Laporan Akhir Rotasi Mikrobiologi - Kelompok Saluran Pernafasan

LAPORAN KEGIATAN PPDH
ROTASI DIAGNOSA LABORATORIK MIKROBIOLOGI

yang dilaksanakan di
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI DAN IMUNOLOGI VETERINER
“ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI SALURAN PERNAFASAN PADA UNGGAS”
Oleh :
GELOMBANG X / KELOMPOK 1
FIRDAUS IGNATIUS LUHUNG, S.KH 210130100111021
ISLAH ASYRAF DIARI, S.KH 210130100111040
AIDA MUSLIMATUN AL AZIZAH, S.KH 210130100111066
MIRANDA EKA PUTRI WIBOWO, S.KH 210130100111068
APRILIA ANGGRAENI, S.KH 210130100111093
PROGRAM PENDIDIKAN PROFESI DOKTER HEWAN

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2021
i
LEMBAR PENGESAHAN
ROTASI DIAGNOSA LABORATORIK
“ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI SALURAN PERNAFASAN PADA UNGGAS”
Malang, 1-12 November 2021
Oleh :
Firdaus Ignatius Luhung, S.KH 210130100111021
Islah Asyraf Diari, S.KH 210130100111040
Aida Muslimatun Al Azizah, S.KH 210130100111066
Miranda Eka Putri Wibowo, S.KH 210130100111068
Aprilia Anggraeni, S.KH 210130100111093
Menyetujui,
Komisi Penguji
Penguji I Penguji II
drh. Indah Amalia Amri, M.Si drh. Gegana Wimaldy Airlangga

NIP. 19870925 201903 2 011 NIP. 19950224 201903 1 008
Mengetahui,
Ketua Program Studi Profesi Dokter Hewan
Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Brawijaya
drh. Nofan Rickyawan, M.Sc

