Tugas Toksikologi

“Metode Deteksi Penggunaan Alkaloid Ergot

SEMESTER GANJIL

DISUSUN OLEH
Kelompok 8
Ayu Adelia O.A 155070507111011
Chikita Patricia Mbae 155070507111024
Sonia Maskurotin 165070507111003
Tantia Eka Wahyuni 165070500111021
Fransiska Dewi Arjasa 165070507111009
Intan Rahmadhani 165070501111034
Raissa Azzaria G.J 175070500111032
Tuntun Parwati 175070501111022

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

JURUSAN FARMASI
FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS BRAWIJAYA
TAHUN AJARAN 2019/2020
 I. Prinsip Metode Deteksi alkaloid ergot

Alkaloid ergot adalah turunan indol yang diproduksi oleh berbagai macam jamur,
dianggap penting secara medis karena efeknya yang signifikan pada sistem saraf pusat
mamalia, karena kesamaan strukturalnya dengan neurotransmiter. Alkaloid ergot dapat
diklasifikasikan dalam beberapa cara. Salah satu cara adalah mengklasifikasikannya
sebagai klavin, ergopeptin, dan amida sederhana dari asam lisergat. Tanpa pemurnian
ekstensif, alkaloid ergot dapat dipisahkan dan dikuantifikasi oleh HPLC dengan deteksi
selektif karena fluoresensinya (Cheng, 2010), (Lehner,2005)

Prinsip dan penerapan metode yang lebih baru untuk kuantitatif dan penentuan semi-
kuantitatif alkaloid ergot dalam makanan, pakan, bahan tanaman dan hewan sedang
ditinjau. Dimana prinsip utama untuk analisis alkaloid ergot terdiri dari kromatografi cair
dengan spektrometri massa tandem (LC-MS / MS) dan cairan kromatografi dengan
deteksi fluoresensi (LC-FLD). Metode lain berdasarkan immunoassay sedang dalam
pengembangan dan variasi teknik minor sedang dikembangkan.

Metode Immunoassay termasuk Enzyme Linked Immunosorbent Assays (ELISA)

memiliki keuntungan karena cepat dan murah tetapi kurang spesifik dan kurang akurat
dibandingkan LC-FLD atau Metode LC-MS. Metode ELISA tidak spesifik untuk
Alkaloid ergot karena tidak memungkinkan untuk memperkirakan derajat toksisitas dari
Alkaloid ergot yang tidak ditargetkan metode kromatografi. Metode ekstraksi dan
pembersihan berbasis kekebalan telah diterapkan pada LSD untuk menghasilkan sampel
cocok untuk ditentukan dengan GC-MS atau LC-MS dan beberapa perangkat ekstraksi.
(Crew,2005)

II. Metode Deteksi Penggunaan Alkaloid Ergot

1. Capillary Electrophoresis
Elektroforesis zona kapiler (CZE) telah diterapkan untuk menentukan EA dan
beberapa epimer menggunakan β- dan γ-siklodekstrin, urea dan poli (vinil alkohol)
dalam buffer fosfat pada pH 2,5 dengan kapiler silika-menyatu pada 25 kV. Metode
deteksi UV dan fluoresensi dapat digunakan untuk metode deteksi, dibuat kompatibel
dengan deteksi spektrofotometri massa Time of Flight (TOF) serta UV dengan
mengoptimalkan running background electrolytes (BGEs) yang terdiri dari metanol
dengan asparagin, natrium tetraborat, atau amonium asetat pada pH basa.
2. Gas Chromatography-Mass Spectrometry
Ergopeptida tidak mudah menguap dan rentan terhadap panas. GC-MS dapat
diterapkan untuk analisis amida asam lisergat dan klavin dengan berat molekul rendah
mengikuti reaksi kimia untuk meningkatkan volatilitas dan stabilitas dengan
memblokir kelompok kutub.
Metode GC-MS mencakup ionisasi dampak elektron di mana sejumlah ion
fragmen dihasilkan dari analit terionisasi, dan metode (GC-MS / MS) terionisasi
dalam mode positif atau negatif untuk memberikan ion molekul kuat yang kemudian
terfragmentasi untuk memberikan lebih sedikit ion spesifik dengan intensitas tinggi.

3. Liquid Chromatography
Kromatografi berbasis fase terbalik selalu digunakan untuk pemisahan EA.
Sebagian besar metode digunakan sistem pelarut campuran metanol-air atau
asetonitril-air dengan tambahan amonium hidroksida, amonium karbonat, amonium
karbamat atau trietilamina untuk memberikan kondisi pH basa. Pemisahan dapat
dicapai dengan fase gerak isokratik dan gradien.

