menggunakan lateks,
membalikkan untuk campuran. Resep untuk 0,5 McFarland standar dalam Lampiran.
393
1. Persiapan Suspensi
Untuk metode suspensi koloni langsung, koloni tidak boleh lebih tua dari 18-24 jam.
Standarisasi inokulum pada saat yang sama Anda mempersiapkan suspensi. Dengan
larutan garam atau kaldu (misal Mueller-Hinton atau kedelai tryptic). Kemudian,
menyesuaikan inokulum untuk kekeruhan setara dengan 0,5 McFarland standar.
2. Metode Log
Metode fase log digunakan untuk sebagian besar organisme yang tumbuh dengan
cepat kecuali staphylococci. login fase pertumbuhan. Sebuah kurva pertumbuhan
untuk bakteri yang khas ditunjukkan di bawah ini. Log pertumbuhan fase terjadi
setelah 2-8 jam inkubasi. Setelah inkubasi, menyesuaikan kekeruhan untuk
mencocokkan bahwa dari 0,5 McFarland standar. Pastikan Anda tahu bagaimana untuk
menyesuaikan dan standardisasi inokulum.
Gambar 4.2-Plot pertumbuhan fase log dalam kaldu

Jawetz, and Melnick, 1996
a. Persiapan cawan Petri

Sebelum membuka cawan petri, memungkinkan disk untuk menyeimbangkan
suhu ruang selama satu sampai dua jam untuk meminimalkan kondensasi dan
mengurangi kemungkinan kelembaban mempengaruhi konsentrasi agen
antimikroba. Memungkinkan Mueller-Hinton Agar (MHA) pada cawan petri
untuk menghangatkan suhu kamar sehingga kelebihan air akan diserap ke dalam
media. Anda dapat mempercepat langkah ini dengan menempatkan piring di
inkubator dengan kelopak mereka terbuka selama 10-15 menit. Memastikan
piring MHA memiliki kedalaman yang tepat dari 4 mm. Vortex suspensi
organisme untuk memastikan itu tercampur. Kemudian, celupkan segar, steril
kapas-tipped swab ke dalam suspensi. Membuang kelebihan cairan dari swab
dengan menekan sisi tabung.Inokulasi Plate di Mulai di bagian atas pelat MHA
mengoles permukaan dengan spons. Penutup dengan bolak-balik dari ujung ke
ujung. Putar piring sekitar 60 ° dan ulangi prosedur swabbing. Putar cawan 60 °
lagi dan usap seluruh cawan ketiga kalinya. Ini akan memastikan bahwa inokulum
yang merata didistribusikan. Lakukan Inkubasi plate dalam waktu 15 menit.
394
Gambar: 4.3 Teknik meratakan bakteri dengan kapas seteril

Meletakkan dis, (Jawetz, and Melnick, 1996)
Menerapkan Disk antimikroba dalam waktu 15 menit dari inokulasi cawan MHA.
Disk dapat ditempatkan pada cawan satu per satu atau dengan multichannel
sebuah disk yang berisi disk biasanya, sampai dengan 12 disk dapat diterapkan
untuk cawan diameter 150 mm atau sampai dengan 5 disk di cawan 100 mm.
Tekan setiap disk dengan kuat untuk memastikan lengkap, tingkat kontak dengan
agar-agar. Jangan lupa langkah ini atau disk mungkin berakhir di tutup piring
setelah inkubasi.
Gambar 4.4 Pembacaan hasil 1

(Jawetz, and Melnick, 1996)
Tempatkan pengukur metrik melintasi zona penghambatan, dengan diameter

terluas, dan mengukur dari satu tepi zona ke sisi yang lain. Gunakan pengukuran
milimeter. Diameter disk sebenarnya akan menjadi bagian dari jumlah itu. Jika
tidak ada zona sama sekali, laporkan sebagai 0 --- meskipun cakram itu sendiri
395
sekitar 7 mm. Diameter zona dilaporkan dalam milimeter, mendongak pada

grafik, dan hasilnya dilaporkan sensitif, tahan, atau menengah. Catat hasilnya
untuk tabel Anda, serta tabel lainnya, dalam tabel.
Gambar 4.5 Pembacaan hasil 2

(Jawetz, and Melnick, 1996)
396
Tabel 1.2
GUIDELINES CHART
Antibiotic
Resistant Intermediate Susceptible
(Antimicrobial DISC CODE
(< or = mm) (mm) (= or > mm)
Agent)
Amoxicillin (other) AMC <13 14-17 >18
Amoxicillin (Staph) AMC 19 20
Ampicillin (other) AM 11 12-13 14
Ampicillin (Staph) AM 28 29
Carbenicillin (other) CB 17 18-22 23
Carbenicillin CB 13 14-16 17
(Pseudomonas)
Cefoxitin FOX 14 15-17 18
Cephalothin CF 14 15-17 18
Chloramphenicol C 12 13-17 18
Ciprofloxacin CIP-5 15 16-20 21
Clindamycin CC-2 14 15-20 21
Enoxacin ENX-10 14 15-17 18