NIP. 19851116 201803 1 001
ii
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis haturkan kepada Allah SWT atas berkat dan rahmat-Nya Tim Penulis
mampu menyelesaikan kegiatan serta laporan kegiatan Koasistensi Program Profesi Dokter Hewan
(PPDH) Rotasi Diagnosa Laboratorik di Laboratorium Mikrobiologi dan Imunologi Fakultas
Kedokteran Hewan Universitas Brawijaya. Dengan penuh rasa hormat dan ketulusan hati, penulis
ingin mengucapkan terimakasih kepada :
1. drh. Dyah Ayu Oktavianie A.P., M. Biotech selaku Dekan Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Brawijaya.
2. drh. Nofan Rickyawan, M.Sc selaku Ketua Program Profesi Dokter Hewan (PPDH) Fakultas
Kedokteran Hewan Universitas Brawijaya.
3. drh. Indah Amalia Amri, M.Si dan drh. Gegana Wimaldy Airlangga selaku dosen penguji
PPDH FKH UB Rotasi Diagnosa Laboratorik di Laboratorium Mikrobiologi dan Imunologi
Veteriner yang telah berkenan memberikan bimbingan, waktu, kesabaran, motivasi, dan
bantuan dalam penulisan laporan ini.
4. Seluruh tim dosen dan staff Laboratorium Mikrobiologi dan Imunologi Veteriner FKH UB
yang telah berkenan memberikan bimbingan, arahan, waktu, bantuan, dan fasilitas dalam
pelaksaan kegiatan PPDH Rotasi Diagnosa Laboratorik di Laboratorium Mikrobiologi dan
Imunologi Veteriner FKH UB.
5. Kolega kelompok 2 PPDH Gelombang X yang telah berkontribusi baik secara langsung
maupun tidak langsung dalam pembuatan laporan ini.
Akhir kata, Tim Penulis berharap semoga Allah SWT membalas segala kebaikan serta ketulusan
yang telah diberikan kepada Tim Penulis. Tim Penulis menyadari bahwa dalam penulisan laporan ini
masih jauh dari sempurna. Oleh karena itu Tim Penulis membuka diri untuk segala kritik dan saran
yang membangun.
Malang, 12 November 2021
Tim Penulis
iii
DAFTAR ISI
Halaman
LEMBAR PENGESAHAN ...............................................................................................................ii
KATA PENGANTAR .......................................................................................................................iii
DAFTAR ISI ...................................................................................................................................... iv
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................................................... vi
DAFTAR TABEL ............................................................................................................................vii
BAB I PENDAHULUAN ................................................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ........................................................................................................................... 1
1.2 Rumusan Masalah ...................................................................................................................... 1
1.3 Tujuan......................................................................................................................................... 1
1.4 Manfaat ....................................................................................................................................... 2
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ....................................................................................................... 3
2.1 Sistem Pernafasan Unggas ......................................................................................................... 3
2.2 Teknik Pengambilan Sampel ...................................................................................................... 3
2.3 Media Isolasi dan Identifikasi Bakteri........................................................................................ 4
2.3.1 Media Brain Heart Infusion Broth (BHIB) .......................................................................... 4
2.3.2 Media Nutrient Agar Plate (NAP) ....................................................................................... 5
2.3.3 Media Mc Conkey Agar (MCA).......................................................................................... 5
2.3.4 Media Blood Agar Plate (BAP) ........................................................................................... 5
2.3.5 Media Chocolate Agar ......................................................................................................... 6
2.3.6 Media Mannitol salt Agar (MSA)........................................................................................ 6
2.3.7 Media Eosin Methylene Blue Agar (EMBA) ...................................................................... 7
2.3.8 Media Triple Sugar Iron Agar (TSIA) ................................................................................. 7
2.3.9 Media Simmons Citrate Agar (SCA) ................................................................................... 8
2.3.10 Media Urease ..................................................................................................................... 8
2.3.11 Media Methyl-Red (MR) ................................................................................................... 8
2.3.12 Media Voges-Proskauer (VP) ............................................................................................ 8
2.3.13 Media Mueller Hinton Agar (MHA) ................................................................................. 8
2.4 Bakteri pada Saluran Pernafasan ................................................................................................ 9
2.5 Penyakit Bakterial pada Saluran Pernafasan Unggas ................................................................. 9
2.5.1 Chromic Respiratory Disease .............................................................................................. 9
2.5.2 Coryza/ Snot ...................................................................................................................... 11
2.6 Sterilisasi Alat .......................................................................................................................... 12
BAB III METODOLOGI ................................................................................................................ 13
3.1 Tempat dan Waktu Pelaksanaan............................................................................................... 13
iv
3.2 Peserta Kegiatan PPDH ............................................................................................................ 13
3.3 Bahan dan Materi Pemeriksaan ................................................................................................ 14
3.3.1 Sampel yang Diperiksa ...................................................................................................... 14
3.3.2 Alat dan Bahan .................................................................................................................. 14
3.4 Sterikisasi Alat ......................................................................................................................... 14
3.5 Metode Pemeriksaan ................................................................................................................ 14
3.5.1 Pengambilan Sampel ......................................................................................................... 14
3.5.2 Pembuatan Media .............................................................................................................. 15
3.5.3 Isolasi dan Identifikasi Bakteri .......................................................................................... 17
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ......................................................................................... 22
4.1 Hasil.......................................................................................................................................... 22
4.1.1. Sinyalemen dan Anamnesa ............................................................................................... 22
4.1.2 Isolasi dan Identifikasi Bakteri .......................................................................................... 23
4.2 Pembahasan .............................................................................................................................. 38
4.2.1 Escherichia coli .................................................................................................................. 38
4.2.2 Staphylococcus aureus ....................................................................................................... 39
4.2.3 Proteus sp ........................................................................................................................... 40
BAB V PENUTUP ............................................................................................................................ 41
5.1 Kesimpulan............................................................................................................................... 41
5.2 Saran ......................................................................................................................................... 41
DAFTAR PUSTAKA ....................................................................................................................... 42
v
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
2. 1 Saluran Pernafasan Unggas. .......................................................................................................... 3
2. 2 Interpretasi media MCA................................................................................................................ 5
2. 3 Interpretasi media BAP ................................................................................................................. 6
2. 4 Interpretasi hasil media ................................................................................................................. 6
2. 5 Interpretasi hasil media EMBA..................................................................................................... 7
2. 6 Interpretasi hasil media TSIA ....................................................................................................... 7
2. 7 Mycoplasma secara mikroskopik ................................................................................................ 10
2. 8 Gejala klinis ayam yang terkena penyakit coryza ....................................................................... 12
3. 1 Interpretasi hasil dari media TSIA…………………………………………………….………..19
3. 2 Interpretasi hasil media MR-VP ................................................................................................. 19
3. 3 Interpretasi hasil media SCA ...................................................................................................... 20
3. 4 Interpretasi hasil media Urease ................................................................................................... 20
4. 1 Gambar (a) dan (b) merupakan Ayam layer yang dilakukan koleksi swab trakea…………..…22
4. 2 DOC Ayam broiler yang dilakukan koleksi sampel dengan cara swab trakea ........................... 23
4. 3 Hasil streak plate method Nutrient Agar setelah dilakukan inkubasi ......................................... 24
4. 4 Hasil pewarnaan gram ................................................................................................................. 25
4. 5 Hasil Streak Plate Method koloni bakteri pada media MCA setelah diinkubasi ........................ 26
4. 6 Hasil Streak Plate Method koloni bakteri pada media MSA setelah diinkubasi ........................ 27
4. 7 Hasil Streak Plate Method koloni bakteri pada media EMBA setelah diinkubasi...................... 28
4. 8 Hasil Streak Plate Method koloni bakteri pada media BAP setelah diinkubasi ......................... 29
4. 9 Hasil inokulasi koloni bakteri pada media TSIA ........................................................................ 30
4. 10 Hasil dan interpretasi hasil dari media TSIA. ........................................................................... 30
4. 11 Hasil inokulasi koloni bakteri pada media MR ......................................................................... 31
4. 12 Hasil inokulasi koloni bakteri pada media VP .......................................................................... 32
4. 13 Hasil inokulasi koloni bakteri pada media SCA ....................................................................... 32
4. 14 Hasil inokulasi koloni bakteri pada media Urease .................................................................... 34
4. 15 Hasil dan interpretasi hasil dari media Urease .......................................................................... 34
4. 16 Hasil uji katalase pada koloni bakteri II sampel A ................................................................... 35
4. 17 Hasil uji koagulasi pada koloni bakteri II sampel A. ................................................................ 35
4. 18 Hasil uji sensitifitas antibiotik................................................................................................... 36
vi
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
4. 1 Morfologi koloni pada media NAP. ............................................................................................ 24
4. 2 Hasil Uji Biokimia bakteri gram positif. ..................................................................................... 29
4. 3 Hasil uji sensitivitas bakteri. ....................................................................................................... 36
vii
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Penyakit infeksi saluran pernafasan merupakan permasalahan yang sering ditemukan
dalam industri perunggasan, seringkali disertai dengan kerugian ekonomi serta penurunan
produktivitas. Banyak sekali faktor penyebab penyakit respirasi pada unggas diantaranya
adalah bakteri, virus, jamur, lingkusngna, imunosupresi dan reaksi paska vaksin (Untari, 2003).
Dianatara berbagai penyebab tersebut infeksi bakteri tampaknya berperan utama
sebagai penyebab penyakit respirasi pada ayam. Penyebab penyakit tersebut bisa karena infeksi
tunggal maupun campuran. Bakteri penyebab infeksi saluran pernafasan dapat berupa
Haemophillus para galinarum, mycoplasma gallisepticum dan Ornithobacerium
rhinotracheale. Bakeri bakteri tersebut bisa juga menyebabkan penyakit dengan infeski sinergis
antara Haemophilus para galinarum dan Mycoplasma galisepticum, M galsepticum dengan
adenovirus terbukti dengan tanda air sacculitis dan sinusitis. Demikian juga interaksi antara
vaksin Newcastle diseasi dan Infectious Bronchitis yang di sertai Mycoplasma dan E.Coli
mengakibatkan penyakit respirasi lebih parah dibandingkan infeksi tunggal.E.coli merupakan
flora normal dalam usus hewan, pada ayam dapat menyebabkan air sacculitis, coligranuloma,
sinovitis, peritonitis, dan koliseptisemia (Rahmaniar, 2021).
Ilmu kedokteran hewan memiliki peran penting dalam pengendalian dan pencegahan
terhadap infeksi penyakit, serta penanganan dini agar tidak terjadi penurunan dalam
menghasilkan produk asal ternak. Oleh karena itu, untuk mencegah meningkatnya angka infeksi
bateri pathogen pada uangga maka dari itu perlu dilakukan deteksi isolasi bakteri.
1.2 Rumusan Masalah

