Tetracera scandens sebagai Tanaman Obat: Struktur Sekretori, Histokokimia, dan

Aktivitas Antibakteri
Evi Muliyah 1 *, Sulistijorini 1 , Yohana Cecilia Sulistyaningsih 1 , Mohamad Rafi 2

PERKENALAN

Tetracera scandens adalah spesies semak yang berbagai bagiannya telah digunakan untuk
pengobatan tradisional. Itu milik keluarga Dilleniaceae dan menyebar ke seluruh Cina, India, Malaysia,
Vietnam, Filipina, Myanmar, Thailand, dan Indonesia. Di Vietnam, akar dan batang digunakan untuk
mengobati hepatitis, pembengkakan, dan asam urat[1]. Suku Anak Dalam, yang mendiami Taman
Nasional Bukit Duabelas, memanfaatkan batang spesies untuk mengobati diare. Suku ini mengenal T.
scandens dengan nama lokal akosempalay. Untuk mengobati diare, batang direbus dengan air dan
rebusan diminum. Ekstrak cair dan metanol dari daun T. scandens menunjukkan potensi anti-diabetes
dengan mengurangi glukosa pada tikus diabetes. Ekstrak metanol T. scandens menunjukkan aktivitas
penghambatan xanthine oxidase [3] dan komponennya menunjukkan aktivitas yang sangat diinginkan
terhadap diabetes T2 dengan penyerapan glukosa yang dirangsang secara signifikan dalam myotubulus
L6

[4]. Ekstrak etanol T. scandens memiliki aktivitas anti-HIV dan aktivitas penghambatan tinggi
terhadap aktivitas reverse transcriptase HIV-1 [5]. Ekstrak metanol dari batang T. Scandens
menghasilkan triterpene nor-lupane baru yang mampu menunjukkan aktivitas penghambatan xanthine
oxidase tergantung konsentrasi yang signifikan [1]. Namun, potensi T. scandens sebagai obat diare tidak
diketahui, tetapi dalam ekstrak lain anggota Dilleniace, yaitu ekstrak berair dan methanolic dari Dillenia
indica menunjukkan aktivitas anti-diare.

Dickison (2000) melaporkan bahwa sebagian besar tanaman obat memiliki struktur sekretori
yang berkontribusi dalam produksi metabolit. Berbagai zat dan senyawa kimia tertentu seperti minyak
esensial, resin, lateks, garam mineral, alkaloid, dan glikosida diproduksi oleh struktur tersebut. Struktur
sekretori diklasifikasikan ke dalam struktur eksternal dan internal. Studi tentang struktur sekretori,
misalnya struktur, ultrastruktur, ukuran, kepadatan, histrokimia, dan sudut pandang kimia dari struktur
tersebut, telah dilakukan banyak, terutama pada Lamiaceae dan Asteraceae. Kjaer et al. (2012) [10]
mempelajari ukuran dan kepadatan struktur sekretori (trikoma kelenjar) di Artemisia annua. Dengan
menggunakan tes histokimia, struktur sekretori Salvia officinalis diketahui mengandung terpenoid,
alkaloid, tanin, flavonoid, dan minyak esensial yang merupakan karakteristik Salvia sebagai tanaman
aromatik.

Beberapa spesies Dilleniaceae sebelumnya dilaporkan ditemukan memiliki potensi sebagai

tanaman agen antibakteri seperti Dillenia elliptica dan Dillenia nitida, namun, potensi T. scandens tidak
diketahui. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi struktur sekretori, aspek
histokokimia, dan potensi antibakteri dari batang T. scandens, yang digunakan oleh suku Anak Dalam
untuk mengobati diare.

BAHAN DAN METODE

Koleksi bahan tanaman

 Batang T. scandens diperoleh dari Taman Nasional Bukit Duabelas Provinsi Jambi, pulau
Sumatera, Indonesia. Bahan-bahan tanaman dikumpulkan pada September 2015. T. scandens terletak di
ketinggian 73,8 m hingga 125,4 m di atas permukaan laut rata-rata. Sampel segar dikumpulkan dan
digunakan untuk tes histrokimia. Untuk tes aktivitas antibakteri, sampel segar dikeringkan di bawah
sinar matahari selama 3 hari, dan kemudian dikeringkan menggunakan oven pada suhu 50ºC selama 5
hari.

