Tutor Hematologi

Sel LE

dr. Munawaroh fitriah / dr. Arifoel H. Sp.PK

1
 Pendahuluan

Systemic Lupus Erythematosus (SLE)

Berasal dari bahasa latin “Serigala”

Merupakan penyakit autoimun sistemik.

Sistem imun tubuh memproduksi autoantibodi
(terutama terhadap Inti sel & komponen inti sel)

Inflamasi &kerusakan berbagai jaringan dan

organ.
2
 Pendahuluan

●
Wanita >> daripada pria (9:1)
Epidemiologi ●
Usia onset terbanyak 20 – 45 tahun
●
Lebih sering pada ras afrika-amerika; asia

●
Masih belum diketahui.
●
Diduga faktor genetik; dipicu faktor hormonal,
Penyebab lingkungan (sinar UV) &obat-obatan
●
Patogenesis : Teori kelainan apoptosis

●
Gejala klinis beragam
Gejala ●
“great imitator”
3
Diagnosis SLE
Kiteria American college of rheumatology :
 Serositis
 Oral ulcer
 Photosensitivitity
 Kelainan hematologi (leukopenia, limfopenia,
trombositopenia atau anemia hemolitik)
 Kelainan ginjal (proteinuria atau cast)
 Kelainan neurologi
 Malar rash
 Discoid rash 4
Diagnosis SLE
• Antinuclear antibodies (ANAs)
• Immunologic phenomena
– dsDNA
– anti-Smith (Sm) antibodies
– antiphospholipid antibodies (anticardiolipin
immunoglobulin G [IgG] or immunoglobulin M
[IgM] or lupus anticoagulant)
– lupus erythematosus (LE) cells
– biologic false-positive serologic test results for
syphilis
5
http://emedicine.medscape.com/article/332244-workup
 Sel LE
• Pertama kali dikemukakan hargraves
&Morton tahun 1948
• Sampel : hapusan sumsum tulang &
darah tepi

Nukleus yang difagosit oleh leukosit PMN

Fenomena sel LE karena adanya

imunoglobulin dalam plasma pasien 
faktor LE
6
 Faktor LE

Terdapat pada serum pasien

Merupakan suatu Imunoglobulin G

Suatu antibodi terhadap DNA, nukleoprotein

atau histon

Menginduksi terbentuknya sel LE.

7
 Pembentukan Sel LE

• Memerlukan inti leukosit rusak, faktor

LE, dan leukosit PMN viable.

8
 Pembentukan sel LE

Faktor LE
+ Badan Netrofil Sel
Inti sel LE viable LE
leukosit
(rusak)

9
10
 Metode pemeriksaan sel LE

1. Mereaksikan serum pasien dengan

leukositnya sendiri.
 Darah heparin (heparinized blood)
 Darah beku (clotted blood)
 Defibrinated blood

2. Mereaksikan serum pasien dengan

leukosit normal
11
Darah beku ( clotted blood)

10 ml darah vena dimasukkan dalam plain tube

dibiarkan beku pada suhu kamar selama 2 jam.

bekuan darah diletakkan pada saringan diatas cawan

petri

Bekuan darah pada saringan digerus

Masukkan darah dari cawan petri ke dalam 3 -4

tabung wintrobe
12
Darah beku ( clotted blood)

Sentrifus pada kecepatan 2500 rpm selama 20 menit

Buang serum dengan pipet disposable

Ambil lapisan buffy coat dengan pipet disposable

Letakkan pada kaca objek
Buat hapusan dan cat dengan wright

13
Darah Heparin (heparinized blood)

Gunakan 5 ml darah vena yang dicampur dengan

0,5 ml heparin.

Tambahkan 5 buah glass beads ke dalam tabung.

.