Adapun rumusan masalah pada kegiatan Koasistensi Rotasi Diagnosa Laboratorik
Mikrobiologi ini antara lain :
1.2.1 Bagaimana cara isolasi dan identifikasi bakteri yang ada pada saluran pernafasan
unggas?
1.2.2 Apa saja bakteri yang dapat ditemukan pada saluran pernafasan unggas yang diduga
terserang penyakit pernafasan berdasarkan gejala klinis?
1.2.3 Apa saja pemeriksaan uji mikrobiologi yang dilakukan pada unggas yang mengalami
gejala klinis penyakit pernafasan?
1.3 Tujuan
Tujuan dari kegiatan Koasistensi Rotasi Diagnosa Laboratorik Mikrobiologi ini antara lain :
1.3.1 Mengetahui cara isolasi dan identifikasi bakteri yang ada pada saluran pernafasan
unggas.
1
1.3.2 Mengetahui bakteri yang dapat ditemukan pada saluran pernafasan unggas yang diduga
terserang penyakit pernafasan berdasarkan gejala klinis.
1.3.3 Mengetahui pemeriksaan uji mikrobiologi yang dilakukan pada unggas yang mengalami
gejala klinis penyakit pernafasan.
1.4 Manfaat
Manfaat yang didapatkan dari kegiatan Koasistensi Rotasi Diagnosa Laboratorik
Mikrobiologi ini adalah mahasiswa mengetahui dan memahami pemeriksaan mikrobiologi
sebagai salah satu metode diagnosa laboratorik untuk mengidentifikasi penyebab penyakit
yang disebabkan oleh agen mikrobiologi seperti bakteri, virus, dan jamur pada dunia
Kesehatan hewan dengan tepat sehingga dapat dilakukan pencegahan dan pengobatan yang
tepat.
2
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Sistem Pernafasan Unggas
Gambar 2. 1 Saluran Pernafasan Unggas.
Sistem pernafasan yang terdapat pada unggas ayam (Gambar 2.1) terdiri dari nasal
cavities, larynx, trachea (windpipe), syrinx (voice box), bronchi, bronchiale dan bermuara
dialveoli. Oleh karena unggas memerlukan energi yang sangat banyak untuk terbang, maka
unggas memiliki sistem respirasi yang memungkinkan untuk berlangsungnya pertukaran
oksigen yang sangat besar per unit hewan. Untuk melengkapi kebutuhan oksigen yang tinggi
tersebut maka anatomi dan fisiologi sistem respirasi unggas sangat berbeda dengan mamalia.
Perbedaan utama adalah fungsi paru-paru. Pada mamalia, otot diafragma berfungsi mengontrol
ekspansi dan kontraksi paru-paru. Unggas tidak memiliki diafragma sehingga paru-paru tidak
mengembang dan kontraksi selama ekspirasi dan inspirasi. Paru-paru hanyalah sebagai tempat
berlangsungnya pertukaran gas di dalam darah. Glottis, terletak tepat di belakang pangkal lidah
dan terhubung ke arah caudal, ke dalam larynx. Glottis berfungsi sebagai katup yang bekerja
buka-tutup untuk mencegah makanan tertelan, cairan, dan benda asing lainnya masuk ke paru
– paru. Glottis ini berhubungan dengan rongga mulut (esophagus) melalui celah yang disebut
rima glottis. Larynx, adalah pintu masuk menuju trakea, sedangkan Trakea pada dasarnya
adalah sebuah tabung udara yang menghubungkan larynx ke seluruh sistem pernapasan pada
unggas (ayam). Trakea terdiri atas cincin cartilago mulai dari ujung caudal dari larynx yang
mencegah terjadinya collaps karena adanya tekanan negatif pada saat ayam bernapas
(Sembiring, 2009).
2.2 Teknik Pengambilan Sampel

Sampel adalah bagian dari populasi yang memiliki karakteristik mirip dengan populasi
itu sendiri yang diambil dengan menggunakan cara-cara tertentu untuk diteliti. Jadi sampel
merupakan bagian dari dari populasi. Teknik pengambilan sampel pada identifikasi bakteri
3
terkhususnya saluran pernafasan dapat dilakukan dengan swab trakea dan nasal. Pada swab
trakea dan nasal dapat dilakukan menggunakan cotton bud steril. Teknik pengambilan sampel
pada swab trakea dapat dilakukan dengan cara membuka mulut burung dengan hati-hati sampai
kelihatan lubang trakeanya lalu dilakukan swab pada trakea dan setelah itu cotton swab steril
dimasukkan ke dalam media BHIB dan diinkubasi didalam inkubator pada suhu 37oC selama
24 jam. Untuk swab nasal juga dilakukan hal yang sama namun tempat pengambilannya berada
pada bagian nasal. Menurut Musdalifa (2020), Sampel swab trakea diambil dari ayam dengan
menggunakan cotton swab steril, kemudian dimasukkan kedalam tabung mikro yang telah
berisi transport medium 199 hanks. Tabung disimpan didalam cool box untuk dibawa ke
Laboratorium.
2.3 Media Isolasi dan Identifikasi Bakteri

Media merupakan bahan yang terdiri dari zat-zat makanan (nutrient) yang diperlukan
mikroorganisme untuk pertumbuhannya. Media dapat memanipulasi tempat tumbuhnya biakan
atau menjadikan media sebagai isolat tempat tumbuhnya, dan sekaligus memanipulasi
komposisi media pertumbuhannya. Media terdiri dari bahan dasar, nutrient dan ataupun bahan
tambahan.
Beberapa mikroorganisme yang termasuk di dalamnya adalah bakteri, dapat tumbuh
baik pada media pertumbuhan. Meskipun demikian, beberapa mikroorganisme lain ada yang
memerlukan media khusus agar dapat tumbuh dan ada juga yang hanya dapat tumbuh apabila
berada dalam sel hidup. Media pertumbuhan dapat berbentuk cair (broth), padat (agar) dan
semisolid. Berdasarkan penggunaannya, media juga dapat dibagi menjadi media nutrien atau
umum, media selektif, media diferensial, media yang diperkaya, dan media transport (Murwani,
2015). Berikut beberapa jenis media yang digunakan untuk isolasi dan identifikasi bakteri
saluran pencernaan yang digunakan pada kegiatan Koasistensi Rotasi Diagnosa Laboratorik
Mikrobiologi :
2.3.1 Media Brain Heart Infusion Broth (BHIB)