Pengamatan mikroskop cahaya Untuk mengamati adanya struktur sekretori di batang, bagian
transversal batang menggunakan mikrotome beku disiapkan. Ukuran dan kepadatan struktur sekretori
kemudian dihitung. Kandungan metabolit diidentifikasi berdasarkan tes histrokimia. Kepadatan struktur
sekretori dihitung menggunakan rumus berikut (Dimodifikasi dari Willmer 1983)

Analisis histokokimia

Untuk analisis histrokimia, batang segar dibagi secara tranversely, pada 20 - 25 μm dengan
menggunakan mikrotoma dualpurpose (Yamato RV-240). Bagian batang kemudian diobati dengan
berbagai reagen dan diamati oleh mikroskop cahaya untuk mengidentifikasi keberadaan terpenoid,
alkaloid, fenol, dan flavonoid. Terpenoid dalam jaringan batang diidentifikasi dengan merendam bagian
dalam larutan asetat cupric 5%. Hasil positif ditunjukkan dengan munculnya warna kuning atau kuning
kecoklatan. Kehadiran alkaloid diuji dengan merendam bagian dalam reagen Wagner. Hasil positif
ditunjukkan oleh adanya endapan coklat atau kuning kemerahan [14]. Untuk uji fenol, bagian sampel
direndam dalam 10% triklorida besi dan ditambahkan dengan beberapa serpihan natrium karbonat,
kemudian diinkubasi selama 15 menit dalam suhu kamar. Hasil positif ditunjukkan oleh munculnya
warna hijau tua atau hitam [15]. Untuk kandungan flavonoid, bagian sampel diperlakukan dengan 5%
aluminium triklorida (AlCl3) dalam etanol 85% dan diamati dengan mikroskop fluoresensi. Hasil positif
ditunjukkan oleh munculnya warna kuning, kuning kehijauan, atau biru [16].

Ekstraksi tanaman

Sampel kering dipotong kecil-kecil dan digiling menjadi bubuk. Bubuk itu diekstraksi
menggunakan metode maserasi dengan metanol sebagai pelarutnya. Hasil ekstraksi kemudian diuapkan
menggunakan rotary evaporator. Ekstrak kemudian diencerkan menggunakan 10% dimethyl sulfoxide
(DMSO) menjadi konsentrasi 25, 50, 75, dan 100 mg / mL.

Tes antibakteri

Aktivitas antibakteri diuji menggunakan metode difusi yang baik [17]. Kultur murni Escherichia
dan Staphyllococcus aureus ditanam dalam media agar-agar nutrisi steril dan tersuspensi dalam media
kaldu nutrisi steril. Kultur diinkubasi pada suhu 37ºC selama 24 jam dan kemudian dimasukkan kembali
dalam 1% agar-agar nutrisi cair. Sumur agar-agar disiapkan dengan menggunakan penggerek gabus yang
disterilkan dengan diameter 7 mm. Sebanyak 50 μL konsentrasi yang berbeda dari T. scandens ekstrak
batang (100, 75, 50, dan 25 mg / mL) ditambahkan ke sumur di piring. Selain itu, 50 μg / mLtetracycline
antibiotik digunakan sebagai positif dan 10% DMSO sebagai kontrol negatif. Kultur diinkubasi selama 24
jam pada suhu 37ºC. Aktivitas antimikroba diukur sebagai diameter (mm) dari zona penghambatan
pertumbuhan yang jelas. Semua percobaan dilakukan dalam triplicates.

HASIL DAN DISKUSI

 Struktur sekretori

Pada batang T. scandens, kami mengamati dua jenis struktur sekretori yaitu sel idiblas dan
trikoma kelenjar (Gambar 1). Sel-sel idiblas diklasifikasikan sebagai struktur sekretori internal sedangkan
trikoma adalah struktur eksternal. Sel-sel idioblast mungkin secara morfologis tidak dapat dibedakan
dari tetangga mereka kecuali bahwa mereka mengandung bahan yang disekresikan, atau mereka
mungkin berbeda sampai batas tertentu. Ini bulat, ellipsoidal, atau bercabang dan mungkin
mengandung karbohidrat, lipid, dan turunan fenolik. Sel-sel idioblast bervariasi dalam bentuk dan
ukuran. Misalnya, dalam kultur suspensi peganum harmala L. sel, dilaporkan bahwa idiblas yang
mengandung alkaloid berbentuk bulat, oval, dan memanjang [18]. Sel idiblas dalam batang T. scandens
bersifat heksagonal dan menyebar di daerah pith. Iranbakhsh (2006) menemukan bahwa sel-sel idiblas
di Datura stramonium semi-hyaline callus adalah bentuk bulat atau oval. Mereka memiliki dinding sel
tebal dan vakuola pusat besar.

