i

Kode/Nama Rumpun Ilmu:

362/Ilmu Kesehatan

LAPORAN PENELITIAN

IDENTIFIKASI METABOLIT SEKUNDER DAN BIOAKTIVITAS CIKAL

TULANG (Cissus quadrangularis L.)

Ketua/Anggota Tim :
Ahmad Purnawarman Faisal, M.Farm., Apt.
Eka Farpina, MPH., Apt

POLITEKNIK KESEHATAN KEMENTERIAN KESEHATAN

KALIMANTAN TIMUR
2018
 ii

HALAMAN PENGESAHAN

Judul : Identifikasi Metabolit Sekunder dan

Bioaktivitas Cikal Tulang (Cissus
quadrangularis L.)
Peneliti Utama
Nama Lengkap : Ahmad Purnawarman Faisal, M.Farm., Apt.
NIP :-
Jabatan Fungsional :-
Program Studi : DIII Analis Kesehatan
Nomor HP : 08115545555
Alamat surel (e-mail) : purn28@gmail.com
Anggota (1)
Nama Lengkap : Eka Farpina, MPH., Apt
Program Studi : DIII Analis Kesehatan
Anggota (2)
Institusi/Industri Mitra (jika ada)
Nama Institusi Mitra :-
Alamat :-
Penanggung Jawab :-
Tahun Pelaksanaan : 2018
Biaya Penelitian : Rp. 10.000.000,-

Samarinda, 20 November 2018

Mengetahui
Kepala Unit Penelitian Poltekkes Ketua

Dr. Hj. Endah Wahyutri, M.Kes A.Purnawarman Faisal, M.Farm., Apt.

NIP. 1965011281989032002

Mengesahkan,
Direktur Poltekkes Kemenkes Kaltim

Drs. H. Lamri, M.Kes

NIP. 19581117198020310

ii
 iii

ABSTRAK

iii
 iv

PRAKATA

Puji dan Syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa,
karena berkat limpahan Rahmat dan Karunia-Nya sehingga penulis dapat
menyusun Laporan Penelitian dengan skema “Calon Dosen” dengan judul
“Identifikasi Metabolit Sekunder dan Bioaktivitas Cikal Tulang (Cissus
quadrangularis L.)” ini dengan baik dan tepat pada waktunya.
Laporan Penelitian ini terwujud atas pengarahan dan bantuan dari berbagai
pihak, dan oleh karena itu pada kesempatan ini penulis menyampaikan
penghargaan dan terima kasih kepada :
1. Drs. H. Lamri, M.Kes, Direktur Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan
Kalimantan Timur
2. Dr. Hj. Endah Wahyutri, M.Kes, Ketua Unit Penelitian Poltekkes Kemenkes
Kaltim.
3. H. Azhari, SKM. M.Kes, selaku Ketua Jurusan Analis Kesehatan Politeknik
Kesehatan Kementerian Kesehatan Kalimantan Timur
4. Seluruh Dosen dan Staff di Lingkungan Poltekkes Kemenkes Kaltim
Penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan yang mendasar pada
Laporan Penelitian ini. Oleh karena itu penulis mengharapkan pembaca untuk
memberikan saran serta kritik konstruktif yang dapat membangun dan
menyempurnakan karya tulis kedepannya. Akhir kata semoga karya tulis ini dapat
memberikan manfaat bagi kita sekalian.

Samarinda, 20 November 2018

iv
 v

DAFTAR ISI

LAPORAN PENELITIAN.......................................................................................i
HALAMAN PENGESAHAN.................................................................................ii
ABSTRAK..............................................................................................................iii
PRAKATA..............................................................................................................iv
DAFTAR ISI............................................................................................................v
DAFTAR TABEL...................................................................................................ix
DAFTAR GAMBAR...............................................................................................x
DAFTAR LAMPIRAN...........................................................................................xi
BAB I.......................................................................................................................1
PENDAHULUAN...................................................................................................1
A. Latar Belakang Masalah..................................................................................1
B. Rumusan Masalah...........................................................................................2
C. Tujuan Penelitian.............................................................................................2
D. Kegunaan Penelitian........................................................................................3
BAB II......................................................................................................................4
KAJIAN PUSTAKA................................................................................................4
A. Uraian Umum Tumbuhan Cikal Tulang.........................................................4
1. Klasifikasi tumbuhan...................................................................................5
2. Morfologi Tumbuhan...................................................................................5
3. Kandungan dan Manfaat Tumbuhan............................................................6
4. Nama Umum................................................................................................6
5. Simplisia.......................................................................................................6
B. Uraian Metabolit Sekunder.............................................................................7
1. Alkaloid........................................................................................................8
2. Flavonoid.....................................................................................................9
3. Karotenoid..................................................................................................10
4. Saponin.......................................................................................................10
5. Senyawa Fenol...........................................................................................11
6. Steroid dan Triterpenoid............................................................................12
7. Tanin..........................................................................................................13
C. Uraian Umum Artemia salina Leach.............................................................14
1. Klasifikasi Artemia salina Leach...............................................................15

v
 vi

2. Penetasan Telur Artemia salina Leach.......................................................15

3. Lingkungan Hidup Artemia salina Leach..................................................16
4. Cara Makan dan Makanan Artemia salina Leach......................................16
5. Perkembangbiakan dan Cara Hidup Artemia salina Leach.......................17
D. Uraian Umum Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)....................................17
1. Bioaktivitas................................................................................................17
2. Brine Shrimp Lethality Test.......................................................................18
3. Metode Reed and Muench.........................................................................18
4. Bioaktivitas Artemia salina Leach Toksikologi.........................................19
5. Lethal Concentration 50%.........................................................................19
E. Uraian Metode Ekstraksi...............................................................................20
1. Infudasi.......................................................................................................21
2. Maserasi.....................................................................................................21
3. Perkolasi.....................................................................................................22
4. Refluks.......................................................................................................22
5. Soxhlet.......................................................................................................22
F. Uraian Umum Metode Fraksinasi..................................................................23
1. Cairan Pelarut.............................................................................................24
BAB III..................................................................................................................26
METODE PENELITIAN.......................................................................................26
A. Fokus Penelitian............................................................................................26
B. Bahan yang Diteliti........................................................................................26
C. Waktu dan Tempat Penelitian.......................................................................26
D. Variabel dan Definisi Operasional................................................................26
1. Variabel Penelitian.....................................................................................26
2. Definisi Operasional..................................................................................27
D. Peralatan dan Bahan Penelitian.....................................................................27
1. Peralatan Penelitian....................................................................................27
2. Bahan Penelitian........................................................................................28
E. Rancangan Penelitian....................................................................................28
F. Teknik Pengumpulan Data.............................................................................30
1. Data dan Sumber Data...............................................................................30
2. Pelaksanaan Penelitian...............................................................................30
3. Fraksinasi...................................................................................................31

vi
 vii

4. Persentase Rendemen.................................................................................32
5. Uji Bebas Metanol.....................................................................................33
6. Uji Metabolit Sekunder..............................................................................33
7. Persiapan Hewan Uji..................................................................................34
8. Pembuatan air Laut Buatan........................................................................35
9. Penentuan Seri Konsentrasi.......................................................................35
10. Pengujian Bioaktivitas.............................................................................35
G. Teknik Analisa Data......................................................................................36
H. Hasil Penelitian yang Diharapkan.................................................................38
BAB V....................................................................................................................39
HASIL DAN PEMBAHASAN..............................................................................39
A. Rendemen Ekstrak Cikal Tulang..................................................................39
B. Kandungan Metabolit Sekunder Cikal Tulang..............................................41
C. Bioaktivitas terhadap Artemia salina Leach..................................................43
1. Uji Bioaktivitas Ekstrak Metanol Cikal tulang..........................................43
2. Uji Bioaktivitas Fraksi n-Heksan Cikal tulang..........................................45
3. Uji Bioaktivitas Fraksi Etil Asetat Cikal tulang.........................................47
4. Uji Bioaktivitras Fraksi n-Butanol Cikal tulang........................................49
BAB VI..................................................................................................................55
KESIMPULAN DAN SARAN..............................................................................55
A. Kesimpulan...................................................................................................55
B. Saran..............................................................................................................55
DAFTAR PUSTAKA............................................................................................56
LAMPIRAN-LAMPIRAN.....................................................................................58

vii
 viii

DAFTAR TABEL

Tabel 4.1. Rancangan Perhitungan Rendemen......................................................29

Tabel 4.2 Rancangan Identifikasi Metabolit Sekunder..........................................29
Tabel 4.3 Rancangan Uji Bioaktivitas Cikal tulang...............................................29
Tabel 4.4 Dari perhitungan tersebut, kemudian data diolah dengan
menggunakan rumus Reed and Muench :..............................................................37
Tabel 5.1. Rendemen Ekstrak Cikal tulang............................................................40
Tabel 5.2. Rendemen Fraksi Cikal tulang..............................................................41
Tabel 5.3. Hasil Identifikasi Metabolit Sekunder Cikal tulang..............................42
Tabel 5.4. Hasil Uji Ekstrak Etanol Terhadap Larva Udang Artemia salina Leach
................................................................................................................................44
Tabel 5.5. Hasil Uji Fraksi n-Heksan Terhadap Larva Udang Artemia salina Leach
................................................................................................................................46
Tabel 5.6. Hasil Uji Fraksi Etil Asetat Terhadap Larva udang Artemia salina
Leach......................................................................................................................48
Tabel 5.7. Hasil Uji Fraksi n-Butanol Terhadap Larva Udang Artemia salina
Leach......................................................................................................................50
Tabel 5.8. Nilai LC50 Ekstrak dan Fraksi Cikal tulang..........................................52

viii
 ix

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Tumbuhan Cikal tulang........................................................................4

Gambar 2.2 Struktur Kimia Alkaloid (Harborne, 1987)..........................................8
Gambar 2.3 Struktur Kimia Kerangka Dasar Flavonoid (Harborne, 1987).............9
Gambar 2.4 Struktur Kimia β-Karoten (Harborne, 1987)......................................10
Gambar 2.5 Struktur Kimia Saponin Tipe Steroid (Harborne, 1987)....................11
Gambar 2.6 Struktur Kimia Senyawa Fenol (Harborne, 1987).............................12
Gambar 2.7 Struktur Kimia Beberapa Senyawa Steroid dan Triterpenoid......13
(Harborne, 1987)....................................................................................................13
Gambar 2.8 Struktur Kimia Tanin: (a) Tanin Terkondensasi; (b) Tanin
Terhidrolisis (Harborne, 1987)..............................................................................14
Gambar 2.9 Bentuk Artemia salina Leach dilihat dari mikroskop (Djarijah, 1995)
................................................................................................................................15
Gambar 4.1 Bagan Prosedur Kerja Ekstraksi Cikal tulang....................................31
Gambar 4.2 Bagan Prosedur Kerja Fraksinasi.......................................................32
Gambar 4.3 Skema penentuan persentase rendemen cikal tulang.........................33
Gambar 4.4 Skema Persiapan Bioindikator Larva artemia salina.L......................35
Gambar 4.5 Skema Kerja Uji Bioaktivitas.............................................................36
Gambar 5.4. Grafik LC50 Ekstrak Etanol Cikal tulang...........................................45
Gambar 5.5. Grafik LC50 Fraksi n-Heksan Cikal tulang.......................................47
Gambar 5.6. Grafik LC50 Fraksi Etil Asetat Cikal tulang......................................49
Gambar 5.7. Grafik LC50 Fraksi n-Butanol Cikal tulang........................................51

ix
 x

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Perhitungan Rendemen......................................................................58

Lampiran 2. Perhitungan Konsentrasi....................................................................60
Lampiran 3. Perhitungan Nilai LC50......................................................................63
Lampiran 4. Dokumentasi Penelitian.....................................................................68

x
 xi

xi
 1

BAB I
PENDAHULUAN

A. Latar Belakang Masalah

Di Indonesia terdapat lebih dari 1.260 spesies tumbuhan obat, 283

diantaranya merupakan spesies tumbuhan yang digunakan oleh industri obat
tradisional, sedangkan tumbuhan obat yang dinyatakan langka sebanyak 62
spesies, sehingga masih banyak tumbuhan obat potensial yang belum
dimanfaatkan untuk pengembangan industri obat tradisional. Kecenderungan gaya
hidup back to nature sekarang ini membuat pengobatan tradisional semakin
meningkat pemakaiannya, ditunjang lagi dengan banyaknya kalangan medis yang
ikut serta dalam mengembangkannya. Kecenderungan ini didasari oleh beberapa
alasan, diantaranya harga obat-obatan modern yang semakin mahal menyebabkan
masyarakat mulai mencari alternatif pengobatan yang murah dan mudah
didapatkan, serta tidak kalah manjur.
Salah satu tumbuhan asli Indonesia yang dapat berfungsi sebagai obat
tradisional adalah Cikal tulang (Cissus quadrangularis L.). Berdasarkan literatur
Cikal tulang mengandung senyawa karotenoid, triterpenoid, dan asam askorbat.
Cikal tulang (Cissus quadrangularis L.) diduga memiliki banyak manfaat
yang sangat luas sebagai bahan obat, seperti obat luka, antibiotik, anti inflamasi,
obat cacing, rematik, diare, disentri, demam nifas, sakit kepala, borok usus, masuk
angin dan patah tulang (Hariana, 2006).
Belum banyak penelitian yang dilakukan terhadap Cikal tulang, karena
penggunaan sebagai bahan obat di lingkungan masyarakat masih kurang, maka
perlu dilakukan pengujian dasar untuk menentukan bioaktivitas dari tumbuhan ini.
Salah satu cara untuk menguji bioaktivitas ekstrak tumbuhan yaitu dengan metode
BSLT (Brine Shrimp Lethality Test). Bioaktivitas adalah suatu kemampuan suatu
senyawa aktif yang terkandung dalam tumbuhan yang dapat memberikan
pengaruh terhadap organisme tertentu.
 2

Metode BSLT merupakan salah satu metode yang digunakan untuk

penapisan awal senyawa-senyawa yang diduga memiliki senyawa aktif. Penelitian
ini menggunakan Artemia salina Leach sebagai hewan uji. Parameter yang
digunakan untuk menunjukkan adanya aktivitas biologi suatu senyawa yaitu
jumlah kematian Artemia salina Leach. Metode ini dilakukan dengan menentukan
besarnya LC50 selama 24 jam. Suatu ekstrak tanaman atau fraksi ekstrak tanaman
yang mempunyai LC50 kurang dari 1000 µg/mL dapat diduga memiliki aktivitas
seperti sitotoksik, anti mikroba, dan pestisida.
Berdasarkan hal tersebut dilakukan penelitian identifikasi golongan
metabolit sekunder dan uji bioaktivitas ekstrak menggunakan metode BSLT.
Penelitian ini merupakan penelitian pendahuluan untuk mengetahui bioaktivitas
ekstrak Cikal tulang untuk pemanfaatannya sebagai sitotoksik, anti mikroba, dan
pestisida.

B. Rumusan Masalah

Berdasarkan berbagai teori yang telah dipaparkan sebelumnya, maka

rumusan masalah dari penelitian kali ini adalah :
a. Berapa rendemen ekstrak Cikal tulang?
b. Golongan metabolit sekunder apa saja yang terkandung dalam Cikal tulang
yang diperoleh di daerah Kalimantan Timur?
c. Bagaimana bioaktivitas ekstrak Cikal tulang terhadap Artemia salina Leach?

C. Tujuan Penelitian

Tujuan penelitian ini adalah:

1. Untuk mengetahui rendemen ekstrak Cikal tulang.
2. Untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder yang terdapat pada Cikal
tulang.
3. Untuk mengetahui ekstrak memiliki bioaktivitas terhadap Artemia salina
Leach.
 3

4. Untuk mengetahui konsentrasi ekstrak yang dapat memberikan efek

bioaktivitas.

D. Kegunaan Penelitian

Kegunaan penelitian ini diharapkan dapat:

1. Sebagai sumber informasi ilmiah dalam mengidentifikasi tumbuhan Cikal
tulang.
2. Sebagai sumber ilmu pengetahuan dan referensi untuk penelitian selanjutnya.
3. Memberikan informasi kepada masyarakat tentang manfaat cikal tulang untuk
tujuan pencegahan nyamuk berbahaya bagi masyarakat.
4. Melaksanakan publikasi ilmiah yang bermanfaat bagi peneliti dan masyarakat.
 4

BAB II
KAJIAN PUSTAKA

A. Uraian Umum Tumbuhan Cikal Tulang

Tanaman Cikal tulang adalah tanaman semak perdu yang sering kita
jumpai berada disekitar kita. Tanaman cikal tulang ini biasanya dapat dijumpai di
halaman depan rumah, pekarangan, ladang dan tempat lainnya. Nama latin
tanaman cikal tulang adalah Cissus quadrangularis L. Sedangkan dalam bahasa
Inggris tanaman sangkal putung mempunyai nama  veld grape, devil's backbone,
adamant creeper, asthisamharaka, hadjod dan pirandai. Menurut sejarah asal
usul tanaman cikal tulang berasal dari  Bangladesh, India atau Sri Lanka.
Persebaran tanaman cikal tulang ini dari daerah Asia Selatan, Afrika, Arab, dan
Asia Tenggara, Brazil, Amerika. (Globinmed, 2011).