Inkubasi dalam suhu ruang selama 30 menit

Campur dalam rotator selama 30 menit

14
 …lanjutan

Inkubasi ulang dalam suhu ruang selama 1 jam

Pindahkan darah ke dalam tabung wintrobe

sentrifus pada 2500 rpm selama 20 menit

Buang plasma dengan pipet

Ambil lapisan buffy coat dengan pipet

letakkan pada kaca objek,
buat hapusan dan cat dengan wright.
15
Defibrinated blood
15 ml whole blood dimasukkan ke dalam labu
erlenmeyer yang berisi 15 glass beads
Goyang dengan gerakan memutar selama 10 menit
atau sampai tidak terdengar suara gelas lagi

Inkubasi pada suhu 37 ⁰c selama 3 – 4 jam

Masukkan darah defibrinasi dalam tabung wintrobe

sentrifus pada kecepatan 2500 rpm selama 20 menit

Ambil lapisan buffy coat

Buat hapusan dan cat dengan pewarnaan romanowsky 16
Mereaksikan serum pasien dengan
leukosit normal
• Spesimen : Darah beku (clotted blood) pasien
(5ml) & darah heparin golongan O (5 ml) dari
orang normal
• Prosedur :
 Serum :
Darah vena pasien dibiarkan beku pada suhu kamar.
Serum diambil atau disimpan sampai digunakan

 Suspensi leukosit normal :

Darah heparin golongan O di sentrifus 1500 rpm
selama 5 menit.
17
 … lanjutan

 Suspensi Leukosit Normal

Dengan pipet pasteur buang sebagian besar sel darah
merah bagian bawah
Sisanya di resuspensi kemudian dipindahkan dalam
tabung wintrobe.
Biarkan dalam suhu 37 ⁰C selama ± 45 menit hingga
didapatkan 1 – 2 ml plasma
Plasma dipindahkan ke dalam tabung untuk dilakukan
pencucian dengan saline.
Sentrifus 1000 rpm selama 5 menit
Buang keluar supernatan (bagian yang jernih). Simpan
pool leukosit 18
 … lanjutan

 Campur 5 tetes serum pasien + 5 tetes

suspensi leukosit normal dalam suatu
tabung,tambahkan 3 glass beads sambil
digoyang secara berputar. inkubasi pada 37
⁰C selama 30 menit.
 Pindahkan dalam tabung wintrobe dan
sentrifus dengan kecepatan 2500 rpm selama
10 menit.
 Ambil lapisan buffy coat, buat hapusan dan
pengecatan dengan pewarnaan romanowsky.
19
 Metode di PK RSU dr. soetomo
5 ml Darah vena (tanpa antikoagulan) dibiarkan beku pada
suhu ruang selama 1 – 2 jam

Sebagian serum dibuang, bekuan darah dihancurkan

dengan mortir.
Setelah halus, darah diambil dengan tabung kapiler &
tutup dengan lilin (seal).

20
 … lanjutan
Dibiarkan selama 10 – 15 menit agar terjadi fagositosis.

Sentrifus dengan kecepatan 2500 rpm selama 15 menit.

Ambil lapisan buffy coat dan buat hapusan

Dilakukan pengecatan dengan giemsa atau wright.

Dilihat dengan mikroskop pembesaran 1000x.

21
Syarat pembacaan :

1. 3 hapusan buffy coat

2. Diperiksa dengan mikroskop pembesaran
1000x selama minimal 10 menit.

22
 Sel LE
• Netrofil yang
mengandung ‘large
spherical body’
(badan LE) pada
sitoplasmanya.
• Badan LE tidak
memiliki struktur inti,
tampak seperti
massa homogen
berwana ungu
pucat.
• Inti neutrofil
terdorong ke
samping.
23
Sumber : images.rheumatology.org
Sel LE

24
 Interpretasi

+ Bila ditemukan minimal 2

●

sel LE

- Bila didapatkan kurang dari

●

2 sel LE

25
Membedakan sel tart

Sel LE Sel Tart

• Sel netrofil yang • Sel monosit yang
memfagosit inti leukosit memfagosit leukosit lain /
lain (yang rusak) inti leukosit lain (limfosit)
• Massa inti leukosit yang • Massa inti leukosit yang
terfagosit tampak terfagosit masih nampak
globular, homogen. struktur intinya / benang
kromatin.

