Jurnal Ilmu Biologi Saudi 26 (2019) 1531-1538

Daftar isi tersedia di ScienceDirect

Jurnal Ilmu Biologi Saudi

homepage jurnal: www. sciencedi rect .com

Artikel asli

Aktivitas antiradang Tetragronula spesies dari Indonesia

Muhamad Sahlan Sebuah , b , ⇑ , Andrea Devina Sebuah , Diah Kartika Pratami c , Herbert Situmorang d , Siti Farida d ,
Abdul Munim e , Benyamin Kusumoputro b , f , Masafumi Yohda g , Ahmad Faried h , Misri Gozan Sebuah ,
Mia Ledyawati saya
Sebuah Jurusan Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas Indonesia, Kampus UI Depok, Jawa Barat 16425, Indonesia
b Pusat Penelitian Teknik Biomedis, Fakultas Teknik, Universitas Indonesia, Kampus UI Depok, Jawa Barat 16425, Indonesia
c Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia, Fakultas Farmasi, Universitas Pancasila, Jakarta 12640, Indonesia
d Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Kampus UI Salemba, Jakarta 10430, Indonesia
e Jurusan Farmakognosi dan Fitokimia, Fakultas Farmasi, Universitas Indonesia, Depok, Jawa Barat, 16424, Indonesia
f Jurusan Elektro, Fakultas Teknik, Universitas Indonesia, Kampus UI, Depok 16425, Jawa Barat, Indonesia
g Departemen Bioteknologi dan Ilmu Hayati, Universitas Pertanian dan Teknologi Tokyo, Koganei, Tokyo 184-8588, Jepang
h Departemen Bedah Saraf dan Kelompok Kerja Onkologi & Sel Punca, Fakultas Kedokteran, Universitas Padjadjaran, Bandung 40161, Jawa Barat, Indonesia
saya Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Teknologi Bandung, Jawa Barat, Indonesia

articleinfo abstrak

Sejarah artikel: Obat antiradang menghambat peradangan, terutama yang diklasifikasikan sebagai obat antiinflamasi nonsteroid (NSAID). Beberapa penelitian
Diterima 8 November 2018 Direvisi 12 Desember telah melaporkan bahwa propolis memiliki efek anti-ulcerogenic dan anti-inflamasi. Dalam studi ini, kami menyelidiki senyawa bioaktif dan in vivo
2018 Diterima 16 Desember 2018 Tersedia online
sifat antiinflamasi dari propolis halus dan kasar Tetragronula sp. Untuk lebih mengidentifikasi penanda anti-inflamasi dalam propolis, LC-MS /
17 Desember 2018
MS digunakan, dan hasilnya dianalisis dengan Mass Lynx.

4.1. Propolis kasar dan halus Tetragonula sp. dikapsulkan dengan maltodekstrin dan getah arab. Mikrokapsul propolis dengan dosis 25-200 mg
Kata kunci:
/ kg diaplikasikan untuk model radang pawin tikus yang diinduksi karagenan. Data dianalisis dengan uji statistik ANOVA satu arah dan
Anti-radang
Kruskal-Wallis. Percobaan LCMS / MS mengidentifikasi tujuh senyawa anti-inflamasi, termasuk [6] -dehydrogingerdione, alpha-tocopherol
Busung
In vivo
succinate, adhyperforin, 6-epiangustifolin, deoxypodophyllotoxin, kurarinone, dan xanthoxyletin. Hasil kami menunjukkan bahwa propolis halus
Propolis kasar pada 50 mg / kg sangat menghambat peradangan, diikuti oleh propolis kasar dengan dosis 25 mg / kg. SPM dan RPM dosis 25 mg / kg memiliki
Propolis lembut nilai inhibisi peradangan masing-masing 62,24% dan 58,12%, sebanding dengan nilai tersebut.
Tetragonula sp

70,26% natrium diklofenak dengan dosis 135 mg / kg. Studi ini menunjukkan bahwa propolis berpotensi untuk dikembangkan sebagai obat
antiinflamasi non steroid.
Produksi dan hosting 2018 oleh Elsevier BV atas nama King Saud University. Ini adalah akses terbuka
artikel di bawah lisensi CC BY-NC-ND ( http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ ).

1. Perkenalan
Obat antiradang diklasifikasikan sebagai obat yang dapat menghambat atau mengurangi
peradangan, yang dapat terjadi sebagai akibat dari cedera fisik, infeksi, panas, dan interaksi
antigen-antibodi ( Fullerton dan Gilroy, 2016; Houglum dan Harrelson, 2011 ). Berbasis
Pada studi mekanistik, obat antiradang dibedakan menjadi dua jenis, yaitu obat antiradang steroid
dan obat antiradang nonsteroid (NSAID). NSAID, termasuk aspirin, asetaminofen, natrium diklofenak,
dan ibuprofen, merupakan jenis obat antiradang yang paling umum. Namun, NSAID dapat
menyebabkan efek tambahan yang bersifat ulserogenik ( Domiati dkk., 2016; Hawkey dan Langman,
2003 ).

⇑ Penulis korespondensi di: Jurusan Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas Indonesia, Kampus UI Depok,
Propolis merupakan bahan resin yang dikumpulkan lebah dari eksudat tumbuhan dan pucuk

Jawa Barat 16425, Indonesia. tumbuhan. Nama propolis adalah bahasa Yunani; pro artinya benteng dan polis artinya kota. Lebah
Alamat email: sahlan@che.ui.ac.id (M. Sahlan). menggunakan propolis dengan berbagai cara, termasuk untuk menghaluskan dinding sarang lebah,
Tinjauan sejawat di bawah tanggung jawab Universitas King Saud. melindunginya dari penyakit, dan menutupi bangkai serta mencegah pembusukannya ( Bankova dkk.,
2000 ). Propolis juga dikenal sebagai obat tradisional untuk mengobati banyak penyakit. Aktivitas
biologis propolis meliputi tindakannya sebagai antioksidan, antibakteri,

