Kromatografi Lapis

Tipis (KLT)
Dr. Diyah Tri Utami, S.Si.
 Pengertian Kromatografi
• Kromatografi adalah teknik untuk memisahkan campuran menjadi
komponennya dengan bantuan perbedaan sifat fisik masing-masing
komponen

Teknik Suatu
pemisahan Komponen
campuran
Jenis kromatografi berdasarkan fase gerak
GLC
Gas
chromatography
GSC

HPLC Eklusi

Liquid LLC
chromatography Ion
exchange
TLC
 KLT
• KLT merupakan cara pemisahan campuran senyawa menjadi senyawa
murninya dan mengetahui kuantitasnya (Sastrohamidjojo, 1991)
• KLT merupakan analisis cepat yang memerlukan bahan yang sangat sedikit,
baik penyerap maupun cuplikannya
• KLT bisa digunakan untuk memisahkan senyawa-senyawa yang sifatnya
hidrofobik seperti lipida-lipida
 KLT
• KLT juga merupakan salah satu metode isolasi yang berdasarkan perbedaan
daya serap serab (adsorbs) dan daya partisi serta kelarutan dari komponen-
komponen kimia yang bergerak mengikuti kepolaran eluen (Suryadarma,
2014). Oleh karena itu, daya serap adsorben terhadap komponen kimia tidak
sama, maka komponen bergerak dengan kecepatan yang berbeda, sehingga
hal inilah yang menyebabkab pemisahan.
 Kelebihan KLT
• KLT banyak digunakan untuk tujuan analisis
• Identifikasi pemisahan komponen dapat dilakukan dengan pereaksi warna,
fluoresensi atau dengan radiasi menggunakan sinar ultraviolet
• Dapat dilakukan elusi secara menaik (ascending), menurun (descending), atau
dengan cara elusi 2 dimensi
• Dapat digunakan untuk memisahkan senyawa hidrofobik (lipid dan hidrokarbon)
• Hanya membutuhkan sedikit pelarut
• Ketepatan penentuan kadar akan lebih baik karena komponen yang akan ditentikan
merupakan bercak yang tidak bergerak
 Analisis KLT banyak digunakan karena:
• Waktu yang diperlukan untuk analisis senyawa relative pendek
• Dalam analisis kualitatif dapat memberikan informasi semi kuantatif tentang
konstiuen utama dalam sampel
• Digunakan untuk memonitor identitas dan kemurnian sampel
• Dengan bantuan prosedur pemisahan yang sesuai, dapat digunakan untuk
analisis kombinasi sampel terutama dari sediaan herbal
 Pelaksanaan KLT
• Fase diam
• Fase gerak
• Aplikasi (penotolan) sampel
• Pengembangan
• Deteksi bercak
• Perhitungan nilai Rf
• Alternatif prosedur KLT
 Fase diam
• Fase diam digunakan dalam KLT merupakan penjerap yang berukruan kecil
dengan diameter partikel 10-30 µm
• Fase diam yang paling sering digunakan adalah silica dan serbuk selulosa
• Mekanisme utama pada KLT adalah absorbs dan partisi
 Fase gerak
• Sistem fase gerak yang paling sederhana adalah campuran 2 pelarut organic
karena daya elusi campuran kedua pelarut ini dapat mudah diatur sedemikian
rupa sehingga pemisahan dapat terjadi dilakukan secara optimal
 Aplikasi (penotolan) sampel
• Untuk memperoleh reprodusibilitas, volume sample yang ditotolkan paling
sedikit 0,5 µl
 Pengembangan
• Sampel yang ditotolkan -> dikembangkandalam bejana kromatografu yang
sebelumnya telah dijenuhi oleh uap fase gerak-> tepi bagian bawah lempeng
titpis yang telah ditotoli sampel dicelupakn ke dalam fase gerak kurang lebih
0,5-1 cm
 Deteksi Bercak
• Deteksi bercak dapat dilakukan secara kimia dan fisika
a. Cara kimia adalah cara yang biasa digunakan yaitu dengan cara merekasikan
bercak dengan suatu perekasi melalui penyemprotan sehingga bercak
menjadi jelas
b. Cara fisika dapat digunakan untuk menamppakn bercak adalah dengan cara
pencacahan radioaktif serta fluorosensi sinar ultraviolet
 Perhitungan nilai Rf
• Perhitungan nilai Rf didasarkan dengan rumus

𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑒𝑚𝑝𝑢ℎ 𝑜𝑙𝑒ℎ 𝑘𝑜𝑚𝑝𝑜𝑛𝑒𝑛

𝑅𝑓 =
𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑒𝑚𝑝𝑢ℎ 𝑜𝑙𝑒ℎ 𝑝𝑒𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡
Perhitungan nilai Rf
 Penggunaan KLT
• Menentukan banyaknya komponen dalam campuran
• Memantau berjalannya suatu reaksi
• Identifikasi senyawa
• Menentukan efektivitas pemurnian
• Melakukan screening sample untuk obat
• Menentukan dan memnatau kondisi yang sesuai untuk kromatografi kolom
Faktor yang mempengaruhi Gerakan noda pada
KLT yang juga mempengaruhi harga Rf
• Struktur kimia yang sedang dipisahkan
• Sifat dari penyerap dan derajad aktifitasnya
• Tebal dan kerataan dari lapisan penyerap
• Pelarut (derajad kemurniannya)
• Derajat kejenuhan dan uap bejana pengembangan yang digunakan
• Teknik percobaan
• Jumlah cuplikan yang digunakan
• Suhu
• kesetimbangan
 Pereaksi semprot
• Dragendrof -> golongan senyawa alkaloid
• Liebarman burchard-> steroid
• KOH 10% metanolik-> antrakinon
• Sitroborat-> flavonoid
• AlCl3-> fenolik
TERIMA KASIH