(Fluoroquinolone,
2nd gen.)
397
GUIDELINES CHART
Antibiotic
Resistant Intermediate Susceptible
(Antimicrobial DISC CODE
(< or = mm) (mm) (= or > mm)
Agent)
Erthromycin E 13 14-22 23
Gentamycin GM 12 13-14 15
Kanamycin K-30 13 14-17 18
Methicillin (Staph) M(orDP) 9 10-13 14
Oxacillin (Staph) OX 10 11-12 13
Penicillin G P 14 15
(Enterococcus)
Penicillin G (Staph) P 28 29
Streptomycin S-10 14 15-20 21
Sulfamethoxazole- SXT 10 11-15 16

trimethoprim
Tetracycline Te-30 14 15-18 19
Tobramycin NN-10 12 13-14 15
Vancomycin Va-30 9 10-11 12
398
Kunci Jawaban Tes
Tes 1
No Sifat Perbedaan Relatif

Gram Positif Gram Negatif
1 Komposisi terhadap Kandungan lipid rendah Tinggi11-22
dinding sel (1-4 %)
2 Ketahanan terhadap Lebih sensitif Lebih tahan lama
inisilin
3 Penghambat oleh Lebih dihambat Kurang dihambat
pewarna biasa
4 Kebutuhan nutrient Kebanyakan spesies relatif Relatif sederhana
komplek
5 Ketahanan terhadap Lebih tahan Kurang tahan
perlakuan fisik
Tes 2
Desinfektan tingkat rendah dapat dibagi menjadi 2 golongan:
1) Golongan pertama
Desinfektan yang tidak membunuh virus HIV dan Hepatitis B.
Klorhexidine (Hibitane, Savlon).
Cetrimide (Cetavlon, Savlon).
Fenol-fenol (Dettol).
Desinfektan golongan ini tidak aman untuk digunakan :
Membersihkan cairan tubuh (darah, feses, urin dan dahak).
Membersihkan peralatan yang terkena cairan tubuh misalnya sarung tangan yang
terkena darah.
Klorheksidine dan cetrimide dapat digunakan sebagai desinfektan kulit fenol-fenol
dapat digunakan untuk membersihkan lantai dan perabot seperti meja dan almari
namun penggunaan air dan sabun sudah dianggap memadai.
2) Golongan kedua
Desinfektan yang membunuh Virus HIV dan Hepatistis B.
Desinfektan yang melepaskan klorin. Contoh : Natrium hipoklorit (pemutih, eau de
javel), Kloramin (Natrium tosilkloramid, Kloramin T) Natrium Dikloro isosianurat
(NaDDC), Kalsium hipoklorit (soda terklorinasi, bubuk pemutih)
Desinfektan yang melepaskan Iodine misalnya : Povidone Iodine (Betadine, Iodine
lemah)
Alkohol : Isopropil alkohol, spiritus termetilasi, etanol.
Aldehid : formaldehid (formalin), glutaraldehid (cidex).
399
Tes 3
Alat dan Bahan :
a. Alat-alat : petridish , pinset, pipet volume steril
b. Kultur murni bakteri uji dalam media NB umur 24 jam
c. Disk antibiotik (paper disk yang mengandung antibiotik penisilin/ampisilin) sebagai
kontrol positif
d. Disk blank
e. Senyawauji berupa antibiotik (misalnya Amoxycilllin sirup kering) dengan variasi
f. Media nutrien agar (NA)
g. Deret larutan standar Mac Farland
h. Buffered Pepton Water (BPW) untuk pembuatan suspensi bakteri uji
i. Aquadest steril sebagai pelarut senyawa uji
j. Alkohol 70 %
Tes 4
Baca persiapan suspensi
Sebutkan langkah-langkah uji sensitivitas bakteri
1. Pilih koloni
2. Siapkan suspensi inokulum
3. Standardisasi suspensi inokulum
4. piring menyuntik
5. Tambahkan disk antimikroba
6. Piring Inkubasi
7. Ukur zona penghambatan
8. Menafsirkan hasil
400
Daftar Pustaka
Anonim., 2010. Kombinasi Antimikroba.
Available at: http://www.medicastore.com/antibiotika/kombinasi_antimikroba. Last

opened: 24 April 2010.
Craig, W.A. 1998. Choosing An Antibiotic On The Basis of Pharmacodynamics. New England.
Ear NoseThroat J.
Dwidjoseputro, D. 2003. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta. Djambatan.
Jawetz, Melnick, Adelberg’s. 2005. Mikrobiologi Kedokteran. Jakarta. Salemba Medika.

