PRIMACO GROUP No. Dokumen : IK.

APL-08
STANDAR OPERASIONAL PROSEDUR Terbitan/Tgl : 3/ 10-02-2017
Divisi : Sales & Marketing Revisi/Tgl : 2/10-02-2017
Bagian : Aplikasi Staff Halaman 1 dari 8

UJI AgregasiTrombosit
1. Tujuan
Standar operasional prosedur ini ditetapkan dan dipelihara untuk memberikan
pedoman cara pengujian Agregasi Trombosit sehingga personil yang melakukan
pengujian dapat mengoperasikan dengan benar dan sistematis sesuai dengan
prosedur.

2. Ruang Lingkup
Standar operasional prosedur ini diterapkan oleh personil Laboratorium yang berwenang agar
mampu melakukan pemeriksaan Agregasi Trombosit dengan prinsip pemeriksaan
menggunakan metode Turbidimetrik menurut Born.

3. Definisi
Agregasi Trombosit bertujuan untuk mendeteksi abnormalitas fungsi trombosit yang dapat
meningkatkan agregasi trombosit yang menimbulkan thrombosis akibatnya pembuluh darah
menjadi tersumbat. Paling sering dikerjakan menggunakan analyzer berdasarkan perubahan
transmisi cahaya.

4. Acuan
-

5. TanggungJawab
Analis Laboratorium yang telah ditetapkan sesuai uraian tugasnya untuk melaksanakan
pengoperasian Agregometer Chrono-Log Model 490 bertanggungjawab dan berwenang untuk
melakukan pengoperasian termasuk perawatannya.

6. Tahapan
6.1. Umum
Selama pengoperasian Agregometer Chrono-Log Model 490, personil yang bersangkutan
harus melakukan pengecekan kelayakan peralatan tersebut seperti setting optical
baseline. Tujuan membuat garis baseline untuk menentukan batas atas transmisi 100%
dengan PPP dan batas bawah transmisi 0% dengan PRP (trace 1,2,3 dan 4) menggunakan
Blanko Aquades.

Dibuat Oleh: Diperiksa Oleh: Disahkan Oleh:

 PRIMACO GROUP No. Dokumen : IK.APL-08
STANDAR OPERASIONAL PROSEDUR Terbitan/Tgl : 3/ 10-02-2017
Divisi : Sales & Marketing Revisi/Tgl : 2/10-02-2017
Bagian : Aplikasi Staff Halaman 2 dari 8

6.2. Prosedur Pengecekan Alat

6.2.1. Pre Cek Calibration
- Siapkan Dua Kuvet yang telah diisi Aquadest 500 µL
- Nyalakan Alat, suhu harus 37oC.
- Klik RUN NEW, isi :
Test Identifikasi : PRE CEK CALIBRATION
- Atur Tombol/Swicth “PRP Sample” ke masing – masing channel.
- Masukkan kuvet ke Lubang “PPP” pada Channel 1, Tekan & Tahan Tombol “Set
Baseline” pada Channel 1, Perhatikan Grafiknya. Setelah grafik naik ke titik 100
Lepaskan.
- Masukkan kuvet lainnya ke lubang PPP. Perhatikan pergerakan grafik. Jika grafik
melebihi angka 100 atau kurang dari 100, Channel tersebut perlu dilkukan “Key
Calibration/Kalibrasi Kunci”.
- Angkat kuvet dari lubang PRP Channel 1, Pindahkan ke Lubang Channel 2, Lakukan
Baseline.
- Lakukan hal yang sama untuk channel 3 & 4.

