3/23/2021

METODE PARAFIN
(EMBEDDING METHOD)

Mikroteknik
2020/2021

METODE PARAFIN
(EMBEDDING)

1. Fiksasi 7. Sectioning/pengirisan
2. Pencucian 8. Affixing/penempelan
3. Dehidrasi 9 Deparafinisasi
4. Clearing/penjernihan
5. Infiltrasi 10.Stainning/pewarnaan
6. Embedding/penanaman
11. Mounting/penutupan
12. Labelling

1
 3/23/2021

TUJUAN:
1. Untuk mempelajari dan memahami langkah-
langkah2 persiapan Metode Parafin
2. Mempersiapkan irisan tipis organ/jaringan dan
mempelajari struktur selnya
3. Untuk memahami pentingnya membedakan
"artifak" dari struktur sel.
4. Untuk menunjukkan kemampuan bekerja
dengan hati-hati dan cermat di lab
5. Mempelajari cara menyiapkan gambar
berkualitas untuk publikasi/skripsi.

FIKSASI
USAHA UNTUK MEMPERTAHANKAN
ELEMEN ELEMEN SEL / JARINGAN
AGAR TETAP PADA TEMPATNYA &
TIDAK MENGALAMI PERUBAHAN
STRUKTUR

2
 3/23/2021

TUJUAN FIKSASI:
1. Mempertahankan keadaan bahan/sampel
tetap seperti semula
2. Menjaga agar sel/jaringan/organ tahan
terhadap larutan yang berbeda tekanan
osmotiknya
3. Mengeraskan bahan/sampel yang akan
dibuat preparat
4. Mematikan/menghentikan proses
metabolisme sel
5

CARA FIKSASI
DIPILIHFIKSATIF MENURUT
TUJUAN; FIKSATIF YG DIPILIH
HARUS SESUAI / DIKETAHUI SIFAT-
SIFATNYA, A.L. :
“DAYA PENETRASINYA”

3
 3/23/2021

MACAM-MACAM FIKSATIF

 SEDERHANA/FIKSATIF TUNGGAL
→ALKOHOL, FORMALIN, dsb
 MAJEMUK/FIKSATIF CAMPURAN
→ BOUIN, ZENKER, FAA, dsb

PICRIC ACID (C6H2(NO2)3OH

▪ KONSENTRASI : JENUH s/d HAMPIR JENUH
▪ BENTUK KRISTAL, KUNING, MUDAH
MENYALA, MUDAH MELEDAK
▪ ASAM KUAT, LARUT DALAM ALKOHOL,
XYLOL/BENSIN
▪ U/ FIKSASI KARBOHIDRAT (LAR.BOUIN)
▪ U/ FIKSASI PROTEIN
▪ PENETRASI LAMBAT; SANGAT
MENGKERUTKAN & MENGERASKAN JARINGAN
▪ MENINGGALKAN EFEK KUNING PADA
JARINGAN→ PERLU WASHING YANG CUKUP
LAMA DALAM ALKOHOL 70%

4
 3/23/2021

CHROMIC ACID (H2CR2O4)

→Hannover (1940)
▪ KONSENTRASI : 0,5% - 1%
▪ LARUTAN AQUOSA→MENGENDAPKAN
▪ NUKLEOPROTEIN, TIDAK BOLEH + ALKOHOL/
FORMALIN → DENATURASI PROTEIN JARINGAN
▪ SEDIKIT MENGERASKAN JARINGAN
▪ U/ FIKSASI : LEMAK, BAIK SEKALI U/ FIKSASI
MITOKHONDRIA, GOLGI & GLIKOGEN
▪ DAYA PENETRASI : LAMBAT, TDK KERUTKAN
JAR. TERJADI ENDAPAN→WASHING PD AIR
MENGALIR  12 JAM
▪ BILA WASHING TDK SEMPURNA → SANGAT
PEKA THD PEWARNA BASA
▪ KEBAIKAN : JARINGAN AKAN TERPULAS DG
BAIK SETELAH MGNK FIKSATIF INI

POTASSIUM DICHROMAT
(K2Cr2O7) →Henrich Muller (1859)

▪ KONSENTRASI : 1% -3% (LAR. BAKU 3 – 5%)

▪ BENTUK PADAT, KRISTAL BESAR, MERAH
JINGGA, BERACUN
▪ GARAM YANG LARUT DALAM AIR
▪ CAMPUR FORMALIN
▪ JARINGAN (MYELIN & PHOSPHOLIPID) +
FIKSATIF FORMALIN→ MASUK KE
Potassium dichromat 2-3% (3-7 HARI)
→TERFIKSASI BAIK

5
 3/23/2021

MERCURIC CHLORID (HgCl2)

→ CORTI (1851)