Produksi dan hosting oleh Elsevier

https://doi.org/10.1016/j.sjbs.2018.12.008
1319-562X / 2018 Produksi dan hosting oleh Elsevier BV atas nama King Saud University. Ini adalah artikel akses terbuka di bawah lisensi CC BY-NC-ND ( http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
).
1532 M. Sahlan dkk. / Jurnal Ilmu Biologi Saudi 26 (2019) 1531-1538
antijamur, antivirus, antiradang, dan fotoprotektor ( Mahadewi dkk., 2018; Pratami dkk., 2018; Sahlan
dkk., 2017; Sahlan dan Supardi, 2013; Soekanto dkk., 2018 ). Karenanya, ekstrak propolis telah
banyak digunakan sebagai minuman, suplemen nutrisi, dan bahan tambahan dalam makanan.
Kandungan utama propolis adalah flavonoid, terpenoid, asam fenolat, asam sinamat, asam kafeat,
dan berbagai ester ( Bankova, 2005; Bittencourt dkk., 2015 ).
Penelitian sebelumnya terhadap propolis Brazil, Afrika Selatan, Jepang, dan Cina menunjukkan
bahwa propolis memiliki efek antiinflamasi. Senyawa antiradang yang diidentifikasi dalam propolis
Brasil adalah artepilin C ( Paulino dkk., 2008 ). Untuk propolis Afrika Selatan, senyawa anti-inflamasi
yang teridentifikasi termasuk galangin dan quercetin, sedangkan propolis Cina telah terbukti memiliki
ester gliserol sebagai senyawa anti-inflamasi ( Du Toit dkk., 2009; Shi et al., 2012 ). Penelitian terbaru
dilakukan oleh Paulino dkk. (2015) membandingkan efek antiradang natrium diklofenak dan propolis.
Kedua senyawa tersebut menunjukkan efek antiradang; namun, natrium diklofenak dapat
menyebabkan penyakit ulserogenik. Namun, penelitian tambahan menunjukkan bahwa propolis
dapat menghambat pembentukan bisul yang disebabkan oleh natrium diklofenak ( Paulino dkk., 2015 ).
Di Indonesia, investigasi tentang efek antiradang propolis, terutama identifikasi biomarker antiradang
dalam propolis, masih terbatas. Oleh karena itu, dalam penelitian ini, kami menyelidiki sifat
anti-inflamasi dari propolis Indonesia. Secara kolektif, temuan kami menunjukkan bahwa propolis
mungkin merupakan alternatif yang menjanjikan untuk NSAID, dengan efek anti-inflamasi dan
anti-ulserogenik.
2. Metodologi / percobaan
2.1. Bahan
Dua sampel ekstrak etanol propolis (EEP), yaitu propolis lunak (diambil dari dalam sarang) dan
propolis kasar (diambil dari luar sarang) digunakan sebagai bahan aktif mikroenkapsulasi. Sampel
propolis dari Tetragonula sp diambil dari Masamba, Kabupaten Luwu Utara, Provinsi Sulawesi
Selatan, Indonesia. Maltodekstrin 97 dekstrosa ekuivalen (DE) 18 dan gum arabic 98 diperoleh dari
Brataco Co. (Indonesia). n-Hexane, ethyl acetate, dan acetic acid dibeli dari Sigma-Aldrich.
2.2. Identifikasi senyawa anti-inflamasi
Kromatografi lapis tipis (KLT) dilakukan untuk mendapatkan sampel yang optimal. Pelarut dan
fase eluen masing-masing terdiri dari etil asetat dan campuran n-heksana, etil asetat, dan asam
asetat (31: 14: 5). Hasil yang diperoleh dari KLT diinjeksikan ke dalam instrumentasi LC-MS / MS,
dan data dianalisis menggunakan software Mass Lynx 4.1. Eksperimen LC-MS / MS analitik
dilakukan dengan menggunakan Sistem ACQUITY UPLC I-Class yang dihubungkan melalui split ke
Spektrometer Massa Xevo G2-XS Q-tof (Waters, USA) di laboratorium polisi dan forensik, Jakarta,
Indonesia.
2.3. Mikroenkapsulasi propolis
Ekstrak etanol propolis (EEP) dibuat dari propolis halus dan kasar yang diekstraksi dengan
etanol 96% menggunakan metode yang dijelaskan dalam Pratami dkk. (2018 ). Mikroenkapsulasi
menggunakan maltodekstrin dan gum arabic seperti yang dijelaskan oleh Da Silva (2013) dan
Marquiafável (2015), dengan beberapa modifikasi ( Da Silva dkk., 2013; Marquiafável dkk., 2015 ).
Pertama, 10 g maltodekstrin, 1 g arab
gum, dan 100 mL akuades dicampur dengan pengaduk magnet selama 5 menit. Campuran tersebut
kemudian dihomogenisasi menggunakan homogenizer ultra-turrax T18 (IKA, Jerman) dengan
kecepatan 6.000 rpm selama 30 menit. Kemudian ditambahkan 300 mL EEP dan diaduk dengan
kecepatan 15.000 rpm selama 2 menit. Terakhir, campuran dikeringkan dengan metode semprot
kering (Büchi B290, Flawil, Swiss). Kondisi operasional pengering semprot adalah sebagai berikut,
aspirator 100%; semprotkan gas 600 L / menit; diameter nosel: 1,5 mm; tingkat umpan sampel: 25%;
dan temperatur masuk 110 C. Morfologi mikrokapsul Spray-Dry Propolis (SDP) diamati dengan
Scanning Electron Microscope (SEM) di Central Forensic Laboratory (PUSLABFOR) Jakarta
Indonesia.
2.4. Persetujuan etis
Persetujuan etis untuk melakukan penelitian diberikan oleh Komite Etik Penelitian Kesehatan,
Fakultas Kedokteran, RSU Universitas Indonesia-Cipto Mangunkusumo (No. 0350 / UN.2.FI / ETIK /
2018).
2.5. Hewan
Sebanyak 53 tikus jantan Sprague Dawley dewasa berpuasa (200–225 g) digunakan dalam
percobaan. Sebelum percobaan dilakukan, hewan dibiarkan menyesuaikan diri selama satu minggu
dan telah dipuasakan selama ± 18 jam, dengan akses air gratis.
2.6. Tes solusi
Ada tujuh kelompok uji dalam penelitian ini, dengan 6-7 hewan di setiap kelompok. Kelompok
kontrol negatif diberi 2 mL Na CMC
0,5% (po), sedangkan kelompok kontrol positif diberi 135 mg / kg natrium diklofenak (po). Ada tiga
dosis yang digunakan dalam percobaan ini untuk setiap larutan propolismikapsul dalam air, yang
diberikan kepada hewan secara oral. Dosis mikrokapsul soft propolis (SPM) adalah 50, 100, dan 200
mg / kg, sedangkan untuk mikrokapsul propolis kasar (RPM) adalah 25, 50, dan 100 mg / kg.
2.7. Pengukuran edema kaki
Untuk mengukur edema telapak kaki, kaki hewan tersebut awalnya diukur menggunakan alat
ukur panjang (plethysmometer) untuk mendapatkan volume kaki awal. Setelah itu, hewan menerima
suntikan karagenan 0,2 mL di salah satu kaki belakangnya untuk menginduksi peradangan. Satu jam
setelah injeksi ini, larutan uji diberikan, dan volume kaki berikutnya diukur sebagai V0. Pengukuran
volume kaki dilakukan setiap jam selama 5 jam.
2.8. Analisis statistik
Sebelum menerapkan metode analisis statistik, volume edema dihitung. Volume edema mewakili
defisiensi volume awal ( Vi) dan volume kaki setiap kali ( Vt) ( Persamaan.
(1) ). Setelah volume edema dihitung, area di bawah kurva ( AUC) dihitung (Persamaan. (2) ), di mana t
adalah interval waktu pengukuran dalam satu jam. Nilai AUC kemudian digunakan untuk menghitung
persentase inhibisi inflamasi (Persamaan.
(3) ), di mana AUCt mewakili pengobatan AUC, sedangkan AUCnc adalah kontrol negatif AUC.
V. e ¼ V. t V. saya ð1Þ
AUC ¼ Ve n þ Ve ð n 1 Þ ð tn tðn1Þ Þ ð2Þ
2
AUC t
Penghambatan Inflamasi ð% Þ ¼ 1 100% ð3Þ
AUC nc
 M. Sahlan dkk. / Jurnal Ilmu Biologi Saudi 26 (2019) 1531-1538 1533