Trikoma adalah hasil dari sel-sel epidermis dan bervariasi dalam ukuran dan kompleksitas,
termasuk skala dan struktur lainnya dan mungkin kelenjar atau menyengat jenis. Trikoma kelenjar T.
scandens bersifat uniseluler dan terletak di permukaan epidermis. Struktur sekretori dalam bentuk
trikoma telah dipelajari secara luas, terutama di Lamiaceae dan Asteraceae. Salvia aurea yang termasuk
dalam keluarga Lamiaceae memiliki dua jenis trikoma kelenjar, yaitu peltate dan capitate trichomes.
Monteiro (2001) melaporkan adanya trikoma kelenjar biseriat tencelled pada kedua permukaan daun
Stevia rebaudiana yang termasuk dalam keluarga Asteraceae.

Analisis histokokimia

Tes histokimia sel-sel idiblas menunjukkan hasil positif untuk terpenoid yang dikonfirmasi oleh
warna kuning kecoklatan dengan reagen asetat cupric. Kehadiran alkaloid ditunjukkan oleh
pembentukan fenol yang mengandung positif yang ditunjukkan oleh pembentukan deposit coklat
kemerahan dengan reagen Wagner. Sel-sel idioblast positif mengandung fenol yang ditunjukkan oleh
pembentukan warna gelap ketika sampel ditambahkan dengan reagen triklorida Ferric (Gambar 2). Hasil
tersebut sesuai dengan Kulip et al. (2010) [22] yang telah melaporkan T. scandens mengandung alkaloid,
terpenoid, dan fenol. Analisis histokimia telah dipelajari secara luas pada sel-sel idioblast. Sel-sel
idioblast di Catharanthus roseus dilaporkan mensintesis alkaloid dalam bentuk vindoline dan sel-sel
idiblas Sambucus racemosa mengakumulasi fenol dalam bentuk tanin. Dalam penelitian ini, analisis
histrokimia pada trikoma kelenjar menunjukkan adanya flavonoid, dikonfirmasi dengan munculnya
warna kuning setelah sampel ditambahkan dengan aluminium triklorida (Tabel 1). Analisis histrokimia
trikoma telah banyak dipelajari dalam keluarga Lamiaceae. Gersbach (2001) melaporkan bahwa Thymus
vulgaris dan Oreganum vulgare memiliki trikoma peltate yang mengandung fenol. Peltate trichome
dalam Salvia officinalis mengandung alkaloid, terpenoid, dan flavonoid.

Idioblast yang mengandung alkaloid memiliki bentuk yang sama dengan yang lain yang
mengandung terpenoid, semuanya heksagonal. Namun, mereka berbeda dalam ukuran dan
kepadatannya. Sel-sel idioblast yang mengandung terpenoid sedikit lebih besar daripada yang
mengandung alkaloid, dan mereka dua kali lebih besar daripada yang mengandung fenol (Tabel 2).
Panjang dan lebar sel-sel idioblast yang mengandung terpenoid sedikit lebih besar dari yang lain.
Hasilnya sesuai dengan Lima et al. (2014) yang menggambarkan keluarga Dilleniaceae memiliki
terpenoid dan flavonoid sebagai senyawa metabolit sekunder utamanya. Spesies lain dari keluarga yang
sama, Dillenia pentagyna, menghasilkan dua jenis glikosida flavonoid, naringenin 7-galactosyl (1 + 4)
glukosida dan dihydroquercetin 5-galactoside .

Aktivitas antibakteri ekstrak batang T. scandens

Ekstrak batang T. scandens memiliki aktivitas penghambatan terhadap S. aureus dan E.,
ditunjukkan dengan munculnya zona penghambatan (Gambar 3). Menurut Aneja et al. (2012) [28],
senyawa metabolit dianggap memiliki aktivitas penghambatan terhadap pertumbuhan bakteri setelah
ukuran zona penghambatannya lebih besar dari diameter sumur. Hasil tes menunjukkan zona
maksimum penghambatan terhadap kedua bakteri pada konsentrasi ekstrak 100 mg / mL masing-
masing 17,7 mm dan 12,5 mm (diameter sumur adalah 7 mm) (Tabel 3). Pada konsentrasi terendah (25
mg / mL), ekstrak batang masih menunjukkan aktivitas penghambatan terhadap kedua bakteri dengan
zona penghambatan maksimum, masing-masing 12,3 mm dan 9,0 mm. Piper betle dikenal memiliki
aktivitas antimikroba yang kuat. Ekstrak metanol dari P. betle pada konsentrasi 500 mg / mL
menunjukkan zona maksimum penghambatan terhadap S. aureus dan E., masing-masing 25 mm dan 15
mm [29].

