Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Sensor dan Aktuator B 201 (2014) 545–554

Daftar isi tersedia di SainsLangsung

Sensor dan Aktuator B: Kimia

halaman utama: www. lain. com/ l oc makan / snb

Sintesis dan karakterisasi polifosfazen baru dan penerapannya pada

biosensor dalam kombinasi dengan polimer konduktor
Didem Ucan A, Fulya Ekiz Kanik B, Yunus Karatas A,**, Levent Toppare B,C,D,e,*
A Departemen Kimia, Universitas Ahi Evran, Kirsehir 40200, Turki
B Departemen Bioteknologi, Universitas Teknik Timur Tengah, Ankara 06800, Turki
C Departemen Kimia, Universitas Teknik Timur Tengah, Ankara 06800, Turki
D Departemen Ilmu dan Teknologi Polimer, Universitas Teknik Timur Tengah, Ankara 06800, Turki
e Pusat Penelitian dan Penerapan Energi Surya (GUNAM), Universitas Teknik Timur Tengah, Ankara 06800, Turki

info artikel abstrak

Sejarah artikel: Biosensor glukosa amperometrik berhasil disiapkan berdasarkan polimer konduktor, poli(4-(2,5-di(tiofen-2-il)-1H-
Diterima 6 Maret 2014 pirol-1-il)benzenamina) (poli(SNS-NH .)2)) dan polimer polifosfazen hidrofilik yang fleksibel,
Diterima dalam bentuk revisi 6 Mei poli[(metoksietoksi)etoksi-bersama3-formilfenoksi]fosfatase (PPA). Poli(SNS-NH2) dipolimerisasi secara elektrokimia
2014 Diterima 10 Mei 2014
pada elektroda grafit untuk mencapai matriks imobilisasi konduksi untuk meningkatkan imobilisasi enzim pada
Tersedia online 16 Mei 2014
permukaan transduser. Selain itu, untuk memperkuat imobilisasi, turunan polifosfazen yang mengandung gugus
aldehida fungsional dirancang, disintesis dan digunakan dalam imobilisasi glukosa oksidase. Tidak hanya gugus
Kata kunci:
amino dalam struktur poli(SNS-NH2), tetapi juga kelompok aldehida dalam PPA berkontribusi pada imobilisasi
Polifosfazen
polimer konduktor
kovalen serta menjebak biomolekul dalam jaringan PPA selama proses imobilisasi. Ini memberikan analisis glukosa
Biosensor glukosa yang efektif dan berumur panjang. Pengukuran amperometrik dilakukan
Imobilisasi kovalen
pada 0,7 V vs Ag/AgCl dalam 50 mM buffer natrium asetat pada pH 4,5. K aplikasiM (0,677 mM), Sayamaksimal (20,91 A),
Nilai LOD (1,3 M) ditentukan. Selain itu, biosensor menunjukkan sensitivitas yang sangat tinggi sebagai
237.1 A mM1 cm2 karena matriks imobilisasi polimer hidrofilik yang baru disintesis dan digabungkan. Akhirnya,
biosensor yang diusulkan berhasil diterapkan untuk penentuan kadar glukosa dalam beberapa minuman, dengan
sukses.
© 2014 Elsevier BV Hak cipta dilindungi undang-undang.

1. Perkenalan
Selama dekade terakhir, kemajuan besar telah terjadi dalam
pengembangan biosensor enzimatik dan mereka mulai digunakan
sebagai alternatif atau perangkat pelengkap dalam deteksi dan
kuantifikasi zat tertentu. Biosensor mudah dibuat dan digunakan,
murah, cepat, selektif, sensitif dan umumnya tidak memerlukan pra-
perlakuan sampel. Namun demikian, inti dalam persiapan biosensor
berbasis enzim baru adalah pemilihan dan pembuatan matriks
imobilisasi untuk molekul enzim agar memiliki biosensor yang tahan
lama, sensitif dan stabil. Saat ini, ilmu material adalah jantung dari
semua aplikasi ilmiah. Pilihan
* Penulis koresponden di: Departemen Kimia, Universitas Teknik Timur Tengah, Ankara
06800, Turki. Tel.: +90 3122103251; faks: +90 3122103200.
** Penulis koresponden di: Departemen Kimia, Universitas Ahi Evran, Kampus Asik Pasa,
Kirsehir 40200, Turki. Telp.: +90 3862804605; faks: +90 3862804525.
Alamat email: ucandidem@gmail.com (D.Ucan), fulyaekiz@gmail.com
(FE Kanik), ykaratas@ahievran.edu.tr, polyunus@gmail.com (Y.Karata),
toppare@metu.edu.tr (L.Toppare).
bahan yang benar untuk aplikasi adalah langkah yang paling penting
dari titik operasi. Dalam biosensor amperometrik berbasis enzim,
matriks imobilisasi yang nyaman tidak hanya harus memperbaiki
molekul enzim ke permukaan transduser dalam konformasi yang tepat
untuk aktivitas katalitik yang efisien, tetapi juga menjaga enzim tetap
berfungsi selama pengukuran selama mungkin tanpa denaturasi atau
kehilangan aktivitas. Matriks imobilisasi pertama-tama harus berfungsi
sebagai platform yang sesuai untuk enzim, kedua mentransfer
elektron secara efisien dalam pengukuran elektrokimia. Oleh karena
itu, untuk menyediakan dan meningkatkan transfer elektron antara
situs aktif enzim dan elektroda, banyak bahan seperti nanopartikel
logam[1,2], turunan karbon nanotube [3,4] atau bahan nanokomposit
anorganik atau polimer [5,6] digunakan dalam pembuatan biosensor.
Di sini, kami mengembangkan platform imobilisasi baru berdasarkan
polimer dengan tulang punggung organik dan anorganik untuk
biosensor enzimatik yang efisien dan tahan lama.
Polimer dengan tulang punggung anorganik telah menarik minat yang
berkembang selama beberapa dekade terakhir karena sifat unggul mereka.
Polyphosphazenes, membawa dua rantai samping yang melekat melalui
reaksi substitusi makromolekul untuk setiap atom fosfor