Nilai AUC juga digunakan untuk analisis statistik. AUC dari SPM dianalisis dengan uji
Kruskal-Wallis dan uji Post-Hoc Mann-Whitney. Tes ini diterapkan karena distribusi data yang
dinormalisasi. Sebaliknya, AUC dari RPM dianalisis dengan ANOVA satu arah, dengan perbandingan
ganda Post-Hoc LSD karena datanya normal dan homogen. Analisis statistik ini dikembangkan
dengan menggunakan software statistik dengan batas kepercayaan 95%.
resolusi dan puncak paling intens; sehingga pendeteksian senyawa lebih mudah dan akurat.
Parameter analitik yang kami gunakan dalam mengidentifikasi biomarker adalah kecocokan antara
fragmen induk dan setidaknya dua fragmen turunan dari hasil yang diperoleh dengan literatur.
Fragmen induk adalah molekul bermuatan yang dapat berdisosiasi membentuk fragmen, sedangkan
fragmen fragmen dari fragmen induk merupakan fragmen turunannya. Setelah ionisasi awal, ion
induk akan mengalami fragmentasi yang menyebabkan lepasnya radikal bebas atau molekul kecil
netral. Ion molekuler tidak pecah secara acak tetapi cenderung membentuk fragmen yang paling
stabil. Parameter dalam pengujian ini serupa dengan parameter Troendle dkk. (1999) dan Kivrak et al.
(2016) bahwa keberadaan suatu senyawa dapat dikonfirmasikan jika terdapat setidaknya dua fragmen

3. Hasil dan diskusi turunan, mengingat bahwa m / z fragmen induk lebih besar dari fragmen anak ( Kivrak dkk., 2016;
Troendle et al., 1999 ). Ini dapat digunakan sebagai parameter karena pola fragmentasi digunakan

3.1. Hasil identifikasi biomarker antiradang untuk mengidentifikasi

Hasil kromatogram dan spektrum massa dari percobaan LC-MS / MS ( Gambar. 1 dan 2 )
dianalisis menggunakan software Mass Lynx 4.1. Dalam spektrum massa, jenis tampilan BPI (Base
Peak Intensity) digunakan. Ini karena BPI menunjukkan lebih detail

Gambar 1. UPLC TOF MSE (50–1500) 4 eV ESI + -Low CE (BPI) Profil Smooth Propolis (1) Deoxypodophyllotoxine, (2) Kurarinone, (3) 6-Dehydrogingerdione, (4) 6-Epiangustifolin, (5) dhyperforin, (6) alfa-tokoferol suksinat.

Gambar 2. UPLC TOF MSE (50–1500) 4 eV ESI + -Low CE (BPI) Profil Propolis Kasar (1) 6-Dehydrogingerdione, (2) Xanthoxyletin, (3) 6-Epiangustifolin, (4) Adhyperforin, (5) alpha- Tokoferol suksinat.
1534 M. Sahlan dkk. / Jurnal Ilmu Biologi Saudi 26 (2019) 1531-1538