Katzung, B.G. 2004. Farmakologi Dasar dan Klinik. Jakarta. Penerbit Buku Kedokteran
EGC.
Lim, D. 1998. Microbiology 2nd Edition. United of States America. McGraw Hill.
Mc Evoy, G.K., J.L. Miller, J. Shick and E.D. Milikan. 2002. AHFS Drug Information. USA.
American Society of Health.
Pelczar, M., E.C.S. Chan. 2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Penerbit Universitas Indonesia.
Jakarta.
Tjay, Tann Hoan., Rahardja, Kirana. 2008. Obat-Obat Penting. Jakarta. Penerbit Elexmedia
Komputindo.
Van Saene, H.K.F, Silvestri L, De la Cal MA. 2005. Infection Control In The Intensive
Care Unit. 2nd ed. Milan. Springer.
disachem.blogspot.com/2012/04/laporan-praktikum-mikrobiologi-uji_28.html
28 April 2012
http://yayukandina.blogspot.co.id/2013/04/uji-potensi-antibiotik.html,
diunduh 7 September 2017.
401

Mikrobiologi Bab1-9

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Mikrobiologi Bab1-9

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Hak Cipta dan Hak Penerbitan dilindungi Undang-undang

Cetakan pertama, Oktober 2017

Penulis : 1. Rr. Meganada Hiaranya Putri, M.Kes

Pengembang Desain Instruksional : Mutimanda Dwisatyadini, M.Kep.

Desain oleh Tim P2M2 :

Jumlah Halaman : 401

BAB I: MIKROBIOLOGI DAN BAKTERIOLOGI 1

PETUNJUK JAWABAN TES ........................................................................................ 65

BAB II: VIROLOGI DAN IMUNOLOGI 70

PETUNJUK JAWABAN TES ........................................................................................ 141

PETUNJUK JAWABAN TES ........................................................................................ 184

BAB IV: PENGENALAN ALAT DAN BAHAN PRAKTEK LABORATORIUM 188

PETUNJUK JAWABAN TES ........................................................................................ 232

BAB V: PRAKTEK MIKRIBIOLOGI PEMBUATAN MEDIA DAN STERILISASI 234

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................... 260

BAB VI: MEKANISME PEMBIAKAN MIKROORGANISME 261

BAB VII: PEWARNAAN BAKTERI 307

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................... 338

BAB VIII: FLORA NORMAL PADA RONGGA MULUT 339

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................... 369

BAB IX: BAKTERI DAN UJI POTENSI SENYAWA ANTIMIKROBA

PETUNJUK JAWABAN TES ........................................................................................ 399

Kita mungkin kurang menyadari bahwa mikroorganisme terdapat dimana-mana

Gambar 1.1 : Antony van Leeuwenhoek (1632

Tanggal 17 September 1683 Antoni mengirimkan gambarnya yang pertama tentang

Teori Abiogenesis (Generatio Spontanea) vs Biogenesis

Ditemukannya dunia organisme yang tidak nampak membangunkan minat terhadap

Louis Pasteur (1822-1895)

Tahun 1879 - 1880 Pasteur membuktikan bahwa hewan (dalam percobaannya

Untuk memperdalam pemahaman Anda mengenai materi di atas, kerjakan latihan

Petunjuk Jawaban Latihan

Mikrobiologi adalah ilmu yang mempelajari mikroorganisme yang meliputi organisme

2) Percobaan yang dilakukan oleh Lazarro Spalanzani menyimpulkan bahwa sumber

4) Ilmuwan yang menemukan cara membunuh endospore dengan melakukan pemanasan

Mikroorganisme merupakan suatu kelompok organisme yang tidak dapat dilihat

A. TAKSONOMI DAN KLASIFIKASI BAKTERI

Tabel 1.1 Dua golongan utama sel organisme

Sumber : https://www.slideshare.net, diunduh tanggal 7 Agustus 2017

Bakteri dan bakteri hijau diklasifikasikan sebagai tanaman primitif karena :

I, II dan III termasuk kedalam Eubacteria

Klasifikasi Berdasarkan Genetika

IV. Polimer-polimer pada sel

Klasifikasi Berdasarkan Ekspresi Fenotipe :

Klasifikasi Berdasarkan Bentuk Sel :

Klasifikasi Terhadap Sifat Pewarnaan :

Klasifikasi berdasarkan Sifat Pertumbuhan :

Klasifikasi berdasarkan metabolisme :

Tabel 1.2 Jenjang Taksonomi

Jenjang Resmi Contoh

3. Sel Prokariotik dan Sel Eukariotik

Ciri-ciri sel prokariotik adalah:

Tabel 1.3 Perbedaan Sel Prokariotik dan Eukariotik

Ciri Sel Prokariotik Sel Eukariotik

Ciri Sel Prokariotik Sel Eukariotik

B. MORFOLOGI DAN STRUKTUR BAKTERI

Gambar 1.5 Ukuran koloni bakteri

Gambar 1.7 Koloni bakteri yang transparent dan yang opaque

Bentuk, Pinggiran dan Peninggian (Elevasi) koloni bakteri

Gambar 1.8 Bentuk

Gambar 1.9 Formasi Bakteri berbentuk KKokus

Gambar 1.10 Staphylococcus sp dilihat Gambar 1.11 Streptococcus sp dilihat

Gambar 1.12 Formasi bakteri berbentuk batang

Gambar 1.13 Bacillus anthraxis dibawah