(Sumber : Foto Pribadi)

Gambar 2.1 Tumbuhan Cikal tulang

 5

1. Klasifikasi tumbuhan

Kingdom : Plantae
Subkingdom : Tracheobionta
Superdivisi : Spermatophyta
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Magnoliopsida
Subkelas : Rosidae
Ordo : Rhamnales
Famili : Vitaceae
Genus : Cissus
Spesies : Cissus quadrangularis L.
(Rita, 2010).

2. Morfologi Tumbuhan

Ciri fisik tanaman sangkal putung ini memiliki daun yang berbentuk hati
dengan percabangan batang segi empat. Fungsi dan kegunaan tanaman sangkal
putung ini bagi sebagai tanaman hias biasa karena batang dari tanaman sangkal
putung ini unik sehingga banyak dijadikan sebagai tanaman hias depan rumah.
Namun yang kita tidak tahu ternyata tanaman sangkal putung ini dapat dijadikan
obat herbal dalam pengobatan berbagai macam penyakit yang ada ditubu.
Tanaman cikal tulang merupakan salah satu jenis tanaman dari keluarga
tanaman anggur-angguran (Vitaceae). Tanaman cikal tulang ini termasuk tanaman
semak tahunan yang mana ukurannya dapat mencapai 1,5 m. Batang tanaman
sangkal putung berbentuk segi empat dengan ruas panjang batang sekitar 8 sampai
10 cm dan lebar 1,2 hingga 1,5 cm,  berwarna hijau. Sisi batang tanaman sangkal
putung kasar disetiap ruasnya muncul sulur atau akar berwarna putih. Daun
tanaman cikal tulang ini berbentuk spiral bulat telur muncul pada ruas batangnya
dengan ukuran 2-5 cm berwarna hijau. Tangkai daun tanaman cikal tulang ini
cukup panjang sekitar 2-3 cm diameternya  5-11 mm. Bunga cikal tulang bunga
majemuk berbentuk asimetris berukuran kecil berkelompok berwarna merah
kuning, muncul pada ruas percabangan. Buah tanaman cikal tulang ini tergolong
buah berry berkelempok berwarna merah. Akar tanaman cikal tulang ini akar
tunggang berwarna putih. Budidaya tanaman cikal tulang ini berkembang biak
dengan cara stek. Habitat tanaman cikal tulang ini berada pada tanah yang agak
 6

kering dengan syarat hidup pada ketinggian dari 0- 2000 m dari permukaan air
laut. (Depkes & Kessos RI, 2000).

3. Kandungan dan Manfaat Tumbuhan

Kandungan dari tumbuhan cikal tulang ini adalah karotenoid, triterpenoid,

dan asam askorbat. (Hariana, 2006).

4. Nama Umum

Nama Indonesia dari tanaman ini adalah Cikal tulang, dan pada daerah
Jawa: Sangkal Putung (Depkes & Kessos RI, 2000).

5. Simplisia

Simplisia adalah bahan alamiah yang dipergunakan sebagai obat yang

belum mengalami pengolahan apapun juga dan kecuali dinyatakan lain, berupa
bahan yang telah dikeringkan. Simplisia dibedakan menjadi simplisia nabati,
simplisia hewani dan simplisia mineral (pelikan). Simplisia nabati ialah simplisia
yang berupa tumbuhan utuh, bagian tumbuhan atau eksudat tumbuhan. Eksudat
tumbuhan ialah isi sel yang secara spontan keluar dari tumbuhan atau isi sel yang
secara tertentu dikeluarkan dari selnya atau senyawa nabati lainnya yang dengan
cara tertentu dipisahkan dari tumbuhannya dan belum berupa senyawa kimia
murni (Depkes RI, 2000).
Pengambilan simplisia atau bagian tanaman yang berkhasiat obat dari
tanamannya hendaknya dilakukan secara manual (dengan tangan), jadi tidak perlu
menggunakan mesin, terutama agar persyaratan-persyaratan simplisia yang
dikehendaki dapat terpenuhi. Simplisia-simplisa yang telah diambil/dipetik/
dipungut pada umumnya harus segera dikeringkan sampai derajat kering tertentu
(90% sampai 95%), dengan demikian akan mudah dihaluskan (kecuali bahan-
bahan yang akan disuling/diambil minyaknya). Pengeringan dapat dilakukan
langsung dibawah teriknya sinar matahari, diangin-anginkan atau dipanaskan pada
suhu tertentu dalam ruang pengeringan. Pengeringan bertujuan untuk mengurangi
 7

kadar air sebab dengan keringnya bahan-bahan dapat dicegah terjadinya reaksi
enzimatis, atau pertumbuhan bakteri dan cendawan (Kartasapoetra, 2006).

B. Uraian Metabolit Sekunder

Salah satu pendekatan untuk penelitian tumbuhan obat adalah identifikasi

senyawa kimia yang terkandung dalam tanaman. Cara ini digunakan untuk
mendeteksi senyawa kimia tumbuhan berdasarkan golongannya. Sebagai
informasi awal dalam mengetahui senyawa kimia apa yang mempunyai aktivitas
biologi dari suatu tanaman. Informasi yang diperoleh dari pendekatan ini juga
dapat digunakan untuk keperluan sumber bahan yang mempunyai nilai ekonomi
lain seperti sumber tanin, minyak untuk industri, dan sumber gum. Metode yang
telah dikembangkan dapat mendeteksi adanya golongan senyawa alkaloid,
flavonoid, senyawa fenolat, tanin, saponin, kumarin, kuinon, steroid atau
terpenoid (Teyler,1988).
Fitokimia atau kimia tumbuhan telah berkembang menjadi satu ilmu
displin tersendiri, berada di antara kimia organik bahan alam dan biokimia
tumbuhan, serta berkaitan erat dengan keduanya. Bidang perhatiannya adalah
aneka ragam senyawa organik yang dibentuk dan ditimbun oleh tumbuhan yaitu
mengenai struktur kimianya, biosintesisnya, perubahan serta metabolismenya,
penebarannya secara alamiah, dan fungsi biologisnya (Harborne, 1987).
Berdasarkan metabolisme suatu hayati, terdapat tiga jalur metabolisme
yang terjadi yaitu metabolisme primer, metabolisme intermedit (antara), dan
metabolisme sekunder. Metabolisme primer yaitu pembentukan metabolit primer
dalam hayati (kelompok senyawa primer). Metabolisme intermedit (antara atau
sentral) yaitu pembentukan senyawa-senyawa antara yang selanjutnya menjadi
prekursor (bahan dasar) metabolit primer maupun sekunder. Metabolisme
sekunder adalah pembentukan metabolit sekunder dalam hayati (Herbert, 1995).
Metabolit primer yaitu suatu senyawa kimia dalam bentuk makromolekul
yang dimiliki semua hayati. Contoh metabolit primer adalah protein, asam
nukleat, lipid, dan karbohidrat. Metabolit intermedit adalah senyawa-senyawa
dalam hayati yang merupakan prekursor (bahan dasar) pembentukan metabolit
 8

primer maupun sekunder. Metabolit sekunder adalah senyawa kimia dalam hayati
berupa mikromolekul yang hanya dimiliki oleh hayati tertentu. Contoh metabolit
sekunder adalah alkaloid, terpen, flavanoid, dan berbagai turunannya (Gunawan,
2004).

1. Alkaloid

Alkaloid merupakan golongan zat tumbuhan sekunder yang terbesar. Pada

umumnya alkaloid mencakup senyawa bersifat basa yang mengandung satu atau
lebih atom nitrogen, biasanya dalam gabungan, sebagai bagian dari sistem siklik.
Alkaloid seringkali beracun bagi manusia dan banyak yang mempunyai kegiatan
fisiologi yang menonjol yang digunakan secara luas dalam bidang pengobatan.
Alkaloid biasanya tanpa warna, seringkali bersifat optis aktif, kebanyakan
berbentuk kristal tetapi hanya sedikit yang berupa cairan (misalnya nikotina pada
suhu kamar).
Alkaloid, sekitar 5500 telah diketahui, merupakan golongan zat tumbuhan
sekunder yang terbesar. Uji sederhana tetapi yang sama sekali tidak satu
sempurna, untuk alkaloid dalam daun atau buah segar adalah rasa pahitnya di
lidah. Misalnya, alkaloid kinin adalah zat yang dikenal paling pahit dan pada
konsentrasi molar 1x 10-3 memberikan rasa pahit yang berarti (Harborne, 1987).
Metode identifikasi alkaloid sebagai berikut, ekstrak kasar sebanyak 50 mg
ditambah 10 mL kloroform-amoniak 0,05 M, lalu disaring kedalam tabung reaksi.
Filtrat ditambah beberapa tetes asam sulfat 2 M dan dikocok sehingga terpisah
dua lapisan. Lapisan asam terdapat dibagian atau dipipet kedalam tabung reaksi
lain lalu ditambahkan pereaksi Dragendroff (Bi(NO3)3.5H2O dalam asam nitrat
dan larutan KI). Adanya alkaloid ditunjukan dengan terbentuknya endapan jingga
sampai merah coklat (Darwis, 2000).

Gambar 2.2 Struktur Kimia Alkaloid (Harborne, 1987)

 9

2. Flavonoid

Flavonoid adalah suatu kelompok senyawa fenol yang terbesar yang

ditemukan di alam. Senyawa-senyawa ini merupakan zat warna merah, ungu dan
biru dan sebagian zat warna kuning yang ditemukan di dalam tumbuh-tumbuhan.
Flavonoid mempunyai kerangka dasar yang terdiri dari 15 atom karbon, dimana
dua cincin (C6) terikat pada suatu rantai propan (C3). Susunan ini dapat
menghasilkan tiga jenis struktur, yakni 1,3 diarilpropan atau flavonoid, 1,2
diarilpropan atau isoflavonoid dan 1,1-diarilpropan atau neoflavonoid (Achmad,
1986).
Senyawa-senyawa flavonoid terdapat dalam semua bagian tumbuhan
tinggi, seperti bunga, daun, ranting, buah, kayu, kulit kayu dan akar. Akan tetapi,
senyawa flavonoid tertentu seringkali terkonsentrasi dalam suatu jaringan tertentu
misalnya antosianidin adalah zat warna dari bunga, buah dan daun (Achmad,
1986).
Identifikasi flavonoid dilakukan dengan cara sebanyak 1 mL fraksi aktif
ditambah 2 mg serbuk magnesium (Mg) dan asam klorida (HCl) pekat 3 tetes. Uji
positif ditandai dengan terbentuknya warna ungu, merah, jingga, kuning-
kecoklatan (Harborne, 1987).

Gambar 2.3 Struktur Kimia Kerangka Dasar Flavonoid (Harborne, 1987)

 10

3. Karotenoid

Karotenoid yaitu tetraterpenoid C40, merupakan golongan pigmen yang

larut lipid dan tersebar luas, terdapat dalam semua jenis tumbuhan, mulai dari
bakteria sederhana sampai ke komposit yang berbunga kuning. Pada hewan, suatu
karatenoid khusus, yaitu β-karotena, merupakan makanan yang diperlukan karena
ia merupakan sumber vitamin A, yaitu suatu isoprenoid alkohol C20. Vitamin A ini
diperoleh setelah β-karotena tadi mengalami hidrasi dan molekulnya terpecah dua.
Melalui makanan, karotenoid juga merupakan sumber warna hewan yang
cemerlang, seperti pada flamingo, bintang laut (Asteroida), udang satang
(Homarus), dan bulu babi (Echinoidea). Pada tumbuhan, karotenoid mempunyai
dua fungsi, yaitu sebagai pigmen pembantu dalam fotosintesis dan sebagai
pewarna dalam bunga dan buah. Dalam bunga karotenoid kebanyakan berupa zat
warna kuning, sementara dalam buah dapat juga berupa zat warna jingga atau
merah.
Identifikasi karotenoid dilakukan dengan cara ekstrak ditambahkan asam
sulfat pekat kemudian diamati perubahan yang terjadi, hasil positif akan terbentuk
warna biru/hijau kebiruan (Harborne,1987).

Gambar 2.4 Struktur Kimia β-Karoten (Harborne, 1987)

4. Saponin

Saponin merupakan glikosida triterpen dan sterol yang telah terdeteksi

dalam lebih dari 90 suku tumbuhan. Saponin merupakan senyawa aktif
permukaan dan bersifat sabun, serta dapat dideteksi berdasarkan kemampuannya
membentuk busa dan menghemolisis darah.
 11

Pembentukan busa yang mantap sewaktu mengekstraksi tumbuhan atau

waktu memekatkan ekstrak tumbuhan merupakan bukti terpercaya akan adanya
saponin. Memang betul, bila dalam tumbuhan terdapat banyak saponin, sukar
memekatkan ekstrak alkohol-air dengan baik, walaupun digunakan penguapan
putar. Karena itu, uji saponin yang sederhana adalah mengocok ekstrak alkohol-
air dari tumbuhan dalam tabung reaksi dan diperhatikan apakah ada terbentuk
busa tahan lama pada permukaan cairan. Saponin dapat juga diperiksa dalam
ekstrak kasar berdasarkan kemampuannya menghemolisis sel darah. Tetapi,
biasanya lebih baik bila uji sederhana itu dipastikan dengan cara kromatografi
lapis tipis dan pengukuran spektrum.
Identifikasi saponin dilakukan dengan cara sebanyak 1 mL ekstrak
dimasukan kedalam tabung reaksi, ditambahkan 10 mL air panas, didinginkan
kemudian dikocok kuat-kuat selama 10 detik. Bila terdapat senyawa saponin
dalam ekstrak yang diuji, maka akan terbentuk buih mantap selama kurang lebih
10 menit. Tinggi buih 1cm sampai 10 cm dan buih tidak hilang jika ditambahkan
1 tetes HCl 2N (Harborne,1987).

Gambar 2.5 Struktur Kimia Saponin Tipe Steroid (Harborne, 1987)

5. Senyawa Fenol

Senyawa asam fenolat ada hubungannya dengan lignin terikat sebagai

ester atau terdapat pada daun di dalam fraksi yang tidak larut dalam etanol; atau
mungkin terdapat dalam fraksi yang larut dalam etanol, yaitu sebagai glikosida
 12

sederhana. Deteksi asam fenolat dan lignindalam jaringan tumbuhan Lignin ialah
polimer fenol yang terdapat dalam dinding sel tumbuhan, yang bersama selulosa,
menyebabkan kekakuan dan kekokohan batang tumbuhan. Lignin terutama
terdapat pada tumbuhan berkayu karena sampai 30% bahan organik pepohonan
terdiri atas zat ini. Bila dioksidasi dengan nitrobenzen, lignin menghasilkan tiga
aldehida fenol sederhana yang ada kaitannya dengan asam fenolat tumbuhan
umum.
Identifikasi senyawa fenol dilakukan dengan cara ekstrak kasar sebanyak
50 mg dilarutkan dalam 1 mL etanol, lalu ditambahi beberapa tetes pereaksi
FeCl3. Uji positif ditunjukan oleh warna hijau, merah, ungu, hitam pekat
(Harborne,1987).

Gambar 2.6 Struktur Kimia Senyawa Fenol (Harborne, 1987)

6. Steroid dan Triterpenoid

Triterpenoid adalah senyawa yang kerangka karbonnya berasal dari enam

satuan isoprena dan secara biosintesis diturunkan dari hidrokarbon C30 asiklik
yaitu skualena. Senyawa ini berstruktur siklik yang nisbi rumit, kebanyakan
berupa alkohol, aldehida, atau asam karboksilat. Mereka berupa senyawa
berwarna, berbentuk kristal, sering kali bertitik leleh tinggi dan aktif optik, yang
umumnya sukar dicirikan karena tak ada kereaktifan kimianya. Uji yang banyak
digunakan ialah reaksi Lieberman-Burchard (anhidrida asetat- H2SO4 pekat) yang
dengan kebanyakan triterpena dan sterol memberikan warna hijau-biru.
Triterpenoid dapat dipilah menjadi sekurang-kurangnya empat golongan senyawa:
triterpena sebenarnya, steroid, saponin dan glikosida jantung. Kedua golongan
yang terakhir sebenarnya triterpena atau steroid yang terutama terdapat sebagai
glikosida.
 13

Sterol tertentu hanya terdapat dalam tumbuhan rendah, contohnya

ergosterol yang terdapat dalam khamir dan sejumlah fungus. Sterol lain terutama
terdapat dalam tumbuhan rendah, tetapi kadang-kadang terdapat juga dalam
tumbuhan tinggi, misalnya fukosterol, yaitu steroid utama pada alga coklat dan
juga terdeteksi pada kelapa.
Identifikasi steroid dan triterpenoid dilakukan dengan cara sebanyak 1
mL fraksi aktif ditambahkan 10 tetes asam asetat glasial dan 2 tetes asam sulfat
secara berurutan. Larutan dikocok perlahan dan dibiarkan beberapa menit. Uji
positif ditandai dengan terbentuknya warna merah atau ungu untuk triterpenoid
serta hijau atau biru untuk steroid (Harborne,1987).
H H

R R

H H

HO HO

Beta-amirin (R=Me) Alfa-amirin (R = Me)

as. oleanolat (R= COOH) as. ursolat (R= COOH)

HO
HO
Stigmasterol
sitosterol (R= etil)
Kampesterol (R= Me)

Β-Amirin (R = CH3) α- Amirin ( R = CH3)

Asam oleanolat (R = CO2H) Asam ursolat (R = CO2H)

H H

R R

H H

HO HO

Beta-amirin (R=Me) Alfa-amirin (R = Me)

as. oleanolat (R= COOH) as. ursolat (R= COOH)

HO
HO
Stigmasterol
sitosterol (R= etil)
Kampesterol (R= Me)

Stigmasterol Ergosterol
Gambar 2.7 Struktur Kimia Beberapa Senyawa Steroid dan Triterpenoid
(Harborne, 1987)

7. Tanin

Tanin terdapat luas dalam tumbuhan berpembuluh, dalam angiospermae

terdapat khusus dalam jaringan kayu. Menurut batasannya, tanin dapat bereaksi
 14

dengan protein membentuk kopolimer mantap yang tidak larut dalam air. Dalam
industri, tanin adalah senyawa yang berasal dari tumbuhan, yang mampu
mengubah kulit hewan yang mentah menjadi kulit siap pakai karena
kemampuannya menyambung silang protein. Di dalam tumbuhan letak tanin
terpisah dari protein dan enzim sitoplasma, tetapi bila jaringan rusak, misalnya
bila hewan memakannya, maka reaksi penyamakan dapat terjadi. Reaksi ini
menyebabkan protein lebih sukar dicapai oleh cairan pencernaan hewan. Pada
kenyataanya, sebagian besar tumbuhan yang banyak bertanin dihindari oleh
hewan pemakan tumbuhan karena rasanya yang sepat. Kita menganggap salah
satu fungsi utama tanin dalam tumbuhan ialah sebagai penolak hewan pemakan
tumbuhan.
Identifikasi tanin dilakukan dengan caraekstrak ditambahkan air panas lalu
didihkan selama 5 menit setelah dingin disaring. Filtratnya ditambahkan ferri
klorida akan menghasilkan warna hijau hitam (tanin katekol) atau biru hitam
(tanin galat) (Harborne,1987).

(a) (b)
Gambar 2.8 Struktur Kimia Tanin: (a) Tanin Terkondensasi; (b) Tanin
Terhidrolisis (Harborne, 1987)

C. Uraian Umum Artemia salina Leach

Udang renik air asin (Brine Shrimp) atau artemia pertama kali diselidiki
oleh Schlosser pada tahun 1775. Sebenarnya sudah dikenal orang jauh
sebelumnya, terutama penduduk sekitar tempat-tempat pembuatan garam (salina).
Oleh karena itu nama populernyapun bermacam-macam, seperti : Brineworm,
 15

Salztierchen, Verme de sale, Soferage, Bahar el dud, Fezzauwurm, dan lain-lain.

Dalam setahun tersebut Schlosser telah berhasil membuat gambar artemia dewasa
secara lengkap. Dalam tahun 1778 Linneus juga mempelajari hewan tersebut. Dia
membuat deskripsinya dan kemudian menamakannya Cancer salinus. Namun,
dalam tahun 1819 nama tersebut diubah oleh Leach menjadi Artemia salina
(Mudjiman, 1995).

1. Klasifikasi Artemia salina Leach

Artemia adalah sejenis udang-udangan primitif. Artemia semula diberi

nama Cancer salinus oleh Linnaeus pada tahun 1778, tetapi kemudian pada tahun
1919 diubah menjadi Artemia salina Leach. Klasifikasi Artemia salina Leach
dalam ilmu sistematika hewan adalah sebagai berikut : filum Arthropoda, kelas
Crustacea, subkelas Branchiopoda, ordo Anostraca, famili Artemilidae, genus
Artemia dan spesies Artemia salina Leach (Mudjiman, 1995).

Gambar 2.9 Bentuk Artemia salina Leach dilihat dari mikroskop (Djarijah, 1995)

2. Penetasan Telur Artemia salina Leach

Telur yang siap menetas berwarna coklat keabu-abuan. Untuk media

penetasan dapat digunakan air laut biasa (kadar garam 30 per mil). Tapi untuk
mencapai hasil penetasan yang lebih baik, kita perlu menggunakan air berkadar
garam 5 permil. Ini dapat dibuat dengan mengencerkan air laut dengan air tawar.
Sebelum ditetaskan telur-telur tersebut perlu dicuci terlebih dahulu, yakni dengan
direndam di dalam air tawar selama 1 jam, baru kemudian dimasukan dalam
 16

wadah penetasan. Suhu air yang baik selama proses penetasan adalah antara 25-
30oC. Sedangkan kadar oksigennya harus lebih dari 2 mg/L. Untuk merangsang
proses penetasannya media penetasan tersebut perlu disinari dengan lampu yang
dipasang di samping wadah. Dalam waktu 24-36 jam setelah pemasukan telur,
biasanya telur-telur itu sudah menetas menjadi anak artemia yang dinamakan
nauplius (Mudjiman, 1995).

3. Lingkungan Hidup Artemia salina Leach

Artemia salina Leach hidup secara planktonik di perairan laut yang kadar
garamnya (salinitasnya) berkisar antara 15-300 per mil dan suhunya berkisar
antara 25ºC-30ºC serta nilai pH nya antara 7,3-8,4. Keistimewaan artemia sebagai
plankton adalah memiliki toleransi (kemampuan beradaptasi dan mempertahankan
diri) pada kisaran kadar garam yang sangat luas. Pada kadar garam yang sangat
tinggi dimana tidak ada satupun organisme lain mampu bertahan hidup, ternyata
artemia mampu mentolelirnya. Artemia tidak dapat mempertahankan diri terhadap
pemangsa atau musuh-musuhnya sebab tidak mempunyai alat ataupun cara untuk
membela diri. Pertahananya merupakan anugerah alam yang berupa lingkungan
hidup berkadar garam tinggi sebab pada kadar garam tinggi tersebut pemangsanya
sudah tidak dapat hidup lagi (Mudjiman, 1995).

4. Cara Makan dan Makanan Artemia salina Leach

Secara alami artemia hidup dari pakan alami lain berupa detritus bahan
organik (sisa bahan alam yang hancur), ganggang renik, ganggang hijau,
ganggang biru, diatom, bakteri dan cendawan (ragi laut). Artemia hanya dapat
menelan makanan kecil-kecil, berukuran 50 mikron kebawah. Ukuran lebih besar
dari itu artemia tidak dapat menelannya bulat-bulat. Makanan akan ditelan setelah
dikumpulkan dulu dalam mulutnya dengan jalan menggerak-gerakkan kakinya.
Arus air ditimbulkan oleh gerakan kakinya akan membawa makan ke arah mulut
sehingga artemia tinggal menelannya saja (Mudjiman, 1995).
5. Perkembangbiakan dan Cara Hidup Artemia salina Leach
 17

Berdasarkan cara perkembangbiakannya artemia digolongakan menjadi

dua jenis, yaitu jenis biseksual dan partenogenetik. Jenis artemia yang dihasilkan
dari perkembangbiakan secara biseksual tidak dapat melakukan
perkembangbiakan secara partenogenetik, begitu juga sebaliknya. Pada jenis
artemia golongan berkembangbiak secara biseksual diawali dengan proses
perkawinan antara induk betina dan jantan, sedangkan pada jenis artemia
golongan berkembangbiak secara partenogenetik tidak pernah terjadi proses
perkawinan. Kedua cara perkembangbiakan tersebut dapat terjadi secara
ovovivipar maupun ovipar. Pada perkawinan secara ovovivipar, organisme baru
yang dihasilkan telah berwujud individu yang persis sama dengan induknya.
Individu baru ini disebut nauplius dan hidup seperti halnya artemia muda.
Sedangkan pada perkawinan secara ovipar hasilnya berupa telur yang
bercangkang tebal. Artemia menjadi dewasa setelah umur 14 hari. Artemia
dewasa ini bisa menghasilkan telur sebanyak 50-300 butir setiap 4-5 hari sekali.
Umur maksimal artemia sekitar enam bulan (Mudjiman, 1995).

D. Uraian Umum Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)

1. Bioaktivitas

Bioaktivitas adalah kemampuan suatu senyawa aktif dalam

mempengaruhi keadaan biologi atau respon biologis terhadap makhluk hidup.
Aktivitas biologi suatu bahan bersumber dari senyawa kimia yang terkandung
dalam suatu bahan tersebut. Pengetahuan bioaktif merupakan cara untuk
menelusuri atau menemukan senyawa alami yang memiliki aktivitas alami yang
dapat dimanfaatkan untuk berbagai keperluan (Colegate and Molyneux, 1993).
 18

2. Brine Shrimp Lethality Test

Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) merupakan salah satu metode

skrining untuk menentukan ketoksikan suatu ekstrak ataupun senyawa. Metode ini
juga sering digunakan untuk mengisolasi senyawa toksik tersebut dari ekstrak.
Parameter yang digunakan untuk menunjukkan adanya aktivitas biologi suatu
senyawa terhadap Artemia salina Leach adalah kematian. Senyawa-senyawa yang
menunjukkan ketoksikan yang tinggi dalam BSLT sering dikaitkan dengan
potensinya sebagai antitumor.
Metode uji toksisitas ini sering digunakan untuk penapisan awal terhadap
senyawa aktif yang terkandung didalam suatu ekstrak karena cepat, mudah,
sederhana dan dapat dipercaya. Secara umum senyawa yang bersifat sitotoksis
juga menunjukkan sifat toksiknya terhadap Artemia salina Leach. Uji toksisitas
akut dengan hewan uji Artemia salina Leach dapat digunakan sebagai uji
pendahuluan pada penelitian yang mengarah uji sitotoksik (Mc Laughlin, 1998).

3. Metode Reed and Muench

Cara ini menggunakan harga kumulatif sebagai dasarnya. Harga

kumulatif diperoleh dari asumsi bahwa hewan uji yang mati pada suatu dosis,
tentu akan mati oleh dosis yang lebih besar dan hewan uji yang tidak mati atau
tetap hidup pada suatu dosis, tentu juga tidak akan mati oleh karena dosis yang
lebih kecil. Angka kumulatif diperoleh dari menjumlahkan kematian hewan uji
pada dosis terbesar yang menyebabkan kematian 100% hewan uji dengan jumlah
hewan uji yang mati pada dosis-dosis yang lebih kecil. Angka kumulatif survivor
(hidup) diperoleh dari menjumlahkan hewan uji yang tetap hidup pada dosis
terkecil yang tidak menyebabkan kematian (100% hewan uji tetap hidup) dengan
jumlah hewan uji yang tetap hidup pada dosis-dosis di atasnya. Persentase
survival pada dosis di bawah LD50 dengan LD50, kemudian dibagi dengan selisih
persentase survival pada dosis di atas dan di bawah LD 50. Proporsi jarak ini jika
kemudian dikalikan dengan dengan Logaritme rasio di atas terhadap dosis di
bawah LD50, didapat harga antilog LD50 (Fanani R, 2009).
 19

4. Bioaktivitas Artemia salina Leach Toksikologi

Bioaktivitas adalah aktivitas biologis yang dimiliki oleh suatu senyawa

tehadap organisme lain atau pada organisme yang menghasilkan senyawa
tersebut. Bioaktivitas biasa terdapat pada antimikroba, antibakteri, antifungi,
antivirus, dan antiprotozoa. Senyawa bioaktif tersebut dapat berupa golongan
senyawa alkaloid, flavonoid, steroid, triterpenoid, dan saponin (Sirait, 2000).
Uji bioaktivitas menggunakan Artemia salina Leach atau BSLT adalah
metode umum skrining bioaktif yang memiliki spektrum luas dalam ekstrak.
Metode ini merupakan skrining awal untuk memprediksi aktivitas sitotoksik,
antimikroba, dan pestisida (Colegate and Molyneux, 1993).
Obat sitotoksik adalah obat yang memiliki kekuatan spesifik untuk
menghancurkan sel tertentu, dapat bersifat mutagenik, karsinogenik, atau
teratogenik (Elzerman, 2005). Dalam dunia farmasi senyawa-senyawa yang
mempunyai aktivitas sitotoksik digunakan sebagai obat kanker. Zat antimikrobial
adalah suatu zat yang mempunyai aktivitas antimikroba yang cukup untuk
digunakan sebagai pengobatan pada penyakit infeksi (Ryan, 2004). Selain itu
antimikroba juga digunakan sebagai pengawet pada formulasi sediaan farmasi
(Ansel, 1989). Pestisida adalah bahan yang digunakan untuk mengendalikan,
menolak, atau membasmi organisme pengganggu. Adapun sasarannya antara lain
seperti serangga, tikus, gulma, burung, mamalia, ikan, atau mikroba yang
dianggap mengganggu (Shopyan,2010).

5. Lethal Concentration 50%

Lethal Concentration 50% adalah konsentrasi suatu senyawa yang akan

menimbulkan kematian pada 50% hewan uji. LC 50 merupakan harga sebenarnya
yang diperoleh secara statistika. Ini merupakan suatu harga perhitungan yang
menggambarkan estimasi paling baik dari dosis yang diperlukan untuk
menimbulkan kamatian pada 50% hewan uji, karenanya selalu disertai suatu
estimasi dari harga kesalahannya (Loomis, 1970).
 20

Pada uji ini dilihat antara konsentrasi larutan ekstrak dengan respon
kematian larva udang. Untuk Ekstrak dianggap toksik apabila nilai LC50 kurang
dari 1000 ppm. Dari data yang diperoleh dapat dihitung LC50 (Mclaughlin,1998).
Nilai LC50 adalah konsentrasi suatu senyawa yang akan menimbulkan kematian
pada 50% hewan uji. LC50 merupakan suatu harga sebenarnya yang diperoleh
secara statistik. Ini merupakan suatu harga perhitungan yang menggambarkan
estimasi yang paling baik dari konsentrasi yang diperlukan untuk menimbulkan
kematian pada 50% hewan uji, karenanya selalu disertai dengan suatu estimasi
dari harga kesalahannya, seperti probabilitas kisaran nilainya. Selain itu, alasan
penggunaan LC50 adalah karena pada konsentrasi tersebut merupakan batasan
tengah dimana masih dapat memberikan efek terapi sekaligus efek toksik dari
ekstrak uji. (Franck,2006)

E. Uraian Metode Ekstraksi

Ekstraksi adalah suatu pemisahan substansi atau zat dari campuran dengan
menggunakan pelarut yang sesuai. Umumnya, senyawa organik yang terkandung
dalam tanaman maupun hewan lebih larut dalam pelarut organik. Proses
terekstraksinya senyawa organik dalam tanaman adalah pelarut organik akan
menembus dinding sel dan akan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung
senyawa organik. Senyawa organik akan terlarut sehingga akan terjadi perbedaan
konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dan pelarut organik di luar sel.
Perbedaan konsentrasi ini akan menyebabkan larutan pekat di dalam sel akan
berdifusi ke luar sel dan proses ini berlangsung terus-menerus sampai terjadi
keseimbangan antara konsentrasi zat aktif di dalam sel (Goeswin, 2007).
Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengektraksi
senyawa aktif dari simplisia menggunakan pelarut yang sesuai. Kemudian semua
atau hampir semua pelarut diuapkan dan masa atau serbuk yang tersisa
diperlakukan sedemikian rupa hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan
(Ansel, 1989).
Cairan pelarut dalam proses pembuatan ekstrak adalah pelarut yang baik
(optimal) untuk senyawa kandungan yang berkhasiat atau aktif, dengan demikian
 21

senyawa tersebut dapat terpisahkan dari bahan dan dari senyawa kandungan
lainnya, serta ekstrak hanya mengandung sebagian besar senyawa kandungan
yang diinginkan. Faktor utama untuk pertimbangan pada pemilihan cairan penyari
adalah sebagai berikut, selektivitas, kemudahan bekerja dan proses dengan cairan
tersebut, ekonomis, ramah lingkungan, keamanan (Depkes RI, 2000).
Cara ekstraksi dapat dilakukan secara infudasi, maserasi, perkolasi, dan
penyarian berkesinambungan (soxhletasi). Dari keempat cara tersebut sering
dimodifikasi untuk memperoleh hasil yang lebih baik. Pada penelitian ini
menggunakan metode penyarian maserasi.

1. Infudasi

Infudasi adalah proses ekstraksi yang umumnya digunakan untuk menyari

kandungan zat aktif yang larut dalam air dari bahan-bahan nabati. Ekstraksi
dengan cara ini menghasilkan sari yang tidak stabil dan mudah tercemar oleh
kuman dan kapang. Oleh sebab itu, sari yang diperoleh dengan cara ini tidak boleh
disimpan lebih dari 24 am (Depkes RI, 1986).