tify senyawa yang tidak diketahui, karena setiap molekul memiliki pola fragmentasi yang berbeda.
Hasil identifikasi LC-MS / MS dapat dilihat di Tabel 1 .
Secara umum mekanisme antiradang dari molekul-molekul ini adalah melalui mekanisme
penghambatan NF-kB. NF-kB berperan penting dalam pembentukan mediator inflamasi seperti iNOS,
COX-2, dan TNF- Sebuah. Selain itu, beberapa senyawa diketahui memiliki sifat antioksidan, yang
dapat menghambat oksigen (radikal) secara aktif, sehingga mengurangi pemicu stres oksidatif yang
dapat menyebabkan peradangan.
Penelitian lain yang dilakukan oleh Haiming Shi (2012) telah mengidentifikasi aktivitas antiradang
pada lima senyawa baru propolis dari Wuhan, Provinsi Hubei, China. Lima ester gliserol termasuk
2-asetil-1-kumaroil-3-cinnamoyl gliserol, (+) - 2-asetil-1-feruloyl-3-cinnamoylglycerol, (-) - 2-acety
l-1-feruloyl-3-cinnamoylglycerol ,
2-asetil-1,3-dicinnamoylgly
cerol, dan (-) - 2-asetil-1- (E) -feruloyl-3- (3 00 ( f), 16 00) - dihydroxy-pal mitoylglycerol ( Shi et al., 2012 ).
Komposisi kimia dari propolis Brazil Apis sp telah diidentifikasi oleh Lima Cavendish dkk. (2015) sebagai
isoflavon seperti formononetin danbiochaninA. Biomarker Formononetinas dari Brasil
propolis memiliki potensi aktivitas anti-inflamasi pada model eksperimental ( Lima Cavendish dkk.,
2015 ). Oleh karena itu, Megumi Funakoshi-Tago (2015) menemukan komponen Propolis Nepal yang
menunjukkan aktivitas antiradang. Hasil ini menunjukkan bahwa 3 0, 4 0- dihydroxy-4-methoxydalbergione,
4-metoksidalbergion,
cearoin, dan chrysin adalah zat yang bertanggung jawab atas aktivitas antiinflamasi propolis Nepal ( Funakoshi-Tago
dkk., 2015 ).
Senyawa yang teridentifikasi dalam penelitian ini juga dapat ditemukan pada propolis lain.
Adhyperforin adalah bagian dari ent-Kauranoids, yang juga dapat ditemukan dalam propolis dari
lebah Brazillian stingless, Anthidioida melipona quadrifasciata e ( Velikova dkk., 2000 ). Senyawa
turunannya dapat ditemukan di propolis Kuba ( Piccinelli dkk., 2009 ). Senyawa lain adalah
xanthoxyletin, yang merupakan bagian dari kumarin. Melalui beberapa penelitian, kumarin ini juga
dapat ditemukan di propolis Slovakia ( Hroboňová dkk., 2013 ). Meskipun senyawa lainnya belum
teridentifikasi pada propolis lain, hal tersebut dapat disebabkan oleh keanekaragaman hayati.
Propolis adalah produk lebah yang berasal dari tumbuhan, oleh karena itu di lokasi geografis yang
berbeda tumbuhan sumber mungkin berbeda sehubungan dengan fl ora lokal ( Bankova, Popova, &
Trusheva, 2014 ).

Tabel 1
Hasil identifikasi senyawa bioaktif antiradang propolis.

Senyawa bioaktif Kategori Sumber tumbuhan Struktur kimia

[6] -Dehydrogingerdione Metoksi fenol Jahe (Zingiber of fi cinale)

alpha-Tocopherol Succinate Vitamin Bayam, bunga matahari, dan lobak

Adhyperforin Phloroglucinol Marga Hypericum

6-Epiangustifolin Diterpenoid Marga Isodon

Deoxypodophyllotoxin Lignan Marga Podophyllum

Kurarinone Flavonoid Genus Sophora (kelompok kacang-kacangan)

Xanthoxyletin Coumarin Marga Zanthoxylum dan Clausena

 M. Sahlan dkk. / Jurnal Ilmu Biologi Saudi 26 (2019) 1531-1538 1535

3.2. Mikroenkapsulasi propolis
Dalam pekerjaan ini, serbuk mikrokapsul propolis dibuat dengan melapisi propolis dengan
maltodekstrin dan gum arab menggunakan metode pengeringan semprot. Maltodekstrin dengan nilai
DE 18 dipilih sebagai bahan pelapis mikroenkapsulasi, memiliki rantai glukosa sedang dan kelarutan
lebih tinggi. Enkapsulasi menggunakan maltodekstrin– gum arabic (MD / GA) sebagai bahan
microwall merupakan solusi untuk mengatasi masalah yang terkait dengan aplikasi langsungnya ( Rao
dkk., 2016 ). MD / GA menawarkan perlindungan terbaik dalam senyawa bioaktif dalam
mikroenkapsulasi yang dilakukan ( Alves dkk., 2014 ). Gum sebagai bahan pelapis ditambahkan ke
formulasi untuk meningkatkan efisiensi mikroenkapsulasi beberapa polifenol dengan spraydrying ( Busch
dkk., 2017 ).
Gambar 3 menunjukkan bahwa morfologi mikrokapsul propolis dianalisis dengan scanning
electron microscopy (SEM). Mikrokapsul SDP menyajikan ukuran partikel bola seragam mulai dari 0,8
hingga 4 l m. Gambar SEM mikrokapsul SDP mirip dengan itu
diamati oleh Busch (2017), mikroenkapsulasi meningkatkan keseragaman ukuran dan integritas
mikropartikel, juga menunjukkan perlindungan bahan inti yang lebih baik ( Busch dkk., 2017 ).
3.3. Efek dosis pada penghambatan inflamasi
Tes in vivo dilakukan untuk mengevaluasi sifat anti-inflamasi dari propolis. Peradangan diinduksi
oleh karagenan ( Gambar 4 A), dan hasil uji antiradang menunjukkan perubahan volume kaki tikus di
setiap kelompok uji ( Meja 2 dan Gambar 4 B). Pada kelompok kontrol negatif volume edema
meningkat dari 0 sampai 5 jam dan menunjukkan kecenderungan yang berbeda dibandingkan
dengan kelompok lain. Hal ini terjadi karena tidak terdapat senyawa aktif yang dapat menghambat
respon inflamasi pada kelompok kontrol negatif. Oleh karena itu, edema meningkat setiap jamnya.
Untuk kedua jenis mikroenkapsulasi propolis (SPM dan RPM), penurunan volume kaki yang signifikan
diamati, menunjukkan efek anti-inflamasi yang terkait dengan SPM dan RPM ( Gambar 4 C). Ini hasil
dari volume edema

Gambar 3. Gambar SEM bubuk propolis semprot kering. (A) maltodekstrin microwave dan gum arabic, (B) mikrokapsul propolis halus, (C) mikrokapsul propolis kasar.