6.3. Peringatan dan Tindakan Pencegahan

6.3.1. Pra analitik
Bahan pemeriksaan adalah darah sitrat dengan perbandingan darah : Na-Sitrat 3,2%
9:1, bila nilai hematokrit 0.40 – 0.50 dan bahan tersebut harus diletakkan pada suhu
kamar 24 – 27oC. Bila subjek menunjukkan nilai hematokrit diluar nilai tersebut
diatas dipakai formula sebagai berikut :

Volume darah (mL) = 0,6 x 9 Volume

antikoagulan (1mL) 1 – nilai hematokrit

Trombosit yang disimpan pada suhu kamar lebih sensitive terhadap ADP dari pada
disimpan pada suhu 37oC. Pemeriksaan agregasi trombosit dilakukan paling cepat
30 menit dan pemeriksaan harus selesai 3 jam setelah pengambilan darah, karena
PRP yang disimpan lebih dari 3 jam pada suhu kamar akan menyebabkan
kemampuan agregasi berkurang. Faktor yang mempengaruhi hasil pemeriksaan
adalah puasa, tidak merokok dan tidak makan obat. Untuk pemeriksaan diagnostik
sebaiknya obat yang menggangu fungsi trombosit dihentikan 10-14 hari. Sebaiknya
pasein berpuasa 10 jam (disarankan puasa dimulai setelah makan malam) agar
plasma tidak keruh.

6.3.2. Analitik

Dibuat Oleh: Diperiksa Oleh: Disahkan Oleh:

 PRIMACO GROUP No. Dokumen : IK.APL-08
STANDAR OPERASIONAL PROSEDUR Terbitan/Tgl : 3/ 10-02-2017
Divisi : Sales & Marketing Revisi/Tgl : 2/10-02-2017
Bagian : Aplikasi Staff Halaman 3 dari 8

Pada tahap analitik perlu diperhatikan pembuatan larutan dan penyimpanan ADP.
Reagen ADP dilarutkan dengan larutan salin 0.9% (Otsuka). Larutan ADP yang telah
diencerkan sebaiknya disimpan pada suhu -70 oC, bila disimpan 2 – 8oC bertahan 8
jam. Jumlah trombosit yang terdapat di dalam PRP sebaiknya 200.000 – 300.000/µL.

6.3.3. Pasca analitik

Perhatikan grafik hasil agregasi trombosit dengan memperhatikan bentuk kurva dan
nilai maksimal agregasi.

6.4. AlatdanBahan
6.4.1. Alat
- 1 Set agregometer Chrono-Log model 490.
- Mikropipet volumetrik 5 µL untuk melarutkan ADP.
- Pipet otomatik 500 µL untuk memindahkan PPP dan PRP.
- Pipet semi otomatik variable 10 – 100 µL untuk pengenceran reagen ADP.
- Tabung Sitrat yang berisi 1 mL Na-Sitrat 3.2%
- Stopwacth
- Tissue
- Pipet tip
- Stir bar
- Kuvet
- Sentrifus dengan swing rotor

6.4.2. Bahan
- Reagen ADP konsentrasi 10 µM, 5 µM, 2 µM dan 1 µM.
- Darah pasien sebanyak 9.0 mL dengan antikoagulan sitrat (disarankan tabung
ukuran 3 – 9 ml). Tabung ukuran 2 mL dapat mempengaruhi hasil.
- Jarum suntik disarankan ukuran 19G – 21G. Untuk menghindari spontan
agregasi atau clot pada sampel darah pasien.

6.5. Prosedur
6.5.1. Pembuatan Larutan ADP 10 µM, 5 µM, 2 µM dan 1 µM
 ADP Konsentrasi 10 µM
Reagen ADP dalam botol dilarutkan dengan NaCL 0.9% sebanyak 5 mL
homogenkan. Bagi menjadi 125 microtube masing-masing berisi 40 µL. (sesuai
kebutuhan, disesuaikan dengan banyaknya pasien). Simpan dalam freezer -70°C,
tahan 1 tahun. Bila akan digunakan, keluarkan microtube berisi 40 µL ADP, dari
dalam freezer. Biarkan mencapai suhu ruangan. Penyimpanan larutan ADP
dalam freezer lemari es tidak akan mencapai ketahanan 1 tahun. Larutan ADP

