Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Rimpang Kunyit (Curcumae

Domesticae Rhizmoma) terhadap Pertumbuhan Bakteri Streptococcus

pneumoniae

Kelompok H-1:
Tasya Putri Salsabila / 110117151
Sintha Mardani / 110117364
Algadiska Millenia Vandanada / 110118430
Santiko Medhaakumara Laurent / 110119013
Sheryl Evina Wahjudi / 110119041
Zahwa Dhiba / 110119051
Ericko Richie Rudy Tulus / 110119060
Xandramela Limala Aliciya Junaidi Lee / 110119069
Ni Wayan Valda Dianitha Utami /110119072

FAKULTAS FARMASI
DEPARTEMEN BIOLOGI
UNIVERSITAS SURABAYA
2021
 DAFTAR ISI

DAFTAR ISI...........................................................................................................I
DAFTAR TABEL................................................................................................III
DAFTAR GAMBAR...........................................................................................IV
DAFTAR PERSAMAAN......................................................................................V

BAB I PENDAHULUAN.......................................................................................1
1.1. Latar Belakang..........................................................................................1
1.2. Masalah Penelitian....................................................................................3
1.3. Tujuan Penelitian.......................................................................................3
1.4. Manfaat Penelitian.....................................................................................3
1.5. Hipotesis....................................................................................................4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA............................................................................5
2.1 Pneumonia.................................................................................................5
2.1.1 Definisi...............................................................................................5
2.1.2 Klasifikasi..........................................................................................5
2.1.3 Etiologi...............................................................................................5
2.1.4 Terapi Pneumonoia............................................................................7
2.2 Streptococcus Pneumoniae........................................................................7
2.2.1 Morfologi...........................................................................................7
2.2.2 Patogenesis.........................................................................................9
2.2.3 Terapi bakteri Streptococcus pneumoniae.........................................9
2.3 Rimpang Kunyit (Curcumae Domesticae Rhizoma)...............................10
2.3.1 Klasifikasi........................................................................................10
2.3.2 Definisi.............................................................................................10
2.3.3 Kandungan Senyawa Kimia.............................................................11
2.4 Kurkumin.................................................................................................12
2.4.1 Definisi.............................................................................................12
2.4.2 Manfaat............................................................................................13
2.5 Metode Uji Aktivitas Antibakteri............................................................14
2.5.1 Metode Dilusi...................................................................................14

I
 2.5.2 Metode Difusi..................................................................................14
2.5.3 Pengukuran Zona Hambat................................................................15
2.6 Kerangka Konseptual..............................................................................16
BAB III METODE PENELITIAN.....................................................................17
3.1 Desain Penelitian.....................................................................................17
3.2 Variabel Penelitian..................................................................................17
3.3 Definisi Operasional Variabel Penelitian................................................17
3.4 Bahan dan Alat........................................................................................18
3.4.1 Bahan Penelitian..............................................................................18
3.4.2 Alat...................................................................................................19
3.5 Populasi dan Sampel...............................................................................19
3.5.1 Populasi............................................................................................19
3.5.2 Sampel..............................................................................................19
3.6 Instrumen Penelitian................................................................................21
3.7 Metode Pengumpulan Data.....................................................................21
3.8 Analisis Data...........................................................................................21
3.9 Kerangka Operasional.............................................................................22
LAMPIRAN..........................................................................................................23
Lampiran 1. Anggaran Penelitian.......................................................................23
Lampiran 2. Matriks Waktu Penelitian..............................................................23
DAFTAR PUSTAKA...........................................................................................24

II
 DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Penyebab pneumonia komunitas (Perhimpunan Dokter Paru Indonesia,

2014)........................................................................................................................6
Tabel 2.2 Terapi antibiotik awal untuk pasien HAP dan VAP tanpa risiko patogen
MDR, onset dini dan semua derajad penyakit (Perhimpunan Dokter Paru
Indonesia, 2003).......................................................................................................7
Tabel 3.1 Definisi Operasional Variabel...............................................................18
Tabel 3.2 Instrumen Penelitian..............................................................................21

III
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Gambar skematik struktur permukaan Streptococcus pneumoniae. 1,

membran plasma (9 nm); 2, lapisan peptidoglikan dinding sel (20 nm); 3, CWPS
dan protein-protein (20-30 nm); 4, kapsul polisakarida (200-400 nm). CWPS
terletak pada lapisan luar dan dalam dari dinding sel yang diisolasi.......................8
Gambar 2.2 Gambar simplisia rimpang kunyit....................................................11
Gambar 2.3 Struktur kimia demetoksikurkumin (demethoxycurcumin),
bismetoksikurkumin (bismethoxycurcumin), dan kurkumin (curcumin)...............12
Gambar 2.4 Kerangka Konseptual Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol
Rimpang Kunyit (Curcumae Domesticae Rhizoma) Terhadap Pertumbuhan
Bakteri Streptococcus pneumoniae........................................................................16
Gambar 3.1 Kerangka Operasional Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol
Rimpang Kunyit (Curcumae Domesticae Rhizoma) Terhadap Pertumbuhan
Bakteri Streptococcus pneumoniae........................................................................23

IV
 DAFTAR PERSAMAAN

Persamaan 3.1 Persamaan Federer.......................................................................20