Gambar 4. Cakar tikus. (A) Sebelum injeksi karagenan, (B) setelah injeksi karagenan, (C) setelah pemberian propolis.

Meja 2
Perbedaan volume edema tiap jamnya.

Kelompok uji Volume edema rata-rata (mL)

Ve 0 Ve 1 Ve 2 Ve 3 Ve 4 Ve 5

Kontrol negatif 0,24 ± 0,06 0,41 ± 0,11 0,59 ± 0,12 0,67 ± 0,13 0,80 ± 0,06 0,90 ± 0,23
Kontrol positif 0,28 ± 0,06 0,28 ± 0,06 0,20 ± 0,06 0,14 ± 0,09 0,12 ± 0,08 0,06 ± 0,06
RPM 25 0,33 ± 0,07 0,32 ± 0,12 0,34 ± 0,14 0,28 ± 0,09 0,13 ± 0,11 0,06 ± 0,06
SPM 50 0,35 ± 0,11 0,20 ± 0,14 0,21 ± 0,09 0,30 ± 0,12 0,20 ± 0,13 0,15 ± 0,11
RPM 50 0,39 ± 0,11 0,48 ± 0,13 0,32 ± 0,10 0,22 ± 0,17 0,25 ± 0,14 0,14 ± 0,09
SPM 100 0,36 ± 0,13 0,48 ± 0,09 0,32 ± 0,11 0,27 ± 0,11 0,11 ± 0,09 0,05 ± 0,06
RPM 100 0,36 ± 0,08 0,55 ± 0,10 0,57 ± 0,14 0,50 ± 0,15 0,50 ± 0,07 0,21 ± 0,13
SPM 200 0,48 ± 0,15 0,42 ± 0,14 0,34 ± 0,11 0,30 ± 0,14 0,18 ± 0,12 0,10 ± 0,08

Catatan. RPM 25: Mikrokapsul propolis kasar 25 mg / kg, SPM: Mikrokapsul propolis halus 50 mg / kg, RPM 50: Mikrokapsul propolis kasar 50 mg / kg, SPM 100: Halus
mikrokapsul propolis 100 mg / kg, RPM 100: Mikrokapsul propolis kasar 100 mg / kg, SPM 200: Mikrokapsul propolis halus 200 mg / kg, Ve 0 = volume kaki dalam 0 jam.
Ve 0 = volume kaki dalam 0 jam. Ve 1 = volume kaki dalam 1 jam. Ve 2 = volume kaki dalam 2 jam. Ve 3 = volume kaki dalam 3 jam. Ve 4 = volume kaki dalam 4 jam. Ve 5 = volume kaki dalam 5 jam.
1536 M. Sahlan dkk. / Jurnal Ilmu Biologi Saudi 26 (2019) 1531-1538

diturunkan oleh RPM 25 (1,27). Nilai AUC berbanding terbalik dengan kemampuan persentase
di kaki tikus per setiap kelompok uji diwakili bahwa ada senyawa antiinflamasi dalam SPM dan RPM ( Gambar
5 ). inhibisi inflamasi. Kontrol negatif yang memiliki nilai AUC tertinggi menghasilkan persentase inhibisi
Nilai AUC daerah di bawah nilai lengkung antara rata-rata volume edema terhadap persentase inflamasi terendah, begitu pula sebaliknya. SPM menghasilkan efek anti-inflamasi yang lebih baik
penghambatan inflamasi ( Tabel 3 dan Gambar 6 ). Kontrol negatif memiliki nilai AUC tertinggi (3,03). daripada RPM karena nilai inhibisi peradangan.
Sebaliknya, SPM 50 memiliki nilai AUC terendah (0,90),

Gambar 5. Volume edema pada kaki tikus tiap kelompok uji (SP: mikroenkapsulasi propolis halus, RP: mikroenkapsulasi propolis kasar).

Tabel 3
Nilai AUC per setiap kelompok uji.

Kelompok uji Area di bawah kurva ( mL. Jam) 1 Total

2 3 4 5

Kontrol negatif 0.32 0,5 0.63 0.74 0.85 3.03

Kontrol positif 0.28 0.24 0.17 0.13 0,09 0.9
RPM 25 0.33 0.33 0.31 0.2 0,09 1.27
SPM 50 0.28 0.21 0.25 0.25 0.17 1.16
RPM 50 0.44 0.4 0.27 0.24 0.19 1.54
SPM 100 0.42 0.4 0.29 0.19 0,08 1.39
RPM 100 0.45 0,56 0,53 0,5 0.36 2.4
SPM 200 0.45 0.38 0.32 0.24 0.14 1.53

