Analisis Tanah dan Tanaman

Agung Ramadhan

( 2020232001 )

PROGRAM MAGISTER ILMU TANAH

FAKULTAS PERTANIAN

UNIVERSITAS ANDALAS PADANG

2020
1. Enzim Urease
Urease (urea amodohydrolase) merupakan enzim yang mengkatalis proses
hidrolisis urea menjadi amonia dan karbon dioksida secara spontan 1014 kali
lebih cepat dibandingkan reaksi tanpa katalis. Enzim urease dapat diisolasi dari
berbagai sumber seperti jamur, bakteri, alga, dan tumbuhan. Enzim urease banyak
terkandung di dalam tumbuhan biji-bijian seperti biji pare (Momordica charantia),
biji Syrian mesquite (Prosopis farcta), dan buncis (Cicer arietinum L.)
(Zusfahaira, et al. 2018)
Enzim urease secara alami terkandung di dalam tanah, sehingga dapat
mempercepat proses reaksi hidrolisis urea. Mula-mula urea terurai menjadi
amonium. Reaksi hidrolisis menyebabkan kenaikan pH tanah secara drastis dan
suplai nitrogen (N) di tanah menjadi abnormal. Sebagian amoniun digunakan oleh
mikroorganisme sebagai sumber energi atau sumber nitrogen (N), sementara
sisanya tervolatilisasi menjadi amonia secara besarbesaran. Melalui reaksi
hidrolisis, enzim urease diketahui sebagai penyebab utama terjadinya pencemaran
lingkungan dan kerugian ekonomi di lahan pertanian.

A. Pengukuran aktivitas enzim urease

Metode 1
Uji aktivitas urease (Jayaraman and Jayaraman, 2004) dilakukan sebagai
berikut: sebanyak 1 mL urea konsentrasi 0,1% ditambah 1 mL larutan buffer
fosfat pH 7 dimasukkan ke dalam tabung sampel. Sebanyak 0,05 mL larutan
urease ditambahkan. Tabung diinkubasi pada suhu 35 ºC selama 15 menit. Tabung
didinginkan dengan es. Larutan pada tabung sampel ditambah 1 mL 2/3 N H2SO4
untuk menghentikan aktivitas enzim urease dan ditambah 1 mL Na-Wolframat
untuk menyempurnakan kerja H2SO4. Tabung blanko diisi sebanyak 3 mL
akuades. Kedua tabung disentrifuse selama 15 menit dan diambil supernatan
dengan penyaringan. Ulangan dilakukan sebanyak 3 kali. Sebanyak 1,5 mL
larutan masing-masing tabung sampel dan blanko diambil. Masing-masing larutan
sampel dan blanko selanjutnya ditambah 250 µL reagen Nessler. Larutan
kemudian diukur serapannya menggunakan spektrofotometer UV -Vis pada
λmaks 500 nm. Estimasi urease dilakukan menggunakan kurva standar
ammonium sulfat. Satu unit aktivitas didefinisikan sebagai “banyaknya ammonia
yang terbentuk (µmol) per mL per menit dari hasil hidrolisis urea oleh urease”.

Metode 2
Aktivitas urease di ukur menurut Kandeler (1996) yang di modifikasi,
yaitu dengan menimbang 5 g tanah dari setiap sampel,kemudian masing masing
di masukan kedalam botol Erlemeyer 100 ml, yang terdiri dari kelompok
perlakuan dan kontrol. Pada perlakuan di tambahkan 2,5 ml substrat urea (0,48
g urea/100 ml H2O) sedangkan kelompok kontrol di tambahkan 2,5 ml H2O,
selanjutnya botol di beri penutup dan di inkubasi selama 37 oC selama 120 menit.
Setelah di inkubasi, pada kelompok perlakuan di berikan 2,5 ml H2O, dan pada
kelompok kontrol di berikan 2,5 ml substrat urea. Seluruh botol di berikan 50 ml
larutan 1M KCl, lalu di kocok 30 menit, dan di saring sehingga di perileh filtrat
ekstrak. Sebanyak 1 ml dari masing masing filtrat ekstrak di masukan ke dalam
tabung reaksi, ditambahkan 0,2 ml pereasi Nasler dan 9 ml H2O, dikocok,
lalu di diamkan selama 10 menit, sebelum arbsobansinya diukur
spektrofotometer pada panjang gelombang 420 nm. Aktifitas urea dinyatakan
dengan unit.g-1 dengan rumus sebagai berikut:

Keterangan
S = Konsentrasi Sampel (µg-1)
C = Konsentrasi kontrol (µg-1)
10 = Faktor pengeceran
55 = Volume ekstrak (ml)
5 = Bobot tanah (g)
100.%-1dm = Faktor bobot kering tanah
a = Botot molekul NH4+(g.mol-1)
b = waktu inkubasi(jam)

sumber : (Rahmansyah et al. 2002)

2. Enzim dehidrogenase
Dehidrogenase merupakan enzim intraseluler yang dihasilkan oleh sel
mikroorganisme. Aktivitas mikroba tanah secara umum dapat diketahui dengan
mengukur aktivitas enzim dehidrogenasenya karena dehidrogenase ada di semua
mikroorganisme (Gil-Sotres et al., 2005). Meskipun hubungan antara ketersediaan
hara dengan aktivitas enzim masih sulit untuk ditetapkan karena tergantung pada
aktivitas spesifik dan total biomass mikroba (Allison et al., 2007), namun aktivitas
enzim dapat digunakan sebagai indikator kualitas tanah. Trevors J.T. (1984)
menyatakan aktivitas dehidrogenase dapat digunakan sebagai indikator sistem
redoks mikroba dan aktivitas oksidatif tanah. Sementara Gil-Sotres et al., (2005)
menyatakan aktivitas dehidrogenase dapat digunakan untuk mengetahui pengaruh
logam berat dan pestisida pada tanah serta untuk mengetahui tingkat perbaikan
tanah terdegradasi. Aktivitas dehidrogenase juga dapat digunakan sebagai
indikator dampak manajemen pengelolaan tanah terhadap kualitas tanah dan
komunitas mikroba tanah (Acosta-Martinez et al., 2007)
A. Pengukuran aktifitas enzim dehidrogenase
Metode 1

a). Alat dan bahan yang diperlukan dalam melaksanakan analisis ini adalah :
Alat
- Labu takar 100 ml dan 1.000 ml
- Glass vial
- Kertas saring
- Vortex
- Pipet mikro 1.000 µLdan pipet serologis 5 ml, 10 ml
- Spektrofotometer dan kuvet

Bahan
- Bufer Tris-HCl (0,1 M)
Larutkan 12,11 g tris-(hydroxymethyl)-aminomethane dengan 700 ml akuades
dalam labu takar 1.000 ml dan sesuaikan pH larutan dengan HCl 25%
menjadi:
pH 7,8 untuk tanah asam (pH< 6)
pH 7,6 untuk tanah netral (pH 6-7)
pH 7,4 untuk tanah-tanah yang kayak akan karbonat (pH> 7)
- Lengkapi volume larutan menjadi 1.000 ml dengan akuades. Bungkus
wadah dengan aluminium foil.
- Larutan substrat TTC 3%
Larutkan 3 g TTC dengan bufer Tris-HCl (pH bergantung pH contoh tanah)
lalu lengkapi volumenya menjadi 100 ml. Bungkus wadah dengan
aluminium foil, simpan dalam refrigerator (suhu 4oC).
- Metanol
- Larutan stok standar (500 µg TPF ml-1)
Larutkan 50 mg TPF dengan metanol dalam labu takar 100 ml, lalu
lengkapi volumenya menjadi 100 ml dengan metanol.

b). Prosedur
Pengukuran harus dilakukan di ruangan dengan cahaya minimum
(tanpa nyala lampu), karena TTC dan TPF sangat peka terhadap cahaya. Semua
pengukuran dilakukan duplo dengan 1 blangko.
- Timbang 5 g tanah dalam glass vial. Koreksi kadar air terlebih dahulu (50%
WHC)
- Tambahkan 2 ml TTC dan 2 ml Buffer Tris-HCl (untuk blangko, tambahkan 4
ml Buffer tris-HCl tanpa TTC).
- Tutup vial lalu divortek dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C dalam
keadaan gelap.
- Setelah inkubasi, tambahkan 20 ml metanol ke dalam masing-masing tabung
dan dishaker selama 2 jam dalam keadaan gelap lalu semua tabung dikocok
pada suhu ruang selama 2 jam dalam keadaan gelap dengan shaker linier 125
rpm.
- Suspensi tanah di saring dengan kertas saring Whatman no.5 yang telah
dibasahi dengan metanol. Filtrat ditampung dalam labu volumetrik 50 ml.
- Untuk mengekstrak semua produk TPF, tanah dalam vial di bilas 2 kali (@ 10
ml) dengan metanol dan terakhir kertas saring juga dibilas dengan metanol (3
pipet).
- Filtrat dalam labu volumetrik ditetapkan volumenya (V) dengan metanol.
- Optical density (absorbansi) filtrat diukur pada λ = 385 nm