V
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Pneumonia adalah peradangan akut kantong udara pada paru-paru
akibat suatu infeksi. Alveolus pasien pneumonia akan berisi nanah dan cairan,
yang mengakibatkan pasien kesakitan saat bernafas dan mengalami
kekurangan oksigen [ CITATION Wor13 \l 1033 ].
Pneumonia masih menjadi permasalah kesehatan yang serius.
Pneumonia menjadi penyebab utama kematian anak-anak di bawah usia lima
tahun (balita) dan orang lanjut usia yang berusia lebih dari 75 tahun. Data dari
World Health Organization (WHO) menyebutkan bahwa pneumonia
menyebabkan kematian sekitar 1,6 juta jiwa pada anak-anak balita atau
sekitar 18% dari total kematian anak-anak balita. Lebih dari 99% kematian
yang disebabkan pneumonia berasal dari negara-negara berpendapatan rendah
dan menengah, terutama di kawasan Afrika Sub-Sahara dan Asia Selatan.
Pneumonia merupakan penyakit yang memiliki tingkat kematian tertinggi
pada orang-orang berusia lebih dari 80 tahun di wilayah Eropa Barat dengan
tingkat kematian sekitar 279 kematian per 100.000 orang, sedangkan di
wilayah Eropa Timur tingkat kematian pneumonia pada bayi berusia 0-6 hari
sekitar 278 kematian per 100.000 orang [ CITATION Wor13 \l 1033 ]. Riset
kesehatan dasar (Riskesdas) mencatatkan pneumonia merupakan penyakit
penyebab kematian kedua pada balita setelah diare, yaitu sebesar 15,5% pada
tahun 2007, dengan rata-rata 83 balita meninggal setiap harinya akibat
pneumonia [ CITATION Kem10 \l 1033 ].
Pneumonia dapat disebabkan oleh berbagai faktor, faktor yang paling
banyak menimbulkan pneumonia adalah bakteri dan virus. Salah satu patogen
yang paling banyak menimublkan pneumonia adalah Streptococcus
pneumoniae [ CITATION Wor13 \l 1033 ]
Streptococcus pneumoniae adalah bakteri gram positif, berbentuk
bulat atau kokus hingga lanset yang tersusun membentuk rantai.
Streptococcus pneumoniae memiliki tiga lapisan yang berbeda yaitu

1
membrane plasma, dinding sel, dan kapsul. Streptococcus pneumoniae dapat
masuk ke dalam sistem pernafasan bagian atas lalu melekat dengan sel-sel
epitel pada faring, yang kemudian akan berpindah ke paru-paru dan
menyebabkan pneumonia [ CITATION Vel \l 1033 ].
Penanganaan pneumonia yang disebabkan oleh Streptococcus
pneumoniae dapat menggunakan obat-obat antibakteri konvensional, seperti
penisilin, eritromisin, tetrasiklin, kloramfenikol, seftriason, dan sefotasin.
Terdapat laporan kasus bahwa beberapa tahun terakhir untuk terapi
Streptococcus pneumoniae dengan obat-obat antibakteri konvensional
tersebut tidak efektif, karena muncul bakteri Streptococcus pneumoniae yang
resisten terhadap penisilin dan resisten terhadap obat (Drug Resistant
Streptococcus pneumoniae) [ CITATION Ale97 \l 1033 ].
Pengembangan terapi dari bahan-bahan herbal yang memiliki aktivitas
antibakteri khususnya untuk bakteri Streptococcus pneumoniae perlu
dikembangkan. Salah satu bahan herbal yang mungkin memiliki aktivitas
antibakteri terhadap bakteri Streptococcus pneumoniae adalah rimpang kunyit
(Curcumae Domesticae Rhizoma).
Rimpang kunyit adalah bagian utama dari tanaman kunyit (Curcuma
domestica). Kulit rimpang kunyit memiliki warna kecoklatan dan bagian
dalam berwarna kuning tua, kuning jingga, atau kuning jingga kemerahan
hingga kecoklatan. Senyawa utama dari rimpang kunyit adalah kurkuminoid
dan minyak atsiri. Kurkuminoid dalam rimpang kunyit berkisar 3,0-5,0%,
kurkuminoid terdiri dari kurkumin dan turunannya seperti
demetoksikurkumin dan bismetoksikurkumin [CITATION Har13 \l 1033 ].
Kurkumin adalah senyawa aktif yang terkandung dalam rimpang
kunyit yang telah diakui dan digunakan untuk berbagai macam tujuan dalam
berbagai bentuk. Kurkumin telah dimanfaatkan secara tradisional di berbagai
negara di Kawasan Asia sebagai bahan pewarna, kari, teh, dan kosmetik.
Kurkumin telah digunakan sebagai obat, karena sifat antioksidan,
antiinflamasi, antimikroba dan antikanker dibeberapa daerah. Kurkumin telah
dilaporkan memiliki aktivitas antimikroba dalam spektrum luas (broad-
spectrum antimicrobial) [CITATION Kai20 \l 1033 ].

2
 Peneliti sangat tertarik untuk menelakukan penelitian aktivitas
antibakteri ekstak rimpang kunyit dengan metode difusi sumuran dengan
judul “Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Rimpang Kunyit (Curcumae
Domesticae Rhizoma) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Streptococcus
pneumoniae”, karena berdasarkan pencarian peneliti belum pernah ada
penelitian mengenai topik pada judul ini sehingga dapat sangat bermanfaat
bagi berbagai pihak.

1.2. Masalah Penelitian

Berdasarkan latar belakang yang dapat dirumuskan masalah penelitian
sebagai berikut:
 Bagaimana efektifitas antibakteri ekstrak rimpang kunyit (Curcumae
Domesticae Rhizoma) dalam menghambat bakteri Streptococcus
pneumoniae?

1.3. Tujuan Penelitian

Tujuan yang hendak dicapai dalam penelitian ini:
 Mengetahui bagaimana efektifitas antibakteri ekstrak rimpang kunyit
(Curcumae Domesticae Rhizoma) dalam menghambat bakteri
Streptococcus pneumoniae?

1.4. Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat membawa manfaat bagi beberapa pihak.
Manfaat penelitian ini dapat dirinci sebagai berikut:
 Bagi negara dan dunia dapat memberikan pemikiran baru dalam
terapi bakteri Streptococcus pneumoniae dan dapat dijadikan
landasan untuk penelitian lanjutan terkait antibakteri ekstrak kunyit
(Curcuma domestica) pada bakteri Streptococcus pneumoniae.
 Bagi pabrik obat herbal dapat dijadikan bahan pertimbangan untuk
memproduksi obat terapi bakteri Streptococcus pneumoniae dari
ekstrak rimpang kunyit.

3
  Bagi tenaga kesehatan dan masyarakat dapat menambah wawasan
dan menjadi referensi dalam terapi bakteri Streptococcus
pneumoniae.