Gambar 6. Grafik ABK per setiap grup uji SPM dan RPM.
 M. Sahlan dkk. / Jurnal Ilmu Biologi Saudi 26 (2019) 1531-1538
Tabel 4
Persentase penghambatan inflamasi untuk setiap kelompok uji.
Kelompok uji Penghambatan inflamasi (%)
Kontrol positif 70.26
SPM 25 62.24
RPM 25 58.12
SPM 50 61.81
RPM 50 49.14
SPM 100 54.36
RPM 100 20.92
SPM 200 49.71
Persentase penghambatan inflamasi tertinggi diperoleh dari SPM 50, dengan nilai 61,81%, diikuti
oleh RPM.
25, dengan nilai 58.12% ( Tabel 4 ). Dengan menggunakan metode kuadrat terkecil, kita dapat
menghitung SPM dan RPM dalam dosis yang sama; dalam kasus kami, kami ingin membandingkan
penghambatan inflamasi dengan dosis 25 mg / kg. SPM dan RPM dengan dosis 25 mg / kg memiliki
nilai inhibisi peradangan masing-masing 62,24% dan 58,12%.
Hasil ini didukung oleh penelitian dari Christina dkk. (2018) Hal ini menunjukkan bahwa propolis
lunak memiliki kandungan polifenol dua setengah kali lebih banyak dibandingkan propolis kasar.
Kandungan polifenol propolis lunak adalah 1.106 l g / mL sedangkan propolis kasar 444,75 l g / mL ( Christina
dkk., 2018 ). Polifenol adalah senyawa fenolik dengan lebih dari satu gugus hidroksil. Polifenol
ditemukan di banyak tumbuhan dan memiliki aktivitas biologis yang penting, seperti antiradang,
antimikroba, antitrombosis, dan imunomodulator ( Chan et al., 2013 ), selain menjadi antioksidan kuat ( Nina
dkk., 2016 ). Penelitian dilakukan oleh Pratami dkk. (2018) membandingkan aktivitas antioksidan dari
propolis lunak dan kasar dan menemukan bahwa propolis lunak memiliki aktivitas antioksidan yang
lebih baik
dari propolis kasar, dengan EC 50 Nilai dalam tes DPPH adalah 25,54 dan 69,96 l g / mL,
masing-masing ( Pratami dkk., 2018 ). Kelimpahan
radikal bebas dapat berfungsi untuk mengidentifikasi senyawa yang aktivitas antioksidannya rendah.
Radikal bebas ini menghasilkan stres oksidatif, yang memicu peradangan. SPM menunjukkan
penghambatan inflamasi yang lebih baik daripada RPM, kemungkinan karena kandungan
polifenolnya dan peningkatan aktivitas antioksidan.
3.4. Hubungan antara dosis dan toksisitas propolis
Setelah 10 hari penelitian disimpulkan, terdapat beberapa kematian hewan pada kelompok
SPM100, SPM200, dan RPM100. Hasil ini kemungkinan besar disebabkan oleh toksisitas propolis
dan serupa dengan yang dilaporkan untuk propolis Brasil merah oleh Da Silva dkk. (2015) . Pada
penelitian tersebut propolis Brazil merah pada dosis 200 mg / kg dan 300 mg / kg menunjukkan
indikasi toksisitas ( da Silva dkk., 2015 ). Toksisitas ini diprediksikan oleh ketidakseimbangan hormon
estrogen dan kandungan isoflon yang tinggi yang menyebabkan peradangan.
Estrogen adalah hormon seks yang terkait dengan aktivitas peradangan ( Lessey dan Young,
2014 ). Memang, estrogen menekan faktor-faktor inflamasi seperti IL-6 dan TNF- Sebuah. Jadi,
hormon estrogen yang diaktifkan dapat mengikat faktor transkripsi seperti NF-kB dan mencegahnya
dari pengikatan DNA, yang dapat menekan peradangan ( Weitzmann dan Paci fi ci, 2006 ). Akibatnya,
jika terjadi ketidakseimbangan estrogen, inhibisi inflamasi akan berkurang. Propolis dari Tetragronula
sp dari Indonesia memiliki kandungan fl avonoid yang tinggi ( Christina dkk., 2018; Pratami dkk., 2018 ),
dan isoflavon adalah salah satu jenis flavonoid. Kandungan isoflavon yang tinggi melebihi batas
tertentu dapat memicu stres oksidatif dan menyebabkan reaksi peradangan ( da Silva dkk., 2015 ).
3.5. Hasil analisis statistik
Sebelum dilakukan uji Kruskal-Wallis dan uji ANOVA satu arah dilakukan uji homogenitas dan
normalitas. Kedua
1537
data dari SPM dan RPM menghasilkan distribusi normal dengan sig. nilai 0,367 untuk SPM dan 0,447
untuk RPM. Namun demikian, data mikroenkapsulasi soft propolis menunjukkan distribusi normal
(nilai sig. 0,41), sehingga pengujian ini akan dilanjutkan dengan uji Kruskal – Wallis dan Post-Hoc
Mann – Whitney. Untuk mikroenkapsulasi propolis kasar, berdistribusi normal, dilanjutkan dengan uji
ANOVA satu arah dan uji LSD Multiple Comparisons. Uji Kruskal-Wallis menghasilkan hasil yang
sangat berbeda dalam minimal dua kelompok uji. Setelah itu, uji Post-Hoc Mann-Whitney
menunjukkan bahwa kontrol negatif secara signifikan berbeda dengan kelompok uji lainnya,
sedangkan kontrol positif tidak berbeda dengan kelompok SPM 50 dan RPM 100. Sebaliknya, kontrol
positif secara signifikan berbeda dari kelompok SPM 200. Tes ANOVA satu arah menunjukkan bahwa
ada perbedaan yang signifikan antara minimal dua kelompok uji. Selanjutnya, uji LSD Multiple
Comparisons menunjukkan bahwa kontrol negatif berbeda nyata dengan kelompok uji lainnya,
sedangkan kontrol positif tidak berbeda dengan kelompok RPM 25 tetapi berbeda dengan kelompok
RPM 50 dan RPM 100.
4. Kesimpulan
Biomarker untuk soft propolis yang kami identifikasi dalam penelitian ini adalah [6]