2. Maserasi

Maserasi adalah proses penyarian simplisia dengan menggunakan pelarut

dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan
(kamar). Secara teknologi termasuk ekstraksi dengan prinsip metode pencapaian
konsentrasi pada keseimbangan. Remaserasi berarti dilakukan pengulangan
penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan maserasi pertama, dan
seterusnya. Maserasi merupakan proses dimana simplisia yang sudah halus
memungkinkan untuk direndam sampai meresap dan melunakkan susunan sel,
sehingga zat-zat mudah larut akan melarut. Maserasi dilakukan dengan cara
merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari akan menembus
dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif. Senyawa
organik akan larut dan karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat
aktif di dalam sel dengan yang di luar sel, maka larutan yang terpekat akan
 22

didesak keluar. Peristiwa tersebut berulang sehingga terjadi keseimbangan

konsentrasi antara larutan di luar sel dan di dalam sel. Maserasi digunakan untuk
penyarian simplisia yang mengandung senyawa organik mudah larut dalam cairan
penyari. Keuntungan cairan penyarian dengan maserasi adalah cara pengerjaan
dan peralatan yang digunakan sederhana dan mudah diusahakan. Kerugian cara
maserasi adalah pengerjaannya lama dan penyariannya kurang sempurna (Depkes
RI, 1986).

3. Perkolasi

Perkolasi adalah cara yang dilakukan dengan mengalirkan cairan penyari

melalui serbuk simplisia yang telah dibasahi. Prinsip perkolasi adalah serbuk
simplisia ditempatkan dalam suatu bejana silinder, yang bagian bawahnya diberi
sekat berpori. Cairan penyari dialirkan dari atas ke bawah melalui bubuk sampel,
cairan penyari akan melarutkan senyawa organik dalam sel-sel yang dilaluinya
sampai mencapai jenuh (Depkes RI, 1986).

4. Refluks

Refluks adalah cara penyarian yang dilakukan dengan memanaskan cairan

penyari bersama sampel di dalam labu alas bulat. Prinsip dasar penyarian ini
adalah sampel yang diekstraksi diletakkan dalam labu alas bulat bersama cairan
penyari yang digunakan. Cairan penyari dipanaskan hingga mendidih. Uap
penyari mengalami kondensasi oleh pendingin balik, embun yang terbentuk
kemudian turun kembali ke labu alas bulat sambil melarutkan zat aktif. Proses ini
berlangsung hingga proses ekstrkasinya sempurna (Depkes RI, 1986).

5. Soxhlet

Soxhlet adalah ekstraksi yang dilakukan dengan memanaskan cairan

penyari pada labu alas bulat, dimana sampel diletakkan dalam kelongsong dan
cairan penyari berada dalam labu alas bulat. Prinsip dasar metode ini adalah cairan
penyari dipanaskan, uap cairan penyari akan naik ke atas melalui pipa samping
 23

naik ke kondensor, uap akan mengembun dan menetes ke dalam kelongsong berisi
sampel yang diekstraksi. Ketika cairan penyari mencapai ketinggian ujung sifon,
seluruh cairan dalam kelongsong akan mengalir melalui sifon dan kembali ke
wadah labu alas bulat (Depkes RI, 1986).

F. Uraian Umum Metode Fraksinasi

Komponen-komponen suatu campuran, misalnya ekstrak dari tumbuhan

dapat dipisahkan dalam kelompok-kelompok senyawa yang dibagi berdasarkan
kesamaan karakteristiknya. Proses ini disebut fraksinasi. Dan dapat pula
dilakukan dengan berbagai cara masing-masing pengelompokan senyawa
berdasarkan pada satu atau lebih ciri utama. Oleh sebab itu kelarutan, ukuran,
bentuk, muatan listrik dan beberapa sifat lainnya dapat mempengaruhi
pengelompokan. Molekul-molekul yang dikelompokan dalam satu fraksi dengan
metode yang didasarkan pada kriteria yang berbeda.
Metode-metode yang biasa digunakan untuk fraksinasi atau pemurnian
antara lain metode pengendapan, ekstraksi cair-cair, destilasi, dialisis,
kromatografi, dan elektroforesis (Jobo, 2001).
Pada ekstraksi cair-cair, zat yang diekstraksi terdapat dalam campuran
yang berbentuk cair. Prinsip metode ini berdasarkan pada distribusi zat terlarut
dengan perbandingan tertentu antara dua pelarut yang tidak saling campur.
Ekstraksi cair-cair ditentukan oleh distribusi Nerst atau hukum partisi yang
menyatakan bahwa pada konsentrasi dan tekanan yang konstan, suatu senyawa
akan terdistribusi dalam proporsi yang selalu sama diantara dua pelarut yang
saling tidak campur. Perbandingan konsentrasi pada keadaan setimbang di dalam
dua fase, disebut koefisien distribusi atau koefisien partisi (KD).
Prinsip metode ini didasarkan pada distribusi zat terlarut dengan
perbandingan tertentu antara dua pelarut yang tidak saling bercampur dimana
sebagian komponen larut pada fase pertama dan sebagian larut pada fase kedua,
selanjutnya kedua fase yang mengandung zat terdispersi dikocok, kemudian
didiamkan sampai terjadi pemisahan sempurna dan terbentuk dua lapisan fase
cair. Komponen kimia akan terpisah ke dalam kedua fase tersebut sesuai dengan
 24

tingkat kepolarannya dengan perbandingan konsentrasi yang tetap. Teknik ini

dapat digunakan untuk kegunaan preparatif, pemurnian, memperkaya, pemisahan
serta analisis pada semua skala kerja (Khopkar, 1990).
Pelarut organik yang dipilih untuk ekstraksi cair-cair adalah pelarut yang
memiliki kelarutan rendah dalam air, mudah menguap sehingga memudahkan
penguapan pelarut organik setelah dilakukan ekstraksi, dan mempunyai
kemurnian yang tinggi untuk meminimalkan adanya kontaminasi sampel.
Kebanyakan ekstraksi cair-cair dilakukan dengan menggunakan corong pisah
dalam waktu beberapa menit (Rohman, 2007).
Pada proses fraksinasi pemilihan pelarut berdasarkan tingkat kepolaran
dari masing-masing pelarut. Etil asetat merupakan senyawa organik dengan rumus
CH3CH2COOCH3. Senyawa etil asetat merupakan ester dari etanol dan asam
asetat. Senyawa ini berupa cairan tak berwarna, memiliki aroma khas. Etil asetat
adalah pelarut polar menengah yang mudah menguap, tidak beracun, dan tidak
higroskopis. Heksan merupakan pelarut polar rendah dengan rumus kimia C 6H14
yang berupa cairan tak berwarna dan tidak larut dalam air. Butanol biasa disebut
n-butanol, n-butil alkohol atau 1-butanol dengan rumus kimia C4H9OH, butanol
merupakan pelarut polar tinggi. Senyawa-senyawa yang bersifat polar akan masuk
ke pelarut polar, begitu pula senyawa yang bersifat non polar akan masuk ke
pelarut non polar (Harborne, 1987).

1. Cairan Pelarut

Cairan pelarut dalam proses pembuatan ekstrak adalah pelarut yang baik
untuk kandungan senyawa yang berkhasiat atau senyawa aktif, dengan demikian
senyawa tersebut dapat dipisahkan dari bahan dan dari senyawa lainnya, serta
ekstrak hanya mengandung sebagian besar senyawa kandungan yang diinginkan.
Pelarut dipilih berdasarkan keamanannya, ekonomis, kemampuannya dalam
menyari dan sebagainya (Harborne, 1987).
Sampai saat ini berlaku aturan bahwa pelarut yang diperbolehkan adalah
air dan alkohol (etanol) serta campurannya. Etanol merupakan pelarut yang paling
baik karena tidak toksik dan dapat melarutkan bahan-bahan polar dan nonpolar.
 25

Jenis pelarut lain seperti metanol, alkohol dan turunannya, heksana, hidrokarbon
alifatik. Toluen, hidrokarbon aromatik, klorofom, dan segolongannya, aseton,
umumnya digunakan sebagai pelarut untuk tahap separasi dan tahap pemurnian.
Khusus metanol, dihindari penggunaannya karena sifatnya yang toksik akut dan
kronik. Namun demikian, jika dalam uji ada sisa pelarut dalam ekstrak
menunjukkan negatif, maka metanol pelarut yang lebih baik dari etanol (Depkes
RI, 2000).
Sampai saat ini berlaku aturan bahwa pelarut yang diperbolehkan adalah
air dan alkohol (etanol), serta campurannya. Jenis pelarut lain seperti metanol
(alkohol turunannya), heksana (hidrokarbon alifatik), toluen (hidrokarbon
aromatik), kloroform (dan segolongannya), dan aseton umummya digunakan
sebagai pelarut utuk tahap separasi dan tahap pemurnian (fraksinasi). Khusus
metanol dihindari penggunaannya karena sifatnya yang toksik akut dan kronik,
namun demikian jika dalam uji ada sisa pelarut dalam ekstrak menunjukkan
negatif, maka metanol sebenarnya pelarut yang lebih baik dari etanol (Depkes RI,
2000).
 26

BAB III
METODE PENELITIAN

A. Fokus Penelitian

Fokus penelitian ini diantaranya adalah sebagai berikut :

1. Menghitung rendemen ekstrak cikal tulang.
2. Mengidentifikasi golongan metabolit sekunder dalam cikal tulang yang
diperoleh di daerah Kalimantan Timur.
3. Menguji bioaktivitas ekstrak cikal tulang terhadap Artemia salina Leach
dalam berbagai fraksi ekstrak.

B. Bahan yang Diteliti

Bahan yang diteliti adalah cikal tulang. Tumbuhan cikal tulang yang
digunakan diperoleh dari Desa Sumberrejo, Sambutan, Kalimantan Timur.
Sampel yang akan diteliti merupakan sampel kering sehingga pengeringan
diupayakan hingga memperoleh kadar air yang sangat minimal.

C. Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian dilakukan pada bulan September 2018 di Laboratorium Kimia

Jurusan Analis Kesehatan, Poltekkes Kemenkes Kaltim.

D. Variabel dan Definisi Operasional

1. Variabel Penelitian

Variabel dalam penelitian ini adalah:

a. Rendemen ekstrak cikal tulang.
b. Golongan metabolit sekunder yang terkandung dalam cikal tulang.
c. Variasi konsentrasi ekstrak cikal tulang sebagai variabel bebas pada
penelitian ini dengan parameter konsentrasi ppm (part per million).
 27

d. Bioaktivitas ekstrak cikal tulang variabel terikat dengan parameter nilai LC 50

dari ekstrak terhadap kematian Artemia salina Leach.

2. Definisi Operasional

Definisi operasional penelitian ini adalah:

a. Golongan metabolit sekunder cikal tulang adalah senyawa mikromolekul
alami yang terkandung dalam cikal tulang.
b. Rendemen ekstrak cikal tulang adalah jumlah ekstrak yang didapatkan yang
ditinjau dari sampel basah, sampel kering dan sampel yang difraksinasi
dengan parameter dalam persen.
c. Variasi konsentrasi ekstrak cikal tulang adalah ragam konsentrasi yang
digunakan untuk pengujian.
d. Bioaktivitas adalah kemampuan suatu zat atau senyawa aktif dalam suatu
pengujian tertentu.
e. LC50 adalah suatu nilai yang menunjukan konsentrasi zat toksik yang dapat
mengakibatkan kematian 50% hewan uji.
f. Kematian larva udang adalah kematian larva yang disebabkan oleh aktivitas
senyawa uji.

D. Peralatan dan Bahan Penelitian

1. Peralatan Penelitian

Peralatan yang digunakan di dalam penelitian ini adalah seperangkat alat

maserasi digunakan untuk mengekstraksi sampel, rotary evaporator digunakan
untuk memekatkan ekstrak cair, desikator untuk menyimpan ekstrak, water batch
untuk menguapkan ekstrak, corong pisah untuk proses fraksinasi, timbangan
digital digunakan untuk penimbangan sampel, seperangkat alat pipet yaitu mikro
pipet untuk mengambil cairan dengan satuan volume µL, pipet tetes digunakan
untuk mengambil larva dan mengambil cairan, pipet volume untuk mengambil
cairan atau larutan secara kuantitatif, erlenmeyer sebagai wadah larutan atau
sebagai wadah pencampuran larutan, gelas ukur untuk mengukur volume cairan
 28

tertentu, keranjang sebagai wadah alat penelitian, toples sebagai wadah penetasan
telur, aerator digunakan untuk memenuhi kebutuhan oksigen dalam wadah
penetasan, seperangkat alat penerangan sebagai sumber cahaya yang dapat
membantu proses penetasan, statif sebagai tempat menggantung lampu selama
proses penetasan, selang plastik sebagai alat untuk mengalirkan udara dari aerator
ke wadah penetasan, vial sebagai wadah sampel dan hewan uji, water bath
sebagai pemanas untuk menguapkan ekstrak, botol selai untuk menampung hasil
ekstrak yang akan diuapkan.

2. Bahan Penelitian

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah metanol, n-butanol, n-

heksan dan etil asetat sebagai pelarut dalam ekstraksi sampel, aquades sebagai
pelarut dan pengencer ekstrak, dimetil sulfoksida untuk membantu melarutkan
ekstrak, aluminium voil untuk menutup wadah atau hasil percobaan, pereaksi
Dragendroff (bismut nitrat dan merkuri klorida dalam asam nitrat), pereaksi
Meyer (raksa klorida dan kalium iodida dalam aquades), asam sulfat pekat, asam
asetat, kloroform, ferri klorida, kalium heksasianoferat (III), metanol, pita
magnesium, asam klorida pekat, natrium klorida, natrium hidroksida dan gelatin
merupakan pereaksi yang digunakan untuk mengidentifikasi metabolit sekunder,
Artemia salina Leach berfungsi sebagai hewan uji, aquades yang berfungsi
sebagai pembanding dan untuk melarutkan ekstrak, air laut untuk media penetasan
dan tempat hidup bioindikator uji, dan ragi digunakan untuk sumber makanan
bioindikator uji.

E. Rancangan Penelitian

Rancangan penelitian perhitungan rendemen, identifikasi metabolit

sekunder dan uji bioaktivitas cikal tulang. Identifikasi golongan metabolit
sekunder dilakukan secara deskriptif sedangkan uji bioaktivitas ditransformasikan
dari data jumlah mati dan hidup larva udang Artemia salina Leach menjadi nilai
LC50.
 29

Tabel 4.1. Rancangan Perhitungan Rendemen

Berat Rendemen Rendemen Rendemen
No Ekstrak Ekstrak I II III
(Gram) (%) (%) (%)
1 Ekstrak Kasar
2 Fraksi n-heksana
3 Fraksi Etil asetat
4 Fraksi n-butanol
Keterangan:
Rendemen 1: rendemen ditinjau dari sampel basah yang diperoleh
Rendemen II: rendemen ditinjau dari sampel kering yang diperoleh
Rendemen III: rendemen ditinjau dari ekstrak yang difraksinasi

Tabel 4.2 Rancangan Identifikasi Metabolit Sekunder

Ekstrak/Fraksi
Golongan Metabolit n- Etil n- Air
No Metanol
Sekunder heksana asetat butanol (+) / (-)
(+) / (-)
(+) / (-) (+) / (-) (+) / (-)
1 Alkaloid
2 Flavonoid
3 Karatenoid
4 Saponin
5 Senyawa Fenol
Steroid dan
6
Triterpenoid
7 Tanin
Keterangan : (+) = jika terdeteksi ada golongan metabolit sekunder
(-) = jika tidak terdeteksi ada metabolit sekunder

Tabel 4.3 Rancangan Uji Bioaktivitas Cikal tulang

Konsentrasi ekstrak Kontrol
Replikasi
K1 K2 K3 K4 K5 C
R1 K1R1MT K2R1MT K3R1MT K4R1MT K5R1MT CR1MT
R2 K1R2MT K2R2MT K3R2MT K4R2MT K5R2MT CR2MT
R3 K1R3MT K2R3MT K3R3MT K4R3MT K5R3MT CR3MT
R4 K1R4MT K2R4MT K3R4MT K4R4MT K5R4MT CR4MT
R5 K1R5MT K2R5MT K3R5MT K4R5MT K5R5MT CR5MT
Keterangan:
K1R1MT = Perlakuan konsentrasi seri 1 ekstrak cikal tulang pada pengulangan 1
 30

F. Teknik Pengumpulan Data

1. Data dan Sumber Data

Data diperoleh melalui ekperimen yaitu jumlah rendemen ekstrak,

kandungan metabolit sekunder (golongan alkaloid, flavonoid, karotenoid, saponin,
senyawa fenol, steroid dan triterpenoid, dan tanin) dan pengujian ekstrak terhadap
kematian larva udang. Sumber data yakni rendemen ekstrak, metabolit sekunder
(golongan alkaloid, flavonoid, karotenoid, saponin, senyawa fenol, steroid dan
triterpenoid, dan tanin) yang diperoleh dengan skrining fitokimia sederhana dan
dilanjutkan dengan pengujian bioaktivitas ekstrak cikal tulang terhadap larva
udang Artemia salina Leach.