Dibuat Oleh: Diperiksa Oleh: Disahkan Oleh:

 PRIMACO GROUP No. Dokumen : IK.APL-08
STANDAR OPERASIONAL PROSEDUR Terbitan/Tgl : 3/ 10-02-2017
Divisi : Sales & Marketing Revisi/Tgl : 2/10-02-2017
Bagian : Aplikasi Staff Halaman 4 dari 8

yang telah dicairkan tahan selama 8 jam pada suhu 2 – 8 oC. Disarankan agar ADP
yang telah di encerkan di ganti setiap 2 Minggu sekali.
 ADP Konsentrasi 5 µM
Buat pengenceran 1:1 (5 µL ADP konsentrasi 10 µM + 5 µL NaCl 0.9%)
 ADP Konsentrasi 2 µM
Buat pengenceran 1:4 (5 µL ADP konsentrasi 10 µM + 20 µL NaCl 0.9%)
 ADP Konsentrasi 1 µM
Buat pengenceran 1:9 (5 µL ADP konsentrasi 10 µM + 45 µL NaCl 0.9%)

6.5.2. Pembuatan Platelet Rich Plasma (PRP) dan Platelet Poor Plasma (PPP)
6.5.2.1. Platelet Rich Plasma (PRP)
Darah pasien sebanyak 9.0 mL dimasukan dalam tabung vakum yang
telah berisi 1 mL na sitrat 0.109M. Darah tersebut disentrifus 1000 rpm
selama 15 menit (100g / 15 menit). Plasma yang diperoleh adalah PRP.
Jumlahtrombosit PRP harus 200.000 – 300.000/µL, jika jumlah trombosit
100.000/µL sulit untuk setting optical baseline. Pisahkan PRP yang di
dapat ke tabung plastik. Masukkan kedalam kuvet yang berisi stir bar.

6.5.2.2. Platelet Poor Plasma (PPP)

Sisa darah yang telah disentrifus diatas disentrifus lagi 3500 rpm selama
15 menit (2400g/20 menit). Plasma yang diperoleh adalah PPP.
Masukkan kedalam kuvet tanpa stir bar.
Note : sentrifus harus dilakukan sesuai dengan prosedur, bila tidak akan
menyebabkan hasil yang salah.

6.5.2.3. Pedoman Pemeriksaan

 Nyalakan alat, tunggu sampai temperature mencapai 37°C. Ditandai
dengan anak panah menunjukan 37°C pada display, biasanya ditunggu
10-15 menit. Suhu incubation wells 36.5 ± 1.0°C : heater block 37±
0.2°C.
 Nyalakan computer.
Jalankan program aggrolink.
Klik :
RUN
NEW
Isi :
- Test Identification : No. Lab
- Last Name : nama pasien
- First Name : kosongkan
- ID : No. Lab

Dibuat Oleh: Diperiksa Oleh: Disahkan Oleh:

 PRIMACO GROUP No. Dokumen : IK.APL-08
STANDAR OPERASIONAL PROSEDUR Terbitan/Tgl : 3/ 10-02-2017
Divisi : Sales & Marketing Revisi/Tgl : 2/10-02-2017
Bagian : Aplikasi Staff Halaman 5 dari 8

- Lab : RS. Puri Indah

- Blood draw time : Jam pengambilan
Catatan : Jangan tekan OK dulu pada computer.

 Pemeriksaan :
Ke dalam kuvet yang disediakan, pipet sebagai berikut :

PRP PRP PRP PRP

Tabung PPP
(trace 1) (trace 2) (trace 3) (trace 4)
Sampel 500 µL 500 µL 500 µL 500 µL 500 µL
Stirrer bar - + + + +

Masukkan kuvet yang sudah berisi PPP dan PRP ke tempatnya masing-masing
pada alat. Nyalakan timer (timer pada posisi ON), inkubasi selama 3 menit
(menggunakan Stopwatch).

Klik OK pada komputer.

