Laporan Kelompok 2

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI FARMASI
PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI DAN VIROLOGI
LAPORAN LENGKAP
PRAKTIKUM
KELOMPOK II
KELAS B/020
KOORDINATOR LABORATORIUM : apt. WAHYUDDIN JUMARDIN, S.Farm
PROGRAM STUDI S1 FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MEGAREZKY
MAKASSAR
2021
KATA PENGANTAR
Puji syukur kami panjatkan kepada Tuhan yang maha Esa karena atas
rahmatnya kami dapat menyelesaikan laporan praktikum ini yang berjudul
“LAPORAN LENGKAP MIKROBIOLOGI DAN VIROLOGI” dengan waktu
yang telah ditentukan.
Kami sangat berterimakasih kepada kakak asisten Mufli Thami Tufail yang
telah menuntun jalannya praktikum mikrobiologi dan virologi ini dengan baik.
Laporan ini jauh dari kata sempurna maka dari itu kritik dan saran yang
bersifat membangun dari pihak pembaca diperlukan. Semoga laporan ini
bermanfaat bagi pembaca untuk menambah ilmu pengetahuan terutama dalam
bidang laboratorium praktikum mikrobiologi dan virologi.
Makassar, 22 Agustus 2021
KELOMPOK II
i
LEMBAR PENGESAHAN
Laporan lengkap ini diajukan sebagai salah satu persyaratan untuk mengikuti
ujian praktikum “MIKROBIOLOGI DAN VIROLOGI” dengan program studi
S1 Farmasi Universitas Megaresky Makasssar Tahun ajaran 2021 kelompok II
kelas B angkatan 2020 yang disahkan oleh :
NO. JUDUL PERCOBAAN ASISTEN PARAF
1 Pengenalan Alat MUFLI THAMI TUFAIL
2 Sterilisasi MUFLI THAMI TUFAIL
3 Pembuatan Media FELIX RONALDO RADA
4 Penanaman dan Isolasi RAHMATIA E. AMAN T.

Mikroorganisme
5 Pemeriksaan Mikroskopik JUMRIANI
Pengecatan Gram
6 Teknik Aseptis : Pemindah RAHMATIA E. AMAN T.
Biakan
7 Perhitungan Koloni MUFLI THAMI TUFAIL
8 Uji Sensitivitas Antibiotik RAHMATIA E. AMAN T.
MAKASSAR, 22 Agustus 2021

Mengetahui Koordinator Laboratorium
apt. WAHYUDDIN JUMARDIN, S.Farm

NIDN : 0927118502
ii
KARTU KONTROL
Nama : PUTRI REGINA TRIANDINI
NIM : D1B120078
Kelompok : 2/II
Kelas : B/020
NO PERCOBAAN NILAI PARAF
1 Pengenalan Alat
2 Sterilisasi
3 Pembuatan Media
4 Penanaman Dan Isolasi

Mikroorganisme
5 Pemeriksaan Mikroskopik
Pengecatan Gram
6 Teknik Aseptis : Pemindah
Biakan
7 Perhitungan Koloni
8 Uji Sensitivitas Antibiotik

Koordinator Praktikum

NIDN : 0927118502
iii
KARTU KONTROL
Nama : PREISCYLIA RARU
NIM : D1B120084
Kelompok : 2/II
Kelas : B/020
1 Pengenalan Alat
2 Sterilisasi
3 Pembuatan Media

Mikroorganisme
Pengecatan Gram
Biakan


NIDN : 0927118502
iv
KARTU KONTROL
Nama : MEIDINA DWI PUTRI
NIM : D1B120057
Kelompok : 2/II
Kelas : B/020
1 Pengenalan Alat
2 Sterilisasi
3 Pembuatan Media

Mikroorganisme
Pengecatan Gram
Biakan


NIDN : 0927118502
v
KARTU KONTROL
Nama : ADVENTIANI MANGAGO
NIM : D1B120081
Kelompok : 2/II
Kelas : B/020
1 Pengenalan Alat
2 Sterilisasi
3 Pembuatan Media

Mikroorganisme
Pengecatan Gram
Biakan


NIDN : 0927118502
vi
KARTU KONTROL
Nama : VIKA APRILIANI TAUFIK
NIM : D1B120083
Kelompok : 2/II
Kelas : B/020
1 Pengenalan Alat
2 Sterilisasi
3 Pembuatan Media

Mikroorganisme
Pengecatan Gram
Biakan


NIDN : 0927118502
vii
KARTU KONTROL
Nama : RISMAYANTI
NIM : D1B120061
Kelompok : 2/II
Kelas : B/020
1 Pengenalan Alat
2 Sterilisasi
3 Pembuatan Media

Mikroorganisme
Pengecatan Gram
Biakan


NIDN : 0927118502
viii
KARTU KONTROL
Nama : NUR FITRI AULIAH
NIM : D1B120092
Kelompok : 2/II
Kelas : B/020
1 Pengenalan Alat
2 Sterilisasi
3 Pembuatan Media

Mikroorganisme
Pengecatan Gram
Biakan


NIDN : 0927118502
ix
DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR .................................................................................. i
LEMBAR PENGESAHAN .......................................................................... ii
KARTU KONTROL ..................................................................................... iii
DAFTAR ISI ................................................................................................. x
PERCOBAAN I
Pengenalan Alat ........................................................................................... 1
PERCOBAAN II
Sterilisasi ...................................................................................................... 28
PERCOBAAN III
Pembuatan Media ......................................................................................... 55
PERCOBAAN IV
Penanaman Dan Isolasi Mikroorganisme .................................................... 80
PERCOBAAN V
Pemeriksaan Mikroskopik Dan Pengecatat Gram......................................... 104
PERCOBAAN VI
Teknik Aseptis : Pemindah Biakan ............................................................... 129
PERCOBAAN VII
Perhitungan Koloni ....................................................................................... 149
PERCOBAAN VIII
Uji Sensitivitas Antibiotik ............................................................................. 170
BIOGRAFI
FOTO KELOMPOK
x
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI DAN VIROLOGI FARMASI
UNIVERSITAS MEGAREZKY MAKASSAR
PERCOBAAN I
PENGENALAN ALAT DAN BAHAN
KELOMPOK II
PREISCYLIA RARU D1B120084

ADVENTIANI MANGAGO D1B120081
MEIDINA DWI PUTRI D1B120057
RISMAYANTI D1B120061
VIKA APRILIANI TAUFIK D1B120083
PUTRI REGINA TRIANDINI D1B120078
KELAS B/20
ASISTEN: MUFLI THAMI TUFAIL

FAKULTAS FARMASI
MAKASSAR
2021
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Laboratorium adalah suatu tempat dimana dilakukan kegiatan percobaan,
pengukuran, penelitian atau riset ilmiah yang berhubungan dengan ilmu sains
(kimia, fisika, biologi) dan ilmu-ilmu lainnya. Laboratorium bias berupa ruangan
yang tertutup seperti kamar atau ruangan terbuka seperti kebun dan lain-lain
(Amna, 2014)
Laboratorium adalah tempat sekelompok orang yang melakukan berbagai
macam kegiatan penelitian (reset), pengamatan, pelatihan dan pengujian ilmiah
sebagai pendekatan antara teori dan praktik dari berbagai macam disiplin ilmu.
Secara fisik laboratorium juga dapat merujuk kepada suatu ruangan tertutup, kamar
atau ruangan terbuka. Laboratorium harus dilengkapi dengan berbagai saran
prasarana untuk kebutuhan percobaan. Laboratorium sebagai tempat kegiatan reset,
penelitian, percobaan, pengamatan, serta pengujian ilmiah memiliki banyak fungsi,
yaitu :
1). Menyeimbangkan antara teori dan praktik ilmu dan menyatukan antara teori
dan praktik
2). Memberikan keterampilan kerja ilmiah bagi para peneliti, baik dari kalangan
siswa, mahasiswa, dosen, atau peneliti lainnya. Hal ini disebabkan
laboratorium tidak hanya menuntut pemahaman terhadap objek yang dikaji,
1
tetapi juga menuntut seseorang untuk melakukan eksperimentasi
3). Memberikan dan menumpuk keberanian para peneliti (yang terdiri dari
pembelajaran, peserta didik, mahasiswa, dosen dan seluruh praktisi
keilmuan lainnya) untuk mencari hakikat kebenaan ilmiah dari suatu objek
keilmuan dalam lingkungan alam dan lingkungan sosial (Amna, 2014)
Laboratorium merupakan faktor yang sangat penting dalam pengerjaan Analisa
mikrobiologi. Dalam menentukan lokasi yang tepat untuk laboratorium Analisa
miktobiologi, beberapa aspek harus menjadi perhatian. Hal ini sangat erat
kaitannya dengan sifat dan ciri Analisa mikrobiologi yang mengharuskan kondisi
aseptic dan lingkungan terkontrol (Hafsan, 2014).
Mikrobiologi adalah ilmu yang mempelajari mengenai organisme yang
berukuran mikroskopis. Sedemikan kecilnya sehingga keberadaan mereka hanya
dapat dilihat dengan alat yang disebut mikroskop. Dunia mikro organisme terdiri
dari lima (5) kelompok organisme, yaitu: bakteri, protozoa, virus, algae serta
cendawan (jamur) mikroskopik. Dengan demikian lingkup mikrobiologi meliputi
Bakteriologi, yaitu ilmu yang mempelajari tentang bakteri, Virologi yaitu Ilmu
yang mempelajari tentang virus, Mikologi yaitu ilmu yang mempelajari tentang
jamur dan algae dan Parasitologi yaitu ilmu yang mempelajari tetntang parasit.
1. Pengantar Mikrobiologi, yang membahas tentang pengertian, sejarah
penemuan bakteri hingga perkembangan teori dasar mikrobiologi.
2
2. Bakteriologi Dasar yang membahas tentang klasifikasi, taksonomi dan
nomenklatur bakteri, morfologi dan struktur bakteri, fisiologi dan metabolisme
bakteri dan mengenai macam-macam media pertumbuhan bakteri.
3. Patogenesis Penyakit infeksi yang terutama membahas tentang aspek umum
penyakit infeksi dan peran bakteri dalam menyebabkan penyakit pada manusia..
4. Flora Normal Rongga mulut, Ekosistem mulut dan Plak Dental yang membahas
tentang jenis dan perkembangan flora normal rongga mulut, lingkungan mulut
dan faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan bakteri di rongga mulut
dan membahas juga tentang komposisi bakteri pada plak dental, dan bagaimana
pembentukan plak dan kalkulus di rongga mulut. mempelajari tentang Parasit
(Meganada, 2017)
Pengenalan alat-alat yang akan dipergunakan dalam laboratorium sangat
penting guna kelancaran percobaan yang akan dilaksanakan diantaranya adalah
menghindari kecelakaan kerja dan gagalnya percobaan. Alat-alat laboratorium
biasanya dapat rusak atau bahkan bebrbahaya jika tidak sesuai dengan prosedur
pemakaian.pemahaman fungsi dan cara kerja peralatan serta bahan harus mutlak
dikuasi (Penuntun mikrobiologi)
Pengenalan alat-alat ini meliputi macam-amacam alat, mengetahui nama-
namanya, memahami bentuk,fungsi, serta cara kerja alat-alat tersebut. Setiap alat
dirancang atau dibuat dengan bahan-bahan yang berbeda satu sama lain dan
mempunyai fungsi yang sangat spesifik. Kebanyakan peralatan utuk percobaan-
3
percobaan di dalam laboratorium terbuat dari gelas. Meskipun peralatan-pralatan
tersebut telah siap dipakai, tetapi di dalam pemasangan alat untuk suatu percobaan
kadang kala diperlukan sambungan-sambungan dengan gelas atau membuat
peralatan khusus sesuai kebutuhan (Meganada, 2017).
Peralatan yang digunakan pada laboratorium mikrobiologi hampir sama
dengan peralatan-peralatan yang umumnya digunakan di laboratorium kimia yaitu
berupa alat-alat gelas antara lain : tabung reaksi, cawan petri, pipet ukur dan pipet
volumetrik, labu ukur (tentukur), labu erlenmeyer, gelas ukur, cawan petri,
termometer, pipet tetes, pembakar spiritus, kaki tiga dengan kawat asbes dan objek
glass, tabung durham, batang pengaduk, beacek glass (Meganada, 2017).
Di samping peralatan gelas tersebut pada laboratorium mikrobiologi masih ada
sejumlah alat yang khusus antara lain: otoklaf, oven, mikroskop, jarum ose
(inokulasi), jarum preparat, up, keranjang kawat untuk sterilisasi, inkubator untuk
membiakkan mikroorganisme dengan suhu yang konstan, spektrofotometer untuk
mengukur kepekatan suspensi atau larutan. Penangas air untuk mencairkan
medium, maknetik stirrer untuk mengaduk dan tabung, hot plat, timbangan analog
(Meganada, 2017)
4
B. Maksud Percobaan
1. Untuk dapat mengetahui alat-alat yang ada di laboratorium
2. Untuk dapat mengetahui nama-nama alat beserta fungsinya
3. Untuk dapat menggunakan alat-alat dalam laboratorium mikrobiologi
C. Tujuan Percobaan
1. Mahasiswa mampu mengetahui nama alat-alat yang digunakan dalam
laboratorium mikrobiologi
2. Mahasiswa mampu mengetahui fungsi serta penggunaan beberapa alat-alat
dalam laboratorium
D. Manfaat Percobaan
1. Mengetahui nama alat-alat yang ada di dalam laboratorium mikrobiologi
2. Mengetahui fungsinya serta mempermudah mahasiswa mempergunakan yang
ada dalam laboratorium karena telah diperkenalkan oleh laboran.
5
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Teori Umum
dapat dilihat dengan alat yang disebut mikroskop. Dunia mikroorganisme terdiri
dari lima kelompok organisme, yaitu: bakteri, protozoa, virus, algae serta cendawan
(jamur) mikroskopik. Dengan demikian lingkup mikrobiologi meliputi
Bakteriologi, yaitu ilmu yang mempelajari tentang bakteri, Virologi yaitu Ilmu yang
mempelajari tentang virus, Mikologi yaitu ilmu yang mempelajari tentang jamur
dan algae dan Parasitologi yaitu ilmu yang mempelajari tentang Parasit. Untuk
melihat mikroorganisme ini harus dilakukan di laboratorium mikrobiologi
(Meganada, 2017).
Laboratorim mikrobiologi adalah salah satu laboratorium yang wajib ada pada
program matakuliah farmasi karena laboratorium ini sangat menunjang pembuatan
peroduk-produk atau sediaan farmasi. Berbagai sediaan obat dan makanan serta
minuman yang akan dipasarkan untuk publik memiliki syarat tertentu terhadap
cemaran mikroba, bahkan obat-obat steril bebas dari cemaran mikroba dan bahan-
bahan lain yang mengancam keselamatan penggunanya. Selama melakukan
kegiatan dalam laboratorium ini harus tetap menjaga keamanan dan keselamatan
diri, oleh karena itu tahap pengenalan alat dan proses sterilisasi menjadi amat
6
penting diketahui dan dipahami oleh para mahasiswa yang akan bekerja di
dalamnya. Selain penggunaan alat pelindung diri (APD) di laboratorium, mahasiswa
juga perlu mengenal dan paham cara menggunakan alat-alat yang biasa digunakan
dalam laboratorium mikrobiologi (Yusmaniar,2017).
Pengenalan alat- alat praktikum penting dilakukan guna untuk keselamatan
kerja dalam melakukan proses penelitian. Selain itu juga pengenalan alat praktikum
bertujuan agar mahasiswa mengetahui nama dan fungsi dari alat-alat tersebut. Alat-
alat praktikum sangat dibutuhkan dalam proses penelitian ataupun praktikum
terutama dalam proses praktikum mikrobiologi banyak sekali alat-alat yang
digunakan dan mempunyai fungsi masing-masing didalam bidang keilmuan atau
pun proses penelitian tentu. Alat-alat ini sangat dibutuhkan sekali. Alat-alat
laboratorium juga dapat berbahaya jika terjadi kesalahan dalam prosedur
pemakaiannya maka diperlukan pengenalan alat-alat laboratorium agar
pengguanaan alat tersebut dapat dipergunakan dengan fungsi dan prosedur yang
baik dan benar, sehingga kesalahan yang terjadi dapat diminimalisir
sedikit mungkin hal ini penting agar mendapatkan hasil penelitian yang baik dan
benar, data–data yang tepat akan meningkatkan kualitas penelitian seseorang
(Hokayuruke, 2013).
Pengetahuan alat merupakan salah satu faktor yang penting untuk mendukung
kegiatan praktikum. Pengenalan alat-alat laboratorium untuk para mahasiswa sangat
penting dilaksanakan agar dapat menunjang pengetahuan dalam melaksanakan
7
aktivitas di dalam laboratorium baik dalam melaksanakan praktikum maupun
penelitian (Bua, 2012).
Pengenalan alat-alat laboratorium juga penting dilakukan untuk keselamatan
kerja saat melakukan penelitian. Alat-alat laboratorium biasanya dapat rusak
atau bahkan berbahaya jika penggunaannya tidak sesuai dengan prosedur.
Pentingnya dilakukan pengenalan alat-alat laboratorium adalah agar dapat
diketahui cara penggunaan alat tersebut dengan baik dan benar, sehingga
kesalahan prosedur pemakaian alat dapat diminimalisasi sedikit mungkin. Hal
ini penting supaya saat melakukan penelitian, data yang diperoleh akan benar pula
(Ririn,2016).
Bekerja dilaboratorium mikrobiologi tidak akan lepas dari berbagai
kemungkinan terjadinya bahaya dari berbagai jenis bahan kimia baik yang berisfat
berbahaya maupun yang bersifat tidak berbahaya. Selain itu, peralatan yang ada di
dalam laboratorium juga dapat mengakibatkan bahaya yang tak jarang beresiko
tinggi bagi praktikan yang sedang melakukan praktikum jika tidak mengetahui cara
dan prosedur penggunaan alat yang akan digunakan. Setiap percobaan kita selalu
menggunakan perlaratan yang berbeda atau meskipun sama tappi ukurannya
berbeda (Ririn,2016)
Beberapa alat laboratorium tersebut meliputi alat-alat yang besar seperti
mikroskop, autoklaf, inkubator, oven, lemari pendingin,dan colony counter. Alat-
alat lain adalah alat-alat kecil seperti mikropipet, cawan petri, labu erlenmeyer, pipet
8
tetes, pipet ukur, tabung reaksi, gelas ukur, tabung durham, kawat ose/sengkelit,
pinset, timbangan dan lain-lain (Yusmaniar,2017).
Penggunaan sarana laboratorium harus diprioritaskan untuk keterlaksanaan
praktikum kimia. Penggunaan alat dan bahan praktikum yang baik dapat menunjang
keterlaksanaan praktikum kimia sesuai dengan tuntutan dari kurikulum yang
diterapkan oleh sekolah (Warsiti dkk, 2013).
Dalam proses penggunaan alat dan bahan praktikum, laboran memiliki peranan
yang cukup penting. Mulai dari mempersiapkan alat dan bahan sesuai permintaan,
mencatat penggunaan, hingga menata kembali ke tempat semula merupakan tugas
dari laboran (Wiratma, 2014).
Pemeliharaan atau perawatan alat dan bahan sebaiknya dilakukan secara rutin
(terjadwal) dan tercatat sehingga dapat memberikan informasi mengenai riwayat
alat dan bahan, dari sejak awal pembelian, pemakaian, pemeliharaan, hingga habis
masa pakai (Rosada dkk, 2017).
Prinsip percobaan peralatan di laboratorium adalah berdasarkan identifikasi alat
yang biasa digunakan pada saat praktikum fungsingya serta cara penggunaan alat
secara tepat sesuai fungsi dan tempatnya. Pada prinsipnya, sterilisasi autoklaf
menggunakan panas dan tekanan dari uap air sehingga disenut sterilisasi panas
basah. Biasanya untuk mensterilkan media menggunakan temperatur 121 dengan
tekanan 2 bar selama 15 menit. Alasan mengapa digunakan temperatur 121
9
karena pada saat itu menunjukkan tekanan 2 bar yang akan membantu membunuh
mikroorganisme dalam suatu benda (tim kimia, 2018)
Prinsip kerja oven yaitu sterilisasi panas kering, perubahan energi listrik
menjadi energi panas dimana temperatur dalam oven dijaga tetap konstan dengan
alat kontrol thermometer. Prinsip kerja water bath yaitu Pada saat dingin
mensterilisasi steker dihidupkan, dipilih suhu (temperatur) yang diinginkan (jika
memungkinkan) dan atur. Pengaturan harus dilakukan sesuia dengan pembacaan
thermostat (bila tersedia), atau sesuai dengan suatu sistem pengawasan suhu (Tim
Kimia, 2018).
10
B. Uraian Bahan
1. Agar ( Dirjen POM Edisi III, 1979)
Nama Resmi : AGAR
Nama Lain : Agar-Agar
Pemeriaan : Tidak berbau atau bau lemah, berasa musilago pada lidah
Kelarutan : Tidak larut dalam air dingin, dan larut dalam air
Mendidih
Kegunaan : Sebagai bahan pemadat medium
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik
2. Alkohol ( FI III, 1997, Hal : 56)
Nama Resmi : AETHANOLUM
Nama Lain : Alkohol, etanol, ethyl alkohol
RM/BM : /46,07
Rumus struktur: H H
H – C – C – OH
H H
Pemeriaan : Cairan tidak berwarna, jernih, mudah menguap dan
Mudah terbakar serta memberikan nyala biru yang tidak
Berasap
Kelarutan : Sangat mudah larut dalam air, dalam kloroform P dan
Dalam Eter P
11
Kegunaan : Sebagai zat tambahan, juga dapat membunuh kuman
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat, terhindah dari cahaya
Ditempat sejuk jauh dari nyala api.
3. Dekstrosa (FI III, 1997. Hal : 300)
Nama resmi : DEXTROSUM
Nama lain : Dekstrosa, glukosa
RM/BM : 0 /180,16
Pemeriaan : Serbuk tidak berwarna, serbuk hablur atau serbuk granul
Putih, tidak berbau, rasa manis
Kelarutan : Mudah larut dalam air, sangat mudah larut dalam air
Mendidih, sukar larut dalam etanol
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik.
4. Ekstrak Beef (Dirjen POM Edisi IV, 1979)
Nama Resmi : BEEF EXTARCT
Nama Lain : Kaldu nabati, kaldu hewani, ekstrak beef
Pemeriaan : Berbau dan berasa pada lidah. Kaldu daging sapi
Konsentrat diperoleh dengan mengekstraksi daging sapi
segar tanpa lemak, dengan cara merebus dalam air dan
menguapkan kaldu pada suhu rendah dalam hampa udara
sampai terbentuk residu kental berbentuk pasta. Massa
berbentuk pasta, berwarna coklat kekuningan sampai
12
coklat tua, bau dan rasa seperti daging, sedikit asam.
Kelarutan : Larut dalam air dingin
Kegunaan : Sumber protein untuk pertumbuhan mikroorganisme
Penyimpanan : Simpan dalam wadah tertutup rapat, tidak tembus cahaya.
5. Alumunium Foil ( FI III, 1997, Hal : 96)
Nama Resmi : ALLUMINILL
Nama Lain : Aluminium, alumunium foil
RM/BM : AL/26,92
Rumus struktur: ̶
pemeriaan : Warna keperakan, tidak berbau, tidak berasa
Kelarutan : Tidak larut dalam air
Kegunaan : Sebagai reaktan reaksi kombinasi dan subtitusi
6. Pepton ( Dirjen POM Edisi IV, 1979)
Nama resmi : PEPTON
Nama lain : Pepton daging
Pemeriaan : Serbuk, kuning kemerahan sampai coklat, bau khas, tidak
Busuk
Kelarutan : Larut dalam air, memberikan larutan berwana coklat
Kekuningan yang bereaksi agak asam, praktis tidak larut
Dalam etanol (95%) P dan dalam Eter P
Kegunaan : Sebagai sumber nutrient yang spesifik untuk mikroba
13
Bakteri
Penimpanan : Dalam wadah tertutup baik.
14
BAB III
METODE KERJA
A. Alat
Adapun alat yang digunakan dalam praktikum kali ini di antaranya yaitu
Autoklaf, Bunsen, Botol semprot, Cawan petri, Erlenmeyer, Gelas ukur,
Gunting, Inkubator, Kaki tiga, Kulkas, LAF ( Laminar Air Flow), Oven, Ose
bulat, Ose lurus, Rak tabung reaksi , Spluid, Tabung reaksi, dan Timbangan
B. Bahan
Adapun bahan yang digunakan dalam praktikum kali ini diantaranya yaitu
Alkohol, Alumunium Foil, Benang godam, Kertas , NB ( Nutrien Broth), NA
( Nutrien Agar ), PDA ( Potato Dextrose Agar ), SSA (Salmonela Sigela Agar),
dan Tissue
C. Cara Kerja
1. Menyiapkan alat dan bahan yang akan digunakan dalam praktikum
2. Laboran/dosen/asisten menunjukkan alat-alat laboratorium yang hendak
dipelajari serta menjelaskan fungsi alat-alat tersebut pada praktikan
3. Mendengar serta memperhatikan laboran/dosen/asisten yang sedang
mengenalkan alat-alat laboratorium
4. Menuliskan fungsi dari alat-alat laboratorium di buku hasil praktikum farmasi
sesuai yang dijelaskan oleh asisten/dosen
15
5. Mengumpulkan buku-uku hasil praktikum farmasi untuk ditanda tangani oleh
asisten/dosen
16
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil
Tabel pengamatan
No Alat dan Bahan Kegunaan
1. Sterilisasi dengan sinar uv Untuk mengidentifikasi mikroorganisme
2. Cawan petri sebagai wadah pertumbuhan mikroba
3. Erlen meyer Sebagai wadah untuk pembuatan
medium
4. Gelas ukur Untuk mengukur volume bahan yang
akan digunakan
17
5. Tabung reaksi Sebagai tempat untuk
mengembangbiakkan mikroba murni
6. Rak tabung reaksi Sebagai tempat tabung reaksi
7. Kaki tiga Sebagai penyangga pemanasan dengan
Bunsen
8. Bunsen Sumber api/panas
9. Kawat kasa Untuk penyangga bahan yang
dipanaskan diatas bunsen
18
10. Timbangan analitik Untuk menimbang bahan
11. Oven Untuk sterilisasi alat yang bersifat kaca
dengan suhu 175°C dan waktu 1,5-2 jam
atau digunakan untuk mengeringkan
sampel
12. Inkubator Untuk membantu pertumbuhan bakteri
dan atau perkembangbiakkan bakteri
dalam waktu tertentu dengan suhu 30°C
dalam waktu 1x24 jam
13. Hot plate Untuk memanaskan bahan
14. Spuit Untuk mengukur bahan cair/padat
19
15. Lemari pendingin Untuk penyimpanan bakteri murni
16. Laminar unflow(laf) Untuk pengerjaan secara aseptis,
menyambungkan atau memisahkan
bakteri
B. Pembahasan
Pada praktikum kali ini dilakukan pengenalan alat dan bahan yang ada pada
laboratorium mikrobiologi dan virologi dasar. Laboratorium mikrobiologi adalah
salah satu laboratorium yang wajib ada pada program mata kuliah farmasi karena
laboratorium ini sangat menunjang pembuatan produk-produk atau sediaan
farmasi.
berukuran mikroskopis. Sedemikian kecilnya sehingga keberadaan mereka hanya
dari lima kelompok organisme yaitu, bakteri, protozoa, virus, algae serta cendawan
(jamur) mikroskopik. Dengan demikian lingkup mikrobiologi meliputi
bakteriologi, yaitu ilmu yang mempelajari tentang bakteri. Sedangkan virologi
yaitu ilmu yang mempelajari tentang virus.
20
Pengenalan alat-alat laboratorium penting dilakukan guna untuk keselamatan
kerja dalam melakukan proses penelitian. Selain itu juga pengenalan alat
praktikum bertujuan agar mahasiswa mengetahui nama dan fungsi dari alat-alat
tersebut. Alat-alat praktikum sangat dibutuhkan dalam proses penelitian. Alat-alat
laboratorium juga dapat berbahaya jika terjadi kesalahan dalam prosedur
pemakaiannya, maka diperlukan pengenalan alat-alat laboratorium agar
penggunaan alat tersebut dapat dipergunakan dengan fungsi dan prosedur yang
baik dan benar sehingga kesalahan yang terjadi dapat diminimalisir sedikit
mungkin hal ini penting agar mendapatkan hasil penelitian yang baik dan benar.
Alat-alat yang digunakan pada praktikum kali ini dintaranya yaitu mikroskop,
autoklaf, inkubator, oven, lemari pendingin, dan laminar unflow (laf). Alat-alat
lain adalah alat kecil seperti mikropipet, cawan petri, gelas ukur, erlen meyer,
tabung reaksi, spuit, ose lurus, ose bulat, timbangan dan lain-lain.
Adapun bahan yang digunakan dalam praktikum kali ini yaitu, NB (Natrium
Blood), SSA (Salmonela Sigela Agar), dan PDA (Potato Dextrose Agar).
Cawan petri yang selalu berpasangan yang berukuran agak kecil sebagai
wadah dan yang lebih besar merupakan tutupnya. Fungsi cawan petri sebagai
tempat pertumbuhan atau penanaman mikroba secara kuantitatif dan sebagai
tempat pengujian sampel ,prinsip kerjanya yaitu medium dapat dituang kecawan
bagian bawah dan cawan bagian atas sebagai penutupnya.
Erlenmeyer Berfungsi untuk menampung larutan, bahan atau cairan yang.
Labu Erlenmeyer dapat digunakan untuk meracik dan menghomogenkan bahan-
21
bahan komposisi media, menampung akuades, kultivasi mikroba dalam kultur cair.
Terdapat beberapa pilihan berdasarkan volume cairan yang dapat ditampungnya
yaitu 25 ml, 50 ml, 100 ml, 250 ml, 300 ml, 500 ml, 1000 ml.
Gelas ukur digunakan untuk mengukur volume zat kimia dalam bentuk cair.
Alat ini mempunyai skala, tersedia berbagai macam ukuran. Gelas ukur tidak dapat
digunakan untuk larutan panas.
Di dalam mikrobiologi, tabung reaksi digunakan untuk uji-uji biokimiawi dan
menumbuhkan mikroba.Tabung reaksi dapat diisi media padat maupun cair. Tutup
tabung reaksi dapat berupa kapas, tutup metal, tutup plastik atau aluminium foil.
Rak tabung reaksi merupakan salah satu dari alat-alat laboratorium yang
berupa non gelas terbuat dari kayu yang berbentuk seperti rak kecil, rak ini
digunakan untuk menata atau menyimpang beberapa dari tabung reaksi.
Kaki tiga dalam alat laboratorium adalah besi yang mempunyai 3 kaki yang
memiliki fungsi sebagai penyangga ring. Fungsi kaki tiga adalah sebagai penahan
kawat kasa dan penyangga ketika proses pemanasan.
Salah satu alat yang berfungsi untuk menciptakan kondisi yang steril adalah
pembakar bunsen. Api yang menyala dapat membuat aliran udara karena oksigen
dikonsumsi dari bawah dan diharapkan kontaminan ikut terbakar dalam pola aliran
udara tersebut. Untuk sterilisasi jarum ose atau yang lain, bagian api yang paling
cocok untuk memijarkannya adalah bagian api yang berwarna biru (paling panas).
Perubahan bunsen dapat menggunakan bahan bakar gas atau metanol.
22
Timbangan merupakan salah satu alat laboratorium yang sering digunakan
untuk mengukur massa benda ke tingkat presisi yang lebih tinggi. Dalam
laboratorium, pengukuran massa merupakan salah satu hal penting yang tidak bisa
ditinggalkan, bahkan menjadi faktor utama penentu berhasilnya pengujian yang
dilakukan.
Oven Berfungsi untuk sterilisasi kering. alat-alat yang disterilkan
menggunakan oven antaralain peralatan gelas seperti cawan petri, tabung reaksi,
dll. serilisasi kerning dengan oven dilakukan dengan cara memanaskan dengan
suhu 180 selama 1 jam.
Inkubator adalah alat untuk menginkubasi atau memeram mikroba pada suhu
yang terkontrol. Alat ini dilengkapi dengan pengatur suhu dan pengatur waktu.
Inkubator merupakan alat yang digunakan untuk menginkubasi atau mengerami
suatu biakan.
Spluid adalah pompa piston sederhana untuk menyuntikkan atau menghisap
cairan atau gas. Alat suntik terdiri dari tabung dengan piston di dalamnya yang
keluar dari ujung belakang.
Jarum inokulum berfungsi untuk memindahkan biakan untuk ditanam/
ditumbuhkan ke media baru. Jarum inokulum biasanya terbuat dari kawat
nichrome atau platinum sehingga dapat berpijar jika terkena panas. Bentuk ujung
jarum dapat berbentuk lingkaran (loop) dan disebut ose.
23
Autoklaf adalah alat pemanas tertutup yang digunakan untuk mensterilisasi
suatu benda menggunakan uap bersuhu dan bertekanan tinggi (120 ) selama
kurang lebih 15 menit. Penurunan tekanan pada autoklaf tidak dimaksudkan untuk
membunuh mikroorganisme, melainkan meningkatkan suhu dalam autoklaf. Suhu
yang tinggi inilah yang akan membunuh mikroorganisme.
Dalam praktikum ini alkohol berfungsi untuk mensterilkan alat-alat yang akan
digunakan seingga terbebas dari bakteri atau virus yang ada. Benang godam
berfungi untuk mengikat alat-alat praktikum yang telah dibungkus oleh kertas
sebelum dimasukkan ke dalam oven untuk disterilkan. Kertas berfungsi untuk
membungkus alat-alat yang digunakan dalam praktikum sebelum dilakukan
sterilisasi.
Nutrient Agar (NA) adalah salah satu contoh media yang sring digunakan
untuk menumbuhkan dan mengembangbiakan bakteri, terbuat dari ektrak beef,
pepton, dan agar. Medium NA dapat juga digunakan untuk merawat / menyimpan
/ reservasi mikroorganisme, membuat subkultur maupun meguji kemurnian isolat
yang ditumbuhkan didalam laboratorium. Medium NA juga sering digunakan
untuk melakukan kegiatan perhitungan / enumerasi jumlah mikroorganisme yang
berada pada sampel air, limbah, dan feses.
Nutrient Broth (NB) termasuk ke media umum yang digunakan untuk
menumbuhkan biakan secara general. NB diformulasikan dengan sumber karbon
dan nitrogen supaya dapat memenuhi kebutuhan nutrisi bakteri. Komposisi NB
24
terdiri dari beef extract sebagai sumber karbon dan pepton sebagai sumber
nitrogen.
Potato Dextrose Agar (PDA) merupakan media yang sering digunakan untuk
menumbuhkan dan mengembangbiakkan yeast dan kapang. Dapat juga digunakan
untuk enumerasi yeast dan kapang dalam suatu sampel atau produk makanan, PDA
cocok untuk pertumbuhan jamur. PDA mengandung sumber karbohidrat dalam
jumlah cukup yaitu terdiri dari 20% ekstrak kentang dan 2% glukosa sehingga baik
untuk pertumbuhan kapang dan kamir tetapi kurang baik untuk pertumbuhan
bakteri.
Salmonela Sigela Agar (SSA) adalah media selektif yang digunakan untuk
mengisolasi salmonella dan beberapa spesies shigella yang berasal dari spisemen
klinik seperti urin, feses maupun makanan.
25
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
Berdasarkan praktikum yang telah dilaksanakan, dapat disimbulkan beberapa
hal yaitu :
1. Mikrobiologi adalah ilmu yang mempelajari mengenai organisme yang
berukuran mikroskopis. Sedemikan kecilnya sehingga keberadaan mereka
hanya dapat dilihat dengan alat yang disebut mikroskop. Dalam praktikum kali
ini dilakukan pengenalan alat dan bahan yang digunakan dalam laboratorium
seperti mikroskop, autoklaf, inkubator, oven, lemari pendingin, laminar unflow
(laf), mikropipet, cawan petri, gelas ukur, erlenmeyer, tabung reaksi, spuit, ose
lurus, ose bulat, timbangan dan lain-lain. Sedangkan bahan yang digunakan
yaitu, NB (Natrium Blood), SSA (Salmonela Sigela Agar), dan PDA (Potato
Dextrose Agar).
2. Beberapa alat yang ada di laboratorium memeiliki fungsinya masing-masing
seperti cawan petri sebagai wadah pertumbuhan mikroba, Erlenmeyer sebagai
wadah untuk pembuatan medium, gelas ukur untuk mengukur volume bahan
yang akan digunakan, tabung rekasi sbagai tempat untuk mengembangbiakkan
mikroba murni, rak tabung reaksi sebagai tempat untuk meletakkan tabung
reaksi, kaki tiga sebagai penyangga pemanasan dengan Bunsen, Bunsen sebagai
sumber api atau panas, kawat kasa untuk penyangga bahan yang dipanaskan
26
diatas Bunsen, timbangan analitik untuk menimbang bahan, oven digunakan
untuk sterilisasi alat yang bersifat kaca, incubator sebagai alat untuk membantu
pertumbuhan bakteri atau perkembangbiakkan bakteri dalam waktu tertentu,
hote plate untuk memanaskan bahan, spluid berfungsi untuk mengukur ahan
cair, lemari pendingin atau kulkas untuk penyimpanan bakteri kurni, dan laminar
unflow (LAF) berfungsi untuk pengerjaan secara aseptis menyambungkan atau
memisahkan bakteri.
B. Saran
1. Laboratorium
Untuk alat-alatnya ditambah kelengkapannya dan untuk alat yang sudah ada
tetap rawat dengan baik agar tidak cepat rusak.
2. Asisten
Untuk kinerja kakak asisten dalam mendampingi kami sudah cukup baik jadi
perlu dipertahankan.
27
DAFTAR PUSTAKA
Bua, A.T. 2012. Laporan Praktikum Instrumentasi Pengenalan Alat Laboratorium dan
Pembuatan Reagen.
Dirjen POM. 1979. Farmakope Indonesia. Edisi III. Dapartemen kesehatan Republik.
Jakarta
Emda Amna, 2014. Laboratorium Sebagai Sarana Pembelajaran Kimia Dalam