2. Pelaksanaan Penelitian

a. Penyiapan sampel

Sampel segar berupa cikal tulang yang bersih, bebas dari kotoran,
kemudian dibersihkan dan dikeringkan dengan diangin-anginkan pada udara
terbuka. Setelah itu dipotong-potong kecil dengan menggunakan gunting.

b. Ekstraksi dengan metode maserasi

Sampel dimasukkan ke dalam wadah dan diberikan cairan penyari berupa

metanol. Sampel direndam beberapa hari sampai maksimal proses ekstraksi
komponen senyawa didalamnya, dimana parameter yang digunakan adalah sampai
larutan metanol yang dihasilkan hampir bening atau bening sehingga didapatkan
ekstrak metanol. Sampel disaring sehingga didapatkan ekstrak metanol cikal
tulang, dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator pada suhu 30-40º C
dengan tekanan rendah sehingga proses penguapan cairan penyari menjadi cepat
sehingga didapatkan ekstrak kental. Setelah itu diuapkan dengan cara diangin-
anginkan untuk mendapatkan ekstrak kering. Ekstrak kemudian disimpan dalam
wadah tertutup rapat dan terhindar dari cahaya.

Tumbuhan Cikal tulang

 31

- dibersihkan
- dikeringkan

Cikal tulang
- dipotong kecil-kecil
- dimaserasi dengan
pelarut metanol

Residu Larutan Ekstrak

diuapkan dengan
rotary evaporator

Ekstrak Kental

diuapkan

Ekstrak Kering Cikal

tulang

Gambar 4.1 Bagan Prosedur Kerja Ekstraksi Cikal tulang

3. Fraksinasi

Proses fraksinasi dilakukan secara bertingkat dengan metode fraksinasi

cair-cair. Fraksinasi ini akan dibuat fraksi n-heksan, n-butanol dan etil asetat.
Ekstrak etanol ditimbang sebanyak 5 gram kemudian dilarutkan dengan aquadest
sebanyak 50 mL. Kemudian ditambahkan pelarut n-heksan sebanyak 50 mL dan
dilakukan penggojokan di dalam corong pisah. Setelah beberapa menit akan
terbentuk 2 lapisan. Lapisan bawah diambil untuk dilanjutkkan fraksinasi
selanjutnya. Dalam setiap pelarut organik, dilakukan beberapa kali pengulangan,
hingga lapisan atas terlihat bening. Lapisan atas hasil fraksinasi dikeringkan/
diuapkan sehingga diperoleh ekstrak kering/ekstrak kental.
 32

Ekstrak Kering Metanol Uji Bioaktivitas

+ air dan n-heksan di ekstraksi

dalam corong pisah

Fraksi n-heksana Fraksi air

+ etil asetat di ekstraksi

Uji Bioaktivitas dalam corong pisah

Fraksi etil asetat Fraksi air

+ n-butanol di ekstraksi
Uji Bioaktivitas dalam corong pisah

Fraksi n-butanol Fraksi air

Uji Bioaktivitas Uji Bioaktivitas

Gambar 4.2 Bagan Prosedur Kerja Fraksinasi

4. Persentase Rendemen

Persentase rendemen diperoleh dengan cara membagi berat akhir ekstrak

cikal tulang yang diperoleh dari proses ekstraksi dan fraksinasi dengan berat awal.
Bobot hasil proses
% Rendemen= ×100 %
Bobot awal
 33

Sampel Segar ditimbang

( X g)

dikeringkan

Sampel Kering ditimbang

( X g)

diekstraksi

Ekstrak ditimbang
( X g)
difraksinasi

. Fraksi
ditimbang
( X g)

Gambar 4.3 Skema penentuan persentase rendemen cikal tulang.

5. Uji Bebas Metanol

Pengujian bebas metanol dilakukan untuk memastikan ada tidaknya

kandungan pelarut metanol pada ekstrak cikal tulang dengan menggunakan uji
iodoform yaitu 10 mg ekstrak dipanaskan dengan 2 mL natrium hidroksida 1 N
dan beberapa tetes iodium (1 g iod, 20 1 g kalium iodida, 100 ml air), terbentuk
endapan kuning dan bau iodoform tercium jika masih terdapat metanol.

6. Uji Metabolit Sekunder

a) Alkaloid
Disiapkan 2 tabung reaksi, dimasukkan ekstrak kemudian masing-masing
ditambahkan 1,5 mL asam klorida 2%. Tabung reaksi I ditambahkan 3 tetes
pereaksi Dragendroff, hasil positif ditandai ada tidaknya endapan jingga coklat.
Tabung reaksi II ditambahkan 3 tetes pereaksi Meyer dan hasil positif ditandai ada
tidaknya endapan putih kekuningan.
b) Flavonoid
 34

Ekstrak kering dilarutkan dalam 1-2 mL metanol, ditambahkan pita

magnesium dan 5 tetes asam klorida kemudian diamati perubahan yang terjadi.
Hasil positif bila berwarna merah atau jingga.
c) Karatenoid
Ekstrak ditambahkan asam sulfat pekat kemudian diamati perubahan yang
terjadi, hasil positif akan terbentuk warna biru/hijau kebiruan.
d) Saponin
Ekstrak diencerkan, ditambahkan 10 tetes asam klorida kemudian dikocok.
Hasil positif ditunjukkan dengan terbentuknya busa yang stabil.
e) Senyawa Fenol
Ekstrak kering ditambahkan kalium heksasianoferat (III) dan ferri klorida,
diamati perubahan yang terjadi. Hasil positif ditandai dengan dihasilkannya warna
biru sampai hitam.
f) Steroid dan Triterpenoid
Ekstrak ditambahkan 0,5 mL asam asetat, 0,5 mL kloroform, dan 1 mL
asam sulfat pekat kemudian diamati perubahan yang terjadi, hasil positif akan
terbentuk cincin merah coklat/ungu di bagian atas hijau/ungu.
g) Tanin
Ekstrak sebanyak 2 mL ditambahkan 5 tetes gelatin, hasil positif akan
menghasilkan endapan berwarna putih.

7. Persiapan Hewan Uji

Telur udang (Artemia salina Leach) sebanyak 0,25 g direndam dalam

wadah penetasan yang berisi air laut 500 mL pada kondisi pH 7-8 di bawah
cahaya lampu pijar 40 watt pada suhu kamar. Telur menetas selama 24 jam
menjadi larva. Setelah larva berumur 48 jam larva udang siap digunakan.

Telur udang Artemia

Salina Leach
Direndam dalam air laut 500 mL
dibawah cahaya lampu pijar 40 watt
pada suhu kamar,Telur akan menetas
selama 24 jam
 35

Larva

Ditunggu selama 48 jam

Larva siap uji

Gambar 4.4 Skema Persiapan Bioindikator Larva artemia salina.L

8. Pembuatan air Laut Buatan

Magnesium sulfat 7,74 g, kalium klorida 0,97 g, dan natrium karbonat 2 g

dilarutkan dalam air panas pada wadah terpisah. Kemudian dicampurkan dengan
31,08 g garam dapur (natrium klorida), 6,09 magnesium klorida, dan 1,53 g
kalsium klorida kemudian dilarutkan dalam 1 L aquades.

9. Penentuan Seri Konsentrasi

Pada penentuan seri konsentrasi dimana untuk dimulai dari 0 – 1000 ppm.
Yang di mana 0 ppm sebagai kontrol atau pembanding. Penjabaran variasi seri
konsentrasinya yaitu dimulai dari 0 ppm, 250 ppm, 500 ppm, 750 ppm dan 1000
ppm. Hal ini dilakukan pada uji pendahuluan, sehingga diketahui batas
konsentrasi yang efektif membunuh Artemia salina Leach.

10. Pengujian Bioaktivitas

Larva udang Artemia salina L. sebanyak 10 ekor dimasukkan kedalam

masing-masing vial yang berisi ekstrak. Dibuat stok ragi sebanyak 3 mg dalam
5 mL aquades sebagai sumber makanan bioindikator uji. Ke dalam vial-vial
tersebut dimasukkan 1 tetes ragi sebanyak 3 mg/5 mL air laut sebagai pakan. Vial-
vial uji kemudian disimpan di tempat yang cukup mendapat sinar lampu.
 36

Pengamatan dilakukan selama 24 jam dan dihitung jumlah larva udang Artemia
salina Leach yang mati. Jumlah larva udang Artemia salina Leach yang mati
dicatat dan dihitung LC50 dengan menggunakan analisis Reed and Muench. Uji
bioaktivitas dapat ditunjukkan dalam Gambar 4.8 (Mc laughlin, 1998).

10 Larva Udang

1 tetes ragi

A ppm B ppm C ppm D ppm E ppm Kontrol

5 Replikasi 5 Replikasi 5 Replikasi 5 Replikasi 5 Replikasi 5 Replikasi

Larva mati

LC50

Gambar 4.5 Skema Kerja Uji Bioaktivitas

G. Teknik Analisa Data

Pengambilan data dilaksanakan setelah mengerjakan uji bioaktivitas

terhadap larva Artemia salina Leach. Data akhir uji bioaktivitas adalah nilai LC50.
Untuk keperluan perhitungan disajikan tabel pengamatan.
Perhitungan Mortalitas Artemia salina Leach setelah perlakuan dengan
berbagai konsentrasi ekstrak dan fraksi cikal tulang.
 37

Tabel 4.4 Dari perhitungan tersebut, kemudian data diolah dengan

menggunakan rumus Reed and Muench :
Rasio mati : Mortalitas
Jumlah Terakumulasi
Log total (%)
Konsentrasi
Konsentrasi Hidu Terakumulasi
Mati Mati (x) Hidup (y) Rasio x 100
p x:(x+y)
A ppm Log A F K F k+l+m+n+o

B ppm Log B G L f+g l+m+n+o

C ppm Log C H M f+g+h m+n+o

D ppm Log D I N f+g+h+i n+o

E ppm Log E J O f+g+h+i+j o

Persamaan untuk mendapatkan nilai LC50

50 %−a k
h= ; i=log ; g=h x i ; y=g+ log s ; LC 50=antilog y
b−a s
Untuk mengetahui tingkat kesalahan dapat digunakan persamaan
SE LC 50=√ 0,79 h R/n

Keterangan:
h = jarak proporsi
i = logaritma pertambahan konsentrasi
a = presentase kematian lebih kecil dari 50%
b = presentase kematian lebih besar dari 50%
k = konsentrasi yang lebih besar dari 50% kematian
s = konsentrasi yang lebih kecil dari 50% kematian
g = hasil kali jarak proporsi dengan logaritma pertambahan konsentrasi
y = persamaan LC50
SE LC50 = standar eror LC50
n = jumlah bioindikator uji
R = simpangan kuartil
 38

H. Hasil Penelitian yang Diharapkan

Hasil-hasil penelitian yang diharapkan adalah

a. Teridentifikasinya jumlah rendemen ekstrak cikal tulang.
b. Teridentifikasinya senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada cikal tulang
yang diperoleh di daerah Kalimantan Timur.
c. Bioaktivitas ekstrak cikal tulang terhadap larva udang Artemia salina Leach.
 39

BAB V
HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Rendemen Ekstrak Cikal Tulang

Penelitian ini dilakukan dengan penyiapan simplisia dan ekstraksi cikal

tulang. Ekstrak cikal tulang adalah ekstrak metanol hasil ekstraksi Cikal tulang
dengan metode maserasi dengan menggunakan pelarut metanol, yang dibuat
beberapa fraksi yaitu n-heksan, etil asetat dan n-butanol. Dari jumlah yang
diperoleh dari masing-masing ekstrak dan fraksi cikal tulang selanjutnya dapat
diketahui rendemennya.
Rendemen adalah persentase hasil yang didapatkan setelah proses
dilakukan dengan membandingkan bobot akhir dengan bobot awal. Pada
penelitian ini, analisis rendemen dibagi menjadi dua yaitu rendemen ekstrak dan
rendemen fraksi. Rendemen ekstrak dibagi menjadi dua yaitu rendemen ekstrak
terhadap sampel kering dan sampel basah sedangkan rendemen fraksi ditinjau dari
ekstrak yang diperoleh dibagi menjadi 3 yaitu rendemen n-heksan, etil asetat, dan
n-butanol. Analisis rendemen ekstrak bertujuan untuk mengetahui persentase
ekstrak yang dihasilkan dari sampel segar dan sampel kering dengan metode
ekstraksi. Analisis rendemen fraksi bertujuan untuk mengetahui persentase fraksi
yang dihasilkan dari ekstrak dengan metode fraksinasi.
Ekstrak metanol yang diperoleh setelah pemekatan adalah 39,6 gram. Dari
sini dapat diketahui jumlah rendemen yang diperoleh sebanyak 9,9 % dari sampel
kering dan 6,09 % dari sampel basah. Rendamen suatu ekstrak menunjukkan
potensi untuk dijadikan sampel atau bahan obat, sehingga semakin banyak
rendemen yang diperoleh, berarti ekstrak yang diperoleh dari proses ekstraksi juga
semakin banyak. Sebaliknya samakin sedikit rendemen yang diperoleh dari proses
ekstraksi, maka ekstrak yang diperoleh juga semakin sedikit. Rendemen yang
diperoleh ini menunjukkan bahwa ekstrak cikal tulang cukup digunakan sebagai
sampel penelitian. Jumlah rendemen ekstrak metanol cikal tulang terhadap sampel
segar dan sampel kering yang diperoleh dapat dilihat pada Tabel 5.1 berikut ini :
 40

Tabel 5.1. Rendemen Ekstrak Cikal tulang

Persentasi Rendemen
Persentasi Rendemen
Jumlah Terhadap Sampel
Ekstrak Terhadap Sampel
Ekstrak (gram) Basah (650 gram)
Kering (400 gram) (%)
(%)
Metanol
39,6 6,09 9,9
(ekstrak kasar)

Untuk mengetahui komponen suatu campuran berdasarkan perbedaan

kelarutan suatu senyawa maka dilakukan proses fraksinasi. Tujuan fraksinasi ini
adalah mengetahui kandungan metabolit sekunder dari setiap fraksi ekstrak
berdasarkan sifat kepolarannya dan melihat perbandingan bioaktivitas masing-
masing fraksi ekstrak. Sebanyak 8 gram ekstrak metanol difraksinasi dengan
metode fraksinasi padat-cair, karena ekstrak tidak larut dengan air sehingga tidak
dapat digunakan fraksinasi cair-cair. Fraksinasi dilakukan dengan pelarut yang
berbeda-beda dari polaritas terendah hingga polaritas tertinggi, karena jika yang
paling polar pertama kali digunakan maka senyawa polar dan non polar akan
tertarik semua dan pemisahannya tidak sempurna, sehingga urutan pelarut
fraksinasi yaitu n-heksan, etil asetat dan n-butanol.
Fraksi n-heksan didapatkan sebanyak 2,2 gram, dengan rendemen fraksi n-
heksan terhadap sampel basah 0,34 % ; rendemen fraksi n-heksan terhadap sampel
kering 0,55 % ; dan rendemen fraksi n-heksan terhadap ekstrak metanol 27,50 %.
Kemudian diperoleh fraksi etil asetat sebanyak 1,6 gram, dengan rendemen fraksi
etil asetat terhadap sampel basah 0,25 % ; rendemen fraksi etil asetat terhadap
sampel kering 0,4 % ; dan rendemen fraksi etil asetat terhadap ekstrak metanol 20
%. Selanjutnya diperoleh fraksi n-butanol sebanyak 0,7 gram, dengan rendemen
fraksi n-butanol terhadap sampel basah 0,10% ; rendemen fraksi n-butanol
terhadap sampel kering 0,17 % ; dan rendemen fraksi n-butanol terhadap ekstrak
metanol 8,75 %. Jumlah rendemen masing-masing fraksi yang diperoleh dapat
dilihat pada Tabel 5.2 berikut ini :
 41

Tabel 5.2. Rendemen Fraksi Cikal tulang

Persentasi Persentasi Persentasi
Jumlah Rendemen Rendemen Rendemen
Sampel Sampel Terhadap Terhadap Terhadap
(gram) Sampel Basah Sampel Kering Ekstrak Metanol
(650 gram) (%) (400 gram) (%) (8 gram) (%)
Fraksi n-
2,2 0,34 0,55 27,50
heksan
Fraksi
etil 1,6 0,25 0,40 20
asetat
Fraksi n-
0,7 0,10 0,17 8,75
butanol

Rendemen dari Tabel 5.2. di atas, dapat diketahui bahwa hasil rendemen
fraksinasi ekstrak cikal tulang didapatkan nilai rendamen yang tertinggi hingga
terkecil secara berturut-turut adalah fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan fraksi n-
butanol. Nilai rendemen tertinggi pertama adalah fraksi n-heksan, hal ini
menunjukkan bahwa senyawa yang tersari dengan pelarut n-heksan diduga
senyawa senyawa bersifat non polar yang sesuai dengan sifat pelarut n-heksan.
Kemudian rendamen tertinggi kedua adalah fraksi etil asetat, hal ini menunjukkan
bahwa senyawa yang tersari dengan pelarut etil asetat diduga senyawa senyawa
bersifat semi polar yang sesuai dengan sifat pelarut etil asetat. Selanjutnya
rendemen yang terkecil terdapat pada fraksi n-butanol, hal ini menunjukkan
bahwa senyawa yang terlarut dalam pelarut organik n-butanol lebih sedikit
dibandingkan yang terlarut dalam pelarut n-heksan dan etil asetat.