Setelah terlihat titik mula grafik, tentukan baseline 1 dengan menekan tombol
hitam pada aggregometer (tombol baseline), sampai terlihat garis mencapai
angka 100, lalu lepas, garis akan kembali ke angka 0. Tekan tombol sekali lagi,
langsung lepas. Lakukan prosedur ini pada tombol set baseline 2,3 & 4.

Klik STOP

Klik RERUN
(Note : jangan di OK dahulu, persiapkan pemipetan ADP, baru di OK)

 Setelah kelihatan mulainya garis grafik, pipet ADP sebagai berikut :

Tabung PRP 500 uL (trace 1)
ADP konsentrasi 10 µM 5 µL

Bila grafik telah menyentuh garis transmisi 0, Klik trace 1 pada grafik

Tabung PRP 500 uL (trace 2)

ADP konsentrasi 5 µM 5 µL
Bila grafik telah menyentuh garis transmisi 0, Klik trace 2 pada grafik

Tabung PRP 500 uL (trace 3)

ADP konsentrasi 2 µM 5 µL

Dibuat Oleh: Diperiksa Oleh: Disahkan Oleh:

 PRIMACO GROUP No. Dokumen : IK.APL-08
STANDAR OPERASIONAL PROSEDUR Terbitan/Tgl : 3/ 10-02-2017
Divisi : Sales & Marketing Revisi/Tgl : 2/10-02-2017
Bagian : Aplikasi Staff Halaman 6 dari 8

Bila grafik telah menyentuh garis transmisi 0, Klik trace 3 pada grafik

Tabung PRP 500 uL (trace 4)

ADP konsentrasi 1 µM 5 µL
Bila grafik telah menyentuh garis transmisi 0, Klik trace 4 pada grafik

Biarkan grafik mencapai 8 menit (terlihat pada display)

Klik STOP
Jika lebih dari 10 menit maka:
Klik View,klik Set Grape Range isi kolom menit ( 10 )
Klik CALCULATE Ok

Klik SAVE, Ok
Note : Jika ada kesalahan penulisan nama atau id Pasien atau menambahkan
tulisan pada kolom comment caranya : Klik Edit, klik Test Information isi

datanya klik Ok, Klik SAVE, Ok.

7. InterpretasiHasil
Nilai Normal
ADP 1 µM 3 – 15%
ADP 2 µM 11 – 36%
ADP 5 µM 25 – 68%
ADP 10 µM 49 – 84%

7.1.Agregasi trombosit menurun

Dibuat Oleh: Diperiksa Oleh: Disahkan Oleh:

 PRIMACO GROUP No. Dokumen : IK.APL-08
STANDAR OPERASIONAL PROSEDUR Terbitan/Tgl : 3/ 10-02-2017
Divisi : Sales & Marketing Revisi/Tgl : 2/10-02-2017
Bagian : Aplikasi Staff Halaman 7 dari 8

7.2. Agregasi Trombosit Meningkat

7.3. Agregasi Trombosit Normal

Dibuat Oleh: Diperiksa Oleh: Disahkan Oleh:

 PRIMACO GROUP No. Dokumen : IK.APL-08
STANDAR OPERASIONAL PROSEDUR Terbitan/Tgl : 3/ 10-02-2017
Divisi : Sales & Marketing Revisi/Tgl : 2/10-02-2017
Bagian : Aplikasi Staff Halaman 8 dari 8

8. Rekaman
8.1. Hasil Pengujian Sampel Uji

9. Lampiran
9.1. Lampiran Tabel Obat yang menghambat agregasi trombosit.

10. Referensi
- Uji Ketelitian dan Nilai rujukan Agregasi Trombosit dengan Agonist ADP pada orang Indonesia
dewasa di Jakarta menggunakan Agregometer Chrono-Log Model 490 (Oleh Prof. dr. Riadi
Wirawan, SpPK (K)).

Dibuat Oleh: Diperiksa Oleh: Disahkan Oleh: