JURNAL PRAKTIKUM

APLIKASI BIOTEKNOLOGI PANGAN

ISOLASI MIKROORGANISME

NAMA : ARIANI RUMITASARI

NIM : G311 16 007
KELOMPOK : VI (ENAM)
ASISTEN : INDAH SUCI RAMADHANI

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI DAN BIOTEKNOLOGI PANGAN

PROGRAM STUDI ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN
DEPARTEMEN TEKNOLOGI PERTANIAN
FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS HASANUDDIN
MAKASSAR
2019
 ISOLASI MIKROORGANISME
Ariani Rumitasari1), Indah Suci Ramadhani2)
Program Studi Ilmu dan Teknologi Pangan, Departemen Teknologi Pertanian,
Fakultas Pertanian, Universitas Hasanuddin

Abstrak
Isolasi merupakan metode yang digunakan untuk memisahkan atau memindahkan mikroba tertentu
dari suatu media ke media baru, sehingga diperoleh kultur murni atau biakan murni. Biakan murni
adalah biakan yang terdiri atas satu spesies mikroba yang ditumbuhkan dalam medium
buatan. Yoghurt mengandung mikroba Lactobacillus bulgaricus dan Streptococcus
thermophilus. Tujuan dari praktikum isolasi mikroba ialah untuk mengetahui prosedur isolasi
mikroorganisme dan mengetahui hasil mikroorganisme pada sampel yang diisolasi. Metode yang
digunakan pada praktikum isolasi mikroorganisme terdiri dari dua tahap, pertama yakni screening
primer dengan pengenceran 100, 10-1, dan 10-2 dan tahap kedua yakni screening sekunder hasil
screening primer pengenceran 10-1 dan 10-2. Hasil isolat yang didapatkan pada sampel yoghurt plain
(cimory) diduga merupakan bakteri Lactobacillus bulgaricus yang sesuai dengan ciri morfologinya
yaitu koloni bundar berwarna putih. Kesimpulan yang diperoleh dari praktikum ini ialah isolasi
mikroorganisme dapat dilakukan dengan melakukan dua tahapan yaitu screening primer dan
screening sekunder. Screening primer bertujuan untuk menumbuhkan mikroba tertentu, sedangkan
screening sekunder bertujuan untuk menumbuhkan mikroba yang telah diketahui ciri-cirinya
sehingga diperoleh kultur murni. Hasil mikroorganisme diduga yang terdapat pada sampel yoghurt
plain (cimory) yaitu Lactobacillus bulgaricus.
Kata kunci : L. bulgaricus, screening primer, screening sekunder, S. thermophilus

I. PENDAHULUAN mikroba ke medium baru untuk

memperoleh kultur murni. Biakan murni
I.1 Latar Belakang
adalah biakan yang terdiri atas satu spesies
Mikroorganisme memiliki ukuran
mikroba yang ditumbuhkan dalam medium
sangat kecil sehingga sulit untuk diamati
buatan. Beberapa cara yang dilakukan
secara langsung. Mikroorganisme memiliki
peran menguntungkan yang digunakan untuk mengisolasi mikroorganisme ialah
dengan screening primer dan screening
dalam segala aktivitas manusia misalnya
sekunder.
dalam bidang pangan, kesehatan, dan
Cimory (yoghurt plain) digunakan
lainnya. Sedangkan yang merugikan
sebagai pengganti bakteri yang berasal dari
menimbulkan efek racun dan dapat
biakan murni karena didalam yoghurt plain
terinfeksi di dalam tubuh.
(Cimory) juga terdapat bakteri yang
Mikroorganisme yang terdapat di
dibutuhkan dalam proses pembuatan
bahan pangan dapat diketahui dengan cara
yoghurt yaitu Streptococcus thermophilus
menumbuhkan mikroba pada media agar.
dan Lactobacillus bulgaricus yang
Salah satu cara untuk memperoleh biakan
digunakan sebagai starter dalam proses
murni suatu mikroorganisme adalah isolasi.
fermentasi.
Salah satu fungsi isolasi mikroba terhadap
Mikroba yang diisolasi pada praktikum
pangan yaitu untuk mengetahui jenis
isolasi mikroorganisme yaitu mikroba yang
mikroba yang terdapat pada bahan pangan.
digunakan dalam produk yoghurt plain
Isolasi mikroorganisme merupakan
(cimory). Oleh karena itu, praktikum ini
metode pemisahan mikroorganisme dari
dilakukan untuk mengetahui prosedur
medium lama yang berisi berbagai jenis

Praktikan Aplikasi Bioteknologi Pangan

1)

Asisten Aplikasi Bioteknologi Pangan

2)
isolasi mikroorganisme dan mengetahui
hasil isolasi mikroba pada agar miring.
I.2 Rumusan Masalah
Rumusan masalah dari praktikum
isolasi mikroorganisme yaitu
1. Bagaimana prosedur isolasi
mikroorganisme dan
2. Bagaimana mengetahui mikroorganisme
pada sampel yang diisolasi.
I.3 Tujuan dan Kegunaan
Tujuan dari praktikum isolasi
mikroorganisme yaitu :
1. Untuk mengetahui prosedur isolasi
mikroorganisme.
2. Untuk mengetahui mikroorganisme
pada sampel yang diisolasi.
Kegunaan yang diharapkan dari
praktikum isolasi mikroorganisme adalah
adanya keterampilan dalam mengisolasi dan
menyeleksi mikroba dari berbagai sumber.
II. METODOLOGI PRAKTIKUM
II.1 Waktu dan Tempat Praktikum
Praktikum isolasi mikroorganisme
dilakukan pada hari Rabu, 13 Maret 2019
dan Jum’at, 22 Maret 2019, pukul 09.50-
11.40 WITA di Laboratorium Mikrobiologi
dan Bioteknologi Pangan, Program Studi
Ilmu dan Teknologi Pangan, Departemen
Teknologi Pertanian, Fakultas Pertanian,
Universitas Hasanuddin, Makassar.
II.2 Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan pada
praktikum isolasi mikroorganisme yaitu
tabung reaksi, rak tabung, laminar air flow,
ose bulat, bunsen, inkubator, pipet volume,
bulb, hocky stick, erlenmeyer, hotplate,
batang pengaduk, timbangan analitik,
autoclave, pinset, gelas ukur, vortex, gelas
kimia dan cawan petri.
Bahan-bahan yang digunakan dalam
praktikum isolasi mikroorganisme yaitu
media de Man Rogosa and Sharpe Agar
(MRSA), alkohol 98%, aluminium foil,
kapas, label, kertas bekas, yoghurt, larutan
fisiologis, dan aquades
II.3 Prosedur Praktikum
II.3.1 Sterilisasi Alat
Terlebih dahulu, semua alat dicuci
dengan air bersih. Selanjutnya dikeringkan
dengan tissue roll lalu diberi kapas pada
ujung tabung reaksi dan pipet volume.
Setelah itu, ditutup dengan kertas dan
aluminium foil. Setelah dibungkus,
disterilisasi menggunakan autoclave dengan
tekanan 1 atm suhu 1210C selama kurang
lebih 15 menit.
II.3.2 Pembuatan Media de Man Rogosa
and Sharpe Agar (MRSA)
Terlebih dahulu, media MRS ditmbang
sebanyak 20,46 gram. Selanjutnya
dilarutkan dengan aquades sebanyak 300 ml
kemudian dihomogenkan menggunakan
hotplate. Setelah itu, media disterilisasi
menggunakan autoclave dengan suhu
121oC, tekanan 1atm selama 15 menit.
II.3.3 Pembuatan Larutan Fisiologis
Terlebih dahulu, NaCl ditimbang
sebanyak 8,5 gram, kemudian ditambahkan
aquades sebanyak 1 L pada erlenmeyer.
Mulut erlenmeyer ditutup dengan kapas dan
aluminium foil. Setelah itu dihomogenkan
dengan hotplate. Lalu disterilkan dengan
autoclave pada tekanan 1 atm, suhu 1210C
selama 15 menit.
II.3.4 Screening Primer
Screening primer mikroba dari produk
cimory dimulai dengan pengenceran
bertingkat hingga 10-2. Pengenceran
bertingkat dilakukan dengan menyiapkan
tabung reaksi sebanyak 2 buah. Masing-
masing tabung reaksi tersebut berisi 9 ml
larutan fisiologis dan telah disterilisasi.
Kemudian dipipet 1 ml cimory dan
dimasukkan ke dalam tabung reaksi
pertama lalu dihomogenkan dengan vortex,
disebut pengenceran 10-1. Selanjutnya
dipipet 1 ml dari tabung reaksi pertama ke
tabung reaksi kedua dan dihomogenkan
Sumber : Data Primer Hasil Praktikum
disebut pengenceran 10-2. Setelah itu,
Aplikasi Bioteknologi Pangan, 2019
dipipet sebanyak 1 ml suspensi 10-1 dan 10-2
Tabel 02. Hasil Pengamatan Screening
di atas masing-masing media MRS yang
Sekunder
telah dibuat sebelumnya di cawan petri. Lama
Sampel Hasil Pengamatan Gambar
Kemudian diratakan dengan Hockey Stick. Inkubasi