▪ KONSENTRASI JENUH – HAMPIR JENUH

→LARUTAN STOK/BAKU DLM BENTUK JENUH
▪ BUBUK PUTIH, RACUN KERAS→ SANGAT
BAHAYA→ASPEK KOROSI PD MEMBRAN MUKOSA
▪ MENGENDAPKAN SEMUA MACAM
PROTEIN→ENDAPAN KRISTAL BENTUK JARUM
▪ SEMUA ZAT WARNA BERASPEK BAIK
▪ MEMBENGKAKKAN JARINGAN
▪ DAYA PENETRASI : SEDANG
▪ Hg = Sublimat → pada Larutan ZENKER, HARUS 2
KALI WASHING AIR MENGALIR (24 JAM)→
SEBELUM DEHIDRASI JUGA SEBELUM STAINING

OSMIUM TETROXIDE (OsO4)

→ Max Schultze (1865)

▪ KONSENTRASI : 0,5%-2%→ LART. STOK 2%

▪ KRISTAL KUNING PUCAT/LAR. 2% DLM AMPUL
▪ SATU-2NYA FIKSATIF TERBAIK U/ LEMAK →HITAM
▪ U/ KARBOHIDRAT, OKSIDATOR, MUDAH
▪ MENGUAP → IRITASI MATA
▪ DAYA PENETRASI : SANGAT LAMBAT → BUAT
▪ IRISAN TIPIS / KECIL→ DIFIKSASI → WASH PD
AIR MENGALIR
▪ JANGAN DI + ALKOHOL / FORMALIN
▪ KEBAIKAN : GOLGI, MITOKHONDRIA
▪ TERWARNA BAIK; TIDAK MENGKERUTKAN JAR.
▪ KEJELEKAN : ZAT WARNA YG DIBERIKAN SUKAR
MASUK KE DALAM JARINGAN

6
 3/23/2021

CADMIUM CHLORIDE (CD Cl2)

→ Aoyama (1929

• U/APARATUS GOLGI DALAM SEL →

JARANG DGNK SEKARANG

ACETONE (CH3CO)

▪ BISA DGNK U/ DEHIDRASI JUGA

▪ DIGUNAKAN DALAM MACAM-MACAM
KONSENTRASI
▪ ACETONE ABSOLUT (-50 C/ DINGIN)
DAPAT MEMPERTAHANKAN ENZIM-
ENZIM TERTENTU→LYPASE, ACID
PHOSPHATASE dsb.

7
 3/23/2021

LARUTAN BOUIN

➢ PICRIC ACID 5% AQUOSA

(JENUH)………………………………………..75 ml
➢ FORMALIN 40%………………………….25 ml
➢ ACETIC ACID GLACIAL ……………5 ml

KEBAIKAN BOUIN

❑ PENETRASI CEPAT
❑ INTI TERPULAS BAIK SEKALI + JAR.
IKAT
❑ SEMUA JARINGAN TERFIKSASI DG
BAIK

8
 3/23/2021

KEJELEKAN BOUIN
❑ BILA LAMA→JARINGAN RAPUH SULIT
DIIRIS
❑ LAMA : 2 – 10 JAM, TERGANTUNG
TEBAL/TIPIS JARINGAN
❑ WASHING DG ALKOHOL 70%,
JANGAN DG AIR→SWELLING

LARUTAN ZENKER

• MERCURIC CHLORIDE ……………………… 5 gr

• POTASSIUM DICHROMATE……………. 2,5 gr
• AQUADEST…………………………………………… 100 ml
• DITAMBAH SODIUM SULPHATE … 1 gr
• BILA AKAN DGNK DITAMBAH…. 5 ml
 ACIDUM ACETICUM GLACIAL TEPAT
SEBELUM DIGNK ATAU
• LARUTAN ZENKER STOCK……………… 100 ml
• A A G……………………………………………………… 5 ml
• DIBUAT pH nya s/d 3,2