B. Kandungan Metabolit Sekunder Cikal Tulang

Identifikasi kandungan metabolit sekunder pada penelitian ini dilakukan

pada semua fraksi ekstrak yaitu ekstrak metanol (eksrak kasar), n-heksan, etil
asetat dan n-butanol. Metabolit sekunder merupakan suatu senyawa yang hanya
ditemukan secara terbatas pada kelompok tertentu. Metabolit sekunder juga
merupakan hasil metabolisme yang sering berperan dalam kelangsungan hidup
suatu tumbuhan, misalnya sebagai zat pertahanan dan zat penarik bagi lawan
 42

jenisnya. Kandungan metabolit sekunder tumbuhan yang diuji yaitu alkaloid,

flavonoid, senyawa fenol, steroid dan terpenoid serta saponin.
Dari hasil identifikasi golongan metabolit sekunder terhadap ekstrak
metanol dan fraksi cikal tulang, diperoleh hasil positif berupa golongan senyawa
alkaloid dan fenol sedangkan untuk flavonoid, steroid dan terpenoid serta saponin
hasilnya negatif. Hasil uji metabolit sekunder dapat dilihat pada Tabel 5.3. berikut
ini :
Tabel 5.3. Hasil Identifikasi Metabolit Sekunder Cikal tulang
Metabolit Sekunder
No Ekstrak Senyawa Steroid dan
Alkaloid Flavonoid Saponin
Fenol Terpenoid
1 Ekstrak etanol (+) (-) (+) (-) (-)
2 n-heksan (+) (-) (-) (-) (-)
3 Etil asetat (+) (-) (+) (-) (-)
4 n-butanol (+) (-) (+) (-) (-)
Keterangan :
(+) = Terdeteksi metabolit sekunder
(-) = Tidak terdeteksi metabolit sekunder

Hasil uji metabolit sekunder dari Tabel 5.3 menunjukkan bahwa hanya
golongan senyawa alkaloid dan senyawa fenol yang terdeteksi pada ekstrak Cikal
tulang. Golongan senyawa alkaloid terdeteksi pada ekstrak metanol dan semua
fraksi. Golongan senyawa fenol terdeteksi pada fraksi n-heksan sedangkan pada
fraksi ekstrak metanol, fraksi etil asetat dan fraksi n-butanol tidak terdeteksi.
Untuk golongan senyawa lainnya yaitu flavonoid, steroid dan terpenoid serta
saponin tidak terdeteksi baik pada ekstrak metanol maupun fraksi-fraksi, hal
tersebut menunjukkan bahwa golongan senyawa kimia yang dominan terdeteksi
pada ekstrak cikal tulang hanya alkaloid dan senyawa fenol. Senyawa alkaloid
yang terkandung bersifat polar dan nonpolar, sedangkan senyawa fenol bersifat
polar dan semi polar.
 43

C. Bioaktivitas terhadap Artemia salina Leach.

Bioaktivitas adalah kemampuan suatu senyawa dalam mempengaruhi

keadaan atau maupun biologi makhluk hidup. Pada penelitian ini bioaktivitas
Cikal tulang yaitu kemampuan dari ekstrak Cikal tulang dalam memberikan
aktivitas biologi terhadap larva udang udang Artemia salina Leach yang dilihat
dari jumlah kematian larva udang tersebut.
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) merupakan salah satu metode yang
digunakan untuk penapisan awal senyawa-senyawa yang diduga berkhasiat
sebagai antikanker. Metode ini menggunakan larva udang Artemia salina Leach,
diketahui berdasarkan jumlah kematian larva akibat pemberian ekstrak yang
mengandung senyawa antikanker. Metode ini mempunyai beberapa keuntungan
antara lain, waktu pelaksanaan cepat, biaya relatif murah, pengerjaan sederhana,
tidak memerlukan teknik aseptik, tidak memerlukan peralatan khusus,
menggunakan sampel dalam jumlah relatif sedikit dan tidak memerlukan serum
hewan seperti pada uji sitotoksik.
Aktivitas sitotoksik ditunjukkan pada nilai LC50, nilai tersebut dapat
digunakan sebagai parameter karena dengan adanya kemampuan suatu sampel
dapat membunuh 50% hewan uji maka dapat dicari manfaat dan aktivitas dari
sampel tersebut. LC50 merupakan konsentrasi ekstrak yang menyebabkan
terjadinya kematian pada 50% Artemia salina Leach sebagai bioindikator uji.
Pengujian bioaktivitas cikal tulang pada penelitian ini menggunakan larva
udang Artemia salina Leach sebanyak 10 ekor dalam 1 botol vial dengan 5 mL air
laut dengan 5 konsentrasi uji untuk setiap konsentrasi uji dibuat replikasi 5 dengan
tujuan untuk mendapatkan data yang baik dan akurat. Analisis data untuk
mengetahui LC50 sebagai parameter bioaktivitas menggunakan analisis Reed and
Muench.

1. Uji Bioaktivitas Ekstrak Metanol Cikal tulang

Ekstrak metanol merupakan ekstrak yang diperoleh melalui proses

ekstraksi dengan metode maserasi yang setelah itu dipekatkan dengan
menggunakan rotary evaporator dan dikeringkan dengan waterbath kemudian
 44

dimasukkan ke dalam desikator untuk menyerap udara agar tidak berjamur.

Ekstrak kasar yang diperoleh dibuat larutan stok 1000 ppm dan dibuat 5 variasi
konsentrasi ekstrak dengan 5 replikasi. Hewan uji pada tiap vial sebanyak 10 ekor
dan data diperoleh setelah diinkubasi selama 1 x 24 jam. Data ekstrak etanol dapat
dilihat pada Tabel 5.4 berikut ini:

Tabel 5.4. Hasil Uji Ekstrak Etanol Terhadap Larva Udang Artemia salina Leach
Mortalitas
Rasio
Jumlah Terakumulasi (%)
Konsentrasi Log mati : total
Konsentrasi
Mati Hidup Terakumulasi Rasio x
Mati Hidup
(x) (y) x : (x+y) 100 %
500 ppm 2,69 9 31 9 96 0,0857 8,57
600 ppm 2,77 14 26 23 65 0,2614 26,14
700 ppm 2,85 19 21 42 39 0,5185 51,85
800 ppm 2,90 27 13 69 18 0,7931 79,31
900 ppm 2,95 35 5 104 5 0,9531 95,41

Hasil dari Tabel 5.4 menunjukkan hasil perhitungan uji ekstrak metanol,
dimana pada konsentrasi rendah 500 ppm sudah memberikan mortalitas atau
kematian 8,57 % dan pada konsentrasi tinggi 900 ppm tingkat jumlah mortalitas
bioindikator uji semakin tinggi yaitu 95,41 %. Hal ini menunjukkan bahwa
semakin tinggi ekstrak yang diberikan, maka semakin tinggi jumlah mortalitas
atau kematian larva udang Artemia salina Leach yang disebabkan pemberian
ekstrak etanol.
Berdasarkan perhitungan dengan menggunakan analisis Reed and Muench,
ekstrak etanol cikal tulang menunjukkan nilai LC50 sebesar 676,08 ppm dan
standard eror antara 645,65 ppm – 707,95 ppm. Kegunaan standard eror ini untuk
penafsiran ukuran kesalahan dari nilai LC50 yang didapatkan dengan melihat batas
atas dan batas bawah yang merupakan batas kepercayaan nilai LC 50 ekstrak etanol
Dimana nilai LC50 yang didapatkan masih masuk dalam range batas kepercayaan
ekstrak etanol. Dengan demikian ekstrak etanol cikal tulang pada penelitian ini
memiliki bioaktivitas menurut metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).
Aktivitas ini kemungkinan di karenakan terdapatnya golongan senyawa alkaloid
dan fenol yang aktif dan memberikan efek terhadap larva udang Artemia salina
 45

Leach. Gambar 5.4 akumulasi hewan uji yang mati dan akumulasi hewan uji yang
hidup dapat dilihat berikut ini :

120
Akumulasi Hewan Uji Mati dan Hidup

100

80

60 Akumulasi hewan uji yang

mati
40 Akumulasi hewan uji yang
hidup
20

0
2,69 2,77 2,85 2,9 2,95
Log Konsentrasi

Gambar 5.4. Grafik LC50 Ekstrak Etanol Cikal tulang

Terlihat pada Gambar 5.4 peningkatan konsentrasi ekstrak metanol Cikal

tulang dalam kemampuan membunuh hewan uji larva udang, yaitu dengan
bertambahnya larva udang yang mati terlihat dari hasil uji Reed and Muench
dengan nilai LC50 676,08 ppm. Dapat terlihat pada grafik titik pertemuan antara
akumulasi kematian dengan akumulasi yang hidup adalah estimasi nilai LC50.
Hasil log dari LC50 676,08 ppm adalah 2,83. Sumbu ini berada pada grafik antara
log konsentrasi 2,77 – 2,85 seperti yang terlihat pada grafik. Hasil perhitungan
batas kepercayaan angka LC50 berada antara range 2,81 – 2,85 dengan ukuran
kesalahan sebesar 0,01. Berdasarkan nilai LC50 ekstrak etanol Cikal tulang
menunjukkan bahwa ekstrak etanol Cikal tulang memiliki aktivitas sebagai
pestisida.

2. Uji Bioaktivitas Fraksi n-Heksan Cikal tulang

Fraksi n-heksan merupakan fraksi n-heksan yang diperoleh melalui proses

fraksinasi padat-cair kemudian dipekatkan dengan waterbath kemudian
dimasukkan ke dalam desikator untuk menyerap udara agar tidak berjamur. Fraksi
 46

n-heksan yang diperoleh dibuat larutan stok 1000 ppm dan dibuat 5 variasi
konsentrasi fraksi dengan 5 replikasi. Hewan uji pada tiap vial sebanyak 10 ekor
dan data diperoleh setelah diinkubasi selama 1 x 24 jam. Data fraksi n-heksan
dapat dilihat pada Tabel 5.5 berikut ini :
Tabel 5.5. Hasil Uji Fraksi n-Heksan Terhadap Larva Udang Artemia salina
Leach
Mortalitas
Rasio
Jumlah Terakumulasi (%)
Konsentrasi Log mati : total
Konsentrasi
Mati Hidup Terakumulasi Rasio x
Mati Hidup
(x) (y) x : (x+y) 100 %
100 ppm 2 7 33 7 94 0,0693 6,93
200 ppm 2,30 15 25 22 61 0,2650 26,50
300 ppm 2,47 21 19 43 36 0,5443 54,43
400 ppm 2,60 27 13 70 17 0,8045 80,45
500 ppm 2,69 36 4 106 4 0,9636 96,36

Hasil dari Tabel 5.5 menunjukkan hasil perhitungan uji fraksi n-heksan,
dimana pada konsentrasi rendah 100 ppm sudah memberikan mortalitas atau
kematian 6,93 % dan pada konsentrasi tinggi 500 ppm tingkat jumlah mortalitas
bioindikator uji semakin tinggi yaitu 96,36 %. Hal ini menunjukkan bahwa
semakin tinggi fraksi yang diberikan, maka semakin tinggi jumlah mortalitas atau
kematian larva udang Artemia salina Leach yang disebabkan pemberian fraksi n-
heksan.
Berdasarkan perhitungan dengan menggunakan analisis Reed and Muench,
ekstrak n-heksan Cikal tulang menunjukkan nilai LC50 sebesar 281,84 ppm dan
standard eror antara 245,47 ppm – 323,59 ppm. Kegunaan standard eror ini untuk
penafsiran ukuran kesalahan dari nilai LC50 yang didapatkan dengan melihat batas
atas dan batas bawah yang merupakan batas kepercayaan nilai LC50 fraksi n-
heksan. Dimana nilai LC50 yang didapatkan masih masuk dalam range batas
kepercayaan n-heksan. Dengan demikian fraksi n-heksan Cikal tulang pada
penelitian ini memiliki bioaktivitas menurut metode Brine Shrimp Lethality Test
(BSLT). Aktivitas ini kemungkinan di karenakan terdapatnya golongan senyawa
alkaloid yang aktif dan memberikan efek terhadap larva udang Artemia salina
 47

Leach. Gambar 5.5 akumulasi hewan uji yang mati dan akumulasi hewan uji yang
hidup dapat dilihat berikut ini :

120
Akumulasai Hewan Uji Mati dan Hidup

100

80

60 Akumulasi hewan uji yang

mati
40 Akumulasi hewan uji yang
hidup
20

0
2 2,3 2,47 2,6 2,69
Log Konsentrasi

Gambar 5.5. Grafik LC50 Fraksi n-Heksan Cikal tulang

Terlihat pada Gambar 5.5 peningkatan konsentrasi fraksi heksan Cikal

tulang dalam kemampuan membunuh hewan uji larva udang, yaitu dengan
bertambahnya larva udang yang mati. Ini terlihat dari hasil uji Reed and Muench
dengan nilai LC50 281,84 ppm. Dapat terlihat pada grafik titik pertemuan antara
akumulasi kematian dengan akumulasi yang hidup adalah estimasi nilai LC50.
Hasil log dari LC50 281,84 ppm adalah 2,45. Sumbu ini berada pada grafik antara
log konsentrasi 2,3 – 2,47 seperti yang terlihat pada grafik. Hasil perhitungan
batas kepercayaan angka LC50 berada antara range 2,39 – 2,51 dengan ukuran
kesalahan sebesar 0,01. Berdasarkan nilai LC50 fraksi n-heksan Cikal tulang
menunjukkan bahwa fraksi n-heksan Cikal tulang memiliki aktivitas sebagai
antimikroba.

3. Uji Bioaktivitas Fraksi Etil Asetat Cikal tulang

Fraksi etil asetat merupakan fraksi etil asetat yang diperoleh melalui proses
fraksinasi padat-cair setelah pemberian pelarut n-heksan yang bersifat sangat tidak
polar, dilanjutkan dengan etil asetat yang bersifat semi polar. Fraksi etil asetat
inilah yang didapat kemudian dipekatkan dengan waterbath kemudian
 48

dimasukkan ke dalam desikator untuk menyerap udara agar tidak berjamur. Fraksi
etil asetat yang diperoleh dibuat larutan stok 1000 ppm dan dibuat 5 variasi
konsentrasi fraksi dengan 5 replikasi. Hewan uji pada tiap vial sebanyak 10 ekor
dan data diperoleh setelah diinkubasi selama 1 x 24 jam. Data fraksi etil asetat
dapat dilihat pada Tabel 5.6 berikut ini :
Tabel 5.6. Hasil Uji Fraksi Etil Asetat Terhadap Larva udang Artemia salina
Leach
Mortalitas
Rasio
Jumlah Terakumulasi (%)
Konsentrasi Log mati : total
Konsentrasi
Mati Hidup Terakumulasi Rasio x
Mati Hidup
(x) (y) x : (x+y) 100 %
400 ppm 2,60 9 31 9 94 0,0873 8,73
500 ppm 2,69 14 26 23 63 0,2674 26,74
600 ppm 2,77 21 19 44 37 0,5432 54,32
700 ppm 2,84 27 13 71 18 0,7977 79,77
800 ppm 2,90 35 5 106 5 0,9549 95,49

Hasil dari Tabel 5.6 menunjukkan hasil perhitungan uji fraksi etil asetat,
dimana pada konsentrasi rendah 400 ppm sudah memberikan mortalitas atau
kematian 8,73 % dan pada konsentrasi tinggi 800 ppm tingkat jumlah mortalitas
bioindikator uji semakin tinggi yaitu 95,49 %. Hal ini menunjukkan bahwa
semakin tinggi ekstrak yang diberikan, maka semakin tinggi jumlah mortalitas
atau kematian larva udang Artemia salina Leach yang disebabkan pemberian
fraksi etil asetat.
Berdasarkan perhitungan dengan menggunakan analisis Reed and Muench,
ekstrak etil asetat Cikal tulang menunjukkan nilai LC 50 sebesar 575,44 ppm dan
standard eror antara 549,54 ppm – 602,56 ppm. Kegunaan standard eror ini untuk
penafsiran ukuran kesalahan dari nilai LC50 yang didapatkan dengan melihat batas
atas dan batas bawah yang merupakan batas kepercayaan nilai LC 50 fraksi etil
asetat. Dimana nilai LC50 yang didapatkan masih masuk dalam range batas
kepercayaan etil asetat. Dengan demikian fraksi etil asetat Cikal tulang pada
penelitian ini memiliki bioaktivitas menurut metode Brine Shrimp Lethality Test
(BSLT). Aktivitas ini kemungkinan di karenakan terdapatnya golongan senyawa
alkaloid dan fenol yang aktif dan memberikan efek terhadap larva udang Artemia
 49

salina Leach. Gambar 5.6 akumulasi hewan uji yang mati dan akumulasi hewan
uji yang hidup dapat dilihat berikut ini :

120
Akumulasi Hewan Uji Mati dan Hidup

100

80

60 Akumulasi hewan uji yang

mati
40 Akumulasi hewan uji yang
hidup
20

0
2,6 2,69 2,77 2,84 2,9
Log Konsentrasi

Gambar 5.6. Grafik LC50 Fraksi Etil Asetat Cikal tulang

Terlihat pada Gambar 5.6 peningkatan konsentrasi fraksi etil asetat Cikal
tulang dalam kemampuan membunuh hewan uji larva udang, yaitu dengan
bertambahnya larva udang yang mati. Ini terlihat dari hasil uji Reed and Muench
dengan nilai LC50 575,44 ppm. Dapat terlihat pada grafik titik pertemuan antara
akumulasi kematian dengan akumulasi yang hidup adalah estimasi nilai LC50.
Hasil log dari LC50 575,44 ppm adalah 2,76. Sumbu ini berada pada grafik antara
log konsentrasi 2,69 – 2,77 seperti yang terlihat pada grafik. Hasil perhitungan
batas kepercayaan angka LC50 berada antara range 2,74 – 2,78 dengan ukuran
kesalahan sebesar 0,01. Berdasarkan nilai LC50 fraksi etil asetat Cikal tulang
menunjukkan bahwa fraksi etil asetat Cikal tulang memiliki aktivitas sebagai
pestisida.