1.5. Hipotesis
Hipotesis adalah suatu pernyataan atau jawaban sementara dari suatu
teori yang akan diuji kebenarannya. Hipotesis dapat dijadikan panduan dalam
menganalisa hasil penelitian yang berdasar pada tujuan penelitian tersebut
[ CITATION Ima18 \l 1033 ]. Hipotesis dari penelitian yang berjudul “Uji
Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Rimpang Kunyit (Curcumae Domesticae
Rhizoma) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Streptococcus pneumoniae” dapat
dituliskan sebagai berikut:
H0: Ekstrak etanol rimpang kunyit (Curcumae Domesticae Rhizoma) tidak
memiliki aktivitas antibakteri terhadap pertumbuhan bakteri Streptococcus
pneumoniae.
H1: Ekstrak etanol rimpang kunyit (Curcumae Domesticae Rhizoma)
memiliki aktivitas antibakteri terhadap pertumbuhan bakteri Streptococcus
pneumoniae.

4
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Pneumonia
2.1.1 Definisi
Pneumonia adalah peradangan akut kantong udara pada paru-
paru akibat suatu infeksi. Alveolus pasien pneumonia akan berisi
nanah dan cairan, yang mengakibatkan pasien kesakitan saat bernafas
dan mengalami kekurangan oksigen [ CITATION Wor13 \l 1033 ].
2.1.2 Klasifikasi
Pneumonia dapat diklasifikasikan berdasarkan klinis dan
epidemiologis yang dapat dirinci sebagai berikut:
1) Pneumonia komunitas (community-acquired pneumonia / CAP)
adalah peradangan akut parenkim paru-paru pada masyarakat.
2) Pneumonia didapat dari rumah sakit atau pneumonia nosokomial
(hospital-acquired pneumonia / HAP) adalah pneumonia pada
pasien setelah dirawat selama 48 jam di rumah sakit dan tidak
terjangkit infeksi lain sebelum masuk rumah sakit (Perhimpunan
Dokter Paru Indonesia, 2003).
3) Health care associated pneumonia (HCAP) adalah pneumonia
yang berhubungan dengan faktor risiko kesehatan seperti
kesehatan sebelum rawat inap, dialisis, tinggal di panti jompo,
kondisi immunocompromised (Micek, et al., 2007).
4) Pneumonia akibat pemakaian ventilator (ventilator-acquired
pneumonia / VAP) adalah pneumonia yang terjadi setelah
pemasangan intubasi endotrakeal (Perhimpunan Dokter Paru
Indonesia, 2003).
2.1.3 Etiologi
Pneumonia dapat disebabkan oleh berbagai faktor seperti
bakteri dan virus. Patogen yang paling sering menyebabkan
pneumonia adalah Streptococcus pneumoniae, Haemophilus
influenzae tipe b (Hib), respiratory syncytial virus (RSV)

5
 [ CITATION Wor13 \l 1033 ]. Pneumonia nosokomial dapat
disebabkan oleh kuman bukan multi-drug resistance (MDR) seperti
Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, dan Methicillin
Sensitive Staphylococcus aureus (MSSA) dan kuman MDR seperti
Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae,
Acinetobacter spp dan Gram positif seperti Methicillin Sensitive
Staphylococcus aureus (MSSA), tetapi jarang ditemukan pneumonia
nosokomial yang disebabkan oleh jamur, kuman anaerob, dan
virus[ CITATION Per03 \l 1033 ]. Pneumonia komunitas dapat
disebabkan oleh berbagai macam kuman, yaitu bakteri, virus, jamur,
dan protozoa yang dapat dirinci dalam tabel 2.1[ CITATION Per14 \l
1033 ]:
Tabel 2.1 Penyebab pneumonia komunitas[ CITATION Per14 \l 1033 ]
Tipe Pasien Etiologi
Rawat Jalan Streptococcus pneumoniae;
Mycoplasma pneumoniae;
Haemophilus influenzae;
Clamidophila pneumoniae; Virus
respirasi
Rawat inap (non ICU) Streptococcus pneumoniae;
Mycoplasma pneumoniae;
Haemophilus influenzae;
Clamidophila pneumoniae;
Legionella spp; Aspirasi; Virus
respirasi
Rawat ICU Streptococcus pneumoniae;
Staphylococcus aureus; Legionella
spp; Basil gram negatif;
Haemophilus influenzae
2.1.4 Terapi Pneumonoia
Pasien pneumonia dapat diterapi dengan menggunakan
antibiotik. Berikut tabel terapi antibiotik yang dapat diberikan pada
pasien pneumonia:
Tabel 2.2 Terapi antibiotik awal untuk pasien HAP dan VAP tanpa risiko
patogen MDR, onset dini dan semua derajad penyakit[ CITATION Per03 \l
1033 ].
Patogen potensial Antibiotik yang
direkomendasikan

6
 Streptococcus pneumoniae Betalaktam + betalaktamase
Haemophilus influenzae (Amoksisilin klavulanat) atau
Methicillin Sensitive Sefalosporin G3 nonpseudomonal
Staphylococcus aureus (MSSA) (Seftriakson, sefotaksim) atau
Antibiotik sensitif basil Gram kuinolon respirasi (Levofloksasin,
negatif enterik (Escherichia coli, Moksifloksasin)
Klebsiella pneumoniae,
Enterobacter spp, Proteus spp,
Serratia marcescens

2.2 Streptococcus Pneumoniae

2.2.1 Morfologi
Streptococcus pneumoniae adalah bakteri gram positif,
berbentuk bulat hingga lanset yang tersusun membentuk rantai.
Streptococcus pneumoniae memiliki tiga lapisan yang berbeda yaitu
membrane plasma, dinding sel, dan kapsul. Dinding sel Streptococcus
pneumoniae tersusun atas tiga lapisan peptidoglikan yang merupakan
tempat melekatnya kapsul polisakarida (capsular polysaccharide),
polisakarida dinding sel (cell wall polysaccharide / CWPS), dan
kemungkinan juga terdapat protein.