c). Kurva kalibrasi

Pipet 0,125 ml; 0,25 ml; 0,375 ml; 0,5 ml; 0,75 ml; 1,0 ml; 1,25 ml dan 1,5
ml larutan standar TPF dalam labu takar (25 ml) dan tepatkan volumenya 25 ml
dengan metanol untuk mendapatkan konsentrasi 2,5 ppm; 5 ppm; 7,5 ppm; 10
ppm; 15 ppm; 20 ppm; 25 ppm; dan 30 ppm. Ukur absorbansi semua larutan
dengan spekrofotometer pada panjang gelombang 485 nm. Kurva standar adalah
hubungan antara nilai absorbansi (Y) dengan konsentrasi TPF (X).

d). Perhitungan :
- Tentukan persamaan linier kurva standar Y = ax + b, r≥ 0,99 dimana y adalah
absorbansi dan x adalah konsentrasi TPF
- Tentukan konsentrasi TPF sampel (x) dengan persamaan tersebut
- Hitung nilai aktivitas dehidrogenase (AD) sampel dengan persamaan berikut:

Sumber : (Damarmoyo. 2015)

3. Enzim Selulase
Enzim selulase adalah suatu sistem enzim yang terdiri atas tiga tipe enzim
utama yaitu kompleks endoβ-1,4-glukanase (CMCase, Cx selulase endoselulase,
atau carboxymethyl cellulase), kompleks ekso-β-1,4- glukanase (aviselase,
selobiohidrolase, C1 selulase), dan β-1,4- glukosidase atau selobiase. Munifah
(2011) menambahkan bahwa enzim selulase adalah enzim yang dapat
menghidrolisis selulosa dengan memutus ikatan glikosidik β-1,4 dalam selulosa,
selodektrin, selobiosa, dan turunan selulosa lainnya menjadi gula sederhana atau
glukosa.
 Pemanfaatan enzim selulase dari bakteri dapat memberikan solusi dalam
masalah pencemaran yakni mengurangi jumlah limbah selulosa seperti timbunan
daun di area pembuangan akhir, limbah pertanian, rumput laut di tepi pantai serta
dapat menjadi nilai tambah terhadap pemanfaatan limbah menjadi olahan pupuk
organik. Hal ini dikarenakan limbah organik merupakan bagian dari masalah
lingkungan yang berpotensi menjadi faktor pencemar lingkungan apabila
dibiarkan dan tidak dikelola dengan baik dan benar. Kesuluruhan bahan tersebut
dapat dimodifikasi untuk memproduksi berbagai bahan yang berguna untuk sektor
pertanian dan biogas, dengan menggunakan enzim selulose. Beberapa penerapan
produk organik yang bermanfaat untuk pertanian diantaranya MOL (Local
Microorganism), POC (pupuk organic Cair), pupuk organic padat dan bokasi serta
pestisida organik.

A. Pengukuran aktivitas enzim selulase

Pengukuran enzim selulase dilakukan dengan mengukur kadar gula
reduksi, yang dilakukan terhadap 3 kelompok tabung reaksi yang terdiri dari
sampel, kontrol dan blanko. Pada sampel, sebanyak 1 mL enzim ekstrak kasar
ditambah dengan 1 mL larutan CMC 1%, kemudian divortex dan diinkubasi pada
suhu ruang selama 60 menit. Selanjutnya sampel ditambahkan 2 mL DNS dan
diinkubasi pada waterbath suhu 100 oC selama 10 menit dan didinginkan. Pada
kontrol, sebanyak 1 mL larutan CMC 1%, ditambah 2 mL DNS lalu ditambah 1
mL enzim ekstrak kasar. Selanjutnya divortex dan diinkubasi pada waterbath suhu
100 oC selama 10 menit. Pada blanko, sebanyak 1 mL larutan CMC 1%, ditambah
dengan 2 mL DNS dan 1 mL akuades kemudian divortex dan diinkubasi pada 100
oC selama 10 menit. Setelah dingin, kemudian dilakukan pengukuran absorbansi
pada ketiga tabung menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 540
nm
Satu unit aktivitas enzim selulase adalah jumlah enzim yang dibutuhkan
untuk melepas 1 μmol gula pereduksi per menit pada kondisi percobaan dengan
perhitungan sebagai berikut:
[ X sampel− X kontrol]x FPx 103
Aktivitas Selulase (U/mL) =
Waktu inkubasi x BM glukosa