http://dx.doi.org/10.1016/j.snb.2014.05.040
0925-4005/© 2014 Elsevier BV Hak cipta dilindungi undang-undang.
546
Skema 1. Persiapan biosensor glukosa.
dari unit berulang, memiliki karakteristik khusus di antara mereka. Berbagai
macam polifosfazen dengan sifat fisik dan kimia yang berbeda dapat
disintesis dengan cara ini. Selain itu, kemungkinan untuk merancang
polifosfazen yang memiliki gugus organik berbeda yang terdistribusi secara
statistik di sepanjang rantai utama memungkinkan untuk menyempurnakan
sifat-sifat ini lebih lanjut.[7,8].
Fleksibilitas dalam sintesis polifosfazen memungkinkan penelitian
berkembang pesat di bidang ini dan arsitektur polimer yang berbeda
menemukan aplikasi potensial yang beragam. Aplikasi biomedis
adalah salah satunya dan banyak ulasan dapat ditemukan di bidang ini
[9–15]. Namun, polifosfazen jarang diselidiki sebagai platform untuk
menghubungkan biokatalis secara kimia. Contoh pertama imobilisasi
enzim diberikan untuk glukosa-6-fosfat dehidrogenase dan tripsin
pada permukaan alumina yang dilapisi dengan lapisan tipis [NP(OPh)2]n
[16]. Kemudian, aktivitas invertase yang tinggi untuk sistem yang
diimobilisasi pada permukaan [NP(OCH2CF3)2]n partikel bulat yang
diaktifkan oleh NaOCH2CH2NH2 dilaporkan [17]. Dalam penelitian lain,
urease dienkapsulasi dalam hidrogel yang terdiri dari ikatan silang
[NP(OCH2OCH2OCH3)2]n [18]. Cuetos dkk. mempelajari terlebih dahulu
imobilisasi alkohol dehidrogenase dan lipase pada [NP(O2C12H7.5(NH2)
0,5)]n untuk bioreduksi stereoselektif keton dalam larutan berair dan
surat itu untuk resolusi kinetik dalam pelarut organik masing-masing
[19] dan baru-baru ini melaporkan ko-imobilisasi selektif pertama dari
Baeyer-Villiger monooxygenase (phenylacetone monooxygenase) dan
enzim daur ulang NADPH (glucose-6-phosphate dehydrogenase) pada
pembawa polifosfazen yang sama [NP(O2C12H8−x(NH2)x)]n (x mulai dari
0,5 hingga 2) [20].
Polimer konduktor dengan arsitektur yang mudah disesuaikan dan
fungsional tahan lama dan stabil. Struktur konduktif seperti itu selalu
dianggap sebagai salah satu bahan yang paling nyaman untuk biosensor
[21–25]. Menggunakan polimer konduktor dengan gugus gantung
fungsional, molekul enzim dapat diimobilisasi secara kovalen ke dalamnya
dengan cara yang terkontrol untuk memiliki biosensor yang tahan lama dan
stabil.
Dalam penelitian ini, polimer konduktor, poli(4-(2,5-di(tiofen-2-il)-1H-
pirol-1-il)benzenamina) (poli(SNS-NH .)2)) dan polifosfazen hidrofilik
fleksibel baru, poli[(metoksietoksi) etoksi-bersama3-
formylphenoxy]phosphazene (PPA), disintesis dan digunakan untuk
imobilisasi glukosa oksidase (GOx) pada elektroda grafit. GOx
diimobilisasi secara kovalen ke polimer yang mengandung permukaan
transduser. Sifat elektrokimia dari polimer konduktor digunakan untuk
meningkatkan
transfer elektron selama pengukuran amperometrik; selain itu,
stabilitas, daya tahan dan sensitivitas biosensor ditingkatkan dengan
penggunaan gugus fungsi aldehida yang mengandung polimer
polifosfazen. Selain itu, karena hidrofilisitas PPA, polimer berinteraksi
dengan cara yang lebih baik dengan molekul enzim dan memberikan
imobilisasi yang mudah dan efisien. Selama imobilisasi, biomolekul
terperangkap dalam jaringan polifosfazen dan juga terikat secara
kovalen ke polimer dengan bantuan gugus amina dan aldehida dalam
struktur polimer dengan cara yang terkendali dan efisien, yang
membawa stabilitas dan aktivitas biosensor yang unggul.Skema 1
menampilkan langkah-langkah preparasi biosensor glukosa
amperometrik secara representatif. Fabrikasi biosensor dioptimalkan
dan dikarakterisasi. Biosensor poli(SNS-NH2)/PPA/GOx yang diusulkan
digunakan untuk mengestimasi kandungan glukosa dalam berbagai
minuman sesuai dengan metode referensi.
2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.1. Bahan:
Glukosa oksidase (GOx, -D-glukosa: oksigen 1-oksidoreduktase, EC
1.1.3.4, 17.300 unit/g) dariAspergillus niger,D-glukosa, asetonitril (ACN)
dan glutaraldehid dibeli dari Sigma (St. Louis, USA;
www.sigmaaldrich.com). Tetrabutilamonium heksafluorofosfat (TBAPF6
) disediakan oleh Aldrich. Semua bahan kimia untuk sintesis monomer
dibeli dari Aldrich kecuali tetrahydrofuran (THF) yang diperoleh dari
Acros (Geel, Belgia,www.acros.comSemua bahan kimia lainnya adalah
kelas analitis.
Semua reaksi untuk sintesis polifosfazen dilakukan di bawah
atmosfer gas nitrogen kering dan menggunakan teknik Schlenk garis
vakum standar. Tetrahidrofuran (THF,
99,0%, Merck), toluena (99,8%, Sigma-Aldrich) dan pentana (99,0%, Merck)
disuling di atas natrium benzofenon ketil sebelum digunakan. Natrium
hidrida (NaH, 60% dispersi dalam minyak mineral Sigma-Aldrich) dicuci
dengan petroleum eter berlebih (rentang didih 40-60◦C, Merck), dikeringkan
dan disimpan dalam Glove-box di bawah gas argon kering. Pentaklorida
fosfor (PCl5, 99,0%, Merck) disublimasikan dan disimpan dalam Glove-Box. 3-
Hydroxybenzaldehyde (97%, Sigma–Aldrich) disimpan dalam Glove-Box,
diethylene glycol methyl ether (98,0%, Merck) disimpan di atas saringan
molekuler yang diaktifkan (tipe 4A) dan digunakan tanpa pemurnian lebih
lanjut.
 D.Ucan dkk. / Sensor dan Aktuator B 201 (2014) 545–

2.2. Aparat

Untuk studi amperometrik dan pengukuran voltametri siklik,

digunakan potensiostat Instrumen Palm (PalmSens, Houten, Belanda).
Semua pengukuran elektrokimia dilakukan dalam sel tiga elektroda
konvensional yang mengandung elektroda grafit (Ringsdorff Werke
GmbH, Bonn, Jerman, tipe RW001, diameter 3,05 mm dan porositas
13%) sebagai elektroda kerja, elektroda platinum sebagai elektroda
lawan, Ag /AgCl (3 M KCl jenuh dengan AgCl) elektroda (Metrohm,
Swiss) sebagai elektroda referensi. Dalam analisis amperometrik, data
diberikan sebagai rata-rata dari tiga pengukuran dan penurunan
standar dicatat sebagai:±SD. Semua pengukuran dilakukan pada
kondisi sekitar (25◦C). JEOL JSM-6400 model pemindaian mikroskop
elektron (SEM) digunakan untuk studi pencitraan permukaan.

Spektrum NMR diukur menggunakan spektrometer Bruker

Spectrospin Avance DPX-400 dan spektrometer Bruker Biospin
UltrashieldTM 300 MHz). Spektrum direkam menggunakan CDCl3
sebagai pelarut dan tetramethylsilane (TMS) sebagai referensi internal.
Berat molekul dan distribusi berat molekul (PDI) dari polimer
ditentukan oleh kromatografi permeasi gel, Viscotek TDA Max (Malvern
Instruments). Kolom dikalibrasi dengan standar polystyrene (polyCAL
Gambar 1. Sintesis representatif dari poli(diklorofosfazen) (2) dan
TDS PS-99K dan PS-235K). Laju aliran adalah 1 mL/menit poli[(metoksietoksi)etoksi-bersama3-formylphenoxy]phosphazene (3) mulai dari
tetrahidrofuran. Diferensial Scanning Calorimetry (DSC) digunakan monomer (1).
untuk mendapatkan suhu transisi gelas (TG) dan transisi primer lainnya
dari polimer. Termogram DSC direkam menggunakan kalorimetri
pemindaian diferensial berlian Perkin Elmer (DSC) pada laju
pemanasan 10 K/menit antara 150◦C dan +150 ◦C di bawah atmosfer 3.4. Sintesis poli[(metoksietoksi)etoksi-co-3-
nitrogen kering. Pemanasan kedua digunakan untuk penentuan suhu formilfenoksi] fosfazen (3)
transisi gelas (TG). Spektrum FT-IR polimer dan elektrolit polimer diukur
pada Varian 1000 FTIR 3-Hydroxybenzaldehyde (0,437 g, 3,59 mmol) dilarutkan dalam 10 mL THF dan ditambahkan
perlahan-lahan ke dalam 5 mL suspensi THF NaH (0,086 g, 3,59 mmol) dalam labu leher tiga alas

spektrometer. bulat 250 mL yang dilengkapi dengan refluks kondensor dalam penangas es . Kemudian
campuran diaduk selama setengah jam pada suhu kamar untuk memastikan bahwa reaksi telah
selesai. Ke dalam larutan ini ditambahkan poli(diklorofosfazen) (4,15 g, 35,85 mmol) dalam 40 mL

3. Eksperimental THF dan campuran reaksi diaduk pada refluks selama 6 jam dan didinginkan hingga suhu kamar.
Larutan garam natrium dari dietilen glikol metil eter dibuat dengan menambahkan

3.1. Sintesis monomer, SNS-NH2 dietilenaglikol metil eter secara perlahan (10,3 g, 88,5 mmol) ke dalam 65 mL suspensi THF NaH
(1,96 g, 81,7 mmol) dalam penangas es dan kemudian direfluks sampai diperoleh larutan jernih.

4-(2,5-Di(tiofen-2-il)-1H-pirol-1-il)benzenamina (SNS- dalam 30 menit. Larutan ini kemudian ditambahkan perlahan-lahan ke dalam campuran reaksi

NH2) disintesis dan dikarakterisasi menurut metode yang dijelaskan dan direfluks selama 18 jam. Campuran reaksi dipekatkan dan didialisis terhadap air selama dua

sebelumnya [26]. Dimulai dengan 1,4-di(2-thienyl)-1,4-butanedione dan hari, kemudian larutan NaOH 0,1 M selama 1 hari dan kemudian air selama dua hari lagi.

menggabungkannya dengan benzena-1,4-diamin dengan adanya asam Solusinya disaring dan pelarut dihilangkan di bawah vakum. Polimer yang diperoleh dilarutkan

propionat, monomer disintesis dan dimurnikan dengan kromatografi dalam THF dan diendapkan dalam petroleum eter dan dikeringkan di bawah vakum tinggi

kolom. Produk diperoleh sebagai padatan kuning pucat yang mewakili setidaknya selama dua hari sampai tercapai berat konstan. 7,89 g (78%) polimer diisolasi

monomer yang diinginkan. (Gambar 1). Polimer yang diperoleh dilarutkan dalam THF dan diendapkan dalam petroleum eter
dan dikeringkan di bawah vakum tinggi setidaknya selama dua hari sampai tercapai berat
konstan. 7,89 g (78%) polimer diisolasi (Gambar 1). Polimer yang diperoleh dilarutkan dalam THF

3.2. Sintesis trikloro (trimetilsilil)fosforanimin (monomer) (1) dan diendapkan dalam petroleum eter dan dikeringkan di bawah vakum tinggi setidaknya
selama dua hari sampai tercapai berat konstan. 7,89 g (78%) polimer diisolasi (Gambar 1).1H NMR
(CDCl3): = 3,99 (br, 2H), 3,67 (br, 2H),

Sintesis monomer trikloro (trimetilsilil)fosforanimin (Cl .)3 = NSiMe3)
dilakukan sesuai dengan prosedur yang dijelaskan oleh Wang et al.
[27] dengan sedikit modifikasi [28].
3.3. Sintesis poli(diklorofosfazen) (2)
Polimer disintesis dari trikloro (trimetilsilil)fosforanimin melalui
polimerisasi kationik hidup menggunakan rute yang dikembangkan
oleh Allcock et al. [29]. Rasio molar monomer terhadap PCl5 disimpan
sekitar 350:1. Konsentrasi PCl5 dalam larutan polimerisasi adalah
0,0027 mol/L. Polimer ini digunakan sebagai polimer prekursor untuk
sintesis polimer target melalui reaksi substitusi makromolekul.Gambar
1).
3,56 (br, 2H), 3,44 (br, 2H), 3,28 (3H) untuk gugus (metoksietoksi)etoksi
dan sekitar 7,5 sinyal aromatik (4H) dan 9,91 gugus aldehida (1H) untuk
gugus 3-formilfenoksi. 13C NMR (CDCl3): = 72.0,
70.3, 68.0, 65.2, 58.9 untuk bagian (metoksietoksi)etoksi dan tidak
terlihat untuk bagian 3-formilfenoksi. 31P NMR (CDCl3): = 7,71 (s besar
tajam) dan 2,82 (s kecil lebar). FT-IR: PN (1231 cm1), POC (1200 dan
1046 cm1), COC (1107 cm1). Satu puncak diamati dalam pengukuran
GPC dengan berat molekul rata-rataMn = 628,800 D dan indeks
polidispersitas (PDI) 1,06 (lihat Informasi Pendukung untuk spektrum
NMR dan FTIR).
3.5. Pembuatan poli(SNS-NH2)/PPA/GOx biosensor
Polimer konduktor, poli(SNS-NH2), secara elektrokimia
disintesis ke grafit yang sebelumnya dipoles dan dibersihkan
548
Gambar 2. Voltammogram siklik untuk polimerisasi SNS-NH2
NaClO4/LiClO4/Sistem pelarut elektrolit ACN pada kecepatan pemindaian 100 mV s1
pada grafit (hingga 20 siklus).
elektroda. Polimer dielektropolimerisasi pada elektroda dalam 0,1 M
NaClO4/LiClO4/ACN elektrolit/sistem pelarut dengan 40 siklus melalui
pemindaian potensial antara 0,5 V dan +1,2 V dengan voltametri siklik.
Setelah polimerisasi, permukaan elektroda yang dilapisi polimer dibilas
dengan air deionisasi untuk menghilangkan kotoran organik. 20 siklus
pertama polimerisasi ditunjukkan pada:Gambar 2..
Sebelum imobilisasi GOx, larutan PPA 91,5 mg/mL dibuat dengan
melarutkan PPA dalam air deionisasi dan disonikasi selama 15 menit
untuk mendapatkan larutan yang jernih. Jumlah yang sesuai dari
larutan ini diencerkan dengan 50 mM larutan dapar fosfat (pH 7)
dengan perbandingan 1:1 untuk menghasilkan larutan PPA 50% dalam
dapar. Solusi ini disiapkan sebelum setiap imobilisasi, dengan segar.
Untuk immobilisasi enzim, 5,0 L alikuot larutan PPA ini, sejumlah
larutan GOx yang sesuai (2,60 mg (45,0 U) dalam 5,0 L, 50 mM buffer
natrium fosfat (pH 7,0)) dicampur dalam vial dan diimobilisasi pada poli
(SNS-NH2) permukaan elektroda grafit dilapisi dengan bantuan
1,0% glutaraldehid dalam 5,0 L 50 mM buffer natrium fosfat (pH
7.0). Ini diikuti dengan pengeringan pada suhu kamar untuk
menguapkan pelarut selama 2 jam. Elektroda enzim kemudian dibilas
dengan air suling untuk menghilangkan enzim yang tidak terikat dan
pengikat silang. Elektroda disimpan dalam lemari es pada suhu 4◦C
semalam. Solusi disiapkan baru sebelum persiapan biosensor.
3.6. Pengukuran elektrokimia
Pengukuran amperometrik menggunakan biosensor yang telah
disiapkan dilakukan dalam sel reaksi yang mengandung 10 mL 50 mM
larutan buffer natrium asetat (pH 4,5) sambil diaduk perlahan.
Pengukuran dilakukan di bawah potensial konstan; 0,7 V versus Ag/
AgCl. Setelah arus mencapai keadaan tunak, larutan substrat, glukosa,
disuntikkan ke sel reaksi dalam jumlah yang tepat dan perubahan arus
( A) yang dihasilkan dari aktivitas katalitik enzim diikuti. Dalam reaksi
itu, -D-glukosa dioksidasi menjadi glukonolakton yang kemudian
dihidrolisis menjadi asam glukonat. Secara bersamaan, oksigen
dikonsumsi untuk menghasilkan hidrogen peroksida[30]. Pada
potensial yang ditentukan, konsumsi oksigen diikuti dan dikorelasikan
dengan glukosa yang dikonsumsi dalam pengukuran amperometrik
yang menunjukkan aktivitas biosensor. Larutan buffer yang digunakan
dalam sel reaksi disegarkan dan biosensor dibilas dengan air suling
setelah setiap pengukuran. Substrat, glukosa, larutan stok disiapkan
dalam larutan buffer dan disimpan dalam gelap dan lemari es.
Tors B 201 (2014) 545–554
3.7. Contoh aplikasi
Biosensor diuji pada berbagai minuman yang mengukur kadar
glukosa di dalamnya. Minuman tersebut digunakan sebagaimana
adanya tanpa perlu perlakuan pendahuluan. Selama pengukuran, alih-
alih glukosa, minuman disuntikkan ke dalam sel reaksi dan respons
biosensor dicatat. Menggunakan kurva kalibrasi untuk glukosa, kadar
glukosa dihitung. Sampel yang sama juga diuji dengan kit uji enzim
komersial untuk pengukuran glukosa (MANUSIA 10260, Glucose
Liquicolor, Wiesbaden, Jerman). Kit uji enzim ini didasarkan pada
metode GOx-PAP termasuk glukosa oksidase, peroksidase, fenol dan 4-
aminofenazon. Tes kolorimetri tergantung pada oksidasi enzimatik
glukosa dengan bantuan glukosa oksidase. Hidrogen peroksida,
produk,[31,32].
dalam 0,1 M
4. Hasil dan diskusi
4.1. Karakterisasi polifosfazen (PPA) (3)
Polimer target diselidiki menggunakan NMR, FT-IR, DSC dan GPC.
Substitusi makromolekul polimer dilakukan terutama menggunakan
rantai samping oligoeter untuk mempertahankan kelarutan dalam air
dengan sejumlah kecil bagian aldehida untuk interaksi lebih lanjut
dengan enzim.1Spektrum H NMR polimer menunjukkan terutama
puncak karakteristik oligoeter, sinyal kelompok 3-formilfenoksi seperti
yang diharapkan sangat minggu. Rasio proton metil pada 3,28 ppm
dengan proton aldehida pada 9,91 ppm harus secara statistik 30 dan
rasio ini dikonfirmasi oleh integrasi sinyal yang sesuai dalam1Spektrum
H NMR (seperti yang ditunjukkan pada Informasi pendukung, Gambar.
S1). Meskipun proton NMR memberikan petunjuk untuk struktur
polifosfazen yang disintesis,31P NMR polimer memberikan hasil yang
lebih signifikan dalam hal pola substitusi dan kelengkapan
penggantian makromolekul (seperti yang ditunjukkan pada Informasi
Pendukung, Gambar. S3). Pertama-tama, hilangnya puncak tajam
tunggal PDCP di sekitar 18 ppm disertai dengan dua sinyal yang
diharapkan dari polifosfazen yang disintesis di sekitar 8 ppm dan 3
ppm. Ini menunjukkan penggantian lengkap atom klorin dari
poli(diklorofosfazen). Sinyal besar di sekitar 8 ppm ditetapkan untuk
unit berulang yang sepenuhnya digantikan oleh oligoeter
[7] dan sinyal kecil di sekitar 3 ppm dikaitkan dengan unit pengulangan
tersubstitusi campuran. Rasio unit berulang dihitung sebagai 0,91-0,09
dengan memperhitungkan dua sinyal ini dan hasilnya cukup dekat
dengan komposisi polimer target 0,90-0,10.
Jumlah dan berat rata-rata berat molekul dari polifosfazen yang
diperoleh diperkirakan oleh GPC relatif terhadap polistirena.
Polimerisasi kationik hidup dengan rasio monomer terhadap polimer
350:1 menyiratkan distribusi berat molekul yang sempit dan rantai
polimer polifosfazen harus mengandung sekitar 700 unit berulang
(karena dua spesies inisiator digunakan per rantai). Asumsi ini berarti
berat molekul harus sekitar 2× 105 D, betapapun berat molekulnya jauh
lebih tinggi (sekitar 6 × 105 D) diperkirakan dengan pengukuran.
Meskipun, perkiraan berat molekul polifosfazen yang berlebihan oleh
GPC diketahui, lompatan berat molekul yang tinggi seperti itu dapat
dihasilkan baik dari hilangnya inisiator selama proses polimerisasi
(karena rasio monomer terhadap inisiator meningkat, berat molekul
meningkat tetapi distribusi sempit dipertahankan) atau ikatan silang
parsial dari rantai polifosfazen selama reaksi perpindahan
makromolekul karena pengotor terutama air (baik berat molekul dan
 D.Ucan dkk. / Sensor dan Aktuator B 201 (2014) 545–
polidispersitas meningkat). Penjelasan sebelumnya dapat
diperhitungkan karena indeks polidispersitas dari distribusi berat
molekul polimer diperkirakan sangat mendekati satu. Tidak ada ikatan
silang yang diamati dan polimer larut dalam pelarut umum seperti
THF, dioksan, kloroform dan air.
Struktur juga dikonfirmasi dengan spektrum FT-IR. PN meregang
pada 1231 cm1 dikaitkan dengan adanya struktur phosphazene
polimer tinggi. Dua puncak POC yang diharapkan ditetapkan ke 1200
cm1 dan 1046 cm1. Adanya rantai samping oligoeter diidentifikasi oleh
pita regangan COC yang kuat pada 1107 cm1. Karena konsentrasi
gugus 3-formilfenoksi pada rantai polimer agak rendah, puncak
aldehida yang diharapkan sekitar 1700 cm1 ditunjukkan sebagai bahu
lemah dari sinyal oligoeter luas pada 1640 cm1.
Sifat termal polimer diselidiki menggunakan DSC. Seperti yang
diharapkan, tidak ada kristalinitas yang diamati pada termogram. NSTG
nilai polimer adalah 81.5 ◦C dan sesuai dengan yang dilaporkan TG nilai
poly[bis(methoxyethoxy)ethoxy phosphazene] dalam literatur [7].
4.2. Studi optimasi dalam persiapan biosensor
Sebuah biosensor harus dirancang untuk penggunaan berulang
dan jangka panjang. Biosensor harus stabil dan dapat direproduksi
untuk aplikasi sampel nyata. Untuk memiliki biosensor seperti itu,
semua kondisi yang mempengaruhi kinerja biosensor harus
dioptimalkan dan dijaga agar tidak berubah selama pengukuran.
Hasilnya, semua parameter yang mempengaruhi aktivitas biosensor
dioptimalkan. Dalam setiap kasus, salah satu parameter seperti jumlah
enzim diubah dalam beberapa biosensor dan semua parameter lain
seperti ketebalan lapisan polimer konduksi, jumlah PPA dan
glutaraldehid, pH dijaga konstan untuk melihat satu-satunya efek dari
satu parameter.
Khususnya pada biosensor berbasis enzim, matriks imobilisasi memiliki
dampak besar pada kualitas dan kinerja biosensor. Matriks yang dirancang
dengan baik dapat memperpanjang umur simpan biosensor dengan
mempertahankan struktur 3D enzim di mana mereka tertanam. Untuk tujuan ini,
polimer konduktor adalah kandidat yang sempurna untuk dapat menjaga enzim
tetap hidup pada saat yang sama tetap pada permukaan transduser.
[33,34].
Dalam penelitian ini, teknik imobilisasi ikatan kovalen dan jebakan
digunakan bersama-sama. Pengikatan kovalen yang berlebihan dari
biomolekul ke bahan pendukung dapat menyebabkan perubahan
ireversibel dalam konformasi alami biomolekul karena fiksasi yang
tidak tepat. Demikian pula, teknik imobilisasi jebakan sulit diterapkan
ketika memilih bahan sebagai jaringan enkapsulasi. Bahan seperti
membran harus menjaga biomolekul pada permukaan elektroda serta
memungkinkan substrat untuk mencapai situs aktif biomolekul. Kedua
teknik memiliki pro dan kontra; namun, menggunakannya dalam
kombinasi dengan cara yang terkontrol dapat memberikan hasil yang
lebih baik dibandingkan dengan teknik tunggal.
Untuk mendapatkan orientasi dan pengikatan enzim yang tepat
pada polimer penghantar terfungsionalisasi amino, poli(SNS-NH2),
ketebalan lapisan polimer dioptimalkan. Itu disesuaikan selama
elektropolimerisasi. Nomor siklus (pemindaian) dalam polimerisasi
menentukan muatan yang disimpan pada film polimer begitu juga
ketebalan lapisan polimer konduktif. Untuk mencari ketebalan
optimum, poli(SNS-NH2) diendapkan ke elektroda grafit dengan nomor
pindai 25, 40, 55, 70 sedangkan parameter lainnya tetap sama (
Gambar 3). Respons biosensor terhadap jumlah glukosa yang sama
dicatat dan dibandingkan. Kinerja biosensor tertinggi diamati dengan
elektroda yang memiliki 40 siklus polimer. Hal ini menunjukkan bahwa
pada ketebalan polimer yang lebih tinggi, karena adanya gugus amino
yang berlebihan pada lapisan polimer, ikatan kovalen lebih dari cukup
yang menyebabkan hilangnya aktivitas.
Gambar 3. Efek poli(SNS-NH2) ketebalan film pada respon biosensor (dalam pH 4,5 50
mM buffer natrium asetat, 25 ◦C, 0,7 V, [glukosa]: 0,7 mM). Bilah kesalahan menunjukkan
standar deviasi (SD) dari tiga pengukuran.
enzim yang menghasilkan sinyal rendah. Sebaliknya, ketika lapisan polimer
lebih tipis dari yang diharapkan, imobilisasi lebih buruk; maka molekul-
molekul enzim diimobilisasi secara longgar sehingga menyebabkan aktivitas
rendah lagi. Hasilnya, 40 siklus dipilih sebagai nomor pindaian optimal
dalam elektropolimerisasi yang sesuai dengan ketebalan 64,0 nm (setara
dengan 2,80 mC) dan digunakan dalam penelitian lebih lanjut.
Untuk meningkatkan imobilisasi, polimer turunan polifosfazen,
poli[(metoksietoksi)etoksi-bersama3-formylphenoxy] phosphazene
(PPA) digunakan bersama dengan polimer konduktor. PPA dipikirkan
dan dirancang untuk imobilisasi enzim sebagai kandidat yang
sempurna karena memiliki gugus liontin aldehida bebas yang terbuka
untuk dihubungkan dan larut dalam air. Ini mudah dilarutkan dalam
air dan bergabung dengan enzim sambil dicetak pada permukaan
pendukung yang diinginkan. Karena nyaman untuk memiliki campuran
enzim-polifosfazen dalam satu fase medium, mudah untuk diterapkan
pada permukaan. Setelah penguapan air di permukaan, polimer dapat
merangkum molekul enzim sebagai jaringan dan dengan pori-pori
dalam struktur, ini memungkinkan difusi yang mudah dari analit dan
molekul produk ke dan dari lingkungan biomolekul sambil menjaga
molekul enzim tidak bergerak dalam matriks polimer substrat untuk
menyebarkan lingkungan biomolekul sambil menjaga molekul enzim
di permukaan. Selain itu, polifosfazen yang disintesis memiliki gugus
aldehida bebas. Mereka terjadi dalam pembentukan ikatan imina
dengan gugus amino bebas dari molekul enzim ketika mereka
berinteraksi satu sama lain untuk waktu tertentu[35,36]. Oleh karena
itu, jebakan didukung dengan ikatan kovalen. Untuk mendapatkan
kombinasi terbaik yang menghasilkan respon biosensor tertinggi,
jumlah PPA dalam larutan enzim selama imobilisasi dioptimalkan.
Setelah poli(SNS-NH2) dilapisi pada elektroda, beberapa elektroda
dengan rasio PPA yang berbeda dalam campuran enzim disiapkan.
9,51 mg/mL larutan PPA dalam air diencerkan dengan 50 mM larutan dapar
fosfat (pH 7,0) (PBS) dalam rasio 0,5:1, 1:1, 1,5:1, 2:1 untuk PPA dalam air:
PDS untuk menghasilkan 33, 50, 60, 67% larutan PPA dalam buffer. 5 L
larutan tersebut digunakan untuk mencampur dengan 45,0 U GOx yang
mengandung larutan buffer untuk imobilisasi. Respons biosensor untuk
konsentrasi glukosa yang berbeda dicatat dan digambarkan dalam
Gambar 4. Jelas terlihat bahwa polifosfazen memiliki kontribusi besar terhadap
sensitivitas biosensor dalam hal sinyal yang lebih tinggi yang menunjukkan
peningkatan dalam imobilisasi. Namun, ketika rasio PPA dibandingkan, tidak
banyak perbedaan yang terlihat antara tiga yang pertama. Dengan yang
mengandung 50% PPA, adalah mungkin untuk mendeteksi konsentrasi glukosa
yang lebih rendah dengan sinyal yang lebih tinggi; demikian juga, sementara
yang lain mencapai saturasi sekitar 0,5 mM kadar glukosa, memberikan sinyal
superior dibandingkan dengan mereka. Karena jebakan yang berlebihan dan
kemungkinan ikatan kovalen, 67% PPA yang mengandung biosensor memberikan
550
Gambar 4. Pengaruh polifosfazen pada respon biosensor (dalam pH 4,5 50 mM buffer
natrium asetat, 25 ◦C, 0,7 V). Bilah kesalahan menunjukkan standar deviasi (SD) dari tiga
pengukuran.
sinyal yang lebih rendah sebagai akibat dari masalah difusi dan
kemungkinan denaturasi molekul enzim. Oleh karena itu, jumlah PPA
50% dipilih sebagai jumlah polifosfazen yang optimal.
Untuk memiliki sinyal biosensor yang lebih tinggi, untuk meningkatkan
jumlah enzim mungkin merupakan strategi yang baik; Namun, jumlah enzim juga
harus dioptimalkan untuk mendapatkan respons biosensor tertinggi. Karena
matriks imobilisasi memiliki kapasitas pemuatan enzim, lebih dari itu tidak dapat
diperbaiki pada permukaan elektroda dan selama pengukuran maka kehilangan
enzim dapat diamati. Sebaliknya, dalam jumlah enzim yang lebih rendah, karena
tidak adanya respons yang lebih tinggi, respons biosensor terhadap konsentrasi
substrat yang lebih rendah mungkin terlalu kecil untuk dideteksi yang
menyebabkan sensitivitas yang lebih rendah. Mempertimbangkan semua kasus
ini, empat elektroda berbeda disiapkan dengan mengubah jumlah enzim dari 37,2
U menjadi 50,9 U (2,15-2,94 mg) GOx. Respons biosensor ditunjukkan dalam
Gambar 5. Respon tertinggi diperoleh dengan menggunakan 45.0 U GOx dalam
preparasi biosensor sebagai hasil dari interaksi dan ikatan yang lebih baik dengan
matriks polimer. Dengan demikian, enzim 45,0 U digunakan untuk langkah-
langkah percobaan lebih lanjut.
Glutaraldehid (GA) digunakan sebagai agen pengikat silang dalam
preparasi biosensor. Selain pembentukan ikatan imina antara matriks
PPA dan enzim, GA dengan aktivitasnya yang tinggi digunakan untuk
meningkatkan imobilisasi melalui pengikatan pada gugus fungsi amino.
penyangga pengikat silang
tion dan meningkatkan
Gambar 5. Pengaruh jumlah enzim terhadap respon biosensor (pada pH 4,5 50 mM
buffer natrium asetat, 25 ◦C, 0,7 V). Bilah kesalahan menunjukkan standar deviasi (SD)
dari tiga pengukuran.
Tors B 201 (2014) 545–
Gambar 6. Pengaruh crosslinker, GA, pada respon biosensor (dalam pH 4,5 50 mM
buffer natrium asetat, 25 ◦C, 0,7 V, [glukosa]: 0,7 mM). Bilah kesalahan menunjukkan
standar deviasi (SD) dari tiga pengukuran.
pada polimer. 0,25%, 0,5%, 1,0% dan 1,3% nilai GA diuji (Gambar 6). 1%
GA ditemukan sebagai nilai optimum.
Selanjutnya, pH lingkungan kerja juga mempengaruhi kinerja
biosensor. Nilai pH yang tidak sesuai dari larutan tempat biosensor
disimpan dapat menyebabkan denaturasi molekul enzim.
Ketergantungan pH dari respon diselidiki pada rentang pH antara 4,0
dan 6,5 dengan 50 mM buffer natrium asetat pada 4,0-5,5 dan 50 mM
buffer fosfat pada 6,0; 6,5, 25◦C. Hasil terbaik dicapai pada larutan
buffer natrium asetat pH 4,5 seperti yang diberikan pada Gambar 7.
Selain itu, untuk melihat efektivitas matriks imobilisasi, kepentingan
dan kontribusi semua komponen, tiga biosensor disiapkan dan
hasilnya ditunjukkan pada gambar. Gambar 8. Ketika enzim dicor pada
permukaan elektroda telanjang (elektroda GOx), sangat sulit untuk
merekam respons yang signifikan. Secara khusus, ketika poli(SNS-NH2)
digunakan sebagai tunggal, tanggapan yang lebih rendah diperoleh.
Sebaliknya, ketika PPA disumbangkan ke dalam matriks imobilisasi,
sinyal-sinyal itu sangat ditingkatkan. Rentang linier dan sensitivitas
ditingkatkan yang menunjukkan efektivitas platform imobilisasi
gabungan.
4.3. Karakterisasi
Teknik pemindaian mikroskop elektron (SEM) digunakan untuk
menganalisis
modifikasi. Ara.
tion di permukaan
Gambar 7. Pengaruh pH (dalam buffer natrium asetat, 50 mM, pada pH 4.0, 4.5, 5.0, 5.5 dan
dalam buffer natrium fosfat, 50 mM, pada pH 6.0, 6.5, 25 ◦C, 0,7 V, [Glukosa]: 0,7 mM). Bilah
kesalahan menunjukkan standar deviasi dari tiga pengukuran.