4. Uji Bioaktivitras Fraksi n-Butanol Cikal tulang

Fraksi n-butanol merupakan fraksi n-butanol yang diperoleh melalui

proses fraksinasi padat-cair setelah pemberian pelarut n-heksan yang bersifat
sangat tidak polar, dilanjutkan dengan etil asetat yang bersifat semi polar dan
 50

terakhir n-butanol yang bersifat polar. Fraksi n-butanol inilah yang didapat
kemudian dipekatkan dengan waterbath kemudian dimasukkan ke dalam
desikator untuk menyerap udara agar tidak berjamur. Fraksi n-butanol yang
diperoleh dibuat larutan stok 1000 ppm dan dibuat 5 variasi konsentrasi fraksi
dengan 5 replikasi. Hewan uji pada tiap vial sebanyak 10 ekor dan data diperoleh
setelah diinkubasi selama 1 x 24 jam. Data fraksi n-butanol dapat dilihat pada
Table 5.7 berikut ini :
Tabel 5.7. Hasil Uji Fraksi n-Butanol Terhadap Larva Udang Artemia salina
Leach
Mortalitas
Rasio
Jumlah Terakumulasi (%)
Konsentrasi Log mati : total
Konsentrasi
Mati Hidup Terakumulasi Rasio x
Mati Hidup
(x) (y) x : (x+y) 100 %
450 2,65 8 32 8 95 0,0777 7,77
550 2,75 15 25 23 63 0,2674 26,74
650 2,81 21 19 44 38 0,5365 53,65
750 2,87 27 13 71 19 0,7889 78,89
850 2,93 34 6 105 6 0,9459 94,59

Hasil dari Tabel 5.7 menunjukkan hasil perhitungan uji fraksi n-butanol,
dimana pada konsentrasi rendah 450 ppm sudah memberikan mortalitas atau
kematian 7,77 % dan pada konsentrasi tinggi 850 ppm tingkat jumlah mortalitas
bioindikator uji semakin tinggi yaitu 94,59 %. Hal ini menunjukkan bahwa
semakin tinggi ekstrak yang diberikan, maka semakin tinggi jumlah mortalitas
atau kematian larva udang Artemia salina Leach yang disebabkan pemberian
fraksi n-butanol.
Berdasarkan perhitungan dengan menggunakan analisis Reed and Muench,
ekstrak n-butanol Cikal tulang menunjukkan nilai LC50 sebesar 575,44 ppm dan
standard eror antara 549,54 ppm – 602,56 ppm. Kegunaan standard eror ini untuk
penafsiran ukuran kesalahan dari nilai LC50 yang didapatkan dengan melihat batas
atas dan batas bawah yang merupakan batas kepercayaan nilai LC50 fraksi n-
butanol. Dimana nilai LC50 yang didapatkan masih masuk dalam range batas
kepercayaan n-butanol. Dengan demikian fraksi n-butanol Cikal tulang pada
penelitian ini memiliki bioaktivitas menurut metode Brine Shrimp Lethality Test
 51

(BSLT). Aktivitas ini kemungkinan di karenakan terdapatnya golongan senyawa

fenol yang aktif dan memberikan efek terhadap larva udang Artemia salina Leach.
Gambar 5.7 akumulasi hewan uji yang mati dan akumulasi hewan uji yang hidup
dapat dilihat berikut ini :

120
Akumulasi Hewan Uji Hidup dan Mati

100

80

60 Akumulasi hewan uji yang

mati
40 Akumulasi hewan uji yang
hidup
20

0
2,65 2,75 2,81 2,87 2,93
Log Konsentrasi

Gambar 5.7. Grafik LC50 Fraksi n-Butanol Cikal tulang

Terlihat pada Gambar 5.7 peningkatan konsentrasi fraksi n-butanol Cikal

tulang dalam kemampuan membunuh hewan uji larva udang, yaitu dengan
bertambahnya larva udang yang mati. Ini terlihat dari hasil uji Reed and Muench
dengan nilai LC50 645,65 ppm. Dapat terlihat pada grafik titik pertemuan antara
akumulasi kematian dengan akumulasi yang hidup adalah estimasi nilai LC50.
Hasil log dari LC50 645,65 ppm adalah 2,81. Sumbu ini berada pada grafik antara
log konsentrasi 2,75 – 2,81 seperti yang terlihat pada grafik. Hasil perhitungan
batas kepercayaan angka LC50 berada antara range 2,79 – 2,81 dengan ukuran
kesalahan sebesar 0,01. Berdasarkan nilai LC50 fraksi Cikal tulang menunjukkan
bahwa fraksi etil asetat Cikal tulang memilki aktivitas sebagai pestisida.
 52

Nilai LC50 ekstrak dan fraksi Cikal tulang dapat dilihat pada Tabel 5.8
berikut ini :
Tabel 5.8. Nilai LC50 Ekstrak dan Fraksi Cikal tulang
No Sampel LC50 (ppm)
1 Ekstrak metanol 676,08
2 Fraksi n-heksan 281,84
3 Fraksi etil asetat 575,44
4 Fraksi n-butanol 645,65

Berdasarkan Tabel 5.8 di atas dapat dilihat perbedaan nilai LC 50 yang

diperoleh. Dapat dilihat dengan membandingkan nilai LC50 ekstrak dan masing-
masing fraksi Cikal tulang dapat diketahui bahwa fraksi yang paling aktif
terhadap larva udang Artemia salina Leach adalah fraksi n-heksan dengan LC50
281,84 ppm, kemudian fraksi etil asetat dengan LC50 575,44 ppm, fraksi n-butanol
dengan LC50 645,65 ppm dan ekstrak metanol dengan nilai LC50 676,08 ppm. Nilai
LC50 yang tinggi menunjukkan bioaktivitas ekstrak yang rendah terhadap hewan
uji dan sebaliknya nilai LC50 yang rendah menunjukkan bioaktivitas ekstrak yang
tinggi terhadap hewan uji. Dari hasil nilai LC 50 fraksi n-heksan sebesar 281,84
ppm yang memberikan aktifitas paling baik dibandingkan ekstrak metanol, fraksi
etil asetat dan n-butanol. Hal ini bahwa fraksi n-heksan senyawa lebih banyak
tertarik dibanding pada ekstrak kasar, fraksi etil asetat, fraksi n-butanol dan dapat
dikatakan bahwa senyawa yang aktif lebih bersifat nonpolar, serta karena
terdapatnya golongan senyawa alkaloid pada fraksi n-heksan yang mempunyai
aktivitas yang paling baik. Hampir semua alkaloid yang ditemukan di alam
mempunyai keaktifan biologis tertentu. Alkaloid bekerja spesifik pada siklus sel
dengan menghambat proses mitosis. Alkaloid dari tanaman juga mempunyai
kemampuan mengikat tubulin yaitu suatu protein yang menyusun mikrotubulus
dengan menghambat atau memblokade polimerasi protein ke dalam mikrotubulus.
Kemudian dari hasil nilai LC50 yang diperoleh, dimana n-heksan dapat
dikembangkan ke dalam pengujian yang lebih sfesifik sebagai antimikroba
sedangkan ekstrak metanol, fraksi etil asetat dan n-butanol dapat dikembangkan
ke dalam pengujian yang lebih sfesifik sebagai pestisida.
 53

Bioaktivitas Cikal tulang pada ekstrak metanol dan berbagai fraksi

berbeda-beda, kemungkinan ini disebabkan oleh kandungan metabolit sekunder
tiap ekstrak yang berbeda-beda sehingga ada ekstrak yang memberikan aktivitas
lemah dan ada yang memberikan aktifitas yang kuat terhadap bioindikator.
Parameter bioaktivitas yaitu nilai LC50. LC50 merupakan konsentrasi ekstrak
dimana hewan uji diberikan ekstrak yang menyebabkan terjadinya kematian pada
50% hewan percobaan. Dari hasil LC 50 yang didapatkan dari analisis data yang
dilakukan, terlihat bahwa ekstrak Cikal tulang memiliki bioaktivitas dengan nilai
LC50 < 1000 ppm. Hal ini disebabkan kandungan metabolit sekunder yang
terdapat di dalam ekstrak cikal tulang antara lain alkaloid dan fenol.
Ekstrak cikal tulang juga mengandung alkaloid pada ekstrak metanol, n-
heksan, etil asetat, dan fraksi n-butanol. Tetapi dalam penelitian ini tidak
menunjukkan aktivitas yang diharapkan, hal ini dikarenakan alkaloid dalam
ekstrak cikal tulang ini diduga memiliki sifat antagonis dan penetral sehingga
dapat mempengaruhi senyawa lain yang membuat tidak terlalu aktif dan
kurangnya daya efektifitas senyawa alkaloid itu sendiri. Dalam ilmu toksikologi,
alkaloid dapat meningkatkan aliran darah dalam tubuh, efektif mencegah naiknya
suhu badan (antithermic) dan sebagai obat penenang (sedative). Sediaan-sediaan
tanaman ini digunakan untuk mengobati tekanan darah tinggi dan penyakit
gangguan syaraf tertentu.
Ekstrak cikal tulang mengandung senyawa fenol pada ekstrak metanol,
fraksi etil asetat dan n-butanol. Mekanisme golongan senyawa fenol yaitu dengan
perusakan membran sel, ion H+ dari senyawa fenol dan turunannya yang akan
menyerang gugus polar (gugus fosfat pada membran sel sehingga fosfolipid akan
terurai menjadi gliserol, asam karboksilat dan asam fosfat. Hal ini mengakibatkan
fosfolipid tidak mampu mempertahankan bentuk sel, akibatnya membran akan
bocor dan sel akan mengalami hambatan pertumbuhan bahkan kematian. Senyawa
fenol dalam ekstrak cikal tulang dapat berperan sebagai antioksidan dengan cara
menghambat proses oksidasi dan proses radikal bebas. Sifat antioksidan tersebut
dapat mencegah terjadinya berbagai penyakit, seperti kanker, diabetes, dan
penyakit jantung.
 54

Mekanisme kematian larva udang berhubungan dengan fungsi senyawa

alkaloid dan fenol dalam cikal tulang yang dapat menghambat daya makan larva.
Cara kerja senyawa ini adalah dengan bertindak sebagai stomach polsoning atau
racun perut. Oleh karena itu, bila senyawa ini masuk ke dalam tubuh larva udang
Artemia salina Leach, alat pencernaan akan terganggu dan menghambat reseptor
perasa pada daerah mulut larva udang Artemia salina Leach. Hal ini
mengakibatkan larva udang Artemia salina Leach gagal mendapatkan stimulasi
rasa sehingga tidak mampu mengenali makanannya yang mengakibatkan larva
udang Artemia salina Leach mati kelaparan.
 55

BAB VI
KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan diperoleh kesimpulan sebagai

berikut:
1. Rendemen ekstrak cikal tulang yang diperoleh terhadap sampel basah (650
gram) sebesar 6,15 % (40 gram) ekstrak metanol, 0,34 % (2,2 gram) n-heksan,
0,25 % (1,6 gram) etil asetat dan 0,10% (0,17 gram) n-butanol ; terhadap
sampel kering (400 gram) sebesar 10 % (40 gram) ekstrak etanol, 0,55 % (2,2
gram) n-heksan, 0,4 % (1,6 gram) etil asetat dan 0,17 % (0,17 gram) n-butanol;
dan tehadap ekstrak metanol (fraksinasi) sebesar 27,50 % (2,2 gram) n-heksan,
20 % (1,6 gram) etil asetat dan 8,75 % (0,17 gram) n-butanol.
2. Golongan metabolit sekunder yang terkandung dalam cikal tulang yang
diekstraksi dengan pelarut metanol, n-heksan, etil asetat, dan n-butanol adalah
alkaloid dan fenol.
3. Bioaktivitas ekstrak cikal tulang berdasarkan nilai LC50 terhadap larva udang
Artemia salina Leach adalah pada ekstrak kasar nilai LC50 sebesar 676,08 ppm,
fraksi n-heksana LC50 281,84 ppm, fraksi etil asetat LC 50 575,44 ppm dan
fraksi n-butanol LC50 645,65 ppm.

B. Saran

Beberapa saran yang dapat diambil dalam penelitian ini diantaranya adalah
sebagai berikut :
1. Dilakukan identifikasi senyawa atau kandungan kimia lain yang terdapat pada
cikal tulang agar dapat diperoleh data ilmiah yang lebih lengkap.
2. Diperlukan pengembangan penelitian lebih lanjut untuk melakukan uji aktivitas
antimikroba, antioksidan, antifungi, pestisida, dan mengisolasi senyawa murni
agar dapat diaplikasikan secara ilmiah bahwa senyawa aktif yang terdapat pada
tanaman cikal tulang dapat digunakan sebagai ilmu pengetahuan.
 56

DAFTAR PUSTAKA

Achmad, S.A, 1986, Kimia Organik Bahan Alam, Jakarta; Karunika.