Ket:
Faktor pengenceran : 1000
Waktu inkubasi : 60 menit
BM glukosa : 180,18 mg/mL

Sumber: (H. Murtiayningsih dan M. Hazmi. 2017)

4. Enzim Protease
Enzim protease merupakan enzim yang berfungsi menghidrolisis ikatan
peptida pada protein menjadi oligopeptida dan asam amino. Protease dibagi
menjadi protease serin, protease tiol, protease aspartat dan protease logam.
Beberapa mikroba diketahui sebagai penghasil protease untuk aplikasi komersial
yakni Bacillus, Lactobacillus, Pyrococcus, Termonospora Rhizopus, Mucor,
Endothia, dan Aspergil-lus (Ward, 2009; Sumardi et al., 2016).

A. Uji aktivitas protease

Aktivitas protease diukur dengan metode (Bergmeyer & Grassl, 1983)
menggunakan kasein hammersten sebagai substrat (2% casein dalam 0,01M
larutan buffer fosfat pH 7,0). Sebanyak 0,5 mL supernatan yang mengandung
larutan enzim protease ditambahkan pada 0,1 mL larutan 0,01 M buffer fosfat pH
7. Campuran reaksi diinkubasikan kembali pada suhu 37°C selama 10 menit.
Reaksi dihentikan dengan menambahkan 0,5 mL 0,1 M trichloroacetic acid
(TCA). Selanjutnya supernatan dipisahkan dari endapan dengan sentrifuse pada
suhu 4°C dengan kecepatan 10.000 rpm selama 10 menit. Sebanyak 0,38 mL
filtrat ditambah dengan 1,25 mL 0,4 M natrium karbonat kemudian ditambahkan
0,25 mL reagen folin ciocalteau dan diinkubasikan kembali selama 20 menit.
Pembacaan optical density (OD) dilakukan pada panjang gelombang 578 nm.
Penentuan nilai blanko dilakukan dengan cara yang sama, di mana 0,5 mL sampel
protease diganti dengan 0,5 mL aquadest. Penentuan nilai standar juga dilakukan
dengan cara sama di mana 0,5 mL sampel protease diganti dengan 0,5 mL tirosin
5 mM. Satu unit (U) aktivitas enzim protease adalah banyaknya enzim yang
diperlukan untuk menghasilkan 1 µmol tirosin per menit pada kondisi pengujian.
Perhitungan aktivitas dilakukan dengan rumus adalah sebagai
berikut:

di mana:
PU : unit aktivitas protease (unit/mL)
Asp : nilai absorbansi sampel
Ast : nilai absorbansi strandar
Abl : nilai absorbansi blanko
T : waktu
5. Enzim amilase
Amilase merupakan salah satu enzim hidrolitik yang memiliki kemampuan
untuk memutuskan ikatan glikosida pada amilum. Hasil hidrolisisnya berupa
molekul-molekul yang lebih kecil seperti glukosa, maltosa, dan dekstrin. Amilase
dapat dihasilkan dari bakteri amilolitik dan jamur amilolitik yang berasal dari
tanah maupun sumber air panas. Beberapa contoh tanah yang banyak mengandung
bakteri amilolitik adalah tanah sekitar penggilingan tepung, tanah dekat
pembuangan sampah, dan tanah dekat pembuangan limbah singkong. Amilase
dapat diproduksi oleh beberapa jenis bakteri amilolitik, yaitu Bacillus aquamaris
MKSC 6.2, Bacillus amyloliquifaciens ABBD, Bacillus subtilis 65, Bacillus
licheniformis ATCC 9945a, Streptomyces sp., Geobacillus thermodenitrificans,
Klebsiela pneumoniae, Clostridium sp., Lactobacillus sp., Micrococcus sp., dan
Bacteriodes sp.