Gambar 8. Pengaruh matriks imobilisasi pada respon biosensor dalam kondisi optimal
(dalam pH 4,5 50 mM buffer natrium asetat, 25 ◦C, 0,7 V). Bilah kesalahan menunjukkan
standar deviasi (SD) dari tiga pengukuran.
polifosfazen (PPA). Di dalamGambar 9(B), terlihat kombinasi PPA dan
GOx. Karena kelarutan PPA dalam air, GOx dan PPA terintegrasi satu
sama lain dengan sangat baik dan interaksi antarmuka yang kaya
diamati. Di dalamGambar 9(C), GOx poli amobil (SNS-NH2) permukaan
terlihat. Dibandingkan dengan (B), diperoleh morfologi yang lebih
halus. Poli konduktor
homogen dan seragam dengan
tanggal untuk immobilisasi enzim
Gambar 9. Karakteristik permukaan (A) polyphosphazene (PPA), (B) GOx immobilized PPA, (C) GOx immobilized poly(SNS-NH)2) dan (D) GOx amobil poli(SNS-NH2)/PPA permukaan
melalui gambar SEM.
Tors B 201 (2014) 545–554 551
struktur, Gambar 9(D), ketiga komponen diintegrasikan dan gambar
untuk poli(SNS-NH2)/PPA/GOx mewakili 3D dan biolayer yang terjadi
secara bebas tercapai. Struktur berpori dan berlekuk menunjukkan
bahwa pada platform imobilisasi ini, molekul enzim dapat dengan
bebas diorientasikan dan mempertahankan struktur 3D signifikannya
setelah imobilisasi. Ini membawa efektivitas platform sebagai matriks
imobilisasi. Setelah imobilisasi, molekul enzim harus mempertahankan
aktivitasnya begitu juga struktur 3D agar dapat mengkatalisis reaksi
enzimatik. Selain itu, seperti yang terlihat, PPA tidak menutupi biolayer
secara berlebihan; sebaliknya, ini mendukung aktivitas enzim sambil
menahannya dalam konformasi yang sesuai.
Karakterisasi analitik biosensor glukosa dilakukan dengan
pembuatan kurva kalibrasi untuk glukosa. Respons biosensor untuk
berbagai konsentrasi glukosa dicatat dan kurva kalibrasi dengan
rentang linier diperoleh (Gambar 10). Biosensor menunjukkan
linearitas sempurna dalam rentang yang luas, rentang konsentrasi
0,01-0,9 mM untuk glukosa. Rentang linier yang lebar selalu diinginkan
agar biosensor dapat bekerja dalam rentang sampel yang luas. Jika
dibandingkan dengan literatur, rentang linier poli(SNS-NH2)/PPA/GOx
biosensor baik dibandingkan dengan 0,01–05 mM untuk mikrosensor
Ru-Py-HRP-GOx/Nafion [37],
0,05–1,1 mM untuk biosensor Nafion/GOx/ Ag-Pdop@CNT /GCE[38]
dan 0,01–0,8 mM untuk biosensor GOx-CS/AgNWs/GCE [39]. Respons
biosensor khas untuk glukosa diberikan sebagai sisipan yang
membuktikan respons cepat terhadap glukosa. Karena keunggulan
matriks imobilisasi, substrat dapat dengan mudah mencapai situs aktif
molekul enzim pada permukaan elektroda dan reaksinya bersifat kat-
dengan nyaman
mmobiliza-
kapasitas dari
552
Gambar 10. Kurva kalibrasi untuk glukosa (dalam pH 4,5 50 mM buffer natrium asetat, 25 ◦C,
0,7V). Bilah kesalahan menunjukkan standar deviasi (SD) dari tiga pengukuran. (Sinyal
amperometrik khas untuk 0,70 mM etanol dalam pH 4,5 50 mM buffer natrium asetat
diberikan sebagai sisipan.)
biosensor untuk merasakan sejumlah kecil substrat. Batas deteksi
diperkirakan 1,3 M menurut S/N = 3 yang lebih rendah dibandingkan
dengan penelitian lain. Misalnya, biosensor glukosa oksidase yang
disiapkan dengan karbon mesopori terurut (OMC) yang didukung
nanopartikel platinum (Pt/OMC) memberikan LOD sebagai 50 M[40].
Dalam contoh lain, berdasarkan glukosa oksidase yang diimobilisasi
olehHai-fenilendiamina (HaiPD) pada nanopartikel platinum (PtNPs)
yang dielektrodeposisi polivinilferrocenium perklorat
matriks (PVF+ClO -4 ), LOD ditemukan sebagai 18 M. [41]. Lebih-lebih lagi,
Sensitivitas diperkirakan sebesar 237,1 mA/M cm2 yang sangat tinggi
jika dibandingkan dengan biosensor glukosa lainnya seperti biosensor
graphene-nano Au–GOx–GCE yang memiliki 56,93 mA/M cm2
[42], GOx–In2HAI3–kitosan/GCE memiliki 7,3 mA/M cm2 [43] dan GOx/
TCS-TiO2/chitosan/GCE biosensor dengan 23,2 mA/M cm2 [44]
kepekaan (Gambar 11).
Konstanta Michaelis-Menten (KM) dianggap sebagai
kator afinitas enzim terhadap substratnya yang digunakan untuk
memahami kinetika reaksi. Ini dapat digunakan untuk memahami
perilaku enzim atau bioaktivitas dan ketersediaan hayati enzim setelah
immobiliz
enzim mo
Gambar 11. Respons biosensor selama 37 hari (dalam pH 4,5 50 mM buffer natrium
asetat, glukosa: [0,5 mM], 25 ◦C, 0,7 V). Bilah kesalahan menunjukkan standar deviasi (SD)
dari tiga pengukuran.
ors B 201 (2014) 54
Gambar 12. Respons biosensor terhadap glukosa dan kemungkinan spesies yang mengganggu (dalam pH
4,5 50 mM buffer natrium asetat, 25 ◦C, 0,7 V).
(K M
aplikasi) dihitung untuk poli(SNS-NH2)/PPA/GOx biosensor sebagai
0,676 mM dan Sayamaksimal sebagai 20,91 A menurut persamaan Lineweaver-Burk
[45]. semakin rendahKM nilai adalah tanda afinitas yang lebih tinggi dari molekul
GOx amobil terhadap glukosa. Kami memperoleh nilai yang tinggi
lebih rendah KM
aplikasi dibandingkan dengan 9,85 mM, 5,46 mM, 11,1 mM, 10,0 mM
dan GOx gratis [38,41,46–48].
Performa luar biasa dari biosensor dalam hal sensitivitas, waktu
respons LOD dapat dikaitkan dengan matriks imobilisasi dan persiapan
biosensor. Polimer konduktor tidak hanya memperluas permukaan
elektroda dengan luas permukaan yang lebih tinggi dan memberikan
permukaan yang lebih baik untuk imobilisasi tetapi juga meningkatkan
reaksi katalitik pada permukaan elektroda dengan elektroaktivitasnya
yang sangat baik; sementara polifosfazen menghasilkan jaringan yang
tepat untuk menjebak molekul enzim dengan memanfaatkan kelarutan
air dan konjugasi melalui gugus aldehida.
4.4. Studi stabilitas dan interferensi
Stabilitas operasional poli(SNS-NH2)/PPA/GOx biosensor
diperkirakan dengan mengukur 0,7 mM glukosa untuk 10 kali selama
periode 8 jam dan deviasi standar relatif (RSD) adalah 4,86% indikasi
reproduktifitas deteksi yang baik. Masa simpan dan stabilitas
penyimpanan biosensor dideteksi dengan merekam respons biosensor
untuk 0,5 mM glukosa setiap hari selama 37 hari. Di antara
pengukuran, biosensor disimpan pada 4◦C. Biosensor menunjukkan
aktivitas yang unggul selama periode ini dengan 95%
mempertahankan aktivitas awalnya. Alasan yang mungkin untuk
stabilitas yang jelas ini mungkin adalah lingkungan mikro yang
sempurna yang disediakan oleh kombinasi polimer organik dan
anorganik. Selain itu, struktur polifosfazen yang seperti membran dan
pengikatan kovalen yang cukup berkontribusi pada pemeliharaan
struktur dan aktivitas molekul GOx pada permukaan elektroda. Ini
terlihat bahwa biosensor dapat digunakan untuk studi jangka panjang
dengan platform imobilisasi yang menguntungkan.
Untuk memiliki biosensor yang andal dan dapat diterapkan, ia
harus bekerja tanpa gangguan. Untuk melihat efek dari beberapa
pengganggu yang mungkin, spesies pengganggu yang dapat
dioksidasi seperti asam askorbat, kolesterol dan urea diuji dalam
kisaran konsentrasi 0,01 mM hingga 0,1 M. Selama pengukuran
amperometrik, alih-alih glukosa, spesies ini disuntikkan ke sel reaksi.
Tidak ada efek interferensi yang diamati di semua aplikasi (Gambar 12