7
 Gambar 2.1 Gambar skematik struktur permukaan Streptococcus
pneumoniae. 1, membran plasma (9 nm); 2, lapisan peptidoglikan
dinding sel (20 nm); 3, CWPS dan protein-protein (20-30 nm); 4,
kapsul polisakarida (200-400 nm). CWPS terletak pada lapisan luar
dan dalam dari dinding sel yang diisolasi
(dimodifikasi dari Velasco, et al., 1995)

Kapsul merupakan lapisan yang paling tebal, yang berfungsi

untuk menutupi struktur bagian dalam pneumokokus. Kapsul
pneumokokus terdiri dari polimer bermassa molekul tinggi yang
tersusun atas unit-unit oligosakarida, yang terdapat dua hingga
delapan monosakarida, juga terdapat fosforilkolin pada bagian kapsul
polisakarida [ CITATION Vel \l 1033 ].
Kapsul pneumokokus sudah dikenal sebagai faktor virulen
terbesar dari Streptococcus pneumoniae dengan mekanisme
Streptococcus pneumoniae mengakibatkan aktivasi jalur komplemen
alternatif berkurang, yang menyebabkan terjadinya resistensi terhadap
fagositosis, yang mengakibatkan terjadinya pengendapan komponen
opsonin yang tidak aktif, sehingga tidak terdapat imunogenitas
terhadap beberapa serotipe [ CITATION Vel \l 1033 ].
Dinding sel dari Streptococcus pneumoniae terdiri rantai
glikan dari N-aseteliglukosamin dan asam N-asetilmuramat yang
saling bersilangan dan terhubung melalui ikatan peptida. Rantai-rantai
peptida memiliki alanin sebagai residu pertama yang terhubung
dengan asam N-asetilmuramat. CWPS adalah suatu kompleks asam
teikoat yang mengandung residu fosforilkolin dan terhubung dengan
peptidoglikan melalui asam N-asetilmuramat[ CITATION Vel \l
1033 ].
Dinding sel Streptococcus pneumoniae juga merupakan salah
satu faktor virulen dari Streptococcus pneumoniae dengan cara

8
 menginduksi inflamasi. Proses induksi inflamasi tersebut dimulai dari
aktivasi jalur komplemen alternatif, yang mengakibatkan
meningkatkan produksi anafilatoksin, sehingga terjadi peningkatan
permiabilitias vaskuler, degramulasi sel mast dan aktivasi PNM.
Proses induksi inflamasi juga ditandai dengan peningkatan produksi
IL-1 yang memiliki efek sitopatik bagi endotelium[ CITATION Vel \l
1033 ].
2.2.2 Patogenesis
Patogenesis adalah suatu proses terkenanya suatu penyakit dari
awal terjadinya suatu infeksi hingga terjadinya suatu reaksi
akhir[CITATION Kem16 \l 1033 ]. Streptococcus pneumoniae dapat
masuk ke dalam sistem pernafasan bagian atas lalu melekat dengan
sel-sel epitel pada faring, Kegagalan pertahanan spesifik (sekresi IgA)
dan pertahanan nonspesifik (refleks batuk, sekresi mukosa, dan
transpor siliaris) menyebabkan Streptococcus pneumoniae berpindah
dari faring ke bronkus dan paru-paru yang akan mengakibatkan
terjadinya pneumonia[ CITATION Vel \l 1033 ].
2.2.3 Terapi bakteri Streptococcus pneumoniae
Penanganaan Streptococcus pneumoniae dapat menggunakan
obat-obat antibakteri konvensional, seperti penisilin, eritromisin,
tetrasiklin, kloramfenikol, seftriason, dan sefotasin. Terdapat laporan
kasus bahwa beberapa tahun terakhir untuk terapi Streptococcus
pneumoniae dengan obat-obat antibakteri konvensional tersebut tidak
efektif, karena muncul bakteri Streptococcus pneumoniae yang
resisten terhadap penisilin dan resisten terhadap obat (Drug Resistant
Streptococcus pneumoniae atau DRSP), hal ini disebabkan karena
terjadi mutasi gen Streptococcus pneumoniae yang mengakibatkan
perubahan struktur dari penicillin-binding receptor dan reseptor-
reseptor obat lainnya sehingga yang menyebabkan berkurangnya
afinitas terhadap semua antibiotik golongan β-laktam, dan obat-obat
terapi Streptococcus pneumoniae lainnya [ CITATION Ale97 \l
1033 ].

9
2.3 Rimpang Kunyit (Curcumae Domesticae Rhizoma)
2.3.1 Klasifikasi
Kunyit merupakan salah satu tanaman yang berasal dari famili
zingiberaceae[ CITATION Har13 \l 1033 ]. Klasifikasi dari tanaman
kunyit sebagai berikut[ CITATION Nor19 \l 1033 ]:
Kingdom : Plantae
Divisio : Spermatophyta
Sub-divisio : Angiospermae
Kelas : Monocotyoledonae
Ordo : Zingiberales
Famili : Zingiberaceae
Genus : Curcuma
Spesies : Curucma domestica Val. atau Curcuma
longa L.
2.3.2 Definisi
Rimpang kunyit (Curcumae Domesticae Rhizoma) adalah
bagian utama dari tanaman kunyit (Curcuma domestica). Kulit
rimpang kunyit memiliki warna kecoklatan dan bagian dalam
berwarna kuning tua, kuning jingga, atau kuning jingga kemerahan
hingga kecoklatan. Rimpang kunyit memiliki rimpang utama yang
berbentuk bulat seperti telur ayam yang sering disebut empu atau
kunir lelaki. Rimpang induk memiliki cabang yang letaknya lateral
dan berbentuk seperti jari yang lurus atau melengkung. Rimpang
induk memiliki rasa agak pahit, getir, kaya akan pigmen dan resin,
sedangkan rimpang anak memiliki rasa yang agak manis dan berbau
aromatis [CITATION Har13 \l 1033 ].

10
 Gambar 2.2 Gambar simplisia rimpang kunyit
(dimodifikasi dari Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, 2017)

2.3.3 Kandungan Senyawa Kimia

Senyawa utama dari rimpang kunyit adalah kurkuminoid dan
minyak atsiri. Kurkuminoid dalam rimpang kunyit berkisar 3,0-5,0%,
kurkuminoid terdiri dari kurkumin dan turunannya seperti
demetoksikurkumin dan bismetoksikurkumin. Kurkuminoid memiliki
bentuk kristal prisma atau batang pendek, mudah larut dalam aseton,
etanol, methanol, benzena, dan kloroform, akan membentuk emulsi
atau tidak larut dalam air. Kurkuminoid akan mengalami fluororesensi
di bawah sinar ultraviolet menghasilkan warna kuning, jingga, hingga
jingga kemerahan yang kuat. Kandungan minyak atsiri dari rimpang
kunyit berkisar 2,5-6,0% yang terdiri dari artumeron, alfa dan beta
tumeron, tumerol, alfa atlanton, beta kariofilen, linalol, 1,8 sineol,
zingiberene, dd felanderen, d-sabinen, dan borneol. Rimpang kunyit
juga mengandung senyawa lain selain kurkuminoid dan minyak atsiri,
seperti pati, lemak, protein, kamfer, resin, damar, gom, kalsium,
fosfor, dan zat besi [CITATION Har13 \l 1033 ].

11
 Gambar 2.3 Struktur kimia demetoksikurkumin (demethoxycurcumin),
bismetoksikurkumin (bismethoxycurcumin), dan kurkumin (curcumin)
(dimodifikasi dari Huang, et al., 2020)

2.4 Kurkumin
2.4.1 Definisi
Kurkumin memiliki nama IUPAC [(1E,6E)-1,7-bis(4-hydroxy-
3-methoxyphenyl)-1,6-heptadiene-3,5-dione] dengan rumus molekul
C21H20O6 dan massa molekul 368,38. Kurkumin memiliki dua cincin
aromatis yang terdapat dua gugus o-metoksi fenolik, yang terhubung
dengan tujuh rantai karbon yang didalamnya terdapat sebuah α,β-tak
jenuh β-diketon [ CITATION Pri14 \l 1033 ].

2.4.2 Manfaat
Kurkumin adalah senyawa aktif yang terkandung dalam
rimpang kunyit yang telah diakui dan digunakan untuk berbagai
macam tujuan dalam berbagai bentuk. Kurkumin telah dimanfaatkan
secara tradisional di berbagai negara di Kawasan Asia sebagai bahan
pewarna, kari, teh, dan kosmetik [CITATION Kai20 \l 1033 ].
Kurkumin telah digunakan sebagai obat, karena sifat
antioksidan, antiinflamasi, antimikroba dan antikanker dibeberapa
daerah. Kurkumin telah dilaporkan memiliki aktivitas antimikroba
dalam spektrum luas (broad-spectrum antimicrobial). Aktivitas

12
 antibakteri dari kurkumin dapat dirinci sebagai berikut [CITATION
Kai20 \l 1033 ]:
A. Merusak membran sel bakteri
Kurkumin dapat merusak membran sel bakteri dengan cara
menyebabkan kebocoran pada membran sel bakteri, baik bakteri
gram positif maupun bakteri gram negatif, seperti S. aureus,
Enterococcus faecalis,E. coli, and P. aeruginosa[ CITATION
Kai20 \l 1033 ].
B. Induksi reactive oxygen species (ROS):
Kurkumin dapat menginaktivasi bakteri B. cereus dan E. coli
dengan cara menginduksi produksi ROS dalam jumlah yang
signifikan, termasuk oksigen singlet dan radikal
hidroksil[ CITATION Kai20 \l 1033 ].
C. Menginhibisi efflux pump bakteri:
Kurkumin dilaporkan dapat berfungsi sebagai penghambat efflux
pump pada bakteri patogen yang resisten terhadap obat (multi drug
pathogenic bacteria), seperti P. aeruginosa dan S.
aureus[ CITATION Kai20 \l 1033 ].
D. Mengganggu proses pembelahan sel bakteri:
Kurkumin dapat menghambat proses pembelahan sel bakteri
dengan cara mengganggu perakitan FtsZ pada B. subtilis dan
E.coli, yang menunjukkan terjadinya hambatan sitokinesis pada
bakteri[ CITATION Kai20 \l 1033 ].
2.5 Metode Uji Aktivitas Antibakteri
Metode uji aktivitas antibakteri dapat dibagi menjadi dua metode
utama yaitu metode difusi dan metode dilusi. Metode-metode tersebut perlu
distandardisasi supaya semua faktor-faktor yang mempengaruhi aktivitas
antibakteri dapat dikendalikan. Metode-metode tersebut dapat digunakan
baik untuk memperkirakan potensi aktivitas antibakteri pada sampel,
maupun uji kerentanan mikroorganisme yang menggunakan organisme
untuk uji standar dan sampel obat tertentu sebagai pembanding.
[ CITATION Jaw04 \l 1033 ].

13
2.5.1 Metode Dilusi
Metode dilusi adalah suatu metode yang dapat digunakan
untuk menguji sensitivitas suatu mikroba terhadap suatu antimikroba
yang dilakukan dengan cara memasukkan sejumlah zat antimikroba
ke dalam suatu medium bakteriologi padat atau cair. Zat antimikroba
dengan pengenceran dua kali lipat (log2) biasanya digunakan pada
metode ini. Medium diinokulasi dengan bakteri uji dan diinkubasi.
Metode dilusi bertujuan untuk menentukan jumlah zat antimikroba
yang diperlukan untuk menghambat dan/atau membunuh bakteri
uji[ CITATION Jaw04 \l 1033 ].
2.5.2 Metode Difusi
Metode difusi adalah salah satu metode yang digunakan
untuk menguji sensitivitas suatu mikroba terhadap suatu antimikroba
dengan menggunakan kertas cakram. Prinsip kerja metode ini adalah
zat uji akan terdifusi ke media padat yang terdapat bakteri yang telah
diinokulasikan. Metode ini dilakukan dengan cara memasukkan
kertas cakram dan diisi dengan senyawa uji pada media agar yang
telah diinokulasi dengan bakteri, lalu diinkubasi selama 18-24 jam
pada suhu 35℃. Hambatan pertumbuhan mikroba diindikasikan
dengan area jernih atau bening pada permukaan media. Metode
difusi dapat dilakukan dengan tiga cara metode sumuran, metode
cakram, dan metode silinder [ CITATION Din15 \l 1033 \m Yol19].

1. Metode sumuran
Metode sumuran adalah salah satu cara metode difusi yang
dilakukan dengan cara membuat lubang tegak lurus pada agar
padat yang telah diinokulasikan oleh bakteri. Jumlah dan letak
lubang disesuaikan dengan banyaknya sampel yang akan diuji,
lalu diisi sampel yang akan diuji, setelah itu dilakukan inkubasi.
Pertumbahan bakteri diamati untuk melihat terjadi hambatan
pertumbuhan bakteri atau tidak [ CITATION Nur20 \l 1033 ].