A.Uji aktivitas enzim amilase

Bakteri amilolitik diisolasi dari tanah dekat pembuangan limbah tahu,
hutan kampus, dan tanah rawa. Masing-masing sampel diambil sebanyak 1g dan
homogenat diencerkan berseri hingga enam kali (10-6) dengan akuades steril. Dari
dua pengenceran terakhir (10-5 dan 10-6) diambil 0,1 ml dan ditanam duplo
secara spread plate pada medium NA, dan diinkubasi pada suhu 31 0C selama
2x24 jam [10]. Seleksi bakteri amilolitik dilakukan dengan cara menumbuhkan
satu ose isolat yang sudah murni pada medium SA, diinkubasi pada suhu 31 oC
selama 2x24 jam. Selanjutnya lugol’s iodin ditambahkan pada permukaan bakteri
dan diamati pembentukan zona bening di sekitar koloni bakteri. Bakteri yang
positif bersifat amilolitik akan membentuk zona bening di sekitar koloni,
sedangkan bakteri yang tidak bersifat amilolitik tidak membentuk zona bening
pada sekitar koloni. Pengukuran indeks amilolitik (IA) dilakukan dengan cara
mengukur rata-rata diameter zona bening yang terbentuk di sekitar koloni
dikurangi rata-rata diameter koloni bakteri yang tumbuh, kemudian dibagi dengan
diameter koloni bakteri yang tumbuh.
Bakteri amilolitik diisolasi dari tanah dekat pembuangan limbah tahu,
hutan kampus, dan tanah rawa. Masing-masing sampel diambil sebanyak 1g dan
homogenat diencerkan berseri hingga enam kali (10-6) dengan akuades steril. Dari
dua pengenceran terakhir (10-5 dan 10-6) diambil 0,1 ml dan ditanam duplo
secara spread plate pada medium NA, dan diinkubasi pada suhu 31 0C selama
2x24 jam [10]. Seleksi bakteri amilolitik dilakukan dengan cara menumbuhkan
satu ose isolat yang sudah murni pada medium SA, diinkubasi pada suhu 31 oC
selama 2x24 jam. Selanjutnya lugol’s iodin ditambahkan pada permukaan bakteri
dan diamati pembentukan zona bening di sekitar koloni bakteri. Bakteri yang
positif bersifat amilolitik akan membentuk zona bening di sekitar koloni,
sedangkan bakteri yang tidak bersifat amilolitik tidak membentuk zona bening
pada sekitar koloni. Pengukuran indeks amilolitik (IA) dilakukan dengan cara
mengukur rata-rata diameter zona bening yang terbentuk di sekitar koloni
dikurangi rata-rata diameter koloni bakteri yang tumbuh, kemudian dibagi dengan
diameter koloni bakteri yang tumbuh.
Produksi dan isolasi amilase dilakukan dengan cara menumbuhkan satu
ose bakteri amilolitik stok ke dalam 250 mL medium basal cair, kemudian
diagitasi selama 24 jam dengan kecepatan 150 rpm pada suhu 31oC. Setelah 24
jam, suspensi bakteri disentrifugasi dengan kecepatan 5000 rpm selama 15 menit
dan dipisahkan antara supernatan dan endapannya. Bagian yang diambil adalah
supernatan yang mengandung amilase kasar.
Sebanyak 1 mL amilase kasar hasil sentrifugasi dicampur dengan 1 mL
pati 1%, kemudian diinkubasi selama 10 menit pada suhu 31 oC. Reaksi dihentikan
dengan cara menambahkan 2 mL asam 3,5 dinitrosalisilat (DNS), kemudian
dikocok menggunakan vortex dan dipanaskan dalam air mendidih selama 5 menit,
selanjutnya didinginkan di dalam air es selama 20 menit. Setelah dingin, diukur
absorbansinya menggunakan spektofotometer pada panjang gelombang 550 nm.
Penggunaan blanko mendapat perlakuan yang sama dengan sampel, tetapi
penambahan amilase dilakukan setelah campuran dipanaskan. Selanjutnya nilai
absorbansi dikonversi ke dalam kurva standar glukosa. Aktivitas amilase dihitung
berdasarkan data kadar glukosa relatif sebagai volume glukosa yang dihasilkan
oleh 1 mL filtrat kasar amilase. Besarnya satu unit aktivitas enzim dapat dihitung
menggunakan rumus sebagai berikut:

Keterangan: AE = Aktivitas enzim (Unit/mL)

MG = Miligram glukosa yang dihasilkan dari reaksi hidrolisis pati
BMG = Berat Molekul Glukosa (180)
MI = Masa Inkubasi (20 menit) (Sumber: Susilawati. 2015)
 REFERENCE

Acosta-Martı´nez, V., Cruz, L., Sotomayor-Ramirez, D., Perez-Alegria, L.. 2007.