-dehydrogingerdione, alpha-tocopherol succinate, adhyperforin, 6-epiangustifolin,
deoxypodophyllotoxin, dan kurarinone, sedangkan untuk propolis kasar adalah [6]
-dehydrogingerdione, alpha-tocopherol succinate , adhyperforin, 6-epiangustifolin, dan xanthoxyletin.
Propolis yang lembut dan kasar memiliki efek antiinflamasi. Propolis halus menunjukkan efek
penghambatan inflamasi yang lebih tinggi daripada propolis kasar. Hasil ini disebabkan oleh fakta
bahwa propolis lunak mengandung lebih banyak isoflavon daripada propolis kasar. Isoflon memiliki
aktivitas antioksidan yang mereduksi radikal bebas yang menyebabkan stres oksidatif dan
peradangan. Studi ini menunjukkan bahwa propolis memiliki potensi untuk dikembangkan sebagai
obat antiinflamasi non steroid sejak kita in vivo Hasil percobaan menunjukkan kemampuannya dalam
menurunkan volume kaki inflamasi pada tikus Sprague Dawley yang diinduksi oleh karagenan.
Pengakuan
Kami berterima kasih atas pendanaan dari USAID melalui program SHERA - Center for
Development of Sustainable Region (CDSR). Penulis juga mengakui dukungan keuangan yang
sebagian didanai dari Proyek PTUPT 2018 (No: 499 / UN2.R3.1 / HKP05.00 / 2018) dan Program
Profesor Kelas Dunia (No.
123.3 / D2.3 / KP / 2018) dari Kementerian Riset, Teknologi, dan Pendidikan Tinggi Republik
Indonesia.
Referensi
Alves, SF, Borges, LL, dos Santos, TO, de Paula, JR, Conceição, EC, Bara, MTF,
2014. Mikroenkapsulasi minyak atsiri dari buah Pterodon emarginatus menggunakan gum arabic dan
maltodextrin sebagai bahan dinding: komposisi dan stabilitas. DryingTechnol. 32 (1), 96–105. https://doi.org/10.1080/07373937.2
.
Bankova, V., 2005. Keanekaragaman kimia propolis dan masalah
standardisasi. J. Ethnopharmacol. 100 (1–2), 114–117. https://doi.org/
10.1016 / j.jep.2005.05.004 .
Bankova, V., Castro, S. De, Marcucci, M., 2000. Propolis: Kemajuan terbaru di
kimia dan asal tumbuhan. Apidologie 31 (1), 3–15. https://doi.org/10.1051/ apido: 2000102 .
Bankova, V., Popova, M., Trusheva, B., 2014. Propolis senyawa volatil: kimiawi
keanekaragaman dan aktivitas biologis: tinjauan. Chem. Sen. J.8 (1), 28. https: // doi. org / 10.1186 /
1752-153X-8-28 .
Bittencourt, MLF, Ribeiro, PR, Franco, RLP, Hilhorst, HWM, de Castro, RD,
Fernandez, LG, 2015. Profil metabolit, aktivitas antioksidan dan antibakteri dari propolis Brasil: Penggunaan
analisis korelasi dan multivariat untuk mengidentifikasi senyawa bioaktif potensial. Res Makanan. Int. 76 (3),
449–457. https: // doi.org/10.1016/j.foodres.2015.07.008 .
1538 M. Sahlan dkk. / Jurnal Ilmu Biologi Saudi 26 (2019) 1531-1538
Busch, VM, Pereyra-Gonzalez, A., Segatin, N., Santagapita, PR, Poklar Ulrih, N.,
Buera, MP, 2017. Enkapsulasi propolis dengan pengeringan semprot: Karakterisasi dan stabilitas. LWT - Sci
Makanan. Technol. 75, 227–235. https://doi.org/10.1016/j. lwt.2016.08.055 .
Chan, GCF, Cheung, KW, Sze, DMY, 2013. Imunomodulator dan
sifat antikanker propolis. Clin. Rev. Alergi Immunol. 44 (3), 262–273.
https://doi.org/10.1007/s12016-012-8322-2 .
Christina, D., Hermansyah, H., Wijanarko, A., Rohmatin, E., Sahlan, M., Pratami, DK,
Mun'Im, A., 2018. Pemilihan propolis Tetragonula sp. ekstrak pelarut dengan parameter konsentrasi flavonoid
dan polifenol dan aktivitas antioksidan. Dalam: AIP Conference Proceedings, Vol. 1933.
https://doi.org/10.1063/1.5023967. Da Silva, FC, Da Fonseca, CR, Alencar, De, et al., 2013. Penilaian produksi
efisiensi, sifat fisikokimia dan stabilitas penyimpanan propolis semprot-kering, bahan tambahan makanan alami,
menggunakan sistem pembawa berbasis gumArabic dan OSA. Proses Bioproduk Makanan. 91 (1), 28–36. https://doi.org/10.1016/j.
10.1016 / J.EJPHAR.2008.02.067 .
fbp.2012.08.006 .
da Silva, RO, Andrade, VM, Bullé Rêgo, ES, Azevedo Dória, GA, dos Santos Lima,
B., da Silva, FA, Zanardo Gomes, M., 2015. Toksisitas oral akut dan sub-akut dari propolis merah Brasil pada
tikus. J. Ethnopharmacol. 170, 66–71. https://doi.org/
10.1016 / J.JEP. 2015.05.009 .
Domiati, S., El-Mallah, A., Ghoneim, A., Bekhit, A., El Razik, HA, 2016. Evaluasi
anti-inflamasi, aktivitas analgesik, dan efek samping dari beberapa turunan pirazol. Inflammofarmakologi 24 (4),
163–172 .
Du Toit, K., Buthelezi, S., Bodenstein, J., 2009. Anti-inflamasi dan antibakteri
profil senyawa terpilih yang ditemukan di propolis Afrika Selatan. S. Afr. J. Sci. 105 (11–12), 470–472 .
Fullerton, JN, Gilroy, DW, 2016. Resolusi peradangan: terapi baru
perbatasan. Nat. Rev. Drug Discovery 15 (8), 551 .
Funakoshi-Tago, M., Okamoto, K., Izumi, R., Tago, K., Yanagisawa, K., Narukawa, Y.,
Tamura, H., 2015. Aktivitas antiradang flavonoid di propolis Nepal dikaitkan dengan penghambatan jalur
pensinyalan IL-33. Int. Immunopharmacol. https://doi.org/10.1016/j.intimp.2015.01.012 .
Hawkey, CJ, Langman, MJS, 2003. Obat antiradang nonsteroid: keseluruhan
risiko dan manajemen. Peran pelengkap untuk penghambat COX-2 dan penghambat pompa proton. Gut 52 (4),
600–608 .
Houglum, JE, Harrelson, GL, 2011. Prinsip Farmakologi untuk Atletik
Pelatih. Slack Incorporated, Amerika Serikat .
Hroboňová, K., Lehotay, J., Čižmárik, J., Sádecká, J., 2013. Perbandingan HPLC dan
Metode spektrometri fluoresensi untuk penentuan turunan kumarin dalam propolis. J. Liq. Kromatogr. Relat.
Technol. 36 (4), 486–503. https://doi.org/
10.1080 / 10826076.2012.660724 .
Kivrak, I., Kivrak, S., Harmandar, M., 2016. Pengembangan metode cepat untuk
penentuan residu antibiotik dalam madu menggunakan UPLC-ESI-MS / MS. Sci Makanan. Technol., Scielo
Lessey, BA, Young, SL, 2014. Ketidakseimbangan homeostasis di endometrium
wanita dengan cacat implantasi: Peran estrogen dan progesteron. Sem. Reproduksi. Med. 32 (5), 365–375. https://doi.org/10.1055/s-0034-1376355
. Velikova, M., Bankova, V., Tsvetkova, I., Kujumgiev, A., Marcucci, MC, 2000.
Lima Cavendish, R., De Souza Santos, J., Belo Neto, R., Oliveira Paixao, A., Valeria
Oliveira, J., Divino De Araujo, E., Zanardo Gomes, M., 2015. Efek antinociceptive dan anti-inflamasi ekstrak
propolis merah Brasil dan formononetin pada hewan pengerat.
J. Ethnopharmacol. 173, 127–133. https://doi.org/10.1016/
j.jep.2015.07.022 .
Mahadewi, AG, Christina, D., Hermansyah, H., Wijanarko, A., Farida, S., Adawiyah,
R., Sahlan, M., 2018. Pemilihan penanda diskriminasi dari berbagai propolis
untuk memetakan dan mengidentifikasi aktivitas anti Candida albicans. Konfigurasi AIP Proc. 1933 (1),
20005. https://doi.org/10.1063/1.5023939 .
Marquiafável, FS, Nascimento, AP, Barud, H. da S., Marquele-Oliveira, F., De-
Freitas, LAP, Bastos, JK, Berretta, AA, 2015. Pengembangan dan karakterisasi ekstrak kering propolis
terstandarisasi baru diperoleh dengan desain faktorial dengan kandungan C artepillin tinggi. J. Pharm. Technol.
Res obat. 4 (1),
1. https://doi.org/10.7243/2050-120x-4-1 .
Nina, N., Quispe, C., Jiménez-Aspee, F., Theoduloz, C., Giménez, A., Schmeda-
Hirschmann, G., 2016. Profil kimiawi dan aktivitas antioksidan propolis Bolivia. J. Sci. Pertanian Makanan 96 (6),
2142–2153. https://doi.org/10.1002/jsfa.7330 .
Paulino, N., Abreu, SRL, Uto, Y., Koyama, D., Nagasawa, H., Hori, H., Bretz, WA,
2008. Efek antiradang dari senyawa yang tersedia secara hayati, Artepillin C, dalam propolis Brasil. Eur. J.
Pharmacol. 587 (1–3), 296–301. https://doi.org/
Paulino, N., Coutinho, LA, Coutinho, JR, Vilela, GC, Pio, V., Paulino, AS, 2015.
Efek antiulserogenik formulasi propolis Brazil pada tikus. Pharmacol. Pharm. 6, 580–588 .
Piccinelli, AL, Campone, L., Dal Piaz, F., Cuesta-Rubio, O., Rastrelli, L., 2009.
Jalur fragmentasi polycyclic polyisoprenylated benzophenones dan profil degradasi nemorosone dengan
spektrometri massa tandem multi-tahap. Selai. Soc. Spektrom Massa. 20 (9), 1688–1698 https://doi.org/
https://doi.org/10.1016/j.jasms.2009.05.004 .
Pratami, DK, Mun, A., Sundowo, A., Sahlan, M., 2018. Profil dan Profil Fitokimia
aktivitas antioksidan ekstrak etanol propolis dari lebah tetragonula. Pharmacognosy J. 10 (1), 128–135. https://doi.org/10.5530/pj.201
.
Rao, PS, Bajaj, RK, Mann, B., Arora, S., Tomar, SK, 2016. Enkapsulasi
antioksidan peptida diperkaya kasein hidrolisat menggunakan campuran arabik maltodekstrin-gum. J. Food Sci.
Technol. 53 (10), 3834–3843. https://doi.org/
10.1007 / s13197-016-2376-8 .
Sahlan, M., Dienayati, D., Hamdi, D., Zahra, S., Hermansyah, H., Chulasiri, M., 2017.
Proses enkapsulasi ekstrak propolis dengan kasein misel meningkatkan aktivitas tabir surya. Makara J. Technol.
21 (1), 1–6 .
Sahlan, M., Supardi, T., 2013. Enkapsulasi propolis Indonesia dengan kasein
misel. Int. J. Pharma Bio Sci. 4 (1), 297–305 .
Shi, H., Yang, H., Zhang, X., Sheng, Y., Huang, H., Yu, L., 2012. Isolasi dan
karakterisasi lima ester gliserol dari wuhan propolis dan potensi sifat anti-inflamasi. J. Agric. Makanan. Chem. 60
(40), 10041–10047.
https://doi.org/10.1021/jf302601m .
Soekanto, SA, Bachtiar, EW, Ramadhan, AF, Febrina, R., Sahlan, M., 2018.
efek permen madu propolis pada C. Albicans dan viabilitas biofilm isolat klinis (in-vitro). Dalam: Prosiding
Konferensi AIP. AIP Publishing, hal. 30004 .
Troendle, FJ, Reddick, CD, Yost, RA, 1999. Deteksi farmasi
senyawa dalam jaringan dengan desorpsi / ionisasi laser yang dibantu matriks dan desorpsi laser / ionisasi
kimiawi tandem spektrometri massa dengan perangkap ion kuadrupol. Selai. Soc. Spektrom Massa. 10 (12),
1315–1321. https://doi.org/
10.1016 / S1044-0305 (99) 00103-8 .
Ent-kaurene antibakteri dari propolis Brasil lebah asli tanpa sengat. Fitoterapia 71 (6), 693–696 https://doi.org/https://doi.org/10.1016/
(00) 00213-6 .
Weitzmann, MN, Paci fi ci, R., 2006. Defisiensi estrogen dan pengeroposan tulang: an
kisah yang menghasut. J. Clin. Investig. 116 (5), 1186–1194. https://doi.org/
10.1172 / JCI28550 .