Isolat bakteri yang tumbuh ditandai dengan terjadinya kekeruhan pada media, hal ini
terjadi karena pada media BHIB mengandung banyak karbohidrat dan protein yang
diperlukan oleh bakteri untuk berkembang biak yaitu Casein pepton, dekstrosa, L-sisten,
sodium klorida, sodium sulfit dan kedelai pepton (Indrayati dan Akma, 2018). Tujuan dari
pembenihan bakteri pada media cair diantaranya yaitu untuk memperbanyak kultur bakteri.
Media BHIB direkomendasikan untuk membiakkan bakteri yang bersifat pathogen, ragi, dan
jamur.
4
2.3.2 Media Nutrient Agar Plate (NAP)
NAP termasuk kedalam jenis media umum yang digunakan sebagai media pertumbuhan
sebagian besar bakteri dan dapat juga digunakan untuk mengetahui motilitas bakteri. NAP
terbuat dari campuran ekstrak daging dan peptone dengan menggunakan agar sebagai
pemadat (Rossita dkk, 2017).
2.3.3 Media Mc Conkey Agar (MCA)

MCA merupakakn media yang memiliki senyawa utama laktosa, garam empedu serta
memiliki indikator warna berupa merah netral. MCA sendiri merupakan medium kultur yang
dirancang untuk menumbuhkan bakteri gram negatif serta mampu membedakan antar
bakteri golongan enterobakter yang dapat memfermentasi laktosa dan tidak
memfermentasikan laktosa, dari bakteri berbentuk batang, dan Gram negatif (Holderman et
al., 2017). Interpretasi hasil dari media MCA (Gambar 2.2) yaitu bakteri yang mampu
memfermentasi laktosa ditunjukkan dengan pertumbuhan koloni berwarna merah sedangkan
bakteri yang tidak mampu memfermentasi laktosa ditunjukkan dengan pertumbuhan koloni
berwarna transparan (Murwani, 2015).
Gambar 2. 2 Interpretasi media MCA (dibaca searah jarum jam) yaitu : Escherichia coli,
Enterobacter aerogenes, Shigella sonnei, dan Proteus mirabilis (Leboffe & Burton,
2011).
2.3.4 Media Blood Agar Plate (BAP)

Media BAP (Blood Agar Plate) digunakan untuk mendeteksi kemampuan hemolisa
bakteri dengan teknik yang dilakukan adalah streak plate. Terdapat tiga jenis hemolosis yaitu
beta hemolisis, alfa hemolisis, dan gamma hemolisis. Beta hemolisis merupakan lisis
lengkap sel darah merah dan hemoglobin, alfa hemolisis mengacu pada lisis parsial/lisis
sebagian dari sel darah merah dan hemoglobin, gamma hemolisis yaitu tidak terjadi
hemolisis dimana tidak ada perubahan warna dalam media (Hikmawati, 2019).
5
Gambar 2. 3 Interpretasi media BAP, (a) hemolisis beta, (b) hemolisis alfa, (c) hemolisis gamma,
dan (d) hemolisis aerob dan anaerob (Leboffe & Burton, 2011).
2.3.5 Media Chocolate Agar

Media coklat agar digunakan untuk isolasi dan kultur dari bakteri Neisseria dan
Haemophilus. Media coklat agar memiliki kandungan kasein, pepton, buffer fosfat, tepung
jagung, dan darah domba.
2.3.6 Media Mannitol salt Agar (MSA)

Manitol Salt Agar (MSA) adalah media pertumbuhan selektif dan diferensial untuk
bakteri Gram Positif. Media ini mengandung garam (NaCl) dalam konsentrasi tinggi yakni
sekitar 7,5% - 10% sehingga hanya dapat ditumbuhi oleh bakteri yang dapat mentoleransi
kadar garam tinggi dan menjadikannya selektif untuk bakteri Gram positif (Staphylococcus
dan Micrococcaceae). Selain itu, media ini juga mengandung mannitol sebagai sumber
karbohidrat dan phenol red sebagai pH indikator untuk mendeteksi asam yang dihasilkan
oleh Staphylococcus mannitol fermentasi serta ekstrak daging dan pepton sebagai bahan
dasar karena merupakan sumber protein dan nitrogen bagi pertumbuhan mikroorganisme
(Novitasari dkk, 2019).
Gambar 2. 4 Interpretasi hasil media MSA (Leboffe & Burton, 2011).
6
2.3.7 Media Eosin Methylene Blue Agar (EMBA)
Eosin Methylene Blue Agar adalah media selektif dan diferensial. Media ini
mengandung Eosin dan metilen biru, yang menghambat pertumbuhan bakteri gram positif,
maka media ini dipilih untuk bakteri gram negatif. EMBA juga mengandung karbohidrat
laktosa, yang membuat bakteri gram negatif terdiferensiasi berdasarkan pada kemampuan
mereka untuk memfermentasi laktosa. Warna media sebelum pemupukan bakteri berwarna
merah keunguan. Perubahan warna hijau metalik pada media EMBA (Gambar 2.5) karena
Escherichia coli dapat memfermentasi laktosa yang mengakibatkan peningkatan kadar asam
dalam media. Kadar asam yang tinggi dapat mengendapkan metylen blue dalam media
EMBA (Harijani dkk, 2013).
Gambar 2. 5 Interpretasi hasil media EMBA (Leboffe & Burton, 2011).
2.3.8 Media Triple Sugar Iron Agar (TSIA)

Media TSIA mengandung tiga macam gula yaitu glukosa, laktosa dan sukrosa, selain itu
media juga mengandung indikator merah fenol dan FeSO4 untuk memperlihatkan
pembentukan H2S yang ditunjukkan dengan adanya endapan hitam. Konsentrasi glukosa
adalah 1/10 dari konsentrasi laktosa atau sukrosa agar fermentasi glukosa dapat terlihat.
Media TSIA terdiri dari dua bagian yaitu butt (bawah) dan slant (atas) (Cahyono, 2019).
Interpretasi hasil pada media TSIA (Gambar 2.6) yaitu asam (warna kuning, produksi asam
dari hasil fermentasi gula glukosa, laktosa dan/sukrosa), alkalis (warna merah, produksi
alkalis dari glukosa, laktosa atau sukrosa yang tidak difermentasi), gas (agar pecah atau
terangkat ke atas pada bagian tegak), H2S (endapan hitam pada bagian tegak tabung).
Gambar 2. 6 Interpretasi hasil media TSIA (Leboffe & Burton, 2011).