). Namun, setelah penambahan berbagai jumlah glukosa, sinyal yang
jelas untuk glukosa diperoleh menunjukkan kerja yang tepat dan
selektivitas biosensor dalam lingkungan yang kaya interferensi.
 D.Ucan dkk. / Sensor dan Aktuator B 201 (2014) 545–554
Tabel 1
Deteksi glukosa dalam minuman (Semua pengukuran dilakukan tiga kali; standar deviasi
dihitung dan diberikan sebagai ± SD.).
Sampel Glukosa (M)
Spektrofotometri Poli(SNS-NH2)/PPA/GOx
C® Soda 0,076 0,077 ± 0,0071
E® Limun 0,183 0,170 ± 0,0030
L® Es teh 0,035 0,052 ± 0,0110
C® jus jeruk 0.107 0,100 ± 0,0108
4.5. Contoh aplikasi
Kelayakan biosensor untuk deteksi sampel nyata sebagai detektor
potensial diselidiki dengan menganalisis beberapa minuman
komersial. Kandungan glukosa sampel dihitung dari kurva kalibrasi
dengan mengukurnya dalam pengukuran amperometrik, bukan
glukosa tanpa perlakuan awal. Seperti yang ditunjukkan padaTabel 1,
kadar glukosa yang ditentukan mendekati nilai yang diperoleh dengan
spektrofotometri katalitik enzimatik. Hasilnya sesuai dengan data kami
yang menunjukkan bahwa biosensor baru dapat digunakan untuk
pengujian sampel praktis dengan akurasi dan presisi yang andal.
5. Kesimpulan
Dalam penelitian ini, kami mensintesis turunan polifosfazen
hidrofilik fleksibel baru, poli[(metoksietoksi)etoksi-bersama3-
formylphenoxy]phosphazene, PPA, dan mengembangkan biosensor
glukosa baru berdasarkan polimer konduktor, poli(4-(2,5-di(thiophen-2-
yl)-1H-pirol-1-il)benzenamina) (poli(SNS-NH .)2)), dalam kombinasi
dengan PPA sebagai platform imobilisasi baru untuk enzim. Elektroda
grafit dilapisi dengan polimer konduktor. Kemudian, enzim
diimobilisasi bersama dengan PPA yang larut dalam air. Karena adanya
gugus amino dalam polimer konduktor dan gugus aldehida pada PPA,
GOx mudah diimobilisasi secara kovalen dan efektif. Kondisi untuk
imobilisasi dioptimalkan. Biosensor dikarakterisasi dalam hal morfologi
permukaan, jangkauan linier, LOD, sensitivitas dan afinitas terhadap
glukosa. Diamati bahwa biosensor menunjukkan sensitivitas dan
afinitas ekstrim terhadap glukosa yang membawa sinyal yang lebih
tinggi dan batas deteksi yang lebih rendah untuk glukosa. Situasi ini
dapat dikaitkan dengan efektivitas dan kinerja matriks imobilisasi yang
baru dirancang. Lebih-lebih lagi, Kinerja biosensor glukosa diuji pada
minuman yang mengandung glukosa. Dengan kapasitas kerjanya yang
bebas gangguan, biosensor GOx menunjukkan kinerja yang
memuaskan dalam pengukuran sampel nyata dengan akurasi tinggi.
Lampiran A. Data tambahan
Data tambahan yang terkait dengan artikel ini dapat ditemukan,
dalam versi online, di http://dx.doi.org/10.1016/j.snb.2014.05.040.
Referensi
[1] M. Kesik, FE Kanik, G. Hizalan, D. Kozanoglu, EN Esenturk, S. Timur, et al., Matriks
imobilisasi fungsional berdasarkan polimer konduktor dan nanopartikel emas
terfungsionalisasi: sintesis dan aplikasinya sebagai biosensor glukosa
amperometrik, Polimer 54 (2013) 4463–4471.
[2] P. Yang, L. Wang, Q. Wu, Z. Chen, X. Lin, Metode untuk penentuan glukosa oleh
biosensor bienzim amperometrik berdasarkan elektroda Au yang dimodifikasi
nanokubus perak, Sens. Aktuator B: Chem. 194 (2014) 71–78.
[3] M. Moyo, JO Okonkwo, NM Agyei, Sebuah biosensor amperometrik berdasarkan
lobak peroksidase yang diimobilisasi ke nanotube karbon berdinding multi-rumbai
jagung yang dimodifikasi elektroda karbon kaca untuk penentuan ion logam berat
dalam larutan berair, Enzyme Microb. Teknologi 56 (2014) 28–34.
553
[4] S. Soylemez, FE Kanik, SD Uzun, SO Hacioglu, L. Toppare, Pengembangan matriks
imobilisasi yang efisien berdasarkan polimer konduktor dan nanotube karbon
multiwall yang difungsikan: sintesis dan penerapannya pada biosensor etanol, J.
Mater. Kimia 2 (2014) 511–521.
[5] M. Kesik, O. Kocer, FE Kanik, NA Unlu, E. Rende, E. Aslan-Gurel, et al., Desain
permukaan yang efektif dan fungsional untuk aplikasi biosensing berdasarkan
polimer konduktor baru dan nanokomposit PMMA/tanah liat, Elektroanalitik 25
(2013) 1995–2006.
[6] M. Baghayeri, E. Nazarzadeh Zare, M. Mansour Lakoraj, Sebuah biosensor hidrogen
peroksida sederhana berdasarkan poli elektro-magnetik baru (P-
phenylenediamine)@Fe3HAI4 nanokomposit, Biosens. Bioelektron. 55 (2014) 259–
265.
[7] HR Allcock, Kimia dan Aplikasi Polyphosphazenes, John Wiley & Sons, New Jersey,
2003.
[8] M. Gleria, JR De (Eds.), Phosphazenes A Worldwide Insight, Nova Science Publishers,
Inc., New York, 2004.
[9] CT Laurencin, AMA Ambrosio, polyphosphazenes Biodegradable untuk aplikasi
biomedis, dalam: R. Arshady (Ed.), Polimer Biodegradable, Citus Books, London,
2003, hlm. 153-173.
[10] CT Laurencin, LS Nair, serat nano Polyphosphazene untuk aplikasi biomedis: studi
pendahuluan, dalam: S. Guceri, YG Gogotsi, V. Kuznetsov (Eds.), Seri Sains NATO, II:
Matematika, Fisika dan Kimia, Penerbit Akademik Kluwer, Dordrecht, 2004, hlm.
283–302.
[11] M. Heyde, E. Schacht, polifosfazen yang dapat terurai secara hayati untuk aplikasi
biomedis, dalam: M. Gleria, R. de Jaeger (Eds.), Aspek Aplikasi Poli (organofosfazen),
Nova Science Publishers, New York, 2004, hlm. 1– 32.
[12] M. Carenza, S. Lora, L. Fambri, Polimer dan campuran phosphazene yang dapat
terdegradasi untuk aplikasi biomedis, dalam: N. Hasirci, V. Hasirci (Eds.),
Biomaterial: Dari Molekul hingga Jaringan Rekayasa, Kluwer Academic, Penerbit
Pleno, Baru York, 2004, hlm. 113-122.
[13] AK Andrianov, Sistem muncul polifosfazen yang larut dalam air untuk aplikasi
biomedis, Polym. Persiapan (Am. Chem. Soc., Div. Polym. Chem.) 46 (2005) 715.
[14] LS Nair, YM Khan, CT Laurencin, Polyphosphazenes, dalam: SA Guelcher, JO Hollinger
(Eds.), Pengantar Biomaterial, CRC, Press, Boca Raton, 2006, hlm. 273–290.
[15] LS Nair, D. Lee, CT Laurencin, Polyphosphazenes sebagai biomaterial baru, dalam:
SK Mallapragada, B. Narasimhan (Eds.), Buku Pegangan Bahan Polimerik
Biodegradable dan Aplikasinya, American Scientific Publishers, Los Angeles,
2006, hlm. 277–306.
[16] HR Allcock, S. Kwon, Hubungan kovalen protein dengan poli(organofosfazen):
imobilisasi glukosa-6-fosfat dehidrogenase dan tripsin, Makromolekul 19 (1986)
1502-1508.
[17] T. Matsuki, N. Saiki, pembawa Polyphosphazene untuk imobilisasi enzim, Teijin Ltd,
Jepang, 1989, hlm. 9.
[18] HR Allcock, SR Pucher, kB Visscher, Aktivitas urea amidohidrolase yang diimobilisasi
dalam hidrogel poli[di)metoksietoksietoksi)fosfat, Biomaterial 15 (1994) 502–506.
[19] A. Cuetos, ML Valenzuela, I. Lavandera, V. Gotor, GA Carriedo, Polyphosphazenes
sebagai dukungan yang dapat disetel dan didaur ulang untuk melumpuhkan
alkohol dehidrogenase dan lipase: sintesis, aktivitas katalitik, dan efisiensi daur
ulang, Biomacromolekul 11 (2010) 1291–1297.
[20] A. Cuetos, A. Rioz-Martinez, ML Valenzuela, I. Lavandera, GG de, GA Carriedo, et al.,
Katalis enzimatik redoks amobil: Baeyer–Villiger monooxygenases yang didukung
pada polyphosphazenes, J. Mol. Katalis. B. Enzim. 74 (2012) 178–183.