Juga dilakukan pengenceran 100, dimana

diambil cimory menggunakan ose bulat lalu Cimory
Tidak terdapat
digores dengan goresan T pada media. (10-1)
media
4X24
Jam
mikroba yang
tumbuh
Setelah itu, masing-masing cawan petri MRS

dibungkus menggunakan kertas bekas dan

dimasukkan ke dalam inkubator pada suhu Terdapat koloni
45C selama 5x24 jam dan diamati koloni Cimory
berbintik bintik
dengan permukaan
yang terbentuk. (10-2) 4X24 yang licin,
media Jam berwarna putih,
II.3.5 Screening Sekunder MRS menyebar dan
tidak mengikuti
Screening sekunder dilakukan dengan pola goresan

mengambil satu koloni pada cawan petri

Sumber : Data Primer Hasil Praktikum
yang telah ditumbuhkan sebelumnya Aplikasi Bioteknologi Pangan, 2019
menggunakan ose bulat. Kemudian digores
secara zig-zag pada agar miring yang telah III.2 Pembahasan
memadat. Setelah itu, tabung reaksi ditutup III.2.1 Yoghurt (Cimory)
dengan kapas dan aluminium foil. Lalu Cimory (yoghurt plain) digunakan
diinkubasi pada inkubator selama 4x24 jam. sebagai pengganti bakteri yang berasal dari
III. HASIL DAN PEMBAHASAN biakan murni karena didalam yoghurt plain
(Cimory) juga terdapat bakteri yang
III.1 Hasil
dibutuhkan dalam proses pembuatan
Hasil praktikum isolasi
yoghurt yaitu Streptococcus thermophiles
mikroorganisme
dan Lactobacillus bulgaricus. Yoghurt
Tabel 01. Hasil Pengamatan Screening
plain (Cimory) mengandung bakteri S.
Primer
Lama
thermophiles dan Lactobacillus bulgaricus
Sampel Hasil Pengamatan Gambar
Inkubasi yang dapat digunakan sebagai starter dalam
proses fermentasi. Yoghurt merupakan
Tumbuh mikroba di
Cimory
(100)
penutup cawan salah satu produk fermentasi berbahan
5X24 Jam bagian pinggir.
media
Mikroba berwarna
dasar susu. Sel-sel bakteri menggunakan
MRS
putih susu laktosa dari susu untuk mendapatkan
karbon dan energi, dan memecah laktosa
Cimory
Tumbuh mikroba menjadi gula sederhana yaitu glukosa dan
tersebar di
(10-1)
media
5X24 Jam permukaan media, galaktosa dengan bantuan enzim B-
Nampak tipis dan
MRS
warna putih buram galaktosidase. Kandungan yoghurt secara
umum ialah protein 4-6%, lemak 0,1-1%,
Cimory 5X24 Jam Tumbuh mikroba laktosa 2- 3%, asam laktat 0,6-1,3%, pH
(10-2) memenuhi setengah
media permukaan media 3,8-4,6. Suhu penyimpanan yang baik untuk
MRS dan berwarna putih
yoghurt ialah 5°C. Karakteristik yoghurt
yang baik ialah berwarna putih, aroma dan
rasa asam/khas, dan memiliki cairan yang
kental-padat.
Hal ini sesuai dengan Kusuma (2012) yang
menyatakan bahwa Cimory (yogurt plain)
mengandung bakteri Streptococcus
thermophiles dan Lactobacillus bulgaricus
yang dapat digunakan sebagai starter dalam
proses fermentasi.
III.2.2 Mikroorganisme pada Yoghurt
Mikroorganisme yang terdapat pada
yoghurt ialah Lactobacillus bulgaricus dan
Sterptococcus thermophillus. Lactobacillus
bulgaricus merupakan bakteri Gram positif,
tidak menghasilkan spora, berbentuk batang
dan bersifat anaerob fakultatif. L.
bulgaricus tumbuh pada suhu optimum 30-
40°C dan tumbuh optimal pada pH 5,5-6,2.
Adapun Streptococcus thermophilus adalah
bakteri gram negative yang bersifat anaerob
fakultatif. Bentuknya bulat dan berstruktur
rantai atau berpasangan. S. thermophilus
tumbuh optimum pada suhu sekitar 37°C.
Hal ini sesuai dengan Wijayanti (2017)
yang menyatakan bahwa Lactobacillus
tumbuh pada suhu optimum 30-40°C
sedangkan
S. thermophillus tumbuh optimal pada suhu
45-47°C.
III.2.3 Media de Man Rogosa and Sharpe
Agar (MRSA)
Media de Man Rogosa and Sharpe
(MRSA) merupakan media spesifik untuk
pertumbuhan bakteri asam laktat karena
media tersebut merupakan media yang
bersifat asam karena berbagai
komposisinya. Komposisi MRS agar adalah
20 gram dextrose, 10 gram pepton, 8 gram
beef extract, 5 gram sodium acetate, 4 gram
extract yeast, 2 gram dipotasium fosfat, 2
gram ammonium sitrat, 0,2 gram
magnesium sulfat, 0,05 gram mangan
sulfat, 10 gram agar. Pepton dan ekstrak
yeast digunakan sebagai sumber nitrogen.
Ekstrak yeast juga digunakan untuk sumber
vitamin. Dekstrosa dan dipotasium
hidrogen fosfat (K2HPO4) sebagai sumber
karbon dan juga sumber mineral. Hal ini
sesuai dengan Subagiyo (2015) yang
menyatakan bahwa media
de Man Rogosa and Sharpe (MRSA)
merupakan media spesifik untuk
pertumbuhan bakteri asam laktat.
III.2.4 Screening Primer
Screening primer merupakan suatu
tahap seleksi atau pendugaan untuk
mendapatkan satu jenis mikroba yang
mempunyai sifat dan karakteristik sesuai
yang diinginkan dengan cara menumbuhkan
mikroba pada media yang selektif.
Berdasarkan hasil pengamatan yang
dilakukan setelah inkubasi selama 5×24 jam
didapat koloni pada pengenceran 100 yaitu
tumbuh mikroba di penutup cawan bagian
pinggir. Mikroba berwarna putih susu, pada
pengenceran 10-1 yaitu tumbuh mikroba
tersebar di permukaan media, nampak tipis
dan warna putih buram, dan pengenceran
10-2 yaitu tumbuh mikroba memenuhi
setengah permukaan media dan berwarna
putih. Berdasarkan ciri-ciri mikroba
tersebut diduga kenampakan makroskopik
di cawan petri yaitu mikroba menyebar
berwarna putih susu atau kekuningan dan
permukaan rata yang merupakan bakteri
asam laktat. Hal ini sesuai dengan pendapat
Zahro (2014) yang menyatakan bahwa
kenampakan makroskopik yaitu mikroba
menyebar berwarna putih susu atau
kekuningan yang merupakan bakteri asam
laktat dan permukaan rata.
III.2.5 Screening Sekunder
Screening sekunder atau penguat
dilakukan dengan cara mengisolasi mikroba
dari cawan petri ke agar miring dengan
menggunakan metode gores. Screening