Afifah, E., 2005, Ramuan Tradisional Untuk Mengatasi Aneka Penyakit,
Agromedia Pustaka; Jakarta.
Ansel, H.C., 1989, Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi Edisi Keempat, UI-Press;
Jakarta.
Colegate, Steven M. dan Russell J.Molyneux. 1993. Bioactive Natural Products:
Detection, Isolation, and Structural Determination. CRC Press Inc:
Florida.
Darwis, D. 2000. Teknik Dasar Laboratorium dalam Penelitian Sentaya Bahan
Alam Hayati. Workshop Pengembangan Sumber Daya manusia didalam
Bidang Kimia Organik Bahan Alam Hayati. FMIPA UNAND, Padang.
Departemen Kesehatan RI. 1986. Sediaan Galenik. Direktorat Jendral
Pengawasan Obat dan Makanan: Jakarta
Departemen Kesehatan RI. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan
Obat. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan: Jakarta
Departemen Kesehatan RI. 2000. Pedoman Pelaksanaan Uji Klinik Obat
Tradisional. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan: Jakarta
Departemen Kesehatan & Kesejahteraan sosial RI. 2000. Inventaris Tanaman
Obat Indonesia. Bakti Husada. Jakarta.
Djarijah, Siregar Abbas., 1995, Pakan Ikan Alami, Kanisius; Jakarta
Elzerman, B., 2005, Studi penangan dan Penyiapan Obat Sitotoksik di Beberapa
Rumah Sakit, (http://digilib.itb.ac.id), Diakses pada tanggal 15 November
2011.
Fanani, R., 2009. Penelitian Uji Aktivitas Ekstra Etanol Herba Dewandaru
Peroral Pada Tikus Galur Sprague Dawley. Fakultas Kedokteran
Universitas Negeri Surakarta. Surakarta
Goeswin, Agoes. 2007. Teknologi Bahan Alam. Institut Teknologi Bogor.
Indonesia
Gunawan, Didik, dan Sri Mulyani. 2004. Ilmu Obat Alam(Farmakognosi) Jilid 1.
Penebar Swadaya. Jakarta
Harborne. J.B, 1987, Metode Fitokimia, terjemahan K. Radmawinata dan I.
Soediso, ITB Press; Bandung.
Hariana, A. 2004. Tumbuhan Obat dan Khasiatnya Seri 3. 2006. Penebar
Swadaya, Jakarta.
Kartasapoetra, G., 2006, Budidaya Tanaman Berkhasiat Obat, Rineka Cipta,
Jakarta
Khopkar, S.M., 1990. Konsep Dasar Kimia Analitik. diterjemahkan oleh A.
Saptorahardjo dan Agus Nurhadi. Cetakan I. UI-Press. Jakarta.
Loomis, T.A., 1970, Essentials of Toxicology, Philadelphia; Lea & Febiger,
Diterjemahkan oleh Donatus dan Mulyono, L. A, Toksikologi Dasar
Edisi Ketiga, 1978, IKIP; Semarang.
 57

Mclaughlin, J.L.,Roger, L.L., and Anderson, J.E. 1998. The Use of Biological
Assay to Evaluate Botanicals. Drugs Information Journal: USA
Mudjiman, Ahmad, 1989, Udang Renik Air Asin (Artemia salina), Bahratara;
Jakarta.
Rita, D., 2010. Identifikasi Jenis Tumbuhan. Laboratorium Dendrologi Fakultas
Kehutanan, Universitas Mulawarman, Samarinda.
Ryan, KJ., Ray, GC., 2004, Sherris Medical Microbiology; An Introduction To
Infectious Disease, The McGraw-Hill Companies, Inc : USA
Shopyan, M., 2010, Deskripsi Pestisida Organik, (http://forum.upi.edu/v3/
index.php), Diakses tanggal 15 November 2011.
Teyler, VE., et.al,1988, Pharmacognosy 9th Edition, Lea & Febiger; Phiadelphia.
Tobo, F., Mufidah., Joebo, B., dan Makhmud, A., I. 2001. Fitokimia. Farmasi
Univertsitas Hasanuddin; Makasar.
 58

LAMPIRAN-LAMPIRAN

Lampiran 1. Perhitungan Rendemen

Bobot sampel basah = 650 gram

Bobot sampel kering = 400 gram
Bobot ekstrak metanol yang diperoleh = 39,6 gram
Bobot ekstrak metanol difraksinasi = 8 gram
Fraksi n-heksan = 2,2 gram
Fraksi etil asetat = 1,6 gram
Fraksi n-butanol = 0,7 gram

1. Rendemen ditinjau dari sampel kering yang diperoleh

Bobot akhir
Rendemen = x 100 %
Bobot awal
39,6 gram
a. Ekstrak metanol = X 100 %
400 gram
= 9,9 %
2,2 gram
b. Fraksi n-heksan = X 100 %
400 gram
= 0,55 %
1,6 gram
c. Fraksi etil asetat = X 100 %
400 gram
= 0,40 %
0,7 gram
d. Fraksi n-butanol = X 100 %
400 gram
= 0,17 %
 59

2. Rendemen ditinjau dari sampel basah yang diperoleh

Dengan menggunakan rumus yang sama dapat dilihat hasilnya pada Tabel
berikut ini :
Sampel Rendemen
Ekstrak metanol 6,09 %
Fraksi n-Heksan 0,34 %
Fraksi Etil Asetat 0,25 %
Fraksi n-Butanol 0,10 %

3. Rendemen ditinjau dari ekstrak yang difraksinasi

Dengan menggunakan rumus yang sama dapat dilihat hasilnya pada Tabel
berikut ini :
Sampel Rendemen
Fraksi n-Heksan 27,5 %
Fraksi Etil Asetat 20 %
Fraksi n-Butanol 8,75 %
 60

Lampiran 2. Perhitungan Konsentrasi

1. Perhitungan Konsentrasi Uji Ekstrak Metanol

1000 mg 100 mg
Pembuatan larutan stok : 1000 ppm= =
1000 mL 100 mL
Maka dilarutkan 100 mg ekstrak sampai batas labu ukur 100 mL
Digunakan 5 konsentrasi dengan 5 replikasi, yaitu :
500 ppm = V1.N1 = V2.N2
x.1000 ppm = 5 mL.500 ppm
2500
x= = 2,5 x 5 = 12,5 mL
1000
Untuk konsentrasi 600 ppm, 700 ppm, 800 ppm, dan 900 ppm dengan cara
perhitungan yang sama dapat dilihat hasilnya pada Tabel berikut ini :
Variasi Konsentrasi Jumlah yang diambil
500 ppm 2,5 mL
600 ppm 3 mL
700 ppm 3,5 mL
800 ppm 4 mL
900 ppm 4,5 mL

2. Perhitungan Konsentrasi Uji Fraksi N-Heksan

1000 mg 50 mg
Pembuatan larutan stok : 1000 ppm= =
1000 mL 50 mL
Maka dilarutkan 50 mg ekstrak sampai batas labu ukur 50 mL
Digunakan 5 konsentrasi dengan 5 replikasi, yaitu :
100 ppm = V1.N1 = V2.N2
x.1000 ppm = 5 mL.100 ppm
500
x= = 0,5 x 5 = 2,5 mL
1000
Untuk konsentrasi 200 ppm, 300 ppm, 400 ppm, dan 500 ppm dengan cara
perhitungan yang sama dapat dilihat hasilnya pada Tabel berikut ini :
 61

Variasi Konsentrasi Jumlah yang diambil

100 ppm 0,5 mL
200 ppm 1 mL
300 ppm 1,5 mL
400 ppm 2 mL
500 ppm 2,5 mL

3. Perhitungan Konsentrasi Uji Fraksi Etil Asetat

1000 mg 100 mg
Pembuatan larutan stok : 1000 ppm= =
1000 mL 100 mL
Maka dilarutkan 100 mg ekstrak sampai batas labu ukur 100 mL
Digunakan 5 konsentrasi dengan 5 replikasi, yaitu :
400 ppm = V1.N1 = V2.N2
x.1000 ppm = 5 mL.400 ppm
2000
x= = 2 x 5 = 10 mL
1000
Untuk konsentrasi 500 ppm, 600 ppm, 700 ppm, dan 800 ppm dengan cara
perhitungan yang sama dapat dilihat hasilnya pada Tabel berikut ini :
Variasi Konsentrasi Jumlah yang diambil
400 ppm 2 mL
500 ppm 2,5 mL
600 ppm 3 mL
700 ppm 3,5 mL
800 ppm 4 mL

4. Perhitungan Konsentrasi Uji Fraksi Etil Asetat

1000 mg 100 mg
Pembuatan larutan stok : 1000 ppm= =
1000 mL 100 mL
Maka dilarutkan 100 mg ekstrak sampai batas labu ukur 100 mL
Digunakan 5 konsentrasi dengan 5 replikasi, yaitu :
450 ppm = V1.N1 = V2.N2
x.1000 ppm = 5 mL.450 ppm
2250
x= = 2,25 x 5 = 11,25 mL
1000
 62

Untuk konsentrasi 550 ppm, 650 ppm, 750 ppm, dan 850 ppm dengan cara
perhitungan yang sama dapat dilihat hasilnya pada Tabel berikut ini :
Variasi Konsentrasi Jumlah yang diambil
450 ppm 2,25 mL
550 ppm 2,75 mL
650 ppm 3,25 mL
750 ppm 3,75 mL
850 ppm 4,25 mL

Lampiran 3. Perhitungan Nilai LC50

1. Tabel Perhitungan Nilai LC50 Ekstrak

Metanol
 63

No Konsentrasi Larva udang Artemia salina yang mati Jumlah

(ppm) U1 U2 U3 U4
1 Kontrol 0 0 0 0 0
2 500 2 2 2 3 9
3 600 3 3 4 4 14
4 700 4 5 5 5 19
5 800 7 7 7 6 27
6 900 9 8 9 9 35

Mortalitas
Rasio
Jumlah Terakumulasi (%)
Konsentrasi Log mati : total
Konsentrasi
Mati Hidup Terakumulasi Rasio x
Mati Hidup
(x) (y) x : (x+y) 100 %
500 ppm 2,69 9 31 9 96 0,0857 8,57
600 ppm 2,77 14 26 23 65 0,2614 26,14
700 ppm 2,85 19 21 42 39 0,5185 51,85
800 ppm 2,90 27 13 69 18 0,7931 79,31
900 ppm 2,95 35 5 104 5 0,9531 95,41

a. Nilai LC50
50 - 26,14 23,86
Jarak yang sebanding = = = 0,92 (g)
51,85 - 26,14 25,71
700
Kenaikan dosis = log = 0,07 (h)
600
gxh = 0,92 x 0,07 = 0,06
y = log 600 + 0,06 = 2,77+ 0,06 = 2,83
LC 50 = Antilog 2,83 = 676,08 ppm
b. Nilai LC75
75 - 51,85 23,15
Jarak yang sebanding = = = 0,84 (g)
79,31 - 51,85 27,46
800
Kenaikan dosis = log = 0,06 (h)
700
gxh = 0,84 x 0,06 = 0,06
y = log700 + 0,06 = 2,85 + 0,06 = 2,90
LC 75 = Antilog 2,90 = 794,33 ppm
c. Nilai LC25
25 - 8,57 16,43
Jarak yang sebanding = = = 0,94 (g)
26,14 - 8,57 17,57
 64

600
Kenaikan dosis = log = 0,08 (h)
500
gxh = 0,94 x 0,08 = 0,07
y = log 500 + 0,07 = 2,69 + 0,07 = 2,76
LC 25 = Antilog 2,76 = 575,44 ppm
d. Nilai R
Antilog LC 75 - Antilog LC50 = 2,90 – 2,83=0,07
Antilog LC 50 - Antilog LC 25 = 2,83 – 2,76=0,07
R (Simpangan Kuartil) = 0,07 + 0,07=0,14
e. Standar Eror
SE.Log LC50 = √ 0,79hR/n
0,79 × 0,07 × 0,14
=√ = 0,01
50
Batas bawah = Log LC 50 - 2SE.Log LC50
= 2,83 - 0,02
= 2,81
Batas atas = Log LC 50 + 2SE.Log LC50
= 2,83 + 0,02
= 2,85
Batas Kepercayaan = 2,81 - 2,85
Antilog = 645,65 ppm - 707,95 ppm

2. Tabel Perhitungan Nilai LC50 Fraksi n-Heksan

Konsentrasi Larva udang Artemia salina yang mati Jumlah

No
(ppm) U1 U2 U3 U4
1 Kontrol 0 0 0 0 0
2 100 2 2 2 1 7
3 200 4 4 4 3 15
4 300 5 5 6 5 21
5 400 7 7 6 7 27
6 500 9 9 9 9 36
Konsentrasi Log Mortalita
Rasio
Konsentrasi Jumlah Terakumulasi s (%)
mati : total
Mati Hidup Mati Hidup Terakumulasi Rasio x
 65

(x) (y) x : (x+y) 100 %

100 ppm 2 7 33 7 94 0,0693 6,93
200 ppm 2,30 15 25 22 61 0,2650 26,50
300 ppm 2.47 21 19 43 36 0,5443 54,43
400 ppm 2,60 27 13 70 17 0,8045 80,45
500 ppm 2,69 36 4 106 4 0,9636 96,36

Untuk fraksi n-heksana dengan cara perhitungan yang sama, hasilnya dapat
dilihat pada Tabel berikut :
Perhitungan Hasil yang Diperoleh
Nilai LC50 281,84 ppm
Nilai LC75 363,07 ppm
Nilai LC25 190,55 ppm
Nilai R (Simpangan Kuartil) 0,28
Batas Kepercayaan (Antilog) 245,47 ppm – 323,59 ppm

3. Tabel Perhitungan Nilai LC50 Fraksi Etil

Asetat
Konsentrasi Larva udang Artemia salina yang mati Jumlah
No
(ppm) U1 U2 U3 U4
1 Kontrol 0 0 0 0 0
2 400 2 2 2 3 9
3 500 3 4 3 4 14
4 600 5 5 6 5 21
5 700 6 7 7 7 27
6 800 8 9 9 9 35

Mortalitas
Rasio
Jumlah Terakumulasi (%)
Konsentrasi Log mati : total
Konsentrasi
Mati Hidup Terakumulasi Rasio x
Mati Hidup
(x) (y) x : (x+y) 100 %
400 ppm 2,60 9 31 9 94 0,0873 8,73
500 ppm 2,69 14 26 23 63 0,2674 26,74
600 ppm 2,77 21 19 44 37 0,5432 54,32
700 ppm 2,84 27 13 71 18 0,7977 79,77
800 ppm 2,90 35 5 106 5 0,9549 95,49
 66

Untuk fraksi etil asetat dengan cara perhitungan yang sama, hasilnya dapat
dilihat pada Tabel berikut :
Perhitungan Hasil yang Diperoleh
Nilai LC50 575,44 ppm
Nilai LC75 676,08 ppm
Nilai LC25 478,60 ppm
Nilai R (Simpangan Kuartil) 0,15
Batas Kepercayaan (Antilog) 549,54 ppm – 602,56 ppm

4. Tabel Perhitungan Nilai LC50 Fraksi n-Butanol

Konsentrasi Larva udang Artemia salina yang mati Jumlah
No
(ppm) U1 U2 U3 U4
1 Kontrol 0 0 0 0 0
2 450 1 2 3 2 8
3 550 4 5 4 4 15
4 650 5 5 5 6 21
5 750 7 6 7 7 27
6 850 8 8 9 9 34

Mortalitas
Rasio
Jumlah Terakumulasi (%)
Konsentrasi Log mati : total
Konsentrasi
Mati Hidup Terakumulasi Rasio x
Mati Hidup
(x) (y) x : (x+y) 100 %
450 2,65 8 32 8 95 0,0777 7,77
550 2,75 15 25 23 63 0,2674 26,74
650 2,81 21 19 44 38 0,5365 53,65
750 2,87 27 13 71 19 0,7889 78,89
850 2,93 34 6 105 6 0,9459 94,59

Untuk fraksi n-butanol dengan cara perhitungan yang sama, hasilnya dapat
dilihat pada Tabel berikut :
Perhitungan Hasil yang Diperoleh
Nilai LC50 645,65 ppm
Nilai LC75 724,44 ppm
Nilai LC25 524,80 ppm
Nilai R (Simpangan Kuartil) 0,14
 67

Batas Kepercayaan (Antilog) 616,59 ppm – 676,08 ppm

 68

Lampiran 4. Dokumentasi Penelitian

1. Penyiapan Sampel Cilal tulang

a. Tanaman Cikal Tulang

b. Simplisia Cikal tulang

 69

2. Ekstraksi simplisia Cikal tulang

a. Maserasi

Sebelum ditambahkan metanol Sudah ditambahkan pelarut

b. Penyaringan dan hasil penyaringan

c. Evaporator dan waterbath

 70

d. Desikator

b. Ekstrak metanol

3. Fraksinasi
 71

a. Waterbath dan desikator

b. Fraksi n-heksan, etil astat, dan n-butanol

4. Penyiapan Bioindikator
 72

5. Pembuatan Larutan Stok dan Penentuan Konsentrasi

a. Larutan stok ekstrak etanol (kasar) dan n-heksan

b. Larutan stok etil asetat dan n-butanol

c. Penentuan Konsentrasi
 73

6. Pengujian Bioaktivitas Ekstrak

a. Ekstrak etanol (kasar) dan n-heksan

b. Fraksi etit asetat dan n-butanol

 74

7. Identifikasi Metabolit Sekunder

a. Identifikasi alkaloid dragendorf dan mayer pada ekstrak etanol

1) Positif terdeteksi alkaloid dragendorf dan pembanding

2) Alkaloid mayer dan pembanding

 75

b. Identifikasi alkaloid dragendorf dan mayer pada fraksi n-heksan

1) Positif terdeteksi alkaloid dragendorf dan pembanding

2) Alkaloid mayer dan pembanding

c. Identifikasi alkaloid mayer dan dragendorf pada fraksi etil asetat

1) Positif terdeteksi alkaloid dragendorf dan pembanding
 76

2) Alkaloid mayer dan pembanding

 77

d. Identifikasi alkaloid mayer dan dragendorf pada fraksi n-butanol

1) Positif terdeteksi alkaloid dragendorf dan pembanding

2) Alkaloid mayer dan pembanding

e. Identifikasi flavanoid pada ekstrak etanol, n-heksana, etil asetat, dan

n-butanol
(-) ekstrak etanol (-) n-heksan (-) etil asetat (-) n-butanol
 78

f. Identifikasi fenol pada ekstrak etanol, n-heksan, etil asetat dan n-butanol
(+) ekstrak etanol (-) n-heksan (+) etil asetat (+) n-butanol

g. Identifikasi senyawa steroid dan terpenoid pada ekstrak kasar, n-heksana,

etil asetat dan n-butanol
(-) ekstrak etanol (-) n-heksan (-) etil asetat (-) n-butanol

h. Identifikasi senyawa saponin pada ekstrak kasar, n-heksana, etil asetat dan
n-butanol
(-) ekstrak etanol (-) n-heksan (-) etil asetat (-) n-butanol
79