Meningkatkan Dan keterampilan Kerja Ilmiah. Banda Aceh, UIN
Ar-Raniry
Hoyakure, 2013. Penuntun Praktikum Kimia Organik 2. Fakultas Pertanian Universitas

Lambung Mangkurat. Banjar Baru.
Hafsan, 2014. Laboratorium Analitik. Makassar, Alaudin University Press
Meganada Hiaranya Putri, Sukini, Yodong. 2017. Mikrobioologi. Kementrian

Kesehatan Republik Indonesia.
Rosada, D. Kadarisman, N. Rahajo. 2017. Panduan Pengelolaan Dan Pemanfaatan

Laboratorium IPA. Jakarta: Kemendikbud
Ririn, Adrian, 2016. Pengenalan Alat-Alat Laboratorium Mikrobiologi Untuk

Mengatasi Keselamatan Kerja Dan Kebersihan Praktikum. Jurnal
Mikrobiologi. Vol.1 (1)
Warsiti, Ngalim, A. Sumardi. 2013. Pengelolaan Laboratorium kimia di SMA negeri

1 Boyolali Tahun 2013. Naskah Publikasi Ilmiah. Surakarta: Universitas
Muhammadiyah Surakarta.
Wiratama, I G. L, Subagia, I W, 2014. Pengelolaan Laboratorium Kimia Pada SMA

Negeri Di Kota Singaraja (Acuan Pengembangan Model Panduan
Pengelolaan Laboratorium Kimia Berbasis Kearifan Lokal Tri Sakti ).
Jurnal Pendidikan Indonesia.
Yusmaniar, Wardiyah, Khairun Nida. 2017. Mikrobiologi Dan Parasitologi. Jakarta

Selatan, Kementrian Kesehatan Republik Indonesia.
LAMPIRAN
A. Skema Kerja
1. Pengenalan Alat Dan Bahan
Disiapkan alat dan bahan
Laboran/asisten menunjukkan
alat-alat laboratorium yang
hendak dipelajari
Mendengar serta
memperhatikan laboran/Asisten
yang menjelaskan
Menuliskan fungsi-fungsi dari

alat laboratorium sesuai dengan
yang dijelaskan
Mengumpulkan buku-buku hasil

praktikum farmasi untuk ditanda
tangani oleh laboran/asisten
PERCOBAAN II
STERILISASI
KELOMPOK II

KELAS B/20

FAKULTAS FARMASI
MAKASSAR
2021
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Farmasi adalah dunia yang mempelajari tentang berbagai obat, baik obat
tradisional, obat herbal, obat modern yang di dapat dari bahan yang berasal dari
tumbuhan maupun zat kimia. Di bidang farmasi ini para ahli mempelajari,
meneliti, dan mengetahui baik buruknya makanan atau obat. (Haeria. 2017)
Mikrobiologi adalah ilmu yang mempelajari semua makhluk mikroskopik
dalam bentuk sel tunggal, multisel, maupun aselular seperti bakteri, microfungi,
kapang, mikroalga, protozoa, dan Archaea. Selain itu, virus merupakan
makhluk mikro aseluler sehingga sering dikaji dalam ilmu mikrobiologi
meskipun tidak dapat sepenuhnya dikatakan sebagai makhluk hidup.
Mikrobiologi dimulai sejak ditemukannya mikroskop dan berkembang menjadi
ilmu yang multidispliner. Dalam penerapannya dimasa kini, mikrobiologi tidak
dapat dipisahkan dengan ilmu yang lain dalam aplikasinya di bidang farmasi,
kedokteran, Teknik kimia, arkeologi, pertanian, gizi dan kesehatan, serta
pangan. (Fidia. 2016)
Sterilisasi adalah proses penghilangan atau membunuh mikroorganisme
(protozoa, fungi, bakteri, mycoplasma, virus) dalam benda/steril, serta
mencegah terjadinya kontaminasi. Peralatan laboratorium yang akan
disterilisasi memerlukan bahan pengemas. Kemasan adalah suatu benda yang
digunakan sebagai wadah/tempat yang dikemas dan dapat
28
mencegah/mengurangi kerusakan, melindungi bahan yang ada di dalamnya dari
pencemaran serta gangguan fisik seperti gesekan, benturan dan getaran. (Istini.
2020)
Seiring dengan berkembangnya teknologi kesehatan di Indonesia semakin
meningkatnya kebutuhan akan instrument medis. Instrument medis sangat
berpengaruh sebagai penunjang untuk penyembuhan luka atau penyakit
terhadap kesembuhan pasien. Malpraktek pada dunia kedokteran banyak terjadi
akibat factor teknis dalam masa penyembuhan. Salah satu factor teknis
penyebab terjadinya malpraktek adalah kontaminasi terhadap alat yang
digunakan dalam dunia kesehatan. Salah satu cara untuk mencegah terjadinya
kontaminasi pada peralatan medis yaitu dengan melakukan sterilisasi.
(Hardono. 2020)
Sterilisasi dapat didefinisikan sebagai proses yang secara efektif
membunuh atau menghilangkan mikroorganisme yang dapat berpindah (seperti
jamur, bakteri, virus) dari permukaan peralatan. Mikroorganisme dapat
dikendalikan yaitu dihambat atau dimatikan dengan menggunakan berbagai
proses. Metode sterilisasi dapat dibagi menjadi dua kelompok umum yaitu fisik
dan kimia meskipun sterilisasi dapat dicapai dengan bahan kimia tertentu,
umumnya metode fisik lebih handal. Salah satu metode paling efektif untuk
mematikan mikroorganisme menggunakan suhu tinggi. Salah satu sterilisator
yang menggunakan metode panas uap bertekanan adalah autoclave. Autoclave
adalah alat untuk mensterilkan berbagai macam peralatan dan perlengkapan
yang digunakan dalam mikrobiologi menggunakan uap air panas pada
29
umumnya 15 Psi dan dengan suhu 121oC . lama sterilisasi yang dilakukan
selama 15 menit. (Hardono. 2020)
B. Maksud Percobaan
1. Untuk mengetahui metode sterilisasi
2. Untuk mengetahui cara membebaskan alat maupun media dari jasad renik
C. Tujuan Percobaan
1. Mahasiswa mampu mengetahui metode sterilisasi
2. Mahasiswa mampu mengetahui cara membebaskan alat maupun media dari
jasad renik
1. Mengetahui metode sterilisasi
2. Mengetahui cara membebaskan alat maupun media dari jasad renik
30
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Teori Umum
kapang, mikroalga, protozoa, dan Archaea. Selain itu, virus merupakan
makhluk mikro aseluler sehingga sering dikaji dalam ilmu mikrobiologi
meskipun tidak dapat sepenuhnya dikatakan sebagai makhluk hidup.
Mikrobiologi dimulai sejak ditemukannya mikroskop dan berkembang menjadi
ilmu yang multidispliner. Dalam penerapannya dimasa kini, mikrobiologi tidak
dapat dipisahkan dengan ilmu yang lain dalam aplikasinya di bidang farmasi,
kedokteran, Teknik kimia, arkeologi, pertanian, gizi dan kesehatan, serta
pangan. (Fidia. 2016)
Steril adalah suatu keadaan dimana suatu zat bebas dari mikroba hidup,
baik yang patogen (menimbulkan penyakit) maupun apatogen/non patogen
(tidak menimbulkan penyakit), baik dalam bentuk vegetatif (siap untuk
berkembang biak) maupun dalam bentuk spora (dalam keadaan statis, tidak
dapat berkembang biak, tetapi melindungi diri dengan lapisan pelindung yang
kuat). Steril atau teknik aseptis adalah suatu system cara bekerja (praktek) yang
menjaga sterilitas ketika menangani pengkulturan mikroorganisme untuk
mencegah kontaminasi terhadap kultur mikroorganisme yang diinginkan.
(Istini. 2020)
31
Uji sterilitas merupakan suatu cara pengujian untuk mengetahui suatu
sediaan atau bahan farmasi atau alat-alat kesehatan yang dipersyaratkan harus
dalam keadaan steril. Dengan demikian sediaan dan peralatan tersebut harus
bebas dari mikroorganisme. Jadi, hanya dikenal sediaan dan peralatan tersebut
steril atau tidak steril, tidak ada istilah hamper atau setengah steril. (Rosylianti.
2012)
Sterilisasi dalam mikrobiologi berarti membebaskan tiap benda atau
subtansi dari semua kehidupan mikrorganisme (protozoa, fungi, bakteri dan
virus) dalam bentuk apapun. Untuk mendapatkan keadaan steril ini, diperlukan
proses fisik (panas), penggunaan bahan kimia (gas formaldehid dan clorox),
antibiotik, sinar UV atau sinar gamma, ataupun dengan cara mekanik melalui
sentrifungsi kecepatan tinggi atau filtrasi (Edhi. 2013)
Sterilisasi merupakan suatu proses untuk membunuh mikroorganisme
sampai ke spora-sporanya, yang terdapat di dalam bahan makanan. Proses ini
dilakukan dengan cara memanaskan makanan sampai temperature 121 °C,
selama watu 15 menit (Tri yuni hendrawati,2017). Sterilisasi bisa juga diartikan
sebagai upaya yang dilakukan dalam rangka mencegah dan menghindari
kontaminasi (Anis. 2015).
Sterilisasi merupakan suatu proses dengan metode tertentu yang dapat
memberikan hasil akhir, yaitu sutu bentuk kadaan yang tidak adapat
diyunjukkan lagi adanya mikrorganisme hidup. Metode sterilisasi cukup
banyak, namun alternatif yang dipilih sangat bergantung pada keadaan serta
32
kebutuhan setempat. Apapun pilihan medodenya hendaknya tetap menjaga
kualitas hasil sterilisasi (Raudah. 2017)
Sterilisasi juga merupakan salah satu teknik yang penting dalam bekerja
dalam laboratorium. Tenknok laboratorium merupakan kiat-kiat mengenai
seluk beluk laboratorium. Sebelum melakukan praktikum di dalam
laboratorium diperlukan pengenalan-pengenalan mengenai beberapa
pengetahuan pokok dan teknik – teknik laboratorium ini untuk mencegah
timbulnya bahaya yang ditimbulkan oleh alat dan bahan dan bahan dalam
laboratorium maupun kesalahan dalam penggunaan peralatan
(Tim Kimia Dasar. 2012).
Tujuan sterilisasi adalah membunuh semua bentuk mikroorganisme hidup
termasuk sporanya pada alat-alat yang disterilkan (Florence. 2012). Sterilisasi
juga bertujuan untuk mematikan mikrorganisme yang berpotensi merugikan
pertumbuhan dan perkembangan bibit. Misalnya saja terkontaminasi oleh
bakteri (Yusnu, dkk. 2018).
Sterilisasi peralatan bisa dilakukan dengan cara pemanasan kering maupun
basa. Misalnya pada wadah botol, gelas dan logam. Pemanasan kering
dilakukan dengan cara menaruh wadah atau gelas kedalam oven yang bersuhu
tinggi selama jangka waktu tertentu. Untuk pemanasan kering, wadah atau gelas
harus benar-benar dalam keadaan kering sebelum dimasukkan kedalam oven.
Pasalnya bila bila wadah dalam kondisi basa bisa mengakibatkan alat pecah
(Yusnu, dkk. 2018).
33
Pemanasan basah, biasanya dipakai autoklaf pada tekanan 1 atmosfer (atm)
dengan suhu dan waktu tertentu. Angka suhu yang dipakai biasanya 121°C
selama 15 menit atau 115°C selama 30 menit. (Yusnu, dkk. 2018).
Autoklaf adalah alat pemanas tertutup yang fungsinya untuk mensterilkan
suatu benda menggunakan uap bersuhu dan bertekanan tinggi biasanya suhu
digunakan 121oC dan bertekanan 15 kg/cm2 yang dilakukan selama kurang
lebih 15 menit. (Fitri. 2013)
Penurunan tekanan pada autoklaf tidak dimaksudkan untuk membunuh
mikroorganisme, melainkan meningkatkan suhu dalam autoklaf. Suhu yang
tinggi inilah yang akan membunuh mikroorganisme. Prinsip kerja autoklaf yaitu
mensterilisasi bahan dengan menggnakan tekanan uap optimum. Pada saat
tercapai tekanan di suhu yang sesuai, maka proses sterilisasi dimulai dan timer
mulai mengitung waktu mundur. Setelah proses sterilisasi, sumber panas
dimatikan dan tunggu tekanan dalam kompartemen turun hingga sama dengan
tekanan udara di lingkungan (jarum pada preisure gauge menunjukan angka
nol) (Fitri. 2013)
Keunggulan autoklaf adalah dapat mensterlisasi alat dan bahan hingga
tidak ada mikroorganisme yang hidup lagi, autoklaf memerlukan waktu yang
singkat untuk sterilisasi serta menggunakan suhu dan tekanan tunggi sehingga
memberikan kekuatan yang lebih besar untuk membunuh sel dibandingkan
dengan udara panas biasa. Autoklaf memiliki kelebihan lain yaitu alat perebus
yang bertekanan tinggi (Permatasari, dkk. 2013)
34
Cara sterilisasi pembakaran biasanya diperuntukkan peralatan-peralatan
yang terbuat dari logam seperti jarum inokulasi, pinset dan pisau. Alat-alat
logam itu dipanaskan sampai membara. Untuk wadah gelas yang telah
disterilisasi didalam autoklaf, ketika akan dipakai dilakukan sterilisasi lagi
dibgian ujung mulut wadah dengan cara pemanasan beberapa saat (Yusnu, dkk.
2018).
Sterilisasi penyaringan. Sterilisasi larutan yang labil terhadap panas kering
sering dilakukan dengan penyinaran menggunakan bahan yang dapat menahan
mikroba, hingga mikroba yang dikandungnya dapat dipisahkan secara fisika.
Perangkat penyaringan umumnya terdiri dari suatu matriks berpori bertutup
kedap atau dirangkaian pada wadah yang tidak permiabel. Efektifitas
penyaringan media atau penyaringan substrat tergantung pada ukuran pori
matriks, daya adsorpsi bakteri dari matriks dan mekanisme pengayakan (Tim
MGMP Pati. 2015).
Sterilisasi dengan cara aseptik dilakukakan untuk mencegah masuknya
mikroba hidup kedalam komponen steril atau komponen yang melewati proses
antara yang melibatkan produk setengah jadi atau produk ruahan atau
komponen yang bebas dari mikroba yang hidup (Tim MGMP Pati. 2015).
Dalam melakukan sterilisasi cara aseptik diperlukan bahan pensteril seperti
golongan alkohol contonya etanol. Bahan ini efektif membunuh bakteri dan
fungi, tetapi tidak bisa membunuh endospore. Mekanisme kerjanya adalah
dengan mendenaturasi protein mikroorganisme, melarutkan lipid dari
membrane mikroorganisme. Konsentrasi adalah dari 70-80% dengan cepat
35
dapat membunuh mikroorganisme disbanding dengan etanol murni karena
untuk mendenaturasi protein diperlukan air (Edhi. 2013).
Selanjutnya yaitu golongan logam berat contohnya merkuri, perak dan
tembaga. Bahan ini bersifat antiseptik karena mampu berkombinasi dengan
protein seluler. Untuk merkuri penggunaannya lebih dibatasi karena bersifat
korosif dan toksiknya tinggi serta kurang efektif terhadap bahan organik.
Golongan aldehid contonya formaldehid, formalin adalah larutan 37% gas
formaldehid merupakan antimikroba paling efektif menginaktivasi hamper
semua mikroorganisme. Dan golongan peroksigen, contohnya ozon (O2) dan
hydrogen peroksida (H2O2) sebagai antimikroba dengan cara menoksidasi
komponen seluler mikroorganisme (Edhi. 2013).
Terdapat beberapa Teknik sterilisasi yang dapat dilakukan, yaitu: sterilisasi
secara fisik, kimia, mekanik, pasteurisasi dan tyndalisasi. (Hafsan. 2014)
1. Sterilisasi secara fisik
Selama senyawa kimia yang disterilkan tidak berubah atau terurai
akibat suhu tinggi dan atau tekanan tinggi, selama itu sterilisasi secara fisik
dapat dilakukan. Misalnya dengan pemanasan udara panas, uap air
bertekanan, pemijaran, penggunaan sinar-sinar bergelombang pendek
seperti sinar X, sinar gamma, UV dan sebagainya. Sterilisasi dengan udara
panas (kering) digunakan alat yaitu oven (Hot Air Sterilizer). Cara ini umum
digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas. Suhu yang digunakan 170-
180oC selama 2-3 jam. (Hafsan. 2014)
36
Sterilisasi dengan uap air bertekanan, merupakan cara yang paling
banyak digunakan. Alat yang dipakai adalah autoklaf, umumnya material
yang disterilkan berupa medium, air dan sebagainya. Suhu yang digunakan
121oC, dengan tekanan 15 lbs selama 15 menit. Sterilisasi dengan autoklaf
merupakan cara yang paling sering digunakan karena; uap air panas dengan
tekanan tinggi memperbesar kemungkinan terjadinya penetrasi uap air ke
dalam sel mikroorganisme, yang menyebabkan koagulasi protein
protoplasma sehingga mengakibatkan kematian sel mikroorganisme.
(Hafsan. 2014)
2. Sterilisasi secara kimia
Sterilisasi secara kimia yaitu memaparkan alat atau bahan yang
mengandung mikroorganisme terhadap suatu senyawa kimia sehingga
dengan suatu reaksi tertentu dapat membunuh atau menghentikan
pertumbuhan mikroorganisme tersebut tanpa merusak bahan atau alat yang
disterilisasi. (Hafsan. 2014)
Senyawa kimia yang paling banyak digunakan sebagai desinfektan
(senyawa yang dapat menghancurkan sel) antara lain CuSO4, AgNO3,
HgCl2, ZnO, alkohol dan campurannya. Beberapa larutan garam seperti
NaCl (9%), KCl (11%), dan KNO3 (10%). Basa kuat dan asam kuat dapat
juga digunakan karena mampu menghidrolisis sel mikroorganisme.
(Hafsan. 2014)
37
3. Sterilisasi secara mekanik
Prinsip sterilisasi secara mekanik (filtrasi) yaitu menyaring suatu cairan
non steril dengan kertas membrane sehingga cairan yang melewatinya akan
terbebas dari mikroorganisme (steril). Pada umumnya bahan yang
disterilkan melalui cara ini adalah bahan yang mengandung senyawa tidak
tahan suhu tinggi atau tekanan tinggi seperti serum darah, antibiotic,
glukosa dll. Filter apparatus umumnya terdiri dari corong, filter base,
penjepit corong, labu pengumpul, selang, dan pompa vakum. Filter
apparatus juga dapat digunakan untuk menghitung mikroorganisme dengan
prinsip yang sama dengan sterilisasi filtrasi. Kertas membrane filter
memiliki pori-pori yang sangat kecil, lebih kecil dari ukuran bakteri pada
umumnya. Diameter pori-pori dapat berukuran 0,2 um, 0,45 um, 0,65 um
dll. (Hafsan. 2014)
4. Pasteurisasi
Pasteurisasi adalah teknik sterilisasi yang biasa digunakan untuk
larutan-larutan yang mudah rusak apabila terkena suhu tinggi lebih tepat
digunakan untuk susu dan produk susu. Pasteurisasi tidak membunuh semua
mikroorganisme yang terdapat pada susu namun mengurainya sehingga
akan lebih tahan lama disimpan. Bakteri thermoduric memiliki
kemungkinan bertahan hidup lebih besar saat pasteurisasi. Pasteurisasi
terdapat dua cara yaitu metode lama (yang dikembangkan oleh Louis
Pasteur), dengan memanaskan susu pada 63oC selama 30 menit atau dengan
flash pasteurisasi (HTST-High Temperature Short-Term) yaitu pemanasan
38
cepat pada 72oC selama 15 detik kemudian didinginkan dengan cepat.
(Hafsan. 2014)
5. Tyndalisasi
Steaming (tyndallization) atau sterilisasi bertahap (discontinue) yang
dikembangkan oleh John Tyndall adalah istilah untuk cara sterilisasi dengan
uap air panas yang dapat mencapai suhu 100oC pada wadah tanpa tekanan.
Sterilisasi menggunakan uap air panas dapat dilakukan sekali atau tiga kali
(tahap) dengan hari yang berlainan dengan memanaskannya pada 80oC
selama satu jam. Tindalisasi dilakukan pada suhu 90-100oC selama 30 menit
secara bertahap 3 kali. Selama jeda tahapan media diinkubasi pada 37oC
semalam. Pemanasan tiga tahap dimaksudkan untuk memberi kesempatan
endospore untuk berkecambah sehingga akan mati pada tahap pemanasan
selanjutnya. (Hafsan. 2014)
39
B. Uraian Bahan
1. Aquadest (FI III,1979,Hal: 96)
Nama Resmi : AQUA DESTILLATA
Nama lain : Aquadest, air suling
RM/BM : H2O/18,02
Rumus Struktur :
Pemerian : Cairan tidak berwarna, tidak berbau, tidak berasa
Kelarutan : Larut dengan semua jenis larutan
Kegunaan : Zat pelarut.
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup kedap
2. Alkohol (FI III,1979,Hal: 65)
Nama lain : Akohol, etanol, ethyl alkohol
RM/BM : C2H6O/46,07
Rumus Struktur : H H
H – C – C – OH
H H
Pemerian : Cairan tidak berwarna, jernih, mudah menguap dan
mudah bergerak; bau khas rasa panas, mudah terbakar
dan memebrikan nyala biru yang tidak berasap.
40
dalam eter P
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat, terhindar dari cahaya,
ditempat sejuk jauh dari nyala air
3. Aluminium foil (FI III,1979,Hal: 96)
Nama lain : Aluminium, aluminium foil
RM/BM : Al/26,92
Rumus Struktur :
Pemerian : Warna keperakan, tidak berbau, tidak berasa
Kegunaan : Sebagai reaktan reaksi kombinasi dan substitusi
41
BAB III
METODE KERJA
A. Alat
Adapun alat yang digunakan dalam praktikum kali ini diantaranya yaitu
: autoklaf, botol semprot, cawan petri, Erlenmeyer, gelas ukur, gunting, kaki
tiga, kawat kasa, lampu spiritus, oven, ose bulat, ose lurus, rak tabung
reaksi, tabung reaksi.
B. Bahan
Adapun bahan yang digunakan dalam praktikum kali ini diantaranya
yaitu : aluminium foil, alkohol, benang godam, kapas, kertas.
C. Cara Kerja
1. Sterilisasi panas
a. Oven
1) Disiapkan alat-alat laboratorium dari gelas seperti cawan petri,
tabung, Erlenmeyer.
2) Ditutup/disumbat alat-alat yang mau disterilkan menggunakan
kapas.
3) Dibungkus alat menggunakan kertas, lalu diikat dengan benang
godam.
4) Dinyalakan oven terlebih dahulu dan disetting pada suhu 175oC
selama 1,5-2 jam.
5) Dimasukkan alat kedalam oven pada suhu 175oC
42
b. Pemisaran
1) Disiapkan lampu spiritus
2) Disiapkan alat yang akan disterilisasi.
3) Disterilisasi alat dengan cara membakar permukaan alat gelas
diatas nyala api Bunsen.
4) Dilakukan sterilisasi ose dengan cara memanaskan ose pada
lampu spiritus atau nyala api Bunsen, mulailah dari pangkal
kawat dan setelah terlihat merah berpijar, secara pelan-pelan
pemanasan dilanjutkan ke ujung ose.
2. Sterilisasi basah
a. Autoklaf
1) Disiapkan alat-alat yang akan disterilisasi
2) Dibungkus alat-alat yang akan disterilkan dengan plastik
3) Dinyalakan terlebih dahulu autoklaf, lalu disetting pada suhu
121oC
4) Dimasukkan alat yang akan disterilkan kedalam autoklaf
5) Disterilisasi pada suhu 121oC selama 10-30 menit
b. Desinfektan
1) Diisi botol semprot dengan alkohol 70%
2) Disemprot tangan dengan alkohol
3) Didiamkan dan akan mulai bekerja, tangan disemprot lagi
dengan alkohol dan diusapkan ke seluruh permukaan tangan
43
4) Disemprot sekitar meja kerja dengan alkohol 70% beberapa kali
sampai merata
5) Diletakkan alat dan bahan yang diperlukan
6) Disemprot lagi dengan alkohol semua permukaan alat.
44
BAB IV
A. Hasil
Tabel pengamatan
No Alat dan Bahan Kegunaan
1. Autoklaf Untuk mensterilisasi suatu benda
ataupun media dengan menggunakan
uap bersuhu tinggi dan bertekanan
tinggi.
2. Botol semprot Untuk menyimpan alkohol 70% yang
digunakan untuk menyemprotkan meja
agar steril
3. Cawan petri Berfungsi sebagai wadah pertumbuhan
atau penanaman mikroba secara
kuantitatif dan tempat pengujian sampel.
4. Erlenmeyer Untuk menampung larutan, bahan atau
cairan, digunakan juga untuk meracik
atau menghomogenkan bahan-bahan
komposisi media, menampung aquadest,
kultivasi mikroba dalam kultur cair.
45
5. Gelas ukur Digunakan untuk mengukur volume
suatu zat dalam bentuk cair, gelas ukur
tidak dapat digunakan untuk larutan
panas.
6. Gunting Digunakan untuk memotong bahan yang
tipis, seperti kertas, tekstil tali, dan kabel.
7. Kaki tiga Sebagai penahan kawat kasa dan
penyangga ketika proses pemanasan.
8. Kawat kasa Untuk menahan beaker atau labu ketika
proses pemanasan menggunakan
pemanas Bunsen atau pemanas spiritus.
9. Lampu spiritus Untuk sterilisasi (memijarkan ose)
sebelum inokulasi sample dan
mengkondisikan area dalam kondisi
aseptis dengan jarak max dari pijaran
lampu spiritus 30 cm
10. Oven Untuk mengeringkan alat-alat sebelum
digunakan dan digunakan untuk
mengeringkan bahan yang dalam
keadaan basah.
46
11. Ose bulat Digunakan untuk mengambil atau
memindahkan sampel dari suatu medium
ke medium lainnya secara zigzag.
12. Ose lurus Digunakan untuk mengambil atau
memindahkan sampel dari suatu medium
ke medium lainnya dengan cara
ditusukkan.
13. Rak tabung reaksi Wadah meletakkan tabung reaksi
14. Tabung reaksi Tempat mereaksikan dua larutan/bahan
kimia atau lebih, serta sebagai tempat
mengembangbiakan mikroba dalam
media cair.
15. Aluminium foil Sebagai penutup Erlenmeyer atau tabung
reaksi
16. Alkohol Cairan yang digunakan sebagai
antiseptic (membunuh atau menghambat
mikroorganisme), untuk pembersih alat-
alat medis.
47
17. Benang godam Berfungsi untuk mengikat alat-alat yang
telah dibungkus dengan kertas sebelum
di masukkan ke oven untuk sterilisasi.
18. Kapas Berfungsi sebagai penyumbat tutup
tabung reaksi, Erlenmeyer, gelas ukur.
19. Kertas Berfungsi untuk membungkus alat-alat
yang akan di masukkan ke dalam oven
untuk di sterilisasikan.
B. Pembahasan
Pada praktikum kali ini dilakukan pengenalan alat dan bahan yang ada
pada laboratorium mikrobiologi dan virologi dasar. Laboratorium mikrobiologi
adalah salah satu laboratorium yang wajib ada pada program mata kuliah
farmasi karena laboratorium ini sangat menunjang pembuatan produk-produk
atau sediaan farmasi.
berukuran mikroskopis. Sedemikian kecilnya sehingga keberadaan mereka
hanya dapat dilihat dengan alat yang disebut mikroskop. Dunia
mikroorganisme terdiri dari lima kelompok organisme yaitu, bakteri, protozoa,
virus, algae serta cendawan (jamur) mikroskopik. Dengan demikian lingkup
mikrobiologi meliputi bakteriologi, yaitu ilmu yang mempelajari tentang
bakteri. Sedangkan virologi yaitu ilmu yang mempelajari tentang virus.
48
Sterilisasi dalam mikrobiologi berarti membebaskan tiap benda atau
subtansi dari semua kehidupan mikroorganisme (protozoa, fungi, bakteri dan
virus) dalam bentuk apapun. Untuk mendapatkan keadaan steril ini, diperlukan
proses fisik (panas), penggunaan bahan kimia (gas formaldehid dan clorox),
antibiotik, sinar UV atau sinar gamma, ataupun dengan cara mekanik melalui
sentrifungi kecepatan tinggi atau filtrasi.
Sterilisasi merupakan suatu proses dengan metode tertentu yang dapat
memberikan hasil akhir, yaitu suatu bentuk keadaan yang tidak dapat
ditunjukkan lagi adanya mikroorganisme hidup. Metode sterilisasi cukup
banyak, namun alternatif yang dipilih sangat bergantung pada keadaan serta
kebutuhan setempat. Apapun pilihan metodenya hendaknya tetap menjaga
kualitas hasil sterilisasi.
Alat yang digunakan pada percobaan ini yaitu: botol semprot, cawan petri,
Erlenmeyer, gelas ukur, gunting, kaki tiga, oven, ose bulat, ose lurus, rak
tabung reaksi, tabung reaksi.
Adapun bahan yang digunakan pada percobaan ini yaitu: aluminium foil,
alkohol 70%, kapas, dan kertas.
Tujuan sterilisasi adalah membunuh semua bentuk mikroorganisme hidup
termasuk sporanya pada alat-alat yang disterilkan. Sterilisasi juga bertujuan
untuk mematikan mikroorganisme yang berpotensi merugikan pertumbuhan
dan perkembangan bibit. Misalnya saja terkontaminasi oleh bakteri.
Sterilisasi peralatan bisa dilakukan dengan cara pemanasan kering maupun
basah. Misalnya pada wadah botol, gelas dan logam. Pemanasan kering
49
dilakukan dengan cara manaruh wadah atau gelas kedalam oven yang bersuhu
tinggi selama jangka waktu tertentu. Untuk pemanasan kering, wadah atau
gelas harus benar-benar dalam keadaan kering sebelum dimasukkan kedalam
oven. Pasalnya bila wadah dalam kondisi basah bisa mengakibatkan alat pecah.
Pemanasan basah, biasanya dipakai autoklaf pada tekanan 1 atmosfer
(atm) dengan suhu dan waktu tertentu. Angka suhu yang dipakai biasanya
121°C selama 15 menit atau 115°C selama 30 menit.
Autoklaf adalah alat pemanas tertutup yang fungsinya untuk mensterilkan
suatu benda menggunakan uap bersuhu dan bertekanan tinggi biasanya suhu
digunakan 121oC dan bertekanan 15 kg/cm2 yang dilakukan selama kurang
lebih 15 menit.
Botol semprot diisi dengan alkohol 70%, berfungsi untuk menyemprot
meja atau alat-alat disekitar agar tidak tertempel mikroorganisme hidup.
Cawan petri, berfungsi sebagai wadah pertumbuhan atau penanaman
mikroba secara kuantitatif dan tempat pengujian sampel. Cara sterilisasi alat
ini, sebelumnya dibungkus dengan menggunakan kertas, bagian putihnya di
dalam. Hal ini dilakukan agar tinta pada kertas tidak melengket pada alat. Cara
membungkus cawan petri seperti membungkus kado. Jika cawan petri berisi
makan cawan dimasukkan kedalam autoklaf.
Erlenmeyer digunakan untuk meletakkan media maupun untuk pemanasan
media. Cara sterilisasinya yaitu bila kosong disterilisasi dengan oven,
sedangkan jika berisi disterilisasi dengan autoklaf. Sebelum disterilkan,
terlebih dahulu mulut Erlenmeyer ditutup dengan kapas.
50
Gelas ukur digunakan untuk mengambil cairan dalam volume tertentu.
Cara sterilisasinya di dalam autoklaf, ditutup dengan kertas lalu diikat dengan
benang godam.
Gunting digunakan untuk memotong bahan yang tipis, seperti kertas,
tekstil tali, dan kabel.
Kaki tiga sebagai penahan kawat kasa dan penyangga ketika proses
pemanasan.
Kawat kasa berfungsi untuk menahan beaker atau labu ketika proses
pemanasan menggunakan pemanas Bunsen atau pemanas spiritus.
Lampu spiritus digunakan untuk sterilisasi jarum ose, jarum enten, dan
jarum needle. Selain itu dapat di gunakan untuk memanaskan suatu media.
Oven digunakan sebagai alat sterilisasi panas kering dengan temperature
170-180oC. Alat ini bekerja tanpa membutuhkan kelembaban sehingga tidak
membasahi alat yang disterilkan. Namun tidak semua bahan/alat dapat
disterilkan dengan cara panas kering, contohnya adalah bahan yang terbuat dari
karet maupun plastic yang tidak tahan dengan panas tinggi.
Ose bulat digunakan untuk mengambil atau memindahkan sampel dari
suatu medium ke medium lainnya secara zigzag. Ose bulat disterilkan dengan
cara dipanaskan menggunakan Bunsen.
Ose lurus duntuk mengambil atau memindahkan sampel dari suatu
medium ke medium lainnya dengan cara ditusukkan. Ose lurus disterilkan
dengan cara dipanaskan menggunakan Bunsen sama seperti ose bulat.
51
Tabung reaksi digunakan untuk meletakkan media yang ditanami mikroba
untuk diamati. Cara sterilisasi alat ini, sebelumnya dibungkus dengan
menggunakan kertas, bagian putihnya di dalam. Hal ini dilakukan agar tinta
pada kertas tidak melengket pada alat.
Aluminium foil sebagai penutup Erlenmeyer atau tabung reaksi agar tidak
terkontaminasi.
Alkohol 70% dipakai untuk mensterilkan meja atau alat-alat yang
tidakdimasukkan kedalam oven, seperti gunting.
Kapas dipakai untuk menutup atau menyumbat Erlenmeyer, tabung reaksi,
gelas ukur.
Kertas, dipakai untuk membungkus alat-alat yang akan di masukkan ke
dalam oven untuk disterilkan.
Manfaat percobaan sterilisasi yaitu untuk mengetahui metode sterilisasi,
mengetahui cara membebaskan alat maupun media dari jasad renik dan dapat
menjelaskan secara singkat cara mensterilisasi.
52
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
1. Sterilisasi dalam mikrobiologi berarti membebaskan tiap benda atau
subtansi dari semua kehidupan mikrorganisme (protozoa, fungi, bakteri dan
virus) dalam bentuk apapun. Dalam praktikum dilakukan sterilisasi alat-alat
seperti gelas ukur, erlenmeyer, tabung rekasi, cawan petriks, ose bulat, ose
lurus dan lain-lain dengan tujuan untuk membunuh semua bentuk
mikroorganisme hidup termasuk sporanya pada alat-alat yang disterilkan.
2. Sterilisasi yang digunakan yaitu sterilisasi cara aseptik yang digunakan
untuk membunuh bakteri yang terdapat pada meja tempat praktikum dengan
etanol 75%. Cara yang kedua yaitu dengan metode panas kering dengan alat
yaitu oven digunakan untuk sterilisasi alat-alat dari kaca seperti cawan petri,
erlenmeyer, tabung rekasi dan lain-lain dan sterilisasi yang terakhir yaitu
sterilisasi pembakaran dengan menggunakan Bunsen untuk mensterilisasi
ose bulat dan ose lurus. Namun sebelum sterilisasi alat-alat harus dibungkus
dengan kertas dan dikiat dengan benang gudang. Tujuan dari
pembungkusan yaitu agar alat-alat tidak terkontaminasi dengan bakteri luar
dan alat tidak pecah karena pada umumnya alat terbuat dari kaca. Selain
menggunakan oven, sterilisasi juga bisa dengan alat autoklaf, dengan
metode panas basah. Caranya dengan memasukkan uap dari atas autoklaf
sehingga udara tertekan ke bawah dan keluar melalui saluran bawah
autoklaf. Setelah itu suhu meningkat dan terjadilah sterilisasi.
53
B. Saran
1. Laboratorium
Kalau bisa alatnya diperlengkap lagi, alat-alat yang telah rusak diperbaiki
agar bisa untuk digunakan saat praktikum selanjutnya.
2. Asisten
Untuk kakak asisten saat menjelaskan suaranya bisa diperbesar karena
praktikan yang duduk di belakang kurang mendengar apa yang disampaikan.
54
DAFTAR PUSTAKA
Anis, Shofiyani, Neni.2015. Pengembangan Metode Sterilisasi Pada Berbagai Eksplan Guna
Meningkatkan Keberhasilan Kultur Kalus Kencur (kaemferia galangal L). Agritech.
Vol 17 (1):55-64.
Dirjen POM. 1979. Farmakope Indonesia. Edisi III. Departemen Kesehatan