7
2.3.9 Media Simmons Citrate Agar (SCA)
Media sitrat merupakan medium sintetik dengan Na sitrat sebagai satu-satunya sumber
karbon, NH4+ sebagai sumber nutrisi dan brom thymol blue sebagai indikator pH (Cahyono,
2019). Prinsip dari media sitrat yaitu melihat kemampuan bakteri dalam menggunakan sitrat
sebagai satu-satunya sumber karbon dan energi. Jika bakteri tersebut mampu menggunakan
sitrat, maka asam akan dihilangkn dari medium biakan sehingga menyebabkan peningkatan
pH dan mengubah warna dari hijau menjadi biru. Interpretasi hasil dari media sitrat yaitu
positif (perubahan warna media dari warna hijau menjadi biru) dan negatif (warna media
tetap hijau).
2.3.10 Media Urease

Prinsip dari media urease yaitu perubahan warna dapat terjadi saat enzim urease
memutus ikatan karbon dan nitrogen untuk membentuk amonia. Adanya amoniak
menyebabkan suasana medium menjadi alkali/basa sehingga indikator phenol red akan
berubah menjadi merah muda pada medium, hal ini mengindikasikan terjadinya reaksi
positif atau dihasilkannya urease (Antriana, 2014). Media urease direkomendasikan untuk
bakteri yang dapat memecah urea, Proteus, Salmonella dan Shigella. Interpretasi hasil dari
media urease yaitu positif (merah) dan negatif (tidak ada perubahan warna (kuning)
2.3.11 Media Methyl-Red (MR)

Prinsip media MR yaitu kemampuan bakteri untuk memfermentasi glukosa menjadi
asam campuran (Antriana, 2014). Interpretasi hasil dari media MR yaitu positif (perubahan
warna merah) dan negatif (warna kuning atau tidak berwarna).
2.3.12 Media Voges-Proskauer (VP)

Prinsip media VP yaitu kemampuan bakteri untuk memfermentasi glukosa
menghasilkan aceton (acetylmethyl carbinol) sebagai hasil produk utama. Interpretasi hasil
dari media VP yaitu positif (warna merah) dan negatif (warna kuning atau tidak berwarna).
2.3.13 Media Mueller Hinton Agar (MHA)

Media Mueller Hinton Agar (MHA) merupakan media untuk pemeriksaan uji kepekaan
bakteri tehadap suatu antibiotik dengan metode Kirby-Baurer pada bakteri nonfastidious
baik aerob dan anaerob. Media MHA sudah ditetapkan sebagai media standar pengujian
sensitivitas antimikroba, juga merupakan media yang bersifat netral, sehinggan tidak
menimbulkan pengaruh terhadap prosedur uji antibakteri (Utomo dkk, 2018).
8
2.4 Bakteri pada Saluran Pernafasan
Saluran pernafasan merupakan organ tubuh yang mudah terserang penyakit karena
adanya hubungan langsung antara rongga hidung dengan alveoli. Mikroorganisme yang sering
ditemukan pada saluran pernafasan antara lain: Mycoplasma gallisepticum/MG (penyebab
CRD), Escherichia coli (serotipe O1, O2 dan O78) (penyebab kolibasilosis), Haemophilus
paragallinarum (serotipe A, B, dan C) (penyebab coryza atau snot), Pasteurella multocida
(penyebab kolera unggas) (Tarmudji, 2005). E. coli secara normal hidup di saluran pencernaan
ayam, yang sejalan dengan metabolisme akan disekresikan bersama feses ke lingkungan
kandang. Debu kandang yang di dalamnya mengandung 105-106 E. coli tiap gramnya berpotensi
menimbulkan penyakit pernafasan apabila debu itu terhirup oleh ayam.
2.5 Penyakit Bakterial pada Saluran Pernafasan Unggas

2.5.1 Chromic Respiratory Disease
Chronic Respiratory Disease (CRD) merupakan penyakit menular menahun pada
ayam disebabkan oleh Mycoplasma gallisepticum ditandai dengan gangguan pernafasan,
keluarnya cairan eksudat dari rongga hidung, batuk, bersin dan kemerahan pada selaput
lendir (conjunctiva) mata. Ayam segala umur dapat terserang CRD. Pada situasi tertentu
dapat menyebabkan gangguan pernafasan akut terutama pada ayam muda, sedangkan bentuk
kronis dapat menyebabkan penurunan produksi telur. CRD memiliki derajat morbiditas
tinggi dan derajat mortalitas rendah. Infeksi dapat menyebar secara vertical melalui telur
yang terinfeksi. Penyakit ini akan lebih parah apabila diikuti dengan infeksi sekunder dengan
virus lain seperti ND, IB atau bakteri seperti misalnya Escherichia coli.
klasifikasi bakteri mycoplasma sebagai berikut:
Kingdom : Bacteria
Phylum : Tenericutes atau Firmicutes
Class : Mollicutes
Order : Mycoplasmatales
Family : Mycoplasmataceae
Genus : Mycoplasma
Spesies : Mycoplasma gallisepticum
9
Gambar 2. 7 Mycoplasma secara mikroskopik (Pudjiatmoko, 2014).
Agen penyebab CRD pada unggas adalah Mycoplasma gallisepticum..Mycoplasma

gallisepticum berukuran 0,25-0,50 mikron, berbentuk pleomorfik, biasanya kokoid dan tidak
mempunyai dinding sel sejati. Bersifat gram negatif dapat dibiakkan dalam telur ayam
bertunas, biakan sel, medium buatan yang dilengkapi dengan 10-15% serum babi atau kuda
yang diinaktifkan. Media buatan dapat berupa padat atau cair. Pertumbuhan optimal pada
media padat diperoleh pada pH 7,8 suhu 37oC-38oC dan penambahan CO2. Koloninya amat
kecil bergaris tengah 0,20-0,30mm, halus, bulat jernih dengan daerah yang menebal dan
menonjol ditengahnya. Selain itu Mycoplasma gallisepticum dapat mengaglutinasi eritrosit
ayam dan kalkun. Pada medium padat koloni Mycoplasma gallisepticum dapat
mengabsorbsi eritosit dan sel epitel trakea ayam dan kalkun, marmut, tikus dan kera serta
sel mani sapi dan manusia. Mycoplasma gallisepticum resisten terhadap penicillin (1000
lU/ml) dan thalium acetate berkadar 1:4000 (Iekram, 2018).
Mycoplasma gallisepticum masuk ke traktus respiratorius melalui proses inhalasi.
Bakteri tersebut menempel pada reseptor epitel yang disebut sialoglycoprotein Kemudian ia
menempel dan merusak mukosa epitel sambal memperbanyak diri. Mycoplasma memiliki
ciliostatic yang merupakan faktor yang menyebabkan lemahnya aktivitas silia. Penularan
dapat secara horizontal dan vertikal. Penularan secara horizontal dapat berupa kontak
langsung dari hewan ke hewan dan yang tidak langsung melalui makanan, air minum, debu,
alat-alat kandang yang tercemar oleh Mycoplasma gallisepticum dan melalui udara dengan
jarak tidak melebihi 6 meter. Penularan Secara vertikal terjadi lewat telur yang dihasilkan
oleh induk penderita. Derajat 5 penularan tertinggi pada waktu induk baru terpapar infeksi
mencapai 35% dan menurun menjadi 1% setelah 2-4 bulan kemudian (Iekram, 2018).
Gejala klinis bervariasi bergantung pada derajat keparahan infeksi. Gejala klinis
diawali dengan keluarnya cairan eksudat bening (catarrhal) dari rongga hidung, bersin,
batuk, ngorok, kebengkakan pada kelopak mata, dan radang konjunctiva (conjunctivitis)
perubahan patologi yang paling spesifik untuk CRD yaitu adanya peradangan pada trakhea
dan kantong membran udara biasanya juga disertai pada rongga perut yang disebut dengan
airsacculitis (Pudjiatmoko, 2014).
10
Diagnosis CRD dapat dilakukan berdasarkan atas uji serologi, gejala klinis, perubahan
patologi, serta isolasi dan identifikasi bakteri Mycoplasma (Pudjiatmoko, 2014).
Kontrol Mycoplasmosis dapat dilakukan dengan biosekuriti yang ketat yang meliputi
pengawasan terhadap lalu lintas ayam, produksi, pekerja dan staf kandang, peralatan, serta
kendaraan yang masuk ke dalam kawasan peternakan. Dekontaminasi terhadap kandang,
peralatan, pakaian pekerja, orang, serta kendaraan yang masuk wilayah peternakan harus
diterapkan dengan ketat. Fumigasi harus dilakukan setelah kandang habis dipakai, dan
bangkai ayam, telur, kotoran ternak serta pakan yang terkontaminasi infeksi harus dibakar
dan dikubur (Iekram, 2018).
2.5.2 Coryza/ Snot
Coryza adalah penyakit menular pada unggas yang menyerang sistem pernapasan dan
disebabkan oleh bakteri Avibacterium paragallinarum yang dulunya disebut Haemophilus
paragallinarum. Penyakit biasanya bersifat akut sampai subakut dan dalam progresnya
biasanya menjadi kronis. Penyakit ini ditandai dengan radang katar pada selaput lendir alat
pernafasan bagian atas (rongga hidung, sinus infraobitalis dan trakea bagian atas).
Pada saat ini dikenal sekurang-kurangnya 3 serotipe Avibacterium paragallinarum.
Ketiga serotipe memiliki antigen bersama, oleh karena itu uji aglutinasi dengan antigen yang
dibuat dari salah satu serotipe dapat dipakai sebagai cara diagnosa untuk ketiga serotipe
tersebut. Penularan melalui kontak tidak langsung dapat terjadi melalui makanan atau
minuman yang tercemar yang selanjutnya menjadi sumber penularan. Ayam yang sembuh
merupakan pembawa dan menjadi sumber penyakit selanjutnya. Selain menyerang ayam,
penyakit ini juga ditularkan pada burung merak, ayam mutiara atau burung puyuh yang
berumur 18-23 minggu (Pudjiatmoko, 2014).
Gejala klinis yang ditimbulkan antara lain dari hidung keluar eksudat yang mula-mula
berwarna jernih dan encer tetapi lambat laun berubah menjadi kuning kental dan bernanah
dengan bau khas. Sekitar lubang hidung terdapat kerak eksudat yang berwarna kuning. Sinus
inftraorbital membengkak sangat besar, unilateral maupun birateral (Gambar 2.8).
Akibatnya lipatan sekitar mata membengkak dan mata menjadi tertutup. Suara ngorok
terdengar pada saat hewan kesulitan bernafas, diare dan pertumbuhan ayam menjadi
terlambat dan kerdil (Pudjiatmoko, 2014).
11
Gambar 2. 8 Gejala klinis ayam yang terkena penyakit coryza yaitu pembengkakan pada sinus
infraorbitalis (Pudjiatmoko, 2014).
Identifikasi penyakitnya dengan fenomena satelit pada pemupukan bersama

Staphylococcus epidermis atau Staphylococcus aureus yang ditanam pada media coklat agar
atau agar darah. Disamping itu Avibacterium paragallinarum adalah satu-satunya kuman
yang sensitif terhadap sulfathiazole, oleh karena itu bila sembuh diobati dengan sulfathiazole
maka diagnosa positif, akan tetapi bila tidak sembuh belum tentu berarti bahwa ayam
tersebut tidak menderita coryza, namun tidak menutup kemungkinan ada infeksi campuran
dengan penyakit saluran pernafasan lainnya (Pudjiatmoko, 2014).
Sampel untuk pemeriksaan di laboratorium sebaiknya diambil secara aseptik dari
eksudat dalam sinus infraobital. Pengobatan pada suatu flok dengan sulfonamide atau
antibiotik direkomendasikan (Pudjiatmoko, 2014).
2.6 Sterilisasi Alat
Sterilisasi adalah proses pembunuhan semua mikroorganisme seperti protozoa, fungi,
bakteri, mikroplasma, dan virus yang ada pada benda atau peralatan untuk menjaga peralatan
di Laboratorium tetap bersih dan steril sehingga tidak menyebabkan kontaminasi. Steril harus
mampu membunuh mikroorganisme yang tahan terhadap panas yaitu spora bakteri. Waktu yang
diperlukan untuk melakukan sterilisasi pada autoklaf bergantung pada sifat bahan yang akan
disterilkan, tipe wadah, dan volume bahan (Istini, 2020).
Prinsip kerja dari autoklaf yaitu pada saat sumber panas dinyalakan, air didalam autoklaf
akan mendidih seiring berjalannya waktu sehingga uap air yang terbentuk akan mendesak udara
yang mengisi autoklaf. Setelah semua udara pada autoklaf terganti dengan uap air, katup uap
atau udara ditutup sehingga tekanan udara dalam autoklaf akan mengalami kenaikan. Pada saat
tercapainya tekanan dan suhu yang sesuai, maka proses sterilisasi dimulai dan timer akan
menghitung waktu mundur. Setelah proses sterilisasi selesai, sumber panas dimatikan dan
tekanan dibiarkan turun secara perlahan hingga mencapai 0 Psi dan autoklaf tidak boleh dibuka
sebelum tekanan mencapai 0 Psi (Syah, 2015).
12
BAB III METODOLOGI
3.1 Tempat dan Waktu Pelaksanaan
Pelaksanaan kegiatan Koasistensi Pendidikan Profesi Dokter Hewan (PPDH) Rotasi
Diagnosa Laboratorik Mikrobiologi yang dimulai pada tanggal 1-12 November 2021 yang
bertempat di Laboratorium Mikrobiologi dan Imunologi Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan
3.2 Peserta Kegiatan PPDH