sekunder bertujuan untuk menumbuhkan
mikroba yang telah diketahui ciri-cirinya
sehingga diperoleh populasi mikroba yang
diinginkan. Berdasarkan praktikum yang
dilakukan dapat dilihat bahwa koloni
mikroba pada pengenceran 10-1 tidak
tumbuh mikroba diduga karena mikroba
tertempel di bagian pinggir ose bulat
sehingga tidak dapat di screening sekunder
di agar miring dan pengenceran 10-2 koloni
yang tumbuh berbentuk bulat kecil
berbintik bintik dengan permukaan yang
licin, berwarna putih, menyebar dan tidak
mengikuti pola goresan. Hasil ini telah
sesuai dengan ciri-ciri mikroba yang
diinginkan yaitu Lactobacillus bulgaricus.
Hal ini sesuai dengan Sunaryanto dan
Marwoto (2012), yang menyatakan bahwa
penampakan koloni yang dibentuk oleh
Lactobacillus bulgaricus berupa koloni
bundar berwarna putih.
IV. PENUTUP
IV.1 Kesimpulan
Kesimpulan yang diperolah dari
praktikum isolasi mikroorganisme ini ialah
1. Isolasi mikroorganisme dapat
dilakukan dengan melakukan dua
tahapan yaitu screening primer dan
screening sekunder. Screening
primer bertujuan untuk menumbuhkan
mikroba tertentu, sedangkan screening
sekunder bertujuan untuk
menumbuhkan mikroba yang telah
diketahui ciri-cirinya sehingga
diperoleh kultur murni.
2. Diduga mikroorganisme yang terdapat
pada sampel produk Cimory (yoghurt
plain) yaitu Lactobacillus bulgaricus.
IV.2 Saran
Saran untuk praktikum selanjutnya
sebaiknya pada screening sekunder
dilakukan pengamatan secara makroskopis
dan dengan pewarnaan gram.
DAFTAR PUSTAKA
Kusuma, H. 2012. Analisis Optimasi
Produksi Yoghurt Pada Pt. Cimory
Cisarua Bogor. Institut Pertanian
Bogor : Bogor [Skripsi]
Subagiyo., Sebastian, M dan Triyanto.
2015. Pengaruh Penambahan
Berbagai Jenis Sumber Karbon,
Nitrogen Dan Fosforpada Medium
Deman, Rogosa And Sharpe (Mrs)
Terhadap Pertumbuhan Bakteri Asam
Laktat Terpilih Yang Diisolasi Dari
Intestinum Udang Penaeid. Jurnal
Kelautan Tropis, 18(3):127–132
Sunaryanto R dan Marwoto B. 2012.
Isolasi, Identifikasi, dan Karakteristik
Bakteri Asam Laktat dari Dadih Susu
Kerbau. Jurnal Sains dan Teknologi
Indonesia 14(3): 228-233.
Wijayanti, D. 2017. Studi Evaluasi Mutu
Yoghurt Nabati Sari Kacang Hijau
(Vigna radiata L.) dengan Variasi
Konsentrasi Sukrosa dan Susu Skim.
Skripsi. Universitas Muhammadiyah
Malang. Malang.
Zahroh, F. 2014. Isolasi Dan Identifikasi
Bakteri Asam Laktat Asalfermentasi
Markisa Ungu (Pasiflora Edulisvar.
Sims) sebagai Penghasil
Eksopolisakarida. Universitas Islam
Negeri Maulana Malik Ibrahim:
Malang
LAMPIRAN
Lampiran 01. Diagram Alir Prosedur
Praktikum Isolasi Mikroorganisme
1. Sterilisasi Alat
2. Pembuatan Media MRS (de Man
Rogosa and Sharpe)

4. Screening Primer

3. Pembuatan Larutan Fisiologis

5. Screening Sekunder