Republik Indonesia. Jakarta
Edhi, Sandra.2013. Cara Mudah Memahami dan Menguasai Kultur Jaringan. Bogor
: IPB Press
Fibriana Fidia, Andin Vita Amalia. 2016. Potensi Kitchen Microbiology Untuk
Meningkatkan Keterampilan Teknik Hands-on Dalam Pembelajaran
Mikrobiologi. Universitas Negeri Semarang : Unnes Science Education
Journal
Florence Meliawaty. 2012. Efisiensi Sterilisasi Alat Bedah Mulut Melalui Inovasi
Oven Dengan Ozon Dan Infrared. JKM. Vol 11 (2): 147-167
Haeria. 2017. Pengantar Ilmu Farmasi. UIN Alauddin : Makassar
Hardono Tri, Kuat Supriyadi. 2020. Modifikasi Autoclave Berbasis Atmega328

(Suhu). Universitas Muhammadiyah Yogyakarta : UMY Science Education
Journal
Hendrawati Tri Yuni, Suratmin Utomo. 2017. Optimasi Suhu dan Waktu Sterilisasi
Pada Kualitas Susu Segar Di Kabupaten Boyolali.Jurnal
Teknologi.Universitas Muhammadiyah Jakarta. Vol 9(2). Hal 98-101
Istini. 2020. Pemanfaatan Plastik Polipropilen Standing Pouch Sebagai Salah Satu
Kemasan Sterilisasi Peralatan Laboratorium. Vol 2 (3). Universitas Gadjah
Mada : Indonesia Journal Of Laboratory
Martoyo Pratiwi Yuniarti. Ratih Dewanti Hariyadi. Permatasari. Winiati Rahayu.

2013. Kajian standar cemaran mikroba dalam pangan di indonesia.Jurnal
Standardisasi Volume 16 Nomor 2, Juli 2014: Hal 113 - 124.
Rahmayanti Fitri. 2013. Intruksi kerja pemakaian autoclave. Universitas

Brawijaya. Indonesia Journal Of Laboratoriy. Vol.2(1)
Raudah, Tien Zubaidah, Imam Santoso.2017. Efektivitas Sterilisasi Metode Panas

Kering Pada Alat Medis Ruang Perawatan Luka Rumah Sakit
Dr.H.Soemarno SosroatmodjoKuala Kapuas. Jurnal Kesehatan Lingkungan
Vol. 14 (1)
Tim Kimia Dasar.Jurusan PMIPA-FKIP.2012.Penuntun Praktikum Kimia Dasar
Jurusan Pendidikan MIPA.Jember University Press
Tim MGMP Pati.2015.Ilmu Resep Teori Jilid III.Yogyakarta: Deepublish
Yusnu, Iman, Nurhakim, 2018. Sukses Budidaya Jamur Tiram. Jakarta : Bumi
Pamulang.
LAMPIRAN
A. Skema Kerja
1. Oven
Disiapkan alat-alat laboratorium dari gelas seperti cawan petri, tabung,
Erlenmeyer
Ditutup/disumbat alat-alat yang mau disterilkan menggunakan kapas
Dibungkus alat menggunakan kertas. Lalu diikat dengan benang godam
Dinyalakan oven terlebih dahulu dan disetting pada suhu 175oC selama
1,5-2 jam.
Dimasukkan alat kedalam oven pada suhu 175oC

2. Pemisaran
Disiapkan lampu spiritus
Disiapkan alat yang akan disterilisasi
Disterilisasi alat dengan cara membakar permukaan alat gelas diatas
nyala api Bunsen
Dilakukan sterilisasi ose dengan cara memanaskan ose pada lampu
spiritus atau nyala api Bunsen

3. Autoklaf
Disiapkan alat-alat yang akan disterilisasi
Dibungkus alat-alat yang akan disterilkan dengan plastik
Dinyalakan terlebih dahulu autoklaf, lalu disetting pada suhu 121oC
Dimasukkan alat yang akan disterilkan kedalam autoklaf
Disterilisasi pada suhu 121oC selama 10-30 menit

4. Desinfektan
Diisi botol semprot dengan alkohol 70%
Disemprot tangan dengan alkohol
Disemprot lagi tangan dengan alkohol dan diusapkan ke seluruh
permukaan tangan
Disemprot sekitar meja kerja dengan alkohol 70% beberapa kali
sampai merata
Diletakkan alat dan bahan yang diperlukan
Disemprot lagi dengan alkohol semua permukaan alat

B. Gambar
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI LABORATORIUM MIKROBIOLOGI

PROGRAM STUDI S1 FARMASI PROGRAM STUDI S1 FARMASI
UNIVERSITAS MEGARESZKY UNIVERSITAS MEGARESZKY
Ket: Dibungkus cawan petri menggunakan Ket: Dibungkus tabung reaksi menggunakan
kertas lalu diikat dengan benang godam kertas lalu diikat dengan benang godam
sebelum dimasukkan ke dalam oven sebelum dimasukkan ke dalam oven
untuk disterilkan. untuk disterilkan.

Ket: Dibungkus alat-alat (cawan petri, tabung Ket: Dimasukkan alat-alat yang telah di
reaksi, gelas ukur, Erlenmeyer) sebelum bungkus ke dalam oven untuk
dimasukkan ke dalam oven disterilkan dengan metode panas
kering.
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
UNIVERSITAS MEGARESZKY
Ket: Dipanaskan ose bulat dan ose lurus

menggunakan bunsen
LAPORAN PRAKTIKUM
PEMBUATAN MEDIUM
KELOMPOK II

NUR FITRI AULIAH D1B120098
KELAS B/020
ASISTEN: FELIX RONALDO RADA

FAKULTAS FARMASI
MAKASSAR
2021
BAB I
PENDAHULUAN
A. LatarBelakang
meneliti dan mengetahui dengan baik buruknya makanan atau obat (Haeria,2017).
dari lima (5) kelompok organisme, yaitu: bakteri, protozoa, virus, algae serta
cendawan (jamur) mikroskopik. Dengan demikian lingkup mikrobiologi meliputi
Bakteriologi, yaitu ilmu yang mempelajari tentang bakteri, Virologi yaitu ilmu
yang mempelajari tentang virus, Mikologi yaitu ilmu yang mempelajari tentang
jamu rdan algae dan Parasitologi yaitu ilmu yang mempelajari tetntang parasit
(Haeria,2017).
Pengantar Mikrobiologi, yang membahas tentang pengertian, sejarah
penemuan bakteri hingga perkembangan teori dasar mikrobiologi. Bakteriologi
dasar yang membahas tentang klasifikasi, taksonomi dan nomenklatur bakteri,
morfologi dan struktur bakteri, fisiologi dan metabolisme bakteri dan mengenai
macam-macam media pertumbuhan bakteri. Patogenesis penyakit infeksi yang
terutama membahas tentang aspek umum penyakit infeksi dan peran bakteri
55
dalam menyebabkan penyakit pada manusia. Flora Normal Rongga mulut,
ekosistem mulut dan plak dental yang membahas tentang jenis dan perkembangan
flora normal rongga mulut, lingkungan mulut dan faktor-faktor yang
mempengaruhi pertumbuhan bakteri di rongga mulut dan membahas juga tentang
komposisi bakteri pada plak dental, dan bagaimana pembentukan plak dan
kalkulus di rongga mulut. Mempelajari tentang parasit (Meganada, 2017).
Medium adalah suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi ( zat makan)
yang dipakai untuk menumbuhkan mikroba termaksud bakteri patogen. Selain
untuk menumbuhkan mikrobia medium dapat digunakan pula untuk isolasi,
meperbanyak, pengujian sifat-sifat fisiologi dan perhitungan jumlah mikroba.
Medium harus mengandung nutrien yang merupakan substansi dengan berat
molekul rendah dan mudah larut dalam air. Ini adalah degradasi dari nutrient
dengan molekul yang kompleks. Nutrien dalam medium harus memenuhi
kebutuhan dasar makhluk hidup yang meliputi air, karbon, energi, mineral dan
faktor tumbuh (Kaheruni, dkk. 2017).
Media adalah campuran nutrien atau zat makanan yang dibutuhkan oleh
mikroorganisme untuk pertumbuhan. Media selain untuk menumbuhkan mikroba
juga dibutuhkan untuk isolasi & inokulasi mikroba serta untuk uji fisiologi dan
biokimia mikroba (Hafsan, 2014).
Media merupakan bahan yang terdiri dari zat-zat makanan (nutrient) yang
diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya. Media juga berguna untuk
isolasi sifat-sifat fisiologi dan perhitungan jumlah mikroba dalam suatu bahan,
media dan pembiakkan selektif digunakan untuk menyeleksi bakteri yang
56
diperlukan dari campuran terdapat dari bahan pemeriksaan, dengan menambahkan
zat-zat tertentu bakteri yang dicari dapat dipisahkan dengan mudah, media ini
dapat dibedakan berdasarkan sifatnya yaitu, cair dan padat (Wenny, 2018).
B. Maksud Percobaan
Adapun maksud dari percobaan kali ini adalah untuk memahami
bagaimana pembuatan media dengan benar dan memahami bagaimana proses
dalam pembuatan medium cair dan padat.
C. Tujuan Percobaan
Adapun tujuan dari percobaan kali ini adalah mahasiswa dapat
menentukan cara pembuatan medium baik medium cair maupun medium padat.
Adapun manfaat dari percobaan kali ini yaitu, praktikan dapat memahami
dan mengetahui cara pembuatan dan perhitungan meium cari dan padat.
57
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Teori umum
Mikrobiologi adalah ilmu yang mempelajari semua makhluk
mikroskopik dalam bentuk sel tunggal, multisel, maupun aselular seperti
bakteri, microfungi, kapang, mikroalga, protozoa, dan Archaea. Selain itu, virus
merupakan makhluk mikro aseluler sehingga sering dikaji dalam ilmu
mikrobiologi meskipun tidak dapat sepenuhnya dikatakan sebagai makhluk
hidup. Mikrobiologi dimulai sejak ditemukannya mikroskop dan berkembang
menjadi ilmu yang multidispliner. Dalam penerapannya dimasa kini,
mikrobiologi tidak dapat dipisahkan dengan ilmu yang lain dalam aplikasinya
di bidang farmasi, kedokteran, Teknik kimia, arkeologi, pertanian, gizi dan
kesehatan, serta pangan (Fidia, 2016).
Semua makhluk hidup memerlukan bahan makanan untuk keperluan
hidupnya. Bahan makanan ini diperlukan untuk sintesis bahan sel dan untuk
mendapatkan energi. Demikian pula dengan mikroorganisme, untuk
kehidupannya membutuhkan bahan-bahan organic dan anorganik dari
lingkungannya. Bahan-bahan tersebut disebut dengan nutrient (zat gizi),
sedangkan proses penyerapannya disebut proses nutrisi. Peran utama nutrient
untuk mikroorganisme adalah sebagai sumber energi, bahan pembangun sel dan
sebagai aseptor electron dalam reaksi bioenergik (reaksi yang menghasilkan
energi). Oleh karenannya, bahan makanan yang diperlukan terdiri dari air,
58
sumber energi, sumber karbon, sumber aseptor electron, sumber mineral, factor
pertumbuhan dan nitrogen (Zahrotul, dkk. 2019).
Mikroorganisme dapat ditumbuhkan dan dikembangkan pada suatu
substrat yang disebut medium (jamak : media). Dengan adanya medium
pertumbuhan, aktivitas mikrobia dapat dipelajari dan dengan medium tumbuh
dapat dilakukan isolasi mikrobia dengan kultur murni, perbanyakan, pengujian
sifat fisiologis, dan perhitungan jumlah mikrobia. Keragaman yang luas dalam
tipe nutrient untuk mikrobia yaitu diimbangi dengan oleh tersedianya berbagai
media yang banyak macamnya untuk kultivasinya. Media yang bisa digunakan
yaitu seperti pepton, ekstrak daging, ekstrak khamir, dan agar. Bahan yang
paling umum digunakan untuk membuat medium menjadi padat dapat dipakai
agar (Zahrotul, dkk. 2019).
Media adalah campuran nutrient atau zat makanan yang dibutuhkan oleh
mikroorganisme untuk pertumbuhan. Media selain untuk menumbuhkan
mikroba juga dibutuhkan untuk isolasi & inokulasi mikroba serta untuk uji
fisiologi dan biokimia mikroba. Media yang baik untuk pertumbuhan mikroba
adalah yang sesuai dengan lingkungan pertumbuhan mikroba tersebut, yaitu :
susunan makanannya dimana media harus mengandung air untuk menjaga
kelembaban dan untuk pertukaran zat atau metabolism, juga mengandung
sumber karbon, mineral, vitamin dan gas, tekanan osmose yaitu harus isotonic,
derajat keasaman/pH umumnya netral tapia da juga yang alkali, temperature
harus sesuai dan steril. Media harus mengandung semua kebutuhan untuk
pertumbuhan mikroba, yaitu : sumber energi misalnya gula, sumber nitrogen,
59
juga ion inorganic essensial dan kebutuhan yang khusus, seperti vitamin serta
unsur makro dan unsur mikro (Yusmaniar, dkk. 2017).
Media dapat memanipulasi tempat tumbuhnya biakan atau menjadikan
menjadikan media sebagai isolate tempat tumbuhnya, dan sekaligus
memanipulasi komposisi media pertumbuhannya. Media terdiri dari bahan
dasar, nutrient dan ataupun bahan tambahan. Media dapat dibedakan
berdasarkan sifat fisis, komposisi dan berdasarkan tujuannya. Media sebelum
digunakan harus disterilkan terlebih dahulu, sterilisasi yang digunakan adalah
sterilisasi panas basah (autoklaf). Syarat media yang baik untuk pertumbuhan
mikroba adalah lingkungan kehidupannya harus sesuai dengan lingkungan
pertumbuhan mikroba tersebut, yaitu : susunan makanannya (media harus
mengandung air untuk menjaga kelembaban dan untuk pertukaran
zat/metabolism, juga mengandung sumber karbon, mineral, vitamin dan gas),
tekanan osmose yaitu harus isotonic, derajat keasaman/pH umumnya netral
tapia da juga yang alkali, temperature harus sesuai dan steril. Media harus
mengandung semua kebutuhan untuk pertumbuhan mikroba, yaitu : sumber
energi (contoh : gula), , sumber nitrogen, juga ion inorganic essensial dan
kebutuhan yang khusus, seperti vitamin (Wenny, 2018).
Berdasarkan bentuknya media dibedakan menjadi 3 yaitu :
1. Media padat
Media padat mengandung bahan pemadat atau agar sekitar 15%
sehingga bentuknya padat. Menurut bentuk dan wadahnya dibedakan
menjadi 3 jenis : media tegak, media miring dan media lempeng. Pada
60
umumnya media ini dipergunakan untuk menumbuhkan bakteri maupun
jamur. Pada media lempeng agar pada umumnya digunakan untuk
mengisolasi mikroorganisme oleh karena pada media ini akan tumbuh
isolate atau koloni-koloni bakteri dan jamur yang diduga ada dalam sampel
yang kita kultur. Dengan demikian kita dapat mengidentifikasi secara
makroskopis isolate mikroorganisme tersebut (Suarjana, dkk. 2017).
2. Media setengah padat atau semisolid
Media semisolid merupakan media yang mengandung agar sekitar 0,3-
0,4 % agar sehingga konsistensinya menjadi kenyal atau tidak padat dan
tidak cair. Pada umumnya media ini digunakan untuk melihat pergerakan
atau motilitas bakteri. Bakteri memiliki flagela yang digunakan untuk
bergerak. Pada media semisolid bakteri yang memiliki flagella terlihat
pertumbuhannya melebar sampai diluar bidang tusukan. Sebaliknya bakteri
yang tidak memiliki flagella pertumbuhannya terbatas pada bidang tusukan
pada waktu melakukan inokulasi (Suarjana, dkk. 2017).
3. Media cair
Media cair merupakan media yang tidak ditambahi bahan pemadat atau
agar sehingga konsistensinya cair. Media cair pada umumnya dipergunakan
untuk melihat sifat pertumbuhan bakteri seperti keruh uniform, membentuk
endapan berpasir atau membentuk untaian rambut atau caput medusae
(Suarjana, dkk. 2017).
Pembiakkan adalah suatu proses memperbanyak organisme dengan cara
menyediakan konolisi lingkungan yang cocok. Mikroorganisme yang sedang
61
tumbuh membuat replika dirinya sendiri dan memerlukan unsur-unsur yang
terdapat dalam komposisi kimia tubuhnya. Nutrient harus menyediakan unsur-
unsur tersebut dalam bentuk yang dapat di metabolisme (Karen, dkk. 2018).
Dalam mempelajari sifat mikroorganisme seperti jamur dan bakteri,
diperlukan suatu media pertumbuhan yang dapat mencukupi nutrisi, sumber
energi dan kondisi longkungan tertentu. Suatu media untuk dapat
menumbuhkan mikroorganisme dengan baik diperlukan perdyaratan antara lain:
media harus mempunyai pH yang sesuai, media tidak mengandung zat-zat
penghambat, media harus steril, dan media harus mengandung semua nutrisi
yang mudah digunakan mikroorganisme (Nurul & Triastuti, 2015).
1. Endo Agar
Endo Agar adalah medium umum untuk uji air dan produk dairy. Endo
Agar adalah media media selektif dan media diferensial yang digunakan untuk
mengisolasi bakteri batang gram negatif berdasarkan kemampuan bakteri
memfermentasi laktosa atau tidak.Media ini pada awalnya dibuat untuk
mengisolasi bakteri batang penyebab tifus (typhoid) kemudian berkembang
menjadi media diferensial terutama untuk konfirmasi pemeriksaan bakteri
coliform. Komposisi Media Endo Agar Bahan Jumlah Peptone 10 gram
Lactose 10 gram Di-potassium phosphate 3,5 gram Sodium sulphite 2,5 gram
Agar 10 gram Distilled Water Add to make 1 Liter pH akhir Media Endo : 7,5
± 0,2 pada suhu 25°C Cara Pembuatan Media Endo Agar Timbang 36 gram
bubuk Media Endo, larutkan dengan aquadest sebanyak 1 liter. Tambahkan
6ml basic fuchsin 10% dalam alkohol.Panaskan sampai mendidih untuk
62
melarutkan media.Sterilkan dalam autoclave pada suhu 121°C selama 15
menit.Tunggu suhu sampai hangat-hangat kuku (45°C-50°C).Homogenkan,
tuang ke dalam cawan petri. Interprestasi Hasil Media Endo Agar Pada bakteri
yang tidak dapat memfermentasi laktosa (contoh : Salmonella sp., Shigella
sp.) koloni dan media akan berwarna transparan atau tidak berwarna karena
bakteri tidak memfermentasi laktosa. Pada bakteri yang dapat memfermentasi
laktosa (contoh : Escherichia coli, Klebsiella sp.) koloni dan media akan
berwarna merah atau merah muda, karena memfermentasi laktosa. Reaksi :
Na2SO4 + Basic Fuchsin → Leucofuchsin Laktosa (difermentasi bakteri) →
Formaldehide Leucofuchsin + Formaldehide → Na2SO4 + Fuchsin.. (Andi
2021).
2. Media TSB (Trypticase Soy Broth)
TSB adalah media Broth diperkaya untuk tujuan umum,untuk isolasi,
dan penumbuhan bermacam mikroorganisme. Media ini banyak digunakan
untuk isolasi bakteri dari specimen laboratorium dan akan mendukung
pertumbuhan mayoritas bakteri patogen.MediaTSB mengandung kasein dan
pepton kedelai yang menyediakan asam amino substansi nitrogen lainnya
yang membuatnya menjadi media bernutrisi untuk bermacam mikroorganisme
.Dektosa adalah sumber energi dan natrium klorida mempertahankan
kesetimbangan osmatik .Di kalium fosfat di tambahkan sebagai buffer untuk
mempertahankan pH.(anonim 20011).
63
3. EMBA (Eosin Methylene Blue Agar)
Media Eosin Methylene Blue mempunyai keistimewaan mengandung
laktosa dan berfungsi untuk memilah mikroba yang memfermentasikan
laktosa seperti S. aureus, P. aerugenosa, dan Salmonella.Mikroba yang
memfermentasi laktosa menghasilkan koloni dengan inti berwarna gelap
dengan kilap logam. Sedangkan mikroba lain yang dapat tumbuh koloninya
tidak berwarna.( Cappucino 2014).
4. Nutrient Broth(NB)
Nutrient broth merupakan media untuk mikroorganisme yang berbentuk
cair. Intinya sama dengan nutrient agar. Termasuk ke dalam media umum
yang digunakan untuk menumbuhkan biakan secara general. NB
diformulasikan dengan sumber karbon dan nitrogen supaya dapat memenuhi
kebutuhan nutrisi bakteri. Komposisi NB terdiri dari beef extract sebagai
sumber karbon dan pepton sebagai sumber nitrogen (Cappucino, 2014)
5. Lactose Broth (LB)
Lactose broth digunakan sebagai media untuk mendeteksi kehadiran
koliform dalam air, makanan, dan produk susu, sebagai kaldu pemerkaya (pre-
enrichment broth) untuk Salmonellae dan dalam mempelajari fermentasi
laktosa oleh bakteri pada umumnya. Pepton dan ekstrak beef menyediakan
nutrien esensial untuk memetabolisme bakteri.Laktosa menyediakan sumber
karbohidrat yang dapat difermentasi untuk organisme kolifor. Digunakan
sebagai medium pemeliharaan isolate. Komposisi medium tersebut adalah
64
ekstrak khamir [Oxoid] 0,5%, NaCl [Merck] 1%, pepton [Oxoid] 1% dan agar
[Fluka] 2% (Bernadita. 2016).
6. Media SSA (Salmonella Shigella Agar)
Adalah media selektif yang digunakan untuk mengisolasi Salmonella dan
beberapa spesies Shigella yang berasal dari spesimen klinik seperti urin,
darah, feses maupun yang berasal dari makanan (Cappucino, 2014).Media
SSA mengandung pepton, laktosa, natrium sitrat, natrium tiosulfat, besi (III)
sitrat, brilliant green, natural red dan bile salt. Salmonella spp. yang tumbuh
dalam media SSA berupa koloni transparan, biasanya terdapat bintik hitam
ditengah koloni tersebut, sedangkan Shigella berupa k koloni transparan, tidak
terdapat bintik hitam di tengah (Bernadita. 2016).
Medium yang dibahas dalam uraian di atas adalah medium untuk
pertumbuhan dan perkembangbiakan mikroorganisme.Jadi, medium atau media
adalah substansi yang terdiri atas campuran zat-zat makanan (nutrisi) untuk
pertumbuhan dan perkembang biakan mikroorganisme. Dalam cabang ilmu
biologi yaitu mikrobiologi, kultur media sangat penting untuk menumbuhkan
mikroba, isolasi, perhitungan jumlah mikroba, dan pengujian sifat-sifat fisik
bakteri sehingga suatu bakteri dapat diidentifikasi. Pembiakan mikrobia dalam
laboratorium memerlukan media yang berisi zat-zat hara atau nutrien serta
lingkungan pertumbuhan sesuai dengan mikroorganisme (Rahayu dkk, 2014).
65
B. Uraian Bahan
1. Aluminium foil (FI III,1979,Hal: 96)
Nama lain : Aluminium, aluminium foil
RM/BM : Al/26,92
Rumus Struktur :
Pemerian : Warna keperakan, tidak berbau, tidak berasa
Kegunaan : Sebagai reaktan reaksi kombinasi dan substitusi
2. Aquadest (FI III 1979, Hal: 96)
RM/BM : H2O/18,02
Rumus Struktur :
66
3. Alkohol (FI III 1979, Hal: 65)
RM/BM : C2H6O/46,07
H – C – C – OH
H H
dalam eter P
ditempat sejuk jauh dari nyala air.
67
C. Uraian Medium
1. Medium Endo Agar
Komposisi : 1,0% pepton, o,25% dipotassium hidrogen fosfat, 1,0%
laktosa, 0,33% natrium sulfit anhidrat, 0,03% fukhsin dan
1,25% agar (Bridson. 2016)
2. Medium Triptoy Soy Broth (TSB)
Komposisi : 20 g/L pepton, 2,5 g/L glukosa, 5 g/L NaCl dan 2,5 g/L
K2HPO4 (Tito. 2014)
3. Media Salmonella Shigella Agar (SSA)
Komposisi : lab-lem copowder (5,0 gr), peptone (5,0 gr), laktose (10,0
gr), bilesalt (8,5 gr), sodium citrate (10,0 gr), sodium
thiosulphate (8,5 gr), ferriccitrate (1,0 gr), brilian tgreen
(0,00033), neutralred (0,025 gr) dan bactoagar (13,5 gr)
(Bridson. 2016)
4. Media Eosin Methylene Blue Agar (EMBA)
Komposisi : 10 g peptone, 5 g lactose, 5 g sucrose, 2 g dipotassium
phosphate, 0,4 g eosin Y, 0,065 g methylene blue dan
aquadest 1 liter (Lily, dkk. 2017)
5. Medium Nutrient Borth (NB)
Komposisi : 1 g/L lable mcopowder, 2 g/L yeastextract, 5 g/L peptone,
dan 5 g/L sodium chloride (Harris. 2015)
6. Media Lactose Broth (LB)
Komposisi : Beef extract, pepton dan laktosa (Yunan. 2017)
68
BAB III
METODE KERJA
A. Alat
Adapun alat-alat yang digunakan pada percobaan kali ini yaitu Bunsen, Botol
semprot, batang pengaduk, cawan petri, Erlenmeyer, gelas ukur, gelas kimia,
handscoon, kaki tiga, pipet tetes, rak tabung reaksi, spoit 20 ml, sendok tanduk,
tabung reaksi, dan timbangan Analitik.
B. Bahan
Adapun bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum kali ini diantaranya