Peserta yang mengikuti kegiatan Koasistensi PPDH Rotasi Diagnostik Laboratorik di
Laboratorium Mikrobiologi dan Imunologi Veteriner FKH UB adalah :
Nama : Firdaus Ignatius Luhung
NIM : 210130100111021
E-mail : luhung@student.ub.ac.id
No. Hp : 087850563986
Nama : Islah Asyraf Diari

NIM : 210130100111040
E-mail : islahasyrafdvm@student.ub.ac.id
No. Hp : 083834358188
Nama : Aida Muslimatun Al Azizah

NIM : 210130100111066
E-mail : aaidamuslimatun@student.ub.ac.id
No. Hp : 085601386268
Nama : Miranda Eka Putri Wibowo

NIM : 210130100111068
E-mail : mirandaekapw@student.ub.ac.id
No. Hp : 081615957507
Nama : Aprilia Anggraeni

NIM : 210130100111093
E-mail : apriliappdh@student.ub.ac.id
No. Hp : 082245450213
Dibawah bimbingan drh. Indah Amalia Amri, M.Si.
13
3.3 Bahan dan Materi Pemeriksaan
3.3.1 Sampel yang Diperiksa
Sampel yang digunakan adalah swab dari trakea unggas yang menunjukkan gejala klinis
sakit pernafasan seperti keluar leleran pada hidung dan adanya kebengkakan unilateral pada
sinus infraorbitalis. Sampel yang diambil dari jenis ayam layer (petelur) dan DOC ayam
broiler (pedaging). Ayam layer didapatkan dari peternakan ayam layer di Desa Ampeldento
Kecamatan Karangploso dan DOC ayam broiler didapatkan dari peternakan ayam broiler di
Kecamatan Dau.
3.3.2 Alat dan Bahan

Alat yang digunakan antara lain cawan petri, tabung reaksi, rak tabung reaksi, object
glass, cover glass, rak tabung reaksi, LAF (Laminar Air Flow), inkubator, autoklaf,
mikroskop, Bunsen, sentrifugator, hot plate dan magnet stirrer, penjepit kayu, ose lurus dan
ose bulat, beaker glass, tabung Erlenmeyer, mikropipet, tabung Eppendorf, timbangan
analisis, dissecting set, spidol marker, cotton bud steril, kapas, dan botol schott.
Bahan yang digunakan antara lain set pewarnaan gram (kristal violet, lugol, aseton
alkohol, safranin, akuades), media Brain Heart Infussion Broth (BHIB), media Nutrient
Broth Agar (NAP), media Blood Agar (BAP), media coklat agar, media Eosin Methylen Blue
Agar (EMBA), media Mac Conkey Agar (MCA), media Mannitol Salt Agar (MSA), media
Mueller Hinton Agar (MHA), media Triple Sugar Iron Agar (TSIA), media MR-VP, media
urease, dan media Simmon Citrate Agar (SCA), disc antibiotik, minyak emersi, methyl red,
α-Naphthol dan KOH 40%, H2O2, dan plasma darah.
3.4 Sterikisasi Alat

Autoklaf adalah alat yang digunakan untuk mensterilkan berbagai macam alat dan
bahan yang digunakan dalam mikrobiologi menggunakan uap air panas bertekanan. Tekanan
yang digunakan pada umumnya 15 Psi atau sekitar 2 atm dengan susu 121 oC (250oF) dan
dilakukan selama 15 menit.
3.5 Metode Pemeriksaan

3.5.1 Pengambilan Sampel
Sampel diambil dari peternakan ayam yang berada di daerah Malang. Ayam yang
digunakan untuk sampel diambil yang menunjukkan adanya gejala klinis penyakit
pernafasan. Ayam yang didapatkan kemudian dilakukan pemeriksaan fisik, dokumentasi,
serta recording sebagai data pendukung atau data sekunder. Pencatatan anamnesa dan
sinyalemen yang didapatkan dari wawancara bersama peternak juga dibutuhkan.
14
Ayam yang diduga mengalami penyakit pernafasan kemudian dilakukan koleksi sampel
dengan cara swab nasal dan trakea dengan menggunakan cotton bud steril dan kemudian
disimpan di media Brain Heart Infussion Agar (BHIB). Nekropsi juga dilakukan untuk
melihat ada tidaknya perubahan patologi anatomi yang terlihat dan disebabkan oleh penyakit
pernafasan tersebut. Kemudian media BHIB yang sudah berisi sampel swab diinkubasi pada
suhu 37 oC selama 24 jam untuk menumbuhkan atau memperbanyak biakan koloni.
3.5.2 Pembuatan Media