14
 2. Metode cakram
Metode cakram adalah salah satu metode difusi yang paling
sering digunakan. Cakram kertas filter yang mengandung obat
diletakkan di atas medium padat yang telah diinokulasikan bakteri
yang akan diuji, kemudian diinkubasi selama 18-24 jam pada
suhu 35℃. Diameter zona hambat (zona jernih) yang muncul
setelah diinkubasi akan diukur sebagai daya hambat obat terhadap
bakteri yang diuji [ CITATION Jaw04 \l 1033 \m Nur20].
3. Metode silinder
Metode silinder glass adalah salah satu metode difusi yang
dilakukan dengan cara meletakkan beberapa silinder gelas atau
besi tahan karat di atas media padat yang telah diinokulasikan
bakteri uji. Tiap silinder diposisikan berdiri di atas media padat,
kemudian diisi dengan larutan uji dan diinkubasi. Pertumbuhan
bakteri diamati dengan cara melihat apakah terdapat zona hambat
di sekeliling silinder tersebut[ CITATION KUS07 \l 1033 ].
2.5.3 Pengukuran Zona Hambat
Pengukuran zona hambat pada metode difusi dilakukan
dengan cara mengukur zona jernih atau bening yang terbentuk
dengan menggunakan jangka sorong sehingga dapat disebut zona
hambat. Zona hambat dengan diameter ≤5mm memiliki kekuatan
hambat lemah, zona hambat dengan diameter 6-10mm memiliki
kekuatan hambat sedang, zona hambat dengan diameter 11-20mm
memiliki kekuatan hambat kuat, dan zona hambat dengan diameter
≥ 21mm memiliki kekuatan hambat sangat kuat [ CITATION
Pug15 \l 1033 ].

2.6 Kerangka Konseptual

Kerangka konseptual merupakan suatu kerangka antara konsep-
konsep yang berrhubungan dalam suatu penelitian dan dapat digunakan
sebagai landasan dari penelitian tersebut [ CITATION Ima18 \l 1033 ].
Kerangka konseptual penelitian ini digambarkan seperti gambar:

15
 Pneumonia Kunyit
(Curucma
domsetica)
Streptococcus pneumoniae
Kurkumin
Pengobatan dengan obat
antibakteri: Merusak membran sel
Penisilin bakteri.
Eritromisin Induksi reactive oxygen
Tetrasiklin species (ROS
Kloramfenikol Menginhibisi Efflux Pump
Seftriason bakteri
Sefotasin Mengganggu pembelahan
sel bakteri

Aktivitas
Beberapa tahun terakhir, muncul S.
antibakteri
pneumoniae yang resisten terhadap obat
(DRSP) dan S. pneumoniae yang resisten
Ekstrak Kunyit
terhadap penisilin.

Keterangan :
: Diteliti
: Tidak diteliti Aktivitas antibakteri
Streptococcus pneumoniae

Gambar 2.4 Kerangka Konseptual Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol

Rimpang Kunyit (Curcumae Domesticae Rhizoma) Terhadap Pertumbuhan
Bakteri Streptococcus pneumoniae.

16
 BAB III
METODE PENELITIAN

3.1 Desain Penelitian

Bakteri Streptococcus pneumoniae merupakan objek uji pada
penelitian ini. Streptococcus pneumoniae akan diberikan ekstrak rimpang
kunyit pada berbagai kadar yang bertujuan untuk melihat persentase kadar
ekstrak rimpang kunyit yang memiliki efek antibakteri terhadap
Streptococcus pneumoniae. Parameter uji dari efek antibakteri adalah
diameter zona hambat pertumbuhan yang dapat diukur dengan jangka sorong.
Metode pengumpulan data yang digunakan pada penelitian ini adalah
observasi.

3.2 Variabel Penelitian

Variabel penelitian merupakan suatu objek yang memiliki perbedaan
atau variasi antara satu dengan yang lain[ CITATION Ima18 \l 1033 ].
Penelitian yang berjudul “Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Rimpang
Kunyit (Curcumae Domesticae Rhizoma) Terhadap Pertumbuhan Bakteri
Streptococcus pneumoniae” memiliki beberapa variabel penelitian antara lain:
1. Variabel bebas
Variabel bebas penelitian ini adalah kadar ekstrak rimpang kunyit.
2. Variabel terikat
Variabel terikat penelitian ini adalah aktivitas antibakteri pada bakteri
Streptococcus pneumoniae.
3. Variabel kontrol
Variabel kontrol penelitian ini adalah media kultur, usia bakteri kultur
dan jumlah bakteri kultur

3.3 Definisi Operasional Variabel Penelitian

Definisi operasional penelitian merupakan definisi dari variabel-
variabel yang akan diteliti melalui suatu penelitian. Definisi operasional
penelitian bertujuan memudahkan pelaksanaan pengumpulan, pengolahan dan

17
 analisa data karena penelitian lebih terarah dan terukur serta lebih fokus pada
variabel-variabel yang akan diteliti[ CITATION Ima18 \l 1033 ]. Definisi
operasional penelitian ini dapat uraikan sebagai berikut:
No Nama Jenis
Alat ukur Definisi Skala
. Variabel Variabel
1. Kadar ekstrak Bebas Mikropipet Persentase Nominal
rimpang atau pipet volume
kunyit volume, labu maserat
ukur rimpang
kunyit dalam
etanol 96%
hingga
volume tepat
5 mL.
2. Aktivitas Terikat Jangka sorong Diameter Nominal
antibakteri zona hambat
Streptococcu yang
s terbentuk
pneumoniae (zona yang
berwarna
jernih).
Tabel 3.3 Definisi Operasional Variabel

3.4 Bahan dan Alat

3.4.1 Bahan Penelitian
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain:
1. Simplisia rimpang kunyit yang diperoleh dari Balai Besar
Penelitian dan Pengembangan Tanaman Obat dan Obat
Tradisional (B2P2TOOT) Tawangmangu.
2. Etanol 96%
3. Media blood plate agar (BAP)
4. Media Mueller-Hinton Agar (MHA)
5. Antibiotik optochin
6. Biakan murni bakteri Streptococcus pneumoniae didapatkan dari
Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Farmasi Universitas
Surabaya.