[21] FE Kanik, M. Kolb, S. Timur, M. Bahadir, L. Toppare, Sebuah biosensor asetilkolin
amperometri berdasarkan polimer konduktor, Int. J.Biol. Makromol. 59
(2013) 111–118.
[22] C. Dhand, SP Singh, SK Arya, B. Datta, BD Malhotra, Biosensor kolesterol
berdasarkan film polimer konduktor yang diendapkan secara elektroforesis yang
berasal dari suspensi koloid polianilin berstruktur nano, Anal. Chim. Acta 602 (2007)
244–251.
[23] D. Odaci, SK Kayahan, S. Timur, L. Toppare, Penggunaan polimer konduktor berbasis
tiofena dalam biosensing mikroba, Electrochim. Acta 53 (2008) 4104–4108.
[24] T. Konry, Y. Heyman, S. Cosnier, K. Gorgy, RS Marks, Karakterisasi morfologi film poli
(pirol-benzofenon) tipis yang dielektropolimerisasi pada serat optik berlapis timah
oksida indium untuk biosensing elektrokimia dan optik, Electrochim. Acta 53 (2008)
5128-5135.
[25] V. Mazeiko, A. Kausaite-Minkstimiene, A. Ramanaviciene, Z. Balevicius, A.
Ramanavicius, Nanopartikel emas dan melakukan nanokomposit berbasis polimer-
polianilin untuk desain biosensor glukosa, Sens. Aktuator B: Chem. 189
(2013) 187–193.
[26] E. Yildiz, P. Camurlu, C. Tanyeli, I. Akhmedov, L. Toppare, Sebuah polimer konduktor
larut dari 4-(2,5-di(thiophen-2-yl)-1H-pyrrol-1-yl)benzenamine dan kopolimer
multikromiknya dengan EDOT, J. Electroanal. Kimia 612 (2008) 247–256.
[27] B. Wang, E. Rivard, I. Manners, Sebuah sintesis hasil tinggi baru dari Cl3P = NSiMe3,
prekursor monomer untuk preparasi terkontrol polifosfazen dengan berat molekul
tinggi, Inorg. Kimia 41 (2002) 1690–1691.
[28] J. Paulsdorf, N. Kaskhedikar, M. Burjanadze, S. Obeidi, NA Stolwijk, D. Wilmer, et al.,
Sintesis dan konduktivitas ion elektrolit polimer berdasarkan polifosfazen dengan
kelompok sisi pendek, Chem. ibu. 18 (2006) 1281–1288.
[29] HR Allcock, SD Reeves, CR de Denus, CK Crane, Pengaruh parameter reaksi pada
polimerisasi kationik hidup dari phosphoranimines menjadi polyphosphazenes,
Macromolekul 34 (2001) 748-754.
554 D.Ucan dkk. / Sensor dan Aktuator B 201 (2014) 545–554
[30] M. Yoshimoto, N. Takaki, M. Yamasaki, liposom terkonjugasi katalase enkapsulasi
glukosa oksidase untuk oksidasi terkontrol glukosa dengan dekomposisi hidrogen
peroksida yang dihasilkan, Koloid Surf. B 79 (2010) 403–408.
[31] A. Teuscher, Richterich, Metode enzimatik glukosa, Schweiz Med. Skr. 101 (1971) 345–
390.
[32] D. Barham, P. Trinder, Sebuah reagen warna ditingkatkan untuk penentuan glukosa
darah oleh sistem oksidase, Analis 97 (1972) 142-145.
[33] M. Gerard, A. Chaubey, BD Malhotra, Penerapan polimer konduksi ke biosensor,
Biosens. Bioelektron. 17 (2002) 345–359.
[34] NC Kekec, FE Kanik, YA Udum, CG Hizliates, Y. Ergun, L. Toppare, Platform berbasis
polimer konduktor baru untuk penginderaan etanol, Sens. Aktuator B: Chem. 193
(2014) 306–314.
[35] RE Fernandez, E. Bhattacharya, A. Chadha, Imobilisasi kovalen dari Pseudomonas
cepacia lipase pada bahan semikonduktor, Appl. Berselancar. Sci. 254 (2008) 4512–
4519.
[36] XY Xu, Y. Feng, JJ Li, F. Li, HJ Yu, Sebuah protokol baru untuk imobilisasi kovalen tionin
pada elektroda karbon kaca dan penerapannya dalam biosensor hidrogen
peroksida, Biosens. Bioelektron. 25 (2010) 2324–2328.
[37] K. Yamamoto, HS Zeng, Y. Shen, MM Ahmed, T. Kato, Evaluasi biosensor glukosa
amperometrik berdasarkan mediator kompleks ruthenium dengan potensi redoks
rendah, Talanta 66 (2005) 1175-1180.
[38] YL Wang, L. Liu, MG Li, SD Xu, F. Gao, Tabung nano karbon multifungsi untuk
elektrokimia langsung glukosa oksidase dan bioassay glukosa, Biosens.
Bioelektron. 30 (2011) 107–111.
[39] LS Wang, X. Gao, LY Jin, Q. Wu, ZC Chen, XF Lin, Biosensor glukosa amperometrik
berdasarkan kawat nano perak dan glukosa oksidase, Sens. Aktuator B: Chem. 176
(2013) 9–14.
[40] XY Jiang, YH Wu, XY Mao, XJ Cui, LD Zhu, Biosensor glukosa amperometrik
berdasarkan integrasi glukosa oksidase dengan nanopartikel platinum/
nanokomposit karbon mesopori terurut, Sens. Aktuator B: Chem. 153 (2011)
158-163.
[41] E. Turkmen, SZ Bas, H. Gulce, S. Yildiz, Biosensor glukosa berdasarkan imobilisasi
glukosa oksidase dalam film poli(o-phenylenediamine) elektropolimerisasi pada
elektroda termodifikasi nanopartikel platinum-polivinilferrocenium, Electrochim.
Akta 123 (2014) 93-102.
[42] XL Wang, XL Zhang, Sintesis co-reduksi elektrokimia dari komposit graphene/nano-
gold dan penerapannya pada biosensor glukosa elektrokimia, Electrochim. Acta 112
(2013) 774–782.
[43] ZJ Yang, XC Huang, RC Zhang, J. Li, Q. Xu, XY Hu, Novel seperti landak Dalam2HAI3-
Elektroda modifikasi kitosan untuk elektrokimia langsung glukosa oksidase dan
biosensing, Electrochim. Babak 70 (2012) 325–330.
[44] Z. Yang, Y. Tang, J. Li, Y. Zhang, X. Hu, Sintesis mudah TiO berbentuk kolumnar
tetragonal2 nanorods untuk konstruksi biosensor glukosa elektrokimia yang
sensitif, Biosens. Bioelektron. 54 (2014) 528–533.
[45] DL Scott, EF Bowden, Kinetika substrat-enzim dari sitokrom peroksidase teradsorpsi
pada elektroda pirolitik-grafit, Anal. Kimia 66 (1994) 1217–1223.
[46] CM Wong, KH Wong, XD Chen, Glukosa oksidase: kejadian alam, fungsi, sifat dan
aplikasi industri, Appl. Mikrobiol. Bioteknologi. 78
(2008) 927–938.
[47] CG de Jesus, D. Lima, V. dos Santos, K. Wohnrath, CA Pessoa, Biosensor glukosa
berdasarkan imobilisasi glukosa oksidase yang sangat efisien pada film lapis demi
lapis polielektrolit silsesquioxane, Sens. Aktuator B: Chem. 186
(2013) 44–51.
[48] HM Deng, AKL Teo, ZQ Gao, Sebuah biosensor glukosa bebas interferensi berdasarkan
mediator polimer redoks potensial rendah baru, Sens. Aktuator B: Chem. 191
(2014) 522–528.
biografi
Didem Ucan lulus dari Departemen Kimia Universitas Ahi Evran, Turki, pada tahun 2012
dan saat ini meraih gelar M.Sc. mahasiswa di universitas yang sama. Bidang minatnya
adalah sintesis polifosfazen dan biosensor elektrokimia.
Fulya Ekiz Kanik memperoleh gelar M.Sc. pada tahun 2009 dari Departemen
Bioteknologi, Universitas Teknik Timur Tengah. Dia adalah seorang Ph.D. mahasiswa di
Departemen Bioteknologi, Universitas Teknik Timur Tengah. Bidang minatnya adalah
biosensor elektrokimia, polimer konduktor, modifikasi permukaan, dan nanopartikel.
Yunus Karatas menerima gelar M.Sc. gelar dari Universitas Teknik Timur Tengah,
Ankara, Turki pada tahun 2001. Ia menerima gelar Ph.D. gelar dari University of Münster,
Jerman pada tahun 2006. Beliau adalah associate professor Kimia, Ahi Evran University,
Turki. Minat penelitiannya meliputi sintesis dan modifikasi polimer anorganik;
polisiloksan dan polifosfazen dan aplikasinya sebagai elektrolit polimer dalam baterai ion
litium dan sel bahan bakar.
Levent Toppare menerima gelar M.Sc. gelar pada tahun 1977 dan Ph.D. gelar pada
tahun 1982 dari Middle East Technical University, Turki. Dia adalah seorang profesor
Kimia di universitas yang sama. Minat penelitiannya meliputi sintesis polimer konduktor
dan aplikasinya dalam elektrokromik, fotovoltaik, OLED, dan biosensor.