4. Ultraviolet and Fluorescence Detection

Dengan pemisahan LC, ergopeptine dan ergopeptinine keduanya dapat diukur
dengan sinar ultraviolet. Detektor (LC-UV) disetel ke panjang gelombang maksimal
310 nm untuk ergopeptine dan ergopeptinines dan pada 280 nm untuk
dihidroergopeptin, meskipun panjang gelombang lain telah dimasukkan.
Banyak EA, termasuk yang paling umum, secara alami berpendar, dan karena
LC-FLD menawarkan yang lebih tinggi sensitivitas untuk banyak EA dibandingkan
dengan LC-UV, penggunaannya lebih disukai. Panjang gelombang eksitasi dan
deteksi masing-masing adalah 310 nm dan 410 nm.

5. Mass Spectrometry
Alkaloid yang dipisahkan secara individual oleh HPLC diionisasi dalam
antarmuka electrospray untuk menghasilkan ion molekuler terprotonasi yang dibuat
untuk bertabrakan dengan molekul gas untuk menginduksi fragmentasi menjadi "ion
produk" bermuatan lebih lanjut yang dapat dipisahkan dan diidentifikasi di tahap
deteksi akhir. Operasi dalam mode ESI-positif biasanya memberikan ion yang lebih
 kuat ([M + H] +) daripada ion molekul yang terdeprotonasi ([M − H] -) yang
diperoleh dalam mode ESI-negatif.
Spektrometri massa Time of Flight adalah metode deteksi untuk LC (LC-TOF-
MS) yang memberikan resolusi massa sangat tinggi (> 20.000). Keuntungan lebih
lanjut dari metode ini adalah bahwa perolehan data tidak ditargetkan (seluruh rentang
massa dipantau dan dicatat tidak seperti beberapa massa terpilih yang dipantau dalam
LC-MS / MS) sehingga informasi spektral untuk sejumlah besar senyawa dapat
diekstraksi dari satu operasi LC.
Deteksi spektrometri massa yang mengikuti LC khususnya rentan terhadap
perubahan intensitas sinyal yang disebabkan oleh adanya senyawa yang diekstraksi
bersama dalam instrumen yang disebut efek matriks. Efek matriks dapat
dikompensasikan untuk sebagian besar dengan menggunakan standar internal berlabel
isotop tetapi harus hati-hati karena interferensi dapat dengan mudah memengaruhi
respons untuk nilai m / z dari suatu analit tetapi tidak dengan nilai m / z yang sedikit
berbeda analog berlabel isotop.

III. Batas Deteksi Positif Palsu Alkaloid Ergot

Hasil ELISA Alkaloid Randox Ergot menunjukkan korelasi 95% yang sangat baik
dengan konsentrasi yang ditetapkan dalam skema Tes Kecakapan FAPAS. Mayoritas
sampel posited mempunyai kandungan alkaloid ergot sebanyak < 250 μg/kg dengan
median kadar alkaloid 70 μg/kg.

IV. Batas Deteksi Negatif Palsu Alkaloid Ergot

Sampel negative merupakan sampel yang memiliki kandungan alkaloid ergot

dibawah nilai yang ditentukan, biasanya dengan kepastian 95%. Sampel dinyatakan
negative palsu bila memiliki kandungan alkaloid ergot pada sampel berada di atas
nilai yang ditentukan akan tetapi hasil pengukuran screening mengindikasikan
negative.
 Daftar pustaka

Colin Crews. 2015. Analysis of Ergot Alkaloids. UK : Fera Science Ltd., Sand Hutton, North
Yorks.

Cheng, J. Z., Coyle, C. M., Panaccione, D. G., & O’Connor, S. E. (2010). A role for lob
yellow enzyme in ergot alkaloid biosynthesis. Journal of the American Chemical Society,
13,1776–1777.

Crews, C. (2015). Analysis of Ergot Alkaloids. Toxins, 7(6), 2024–2050. 

Lehner, A. F., Craig, M., Fannin, N., Bush, L., & Tobin, T. (2005). Electrospray tandem
quadrupole mass spectrometry in the elucidation of ergot alkaloids chromatographed by
HPLC: Screening of grass or forage samples for novel toxic compounds. Journal of Mass
Spectrometry, 40, 1484–1502.

M. Ruhland &  J. Tischler. 2008. Determination of ergot alkaloids in feed by HPLC.

https://www.randoxfood.com/ergot-alkaloid-elisa-ea3491-available-now/

Veršilovskis, et al. 2019. Screening Of Ergot Alkaloids By ELISA Test Kits Available On The
Market. Netherlands: Wageningen University & Research.