ISOLASI DNA DARI BUAH PISANG

4.1.Kompetensi Dasar yang diharapkan

Setelah mengikuti percobaan ini, mahasiswa diharapkan:
1. Mampu memahami prinsip isolasi DNA dari sel tumbuhan.
2. Mampu mengisolasi dan menentukan kadar DNA dari buah berdaging lunak.

4.2. Dasar Teori

DNA (Deoksiribo asam nukleat) adalah materi genetik yang tersimpan dalam inti sel, sehingga
hanya dapat diisolasi jika sel dan membran inti selnya dipecah. Materi ini merupakan polimer
dari 4 macam nukleotida yang hanya berbeda pada komponen basanya, yaitu adenin (A), Timin
(T), Sitosin (C), dan Guanin (G). Setiap nukleotida terdiri dari 3 komponen yaitu gula
deoksiribosa, basa nitrogen, dan gugus fosfat. Adanya gugus fosfat menyebabkan DNA bersifat
polar sehingga dapat larut dalam air dan tidak larut dalam pelarut organik seperti etanol. DNA
mempunyai serapan maksimum pada panjang gelombang 260 nm, sedangkan protein
mempunyai serapan maksimum pada panjang gelombang 280 nm. DNA murni mempunyai
nilai perbandingan OD260: OD280  1,8. Larutan DNA dengan OD260 = 1 memiliki konsentrasi
50 ng/L.

4.3. Alat dan Bahan

4.3.1. Alat
1. Mortal dan pestel
2. Pisau
3. Gelas ukur 100 mL
4. Batang pengaduk
5. Tabung reaksi 2 buah
6. Rak tabung reaksi
7. Corong gelas
8. Kertas saring
9. Seperangkat spektrofotometer UV
4.3.2. Bahan
1. Buah-buahan berdaging buah lunak (pepaya, mangga, kiwi)  100 g
2. NaCl 3 g
3. Detergen cair 10 mL
4. Akuades 100 mL
5. Etanol p.a. atau etanol 96%10 mL (simpan di freezer)
4 .4. Cara kerja
1. Kuliti buah, ambil dagingnya 50 g, dan potong-potong dengan pisau sekecil mungkin.
2. Lumatkan potongan buah di dalam mortal dengan bantuan garpu hingga menjadi bubur.
3. Tambahkan 3 g NaCl dan 10 mL detergen ke dalam bubur buah, campur hingga homogen,
masukkan dalam gelas ukur 100 mL, encerkan campuran tersebut dengan akuades hingga
100 mL
4. Saring campuran dengan kertas saring, simpan filtrat yang diperoleh.
5. Masukkan 6 mL filtrat ke dalam tabung reaksi, kemudian alirkan secara perlahan melalui
sisi dalam tabung 9 mL etanol dingin. (Jangan dikocok)
6. Diamkan hingga terjadi presipitasi DNA yang berupa benang-benang halus dipermukaan
etanol dan dapat dipindahkan.
7. Pindahkan seluruh benang DNA yang diperoleh pada no. 6 dengan batang pengaduk atau
pipet tetes yang berujung runcing dari etanol dan larutkan kembali dalam 15 mL akuades,
kemudian diukur absorbansinya pada 250, 260, 270, 280 dan 290 nm. (Jika absorbansi
yang diperoleh lebih besar dari 1, maka sampel harus diencerkan hingga nilai
absorbansinya berapa pada rentang 0,2-0,8).
4.5. Data Pengamatan
Pelajari baik-baik video pembelajaran dalam link berikut: (1)
https://www.youtube.com/watch?v=sFD1gUHMYwU, (2)
https://www.youtube.com/watch?v=MUM8j0vdxv8, dan (3)
https://www.youtube.com/watch?v=qw2ZaUXgWHU
kemudian analisislah data tabel berikut:

OD250 OD260 OD270 OD280 OD290

Isolat DNA 0,50 0,60 0,48 0,30 0,15

4.6. Analisis Data

Buatlah kurva hubungan antara absorbansi dan panjang gelombang. Tentukan kemurnian
DNA yang diperoleh berdasarkan data tersebut. Hitung kadar DNA yang diperoleh (g
DNA/g buah).
4.7. Pembahasan
• Diskusikan maksud setiap langkah prosedur isolasi DNA dari daaging buah tersebut
berdasarkan prinsip (fisika/kimiawi) yang mendasarinya. Sertakan pula disertai reaksi
kimianya.
• Diskusikan kelayakan hasil analisis Saudara tentang kemurnian dan kadar DNA yang
Saudara peroleh dari analisis ini.

Tugas Pendahuluan
1. Gambarkan struktur DNA yang terdiri dari 3 Nukleotida yaitu ATG!
2. Apa fungsi NaCl, detergen, dan etanol pada percobaan ini?
3. Bagaimana menentukan g DNA yang isolasi dari tiap g buah yang anda pilih, jika dari
percobaan yang anda lakukan menghasilkan nilai OD pada 260 nm sebesar 0,5?

Daftar pustaka
Plummer, D.T. 1987. An Introduction to Practical Biochemistry. 3th Ed. London: Mc Graw-
Hill Book Company
FORMAT RESUME VIDEO (DIKUMPULKAN JAM 10.25)

ANALISIS KADAR GLUKOSA DARAH

KELOMPOK: ……………
ANGGOTA:
1. ……………
2. ……………
3. ……………

Link Video: (1) https://www.youtube.com/watch?v=sFD1gUHMYwU, (2)

https://www.youtube.com/watch?v=MUM8j0vdxv8, dan (3)
https://www.youtube.com/watch?v=qw2ZaUXgWHU

A. Pertanyaan
Berapa kadar DNA yang terdapat di dalam daging buah pisang?
B. Alat dan Bahan
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………

C. Tujuan Percobaan
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………

D. Prosedur
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………

E. Hasil Percobaan
Tiga kali analisis menghasilkan absorbansi yang sama seperti yang terdapat di dalam tabel ..……
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………

F. Analisis dan Kesimpulan

………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
G. Penjelasan
- Interpretasi ….…………………….……………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
…...
FORMAT LAPORAN PRAKTIKUM (DIKUMPULKAN PEKAN DEPAN)

ANALISIS KADAR GLUKOSA DARAH

KELOMPOK: ……………
ANGGOTA:
1. ……………
2. ……………
3. ……………

Link Video: (1) https://www.youtube.com/watch?v=sFD1gUHMYwU, (2)

https://www.youtube.com/watch?v=MUM8j0vdxv8, dan (3)
https://www.youtube.com/watch?v=qw2ZaUXgWHU

A. Pendahuluan

………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………

B. Metode
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………

C. Hasil Percobaan
Tiga kali analisis menghasilkan absorbansi yang sama seperti yang terdapat di dalam tabel .……
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………

D. Pembahasan
- Interpretasi ….…………………….……………………………………………………………
- Penjelalsan/justifikasi …………….……………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
…...
E. Kesimpulan
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
…...

Lampiran (Jawaban Tugas Pendahuluan)

1. Gambarkan struktur DNA yang terdiri dari 3 Nukleotida yaitu ATG!
2. Jelaskan prinsip percobaan ini!
3. Apa fungsi NaCl, detergen, dan etanol pada percobaan ini?