Ekstrak batang T. scandens menunjukkan aktivitas penghambatan yang lebih tinggi terhadap
pertumbuhan S. aureus dibandingkan dengan E.. Aktivitas penghambatan antibakteri terhadap bakteri
gram positif lebih jelas daripada terhadap bakteri gram negatif. Ada, sebagian, dasar morfologis untuk
kerentanan diferensial. E., sebagai bakteri gram negatif, memiliki membran luar yang terutama terdiri
dari lipopolisakarida, yang agak kedap terhadap molekul lipofilik, seperti yang disarankan oleh resistensi
kuat strain tipe liar terhadap antibiotik hidrofobik, deterjen, dan pewarna hidrofobik. Membran luar juga
bertindak sebagai penghalang selektif untuk molekul hidrofilik dengan batas pengecualian sekitar 600
Da untuk gula dan peptida [31, 32]. Bakteri gram positif tidak memiliki membran luar ini tetapi memiliki
lapisan peptidoglikan yang jauh lebih tebal, yang bukan merupakan penghalang permeabilitas yang
efektif untuk zat terlarut hidrofilik karena batas pengecualiannya mendekati 105 Da [33].

Senyawa antibakteri mampu menjadi bakteriostatik, bakterisida, dan bakteriostatik. Sebagian

besar agen antibakteri yang digunakan untuk pengobatan infeksi bakteri dapat dikategorikan sesuai
dengan cara kerja prinsip mereka . Mode tindakan yang paling umum adalah merusak dinding sel,
menghambat sintesis protein dan asam nukleat, menghambat permeabilitas sel, dan menghambat
aktivitas enzim. Mekanisme tersebut menghambat pertumbuhan bakteri, ditunjukkan dengan zona yang
jelas pada media yang mengandung ekstrak tanaman yang diduga mengandung senyawa anti-bakteri.
Antibiotik yang digunakan sebagai kontrol positif dalam penelitian ini adalah tetrasiklin, senyawa
spektrum luas yang mampu menghambat bakteri gram positif dan gram negatif dengan menghambat
sintesis protein. Kontrol negatif yang digunakan adalah 10% DMSO yang merupakan pelarut untuk
ekstrak batang. Pelarut ini digunakan sebagai perbandingan untuk mengamati efek pelarut pada zona
penghambatan yang dihasilkan oleh ekstrak.

Studi tentang aktivitas antibakteri keluarga Dilleniaceae banyak. Wiart et al. (2004) [35]
melaporkan bahwa Dillenia suffruticosa mampu menghambat Bacillus cereus, B. subtilis, Candida
albicans, dan Pseudomonas aeruginosa. Ekstrak metanol dari davilla elliptica dan daun Davilla nitida
berpotensi untuk menghambat Helicobacter pylori. Kemampuan ekstrak batang T. scandens dalam
menghambat aktivitas bakteri adalah karena kandungan metabolitnya. Tes hisokimia mengungkapkan
bahwa batang T. scandens mengandung fenol, alkaloid, terpenoid, dan flavonoid. Menurut Ahmad et al.
(2014) [37], flavonoid dalam bentuk 3',4',5,7 tetramethoxyflavone mampu menghambat pertumbuhan
S. aureus. Djoukeng et al. (2005) [38] melaporkan bahwa ekstrak daun Syzygium guineense (Myrtaceae)
mengandung terpenoid dalam bentuk asam asia dan campuran asam terminolik, membuatnya mampu
menghambat pertumbuhan E., B. subtilis, dan Shigella sonnei . Fenol dalam bentuk hidrokuinon mampu
menghambat pertumbuhan S. aureus dan E. coli[39]. Sifat-sifat ini dapat menjelaskan mekanisme kerja
ekstrak tanaman. Pemurnian lebih lanjut dari prinsip-prinsip antibakteri dalam ekstrak diperlukan. Zat-
zat seperti itu dalam keadaan dimurnikan mungkin berguna untuk pengobatan kondisi ini.

KESIMPULAN

Batang T. scandens memiliki sel idiblast dan trikoma kelenjar uniseluler sebagai struktur
sekretorinya. Reaksi hisokimia menunjukkan zat yang disekresikan oleh sel idiblast T. scandens
terutama mengandung alkaloid, terpenoid, dan fenol. Trikoma kelenjar T. scandens hanya mengandung
flavonoid. Ekstrak batang T. scandens memiliki potensi sebagai agen antibakteri terhadap S. aureus dan
E.. Ekstrak batang pada konsentrasi 100 mg / mL menunjukkan aktivitas penghambatan terbaik.

PENGAKUAN

Para penulis menyampaikan apresiasi yang sebesar-besarnya kepada Direktorat Jenderal

Pendidikan Tinggi melalui pendanaan BOPTN tahun 2015 karena telah memberikan dukungan keuangan
untuk penelitian ini.