9
 3/23/2021

KEBAIKAN :
➢ INTI + JAR. IKAT TERPULAS BAIK →
U/ JAR. TUMOR LEBIH-LEBIH,
SEMUA ZAT WARNA BEKERJA BAIK

KEJELEKAN :
➢ JARINGAN TERLALU TEBAL
➢ LAMA → JAR. RAPUH → PATAH

LARUTAN HELLY

➢ CHLOROFORM ………………………. 30 ml
➢ ALKOHOL ABSOLUT …………… 0 ml
➢ A A G ………………………………………. 10 ml

10
 3/23/2021

KEBAIKAN :
➢ FIKSASI + DEHIDRASI DAPAT
BERJALAN SEKALIGUS → AWETKAN
GLIKOGEN DALAM JARINGAN

KEJELEKAN :
➢ SANGAT KERAS BILA TERLALU
LAMA→SULIT DIIRIS
➢ LANGSUNG DAPAT DIPINDAH KE
ALKOHOL ABSOLUT SETELAH
DIFIKSASI

LARUTAN ORTH

➢ POTASSIUM DICHROMAT………… 2,5 gr

➢ SODIUM SULPHAT……………………… 1,0 gr
➢ AQUADEST ………………………………… 100 ml

LARUTAN DI ATAS BILA DGNK

DITAMBAH 10 ml FORMALIN → TEPAT

11
 3/23/2021

KEBAIKAN:
➢ U/ MELIHAT MITHOSIS, SEL
ERYTHROCYT, JAR. IKAT

KEJELEKAN:
➢ TIDAK DAPAT DGNK U/ JARINGAN
BESAR
➢ PENETRASI SANGAT LAMBAT
➢ WASH ½ s/d 1 JAM→ PADA AIR
MENGALIR

LARUTAN FAA
➢ FORMALIN ………………………………… 5 ml
➢ ASAM ASETAT GLASIAL………. 5 ml
➢ ALKOHOL 70% ……………………….. 90 ml

➢ DIBUAT STOCK, BILA

DIGUNAKAN AMBIL SECUKUPNYA,
SAMPAI JARINGAN TERENDAM

12
 3/23/2021

LARUTAN FORMER

➢ ASAM ASETAT GLASIAL…………. 15 ml

➢ ALKOHOL ABSOLUT ……………….. 45 ml
ATAU 1 : 3

➢ LARUTAN DIBUAT, APABILA AKAN

DIGUNAKAN
➢ MELIHAT PEMBELAHAN,
KROMOSOM

ASAM ASETAT GLASIAL

➢ ASAM ASETAT GLASIAL…………. 10 ml
➢ UNTUK FIKSASI POLEN DENGAN
METODE ASETOLISIS

13
 3/23/2021

FIKSASI
U/ PRAKTIKUM
➢ Fiksatif jar.Tumbuhan :
FAA, Alkohol 70 %
➢ Fiksatif jar. Hewan:
Bouin, NBF (Neutral Buffered Formalin)
➢ Waktu fiksasi : 20 - 24 jam

DEHIDRASI
PRINSIP:
▪ JARINGAN HEWAN/TUMBUHAN →
85 % ADALAH AIR
▪ AIR SELAMANYA TIDAK DAPAT
BERCAMPUR DENGAN MEDIUM
EMBEDDING → PARAFIN/SELOIDIN

14
 3/23/2021

DEHIDRASI
▪ PROSES PENARIKAN MOLEKUL AIR
DARI DALAM JARINGAN
▪ DIKERJAKAN SETELAH PROSES
FIKSASI

TUJUAN DEHIDRASI
▪ SUPAYA JARINGAN BEBAS DARI AIR
→ SHG JARINGAN LEBIH
TERAWETKAN & RUANG ANTAR SEL
DALAM JARINGAN BISA DIISI
DENGAN BERBAGAI MEDIA YG AKAN
MEMUDAHKAN U/ KEPERLUAN
BERBAGAI METODE SEDIAAN
MIKROSKOPIS

15
 3/23/2021

CARA DEHIDRASI
▪ MEMASUKKAN JARINGAN/ORGAN KE
DALAM DEHYDRANT→ SECARA
BERTAHAP AGAR JARINGAN TIDAK
MENGALAMI PERUBAHAN BENTUK
/STRUKTUR
▪ BIASANYA DIGUNAKAN DEHIDRAN
DALAM KONSENTRASI MENINGKAT
RENDAH TINGGI

MACAM-MACAM
DEHYDRANT

▪ ETHANOL / ETHYL ALCOHOL

▪ DIOXANE
▪ ACETONE

16
 3/23/2021

ETHANOL / ETHYL ALCOHOL

▪ UMUM DIGUNAKAN
▪ PROSES SECARA PERLAHAN-LAHAN,
ALKOHOL BERTINGKAT (30% s/d
ABSOLUT)
▪ Masson 1928, YG BAIK DIMULAI DARI
95% ATAU 80%
▪ VOLUME DEHIDRANT 10 X VOLUME
JARINGAN
▪ MEMPERKERAS JARINGAN → JANGAN
TERLALU LAMA→ 1-2 JAM, UKURAN
JARINGAN 2-4 mm

DIOXANE
▪ PROSES : MASUKKAN DALAM DIOXANE
50% → 3 JAM→ DIGANTI DIOXANE
MURNI 2 KALI→ @ 3 JAM
▪ U/ JARINGAN SETELAH FIKSASI
DENGAN BOUIN / FORMALIN→ CUCI
DG ALKOHOL 70% → MASUKKAN KE
DALAM CAMPURAN DIOXANE :
ALKOHOL (1 : 1)→ 3 JAM→ MASUKKAN
DIOXANE MURNI 2 KALI

17
 3/23/2021

ACETONE

▪ JARANG DIGUNAKAN
▪ TIDAK BERCAMPUR BAIK DENGAN
PARAFIN
▪ BIASANYA ACETONE PANAS +
PARAFIN → BAIK
▪ → DIPINDAH KE PARAFIN MURNI→
EMBEDDING

TO BE CONTINUE….
NEXT PROCESS
CLEARING & INFITRASI

BOTOL STOK DEHIDRAN

& AGENT CLEARING

18