26
 Sel LE Sel Tart

Sumber : www.mlo-online.com 27
Sel LE

Positif palsu Negatif palsu

• Rheumatoid arthritis • SLE dalam terapi

• Hepatitis kortikosteroid
• Interaksi obat • Leukopenia
( penisilin,
antikonvulsan,
metildopa, hidralazin)

28
TERIMA KASIH

29
 The LE cell.

Hepburn A L Rheumatology 2001;40:826-827

30
© British Society for Rheumatology
 Fig. 2

31
Mayo Clinic Proceedings 1999 74, 936-938DOI: (10.4065/74.9.936)
Copyright © 1999 Mayo Foundation for Medical Education and Research Terms and Conditions
• Beda sel LE dengan wright / giemsa (X)
• Beda sel tart vs sel Le
• Kenapa heparin? Kl EDTA?
• Kenapa Sel LE harus netrofil? Kl sel lain kok bukan Sel
LE???
• Test utk deteksi faktor LE brown 186. 7
• Kl scr scr in vivo gmn faktor LE bereaksi dengan sel
nukleus?
• Beda wright +giemsa + gambar (X)
• Kenapa bs positif palsu /negatif palsu
• Sumber my diagnosis criteria!!!!!!! (X)
32
 Pembentukan Sel LE

• Serum pasien yang mengandung fraksi

gama globulin (LE factor) secara
langsung bereaksi dengan inti leukosit.
• Interaksi inti leukosit denga LE factor
membentuk LE body yang homogen,
bulat dan amorf.
• LE body menarik netrofil sehingga
difagosit oleh netrofil membentuk suatu
sel LE. 33
34
35
36
Work up criteria

37
Work up criteria

emedicine.medscape.com/article/332244-workup 38
39
Rheumatology oxford journal (2002) 41 (3): 343-345. 40
African Journal of Biomedical Research, Vol. 8, No. 3, 2005, pp. 135-137

41
42
Rheumatology oxford journal (2002) 41 (3): 343-345. 43
44
45
Sumber : www.mlo-online.com 46
The Journal of
Investigative
Dermatology
(1952) 19, 333–336

47
Rheumatology oxford journal (2002) 41 (3): 343-345 48
49
http://bloodjournal.hematologylibrary.org/content/13/9/883.full.html 50
Journal Ann. rheum. Dis. (1961), 20, 281.
51
52
Sensivitas dan Spesifisitas ANA
Autoantibodies Associated CTD Sensitivity Specificity
ANA SLE 93 57
  Sjorgen`s syndrome 48 52
  SS 85 54
  PM/dermatomycositis 61 63
 
Raynaud`s phenomenon    

Specific ANA      

Anti-dsDNA SLE 57 97
Anti-Sm SLE 25-30 High*
Anti-SSA/Ro Sjorgen`s syndrome,subacute cutaneus SLE, 8-70 87
Neonatal lupus syndrome
Anti-SSB/La Sjorgen`s syndrome,subacute cutaneus SLE, 16-40 94
Neonatal lupus syndrome
Anti-U3-RNP SS 12 96
Anticentromere Limited cutaneous SS 65 99.9
Scl-70 SS 20 100
Jo-1 PM 30 95
53
 Kekurangan tes Sel LE

• Time-consuming
• Tergantung dari skill operator
• Spesifisitas rendah

54
55
 56
Arch Patol Lab Med – vol.124, january 2000
57
Drug – induced SLE

58
Acta Cytologica 2013;57:652–654 59
Giemsa Wright

60
Rotator & glass beads

61
62
 Rossete vs LE cell

• Wright-stained smear of the pleural fluid shows a rosette on the left

(arrow) and a LE cell on the right (arrow).

63
British medical Jurnal 03400-0036. 1953. p. 189
64
Sensitivitas sel LE

• About 50% to 75% of patients with lupus

have a positive test.

65

www.medall.in/medall-for-you/tests-procedures/pathology-test/hematology/le-cells/#sthash.rhrt2388.dpuf
Kelainan Apoptosis

66
67
68
 Erythrophagocytosis is another process that
may be confused with the L.E phenomenon. The
ingested red cell in the cytoplasm of the
phagocyte may simulate the inclusion body of
the L.E. cell.

www.nature.com/jid/journal/v24/n3/full/jid195544a.html

69
In vivo

70
71