Enzyme Activities as Affected by Soil Properties and Land Use in a
Tropical Watershed. Applied Soil Ecology 35: 35–45.
Allison, V.J., Condron, L.M., Peltzer, D.A., Richardson, S.J., Turner, B.L.. 2007.
Changes in Enzyme Activities and Soil Microbial Community Composition
Along Carbon and Nutrient Gradients at The Franz Josef Chronosequence,
New Zealand. Soil Biology & Biochemistry 39: 1770–1781.
Bergmeyer, H.U. & Grassl, F. (1983). Method of enzy- matic analysis. Third
Edition. VCH (Verlagsgesellschaft), Meinheim, Germany. Volume II
(Samples, reagents, assesment of results), p. 1-159.
Damarmoyo. K. S 2015. Aktivitas Enzim Dehidrogenase Pada Beberapa Sampel
Tanah Di Balai Penelitian Tanah Bogor. Universitas Gadjah Mada.
Yogyakarta
Gil-Sotres, F., Trasar-Cepeda, C., Leiros, M.C., Seoane, S.. 2005. Different
Approaches to Evaluating Soil Quality Using Biochemical Properties. Soil
Biology & Biochemistry 37: 877–887.
Jayaraman, J. and Jayaraman, J. 2004. Laboratory Manual in Biochemistry,
Kalyani Publishers.
Modolo, Luzia V., Aline X. de Souza, Livia P. Horta, Debora P. Araujo, and
Angelo de Fatima. "An Overview on The Potential of Natural Products as
Ureases Inhibitor: A Review." Journal of Advanced Research, 2015: 35-44.
Munifah I, Chasanah E, Fawzya YN. 2011. Screening of cellulolytic bacteria from
Indonesia’s marine environment. Di dalam: Prosiding Seminar ISISM
(International Seminar of Indonesian Society for Microbiology); Bogor, 26
Juni 2011. Bogor: Perhimpunan Mikrobiologi Cabang Bogor.
Murtiyaningsih. H. Dan Hazmi. M. 2017. Isolasi Dan Uji Aktivitas Enzim
Selulase Pada Bakteri Selulolitik Asal Tanah Sampah. Universitas
muhammadiyah Jember. Jember.
Ramansyah. M., Latupapua. H.J.D. dan Sudiana I. Made. 2002. Ragam Aktifitas
Urease Dan Fosfomonoesterase Serta Perananya Dalam Ketersediaan
Nutrisi N Dan P Pada Tanah Kebun Biologi Wamena. Pusat Penelitian
Biologi. LIPI. Bogor
Saratale, G.D., Saratale, R.G., Oh, S.E. 2012. Production and Characterization Of
Multiple Cellulolytic Enzymes By Isolated Streptomyces sp. MDS. Biomass
and Bioenergy.47: 302 -315.
Sumardi, Sutyarso, Susanto, G.N., Kurtini, T., Hartono, M., & Widhi, R.R.E.P.N.
(2016). Pengaruh probiotik terhadap kolesterol darah pada ayam petelur
(layer). Jurnal Kedokteran Hewan, 10(2), 128-131.
Susilawati. I. O., B. Ummi. M dan Riany H. 2015. Analisis Aktivitas Enzim
Amilase Yang Berasal Dari Bakteri Tanah Di Kawasan Universitas Jambi.
Universitas Jambi. Jambi.
Ward, O.P, Rao, M.B., & Kulkarni, A. (2009). Proteases production. Applied
Microbiol. Industrial, p. 495-511.
Zusfahaira, Dian Riana Ningsiha, Amin Fatonia, and Darul Santri Pertiwia.
"Pemurnian Parsial dan Karakterisasi Urease dari Biji Kacang Panjang
(Vigna unguiculata subsp sesquipedalis L.)." ALCHEMY Jurnal Penellitian
Kimia, 2018: 72-83.