18
 3.4.2 Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain:
1. Blender 14. Tabung reaksi
2. Gelas piala 15. Rak tabung reaksi
3. Labu ukur 16. Botol semprot
4. Batang pengaduk 17. Autoklaf
5. Aluminium foil 18. Bunsen
6. Corong hisap 19. Kawat ose
7. Labu hisap 20. Cawan petri
8. Kertas saring 21. Jangka sorong
9. Neraca analitik 22. Inkubator
10. Bola hisap 23. Spidol
11. Pipet volume 24. Pinset
12. Mikropipet 25. Spreader
13. Vial

3.5 Populasi dan Sampel

3.5.1 Populasi
Populasi adalah generalisasi dari suatu objek atau subjek yang kualitas
dan sifat tertentu yang akan dipelajari dan ditarik suatu kesimpulan dalam
suatu penelitian. Populasi dapat diartikan sebagai seluruh bagian yang menjadi
objek penelitian[ CITATION Ima18 \l 1033 ]. Populasi dalam penelitian ini
adalah bakteri Streptococcus pneumoniae.
3.5.2 Sampel
Sampel adalah sebagian jumlah dan sifat dari populasi yang akan
diteliti secara nyata dan ditarik kesimpulan[ CITATION Ima18 \l 1033 ].
Sampel dalam penelitian ini adalah biakan murni bakteri Streptococcus
pneumoniae dari Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Farmasi Universitas
Surabaya.
Penelitian ini menggunakan teknik sampling purposif dalam proses
pengambilan sampel. Sampling purposif merupakan suatu cara pengambilan
sampel dengan memilih subjek berdasarkan sifat atau karakteristik tertentu

19
dan berhubungan dengan sifat dari populasi[ CITATION Ima18 \l 1033 ].
Penelitian yang berjudul “Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Rimpang
Kunyit (Curcumae Domesticae Rhizoma) Terhadap Pertumbuhan Bakteri
Streptococcus pneumoniae”, peneliti menetapkan karakteristik subjek
penelitian adalah bakteri Streptococcus pneumoniae yang dikultur selama 24
jam dengan suhu 35-37℃ dan ~5% CO2 pada media BAP.
Besaran sampel dalam penelitian ini dapat dihitung dengan
menggunakan persamaan Federer. Persamaan Federer dapat dijabarkan
seperti:
( t−1 ) ( n−1 ) ≥15……….………Persamaan 3.1
Keterangan :
t: jumlah kelompok
n: banyaknya sampel pada masing-masing kelompok
Penelitian ini menggunakan 12 kelompok percobaan:
1. Kelompok I : Ekstrak rimpang kunyit 100%
2. Kelompok II : Ekstrak rimpang kunyit 90%
3. Kelompok III : Ekstrak rimpang kunyit 80%
4. Kelompok IV : Ekstrak rimpang kunyit 70%
5. Kelompok V : Ekstrak rimpang kunyit 60%
6. Kelompok VI : Ekstrak rimpang kunyit 50%
7. Kelompok VII : Ekstrak rimpang kunyit 40%
8. Kelompok VIII : Ekstrak rimpang kunyit 30%
9. Kelompok IX : Ekstrak rimpang kunyit 20%
10. Kelompok X : Ekstrak rimpang kunyit 10%
11. Kelompok XI : Kontrol positif
12. Kelompok XII : Kontrol negatif
Nilai (n) dapat dihitung sebagai berikut :
( 12−1 ) ( n−1 ) ≥ 15
11 ( n−1 ) ≥ 15
15
n−1≥
11
n−1≥ 1,364

20
 n ≥ 2,364
Jumlah sampel tiap kelompok (n) yang diperoleh dari perhitungan ≥
2,364, sehingga jumlah sampel. Peneliti menggunakan 3 sampel untuk
masing-masing kelompok, total sampel dalam penelitian ini sebanyak 36
sampel.
3.6 Instrumen Penelitian
Instrumen penelitian adalah sebuah alat ukur yang dipakai untuk
memperoleh informasi secara kuantitatif tentang variasi sifat variabel secara
objektif[ CITATION Haj96 \l 1033 ]. Peneliti merumuskan instrumen
penelitian sebagai berikut:
Tabel 3.4 Instrumen Penelitian
Variabel Metode Instrumen
Bebas Pengenceran untuk Labu ukur, neraca
mendapatkan ekstrak analitik, pipet volume
rimpang kunyit dalam atau pipet mikro.
berbagai kadar.
Terikat Mengukur zona hambat Jangka sorong untuk
pertumbuhan bakteri mengukur diameter zona
Streptococcus hambat pertumbuhan
pneumoniae bakteri Streptococcus
pneumoniae.

3.7 Metode Pengumpulan Data

Penelitian ini menggunakan cara observasi dalam proses pengumpulan
data. Peneliti melakukan pengamatan objek penelitian secara langsung, dalam
penelitian ini objek penelitiannya adalah bakteri Streptococcus pneumoniae.
Objek penelitian ini akan dilihat hambatan pertumbuhannya dengan
mengukur diameter zona hambat pertumbuhan dengan menggunakan jangka
sorong.

3.8 Analisis Data

3.9 Kerangka Operasional

Rimpang Kunyit Biakan murni bakteri

Streptococcus pneumoniae
21
Serbuk
Rimpang Kunyit Kultur bakteri Streptococcus
pneumoniae pada media BAP
pada suhu 35-37℃ dengan
 Suspensi bakteri
Ekstrak dalam berbagai kadar Streptococcus pneumoniae
(10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, dengan NaCl 0,85% hingga
70%, 80%, 90%, dan 100% kekeruhan 0,5 McFarland

Kontrol Negatif Kontrol Positif

Etanol 96% Optochin 5 μg

Inkubasi MHA selama 24 jam

pada suhu 35-37℃

Pengukuran diameter zona

hambat dengan jangka sorong Analisa data

Gambar 3.5 Kerangka Operasional Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol

Rimpang Kunyit (Curcumae Domesticae Rhizoma) Terhadap Pertumbuhan
Bakteri Streptococcus pneumoniae.