yaitu :alkohol, aluminium foil, aquadest, benang godam, EMBA (Eiosin
Methylene Blue Agar), Endo Agar, kapas, kertas perkamen, LB (Lactose Broth),
NB (Nutrien Broth), SSA (Salmonella Sigella Agar), TSB (Trypticase Soy
Broth).
C. Cara Kerja
1. pembuatan medium cair
a. Nutrient Broth (NB)
1) Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan.
2) Ditimbang nutrient broth sebanyak 0,96 gram menggunakan
timbangan analitik.
3) Diukur aquadest 120 mL dengan gelas ukur.
4) Dimasukkan NB 0,96 gram kedalam erlenmeyer dan ditambahkan
aquadest 120 mL, lalu dihomogenkan.
69
5) Dipanaskan di atas bunsen dan diaduk hingga mendidih.
6) Diangkat erlenmeyer dan ditutup dengan kapas.
7) Dimasukkan NB kedalam autoklaf untuk disterilisasikan dengan suhu
121oC selama 20 menit.
8) Dikeluarkan NB dan alat dari autoklaf.
9) Disterilkan tabung reaksi dan erlenmeyer dengan bunsen dan diambil
NB menggunakan spuit dan dimasukkan kedalam tabung reaksi
kemudian diangin-anginkan dan erlenmeyer ditutup kembali dengan
menggunakan kapas.
b. Lactose Broth (LB)
2) Ditimbang nutrient broth sebanyak 1,56 gram menggunakan
timbangan analitik.
4) Dimasukkan LB 1,56 gram kedalam rlenmeyer dan ditambahkan
6) Diangkat erlenmeyer dan ditutup dengan menggunakan kapas.
7) Dimasukkan LB dan alat-alat lainnya kedalam autoklaf untuk
disterilkan dengan suhu 121oC selama 20 menit.
70
8) Dikeluarkan LB dan alat dari autoklaf.
LB menggunakan spuit dan dimasukkan kedalam tabung reaksi
menggunakan kapas.
c. Trypticase Soy Broth (TSB)
2) Ditimbang nutrient broth sebanyak 1,8 gram menggunakan timbangan
analitik.
4) Dimasukkan TSB 1,8 gram kedalam erlenmeyer dan ditambahkan
7) Dimasukan TSB dan alat-alat lainnya kedalam autoklaf untuk
disterilisasikan dengan suhu 121oC selama 20 menit.
8) Dikeluarkan TSB dan alat dari autoklaf.
TSB menggunakan spuit dan dimasukkan kedalam tabung reaksi
menggunakan kapas.
71
2. Pembuatan medium padat
a. ENDO Agar
2) Ditimbang ENDO agar sebanyak 4,68 gram menggunakan timbangan
analitik.
4) Dimasukkan ENDO Agar 4,68 gram kedalam erlenmeyer dan
ditambahkan aquadest 120 mL, lalu dihomogenkan.
7) Dimasukkan ENDO Agar kedalam autoklaf untuk disterilisasikan
dengan suhu 121oC selama 20 menit.
8) Dikeluarkan ENDO Agar dan alat-alat dari autoklaf.
9) Disterilkan cawan petri dan erlenmeyer dengan bunsen dan diambil
ENDO Agar menggunakan spuit dan dimasukkan kedalam cawan petri
menggunakan kapas.
10) Diratakan ENDO Agar dengan menggunakan angka delapan.
b. Eosin Methylene Blue Agar (EMBA)
2) Ditimbang EMBA sebanyak 4,32 gram menggunakan timbangan
analitik.
72
4) Dimasukkan EMBA 4,32 gram kedalam erlenmeyer dan ditambahkan
7) Dimasukkan EMBA kedalam autoklaf untuk disterilisasikan dengan
suhu 121oC selama 20 menit.
8) Dikeluarkan EMBA dan alat-alat dari autoklaf.
EMBA menggunakan spuit dan dimasukkan kedalam cawan petri
menggunakan kapas.
10) Diratakan EMBA dengan menggunakan angka delapan.
c. Salmonella Sigella Agar (SSA)
2) Ditimbang SSA sebanyak 4,32 gram menggunakan timbangan analitik.
4) Dimasukkan SSA 4,32 gram kedalam erlenmeyer dan ditambahkan
7) Dimasukkan SSA kedalam autoklaf untuk disterilisasikan dengan suhu
121oC selama 20 menit.
8) Dikeluarkan SSA dan alat-alat dari autoklaf.
73
SSA menggunakan spuit dan dimasukkan kedalam cawan petri
menggunakan kapas.
10) Diratakan SSA dengan menggunakan angka delapan.
74
BAB IV
A. Hasil
NO Media Padat Media cair
1 Endo agar Lurin Bertani (LB)
2. Eosin Methylene Blue Agar (EMB) Nutrient Borth (NB)
3. Salmonella Shigella Agar (SSA) Triptic Soy Broth (TSB)
75
B. Pembahasan
Pada pembuatan medium padat seperti ENDO AGAR, EMBA, dan SSA
masing-masing didapatkan dengan jumlah bobot ENDO AGAR adalah 4,68 g,
EMBA adalah 4,32 g, dan SSA adalah 4,32 g dan dilarutkan bersama aquadest
120mL dalam erlenmeyer dan disterilkan dalam autoclave kemudian dituangkan
ke dalam cawan petri menggunakan spuit 20mL dan terbentuklah medium padat.
Pada pembuatan medium cair seperti LB, NB, dan TSB masing-masing
didapatkan dengan jumlah LB adalah 1,56 g, NB adalah 0,96 g, dan TSB adalah
1,8 g dan dilarutkan bersama aquadest 60mL dalam erlenmeyer dan disterilkan
dalam autoclave kemudian dituangkan ke dalam tabung reaksi menggunakan spuit
20mL dan terbentuklah medium cair.
Media memiliki banyak jenis dan fungi. Salah satunya yaitu media PDA
(Potato Dextrose Agar). Media PDA merupakan media yang sangat umum
digunakan untuk mengembangbiakkan dan menumbuhkan jamur dan khamir.
PDA mengandung sumebr karbohidrat dalam jumlah cukup terdiri dari 20%
ekstrak kentang dan 2% glukosa. Komposisi media PDA berupa kentang, dextrose
dan aquadest. Secara rinci karakteristik media PDA terdiri dari, potato ekstrak 40
gram, dextrose 20 gram, dan agar 15 gram.
Adapun fungsi dari media PDA yaitu agar yang merupakan bahan media
tempat tumbuh bagi biakkan yang baik karena mengandung cukup air, ini
berfungsi untuk memadatkan media. Dextrose atau gugusan gula baik itu
monosakarida maupun polisakarida merupakan penambahan nutrisi bagi biakkan
pada media PDA.
76
Proses pembuatan media PDA, EMBA, ENDO AGAR, LB, NB, dan TSB
dilakukan dengan cara menimbang media bubuk menggunakan neraca analitik
sesuai dengan peraturannya lalu dimasukkan kedalam erlenmeyer, erlenmeyer
berfungsi sebagai wadah untuk melarutkan media bubuk dengan aquadest yang
telah diukur pHnya.
Setelah itu dipanaskan diatas api bunsen, fungsi dipaaskan agar bubuk dan
aquadest terlarut, setelah itu ditutup erlenmeyer menggunakan kapas dan
disterilkan di autoclave, fungsi dari autoclave yaitu untuk mensterilkan media,
karena media sangat mudah terkontaminasi dengan keadaan luar makanya harus
disterilkan.
Setelah disterilkan di dalam autoclave media dimasukkan ke cawan petri
untuk media yang padat seperti PDA, EMBA, ENDO AGAR, sedangkan media
cair seperti TSB, NB, LB dimasukkan dalam tabung reaksi. Setelah dimasukkan
ke dalam cawan petri dan tabung reaksi, media harus disterilkan kembali dalam
autoclave.
Dalam pembuatan media kesterilan alat dan tempat harus sangat diperhatikan,
karena media sangat mudah terkontaminasi dengan udara luar, jika media sudah
terkontaminasi dengan mikroorganisme lain maka media tersebut akan ditumbuhi
bakteri-bakteri yang tidak diinginkan.
77
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
Berdasarkan praktikum yang telah dilaksanakan dapat disimpulkan bahwa
media merupakan suatu bahan yang digunakan untuk menumbuhkan mikroba
yang terdiri atas campuran nutrisi atau zat-zat makanan. Media digunakan untuk
isolasi dan identifikasi mikroorganisme sekaligus digunakan untuk perbanyakan
dan perhitungan jumlah mikroorganisme. Sebelum melakukan praktikum maka
perlu dipersiapkan alat dan bahan yang diperlukan serta dilakukan sterilisasi alat.
Cara pembuatan dari keenam media yaitu ENDO AGAR, EMBA, SSA, LB,
NB, dan TSB cenderung sama, terlebih dahulu semua alat dibungkus dengan
kertas, kemudian alat disterilkan menggunakan oven dengan suhu 175°C selama
60 menit. Setelah alat disterilkan, tutup mulut alat menggunakan kapas, masing-
masing media ditimbang menggunakan neraca analitik sesuai perhitungan yang
telah ditentukan. Kemudian media bubuk dimasukkan kedalam erlenmeyer dan
ditambahkan dengan aquadest sebanyak 120mL, lalu panaskan diatas bunsen
sambil diaduk agar media tidak menggumpal dan agar perubahan warna terlihat.
Diamkan beberapa menit lalu sterilkan menggunakan autoclave dengan suhu
121°C selama 15 menit, kemudian pindahkan media padat kedalam cawan petri
dan media cair kedalam tabung reaksi menggunakan spuit 20mL, dikerjakan
didekat bunsen agar media dan wadah tetap steril dari mikroorganisme yang tidak
diinginkan.
78
B. Saran
1. Laboratorium
Alat-alat yang digunakan dalam laboratorium harus dilengkapi agar tidak
mengganggu proses praktikum dan untuk alat yang sudah ada di rawat dengan
baik agar tidak mudah rusak.
2. Asisten
Kinerja kakak sebagai asisten sudah cukup baik jadi perlu dipertahankan
agar kedepannya semakin baik lagi.
79
DAFTAR PUSTAKA
Aini, Nurul & Rahayu, Triastuti. 2015. Media Alternatif Untuk Pertumbuhan
Jamur Menggunakan Sumber Karbohidrat Yang Berbeda. Surakarta. Sp.
Corral, Karen C, dkk. 2018 Mikrobiologi Kedokteran. Jakarta. EGC.
Dirjen POM. 1995. Farmakope Indonesia. Edisi IV. Departemen Kesehatan

Dirjen POM. 1979. Farmakope Indonesia. Edisi III. Departemen Kesehatan

Emda Amma, 2014. Laboratorium sebagai Sarana Pembelajaran Kimia Dalam

Meningkatkan Dan Keterampilan Kerja Ilmiah. BandaAceh, UINArraniry
Journal
Hafsan, 2014.Laboratorium Analitik. Makassar, Alaudin University Press
Meganada Hiaranya Putri, Sukini, Yodong. 2017. Mikrobiologi. Kementrian

Kesehatan Republik Indonesia
Murtius, Wenny Surya. 2018. Praktek Dasar Mikrobiologi. Padang:Universitas

Andalas
Suarjana, Besung, Mahatmi, danTono. 2017.Isolasi dan Identifikasi Bakteri. Bali:
Universitas Udayana
Yusmaniar, Wardiyah, Khairun Nida. 2017. Mikrobiologi Parasitologi. Jakarta:

Kementerian Kesehatan Republik Indonesia
Zahrotul, Nadira, dan Tholibah. 2019. Panduan Praktikum Mikrobiologi Dasar.
Magelang:Universitas Tidar
Suarjana, Besung, Mahatmi, dan Tono. 2017. Isolasi dan Identifikasi Bakteri.
Bali: Universitas Udayana
Yusmaniar, Wardiyah, Khairun Nida. 2017.Mikrobiologi Parasitologi.Jakarta:

Kementerian Kesehatan Republik Indonesia
Zahrotul, Nadira, dan Tholibah.2019.Panduan Praktikum Mikrobiologi Dasar.
Magelang:Universitas Tidar
LAMPIRAN
A. Skema Kerja
1. Endo Agar
DitimbangEndo Agar sebanyak 4,68 g.
Diukuraquadestsebanyak 120 ml.
DimasukkanEndo Agar 4,68 g kedalam Erlenmeyer dan
ditambahkanaquadest 120 ml, laludihomogenkan.
Dipanaskan di atas bunsen dan diadukhinggamendidih.
Diangkat Erlenmeyer dan ditutupdenganmenggunakankapas.
DikeluarkanEndo Agar dan alatdariautoklaf.
DiratakanEndo Agar denganmenggunakanmetodeangkadelapan.

2. EMBA
Ditimbang EMBAsebanyak 4,68 g.
DimasukkanEMBA 4,32 g kedalam Erlenmeyer dan
DimasukkanEMBA dan alat-
alatlainnyakedalamautoklafuntukdisterilisasikandengansuhu 121°C
selama 15-20 menit.
DikeluarkanEMBA dan alatdariautoklaf.

Distrerilkancawan petri dan Erlenmeyer dengan bunsen dan diambil
EMBAmenggunakanspoit dan dimasukkankedalamcawan petri
kemudiandiangin-anginkan dan Erlenmeyer
ditutupkembalidenganmenggunakankapas.
Diratakan EMBA denganmenggunakanmetodeangkadelapan.
3. LB
Ditimbang LB sebanyak 1,56 g.
DimasukkanLB 1,56 g kedalam Erlenmeyer dan ditambahkanaquadest
120 ml, laludihomogenkan.

DimasukkanLB dan alat-
selama 15-20 menit.
Dikeluarkan LB dan alatdariautoklaf.
Distrerilkancawan petri dan Erlenmeyer dengan bunsen dan diambilLB
menggunakanspoit dan dimasukkankedalamcawan petri
DiratakanLB denganmenggunakanmetodeangkadelapan.
4. NB
Ditimbang NB sebanyak 0,96 g.

DimasukkanNB 0,96 g kedalam Erlenmeyer dan ditambahkanaquadest
DimasukkanNB dan alat-
selama 15-20 menit.
DikeluarkanNB dan alatdariautoklaf.
NBmenggunakanspoit dan dimasukkankedalamcawan petri
Diratakan NB denganmenggunakanmetodeangkadelapan.
5. SSA
Ditimbang SSA sebanyak 4,32 g.
DimasukkanSSA 4,32 g kedalam Erlenmeyer dan
DimasukkanSSA dan alat-
selama 15-20 menit.

DikeluarkanSSA dan alatdariautoklaf.
SSAmenggunakanspoit dan dimasukkankedalamcawan petri
Diratakan SSA denganmenggunakanmetodeangkadelapan.
6. TSB
Ditimbang TSB sebanyak 1,8 g.
DimasukkanTSB 1,8 g kedalam Erlenmeyer dan ditambahkanaquadest

DimasukkanTSB dan alat-
selama 15-20 menit.
DikeluarkanTSB dan alatdariautoklaf.
TSBmenggunakanspoit dan dimasukkankedalamcawan petri
Diratakan TSB denganmenggunakanmetodeangkadelapan.

B. Perhitungan
39
1. Endo Agar = 1000 𝑥 6 𝑥 20 𝑚𝑙 = 4,68 𝑔
30
2. TSB = 1000 𝑥 6 𝑥 10 𝑚𝑙 = 1,8 𝑔
36
3. SSA = 1000 𝑥 6 𝑥 20 𝑚𝑙 = 4,32 𝑔
36
4. EMBA = 1000 𝑥 6 𝑥 20 𝑚𝑙 = 4,32 𝑔
8
5. NB = 1000 𝑥 6 𝑥 20 𝑚𝑙 = 0,96 𝑔
13
6. LB = 1000 𝑥 6 𝑥 20 𝑚𝑙 = 1,56 𝑔
C. GAMBAR
LABORATORIUM LABORATORIUM
MIKROBIOLOGI MIKROBIOLOGI
Ket: Ditimbang TSB sebanyak 1,80 Ket: DitimbangEndo Agar sebanyak
gram. 4,68 gram.
Ket: Ditambahkanaquadessebanyak Ket: DimasukkanEndo Agar kedalam
20 ml di dalam erlenmeyer. Erlenmeyer yang sudah diberi
aquades.
Ket: DipanaskanEndo Agar diatas Ket: Disterilkan medium
Bunsen sambil diaduk – aduk ad menggunakan autoklaf.
homogen.
LABORATORIUM
MIKROBIOLOGI
Ket: Dimasukkansetiap media

kedalamcapit atau cawan petri
dan diberi label.
LAPORAN PRAKTIKUM
PENANAMAN DAN ISOLASI MIKROORGANISME
KELOMPOK II

KELAS B/20
ASISTEN : RAHMATIA E. AMAN T.

FAKULTAS FARMASI
MAKASSAR
2021
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
tumbuhan maupun zat kimia. Di bidang farmasi ini para ahli mempelajari, meneliti,
dan mengetahui baik buruknya makanan atau obat (Haeria, 2017)
kapang, mikroalga, protozoa, dan archaea. Selain itu, virus merupakan makhluk
mikro aseluler sehingga sering dikaji dalam ilmu mikrobiologi meskipun tidak
dapat sepenuhnya dikatakan sebagai makhluk hidup. Mikrobiologi dimulai sejak
ditemukannya mikroskop dan berkembang menjadi ilmu yang multidispliner.
Dalam penerapannya dimasa kini, mikrobiologi tidak dapat dipisahkan dengan ilmu
yang lain dalam aplikasinya di bidang farmasi, kedokteran, teknik kimia, arkeologi,
pertanian, gizi dan kesehatan, serta pangan (Fidia, 2016).
Mikroba ada yang bermanfaat dan ada yang merugikan yang bersifat pathogen.
Mikroba yang bermanfaat dan mikroba yang merugikan untuk membedakannya
tentu sulit, mengingat mikroba tersebut dalam bentuk populasi campuran. Hal ini
dapat diatasi dengan proses identifikasi antara mikroba bermanfaat dan mikroba
yang merugikan dapat melalui pemisahan populasi campuran dari lingkungan.
Pemisahan ini lebih dikenal dengan nama isolasi mikroba. Pengamatan mikroba
80
hanya dapat dilakukan jika mikroba yang diamati di isolasi di tempat-tempat
tertentu sehingga mereka mudah diamati. Pengamatan terhadap mikroba tertentu
hanya dapat dilakukan jika mikroba dipisahkan dari lingkungan dan mikroba
lainnya. Ini bisa dilakukan dengan teknik isolasi (Bandaring, dkk. 2020).
Isolasi mikroorganisme suatu upaya pemindahan mikroba diluar dari
lingkungan alamiahnya untuk mendapatkan biakan murni. Pemisahan
mikroorganisme dari lingkungan bertujuan untuk memperoleh biakan murni yang
sudah tidak bercampur lagi dengan mikroba lainnya. Prinsip dari isolasi mikroba
adalah memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lainnya yang terdapat pada
suatu substrata tau lingkungan sekitarnya. Sehingga dalam mempelajari ilmu
mikroorganisme kita hrus mengerti dan memahami bagaimana mendapatkan
mikroba murni dengan cara mengisolasi dan memisahkan mikrobia tersebut sesuai
dengan tujuannya. Melalui isolasi kita dapat mempelajari morfologi, biologi
ataupun karakteristik mikrobia tersebut (Yunilas, 2017)
Media merupakan bahan yang dapat dilakukan sebagai tempat pertumbuhan
mikroorganisme seperti bakteri. Beberapa jenis bakteri dapat hidup baik pada
media yang sangat sederhana, yang hanya mengandung garam anorganik ditambah
sumber karbon organik seperti gula, namun ada pula bakteri yang memerlukan
suatu media yang sangat kompleks selain mengandung sumber karbon dan nitrogen
juga perlu penambahan darah atau bahan-bahan kompleks lainnya, namun yang
terpenting media harus mengandung nutrisi yang merupakan substansi dengan berat
molkul rendah dan mudah larut dalam air (Bandaring, dkk. 2020).
81
B. Maksud Percobaan
Adapun maksud dari percobaan kali ini adalah untuk mengenal cara
mengisolasi mikroorganisme terutama bakteri dan fungsi dari beberapa sumber
isolasi dan mengetahui mikroorganisme yang terdapat dalam sumber isolasi
C. Tujuan Percobaan
Adapun tujuan percobaan kali ini adalah mahasiswa mampu mengetahui cara
mengisolasi mikroorganisme terutama bakteri dan fungi dari beberapa sumber
isolasi dan mahasiswa mampu mengetahui mikroorganisme yang terdapat dalam
sumber isolasi.
Adapun manfaat dari percobaan kali ini yaitu mengetahui cara mengisolasi
mikroorganisme terutama bakteri dan fungi dari beberapa sumber isolasi dan
mengetahui mikroorganisme yang terdapat dalam sumber isolasi.
82
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Teori Umum
Mikroorganisme atau mikroba adalah organisme yang berukuran sangat kecil
sehingga untuk mengamatinya diperlukan alat bantuan yang disebut mikroskop.
Mikroorganisme ada yang bersel tunggal maupun bersel banyak. Mikroorganisme
disebut juga organisme mikroskopis (Ermavianti, 2019).
Penanaman bakteri adalah pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang
lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi dalam
kondisi steril atau aseptik. Kondisi steril ini meliputi media, alat, dan bahan yang
digunakan harus benar-benar bersih dari kontaminasi organisme. Dalam melakukan
penanaman bakteri diperlukan beberapa persiapan antara lain menyiapakan ruangan
dan pemindahan dengan kawat inokulasi. Ruangan tempat penanaman bakteri harus
bersih dan steril agar tidak terjadi kesalahan dalam percobaan dan kawat inokulasi
(ose) yang digunakan sebaiknya digunakan pada bagian ujung yang terbuat dari
platina atau nikel (Tim Tentor Master, 2018).
Proses pengambilan bakteri dari media atau lingkungan aslinya dan
menumbuhkannya pada media buatan untuk mendapatkan kultur bakteri murni
adalah pengertian isolasi bakteri. Populasi bakteri dapat diisolasi ke dalam suatu
kultur sehingga dapat dipelajari, sifat, dan kemampuan biokimianya sebagai salah
satu tujuan isolasi (Rahmi, 2021).
Proses isolasi bakteri dari satu tempat ke tempat yang lainnya harus dilakukan
dilakukan dengan prosedur aseptik. Aseptik dalam hal ini berarti bebas dari sepsis,
83
yaitu kondisi yang tercemar karena tempat mikroorganisme lain yang tidak
dinginkan. Prosedur ini sangat penting dilakukan saat menangani bakteri, selain
untuk melindungi diri juga terhindar dari mikroorganisme lain (Rahmi, 2021).
Isolasi bakteri merupakan suatu cara untuk memisahkan atau memindahkan
mikroba tertentu dari lingkungan sehingga di peroleh kultur murni atau biakan.
Pada proses isolasi bakteri harus diketahui cara menaman dan menumbuhkan
bakteri pada medium biakan serta syarat-syarat lain untuk untuk pertumbuhannya.
Memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru diperlukan
ketelitian pensterilan alat-alat yang digunakan, supaya dapat dihindari terjadinya
kontaminasi (Sudjito, 2018).
Biakan pertama kali hasil isolasi disebut isolat. Pembuatan isolat dilakukan
dengan cara mengambil sampel dari lingkungan baik yang cair, udara maupun
tanah. Selanjutnya sampel tersebut kemudian dibiakkan dengan menggunakan
media universal atau media seletif. Media universal akan diperoleh biakan mikroba
campuran. Untuk media proses identifikasi maupun isolasi jenis tertentu saja,
dilakukan proses pembuatan isolate tunggal dari isolate campuran tersebut (Lestari,
2017).
Isolasi mikroba bisa juga diartikan sebagai suatu proses pemisahan mikroba
dari lingkungan asalnya dengan menggunakan teknik pengenceran berseri
kemudian menumbuhkannya pada media buatan untuk memperoleh kultur murni
“pure culture”. Beberapa hal yang perlu diperhatikan dalam isolasi mikroba
diantaranya teknik sterilisasi, jenis media yang digunakan, teknik isolasi dan
penyimpanan kultur mikroba pasca isolasi (Kristiandi, 2020).
84
Hal-hal lain yang perlu diperhatikan dalam melakukan isolasi bakteri yaitu :
sifat spesies mikroba yang akan diisolasi, tempat hidup atau asal mikroba, medium
untuk pertumbuhan yang sesuai, cara menanam mikroba tersebut, cara inkubasi
mikroba, cara menguji bakteri bahwa miroba yang isolasi telah berupa biakan murni
dan sesuai dengan maksud dan yang terakhir yaitu cara memelihara agar mikroba
yang telah diisolasi tetap merupakan biakan murni (Rahmi, 2021).
Prinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba dengan
mikroba yang lain yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba. Hal ini
dilakukan dengan menumbuhkannya dalam media padat, sel-sel mikroba akan
membentuk koloni sel yang tetap pada tempatnya (Gabriella, 2017).
Dalam melakukan isolasi dilakukan dua tahap yaitu propagasi pengenceran.
Propagasi dilakukan dengan tujuan untuk memperbanyak jumlah sel bakteri
penghasil kozoenzim sehingga memudahkan sebelum dilakukan identifikasi. Tahap
ini dilakukan dengan carasampel dicampurkan dengan medium selektif kemudian
di inkubasi dengan menggunakan shaker dengan kecepatan 100 rpm selama 6 x 24
jam. Tahap kedua yaitu pengenceran. Pengenceran dilakukan dengan tujuan
mendapatkan kuantitas bakteri dalam jumlah yang dapat terhitung. Teknik yang
digunakan adalah teknik pengenceran secara bertingkat atau berseri (series of
dilution) (Lestari, 2017).
Masa hidup mikroorganisme ditentukan melalui beberapa syarat yaitu medium
tempat mikroba tumbuh harus lembab, mengandung oksigen bagi mikroba yang
membutuhkan oksigen, pH netral, mengandung sumber karbon, mineral, vitamin
serta nutrisi yang mencukupi (Rahmadhani, 2020).
85
Terdapat beberapa metode yang dilakukan selama isolasi diantaranya spread-
plate (cawan tebar/sebar), streak plate (cawan gores), pour plate (cawan tuang) dan
teknik dilusi (pengenceran).
1. Spread-plate (cawan sebar)
Cawan sebar merupakan teknik kultur mikroba dengan cara menuangkan
sampel di atas media yang telah memedat lalu menyebar secara merata
menggunakan batang drigalski. Dengan metode ini mikroba hanya dapat
tumbuh di atas permukaan media. Oleh karena itu, pada metode spread-plate
tidak dapat digunakan untuk mengukturkan mikroba anaerob yang hanya dapat
tumbuh di bawah permukaan media agar (Kristiandi, 2021).
2. Streak- plate (cawan gores)
Cawan gores merupakan teknik isolasi yang dilakukan dengan
menggoreskan sampel mikroba dengan membuat garis berpola di atas
permukaan media padat menggunakan jarum inokulasi (ose). Penggoresan
yang sempurna akan menghasilkan koloni yang terpisah. Mikroba yang
terlepas pada garis-garis goresan semakin lama semakin sedikit, sehingga pada
garis terakhir akan membentuk koloni yang terpisah jauh dan koloni tersebut
diperkiran tunggal (Kristiandi, 2021).
3. Pour-plate (cawan tuang)
Cawan tuang merupakan teknik isolasi dengan cara mencampurkan
sampel mikroba dengan media yang belum memadat (suhu 45°C). Dengan
metode pour-plate mikroba diharapkan akan tumbuh dan tersebar merata baik
di lapisan permukaan atas maupun lapisan permukaan dibawah permukaan
86
media agar. Oleh karena itu, metode tersebut sangat cocok digunakan untuk
mengisolasi mikroba aerob maupun anaerob (Kristiandi, 2021).
Keunggulan metode tuang yaitu permukaan bakteri lebih halus dan merata
di seluruh permukaan media sehingga zona bening Nampak lebih jelas dan
pengukuran diameter lebih mudah, durasi waktu yang dugunakan dalam cawan
petri lebih singkat dan terjadinya resiko kontaminasi lebih sedikit
dibandingkan dengan kolaborasi metode sebar dan gores (Serniati, 2017).
Sedangkan kelemahan dari metode ini adalah membetuhkan waktu dan
bahan yang lama dan banyak, akan tetapi tidak memerlukan biakan tinggi
(Fatiqin, 2019).
4. Teknik Dilusi (pengenceran)
Tujuan dari teknik ini adalah melarutkan atau melepaskan mikroba dari
susbtratnya ke dalam air sehingga lebih mudah penanganannya. Sampel yang
telah diambil kemudian disuspensikan dalam aquades steril. Teknik
penanaman ini merupakan lanjutan dari teknik pengenceran bertingkat. Teknik
dilusi penting dalam analisa mikrobiologi karena hampir semua metode
penelitian dan perhitungan jumlah mikroba menggunakan teknik ini, seperti
TPC (Total Plate Count) (Sudjito, 2018).
87
B. Uraian Bahan
1. Aquadest (FI III, 1979, Hal : 96)
RM/BM : H2O/18,02
Rumus Struktur :
2. Alkohol (FI III, 1979, Hal: 65)
RM/BM : C2H6O/46,07
Rumus Struktur :
88
dalam eter P
3. Media salmonella shigella agar (SSA) (Bridson, 2016)
Komposisi : Lab-lem copoeder 5,0 gram, pepton 5,0 gram,lactose 10,0
gram, bilesalt 8,5 gram, sodium citrate 10,0 gram, sodium
thiosulphate 8,5 gram, ferriccitrate 1,0 gram, brilian
tgreen 0,00033, neutralred 0,025 gram dan bactoagar 13,5
gram.
4. Bakso (Sufi, 2021)
Komposisi : Energi 201 kal, protein 18,8 gram, lemak 14,0 gram, kalsium
11 mg, fosfor 170 mg dan besi 2,8 mg.
5. Nasi putih (Kemenkes RI, 2014)
Komposisi : Energi 357, indeks glikemik 64, karbohidrat 77,1, lemak
1,7, protein dan serat 0,2
6. Yakult (Sudarmadji, 2019)
Komposisi : Air 52,85, gula 14,40, glukosa 0,20, lactobacillus casei
1,00, dan skin milk powder 2,03.
7. Mie (Nuril, 2020)
Komposisi : Energi total 380 kkal, energy dari lemak 130 kkal, protein
13%, natrium 71%, karbohifrat total 17%, vitamin A 25%,
89
vitamin B1 35%, vitamin B6 25%, vitamin B12 45%, dan
gula 8 gram.
8. Roti (Tim Ide Masak, 2012)
Komposisi : Tepung terigu, ragi, gula, telur, air, susu, dan mentega.
Salah satu bahan utama pembuatan roti yaitu tepung terigu
yang mengandung protein sebesar 11- 13%.
9. Teh (Muaris, 2012)
Komposisi : Energi 153 kkal, protein 3,2 gram, lemak 3,9 gram,
karbohidrat 26,8 gram, serat, kolestrol 14 mg, natrium
85,2 mg.
90
BAB III
METODE KERJA
A. Alat
Adapun alat yang digunakan dalam praktikum kali ini di antaranya yaitu
autoklaf, bunsen, botol semprot, cawan petri, erlenmeyer, gelas ukur, gunting,
inkubator, kaki tiga, kulkas, LAF (Laminar Air Flow), oven, ose bulat, ose lurus,
rak tabung reaksi, spoit, tabung reaksi, dan timbangan.
B. Bahan
aquades, alkohol, bakso, benang godam, kertas, mie masak, nasi, roti, SSA
(Salmonela Sigela Agar), tissue, teh gelas, dan yakult.
C. Cara Kerja
1. Sterilisasi Alat
a. Dibungkus semua alat-alat seperti cawan petri, gelas kimia, gelas ukur,
dan tabung reaksi dengan kertas lalu diikat dengan benang godam.
b. Dimasukkan semua alat-alat ke dalam oven dengan suhu 175°C selama 60
menit.
c. Dikeluarkan semua alat-alat dari oven dan didiamkan selama beberapa
menit sampai alat-alatnya dingin.
2. Pembuatan Bahan
a. Mie
1. Dihaluskan mie dengan menggunakan lumpang.
91
2. Ditimbang mie yang sudah dihaluskan sebanyak 1 gram dengan
menggunakan timbangan analitik.
3. Dilarutkan dengan aquades sebanyak 1 mL.
b. Roti
1. Dihaluskan roti dengan menggunakan lumpang.
2. Ditimbang roti yang sudah dihaluskan sebanyak 1 gram dengan
c. Bakso
1. Dihaluskan bakso dengan menggunakan lumpang.
2. Ditimbang bakso yang sudah dihaluskan sebanyak 1 gram dengan
d. Nasi
1. Dihaluskan nasi dengan menggunakan lumpang.
2. Ditimbang nasi yang sudah dihaluskan sebanyak 1 gram dengan
e. SSA (Salmonella Sigella Agar)
1. Ditimbang SSA sebanyak 8,64 gram dengan menggunakan timbangan
analitik.
2. Diukur aquades sebanyak 240 mL dengan menggunakan gelas ukur
92
3. Dimasukkan SSA ke dalam erlenmeyer yang telah berisi aquades dan
diaduk
4. Dipanaskan SSA di api bunsen sampai mendidih dan terus diaduk.
5. Dimasukkan kedalam autoklaf selama 15- 20 menit lalu dikerluarkan.
f. Teh Gelas
1. Disiapkan alat dan bahan yang digunakan
2. Diukur teh gelas sebanyak 1 mL dengan menggunakan gelas ukur.
g. Yakult
1. Disiapkan alat dan bahan digunakan
2. Diukur yakult sebanyak 1 mL dengan menggunakan gelas ukur.
3. Isolasi Mikroorganisme
a. Isolasi Bahan Padat
1. Diencerkan roti yang telah dihaluskan/ digerus sebanyak 1 gram dan
ditambahkan aquadest sebanyak 1 mL.
2. Dimasukkan ke dalam tabung 1, lalu ditambahkan aquadest sebanyak 9
mL.
3. Diambil lagi 1 mL dari tabung 1, kemudian dimasukkan ke tabung 2 dan
93
7. Dilakukan hal yang sama pada bahan mie, bakso dan nasi.
b. Isolasi Bahan Cair
1. Diambil 1 mL yakult dan ditambahkan aquadest sebanyak 8 ml.
2. Dimasukkan ke dalam tabung 1, lalu ditambahkan aquadest sebanyak 9
mL.
7. Dilakukan hal yang sama pada bahan teh gelas.
4. Penanaman Mikroorganisme
1. Dibagi 12 medium SSA ke dalam cawan petri, 6 bagian untuk medium
bahan padat dan bahan cair dan 6 bagian lagi sebagai medium untuk
menangkap mikroorganisme.
2. Diberi label 6 cawan petri yang akan digunakan pada bahan padat dan cair.
94
3. Diambil bahan dari tabung 5 dengan label roti menggunakan jarum
inokulum atau ose yang telah disterilisasi diatas api bunsen dan dibuat zig
zag di permukaan media, setelah itu di tutup.
4. Dilakukan cara ini untuk bahan lainnya seperti mie, bakso, nasi, teh gelas
dan yakult.
5. Diinkubasi selama 1 × 24 jam.
6. Diamati mikroba yang tumbuh.
5. Penangkapan Mikroorganisme di Sekitar Kita
1. Disiapkan 6 medium SSA tadi dalam cawan petri dan biarkan memadat.
2. Diletakkan cawan petri di ruangan, depan lab, wc, uv, LAF dan tanpa
perlakuan dan dibuka selama 15 menit.
3. Ditutup cawan petri setelah 15 menit.
4. Diinkubasi 1× 24 jam.
5. Diamati mikroba yang tumbuh.
95
BAB IV
A. Hasil
Tabel pengamatan
No. Isolasi Ket.
Penanaman Mikroba
1.
Negatif
Tidak terdapat
pertumbuhan
mikroba
Sebelum Inkubasi Setelah Inkubasi
(Sampel Bakso) (Sampel Bakso)
2.
Negatif
Tidak terdapat
pertumbuhan
mikroba

(Sampel Mie) (Sampel Mie)
3.
Negatif
Tidak terdapat
pertumbuhan
mikroba
(Sampel Nasi) (Sampel Nasi)
96
4.
Negatif
Tidak terdapat
pertumbuhan
mikroba

(Sampel Roti) (Sampel Roti)
5.
Negatif
Tidak terdapat
pertumbuhan
mikroba

(Teh gelas) (Teh Gelas)
6.
Negatif
Tidak terdapat
pertumbuhan
mikroba

(Yakult) (Yakult)
97
Menangkap Mikroba
N No. Isolasi Ket.
Menangkap Mikroba
1. Negatif
Tidak terdapat
pertumbuhan
mikroba

(Tanpa Perlakuan) (Tanpa Perlakuan)
2.
Negatif
Tidak terdapat
pertumbuhan
mikroba

(Ruangan) (Ruangan)
3.
Negatif
Tidak terdapat
pertumbuhan
mikroba

(Depan Lab) (Depan Lab)
98
4.
Negatif
Tidak terdapat
pertumbuhan
mikroba

(Wc) (Wc)
5.
Negatif
Tidak terdapat
pertumbuhan
mikroba

(UV) (UV)
6.
Negatif
Tidak terdapat
pertumbuhan
mikroba

(LAF) (LAF)
99
B. Pembahasan
Inokulasi atau penanaman bakteri adalah pekerjaan memindahkan bakteri dari
medium yang lama kemedium yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat
tinggi dalam kondisi steril (aseptik). Kondisi steril ini meliputi media, alat dan
bahan yang digunakan harus benar – benar bersih dari kontaminasi
mikroorganisme. Isolasi mikroba memisahkan mikroba satu dengan mikroba lain
yang berasal dari campuran berbagai mikroba untuk dapat mempelajari sifat biakan,
morfologi dan sifat mikroba lainnya.
Pada praktikum kali ini alat yang digunakan yaitu autoklaf, bunsen, botol
semprot, cawan petri, erlenmeyer, gelas ukur, gunting, inkubator, kaki tiga, kulkas,
LAF (Laminar Air Flow), oven, ose bulat, ose lurus, rak tabung reaksi, spoid,
tabung reaksi, dan timbangan.
Adapun bahan yang digunakan yaitu aquades, alkohol, bakso, benang godam,
kertas, mie masak, nasi, roti, SSA (Salmonela Sigela Agar), tissue, teh gelas dan
yakult.
Pada percobaan kali ini, hal yang dilakukan pertama kali adalah sterilisasi alat.
Tujuan dari sterilisasi alat yaitu membebaskan seluruh alat yang digunakan dari
mikroorganisme. Sterilisasi alat dilakukan dengan cara seluruh alat seperti cawan
petri, gelas kimia, erlenmeyer, gelas ukur dan tabung reaksi dibungkus dengan
kertas lalu diikat dengan benang godam setelah itu dimasukkan semua alat tadi
kedalam oven dengan suhu 175˚C selama 60 menit kemudian keluarkan seluruh
alat dari oven dan didiamkan selama beberapa menit sampai alat dingin.
100
Selanjutnya masuk kedalam proses pembuatan bahan. Bahan yang digunakan
terdiri atas 2 yaitu bahan padat dan cair. Bahan padat seperti bakso, mie, nasi, roti
dan SSA sedangkan bahan cair seperti teh gelas dan yakult. Bahan padat seperti
bakso, mie, nasi, dan roti dihaluskan terlebih dahulu dengan menggunakan
lumpang dan stemper selanjutnya bahan tersebut di timbang sebanyak 1 gram
dengan timbangan analitik kemudian dilarutkan dengan aquades sebanyak 1 mL
agar diperoleh bahan yang encer atau cair sedangkan bahan cair seperti teh gelas
dan yakult langsung diambil sebanyak 1 mL menggunakan gelas ukur. Pembuatan
SSA dilakukan dengan menimbang bahan sebanyak 8,64 gram kemudian dilarutkan
SSA dengan aquades sebanyak 240 mL selanjutnya di panasakan bahan di atas api
bunsen sampai mendidih dan homogen kemudian di masukkan ke dalam autoklaf
selama 15- 20 menit kemudian dikeluarkan dari autoklaf dan di masukkan kedalam
cawan petri.
Selanjutnya masuk ke dalam proses isolasi. Proses isolasi dibagi 2 yaitu isolasi
bahan padat dan cair. Isolasi bahan padat dilakukan dengan memasukkan bahan
yang sudah diencerkan ke dalam tabung 1, lalu di tambahkan aquades sebanyak 9
mL. Di ambil lagi 1 mL dari tabung 1 kemudian dimasukkan ke tabung 2 dan
ditambah aquades sebanyak 9 mL. Dilakukan terus cara ini sampai tabung ke yang
5. Proses selanjunya yaitu isolasi bahan cair dilakukan dengan mengambil bahan
cair sebanyak 1 mL kemudian di tambah aquades sebanyak 9 mL lalu di
homogenkan kemudian di ambil 1 mL dari tabung 1 untuk di masukkan ke tabung
2 dan ditambah aquades sebanyak 9 mL. Dilakukan terus cara tersebut sampai
tabung ke yang 5.
101
Proses selanjutnya yaitu penanaman mikroorganisme dilakukan dengan
mengambil bahan dari tabung 5 menggunakan jarum inokulum atau ose yang telah
disterilisasi diatas api bunsen sampai pijar dan dibuat zig zag diatas pemukaan
media setelah itu ditutup kemudian di inkubasi selama 1 x 24 jam dan diamati
mikroba yang tumbuh. Selanjunya masuk kedalam proses menangkap
mikroorganisme dilakukan dengan menyiapkan medium dalam cawan petri
kemudian cawan petri diletakkan diruangan, depan lab, wc, uv, LAF, dan tanpa
perlakuan dan dibuka selama 15 menit kemudian ditutup setelah 15 menit lalu
diinkubasi 1 x 24 jam kemudian diamati mikroba yang tumbuh.
Faktor-faktor kesalahan yang mungkin terjadi pada saat melakukan percobaan,
antara lain kurang tepat dalam menimbang dan mengukur bahan, kesalahan saat
mencampur atau menambahkan sampel. Selain itu, faktor peralatan juga sangat
berpengaruh maka dari itu perlu ada pengecekkan kembali peralatan pada saat akan
melakukan praktikum. Peralatan praktikum juga perlu untuk dijaga dan dirawat
agar tidak rusak dan untuk menghindari kerusakan alat.
102
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
isolasi mikroorganisme merupakan suatu upaya pemindahan mikroba diluar dari
lingkungan alamiahnya untuk mendapatkan biakan murni. Pemisahan
mikroorganisme dari lingkungannya bertujuan untuk mendapatkan biakan murni
yang sudah tidak bercampur lagi dengan mikroba lainnya. Beberapa jenis bakteri
dapat hidup baik pada media yang sederhana, yang hanya mengandung garam
organik ditambah sumber karbon organik seperti gula, namun ada pula bakteri yang
memerlukan suatu media yang sangat kompleks selain mengandung sumber karbon
dan nitrogen juga perlu penambahan darah atau bahan-bahan kompleks lainnya.
B. Saran
1. Laboratorium
Untuk laboratorium agar alat-alatnya lebih ditambah kelengkapannya guna
menunjang proses belajar mahasiswa, dan untuk alat yang sudah ada agar tetap
dijaga dan dirawat agar bertahan lama.
2. Asisten
Untuk kakak asisten cara menjelaskannya sudah cukup baik, kiranya perlu
dipertahankan lagi kedepannya agar kami dapat mengerti dengan baik.
103
DAFTAR PUSTAKA
Badaring, Deny, Romadhon, Fiqriansyah, dan Bahri Arsad. “2020”. Identifikasi

Morfologi Mikroba pada Ruangan Water Closet Jurusan Biologi Universitas
Negeri Makassar. Universitas Negeri Makassar : Makassar
Bridson. “2016”. The Oxoid Manual 9th Edition. Former Technical Director of
Oxoid.
Ermavianti, Dwi. 2019. Sanitasi Hygiene Kecantikan. Andi Offset : Yogyakarta
Fatiqin, Awalul, Riri, Novita, Ike, Apriani. “2019”. Pengujian Salmonella Dengan
Menggunakan Media Dan E.coli Menggunakan Media Emba Pada Bahan
Pangan. Jurnal Indobiosains. Vol 1(1). Hal 22-29.
Fidia Fibriana, Andin Vita Amalia. 2016. Potensi Kitchen Microbiology Untuk
Journal
Gabriela Christy Sabbathini, Sri Pujiyanto, Wijanarka, Puspita Lisdiyanti. 2017.

Isolasi dan Identifikasi Bakteri Genus Sphingomonas dari Daun Padi (Oryza
sativa) di Area Persawahan Cibinong. Jurnal Biologi. Vol 6 (1). Hal. 59-64
Haeria. 2017. Pengantar Ilmu Farmasi. UIN Alauddin : Makassar.
Kemenkes RI. 2014. Profil Kesehatan Indonesia. Kementrian Kesehatan RI :

Jakarta.
Kristiandi, Kiki. 2021. Teknologi Fermentasi. Yayasan Kita Menulis : Medan
Lestari, Purwaning, Budi. 2017. Mikrobiologi Berbasis Inkuiry. PT Book Mart

Indoesia (Gunung Samudra) : Malang.
Muaris, Hindah, Gagas. 2012. Jurus Jitu Jajanan Sehat Di Luar Rumah. PT
Gramedia Pustaka Utama : Jakarta.
Nuril. 2020. Mie Sehat Sebagai Usaha Pengereman Impor Terigu Dengan
Menggunakan Bahan Subtitusi Alami. Academic Dan Research Institute :
Pasuruan
Rahmadhani, Indrie, Wahyuni. 2020. Dasar-Dasar Praktikum Mikrobiologi. PT

Pena Persada : Purwokerto.
Rahmi. 2021. Mikrobiologi Akuatik. PT Nas Media Indonesia : Makassar.
Serniati, Marbiah, Nurhayati. 2017. Kajian Uji Konfrontasi Terhadap Bakteri

Pathogen Dengan Menggunakan Metode Sebar, Medote Tuang, Dan Metode
Gores. Jurnal Galung Tropika.Vol 6 (1). Hal 42-48
Sudjito, Yason Lukman. 2018. Smart Book Biologi. PT Grasindo : Jakarta.
Sudarmadji, S. 2019. Prosedur Analisa Untuk Bahan Makanan Dan Pertanian.

Liberty : Yogyakarta
Sufi. 2021. Bisnis Laris Manis Bakso. PT Gramedia Pustaka Utama : Jakarta.
Tim Ide Masak. 2012. Resep Favorit Untuk Usaha Roti Manis. PT Gramedia
Pustaka Utama : Jakarta.
Tim Tentor Master. 2018. Magic Trick Praktis Ala Bimbel Biologi. PT Gramedia
Widiasarana Indonesia : Jakarta.
Yunilas. 2017. Penuntun Praktikum Mikrobiologi Peternakan. Fakultas Pertanian
Universitas Sumatera Utara : Sumatera Utara
LAMPIRAN
A. Skema Kerja
1. Sterilisasi alat
Alat
− Dicuci
− Dibilas
− Dikeringkan
− Dibungkus
− Disterilkan
Alat steril
2. Penanaman Mikroba
Bakso
− Ditimbang
− Dilarutkan
− Diencerkan
− Dipindahkan
− Diinkubasi 1 x 24 jam
Terdapat Pertumbuhan Mikroba

Mie Masak
− Ditimbang
− Dilarutkan
− Diencerkan
− Dipindahkan
Nasi
− Ditimbang
− Dilarutkan
− Diencerkan
− Dipindahkan
Roti
− Ditimbang
− Dilarutkan
− Diencerkan
− Dipindahkan

Teh Gelas
− Diukur
− Diencerkan
− Dipindahkan
Yakult
− Diukur
− Diencerkan
− Dipindahkan
3. Penangkapan
Medium SSA
− Ditimbang
− Dilarutkan
− Dipanaskan
− Dihomogenkan
− Disterikan
− Diletakkan
− Dibiarkan 15 menit
− Diinkubasi 1 x 24

B. Perhitungan
36
1. SSA = 1000 𝑥 12 𝑥 20 𝑚𝐿 = 8,64 𝑔𝑟𝑎𝑚
C. Gambar

Ket: Disterilkan alat – alat Ket: Ditimbang SSA

Ket: Dihaluskan bahan – bahan Ket: Ditimbang nasi

Ket: Ditimbang roti Ket: Ditimbang biji bakso

Ket: Ditimbang mie Ket: Pembuatan medium

Ket: Dicairkan bahan padat Ket: Dipindahkan sampel dalam tabung
reaksi

Ket: Medium sebelum inkubasi Ket: Hasil inkubasi medium

LAPORAN PRAKTIKUM
PEMERIKSAAN MIKROSKOPIK & PENGECATAN GRAM
KELOMPOK II

KELAS B/20
ASISTEN : JUMRIANI

FAKULTAS FARMASI
MAKASSAR
2021
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
dan mengetahui baik buruknya makanan atau obat. (Haeria, 2017)
kapang, mikroalga, protozoa, dan Archaea. Selain itu, virus merupakan makhluk
pertanian, gizi dan kesehatan, serta pangan (Fidia, 2016)
Bakteri mempunyai morfologi, struktur dan sifat-sifat yang khas. Bakteri
merupakan mikroorganisme yang berukuran mikroskopik. Selain mikroskopik,
bakteri juga hampir tidak berwarna atau transparan dan kontras dengan air.
Sehingga melihat dan mengamati bakteri dalam kedaan hidup sangat sulit. Untuk
mengatasi hal tersebut maka dikembangkan suatu teknik pewarnaan sel bakteri. Ini
merupakan salah satu cara yang paling utama dalam penelitian-penelitian
104
mikrobiologi. Hal itu untuk mempermudah proses identifikasi bakteri. (Meganada
dkk, 2017)
Istilah ”pewarna sederhana” dapat diartikan dalam mewarnai sel-sel bakteri
hanya digunakan satu macam zat warna saja. Kebanyakan bakteri mudah bereaksi
dengan pewarna-pewarna sederhana karena sitoplasmanya bersifat basofilik (suka
akan basa) sedangkan zat-zat warna yang digunakan untuk pewarnaan sederhana
umumnya bersifat alkalin (komponen kromoforiknya bermuatan positif). Faktor-
faktor yang mempengaruhi pewarnaan bakteri yaitu fiksasi, peluntur warna,
substrat, intensifikasi pewarnaan dan penggunaan zat warna penutup. Suatu
preparat yang sudah meresap suatu zat warna, kemudian dicuci dengan asam encer
maka semua zat warna terhapus. sebaliknya terdapat juga preparat yang tahan
terhadap asam encer. Bakteri-bakteri seperti ini dinamakan bakteri tahan asam, dan
hal ini merupakan ciri yang khas bagi suatu spesies (Meganada dkk, 2017)
Untuk mengidentifikasi suatu biakan murni bakteri hasil isolasi mula-mula
diamati morfologi sel secara mikroskopik melalui pengecatan atau pewarnaan,
salah satunya adalah dengan pewarnaan gram. Pewarnaan gram merupakan salah
satu prosedur yang paling banyak digunakan untuk mencirikan banyak bakteri. Dari
pewarnaan gram dapat diketahui morfologi sel antara lain sifat gram, bentuk sel,
dan penataan sel. Pewarnaan gram atau metode gram adalah suatu metode empiris
untuk membedakan spesies bakteri menjadi dua kelompok besar, Gram positif dan
gram negatif, berdasarkan sifat kimia dan fisika dinding sel mereka, metode ini
diberi nama berdasarkan penemunya, ilmuwan Denmark Hans Christian gram
1884 (Meganada dkk, 2017)
105
Pewarnaan Gram dibagi menjadi dua yaitu pewarnaan majemuk karena
menggunakan lebih dari satu macam zat warna. Dan pewarnaan diferensial karena
pewarnaan ini mampu mendiferensiasi atau membedakan bakteri, sehingga bakteri
dapat digolongkan menjadi dua yaitu Gram negatif dan Gram positif. (Meganada
dkk, 2017)
Prinsip dasar dari pewarnaan ini adalah adanya ikatan ion antara komponen
seluler dari bakteri dengan senyawa aktif dari pewarnaan yang disebut kromogen.
Terjadi ikatan ion karena adanya muatan listrik baik pada komponen seluler
maupun pada pewarnaan. Berdasarkan adanya muatan ini maka dapat dibedakan
pewarna asam dan pewarna basa. Teknik pewarnaan bukan pekerjaan yang sulit
tapi perlu ketelitian dan kecermatan bekerja serta mengikuti aturan dasar yang
berlaku. Oleh karena itu yang melatarbelakangi praktek ini yaitu untuk mengetahui
teknik pewarnaan mikroorganisme sehingga mempermudah dalam melihat bagian-
bagian bakteri (Meganada dkk, 2017)
Pemeriksaan mikroskopis ini dilakukan untuk menemukan hasil bakteri secara
visual dengan melakukan identifikasi langsung. Kelemahan teknik ini adalah tidak
dapat membedakan spesies dan tidak dapat melakukan hitung jumlah bakteri.
Selain itu juga reagensia yang digunakan relatif mahal. (Wempi, 2012)
106
B. Maksud Percobaan
Adapun maksud dari percobaan ini:
1. Agar mahasiswa mengetahui pemeriksaan mikroskop bakteri
2. Agar mahasiswa mengetahui cara melakukan pengecatan bakteri, khususnya
membedakan bakteri gram positif dan bakteri gram negatif
C. Tujuan Percobaan
Adapun tujuan dari percobaan ini:
1. Mahasiswa mengetahui pemeriksaan mikroskop bakteri
2. Mahasiswa mengetahui cara melakukan pengecatan bakteri, khususnya
membedakan bakteri gram positif dan bakteri gram negatif
Adapun manfaat dari percobaan ini:
1. Mengetahui pemeriksaan mikroskop bakteri
2. Mengetahui cara pengecatan bakteri, khususnya bakteri gram positif dan bakteri
gram negatif
107
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Teori Umum
pertanian, gizi dan kesehatan, serta pangan. (Fidia, 2016)
Mikroorganisme merupakan jasad renik yang tidak dapat dilihat dengan mata
telanjang, tetapi harus menggunakan mikroskop. Yang tergolong ke dalam
mikroorganisme adalah bakteri, jamur, ganggang, protozoa, dan virus.
Mikroorganisme terdapat dalam populasi yang besar dan beragam dan hamper
terdapat di mana-mana di ala mini. Mereka dapat berada di dalam air, udara, tanah,
maupun di dalam tubuh makhluk hidup. Mikroorganisme terdapat paling banyak di
tempat yang mengandung nutrient, kelembaban dan suhu yang sesuai untuk
pertumbuhan dan perkembangbiakannya. (Mayasari, 2020)
Bakteri merupakan mikroba uniseluler, yang mempunyai 3 bentuk dasar yaitu,
bulat seperti bola (coccus), batang (bacillus), silindris dan lengkung (spiral). Untuk
melihat struktur sel bakteri dengan seksama, diperlukan suatu pewarnaan. Biasanya
108
pewarna yang digunakan disebut pewarna bakteri. Fungsi pewarnaan bakteri
terutama memberi warna pada sel atau bagian-bagiannya, sehingga menambah
kontras dan tampak lebih jelas. Sel-sel bakteri yang tidak diwarnai pada umumnya
sukar diamati dengan mikroskop cahaya biasa, karena sitoplasma sel mempunyai
indeks bias yang hampir sama dengan indeks bias lingkungannya yang bersifat cair.
(Kurniati dkk, 2018)
Sel prokariotik merupakan bentuk kehidupan yang terkecil dan memiliki
metabolism paling bervariasi. Kata prokariotik sendiri berarti “sebelum nukleus”
yaitu suatu organisme bersel satu tanpa memiliki nukleus. Hal ini berarti bahwa sel
prokariotik ini merupakan nenek moyang dari sel eukariotik, karena dia ada
sebelum sel eukariotik ada. Sel prokariotik ini memiliki tiga komponen dasar
diantaranya yaitu : plasmalemma, ribosom, dan nucleoid. Beberapa prokariotik
tidak memiliki kapsul yang menyelubungi dinding sel,kecuali prokariot yang dapat
berfotosintesis. Sel prokariotik ini dapat mengabsorbsi bahan organic untuk
pertumbuhannya. (Rahmadina, 2017)
Sel eukariotik ialah sel yang memiliki inti atau nukleus (karion) yang
dikelilingi oleh membrane, sehingga sel ini memiliki dua membran yaitu membran
sitoplasma dan membran inti (membran nukleus). Kata eukaryotic ini berasal dari
kata Yunani, eu (sejati), dan karyon (bagian dalam biji/nukleus). Oleh sebab itu, sel
ini dinamakan sel yang memiliki membrane inti (nukleus). Sel eukariotik memulai
kehidupannya dengan sebuah nukleus yang dikelilingi oleh berbagai macam
organel yang memiliki struktur dan fungsi tertentu dan terbungkus dalam sebuah
109
membran sehingga bentuknya kokoh dan tersusun dengan teratur. (Rahmadina,
2017)
Karakteristik yang membedakan bakteri gram positif adalah komposisi dinding
selnya beberapa lapisan peptidoglikan bergabung bersama membentuk struktur
tebal dan kaku. Terdapat sekitar 40 lapisan peptidoglikan atau disebut juga lapisan
Murein/Mukopeptida yang merupakan 50% dari bahan dinding sel. Sedangkan
pada bakteri gram negatif hanya ada 1 atau 2 lapisan yang merupakan 5-10% dari
bahan dinding sel. (Meganada dkk, 2017)
Selain itu dinding sel bakteri gram positif memiliki asam teikoat dan
teikuronat, yang terutama terdiri dari alkohol (seperti ribitol dan alkohol) dan fosfat.
Asam teikoat terdiri dari 2 jenis yaitu : asam lipoteikoat dan dinding dinding asam
teikoat. Kedua jenis asam teikoat bermuatan negatif karena mengandung gugus
fosfat dalam struktur molekul mereka. (Meganada dkk, 2017)
Komponen khusus dinding sel bakteri gram negatif terdiri dari Lipoprotein dan
selaput luar. Selaput luar mempunyai saluran khusus yang mengandung molekul
protein yang disebut porin yang memudahkan difusi pasif senyawa hidrofil dengan
berat molekul rendah (gula, asam amino, ion-ion tertentu). Molekul antibiotika
dapat menembus, tetapi relatif lambat, sehingga bakteri gram negatif relatif lebih
resisten terhadap antibiotika. (Meganada dkk, 2017)
Bakteri yang termasuk gram negatif adalah Enterobactericeae, Salmonella sp,
Shigella sp, E.Coli dan sebagainya. Sedangkan bakteri gram positif adalah
Staphylococci, Streptococci, Enterrococci, Clostridium, Bacillus. (Meganada dkk,
2017)
110
Staphylococcus aureus adalah salah satu contoh dari bakteri gram positif,
tumbuh dalam kelompok menyerupai buah anggur. Sel Staphylococcus aureus
berbentuk bulat dengan diameter antara 0,8-1,0 µm, tersusun dalam kelompok tidak
teratur, tidak bergerak, tidak membentuk spora. (Prihartono, 2012)
S. aureus mudah tumbuh pada kebanyakan pembenihan bakteriologik dalam
keadaan aerobic atau mikroaerobik. Bakteri ini tumbuh paling cepat pada suhu
37°C, tapi paling baik membentuk pigmen pada suhu kamar (20°C). koloni S. aureus
pada pembenihan padat berbentuk bulat halus menonjol berkilau-kilauan,
membentuk pigmen berwarna kuning emas. (Prihartono, 2012)
S. aureus bersifat meragikan karbohidrat dengan lambat, menghasilkan asam
laktat tetapi tidak menghasilkan gas. Bakteri tersebut dapat menimbulkan penyakit
melalui kemampuannya berkembang biak dan menyebar luas dalam jaringan
karena kemampuannya menghasilkan banyak zat ekstraseluler. (Prihartono, 2012)
Penanaman dapat dilakukan pada media sederhana maupun media yang
mengandung darah. Biakan S.aureus bila ditanam pada suhu 37°C akan tumbuh
dengan cepat, tetapi hemolysis dan pembentukan pigmen mungkin tidak terjadi
sampai beberapa hari kemudian dan menjadi optimal pada suhu kamar 27°C.
(Prihartono, 2012)
E. coli adalah kuman oportunis yang banyak ditemukan di dalam usus besar
manusia sebagai flora normal. Sifatnya unik karena dapat menyebabkan infeksi
primer pada usus misalnya diare pada anak-anak dan travelers diarrhea, seperti
juga kemampuannya menimbulkan infeksi pada jaringam tubuh lain diluar usus.
111
E.coli dapat memfermentasi laktosa, beberapa strain E.coli menghasilkan
hemolysis agar darah. (Prihartono, 2012)
E.coli berbentuk batang gemuk berukuran 2,4 µm x 0,4 µm sampai 0,7 µm,
termasuk gram negatif tidak bersimpai, bergerak aktif dan tidak berspora. Bersifat
aerob atau fakultatif aerob dan tumbuh pada pembenihan biasa. Suhu optimum
pertumbuhannya yaitu 37°C E.coli meragi laktosa, glukosa, sukrosa, maltose dan
mannitol dengan asam dan gas. E.coli banyak ditemukan dalam usus besar manusia,
menyebar ke vagina dan uretra. Strain E.coli yang menyebabkan diare mempunyai
pili sebagai media untuk melekat pada epitel intestine. (Prihartono, 2012)
E.coli tumbuh baik pada hamper semua media yang biasa dipakai di
laboratorium mikrobiologi; pada media yang dipergunakan untuk isolasi kuman
enteric, sebagian besar strain E.coli tumbuh sebagai koloni yang meragi laktosa.
E.coli bersifat mikroaerofilik. Beberapa strain bila ditanam pada agar darah
menunjukan hemolysis tipe β. Penyakit-penyakit yang disebabkan oleh E.coli
misalnya diare, infeksi saluran kemih mulai dari sistitis sampai pielonefriti,
pneumonia, meningitis pada bayi baru lahir dan infeksi luka terutama luka di dalam
abdomen. (Prihartono, 2012)
Pewarnaan gram atau metode gram adalah salah satu teknik pewarnaan yang
paling penting dan luas yang digunakan untuk mengidentifikasi bakteri. Dalam
proses ini, olesan bakteri yang sudah terfiksasi dikenai larutan-larutan berikut : zat
pewarna kristal violet, larutan yodium, larutan alkohol (bahan pemucat), dan zat
pewarna tandingannya berupa zat warna safranin, atau air fuchsin. Metode ini diberi
nama berdasarkan penemunya, ilmuwan Denmark Hans Christian Gram (1853-
112
1938) yang mengembangkan teknik ini pada tahun 1884 untuk membedakan antara
Pneumokokus dan bakteri Klebsiella pneumoniae. Bakteri yang terwarnai dengan
metode ini dibagi menjadi dua kelompok, yaitu bakteri gram positif dan bakteri
gram negative. Bakteri gram positif akan mempertahankan zat pewarna kristal
violet dan karenanya akan tampak berwarna ungu tua di bawah mikroskop. Adapun
bakteri gram negatif akan kehilangan zat pewarna kristal violet setelah dicuci
dengan alkohol, dan sewaktu diberi zat pewarna tandingannya yaitu dengan zat
pewarna air fuchsin atau safranin akan tampak berwarna merah. Perbedaan warna
ini disebabkan oleh perbedaan dalam struktur kimiawi dinding selnya. (Meganada
dkk, 2017)
Tujuan dari pewarnaan bakteri adalah untuk mempermudah pengamatan
bentuk sel mikroorganisme, memperjelas ukuran jasad, dapat mengamati struktur
luar dan struktur dalam dari sel mikroba, melihat reaksi jasad terhadap pewarna
yang diberikan, sehingga sifat fisik, kimia dari jasad dapat diketahui. Dengan
demikian, kita dapat menggunakan pewarna sebagai salah satu cara untuk
klasifikasi bakteria. Berhasil atau tidaknya pewarnaan sangat ditentukan oleh waktu
pemberian warna dan umur biakan yang diwarnai. (Sujaya, 2016)
Jenis-jenis pewarnaan bakteri yang dikenal adalah :
1. Pewarnaan sederhana. Pewarnaan ini hanya menggunakan satu macam zat
warna, missal biru metilen, air flukhsin, atau ungu kristal selama 1-2 menit.
(Prihartono, 2012)
2. Pewarnaan diferensial. Pewarnaan diferensial menggunakan lebih dari satu
macam zat warna yang terdiri atas : a) pewarnaan gram yang ditemukan oleh
113
Christian Gram pada tahun 1884 untuk membedakan bakteri yang bersifat gram
positif dan gram negative, b) pewarnaan tahan asam, misalnya pewarnaan Ziehl
Neelsen dan Kinyoun-Gabbet untuk membedakan bakteri yang tahan asam dan
yang tidak tahan asam. (Prihartono, 2012)
Pewarnaan khusus. Pewarnaan ini dipakai untuk mewarnai bagian-bagian sel
bakteri atau bakteri tertentu yang sulit diwarnai dengan pewarnaan biasa, misalnya
pewarnaan gray untuk mewarnai flagel dan pewarnaan klein untuk mewarnai spora.
(Prihartono, 2012)
114
B. Uraian Bahan
RM/BM : H2O/18,02
Rumus Struktur :
2. Alkohol (FI III,1979,Hal: 65)
RM/BM : C2H6O/46,07
H – C – C – OH
H H
115
dalam eter P
3. Aseton (Ditjen POM. 1979)
Nama resmi : ACETONUM
RM/BM : (CH3)2CO/58,00
Pemerian : Cairan jernih tidak berwarna, mudah menguap, bau khas,
mudah terbakar
Kelarutan : Dapat bercampur dengan air, etanol 95%, ester, klorofom
membentuk larutan jernih
Titik didih : Antar 55.5% dan 57%
Kegunaan : Sebagai sampel
4. Iodium (Ditjen POM, 1979)
Nama resmi : IODIUM
Nama lain : Iodium
RM/BM : I/126,91
Pemerian : Keping atau butir, berat, mengkilat, seperti logam, hitam
kelabu, dan bau khas
Kelarutan : Larut dalam lebih kurang 3500 bagian air, dalam 13
bagian etanol (95%) P, dalam lebih kurang 80 bagian
gliserol P dan dalam lebih kurang 4 bagian
116
karbondisulfida P, larut dalam Klorofom P dan dalam
Karbontetraklorida P
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat
Kegunaan : Sebagai komposisi cat B
5. Kristal Violet (Ditjen POM, 1979)
Nama resmi : KRISTAL VIOLET
Pemerian : Hablur berwarna hijau tua
Kelarutan : Sukar larut dalam air, agak sukar larut dalam etanol (95%)
P dan dalam asam asetat glasial P, Larutannya berwarna
lembayung tua
Kegunaan : Sebagai cat utama atau gram A dalam Pengecatan Gram
6. Kalium Iodida (Ditjen POM, 1979)
Nama resmi : KALII IODIDE
Sinonim : Kalium iodide
RM/BM : KI/166,00
Pemerian : Hablur heksahedral, transparan atau tidak berwarna,
opak putih, atau serbuk butiran putih. Higroskopik
Kelarutan : Sangat mudah larut dalam air, lebih mudah larut dalam
air mendidih, larut dalam etanol 95% p, mudah larut
dalam gliserol p
Kegunaan : Sebagai reduktor yang melepaskan I2
117
7. Safarin (Ditjen POM, 1979)
Nama resmi : SAFARININ
Pemerian : Serbuk halus berwarna biru keunguan
Kelarutan : Tidak larut dalam air, mudah larut dalam etanol
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat
Kegunaan : Sebagai Komposisi cat D
8. Amonium Oksalat (Ditjen POM, 1979)
Nama resmi : AMMONIUM OXALATE
Nama lain : Ammonium oksalat
Massa Molekul : 60 g/mol
Rumus molekul : C2H8N2O2
Pemerian : Cairan putih, tidak berbau
Kelarutan : Larut dalam air
Titik didih : Dekompos
Titik lebur : 70oC
Kegunaan : Sebagai komposisi cat A
118
C. Uraian Bakteri
1. Escherichia coli (Prihartono, 2012)
a. Klasifikasi Escherichia coli
Kingdom : Procaryota
Divisio : Gracilicutes
Class : Scotobacteria
Ordo : Eubacteriles
Family : Entobacteriaceae
Genus : Escherichia
Species : Escherichia coli
b. Morfologi Escherichia coli
Morfologi : Bakteri gram-negatif berbentuk batang pendek yang
memiliki panjang sekitar 2 µm, diameter 0,7 µm, lebar
0,4-0,7 µm dan bersifat anaerob fakultatif.
2. Staphylococcus aureus (Prihartono, 2012)
a. Klasifikasi Staphylococcus aureus
Kingdom : Procaryota
Divisio : Firmicutes
Class : Bacili
Ordo : Bacillales
Family : Staphylococcaceae
Genus : Staphylococcus
Species : Staphylococcus aureus
119
b. Morfologi Staphylococcus aureus
Morfologi : Bakteri gram-positif berbentuk bulat berdiameter 0,7-1,2
µm, tersusun dalam kelompok-kelompok yang tidak
teratur seperti buah anggur, fakultatif anaerob, tidak
membentuk spora, dan tidak bergerak.
120
BAB III
METODE KERJA
A. Alat
Adapun alat yang digunakan dalam praktikum kali ini diantaranya yaitu botol
semprot, bunsen, cawan petri, deck gelas, gelas kimia, mikroskop, kaki tiga, kawat
kasa, objek gelas, ose bulat, pipet tetes, rak tabung reaksi, dan tabung reaksi.
B. Bahan
Adapun bahan yang digunakan pada praktikum kali ini diantaranya yaitu
aceton, aquades, alkohol, aluminium foil, biakan bakteri gram positif dan gram
negatif, iodium, kalium iodida, kapas, kristal violet, safranin dan tissue.
C. Cara Kerja
1. Pembuatan Preparat Untuk Pengecetan
1) Diambil objek gelas yang bersih dan steril.
2) Disterilkan objek gelas dan ose dengan menggunakan bunsen.
3) Diambil satu koloni bakteri dengan ose yang steril dan diratakan pada objek
gelas dan ditipiskan.
4) Disterilkan kembali ose yang digunakan mengambil bakteri dengan dibakar
pada nyala api sampai membara.
5) Dikeringkan preparat diatas nyala api sambil digoyangkan dengan jarak
kira-kira 20 cm.
121
2. Pengecatan gram
1) Diambil Preparat yang siap dicat, digenangi dengan cat gram A selama 3
menit. Kemudian cat dibuang dan tanpa dicuci
2) Digenangi preparat yang sama dengan cat gram B selama 1 menit. Setelah
itu cat dibuang dan dicuci dengan air mengalir
3) Ditetesi preparat dengan cat gram C ampai warna cat tepat
dihilangkan/dilunturkan
4) Digenangi preparat dengan cat gram D selama 1-2 menit.
5) Dicuci preparat lalu dikeringkan dalam suhu kamar dan kemudian diamati
dibawah mikroskop dengan menggunakan pembesaran kuat.
122
BAB IV
A. Tabel Hasil Pengamatan
No. Nama Bakteri Perubahan Warna Gram

1. Bakteri Escherichia Negatif
coli berbentuk
batang (basil)
Warna Merah
2. Bakteri Positif
Staphylococcus
aureus berbentuk
bulat (coccus)
Warna Ungu
B. Pembahasan
Pewarnaan gram atau metode gram adalah salah satu teknik pewarnaan yang
paling penting dan luas yang digunakan untuk mengidentifikasi bakteri. Pewarnaan
gram bertujuan untuk mengidentifikasi bakteri dengan mudah. Pewarnaan gram
untuk membedakan spesies bakteri menjadi dua kelompok besar, yakni gram positif
dan gram negatif, berdasarkan sifat kimia dan fisik dinding sel mereka.
123
Bakteri gram negatif adalah bakteri yang tidak mempertahankan zat warna
metil ungu pada metode pewaraan gram. Sedangkan bakteri gram positif akan
mempertahankan zat warna metil ungu gelap setelah dicuci dengan alkohol. Bakteri
gram negatif memiliki 3 lapisan dinding sel, lapisan terluar yaitu lipoposakarida
(lipid) kemungkinan tercuci oleh alkohol, sehingga pada saat diwarnai dengan
safranin akan berwarna merah. Bakteri gram positif memiliki selapis dinding sel
berupa peptidoglikan yang tebal. Setelah pewarnaan dengan kristal violet, pori-pori
dinding sel menyempit akibat dekolorisasi oleh alkohol sehingga dinding sel tetap
menahan warna ungu.
Adapun peralatan yang digunakan pada percobaan ini yaitu : botol semprot,
bunsen, cawan petri, deck glass, Erlenmeyer, gelas kimia, kaki tiga, kawat kasa,
mikroskop, objek glass, ose bulat, pipet tetes, rak tabung reaksi, dan tabung reaksi.
Bahan-bahan yang digunakan pada percobaan ini yaitu : aceton, alkohol,
aluminium foil, aquadest, Escherichia coli, iodium, kalium iodida, kapas, kristal
violet, safranin, Staphylococcus aureus, dan tissue.
Alkohol 70% dipakai untuk mensterilkan meja atau alat-alat yang
tidakdimasukkan kedalam oven, seperti gunting.
Kapas dipakai untuk menutup atau menyumbat Erlenmeyer, tabung reaksi,
gelas ukur.
Kristal violet, alkohol 96% dan ammonium oksalat digunakan sebagai
pengecatan gram A (Ungu). iodium, kalium iodide dan aquadest digunakan sebagai
pengecatan gram B (Coklat). Aceton dan alkohol digunakan sebagai pengecatan
124
gram C (tak berwarna). Safranin, alkohol 96% dan aquadest digunakan sebagai
pengecatan gram D (Merah).
Jenis bakteri yang digunakan pada percobaan ini adalah Escherichia coli yang
merupakan bakteri gram negatif berbentuk batang atau basil dan Staphylococcus
aureus yang merupakan bakteri gram positif berbentuk bulat atau coccus.
Cara pembuatan preparat untuk pengecatan. Pertama diambil objek glass yang
bersih dan steril, kemudian disterilkan objek glass dan ose dengan menggunakan
bunsen. Selanjutnya, diambil satu koloni bakteri dengan ose yang steril dan
diratakan pada objek gelas dan ditipiskan, kemudian disterilkan kembali ose yang
digunakan untuk mengamil bakteri dengan cara dibakar pada nyala api sampai
membara, lalu dikeringkan preparat di atas nyala api sambil digoyangkan dengan
jarak kira-kira 20 cm.
Cara pembuatan cat gram B. Pertama, disiapkan alat dan bahan, kemudian
ditimbang iodium sebanyak 1 gram dan kalium iodida sebanyak 2 gram.
Selanjutnya, dimasukkan aquadest ke dalam Erlenmeyer sebanyak 300 ml dengan
menggunakan labu ukur, kemudian dimasukkan iodium dan kalium iodida yang
sudah ditimbang ke dalam Erlenmeyer yang berisi aquadest sebanyak 300 ml, lalu
dihomogenkan iodium, kalium iodida dan aquadest di dalam Erlenmeyer.
Cara pengecatan bakteri Staphylococcus aureus. Pertama, disiapkan preparat
yang telah diberi bakteri, kemudian dicat / digenangi preparat yang sudah ada
bakteri dengan cat gram A (kristal violet, alkohol 96% dan Ammonium oksalat)
selama 1-3 menit, lalu dibuang cat dan tidak dicuci. Selanjutnya, dicat / digenangi
preparat dengan cat gram B selama 1 menit, kemudian dibuang cat dan dicuci
125
dengan air mengalir, lalu ditetesi preparat dengan dengan cat gram C (aseton dan
alkohol) sampai warna cat hilang atau luntur. Selanjutnya, dibuang dan dicuci
dengan air mengalir, kemudian digenangi / dicat preparat dengan cat gra D
(safranin) selama 1-2 menit, lalu dcuci preparat dan dikeringkan dalam suhu kamar,
kemudian diamati dibawah mikroskop dengan perbesaran kuat. Melalui
pengamatan kami, Staphylococcus aureus memiliki bentuk bulat atau coccus dan
berwarna ungu sehingga Staphylococcus aureus merupakan bakteri gram positif.
Tetapi, pada pengamatan ini faktor cahaya menyebabkan warna pada
Staphylococcus aureus terlihat seperti kuning pudar.
Cara pengecatan bakteri Escherichia coli. Pertama, disiapkan preparat yang
telah diberi bakteri, kemudian dicat / digenangi preparat yang sudah ada bakteri
dengan cat gram A (kristal violet, alkohol 96% dan Ammonium oksalat) selama 1-
3 menit, lalu dibuang cat dan tidak dicuci. Selanjutnya, dicat / digenangi preparat
dengan cat gram B selama 1 menit, kemudian dibuang cat dan dicuci dengan air
mengalir, lalu ditetesi preparat dengan dengan cat gram C (aseton dan alkohol)
sampai warna cat hilang atau luntur. Selanjutnya, dibuang dan dicuci dengan air
mengalir, kemudian digenangi/dicat preparat dengan cat gra D (safranin) selama 1-
2 menit, lalu dcuci preparat dan dikeringkan dalam suhu kamar, kemudian diamati
dibawah mikroskop dengan perbesaran kuat. Melalui pengamatan kami,
Escherichia coli memiliki bentuk batang atau basil dan berwarna merah sehingga
Escherichia coli merupakan bakteri gram negatif.
Manfaat dari percobaan pemeriksaan mikroskopik dan pengecatan gram yaitu
untuk mengetahui cara pemeriksaan mikroskopik pada bakteri, mengetahui cara
126
pengecatan bakteri, khususnya dapat membedakan antara bakteri gram positif dan
bakteri gram negatif.
Alasan digunakannya bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli
yaitu karena dapat dengan mudah ditemukan dimanapun. Tapi bukan bukan hanya
itu alas an lainnya adalah agar pada pemeriksaan mikroskopik dengan terjadi warna
kontras antara bakteri dengan lingkungan sekitarnya, sehingga bakteri terlihat jelas
dan dalam hal ini perlu diperhatikan juga bentuk bakteri, susunan bakteri atas
kedudukan satu dengan yang lain dan sifat pengecatan dari bakteri tersebut.
127
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
Bakteri merupakan organisme yang relative sederhana karena umumnya terdiri
dari satu sel (uniselular) dan tidak memiliki membran inti (prokariotik). Prokariotik
mencakup bakteri dan Archea.Secara umum bakteri memiliki sifat yang tembus
cahaya, hal ini dikarenakan bakteri tidak memiliki zat warna dalam tubuhnya.
Tujuan dari pewarnaan yaitu untuk mempermudah proses pengamatan dari bentuk
sel bakteri, perluasan ukuran, mengamati struktur dalam serta luar sel bakteri, serta
untuk melihat reaksi jazad terhadap pewarnaan yang diberikan, sehingga nantinya
sifat fisik atau kimia jazad dapat diketahui .Bakteri seringkali dikelompokkan
berdasarkan bentuk dan sifatnya terhadap pengencatan Gram. Pengecatan Gram
merupakan upaya untuk melihat respon dinding sel terhadap cat. Pengecatan
dilakukan dalam empat macam cat yaitu cat utama (Gram A), cat penguat (Gram
B), cat peluntur (Gram C) dan cat penutup (Gram D).
B. Saran
1. Laboratorium
Diharapkan agar alat-alat maupun bahan lebih di lengkapi lagi, dan untuk
alat-alat yang telah rusak mungkin bisa diperbaiki atau di ganti.
2. Asisten
Untuk asisten cara penjelasan di laboratorium sudah bagus, tetapi untuk
asistensi ada baiknya bisa dijelaskan secara rinci dan detail agar praktikan bisa
lebih memahami.
128
DAFTAR PUSTAKA
Journal
Kurniati Tri Handayani, Indrayanti Reni, Muzajjanah, Rustam Yoswita, Sukmawati

Dalla. 2018. Penuntun Praktikum Mikrobiologi. Universitas Negeri Jakarta
Meganada Hiaranya Putri, Sukini, Yodong. 2017. Bahan Ajar Keperawatan Gigi
Mikrobiologi. Kementerian Kesehatan Republik Indonesia : Jakarta
Prihartono Dwi. 2012. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Buah Ceremai
(Phyllanthus acidus (L.) Skeels) Terhadap Staphylococcus aureus dan
Escherichia coli Multiresisten Antibiotik. Universitas Muhammadiyah:
Surakarta
LAMPIRAN
A. Skema Kerja
1. Staphylococcus Aureus
Bakteri 1
- Disiapkan alat dan bahan

- Disterilkan dect glass dan objek
glass
- Disterilkan ose
- Dikeringkan objek glass
- Diletakkan bakteri staphylococcus
Aureus
- Ditetesi gram A sebanyak 3 tetes
dan didiamkan selama 3 menit
- Dibuang cat tanpa dicuci
- Ditetesi dengan cat gram B
- Dibuang dan dicuci dengan
menggunakan aquades
- Ditetesi dengan cat gram C
- Digenangi dengan cat gram D
- Dicuci preparat dan dikeringkan
- Diamati di bawah mikroskop
Staphylococcus
Aureus
2. Escherichia coli
Bakteri 2
- isiapkan alat dan bahan

- Disterilkan dect glass dan objek
glass
- Disterilkan ose
- Dikeringkan objek glass
- Diletakkan bakteri escherichia coli
Ditetesi gram A sebanyak 3 tetes
dan didiamkan selama 3 menit
- Dibuang cat tanpa dicuci
- Ditetesi dengan cat gram B
- Dibuang dan dicuci dengan
menggunakan aquades
- Ditetesi dengan cat gram C
- Digenangi dengan cat gram D
- Dicuci preparat dan dikeringkan
Diamati di bawah mikroskop
Esherichia coli
B. Foto Pengamatan

Ket: Diambil bakteri dari dalam tabung Ket: Diratakan bakteri pada objek gelas dan
reaksi. ditipiskan.

Ket: Disterilisasi kembali ose Ket: Didiamkan gram A selama kurang lebih
menggunakan bunsen. 3 menit.

Ket: Didiamkan gram B selama 1 menit Ket: Didiamkan gram C selama 2 menit 2,29
3,60 detik. detik.

Ket: Hasil pengamatan Erchechia Coli. Ket: Hasil bakteri staphylococcus aureus.
LAPORAN PRAKTIKUM
TEKNIK ASEPTIS : PEMINDAH BIAKAN
KELOMPOK II

KELAS B/20
ASISTEN: RAHMATIA E. AMAN T.

FAKULTAS FARMASI
MAKASSAR
2021
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
dan mengetahui baik buruknya makanan atau obat. (Haeria. 2017).
yang lain dalam aplikasinya di bidang farmasi, kedokteran, Teknik kimia,
arkeologi, pertanian, gizi dan kesehatan, serta pangan. (Fidia. 2016).
Biakan murni ( pure culture ) sangat diperlukan dalam kegiatan mikrobiologi,
misalnya untuk keperluan diagnostik, karakteristik mikroorganisme, industry
mikribiologi, dan yang lain. Untuk mendapatkan kultur murni selain nutrisi dan
lingkungan yang menunjang pertumbuhan mikroorganisme juga perlu dicegah
adanya kontaminan dalam biakan. Untuk itu diperlukan suatu teknik aseptis
(Tim Mikrobiologi, 2021).
129
Teknik aseptis sangat diperlukan untuk memindahkan biakan dari satu tempat
ke tempat yang lain. Dengan teknik aseptis seorang mikrobiologis berusaha
mencegah terjadinya kontaminasi pada biakan (Tim Mikrobiologi, 2021).
Pembiakan mikrobia di laboratorium memerlukan media yang berisi zat
haraserta lingkungan pertumbuhan sesuai bagi mikroba. Media adalah suatu bahan
yang digunakan untuk menumbuhkan mikroba yang terdiri atas campuran nutrisi
atau zat-zat makanan. Selain untuk menumbuhkan mikroba, media dapat juga
digunakan untuk isolasi, memperbanyak, pengujian sifat-sifat fisiologis dan
perhitungan jumlah mikroba (Nur Hidayat, Dkk. 2018).
130
B. Maksud Percobaan
Adapun maksud dari percobaan ini :
1. Mahasiswa mampu mengetahui cara memindahkan biakan dari satu media ke
media lain.
2. Mahasiswa mampu mengetahui cara kerja aseptis.
C. Tujuan Percobaan
Adapun tujuan dari percoaan ini :
1. Mahasiswa dapat memahami cara memindahkan biakan dari satu media ke
media lain.
2. Mahasiswa dapat memahami cara melakukan kerja aseptis.
Adapun manfaat dari percobaan ini :
1. Mahasiswa mengetahui cara memindahkan biakan dari satu media ke media lain.
2. Mahasiswa dapat mengetahui cara kerja aseptis.
131
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Teori Umum
sehingga untuk mengamatinya diperlukan alat bantuan yang disebut mikroskop.
Pemindahan biakan atau bakteri atau yang lebih dikenal dengan inokulasi yaitu
suatu cara memindahkan biakan murni dari satu media ke media yang lain yang
sama atau berbedah dimana biakan murni/ inokulum merupakan biakan hasil isolasi
yang terdiri dari satu jenis mikroba (Harti, 2015).
Tujuan dipindahkannya biakan atau bakteri yaitu memperbanyak
mikroorganisme atau rekulturasi dan digunakan dalam perhitungan jumlah
mikroorganisme, untuk memperoleh isolate, inokulum dari sampel atau biakan
campuran digunakan dalam pengujian sifat fisiologi yang khusus dari berbagai
isolate serta digunakan dalam menguji patogenensis organisme (Harti ,2015).
Penanaman bakteri adalah pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang
lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi dalam
kondisi steril atau aseptik. Kondisi steril ini meliputi media, alat, dan bahan yang
digunakan harus benar-benar bersih dari kontaminasi organisme. Dalam melakukan
penanaman bakteri diperlukan beberapa persiapan antara lain menyiapakan ruangan
dan pemindahan dengan kawat inokulasi. Ruangan tempat penanaman bakteri harus
bersih dan steril agar tidak terjadi kesalahan dalam percobaan dan kawat inokulasi
132
(ose) yang digunakan sebaiknya digunakan pada bagian ujung yang terbuat dari
platina atau nikel (Tim Tentor Master, 2018).
Kondisi aseptik adalah suatu keadaan yang dirancang untuk mengindari adanya
kontaminasi oleh mikroorganisme, pirogen, ataupun partikel, baik pada alat,
kemasan ataupun bentuk sediaan selama proses pencampuran. Teknik aseptis
didefenisikan sebagai prosedur kerja yang meminimalisasi kontaminan
mikroorganisme dan dapat mengurangi resiko paparan terhadap petugas (Oetari,
2018).
Agar percobaan dan pengujian dapat berhasil maka jumlah kotaminan pada
peralatan dan lingkungan kerja harus diminimalkan. Untuk itu diperlukan suatu
metode aseptis. Metode aseptis merupakan keterampilan laboratorium yang
mendasar dan sangat penting yang dapat digunakan untuk memindahkan biakan
kultur, mengisolasi media, isolasi kultur murni dan melakukan pengujian
mikrobiologik. Metode aseptis digunakan untuk mengisolasi spesies kultur
campuran. Selain itu, metode aseptis juga dapat mencegah penyebaran mikroba
patogen ke lingkungan maupun analis sehingga menurunkan resiko foodborne
disease (Lestari, 2018).
Prinsip-prinsip dasar teknik aseptik yang harus ditegakkan adalah: Media
pertumbuhan dalam wadah (misalnya erlenmeyer atau tabung reaksi) harus
disterilisasi segera setelah dibuat, wadah (misalnya petridish) yang akan digunakan
untuk kultivasi mikroorganisme sebaiknya dibungkus dan kemudian disterilkan,
semua instrumen (misalnya jarum ose ataupun tip pipet) dan berbagai larutan serta
aquadest yang akan menyentuh sisi sebelah dalam petridish dan tabung reaksi yang
133
sudah disterilkan, medium steril dan kultur mikroorganisme, pertama-tama harus
disterilkan terlebih dahulu, area kerja atau meja kerja harus disterilkan dahulu
sebelum dipakai dan selalu dijaga sterilitasnya sepanjang pemakaiannya (misalnya,
tidak meletakkan ose dan tip pipet yang telah digunakan untuk kultivasi maupun
transfer mikroorganisme, di atas meja kerja. Jarum ose harus disterilkan kembali
(dengan dibakar pada nyala api Bunsen) sebelum diletakkan di tempatnya dan tip
pipet bekas pakai harus diletakkan dalam larutan disinfektan/ alkohol), mulut
tabung reaksi harus selalu dipanaskan dahulu sebelum maupun sesudah transfer
ataupun kultivasi mikroorganisme. Tutup/sumbat tabung kultur tidak boleh
diletakkan di atas meja kerja untuk mencegah kontaminasi ulangalik antara tabung
reaksi kultur dan meja kerja, biasakan untuk memisahkan (mengkategorikan) segala
macam peralatan dan medium antara yang steril dan terkontaminasi agar pekerjaan
berjalan lancer, transfer kultur dan kultivasi mikroorganisme harus dilakukan di
dekat nyala api Bunsen pada meja kerja yang sudah disterilkan atau dalam laminar-
air flow cabinet (Rakhmawati, 2011).
Dalam melakukan transfer atau pemindahan bakteri maka perlu diperhatikan
hal-hal seperti berikut :
1. Transfer dapat dilakukan dengan ose mata atau ose jarum, ose yang akan
dipakai untuk memindahkan kultur sel harus dalam keadaan steril yaitu dengan
membakar ose diatas api pemanas bunsen, setelah ose dingin baru dapat
digunakan untuk memindahkan mikroba dari media yang lama ke media yang
baru. Jika saat memindahkan kultur sel terdengar suara “mendesis” berarti ose
134
belum cukup dingin sehingga kemungkinan mikroba yang dipindahkan dapat
mati karena ose masih panas.
2. Sebelum dan sesudah memindahkan kultur sel. ujung atau mulut tabung harus
dilewatkan diatas api Bunsen untuk meminimalisir kontaminan dari udara
masuk ke dalam tabung.
3. Selain dipindahkan dalam media cair dan agar dalam cawan petri, kultur sering
kali dipindahkan ke agar miring. Untuk memindahkan/ menginokulasikan
kultur pada media agar miring, ose yang sudah mengandung mikroba
disentuhkan secara perlahan-lahan di ujung paling dalam tabung , kemudian
ose ditarik pelan-pelan secara zig zag sampai ke ujung bagian atas tanpa
merusak agar (Lestari, 2018).
135
B. Uraian Bakteri
1. Klasifikasi Bakteri Escherichia Coli (Ikmalia, 2014).
Kingdom : Bacteria
Divisi : Proteobacteria
Classis : Gammaproteobacteria
Ordo : Enterobacteriales
Family : Enterobactericeae
Genus : Escherichia
Species : Escherichia coli
Morfologi : Bakteri gram negatif berbentuk batang pendek yang
memiliki panjang sekitar 2 mm, diameter 0,7, lebar 0,4 –
0,7 mm dan bersifat anaerob fakultatif.
2. Klasifikasi Staphylococcus aureus (Syahrurachman, et al. 2011).
Domain : Bacteria
Kingdom : Eubacteria
Ordo : Eubacteriales
Family : Micrococcaceae
Morfologi : Bakteri gram positif bulat berdiameter 0,7 – 1,2 mm,
tersusun dalam kelompok – kelompok yang tidak teratur
seperti buah anggur, fakultatif anaerob, tidak membentuk
spora dan tidak bergerak.
136
3. Klasifikasi Streptococcus mutans (Sutadi Heriandi, 2015).
Kingdom : Monera
Divisi : Firmicutes
Classis : Bacilli
Ordo : Lactobacilalles
Family : Streptococcaceae
Genus : Streptococcus
Species : Streptococcus mutans
Morfologi : Bakteri gram positif berbentuk bulat dengan diameter 0,5-
0,7 mm, fakultatif anaerob, tidak bergerak aktif, tidak
membentuk spora dan mempunyai susunan rantai dua atau
lebih.
137
C. Uraian Bahan
1. Aquadest (Dirjen POM 1979 : 96)
RM/BM : H2O/18,02
Rumus Struktur :
2. Alkohol (Dirjen POM 1979 : 65)
RM/BM : C2H6O/46,07
Rumus Struktur :
138
dalam eter P
3. Nutrien Agar (NA) (Kristiandi, 2021)
Komposisi : 0.5% pepton, 0,3% ekstrak daging sapi, 1,5% agar dan
0,5 % NaCl yang berperan sebagai penunjang
pertumbuhan mikroba
4. Medium Nutrient Borth (NB) (Harris,2015)
Komposisi : 1 g/L lable mcopowder, 2 g/L yeastextract, 5 g/L peptone,
dan 5 g/L sodium chloride).
139
BAB III
METODE KERJA
A. Alat
Adapun alat yang digunakan pada praktikum kali ini di antaranya yaitu
autoklaf, bunsen, botol semprot, cawan petri, Erlenmeyer, gelas ukur, gunting, kaki
tiga, kulkas, oven, ose bulat, rak tabung reaksi, spoit, tabung reaksi, dan timbangan
analitik.
B. Bahan
Adapun bahan yang digunakan pada praktikum kali ini adalah aquadest,
alkohol, bakteri Escherichia coli, bakteri Propionibacterium acnes, bakteri
Streptococcus mutans, benang godam, kertas, NA (Nutrient Agar), dan NB
(Nutrient Broth).
C. Cara Kerja
1. Sterilisasi Alat
a. Dibungkus semua alat-alat seperti cawan petri, gelas kimia, gelas ukur, dan
tabung reaksi dengan kertas lalu diikat dengan benang godam.
b. Dimasukkan semua alat-alat ke dalam oven dengan suhu 175°C selama 60
menit.
2. Pembuatan medium
a. NA (Nutrient Agar)
1. Ditimbang NA sebanyak 2,76 gram dengan menggunakan timbangan.
140
2. Dimasukkan aquadest sebanyak 120 mL ke dalam erlenmeyer.
3. Dimasukkan NA 2,76 gram ke dalam erlenmeyer yang berisi aquades
120 ml.
4. Dipanaskan NA sampai homogen.
5. Diaduk atau dihomogenkan sampai mendidih menggunakan batang
pengaduk.
6. Diangkat erlenmeyer dan ditutup dengan kapas.
7. NA dan alat lainnya dimasukkan ke dalam autoklaf untuk
disterilisasikan dengan suhu 121O C selama 20 menit.
8. Dikeluarkan NA dan alat dari autoklaf.
9. Tabung reaksi dan erlenmeyer disterilkan dengan bunsen dan diambil
NA menggunakan spoit dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi
kemudian diangin – anginkan dan Erlenmeyer ditutup kembali
menggunakan kapas.
10. NA diratakan dengan menggunakan metode angka delapan.
b. NB (Nutrient Broth)
1. Ditimbang NB sebanyak 0,24 gram dengan menggunakan timbangan.
2. Dimasukkan aquadest sebanyak 120 mL ke dalam erlenmeyer.
3. Dimasukkan NB 0,24 gram ke dalam erlenmeyer yang berisi aquades
120 ml.
4. Dipanaskan NB sampai homogen.
5. Diaduk atau dihomogenkan sampai mendidih menggunakan batang
pengaduk.
141
6. Diangkat erlenmeyer dan ditutup dengan kapas.
7. NB dan alat lainnya dimasukkan ke dalam autoklaf untuk
disterilisasikan dengan suhu 121OC selama 20 menit.
8. Dikeluarkan NB dan alat dari autoklaf.
9. Tabung reaksi dan erlenmeyer disterilkan dengan bunsen dan diambil
NB menggunakan spoit dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi
kemudian diangin – anginkan dan Erlenmeyer ditutup kembali
menggunakan kapas.
10. NB diratakan dengan menggunakan metode angka delapan.
3. Pemindahan biakan dari media cair ke media padat
a. Dipanaskan ose hingga membara
b. Dibuka tabung yang berisi kultur yang akan dipindahkan, panasi mulut
tabung pada nyala api
c. Dimasukkan ose tersebut ke dalam biakan dekat dinding tabung dan ambil
satu koloni biakan, kemudian panasi mulut tabung dan tutup kembali.
d. Dibuka tabung berisi nutrient agar miring, panasi mulut tabung dengan
nyala api
e. Digoreskan ose pada media nutrient agar miring
f. Dipanasi kembali mulut tabung, kemudian tutup
g. Diinkubasi 37oC selama 24 jam.
4. Pemindahan biakan dari media padat ke media padat
142
d. Dibuka petri dish sebagian dan panasi mulut petri dish dekat dengan nyala
api
e. Digoreskan ose pada media nutrient agar pada petri dish dekat nyala api
f. Dipanasi kembali mulut petri dish dan kemudian tutup
5. Pemindahan biakan dari media padat ke media cair
d. Dibuka tabung yang berisi nutrient, panasi mulut tabung dengan nyala api
e. Dimasukkan ose kedalam tabung yang berisi nutrient
f. Dipanasi kembali mulut tabung, kemudian tutup
143
BAB IV
A. Tabel Hasil Pengamatan
No. Pemindahan biakan bakteri Keterangan
1. Pemindahan biakan
padat-padat yang
terdapat pertumbuhan
Sebelum Inkubasi Sesudah Inkubasi bakteri (Escherichia
Bakteri coli)
cair-cair yang terdapat
pertumbuhan bakteri
(Propionibacterium
Sebelum Inkubasi Sesudah Inkubasi
acnes)
Bakteri
padat-cair yang terdapat
pertumbuhan bakteri
(Streptococcus mutans)
Bakteri
padat-padat yang
terdapat partumbuhan
bakteri (Escherichia
coli)
Bakteri
144
cair-padat yang terdapat
partumbuhan bakteri
Sebelum Inkubasi Sesudah Inkubasi (Propionibacterium
Bakteri acnes)
padat-padat yang
terdapat partumbuhan
bakteri (Streptococcus
mutans)
Bakteri
B. Pembahasan
Pemindahan biakan atau bakteri atau yang lebih dikenal dengan inokulasi yaitu
suatu cara memindahkan biakan murni dari satu media ke media yang lain yang
sama atau berbedah dimana biakan murni/ inokulum merupakan biakan hasil isolasi
yang terdiri dari satu jenis mikroba (Harti, 2015).
Pada praktikum kali ini digunakan alat – alat yaitu autoklaf, bunsen, botol
semprot, cawan petri, erlenmeyer, gelas ukur, gunting, kaki tiga, kulkas, oven, ose
bulat, rak tabung reaksi, spoit, tabung reaksi, dan timbangan analitik.
Adapun bahan – bahan yang digunakan adalah aquadest, alkohol, bakteri
Escherichia coli, bakteri Propionibacterium acnes, bakteri Streptococcus mutans,
benang godam, kertas, NA (Nutrient Agar), dan NB (Nutrient Broth).
Pada percobaan kali ini, hal yang dilakukan pertama kali yaitu pembuatan
medium. Pertama, disterilisasikan terlebih dahulu alat – alat yang digunakan
menggunakan oven dengan temperature 175°C selama 60 menit, lalu dikeluarkan
145
dan didiamkan hingga dingin. Selanjutnya, timbang bahan yang akan digunakan,
dihomogenkan medium dengan aquades, diletakkan larutan yang telah
dihomogenkan di atas bunsen dan diaduk medium hingga mendidih, diangkat
medium yang telah mendidih kemudian ditutup erlenmeyer menggunakan kapas
lalu disterilkan di autoklaf. Sebelum medium dipindahkan ke cawan petri
disterilisasikan terlebih dahulu menggunakan pijaran api. Dimiringkan sedikit
erlenmeyer untuk diambil medium menggunakan spoit lalu dituangkan ke cawan
petri lalu ditutup, digoyangkan cawan petri membentuk angka 8, dilakukan secara
berulang sampai semua mediumnya habis.
Cara pemindahan biakan yang pertama, ose dipanaskan dari pangkal sampai
ujung hingga membara, kemudian dibuka tabung yang berisi kultur yang akan
dipindahkan, panasi mulut tabung pada nyala api. Kemudian ose dimasukkan ke
dalam biakan dekat dinding tabung dan ambil satu koloni biakan. Selanjutnya,
tabung dibuka, lalu dipanasi mulut tabung dengan nyala api kemudian digoreskan
ose pada media nutrient agar miring, lalu dipanasi kembali mulut tabung dan ditutup
kembali. Setelah itu, diinkubasi selama 24 jam dengan suhu 37°C.
Teknik aseptis sangat diperlukan untuk memindahkan biakan dari satu ke
tempat yang lain. Dengan teknik aseptis seorang mikrobiologis berusaha mencegah
terjadinya kontaminasi pada biakan. Manfaat dari percobaan teknik aseptis
pemindah biakan adalah mampu memindahkan biakan bakteri dari satu media ke
media yang lain, serta mampu melakukan kerja secara aseptis.
Berdasarkan hasil pengamatan pada medium bakteri yang dipindahkan harus
dilakukan secara aseptik agar terjadi biakan murni. Hasil yang didapatkan setelah
146
bakteri diinkubasi terdapat pertumbuhan bakteri atau kultur murni pada medium
Nutrient Agar (NA) dan medium Nutrient Broth (NB).
147
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
Penanaman bakteri adalah pekerjaan memindahkan bakteri dari medium lama
ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi dalam kondisi
steril atau aseptis. Tujuan pemindahan biakan yaitu untuk memperbanyak
mikroorganisme atau rekulturasi, digunakan dalam perhitungan jumlah
mikroorganisme dan digunakan dalam menguji patogenensis organisme. Kondisi
aseptis adalah suatu keadaan yang dirancang untuk menghindari adanya
kontaminasi oleh mikroorganisme, baik pada alat, kemasan ataupun bentuk sediaan
selama proses pencampuran dan dapat mengurangi resiko paparan terhadap
praktikan. Media pertumbuhan yang dibuat dan wadah yang akan digunakan untuk
kultivasi mikroorganisme sebaiknya dibungkus dan kemudian disterilkan. Metode
aseptis digunakan untuk mengisolasi spesies kultur campuran. Metode aseptis juga
dapat mencegah penyebaran mikroba patogen ke lingkungan
B. Saran
1. Laboratorium
Disarankan semoga kedepannya bahan-bahan dan alat-alat di dalam
laboratorium semakin lengkap.
2. Asisten
Secara keseluruhan konsep atau cara kakak sebagai asisten dosen dalam
laboratorium baik, sebaiknya kakak-kakak asisten dosen lebih tingkatkan lagi
agar kedepannya semakin baik.
148
DAFTAR PUSTAKA
Fibriana Fidia. Andin Vita Amalia. 2016. Potensi Kitchen Microbiology Untuk
Meningkatkan keterampilan Teknik Hands – on Dalam Pembelajaran
Journal.
Haeria. 2017. Pengantar Ilmu Farmasi. UIN Alauddin : Makassar.
Harris, Amanda. (2015), Studi Komparasi Variasi Media Kultur Terhadap

Pertumbuhan Populasi Bakteri Bacillus subtillis dan Bacillus licheniformis
Untuk Probiotik Unggas. Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Arlanga
Surabaya.
Harti, Agnes Sri. 2015. Mikrobiologi Kesehatan. CVAndi Offset : Yogyakarta.
Ikmalia. 2014. Analisa Profil Protein Isolat Escherichia coli S1 Hasil Iradiasi Sinar
Gamma.
Kristiandi, Kiki, Sanya Anda Lusiana, Rizky Nisfi Ramdhini.2021. Teknologi

Fermentasi : Yayasan Kita Menulis
Lestari, Lili Arsanti, Eni Harmayani, Tyas Utami, Puspita Mardika Sari, Syara
Nurfiani. 2018. Dasar-Dasar Mikrobiologi Makanan di Bidang Gizi dan
Kesehatan. Gajah Mada Uuniversity Press : Yogyakarta
Nur Hidayat, Dkk. 2018. Mikroorganisme Dan Pemanfataannya. UB Press.

Malang. Oetari. R. A. 2018. Teknik Aseptis. Gajah Mada University Press:
Yogyakarta.
Rakhmawati, Anna, Bernadetta Octavia, Siti Umniyatie. 2011. Petunjuk Praktikum

Mikrobiologi. Jurdik Biologi FMIPA UNY.
Syahrurachman, et al. 2011. Buku Ajar Mikrobiologi Kedokteran. Staf Pengajar

Fakultas Kedokteran Univesitas Indonesia. Edisi revisi. Jakarta : Binarupa
Aksara.
129
Sutadi Heriandi, Yuke Heriandi. 2015. Identifikasi S.Mutans dan S.Sobrinus
Dengan Morfologi Koloni dan Analisa Biokimia. Fakultas Kedokteran Gigi
Universitas Indonesia. Jakarta : vol. 11(3), no. 106 – 109.
Tim Tentor Master. 2018. Magic Trick Praktis Ala Bimbel Biologi. PT Gramedia
Widiasarana Indonesia : Jakarta.
Tim Mikrobiologi. 2021. Penuntun Praktikum Mikrobiologi Dasar. Fakultas

Farmasi Universitas Megarezky : Makassar.
130
LAMPIRAN
A. Skema Kerja
1. Sterilisasi alat
Alat
− Dicuci
− Dibilas
− Dikeringkan
− Dibungkus
− Disterilkan
Alat steril
2. Pembuatan medium
Medium NA
− Ditimbang
− Dilarutkan
− Dipanaskan
− Dihomogenkan
− Disterilkan
− Dipindahkan
131
Medium NB
− Ditimbang
− Dilarutkan
− Dipanaskan
− Dihomogenkan
− Disterilkan
− Dipindahkan
132
B. Perhitungan
23
1. NA = 1000 𝑥 6 𝑥 20 𝑚𝐿 = 2,76 𝑔𝑟𝑎𝑚
8
2. NB = 1000 𝑥 3 𝑥 10 𝑚𝐿 = 0,24 𝑔𝑟𝑎𝑚
133
C. Foto Pengamatan

KET: Disterilkan alat. KET:. Ditimbang NA.

KET: Ditimbang NB KET: Pembuatan medium.
134

KET: Bahan disterilisasi di dalam autoklaf. KET: Pemindahan medium.

KET: Pengambilan bakteri. KET: Penggoresan bakteri.
135

KET: Medium sebelum inkubasi. KET: Medium sesudah inkubasi.
136
PERCOBAAN VII
PERHITUNGAN KOLONI
KELOMPOK II

KELAS B/20

FAKULTAS FARMASI
MAKASSAR
2021
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
meneliti, dan mengetahui baik buruknya makanan atau obat. (Haeria. 2017)
kapang, mikroalga, protozoa, dan Archaea.Selain itu, virus merupakan makhluk
dapat sepenuhnya dikatakan sebagai makhluk hidup.Mikrobiologi dimulai sejak
Dalam penerapannya dimasa kini, mikrobiologi tidak dapat dipisahkan dengan
ilmu yang lain dalam aplikasinya di bidang farmasi, kedokteran, Teknik kimia,
arkeologi, pertanian, gizi dan kesehatan, serta pangan. (Fidia. 2016)
Menghitung jumlah mikroorganisme pada suatu materi dilakukan untuk
mengetahui status mikrobiologis dari bahan tersebut.Perhitungan mikroba tersebut
dapat dilakukan secara langsung maupun tidak langsung.Perhitungan secara
langsung memungkinkan mengetahui jumlah mikroba pada saat itu juga tetapi
sulit untuk membedakan sel hidup dan sel mati.(penuntun)
Mikroba dapat hidup pada beberapa kondisi tertentu, sehingga medium
pengencer yang digunakan pun berbeda-beda. Pada analisis suatu mikroba
149
terdapat beberapa pilihan medium pengenceran yang dapat digunakan untuk
mikroba anaerobic, medium pengencer yang digunakan untuk mikroba osmofilik
dan halofilik, serta medium pengencer untuk sampel cair atau sampel padat
dengan partikel halus dan lainnya ( Wenny, 2018)
Perhitungan koloni ini dilakukan untuk mengetahui pertumbuhan suatu
bakteri. Penghitungan suatu koloni dapat dilakukan dengan metode pour plate.
Mengingat jumlah koloni bisa mencapai lebih dari 300 koloni, maka diperlukan
alat bantu yang biasa disebut Colony Counter untuk mempermudah penghitungan
jumlah koloni bakteri. (Erdo, 2019)
B. Maksud Percobaan
1. Untuk mengetahui cara perhitungan mikroba pada berbagai bahan
2. Untuk mengetahui jumlah mikroba pada suatu bahan
C. Tujuan Percobaan
1. Mahasiswa mengetahui cara perhitungan mikroba pada bahan
2. Mahasiswa mengetahui jumlah mikroba pada suatu bahan
Adapun manfaat dari percobaan ini yaitu mengetahui cara perhitungan
mikroba pada berbagai bahan dan mengetahui jumlah mikroba pada suatu bahan.
150
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Teori Umum
dalam bentuk sel tunggal, multisel, maupun seluler seperti bakteri, mikrofungi,
kapang, mikroalga, protozoa, dan Archaea.Selain itu, virus merupakan makhluk
dapat sepenuhnya dikatakan sebagai makhluk hidup.Mikrobiologi dimulai sejak
ilmu yang lain dalam aplikasinya di bidang farmasi, kedokteran, teknik kimia,
arkeologi, pertanian, gizi dan kesehatan, serta pangan. (Fidia, 2016)
Mikroorganisme merupakan jasad renik yang tidak dapat dilihat dengan mata
telanjang, tetapi harus menggunakan mikroskop.Yang tergolong ke dalam
mikroorganisme adalah bakteri, jamur, ganggang, protozoa, dan virus.
Mikroorganisme terdapat dalam populasi yang besar dan beragam dan hamper
terdapat di mana-mana di ala mini. Mereka dapat berada di dalam air, udara,
tanah, maupun di dalam tubuh makhluk hidup.Mikroorganisme terdapat paling
banyak di tempat yang mengandung nutrient, kelembaban dan suhu yang sesuai
untuk pertumbuhan dan perkembangbiakannya. (Mayasari, 2020)
Bakteri adalah suatu organisme yang jumlahnya paling banyak dan tersebar
luas dibandingkan dengan organisme lainnya di bumi.Bakteri umumnya
merupakan organisme uniseluler (bersel tunggal), prokariota/prokariot, tidak
151
mengandung klorofil, serta berukuran mikroskopik (sangat kecil). Bakteri tidak
hanya merugikan bagi manusia, ada juga yang memiliki manfaat, antara lain
:Escherichia coli, Acetobacter xylinum, Streptococcus termophylus. (Arya, 2015)
Pengertian lain dari bakteri yaitu salah satu golongan mikroorganisme
prokariotik (bersel tunggal) yang hidup berkoloni dan tidak mempunyai selubung
inti namun mampu hidup dimana saja. Menurut klasifikasinya bakteri dibagi
menjadi 2 yaitu bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif.Beberapa bakteri
Gram positif dan bakteri Gram negatif merupakan flora normal pada tubuh
manusia. (Michelle, 2017)
Koloni bakteri merupakan sekumpulan dari bakteri-bakteri yang sama yang
mengelompok menjadi satu dan membentuk suatu koloni-koloni. Untuk
mengetahui pertumbuhan suatu bakteri dapat dilakukan dengan menghitung
jumlah koloni bakteri. Perhitungan suatu koloni biasa dilakukan secara manual
dengan menandai dan menghitung koloni bakteri yang ada pada cawan petri,
perhitungan ini masih menggunakan daya ingat manusia sehingga dapat terjadi
kesalahan dalam proses perhitungan. Untuk mempermudah perhitungan jumlah
koloni bakteri digunakan alat yang biasa disebut Colony Counter.Pada alat Colony
Counter, perhitungan jumlah koloni bakteri menggunakan arduino uno smd
dengan minimum sistem atmega 328 dan Probe sebagai penghitung koloni
bakteri. Dengan adanya Colony Counter tersebut pengguna tinggal menandai
koloni bakteri yang dihitung dengan menyentuhkan Probe pada media sampel,
sehingga hasil perhitungan akan langsung ditampilkan di LCD. Dari hasil uji coba
152
penghitungan pada 15 sampel alat Colony Counter dapat berfungsi dengan baik.
(Erdo, 2019)
Colony Counter merupakan alat yang digunakan untuk menghitung koloni
bakteri. Colony Counter bekerja dengan memanfaatkan lup untuk memperbesar
koloni bakteri yang terdapat pada cawan petri. Colony Counter pada umumnya
masih bersifat manual, hanya mengandalkan daya ingat petugas laboratorium.
Proses yang masih manual seperti ini akan berdampak pada lambatnya proses
penghitungan dan rendahnya kualitas hasil yang didapat. Dengan proses seperti ini
diperlukan otomasisasi perhitungan menggunakan alat seperti perancangan
berbasis mikrokontroler. (Arya, 2015)
Perhitungan bakteri adalah suatu cara yang digunakan untuk menghitung
jumlah colony bakteri yang tumbuh pada suatu media pembiakan. Perhitungan
jumlah bakteri dapat dilakukan dengan berbagai cara misalnya perhitungan
dengan metode MPN, perhitungan dengan pengecatan negatif dan perhitungan
dengan metode hitung cawan. Jumlah bakteri dapat juga dihitung dengan
menggunakan haemacytometeratau petroff hauseser cunter. Satuan yang
digunakan dalam perhitungan adalah CFU/mL atau CFU/gram. (Nur Hidayati,
2018)
Perhitungan bakteri dengan metode MPN (Most Propable Number)
merupakan metode perhitungan sel bakteri terutama untuk perhitungan bakteri
coliform berdasarkan jumlah perkiraan terdekat yaitu perhitungan dalam range
tertentu dan dihitung sebagai nilai duga dekat secara statistic dengan merujuk
pada table MPN (Most Propable Number). (Harti, 2015)
153
MPN (Most Propable Number) bisa juga diartikan sebagai suatu metode yang
menggunakan serangkaian pengenceran dan beberapa seri tabung (3,5, atau 7
tabung) untuk memperkirakan secara statistik jumlah bakteri dalam sampel
pangan cair seperti sush dan air. MPN merupakan metode yang diaplikasikan
ketika sampel diduga mengandung bakteri dalam jumlah rendah ( 100/g atau
100 mL) atau mengandung partikel yang akan mengganggu jika dilakukan
perhitungan dengan metode pemupukan cawan (plate count). (Rahti, 2021)
Salah satu metode yang dapat dilakukan untuk menghitung jumlah mikroba
dalam suatu bahan makan salah satunya yaitu dengan mengukur jumlah sel yang
ada menggunakan metode hitung cawan (Total Plate Count).Metode hitung cawan
merupakan metode enumerasi yang sudah lama dan banyak digunakan dalam
bidang mikrobiologi pangan untuk memperkirakan jumlah mikroorganisme yang
ada pada suatu sampel bahan makan dengan asumsi bahwa mikroorganisme yang
ada terdistribusi secara homogen di dalam makan.(Endang, 2020)
Metode hitung cawan memiliki beberapa kelebihan diantaranya yaitu
kapasitas untuk menghitung jumlah bakteri jika terlalu banyak ataupun jika terlalu
sedikit dapat menggunakan faktor pengenceran.Selain itu, metode hitung cawan
ini hanya menghitung bakteri yang layak dihitung tidak termasuk bakteri mati
ataupun puing-puing yang ada pada media pertumbuhan.Namun, metode ini juga
memiliki kekurangan yaitu perhitungan kumpulan sel bakteri dapat salah dihitung
sebagai koloni tunggal sehingga dilaporkan sebagai CFU/mL daripada
sel/mL.Selain itu metode ini membutuhkan waktu yang lama karena hasil hitung
cawan ini biasanya diperoleh setelah 1-3 hari.(Endang, 2020)
154
Metode hitung cawan dibedakan menjadi beberapa cara yaitu metode tuang
(pour plate), metode sebaran (spread plate), dan metode drop plate. Metode
hitung cawan termasuk metode yang digunakan untuk penanaman bakteri dengan
menggunakan media padat, yang prinsip kerjanya berdasarkan pembuatan seri
pengenceran (homogenisasi) sampel dengan kelipatan.Hasil perhitungan dengan
menggunakan hitung cawan ini dalam bentuk Colony forming unit (CFU).CFU ini
menunjukkan jumlah koloni yang tumbuh tiap gram atau mililiter sampel yang
dihitung dari jumlah cawan, faktor pengenceran, dan volume yang
digunakan.(Endang, 2020)
Prinsip dari metode hitungan cawan adalah menumbuhkan sel-sel mikroba
yang masih hidup pada suatu atau beberapa media sehingga sel tersebut
berkembang biak dan membentuk koloni-koloni yang dapat dilihat langsung
dengan mata telanjang tanpa menggunakan mikroskop, dan koloni dapat dihitung
menggunakan Colony Counter. (Merisa, 2015)
Metode kuantitatif yang digunakan untuk mengetahui jumlah mikroba yang
ada pada suatu sampel, umumnya dikenal dengan Angka Lempeng Total (ALT).
Uji Angka Lempeng Total (ALT) dan lebih tepatnya ALT aerob mesofil atau
anerob mesofil menggunakan menggunakan media padat dengan hasil akhir
berupa koloni yang dapat diamati secara visual berupa angka dalam coloni (cfu)
per mL/gram atau koloni/100 mL. (Rahmadhani, 2020)
Angka Lempeng Total adalah angka yang menunjukkan jumlah bakteri
mesofil dalam tiap-tiap 1 ml atau 1 gram sampel makanan yang diperiksa. Prinsip
dari ALT adalah menghitung pertumbuhan koloni bakteri aerob mesofil setelah
155
sampel makanan ditanam pada lempeng media yang sesuai dengan cara tuang
kemudian dieramkan selama 24-48 jam pada suhu 35-37°C. Uji angka lempeng
total merupakan metode yang umum digunakan untuk menghitung adanya bakteri
yang terhadap dalam sediaan yang diperiksa. (Sri, 2019)
Menurut MA PPOM 61/MIK/06 prinsip pengujian Angka Lempeng Total
yaitu pertumbuhan koloni bakteri aerob mesofil setelah cuplikan diinokulasi pada
media lempeng agar dengan cara tuang dan dinkubasi pada suhu yang sesuai. Pada
pengujian Angka Lempeng Total digunakan PDF (Pepton Dulution Fluid) sebagai
pengencer sampel dan menggunakan PCA (Plate Count Agar) sebagai media
padat. (Rahmadhani, 2020)
Beberapa hal yang perlu diperhatikan ketika menghitung jumlah koloni
bakteri dari sampel yaitu :
1. Cawan yang dipilih dan dihitung adalah yang mengandung jumlah koloni
antara 30-300 CFU/g. Jika jumlah koloni tiap sampel lebih dari 300 CFU/g
dikategorikan sebagai terlalu banyak untuk dihitung (TBUD) atau too
numerous to count (TNTC).
2. Beberapa koloni yang bergabung menjadi satu atau satu deret rantai koloni
yang terikat sebagai suatu garis dihitung sebagai satu koloni.
3. Koloni yang tumbuh menutup lebih besar dari setengan luas cawan petri,
tidak disebut sebagai koloni melainkan spreader.
4. Jika hasil perbandingan jumlah bakteri dari hasil pengenceran berturut-turut
antara pengenceran yang lebih besar dengan pengenceran sebelumnya adalah
< 2 maka hasilnya dirata-rata. Namun jika hasilnya ≥ 2, maka menggunakan
156
jumlah mikroba dari hasil pengenceran sebelumnya (pengenceran terkecil).
(Endang, 2020)
Menurut Nur Hidayati, persyaratan-persyaratan perhitungan koloni yaitu :
1. Jumlah koloni per cawan petri adalah 25-250
2. Perbandingan antara pengenceran yang lebih tinggi dengan yang lebih
rendah, jika < 2 maka di rata-rata, jika ≥ 2 maka data yang digunakan adalah
data pengenceran yang lebih rendah.
3. Tidak spreader
4. Jika jumlah koloni tidak ada yang memenuhi syarat maka digunakan yang
mendekati 250
5. Jika ada ulangan maka hasilnya dirata-rata terlebih dahulu
6. Penulisan laporan menggunakan satu angka didepan koma dan satu angaka
decimal dibelakang koma.
7. Jika decimal dibawah lima maka dibulatkan ke bawah dan jika lebih besar
atau sama dengan lima maka dibulatkan keatas (Nur Hidayati, 2018).
157
B. Uraian Bahan
1. Aluminium foil (Dirjen POM, 1979:639)
Nama resmi : ALUMINILL
Nama lain : Aluminium
Rumus molekul : Al
Berat molekul : 26,92
Struktur molekul : -
Pemerian : Warna keperakan, tidak berbau, tidak berasa.
Kegunaan : Sebagai reaktan dalam reaksi kombinasi
2. Aquadest (FI III, 1979, Hal: 96)
Nama Lain : Aquadest, air suling
RM/BM : H2O/18,02
Rumus Struktur :
Kegunaan : Zat pelarut
3. Alkohol (FI III, 1979, Hal: 65)
Nama resmi : AETHANOLUM
158
Nama lain : Etanol
Berat molekul : 46,07
Rumus molekul : C2H6O
Struktur molekul :
Pemerian : Cairan tidakberwarna, jernih,mudah menguap,
mudah bergerak,baukhas, rasa panas, mudah terbakar
dengan memberikan warna biru yang tidak berasap.
Kelarutan : Sangat mudah larut dalam air, kloroform p,dan eter p.
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik, terlindung dari cahaya,
ditempat sejuk, jauh dari api.
Kegunaan : Zat tambahan.
159
C. Uraian Bakteri
1. Bacillus sp (Fibi Puspita, 2017)
a. Klasifikasi
Kingdom : Bacteria
Divisi : Procaryotae
Kelas : Schizomycetes
Bangsa : Eubacteriales
Suku : Bacillacae
Marga : Bacillus
Jenis : Bacillus sp.
b. Morfologi
Bacillus spmerupakan bakteri gram positf dengan bentuk batang
pendek hingga batang tunggal dengan penataan tunggal. Waran
koloninya putih hingga kekuningan, tepinya tidak rata, permukaannya
kasar dan tidak berlendir.
2. Staphylococcus aureus (Syahrurachman, et al. 2011)
a. Klasifikasi
Kingdom : Bacteria
Domain : Eubacteria
160
b. Morfologi
Bakteri gram positif bulat berdiameter 0,7 – 1,2 mm, tersusun dalam
kelompok – kelompok yang tidak teratur seperti buah anggur, fakultatif
anaerob, tidak membentuk spora dan tidak bergerak.
161
D. Uraian Medium
pertumbuhan mikroba
162
BAB III
METODE KERJA
A. Alat
Adapun alat yang digunakan pada praktikum kali ini adalah: buku, Colony
Counter, pensil.
B. Bahan
Adapun bahan yang digunakan pada praktikum kali ini adalah: koloni
bakteri dalam cawan.
C. Cara Kerja
1. Letakkan isolate bakteri dalam cawan di atas Colony counter.
2. Hitung jumlah koloni yang terdapat dalam satu cawan.
3. Tandai koloni yang sudah dihitung supaya tidak terhitung ulang.
a. Metode hitung cawan
1. Siapakan kultur cair bakteri uji berumur 1×24 jam.
2. Homogenkan dulu sampel mikroba yang akan dihitung.
3. Lakukan pengenceran terhadap sampel. Caranya: pengenceran 10-
1diperoleh dengan memasukkan 1 ml sampel ke dalam 9 ml air pepton/
aquades steril. Pengenceran 10-2 diperoleh memasukkan 1 ml sampel dari
pengenceran 10-1 ke dalam 9 ml air pepton/ aquades steril. Pengenceran
10-3diperoleh dengan memasukkan 1 ml sampel dari pengenceran 10-3 ke
dalam 9 ml air pepton , dan seterusnya pengenceran dilakukan tergantung
dari kekeruhan sampel.
163
4. Inokulasikan sebanyak 0,1 ml hasil pengenceran kepermukaan media NA
dengan cara taburan, kemudian ratakan dengan cara memutar-mutar cawan
diatas meja. Inokulasikan ini dapat pula dilakukan dengan metode tuang.
164
BAB IV
A. Tabel Pengamatan
No Nama Bakteri Gambar Jumlah
1. Staphylococcus Aureus 59 Koloni
2. Bacillus Sp. 9 Koloni
B. Pembahasan
Bakteri merupakan mikroorganisme bersel tunggal dengan ukuran panjang
0,5-10 µ dan lebar 0,5-2,5 µ. Karakteristik bakteri dilihat dari bentuknya, seperti
bulat (cocci), batang (spirilli), koma (vibrios). Tambahan struktur bakteri yang
terpenting diketahui cambuk (flagella), kapsul (capsule) dan endospora
(endospore). Flagella merupakan struktur tambahan di luar sel yang berbentuk
cabuk halus yang tidak terlihat di bawah miskroskop kecuali menggunakan teknik
perwarnaan khusus.Susunan flagella pada sel yang untuk diidentifikasi dan
165
dikelompokkan menjadi dua golongan, yaitu flagella peitrichous dan flagella
polar.
Koloni bakteri merupakan sekumpulan dari bakteri-bakteri yang sejenis yang
mengelompok menjadi satu dan membentuk suatu koloni-koloni. Untuk
mengetahui pertumbuhan suatu bakteri dapat dilakukan dengan menghitung
jumlah koloni bakteri. Penghitungan suatu koloni dapat dilakukan dengan metode
pour plate. Mengingat jumlah koloni bisa mencapai lebih dari 300 koloni, maka
diperlukan alat bantu yang biasa disebut Colony Counter untuk mempermudah
penghitungan jumlah koloni bakteri.
Perhitungan bakteri adalah suatu cara yang digunakan untuk menghitung
jumlah colony bakteri yang tumbuh pada suatu media pembiakan. Perhitungan
jumlah bakteri dapat dilakukan dengan berbagai cara misalnya perhitungan
dengan metode MPN, perhitungan dengan pengecatan negatif dan perhitungan
dengan metode hitung cawan. Jumlah bakteri dapat juga dihitung dengan
menggunakan haemacytometeratau petroff hauseser cunter. Satuan yang
digunakan dalam perhitungan adalah CFU/mL atau CFU/gram.
Adapun alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah buku, colony
counter dan pensil.Adapun bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah
koloni bakteri dalam cawan.
Adapun cara kerja pada praktikum kali ini yaitu, letakkan isolat bakteri dalam
cawan di atas colony counter, hitung jumlah koloni yang terdapat dalam satu
cawan, tandai koloni yang sudah dihitung supaya tidak terhitung ulang. Metode
hitung cawan, siapakan kultur cair bakteri uji berumur 1×24 jam, homogenkan
166
dulu sampel mikroba yang akan dihitung, lakukan pengenceran terhadap sampel,
caranya: pengenceran 10-1 diperoleh dengan memasukkan 1 mL sampel ke dalam
9 mL air pepton/ aquades steril, pengenceran 10-2 diperoleh memasukkan 1 mL
sampel dari pengenceran 10-1 ke dalam 9 mL air pepton/ aquades steril,
pengenceran 10-3 diperoleh dengan memasukkan 1 mL sampel dari pengenceran
10-3 ke dalam 9 mL air pepton, dan seterusnya pengenceran dilakukan tergantung
dari kekeruhan sampel, inokulasikan sebanyak 0,1 mL hasil pengenceran
kepermukaan media NA dengan cara taburan, kemudian ratakan dengan cara
memutar-mutar cawan diatas meja, inokulasikan ini dapat pula dilakukan dengan
metode tuang.
Pada hasil pengamatan morfologi koloni bakteri, didapatkan koloni bakteri
berbentuk bulat dengan tepi utuh yang mendominasi namun ada juga beberapa
koloni bakteri dengan tepi bergerigi, warna beragam yaitu putih, kuning, dan
merah serta elevansi tumbuh dipermukaan. Morfologi koloni bakteri perlu diamati
untuk mempermudah dalam proses identifikasi bakteri karena sifatsifat koloni
bakteri dapat menentukan jenis bakteri tersebut. Koloni sel bakteri merupakan
sekelompok sel yang dapat dilihat secara langsung dengan mata. Koloni bakteri
dapat berbentuk bulat, tak beraturan dengan permukaan cembung, cekung atau
datar serta tepi koloni rata atau bergelombang, Berdasarkan hasil
penelitianmenyatakan dengan melakukan pengamatan morfologi bakteri akan
memudahkan dalam mengidentifikasi bakteri misalnya bakteri Bacillus sp. koloni
muncul di atas permukaan media Nutrient Agar (NA) dengan warna koloni
kuning, krem atau putih kusam, dan merah kecoklatan, bakteri Staphylococcus sp.
167
koloni muncul di atas permukaan media NA dengan koloni berwarna putih dan
permukaan koloni mengkilat. Jumlah koloni yang diamati terdapat 59 jumlah
koloni bakteri.
168
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
perhitungan mikroba dapat dilakukan secara langsung maupun tidak
langsung.Perhitungan jumlah bakteri secara langsung digunakan untuk
menentukan jumlah bakteri keseluruhan baik yang mati maupun yang
hidup.Sedangkan perhitungan bakteri secara tidak langsung digunakan untuk
menentukan jumlah bakteri yang hidup saja.Dalam praktikum ini jumlah koloni
dari bakteri Staphylococcus aureus yaitu berjumlah 59 koloni.Sedangkan jumlah
koloni dari bakteri Bacillus sp. yaitu berjumlah 9 koloni.
B. Saran
1. Laboratorium
Diharapkan agar alat-alat yang ada di laboratorium mikrobiologi lebih
dilengkapi lagi, dan untuk alat yang sudah rusak sebaiknya diperbaiki/diganti.
1. Asisten
Untuk asisten secara keseluruhan cara penjelaskannya sudah bagus, tetapi
untuk praktikum online sebaiknya menggunakan zoom premium agar yang
terkendala oleh jaringan tidak kesusahan untuk join di zoom dan kami juga
bisa mengikuti praktikum hingga selesai.
169
DAFTAR PUSTAKA
Arya Bondan Permadi, Hj. Her Gumiwang Ariswati, Triwiyanto. 2015. Inkubasi
Bakteri Dilengkapi Dengan Colony Counter (Inkubator Bakteri). Fakultas
Teknik Elektromedik : Politeknik Kesehatan Surabaya.
Endang Soesetyaningsih, Azizah. 2020. Akurasi Perhitungan Bakteri pada Daging

Sapi Menggunakan Metode Hitung Cawan (Calculation Accuracy of
Bacterical in Beef Meat Using Total Plate Count Method).Vol. 8 (3).Hal : 75-
79.
Erdo Banu Wicaksono, Hardianto, Arief Muliawan. 2019. Rancang Bangun

Penghitung Jumlah Koloni Bakteri Berbasis Arduino Uno. Jurnal Teknika.
Vol. 13 (2).Hal. 123 – 128
Journal
Fifi Puspita,Muhammad Ali,Ridho Pratama. 2017. Isolasi dan Karakterisasi

Morfologi dan Fisiologi Bakteri Bacillus sp. Endofitik dari Tanaman Kelapa
Sawit (Elaeis guineensis Jacq). Jurnal Agrotek. Vol. 6 (2): 44-49.
Harti, Agnes Sri. 2015. Mikrobiologi Kesehatan. CVAndi Offset : Yogyakarta
Kristiandi, Kiki, Sanya Anda Lusiana, Rizky Nisfi Ramdhini. 2021. Teknologi
Fermentasi : Yayasan Kita Menulis
Merisa Yunita, Yusuf Hendrawan, Rini Yulianingsih. 2015. Analisis Kuantitatif

Mikrobiologi Pada Makanan Penerbangan (Aerofood ACS) Garuda
Indonesia Berdasarkan TPC (Total Plate Count) Dengan Metode Pour Plate.
Jurnal Keteknikan Pertanian Tropis dan Biosistem.Vol. 3 (3).Hal.273-248.
Michelle V. Holderman, Edwin de Queljoe, Sendy B. Rondonuwu.

2017.Identifikasi Bakteri Pada Pegangan Eskalator Di Salah Satu Pusat
Perbelanjaan Di Kota Manado. Jurnal Ilmiah Sains. Vol. 17 (1). Hal 13-18.
Nur Hidayati, Irene Meitiniarti, Neti Yuliana. 2018. Mikroorganisme dan

Manfaatnya. UB Press : Malang.
Rahmadhani,Indrie,Wahyuni. 2020. Dasar-Dasar Praktikum Mikrobiologi .Jawa

Tengah: CV Pena Persada.
Ratih Dewanti. 2021. Mikrobiologi Keamanan Pangan. PT IPB Press : Bogor.
Sri Sundari, Fadhliani. 2019. Uji Angka Lempeng Total (ALT) pada Sediaan
Kosmetik Lotion X di BBPOM Medan. Jurnal Biologica Samudra.Vol.1
(1).Hal : 25-33
Syahrurachman, et al. 2011.Buku Ajar Mikrobiologi Kedokteran.Staf Pengajar
Fakultas Kedokteran Univesitas Indonesia.Edisi revisi.Jakarta : Binarupa
Aksara.
LAMPIRAN
A. Skema kerja
Pengenceran
- Disiapkan alat dan bahan
- Disiapkan kultur bakteri
- Dihomogenkan sampel mikroba
- Disiapkan sampel
- Disiapkan Diukur 1 mL sampel
pada tabung reaksi
- Diulangi hingga tabung reaksi
kelima
- Diratakan
Hasil pengenceran
Perhitungan koloni bakteri
- Diletakkan isolate cawan diatas
colony counter
- Dihitung jumlah koloni
- Ditandai koloni yang sudah
dihitung
Koloni bakteri telah dihitung

B. Perhitungan
23
1) NA = 1000 𝑥 6 𝑥 20 𝑚𝐿 = 2,76 𝑔𝑟𝑎𝑚
1 1
(150 𝑥 −2)+(25 𝑥 −3)
10 10
2) Perhitungan ALT = 2
(150 𝑥 102)+(25 𝑥 103)
= 2
15000+25000
= 2
= 20.000
C. Gambar
LABORATORIUMMIKROBIOLOGI LABORATORIUM MIKROBIOLOGI

UNIVERSITAS MEGAREZKY UNIVERSITAS MEGAREZKY
Ket :Colony counter. Ket : Nyalakan lampunya.

UNIVERSITAS MEGAREZKY UNIVERSITAS MEGAREZKY
Ket :Proses perhitungan bakteri. Ket :Sampel koloni mikroba.

PERCOBAAN VIII
UJI SENSITIVITAS MIKROBA TERHADAP ANTIBIOTIK
KELOMPOK II

KELAS B/20
ASISTEN: RAHMATIA E. AMAN T.

FAKULTAS FARMASI
MAKASSAR
2021
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
dan mengetahui baik buruknya makanan atau obat (Haeria, 2017).
dalam bentuk sel tunggal, multisel, maupun aselular seperti bakteri, mikrofungi,
mikro aseluler sehingga sering dikaji dalam ilmu mikrobiologi meski pun tidak
ilmu yang lain dalam aplikasinya di bidang farmasi, kedokteran, Teknik kimia,
arkeologi, pertanian, gizi dan kesehatan, serta pangan (Fidia, 2016).
Bakteri mempunyai morfologi, struktur dan sifat-sifat yang khas. Bakteri
merupakan mikroorganisme yang berukuran mikroskopik. Selain mikroskopik,
bakteri juga hampir tidak berwarna atau transparan dan kontras dengan air.
Sehingga melihat dan mengamati bakteri dalam kedaan hidup sangat sulit. Untuk
mengatasi hal tersebut maka dikembangkan suatu teknik pewarnaan sel bakteri. Ini
merupakan salah satu cara yang paling utama dalam penelitian-penelitian
170
mikrobiologi. Hal itu untuk mempermudah proses identifikasi bakteri (Meganada
dkk, 2017).
Antibiotik merupakan bahan kimiawi yang dihasilkan oleh organisme seperti
bakteri dan jamur, yang dapat mengganggu mikroorganisme lain. Biasanya bahan
ini dapat membunuh bakteri (bakterisidal) atau menghambat pertumbuhan bakteri
(bakteriostatik) atau mikroorganisme lain. Beberapa antibiotik bersifat aktif
terhadap beberapa spesies bakteri (berspektrum luas) sedangkan antibiotik lain
bersifat lebih spesifik terhadap spesies bakteri tertentu (Sudigdoadi, 2015).
Antibiotik merupakan golongan obat yang digunakan untuk mengobati
penyakit infeksi akibat bakteri. Penggunaan antibiotik yang tidak tepat akan
berdampak besar terhadap terjadinya resistansi. Mekanisme resistansi antibiotik
adalah terhambatnya kemampuan antibiotik untuk mencapai tempat kerjanya atau
menembus membran luar. Munculnya resistansi pada satu atau beberapa jenis
antibiotik tertentu akan berpengaruh terhadap pola pengobatan. Negara-negara
yang tidak memiliki pedoman pengobatan standar cenderung menggunakan secara
berlebihan. Selain itu, penggunaan antibiotik tanpa resep dari dokter juga menjadi
faktor yang turut memengaruhi resistensi antibiotik (Rachmawati, dkk. 2020).
Penggunaan antibiotik memiliki prinsip-prinsip yang harus dilakukan sebagai
pedoman dalam penggunaanya. Prinsip tersebut antara lain pengunaan antibiotik
bijak, terapi empiris dan definitif, profilaksis bedah dan kombinasi (Sudigdoadi,
2015)
171
B. Maksud Percobaan
1. Untuk mengetahui sensitivitas mikrobia terhadap antibiotik.
2. Untuk mengetahui sensitif atau resisten terhadap antibiotik yang diujikan.
C. Tujuan Percobaan
1. Mahasiswa mampu melakukan uji sensitifitas mikrobia terhadap antibiotik.
2. Mahasiswa mampu menentukan mikrobia uji termasuk sensitif atau resisten
terhadap antibiotik yang diujikan.
1. Mengetahui cara melakukan uji sensitifitas mikrobia terhadap antibiotik.
2. Mengetahui cara menentukan mikrobia uji termasuk sensitif atau resisten
terhadap antibiotik yang diujikan.
172
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Teori Umum
Mikrobiologi adalah ilmu yang mempelajari semua makhluk mikroskopis
dalam bentuk sel tunggal, multiseluler, maupun seluler seperti bakteri, mikrofungi,
kapang, mikroalga, protozoa dan archaea. Selain itu virus merupakan mahkluk
mikro seluler sehingga sering dikaji dalam ilmu mikrobiologi meskipun tidak dapat
sepenuhnya dikatakan sebagai mahkluk hidup. Mikrobiologi dimulai sejak
ditemukan mikroskop dan berkembang menjadi ilmu yang multidisipliner. Dalam
penerapannya dimasa kini, mikrobiologi tidak dapat dipisahkan dengan ilmu
lainnya dalam aplikasinya dibidang farmasi, kedokteran, teknik kimia, arkeologi,
pertanian, gizi, dan kesehatan, serta pangan (Fidia, 2016).
sehingga untuk mengamatinya diperlukan alat bantu yang disebut mikroskop.
Bakteri adalah suatu organisme yang jumlahnya paling banyak dan tersebar
luas dibandingkan dengan organisme lainnya di bumi. Bakteri umumnya
merupakan organisme uniseluler (bersel tunggal), prokariota/prokariot, tidak
mengandung klorofil, serta berukuran mikroskopik (sangat kecil). Bakteri tidak
hanya merugikan bagi manusia, ada juga yang memiliki manfaat, antara lain :
Escherichia coli, Acetobacter xylinum, Streptococcus termophylus (Arya, 2015).
173
Pengertian lain dari bakteri yaitu salah satu golongan mikroorganisme
prokariotik (bersel tunggal) yang hidup berkoloni dan tidak mempunyai selubung
inti namun mampu hidup dimana saja. Menurut klasifikasinya bakteri dibagi
menjadi 2 yaitu bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif. Beberapa bakteri
Gram positif dan bakteri Gram negatif merupakan flora normal pada tubuh
manusia (Michelle, 2017).
Kata antibiotik berasal dari bahasa yunani yaitu “anti” artinya melawan dan
“bios” artinya hidup, sehingga antibiotik adalah zat atau senyawa yang dapat
membunuh atau menghambat pertumbuhan dari bakteri (Eko, 2018).
Antibiotik ditemukan pada tahun 1928 oleh Sir Alexander Fleming (Fleming,
1929). Sejak ditemukannya antibiotik sebagai agen antimikroba, antibiotik dikenal
telah mmenyelamatkan banyaknya nyawa terutama pada penggunaannya selama
perang dunia II (Sengupta, 2013; Wright, 2014). Namun pada tahun 2013 Central
for Disease Control and Prevention (CDC) mengemumkan bahwa saat ini manusia
telah memasuki ”post-antibiotik era” dan World Health Organization (WHO) pada
tahun 2014 memperingatkan bahwa krisis resistensi antibiotik telah menjadi
ancaman kesehatan serius di dunia (WHO, 2011; Michel, 2014; Spellberg, 2014)
Pemakaian antibiotik sebagai terapi dasar dalam penyakit infeksi harus
dilakukan secara bijak dan rasional sehingga terhindar dari terjadinya peningkatan
resistensi antibiotik dan efek samping yang tidak diinginkan. Hal ini menyebabkan
penyakit infeksi akan semakin sulit diobati (Ratih, 2019).
Antibiotik bisa juga diartikan sebagai substansi kimia yang diproduksi oleh
berbagai spesies mikroorganisme (bakteri, fungi, aktinomicetes), mampu menekan
174
pertumbuhan mikroba lain dan mungkin membunuhnya. Ada berpuluh-puluh
antibiotik yang berguna untuk terapi penyakit infeksi. Antibiotik ini berbeda satu
sama lain dalam beberapa hal seperti sifat kimia, fisika, farmakologis, spektrum
antibakteri dan mekanisme kegiatannya (Natalia, 2020).
Antibiotik sebagai obat untuk menanggulangi penyakit infeksi,
penggunaannya harus rasional, tepat dan aman. Penggunaan antibiotik yang tidak
rasional akan menimbulkan dampak negatif, seperti terjadinya kekebalan
mikroorganisme terhadap beberapa antibiotik, meningkatnya efek samping obat
dan bahkan berdampak kematian. Penggunaan antibiotik dikatakan tepat bila efek
terapi mencapai maksimal sementara efek toksik yang berhubungan dengan obat
menjadi minimum, serta perkembangan antibiotik resisten seminimal mungkin
(Rini, 2017).
Salah satu contoh antibiotik adalah amoksisilin. Amoksisilin merupakan suatu
antibiotik semisintetik penicillin yang memiliki cincin beta-laktam memiliki
aktivitas sebagai antibakteri yang disebabkan oleh mikroorganisme yang rentan.
Amoksisilin termasuk antibiotik spektrum luas dan memiliki bioavailablitas oral
yang tinggi. Antibiotik amoksisilin ini juga dapat digunakan pada terapi
pneumonia dan penyakit lain termasuk infeksi bakteri pada telinga, tenggorokan,
sinus, kulit, saluran kemih, abdomen dan darah (Cindy, 2018).
Dampak negatif akibat penggunaan antibiotik yang tidak rasional,
penggunaan antibiotik yang terlalu sering, penggunaan antibiotik baru yang
berlebihan, dan penggunaan antibiotik dalam jangka waktu yang lama ialah
timbulnya resistensi mikroorganisme terhadap berbagai antibiotik (multidrug-
175
resistance). Hal ini mengakibatkan pengobatan menjadi tidak efektif, peningkatan
morbiditas maupun mortalitas pasien, dan peningkatan biaya kesehatan (Rini,
2017).
Resistensi dapat diartikan sebagai tidak terhambatnya pertumbuhan
mikroorganisme, dalam hal ini bakteri dengan pemberian antibiotik secara sistemik
pada kadar hambat minimalnya atau dosis normal yang seharusnya. Jadi, resistensi
antibiotik adalah kemampuan mikroorganisme untuk bertahan terhadap efek
antibiotik, diantaranya dengan memperoleh gen resisten melalui mutasi atau
perubahan / pertukaran plasmid (transfer gen) antar spesies bakteri yang sama,
contohnya methiciline-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) atau vancomycin-
resistant Staphylococcus aureus (VRSA) (Rini, 2017).
Efektivitas adalah pemberian antibiotik yang dapat mengobati penyakit yang
disebabkan mikroba seperti demam tifoid yang dilihat dari dari catatan medik
dokter yang dinyatakan sembuh atau membaik (Aan, 2016).
Sensitivitas adalah suatu keadaan dimana mikroba sangat peka terhadap
antibiotik atau sensitivitas adalah suatu kepekaan suatu antibiotik yang masih baik
untuk memberikan daya hambat terhadap mikroba (Artati, 2018).
Ada beberapa faktor penyebab terjadinya resistensi bakteri, yaitu faktor
primer adalah penggunaan agen antibiotik, munculnya strain bakteri yang resisten
terhadap antibiotik, dan penyebaran strain tersebut ke bakteri lain. Selain itu,
adanya faktor penjamu seperti lokasi infeksi, kemampuan antibiotik mencapai
organ target infeksi sesuai dengan konsentrasi terapi, flora normal pasien, dan
ekologi lingkungan merupakan faktor-faktor yang perlu diperhatikan (Rini, 2017).
176
Resistensi dapat dibagi menjadi tiga tipe yaitu resistensi non genetik, resistensi
genetik dan resistensi silang. Resistensi non genetik terdapat pada bakteri dalam
keadaan inaktif atau istirahat, resistensi genetik merupakan mutasi gen yang
bersifat spontan tanpa dipengaruhi antibakteri, sedangkan resistensi silang adalah
resistensi bakteri terhadap suatu antibiotika tertentu dan antibiotika lain yang
mempunyai struktur hampir sama (Suharsa, 2015).
Mekanisme kerja yang dilakukan suatu antibiotik dalam menekan
pertumbuhan bakteri melalui bermacam- macam cara, tetapi memiliki tujuan yang
sama yaitu menghambat perkembangan bakteri. Berdasarkan mekanisme kerjanya
dalam menghambat proses biokimia di dalam organisme antibiotik dibedakan
menjadi lima yaitu antibiotik penghambat reaksi kimia dinding sel bakteri seperti
penicillin dan sefalosporin, antibiotik penghambat rekasi kimia asam nukleat sel
mikroba seperti rifampisin, antibiotik penghambat reaksi kimia protein seperti
tetrasiklin,dan kloramfenikol, antibiotik penghambat fungsi membrane sel seperti
ionimycin dan antibiotik penghambat sel mikroba seperti trimetophrim (Prapati,
2012).
Antibiotik dapat digolongkan atau diklasifikasikan berdasarkan asal atau
sumbernya, struktur kimianya, tempat kerjanya dan spectrum kerjanya.
1. Antibiotik alamiah merupakan antibiotik yang berasal dari bahan alamiah
seperti tanaman, hewan maupun mikroorganisme lainnya.
2. Antibiotik semisintik merupakan antibiotik yang berasal dari hasil sintesis
bahan dasarnya yang berasal dari bahan-bahan alamiah (biosintesis), misalnya
177
antibiotik yang merupakan senyawa turunan dari antibiotik alamiah seperti
penicillin-V
3. Antibiotik sintesik (murni) merupakan antibiotik yang berasal dari bahan
dasar yang awalnya tidak berkhasiat, setelah disintesis maka didapat senyawa
dengan khasiat farmakologis sebagai antibiotik, misalnya antibiotik yang
merupakan struktur analog antibiotik alamiah maupun turunanya seperti
Kloramfenikol (Natalia, 2020).
Adapun klasifikasi antibiotika secara umum dapat dibagi sebgai berikut.
a. Berdasarkan sifat toksisitas selektif atau aktivitas antibakterial
1. Antibiotika dengan aktivitas bakteriostatik, yang bersifat menghambat
pertumbuhan mikroba melalui prevensi multiplikasi aktif bakteri pada
dosis yang dianjurkan. Kadar minimal yang diperlukan umtuk
menghambat pertumbuhan mikroba disebut dengan kadar hambat minimal
(KHM)
2. Antibiotika dengan aktivitas bakterisidal, yang bersifat membunuh
mikroba pada dosis yang di anjurkan. Kadar minimal yang diperlukan
untuk membunuh mikroba disebut dengan kadar bunuh minimal (KBM).
b. Berdasarkan perbedaan sifat spektrumnya
1. Antibiotika berspektrum sempit, misalnya penisilin G yang bersifat aktif
terutama terhadap bakteri gram-positif dan tidak peka terhadap bakteri
gram-negatif.
2. Antibiotika berspektrum luas, dengan aktivitas antimikroba yang efektif
terhadap kuman gram-positif dan gram-negatif. Misalnya tetrasiklin yang
178
bersifat aktif terhadap beberapa bakteri gram-positif maupun gram-
negatif, Rickettsia dan Chlamydia.
Batas antara kedua sifat spektrum ini terkadang tidak jelas dan efektivitas
klinis antibiotika tidak berbanding lurus dengan sifat spektrumnya.
Antibiotika dengan berspektrum luas cenderung menimbulkan
superinfeksi oleh kuman atau jamur yang resisten. Di lain pihak, pada
spesies yang belum diketahui, diperlukan antimikroba yang berspektrum
luas sementara menunggu hasil pemeriksaan mikrobiologis.
c. Berdasarkan struktur kimianya
1. Golongan sulfonamid: sulfadiazine.
2. Golongan beta-laktam : penisilin, sefalosporin, dan lainnya.
3. Golongan tetrasiklin.
4. Golongan aminoglikosida : gentamisin.
5. Golongan makrolid : eritromisin.
6. Golongan polipeptida: vankomisin.
7. Golongan fluorokuinolon: enrofloksasin.
8. Golongan linkosamid: linkomisin.
9. Lainnya: tuberkilostatika, leprostatika, antikanker, antivirus, interferon,
kloramfenikol, nitrofurantoin.
d. Berdasarkan mekanisme kerjanya
1. Menghambat sintesis dinding sel : vankomisin, golongan beta-laktam
2. Menghambat sintesis protein : aminoglikosida, eritromisin, klindamisin,
tetrasiklin.
179
3. Meningkatkan permeabilitas membrane sitoplasma: polimiksin B,
amfoterisin B.
4. Menghambat sintesis asam nukleat: kuinolon.
5. Menghambat metabolism sel: sulfonamid (Soegeng, 2016).
Ada pun perhitungan zona hambat yaitu :
1. Amoxicillin
(30 – 6 mm) + (35 - 6 mm) + (65 – 66 mm)

3
= 24 mm + 29 mm + 59 mm
3
= 112 mm
3
= 37,33 mm
2. Cefadroxil
(45 – 6 mm) + (45 – 6 mm) + (105 + 6 mm)

3
= 39 mm + 39 mm +_ 39 mm
3
= 177 mm
3
= 59 mm
3. Eritromisin
(40 – 6 mm) + (40 – 6 mm) + (40 – 6 mm)

3
180
= 34 mm + 34 mm + 34 mm
3
= 102 mm
3
= 34 mm
181
B. Uraian Bahan
RM/BM : H2O/18,02
Rumus Struktur :
2. Amoksisilin (FI IV,1995, Hal: 95)
Nama Resmi : AMOXICILLIN
Nama lain : Amoksisilin
RM/BM : C16H19N3O5S/365,4
Rumus Struktur :
Pemerian : Serbuk putih dan hampir putih, sangat higroskopik
182
Kelarutan : Sangat mudah larut dalam air, agak sukar larut dalam
etanol, sangat sukar larut dalam aseton, praktis, tidak
larut dalam kloroform dan eter
Kegunaan : Sebagai antibiotik
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik dan terlindung dari cahaya
Farmakodinamik : Baik amoxicillin dan kloksalilin adalah derivat dan
penisilin dan bersifat bakterisidal. Obat- obat ini
menganggu sintetis dinding sel bakteri, sehingga
menyebabkan sel menjadi lisis. Amoxicillin dapat
diproduksi dengan atau tanpa asam klavulanat, suatu
agen yang mencegah pemecahan amoxicillin dengan
menurunkan resistensi terhadap obat antibakterial.
Penambahan asam klavulanat menambah efek
amoxicillin. Preparat amoxicillin klavunalat
(augmentin) dan amokxilin trihidrat (Amoxil)
mempunyai farmakokinetik dan farkodinamik yang
serupa dan demikian pula dengan efek samping dan
reaksi merugikannnya.
Farmakokinetik : Amoxicillin diabsopsi dengan baik melalui saluran
gastrointestinal, dimana kloksasilin obat ini mempunyai
waktu paruh yang singkat. Tujuh puluh persen dari
amokxilin diekskresikan ke dalam urin, kloksasilin di
ekskresikan ke dalam empedu dan urin.
183
Interaksi : Meningkatnya risiko perdarahan, jika digunakan dengan
obat pengencer darah. Meningkatnya risiko alergi, jika
digunakan dengan allopurinol.
Indikasi : Infeksi saluran kemih, otitsmedia, sinusitis, bronkitis,
kronis, salmonelosis, gonore, profilaksis endokardia dan
terapi tambahan pada meningitis listeria.
Efek samping : Mual, diare ruam, kadang-kadang terjadi kolitis
Cara kerja obat : Amoxicillin adalah senyawa Penisilina semisintetik
dengan aktivitas antibakteri spektrum luas yang bersifat
bakterisid, efektif terhadap sebagian besar bakteri gram
positip dan beberapa gram negatip yang patogen.
Bakteri patogen yang sensitif terhadap Amoxicillin
antara lain : Staphylococci, Streptococci, Enterococci,
S. pneumoniae, N. gonorrhoeae, H influenzas, E. coli,
dan P. mirabiiis. Amoxicillin kurang efefktif terhadap
species Shigella dan bakteri penghasil beta laktamase.
Dosis antibiotic : oral dewasa 250-500 mg tiap 8 jam, infeksi saluran
nafas berat/berulang 3 gram tiap 12 jam, infeksi salura
kemih 3 gram diulang setelah 10-12 jam
3. Sefadroksil (ISO,2019, Vol. 52, Hal. 112)
Nama Resmi : CEFADROXIL
Nama lain : Cefat
184
RM/BM : C16H16N2O6S2/332
Rumus Struktur :
Pemerian : Serbuk hablur putih atau sisik mengkilap, tidak
berwarna kasar, tidak berbau, rasa agak asam dan pahit
kemudian manis.
Kelarutan :
Kegunaan : Sebagai antibiotik
Penyimpanan : dalam wadah tertutup rapat
Farmakodinamik : Cefadroxil mengandung gugus beta laknam, struktur
molekul yang yang berperan dalam fungsi bakterisidal
antibiotic tersebut. Gugus beta laknam bekerja dengan
mengabisi zat yang berfungsi dalam sintesis dinding
bakteri, yaitu penicillin- binding protein (PBP). Inhibisi
PBP akan menganggu fase transpeptidase pada proses
biosintetis peptidoglikan.
Farmakokinetik : Sefaleksin, sefradin dan sefadroksil diabsobsi dari usus
secara bervariasi. Setelah dosis oral 500 mg, kadar
serum 15- 20 mcg/ mL. Konsentrasi dalam urin biasanya
sangat tinggi, tetapi disebagian besar jaringan bervariasi
dan pada umumnya lebih bervariasi dari pada serum.
185
Interaksi : Cefadroxil yang dikonsumsi bersama dengan antibiotik
golongan bakteriostatik lain dapat menyebabkan efek
antagonis yang mengurangi efikasi obat. Contoh
antibiotik yang bersifat bakteriostatik adalah
eritromisin, tetrasiklin, chloramphenicol, dan
sulfonamide. Konsumsi bersama dengan kolestiramin
menyebabkan berkurangnya efek cefadroxil karena
bioavailabilitas yang berkurang.
Indikasi : Bakteri gram positif dan bakteri gram negatif.
Efek samping : Dari konsumsi cefadroxil dapat melibatkan berbagai
sistem, antara lain saluran pencernaan, disfungsi hepar,
genitalia, serta reaksi hipersensitivitas yang dapat
mengancam jiwa.
Cara kerja : Cefadroksil adalah antibiotika semisintetik Golongan
sefalosforin, Cefadroxil sendiri adalah jenis antibiotik
yang disebut juga dengan sefalosporin. Obat ini bekerja
dengan cara mengganggu kemampuan bakteri saat
membentuk dinding sel dari bakteri yang masuk ke
tubuh.
Kontra indikasi : Orang dengan riwayat hipersensitif terhadap cefadroxil
atau antibiotik golongan sefalosporin lain merupakan
kontraindikasi pemberian cefadroxil. [3,13,14].
4. Eritromisin (FI III,1979,Hal: 247)
186
Nama Resmi : ERYTHROMYCINUM
Nama lain : Eritromisina
RM/BM : C37H67NO13/18,02
Rumus Struktur :
Pemerian : Serbuk atau hablur, putih atau agak kekuningan, tidak
berbau atau hampir tidak berbau, rasa pahit, agak
higroskopik
Kelarutan : Larut dalam lebih kurang 1000 bagian air, larut dalam
etanol 95% P, dalam kloroform P dan dalam eter P.
Kegunaan : Sebagai antibiotikum
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik dan terlindung dari cahaya
Farmakodinamik : Eritromisin menekan sintesis protein bakteri. Mula kerja
dari preparat oral adalah 1 jam, waktu untuk mencapai
puncak adalah 4 jam, dan lama kerjanya adalah 6 jam.
Farmakokinetik : Preparat eritromisin oral diabsorpsi dengan baik melalui
saluran gastrointestinal. Obat ini tersedia untuk
pemberian intravena, tetapi harus diencerkan dalam 100
mL salin atau dekstrosa 5% dalam larutan air untuk
187
mencegah flebitis atau rasa terbakar pada tempat
suntikan.
Interaksi : Klindamisin dan linkomisin bersifat inkompatibel
dengan aminofilin, fenitoin (dilanti), barbiturate dan
ampisilin.
Indikasi : Sebagai alternatif untuk pasien yang alergi penisilin
untuk pengobatan enteritis kampilobakter, pneumonia,
penyakit Legionaire, sifilis, uretritis non gonokokus,
prostatitis kronik, akne vulgaris, dan profilaksis difetri
dan pertusis.
Efek Samping : Mual, muntah, nyeri perut, diare, urtikaria, ruam dan
reaksi alergi lainnya; gangguan pendengaran yang
reversibel pernah dilaporkan setelah pemberian dosis
besar; ikterus kolestatik dan gangguan jantung (aritmia
dan nyeri dada).
Cara Kerja : Bekerja dengan menembus membran sel bakteri dan
mengikat sub unit ribosom pada sel bakteri sehingga
menyebabkan bakteri mati.
Dosis Oral : Dewasa dan anak di atas 8 tahun, 250-500 mg tiap 6
jam atau 0,5-1 g tiap 12 jam (lihat keterangan di atas);
pada infeksi berat dapat dinaikkan sampai 4 g/hari.
Anak sampai 2 tahun, 125 mg tiap 6 jam; 2-8 tahun 250
mg tiap 6 jam. Untuk infeksi berat dosis dapat
188
digandakan. Akne: 250 mg dua kali sehari, kemudian
satu kali sehari setelah 1 bulan. Sifilis stadium awal, 500
mg 4 kali sehari selama 14 hari.Infus intravena: infeksi
berat pada dewasa dan anak, 50 mg/kg bb/hari secara
infus kontinu atau dosis terbagi tiap 6 jam; infeksi
ringan 25 mg/kg bb/hari bila pemberian per oral tidak
memungkinkan.
pertumbuhan mikroba
189
C. Uraian Bakteri
1. Klasifikasi Staphylococcus aureus (Syahrurachman, et al. 2011).
Domain : Bacteria
Kingdom : Eubacteria
Morfologi : Bakteri gram positif bulat berdiameter 0,7 – 1,2 mm,
tersusun dalam kelompok – kelompok yang tidak teratur
seperti buah anggur, fakultatif anaerob, tidak membentuk
spora dan tidak bergerak.
190
BAB III
METODE KERJA
A. Alat
Adapun alat yang digunakan dalam praktikum kali ini diantaranya yaitu alu,
bunsen, batang pengaduk, cawan petri, cawan porselin, Erlenmeyer 250 mL, gelas
ukur 100 mL, gelas kimia 100 mL, gelas arloji, kaki tiga, kawat kasa, korek,
lumpang, pinset, spoid, dan sendok tanduk.
B. Bahan
aquadest, amoxilin, benang godam, cefadroxil, eritromisin, kapas, kertas
perkamen, Natrium Agar dan paper dish.
C. Cara Kerja
1. Sterilisasi alat
a. Dibungkus semua alat-alat seperti cawan petri, gelas kimia, gelas ukur, dan
tabung reaksi dengan kertas lalu diikat dengan benang godam.
b. Dimasukkan semua alat-alat ke dalam oven dengan suhu 1750C selama 60
menit.
2. Pembuatan medium NA (Nutrien Agar)
a. Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan.
b. Ditimbang NA (Nutrien Agar) sebanyak 0,46 gram menggunakan
timbangan analitik.
191
c. Dilarutkan NA (Nutrien Agar) dengan aquadest sebanyak 20 ml ke dalam
Erlenmeyer.
d. Dipanaskan di atas bunsen kemudian diaduk dengan menggunakan batang
pengaduk sampai homogeny.
e. Diangkat medium NA (Nutrient Agar) kemudian ditutup dengan kapas.
f. Disterilisasi medium NA (Nutrien Agar) dan alat-alat lainnya kedalam
autoklaf dengan suhu 1210C selama 20 menit.
g. Diangkat medium NA (Nutrien Agar) lalu didinginkan kemudian
ditambahkan bakteri Staphylococcus Aureus dan diambil menggunakan
spoit 1 ml.
h. Dimasukkan kedalam cawan petri dan disterilkan didekat bunsen lalu
ditutup.
i. Diratakan dengan metode delapan.
3. Pemberian antibiotik Cefadroxil pada medium
a. Dimasukkan antibiotik ke dalam lumping lalu digerus sampai halus.
b. Dilarutkan aquades 50 ml dengan antibiotik Cefadroxil 1 gram.
c. Dicelupkan paper dish kedalam antibiotik Cefadroxil.
d. Di totol-totol paper dish pada gelas arloji sebanyak 5-7 kali lalu di letakkan
di bagian tengah medium.
e. Diinkubasi selama 1 x 24 jam.
4. Pemberian antibiotik Eritromisin pada medium
a. Dimasukkan antibiotik ke dalam lumpang lalu digerus sampai halus.
b. Dilarutkan aquades 50 ml dengan antibiotik Eritromisin 1 gram.
192
c. Dicelupkan paper dish kedalam antibiotik Eritromisin.
5. Pemberian antibiotik Amoxicillin pada medium
a. Dimasukkan antibiotik ke dalam lumpang lalu digerus sampai halus.
b. Dilarutkan aquades 50 ml dengan antibiotik Amoxicillin 1 gram.
c. Dicelupkan paper dish kedalam antibiotik Amoxicillin
193
BAB IV
A. Hasil Tabel pengamatan
NO GAMBAR KETERANGAN
1
Terdapat bercakan putih pada
cawan petri dan Dapat
menghambat mikroba
-bakteriosida
Sampel : Obat
Amoxisillin -bakterostatik
Bakteri : Staphylococcus
aureus
2
Terdapat zona bening pada
cawan perti dan dapat
membunuh mikroba.
-sensitif
Sampel : Obat Eritromisin
-bakteriosida dan
aureus bakteriostatik
3
Terdapat bercakan putih pada
cawan petri dan Dapat
menghambat mikroba
-sensitif
Sampel : Obat Cefadroxil

aureus
194
B. Pembahasan
Antibiotik merupakan tes yang digunakan untuk menguji kepekaan suatu
bakteri terhadap suatu antibiotik. Uji sensitivitas bertujuan untuk mengetahui
efektifitas dari suatu antibiotik. Hasil sensitivitas suatu bakteri terhadap antibiotik
ditentukan oleh diameter zona hambat yang terbentuk, semakin besar diameter
zona hambat yang terbentuk maka pertumbuhannya semakin terhambat sehingga
dibutuhkan standar acuan untuk menentukan apakah bakteri tersebut resisten atau
sensitive terhadap suatu antibiotik.
Adapun alat yang digunakan pada percobaan kali ini adalah : Cawan petri,
Bunsen, Kaki tiga, Kawat kasa, Gelas ukur 100 mL, Erlenmeyer 250 mL, Cawan
porselen, Gelas kimia 100 mL, Spoit 1 ml, Batang pengaduk, Gelas arloji, Korek,
Kertas perkamen, Pinset, Paper dish, lumpang dan alu.
Adapun bahan yang digunakan pada percobaan kali ini adalah medium
Nutrien agar, Antibiotik Amoxilin, Eritromisin, Cefadroxil, dan bakteri yang di
pakai Staphylococcus aureus.
Adapun cara kerja sterilisasi metode panas kering (oven) yaitu pertama-tama
dihubungkan oven dengan sumber listrik. Kemudian, diaktifkan oven dan ditunggu
selama beberapa saat hingga muncul kata display. Setelah itu, diatur waktu dan
suhu oven. Ditunggu hingga suhu menyala. Dan diletakkan alat laboratorium yang
berbahan kaca contohnya erlenmeyer, gelas ukur, cawan petri dan tabung reaksi
yang telah dibungkus dengan kertas HVS didalam oven. Ditunggu hingga proses
sterilisasi selesai. Kemudian, dinonaktifkan oven tunggu hingga display mati.
195
Adapun cara kerja pembuatan medium Nutrient Agar yaitu pertama-tama
disiapkan alat yang sudah disterilkan. Kemudian, ditimbang medium yang
digunakan dan diletakkan diatas kertas perkamen. Setelah itu, dicampur medium
padat dengan aquades 120 mL didalam labu erlenmeyer. Dipanaskan medium
diatas nyala api bunsen hingga mendidih. Kemudian, diangkat labu erlenmeyer
yang berisi medium yang telah mendidih menggunakan lap halus. Dan ditutup
labu erlenmeyer menggunakan kapas. Selanjutnya, disterilkan medium kedalam
autoklaf dengan suhu 121°C dalam waktu 20 menit. Setelah itu, dimasukkan
medium kedalam cawan petri sebanyak 20 mL menggunakan spoit. Kemudian,
ditambahkan bakteri Staphylococcus aureus sebanyak 1 ml menggunakan spoit.
Dan diratakan medium dengan cara membentuk angka 8.
Adapun cara pembuatan sampel yang di gerus yaitu antibiotik amoxilin,
eritromisin, cefadroxil, kemudian di ambil sampel sebanyak 0,1 gram dan
kemudian peperdist di celupkan pada antibiotik dan di letakan pada cawan petri
yang berisi medium nutrien agar dilakukan pada semua sampel, kemudian di
inkubasi selama 1x24 jam untuk mengetahui seberapa daya hambat pada antibiotik
bakteri uji.
Berdasarkan kemampuan menghambat atau membunuh bakteri, antibiotik
digolongkan menjadi dua kelompok yakni bakteriostatik dan bakterisidal. Secara
sederhana, bakterisidal adalah obat yang membunuh bakteri sedangkan
bakteriostatik adalah obat yang mencegah pertumbuhan bakteri. Resistensinya
suatu antibiotik mungkin dikarenakan pemberian antibiotik secara tidak teratur.
Oleh karena itu, diperlukan suatu uji sensitifitas antibiotik untuk mengetahui
196
pasien tersebut mengalami resisten terhadap jenis-jenis antibiotik sehingga dapat
diberikan antibiotik yang sesuai (masih sensitif).
Antibiotik dapat menjadi resisten dengan ciri antibiotik tersebut tidak
terhambat pertumbuhannya ketika diberikan antibiotik secara sistemik dalam
dosisi normal yang semestinya dapat menghambat pertumbuhan bakteri itu.
Penyebab dari resistensi antibiotik ini terjadi karena penggunaannya yang
berlebihan dan irasional. Bahkan, 40% dari penggunaan antibiotik ini dipakai
untuk hal yang kurang tepat seperti infeksi virus.
Antibiotik Amoxicillin tergolong bakteriosida dan bakteriostatik karena
mampu menghambat atau membunuh bakteri, antibiotik Eritromisin tergolong
bakteriosida dan bakteriostatik karena menghambat dan membunuh bakteri,
sedangkan antibiotik Cefadroxil tergolong antibiotik bakteriostatik karena hanya
mampu menghambat pertumbuhan mikroba.
Adapun tingkat sensitifitas pada antibiotik yang digunakan yaitu antibiotik
Amoxicillin dan Eritromisin sangat sensitive karena mampu menghambat bahkan
membunuh mikroba. Sedangkan, antibiotik Cefadroxil tingkat sensitifitasnya lebih
rendah karena hanya mampu menghambat mikroba
Mekanisme penghambatan terhadap pertumbuhan bakteri oleh senyawa
antibakteri dapat berupa perusakan dinding sel dengan cara menghambat
pembentukannya atau mengubahnya setelah selesai terbentuk, perubahan
permeabilitas membran sitoplasma sehingga menyebabkan keluarnya bahan
makanan dari dalam sel, perubahan molekul protein dan asam nukleat,
penghambatan kerja enzim, dan penghambatan sintesis asam nukleat dan protein.
197
Penghambat Luas dan sempit dipengaruhi oleh antibiotik yang digunakan
dalam suatu uji sensitivitas, karena setiap antibiotik memiliki daya hambat yang
berbeda.
Antibiotik Amoxicillin dan Eritromisin merupakan antibiotik yang
berspektrum luas karena mampu menghambat atau membunuh mikroba baik
bakteri gram positif atau pun bakteri gram negative. Sedangkan, Cefadroxil
merupakan antibiotik berspektrum sempit karena hanya mampu menghambat
mikroba.
Setelah di inkubasi selama 1x24 jam di dapatkan hasil pada Amoxilin yaitu
dapat menghambat bakteri Staphylococcus aureus, pada Eritromisin dapat
membunuh bakteri Staphylococcus aureus, pada Cefadroxil dapat menghambat
bakteri Staphylococcus aureus.
Adapun cawan perti yang di gunakan pada Amoxicillin dengan ukuran vertikal
4cm, horizontal 4cm, dan miringnya 4cm, Eritromisin dengan ukuran vertikal 3cm,
horizontal 3,5cm ,miring 3cm, dan sisi lainnya 3,5cm. Cefadroxil dengan ukuran
vertikal 4,5cm, horizontal 4,5cm, miring 5cm, dan sisi miring 5,5 cm.
198
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
Berdasarkan percobaan yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa uji
sensitivitas mikrobia terhadap antibiotik dapat dilakukan dengan cara sumuran
yaitu dengan membuat sumuran atau lubang pada media padat yang telah berisi
mikrobia dan kemudian pada sumuran tersebut dimasukkan antibiotik.
Hasil sensitivitas suatu bakteri terhadap antibiotik ditentukan oleh diameter
zona hambat yang terbentuk, semakin besar diameter zona hambat yang terbentuk
maka pertumbuhannya semakin terhambat sehingga dibutuhkan standar acuan
untuk menentukan apakah bakteri tersebut resisten atau sensitif terhadap suatu
antibiotik.
B. Saran
1. Laboratorium
Untuk laboratorium agar alat-alatnya lebih ditambah kelengkapannya guna
menunjang proses belajar mahasiswa, dan untuk alat yang sudah ada agar tetap
dijaga dan dirawat agar bertahan lama.
2. Asisten
Untuk kakak asisten cara menjelaskannya sudah cukup baik, kiranya perlu
dipertahankan lagi kedepannya agar kami dapat mengerti dengan baik.
199
DAFTAR PUSTAKA
Artati. 2018.Media Kesehatan Politeknik Kesehatan Makassar, Jurnal Kesehatan.

Vol 11 NO 2 (2016)
Arya Bondan Permadi, Hj. Her Gumiwang Ariswati, Triwiyanto. 2015. Inkubasi
Bakteri Dilengkapi Dengan Colony Counter (Inkubator Bakteri).Fakultas
Teknik Elektromedik :Politeknik Kesehatan Surabaya.
Cindy Melinda Sofyani. 2018. Validasi Metode Analisis Kromatografi Cair

Kinerja Tinggi Untuk Penetapan Kadar Uji Disolusi Terbanding Tablet
Amoksisilin.Jurnal Farmaka Suplemen. Vol. 16 (1).Hal.324-330.
Eko Widodo, M Halim Natsir, Osfar Sjofjan. 2018. Adiktif Pakan Unggas
Pengganti Antibiotik (Respon Terhadap Larangan Antibiotik Pemerintah
Indonesia). UB Press : Malang.
Fidia, Fibriana, Andin Vita Amalia. 2016. Potensi Kitchen Microbiology Untuk
Mikrobiologi.Universitas Negeri Semarang :Unnes Science Education
Journal
Kristiandi, Kiki, Sanya Anda Lusiana, Rizky Nisfi Ramdhini. 2021. Teknologi
Fermentasi: Yayasan Kita Menulis
Meganada, Hiaranya Putri, Sukini, Yodong. 2017. Bahan Ajar Keperawatan Gigi
Mikrobiologi. Kementerian Kesehatan Republik Indonesia : Jakarta
Michelle V. Holderman, Edwin de Queljoe, Sendy B. Rondonuwu.

2017. Identifikasi Bakteri Pada Pegangan Eskalator Di Salah Satu Pusat
Perbelanjaan Di Kota Manado. Jurnal Ilmiah Sains.Vol. 17 (1). Hal 1318.
Natalia, Sri, Martani. 2020. MerA Echerichia Coli Efek Resisten Merkuri
Terhadap Resisten Antibiotik. Media Sains Indonesia : Bandung.
Prapati Utama. 2012. Antibiotik Alami Untuk Mengatasi Aneka Penyakit.

Agromedia Pustaka : Jakarta.
Ratih Pusporini. 2019. Antibiotik Kedokteran Gigi. UB Press : Malang
Rachmawati Sinta, Rizky L. Fazeri dan Ika Norcahyanti. 2020.

Gambaran Penggunaan Antibiotik di Bangsal Penyakit Dalam RSUD
Bangil Kabupaten Pasuruan. Universitas Jember : JPSCR
Rina Hidayati Pratiwi. 2017. Mekanisme Pertahanan Bakteri Patogen Terhadap

Antibiotik. Jurnal Pro-Life.Vol. 4 (3).Hal : 418-429.
Soegijanto, Soegeng.2016. Kumpulan Makalah Penyakit Tropis. Surabaya:

Airlangga University Press
Sudigdoadi Sunarjati. 2015. Mekanisme Timbulnya Resistensi Antibiotik Pada

Infeksi Bakteri. Universitas Padjadjaran : Bandung
Widodo, Aan Wahyu.2016. Evaluasi Penggunaan dan Efektifitas Pemberian

Antibiotik Pada pasien Demam Tifoid Di Instalasi Rawat Inap RSUD SukaharjoPada
Periode 1 Oktober -31 Desember 2015. Jurnal Kesehatan Prima. Vol 13 (2). Hal. 14
LAMPIRAN
A. Skema Kerja
1. Sterilisasi alat
Alat
− Dicuci
− Dibilas
− Dikeringkan
− Dibungkus
− Disterilkan
Alat Sterilisasi
2. Pembuatan medium NA
Medium NA
− Ditimbang
− Dilarutkan
− Dipanaskan
− Didinginkan
− Dicampur dengan bakteri
− Dihomogenkan
− Diratakan dengan metode 8
− Didiamkan
Medium di bagi menjadi 3

bagian
3. Pemberian antibiotik cefadroxil pada medium
Cefadroxil
− Digerus
− Dicampur dengan aquades
− Dicelupkan di paper dish
− Ditotol – totol sebanyak 5-7 kali
− Diletakkan dibagian tengah medium
Menghambat bakteri
4. Pemberian antibiotik eritromisin pada medium
Eritromisin
− Digerus
Membunuh bakteri
5. Pemberian antibiotik amoxicillin pada medium
Amoxicillin
− Digerus
Menghambat bakteri
B. Perhitungan Medium
23
1. NA = 1000 𝑥 1 𝑥 20 𝑚𝐿 = 0,46 𝑔𝑟𝑎𝑚
C. Perhitungan Zona Hambat
1. Amoxicillin
(30 – 6 mm) + (35 - 6 mm) + (65 – 66 mm)

3
= 24 mm + 29 mm + 59 mm
3
= 112 mm
3
= 37,33 mm
2. Cefadroxil
(45 – 6 mm) + (45 – 6 mm) + (105 + 6 mm)

3
= 39 mm + 39 mm +_ 39 mm
3
= 177 mm
3
= 59 mm
3. Eritromisin
(40 – 6 mm) + (40 – 6 mm) + (40 – 6 mm)

3
= 34 mm + 34 mm + 34 mm
3
= 102 mm
3
= 34 mm
D. Foto Pengamatan

KET: Disterilkanalat. KET:.Alat dan bahan yang digunakan.

KET: Ditimbang NA. KET: Aquades diukur dengan gelas ukur.


KET: Bahan antibiotik dilarutkan dengan KET:Medium sebelum inkubasi

aquades sebanyak 50 ml.
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
KET : Medium sesudah inkubasi.

Laporan Kelompok 2

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Laporan Kelompok 2

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI FARMASI

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI DAN VIROLOGI

KOORDINATOR LABORATORIUM : apt. WAHYUDDIN JUMARDIN, S.Farm

PROGRAM STUDI S1 FARMASI

rahmatnya kami dapat menyelesaikan laporan praktikum ini yang berjudul

“LAPORAN LENGKAP MIKROBIOLOGI DAN VIROLOGI” dengan waktu

yang telah ditentukan.

bersifat membangun dari pihak pembaca diperlukan. Semoga laporan ini

bermanfaat bagi pembaca untuk menambah ilmu pengetahuan terutama dalam

bidang laboratorium praktikum mikrobiologi dan virologi.

Makassar, 22 Agustus 2021

ujian praktikum “MIKROBIOLOGI DAN VIROLOGI” dengan program studi

S1 Farmasi Universitas Megaresky Makasssar Tahun ajaran 2021 kelompok II

kelas B angkatan 2020 yang disahkan oleh :

NO. JUDUL PERCOBAAN ASISTEN PARAF

1 Pengenalan Alat MUFLI THAMI TUFAIL

2 Sterilisasi MUFLI THAMI TUFAIL

3 Pembuatan Media FELIX RONALDO RADA

4 Penanaman dan Isolasi RAHMATIA E. AMAN T.

8 Uji Sensitivitas Antibiotik RAHMATIA E. AMAN T.

MAKASSAR, 22 Agustus 2021

apt. WAHYUDDIN JUMARDIN, S.Farm

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI DAN VIROLOGI

Nama : PUTRI REGINA TRIANDINI

NO PERCOBAAN NILAI PARAF

4 Penanaman Dan Isolasi

8 Uji Sensitivitas Antibiotik

MAKASSAR, 22 Agustus 2021

apt. WAHYUDDIN JUMARDIN, S.Farm

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI DAN VIROLOGI

Nama : PREISCYLIA RARU

NO PERCOBAAN NILAI PARAF

4 Penanaman Dan Isolasi

8 Uji Sensitivitas Antibiotik

MAKASSAR, 22 Agustus 2021

apt. WAHYUDDIN JUMARDIN, S.Farm

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI DAN VIROLOGI

Nama : MEIDINA DWI PUTRI

NO PERCOBAAN NILAI PARAF

4 Penanaman Dan Isolasi

8 Uji Sensitivitas Antibiotik

MAKASSAR, 22 Agustus 2021

apt. WAHYUDDIN JUMARDIN, S.Farm

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI DAN VIROLOGI

Nama : ADVENTIANI MANGAGO

NO PERCOBAAN NILAI PARAF

4 Penanaman Dan Isolasi

8 Uji Sensitivitas Antibiotik

MAKASSAR, 22 Agustus 2021

apt. WAHYUDDIN JUMARDIN, S.Farm

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI DAN VIROLOGI

Nama : VIKA APRILIANI TAUFIK

NO PERCOBAAN NILAI PARAF

4 Penanaman Dan Isolasi

8 Uji Sensitivitas Antibiotik

MAKASSAR, 22 Agustus 2021

apt. WAHYUDDIN JUMARDIN, S.Farm

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI DAN VIROLOGI

NO PERCOBAAN NILAI PARAF

4 Penanaman Dan Isolasi

8 Uji Sensitivitas Antibiotik

MAKASSAR, 22 Agustus 2021

apt. WAHYUDDIN JUMARDIN, S.Farm