22
 LAMPIRAN

Lampiran 1. Anggaran Penelitian

1. Rimpang kunyit (1 kg) = Rp. 100.000,00
2. Etanol 96% p.a. (2500 mL) = Rp. 2.500.000,00
3. Kertas saring (1 pak) = Rp. 25.000,00
4. Aluminium foil (3 rol @ Rp. 30.000,00) = Rp. 90.000,00
5. Vial (15 buah @ Rp. 1.000,00) = Rp. 15.000,00
6. Cawan petri (15 buah @ Rp 30.000,00) = Rp. 450.000,00
7. Optochin disk (1 vial) = Rp. 600.000,00
8. Media blood plate agar (10 plate) = Rp. 400.000,00
9. Media Mueller-Hinton Agar (500g) = Rp. 1.800.000,00 +
Total anggaran = Rp. 5.980.000,00
Terbilang lima juta sembilan ratus delapan puluh ribu rupiah

Lampiran 2. Matriks Waktu Penelitian

TANGGAL / BULAN
MEI JUNI JULI AGUSTUS
KEGIATAN
1- 16- 1- 16- 1- 16- 1- 16-
15 31 15 30 15 31 15 31
Pembuatan proposal ■
Persiapan ■
Penelitian
■ ■ ■
Laboratorium
Pengolahan Data ■ ■
Konsultasi ■ ■
Pembuatan Laporan ■ ■ ■ ■
Presentasi Hasil
■
Penelitian

23
 DAFTAR PUSTAKA

Fahryl, N. & Carolia, N., 2019. Kunyit (Curcuma domestica Val) sebagai Terapi
Artritis Gout. Majority, 8(1), pp. 251-255.
Fitriana, Y. A. N., Fatimah, V. A. N. & Fitri, A. S., 2019. Aktivitas Anti Bakteri
Daun Sirih: Uji Ekstrak KHM (Kadar Hambat Minimum) dan KBM
(Kadar Bakterisidal Minimum). SAINTEKS, 16(2), pp. 101-108.
Hartati, S. & Balittro., 2013. Khasiat Kunyit Sebagai Obat Tradisional dan
Manfaat Lainnya. Jurnal Puslitbang Perkebunan, Agustus.pp. 5-9.
Huang, C. et al., 2020. Curcumin, Demethoxycurcumin, and
Bisdemethoxycurcumin Induced Caspase-dependent and – Independent
Apoptosis via Smad or Akt Signaling Pathways in HOS Cells. BMC
Complementary Medicine and Therapies, 20(68), pp. 1-11.
Jawetz, Melnick & Adelberg, 2004. Mikrobiologi Kedokteran. 23 penyunt.
Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Jones, B., Dean, N., Wunderink, R. & Sockrider, M., 2016. What is Pneumonia?.
American Thoratic Society, Volume 193, pp. 1-2.
Jorgensen, J. H. & Turnidge, J. D., 2015. Susceptibility Test Methods: Dilution
and Disk Diffusion Methods. Manual of Clinical Microbiology, Volume
11, pp. 1253-1273.
Kai, K. et al., 2020. Curcumin-A Review of Its Antibacterian Effect. Biomedical,
26(1), pp. 19585-19587.
Katrin, D., Idiawati, N. & Sitorus, B., 2015. Uji Aktivitas Antibakteri dari Ekstrak
Daun Malek (Litsea graciae Vidal) terhadap Bakteri Stapylococcus aureus
dan Escherichia coli. JKK, pp. 7-12.
Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, 2010. Pneumonia Balita. Jakarta:
Kementerian Kesehatan Republik Indonesia.
Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, 2017. Farmakope Herbal Indonesia.
II penyunt. Jakarta: Kementerian Kesehatan Republik Indonesia.
Kementerian Pendidikan dan Kebudayaan Republik Indonesia, 2016. KBBI
Daring. [Online]

24
 Available at: https://kbbi.kemdikbud.go.id/entri/patogenesis
[Diakses 24 Maret 2021].
Kusmiyati & Agustin, N. W. S., 2007. Uji Aktivitas Senyawa Antibakteri dari
Mikroalga Porphyridium cruentum. BIODIVERSITAS, 8(1), pp. 48-53.
Masturoh, I. & T., N. A., 2018. Bahan Ajar Rekam Medis dan Informasi
Kesehatan (RMIK) Metodologi Penelitian. Jakarta: Kementerian
Kesehatan Republik Indonesia.
Micek, S. T. et al., 2007. Health Care-Associated Pneumonia and Community-
Acquired Pneumonia: a Single-Center Experience. Antimicrobial Agents
and Chemotherapy, 51(10), pp. 3568-3573.
Nurhayati, L. S., Yahdiyani, N. & Hidayatyloh, A., 2020. Perbandingan Pengujian
Aktivitas Antibakteri Starter Yoghurt dengan Metode Difusi Sumuran dan
Metode Difusi Cakram. Jurnal Teknologi Hasil Peternakan, pp. 41-46.
Perhimpunan Dokter Paru Indonesia, 2003. Pneumonia Nosokomial Pedoman
Diagnosis & Penatalaksanaan di Indonesia. Jakarta: Perhimpunan Dokter
Paru Indonesia.
Perhimpunan Dokter Paru Indonesia, 2014. Pneumonia Komunitas Pedoman
Diagnosis & Penatalaksanaan di Indonesia. 2 penyunt. Jakarta:
Perhimpunan Dokter Paru Indonesia.
Priyadarsini, K. I., 2014. The Chemistry of Curcumin: from Extraction to
Therapeuctic Agent. Molecules, pp. 20091-20112.
Seyawati, A. & Marwiati, 2018. Tata Laksana Kasus Batuk dan atau Kesulitan
Bernafas: Literature Review. Jurnal Ilmiah Kesehatan, pp. 30-52.
Surjowardojo, P., Susilorini, T. E. & Sirait, G. R. B., 2015. Daya Hambaat Dekok
Kulit Apel Manalagi (Malus sylvestrs Mill.) terhadap Pertumbuhan
Staphylococcus aureusdan Pseudomonas sp. Penyebab Masitis. J.Ternak
Tropika, 16(2), pp. 40-48.
Tomasz, A., 1997. Antibiotic Resistance in Streptococcus pneumoniae. Clinical
Infectious Disease, pp. S85-S88.
Velasco, E. A., Verheul, A., Verhoef, J. & 1995., H. S., 1995. Streptococcus
pneumoniae: Virulence Factors, Pathogenesis, and Vaccines.
Microbiological Reviews, pp. 591-603.

25
World Health Organization, 2013. Priority Medicines for Europe and the World
2013 Update. s.l.:World Health Organization

26