3.5.2.1 Brain Hearth Infussion Broth (M211-500G, HIMEDIA®)
− Disuspensikan 52gram bahan media dengan 1 liter akuades.
− Dididihkan hingga larut sempurna menggunakan hot plate dan magnet stirrer.
− Disterilkan larutan media menggunakan autoklaf dengan tekanan 15 Psi dengan
suhu 121 oC selama 15 menit.
− Didinginkan hingga suhu 45-50oC, lalu dituangkan media kedalam tabung reaksi
steril sebanyak 3 ml didalam LAF.
− Disimpan media didalam kulkas bersuhu 4oC.
3.5.2.2 Nutrient Agar Plate (VM664850 449 – 1.05450.0500, Merck KGaA®)
− Dituangkan media kedalam cawan petri steril sebanyak 10-20ml didalam LAF.
3.5.2.3 Blood Agar Plate (VM795786 733 – 1.10886.0500, Merck KGaA®)
− Didinginkan hingga suhu 45-50oC, lalu ditambahkan darah domba 7% dan
dihomogenkan.
3.5.2.4 Chocolate Agar (VM795786 733 – 1.10886.0500, Merck KGaA®)
15
− Ditambahkan darah domba 7% dan dihomogenkan.
3.5.2.5 Mac Conkey Agar (VM775965 712 – 1.05465.0500, Merck KGaA®)
3.5.2.6 Eosin Methylen Blue Agar (Levine) (CM0069, OXOID®)
− Disuspensikan 37,5gram bahan media dengan 1 liter akuades.
− Didinginkan hingga suhu 60oC, lalu dituangkan media kedalam cawan petri steril
sebanyak 10-20ml didalam LAF.
− Disimpan media didalam kulkas bersuhu 4oC
3.5.2.7 Mannitol Salt Agar (CM0085, OXOID®)
3.5.2.8 Mueller-Hinton Agar (CM0337, OXOID®)
16
3.5.2.9 Triple Sugar Iron Agar (CM0277, OXOID®)
− Dituangkan media kedalam tabung reaksi steril sebanyak 5 ml didalam LAF.
− Disimpan didalam kulkas bersuhu 4oC.
3.5.2.10 Simmon Citrate Agar (CM0155, OXOID®)
3.5.2.11 Urea Broth Base (M111-500G, HIMEDIA®)
− Disuspensikan 18,71gram bahan media dengan 950 ml akuades .
− Didinginkan pada suhu 45-50 oC, lalu dituangkan media kedalam tabung reaksi
steril sebanyak 3 ml didalam LAF.
− Disimpan media didalam kulkas bersuhu 4oC
3.5.2.12 MR-VP Medium (VM672912 503- 1.05712.0500, Merck KGaA®)
− Disuspensi 17gram bahan media dengan 1 liter akuades.
3.5.3 Isolasi dan Identifikasi Bakteri

Isolasi awal bakteri menggunakan media cair Brain Heart Infusion Broth (BHIB) untuk
meluruhkan debris atau kotoran yang terbawa sampel, kemudian dilanjutkan penanaman
pada media Nutrient Agar Plate (NAP) untuk mendapatkan biakan murni bakteri, yang
kemudian dilanjutkan penanaman bakteri ke media selektif diferensial.
17
Isolasi bakteri pada media BHIB dilakukan dengan cara swab nasal dan trakea yang
sudah dikoleksi dengan cotton bud steril dimasukkan kedalam tabung reaksi yang berisi
media BHIB dan dilakukan inkubasasi didalam inkubator pada suhu 37oC selama 24 jam.
Kemudian, diambil satu inokulum bakteri dari media BHIB dengan ose bulat secara aseptis
untuk diinokulasikan kedalam media NAP dengan streak 4 kuadran dan dilakukan
inkubasasi didalam inkubator pada suhu 37oC selama 24 jam. Koloni yang diperoleh dari
penanaman di media NAP dilakukan identifikasi morfologi bakteri dengan menggunakan
pewarnaan gram. Beberapa koloni yang tumbuh terpisah dan diduga jenis koloni yang
berbeda diambil menggunakan ose steril untuk dilakukan pewarnaan gram dengan cara :
1. Koloni bakteri yang diambil dari NAP diletakkan pada object glass yang sudah
ditetesi akuades steril dan dihomogenkan dan difiksasi diatas Bunsen.
2. Bakteri yang sudah di fiksasi di object glass diwarnai dengan pewarna kristal violet
dan didiamkan selama 1 menit dan dibilas menggunakan air mengalir dan ditetesi
lugol dan didiamkan selama 1 menit.
3. Lugol dibilas dengan air mengalir, kemudian diteteskan aseton alkohol pada object
glass dan didiamkan selama 1 menit.
4. Aseton alkohol dibilas menggunakan air mengalir, kemudian diteteskan pewarna
safranin dan didiamkan selama 1 menit dan dibilas menggunakan air mengalir.
5. Preparate dikeringkan pada suhu ruang dan dilakukan pengamatan dan identifikasi
menggunakan mikroskop perbesaran 1000x dengan minyak emersi.
6. Dilakukan pencatatan hasil dari identifikasi seperti bentuk dan warna dari koloni
bakteri.
Identifikasi lebih lanjut dilakukan dengan penanaman pada media MCA, MSA, EMBA,
Coklat agar, dan BAP. Isolasi dilakukan pada beberapa koloni bakteri yang terlihat berbeda
pada media NAP yang kemudian diinokulasikan pada media MCA, MSA, EMBA, Coklat
agar, dan BAP dengan Teknik streak-plate method 4 kuadran. Media kemudian diinkubasi
dengan inkubator pada suhu 37oC selama 24 jam. Isolasi ini bertujuan untuk menentukaan
dugaan jenis bakteri menggunakan media diferensial dan media selektif.
Bakteri yang belum bisa dipastikan jenis bakterinya menggunakan media diferensial dan
media selektif, untuk bakteri gram negatif dapat dilanjutkan dengan uji biokimia meliputi
penanaman koloni bakteri pada media TSIA, Urease, MR-VP, dan SCA untuk memastikan
lagi jenis bakterinya. Penanaman koloni bakteri pada media biokimiawi yaitu :
18
a. Triple Sugar Iron Agar (TSIA)
Penanaman koloni bakteri pada media TSIA dilakukan dengan cara diambil
biakan bakteri menggunanakan ose lurus secara aseptis dan dinokulasikan pada
media TSIA. Inokulasi dengan cara menusukkan ose pada media bagian butt dan
distreak pada bagian slant. Media diinkubasi dengan suhu 37oC selama 18-24 jam.
Interpretasi hasil dari media TSIA yaitu alkalin slant (merah) dan acid butt (kuning)
dengan atau tidak adanya produksi gas (agar butt rusak) (Cappucino & Welsh, 2020).
Gambar 3. 1 Interpretasi hasil dari media TSIA (Cappucino & Welsh, 2020).
b. MR-VP
Penanaman koloni bakteri dimedia MR-VP dilakukan dengan cara mengambil
biakan bakteri dengan ose bulat secara aseptis, dicelupkan pada media MR-VP dan
dihomogenkan. Kemudian media diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam. Setelah
24 jam, media MR ditambahkan 5 tetes Methyl red dan media VP ditambahkan 3ml
α-Naphthol dan 3 ml KOH 40%. Interpretasi hasil dari media MR yaitu perubahan
warna merah (positif) dan kuning (negatif), sedangkan untuk media VP yaitu
terbentuk cincin merah atau jingga (positif) dan tidak ada perubahan warna (negatif)
(Cappucino & Welsh, 2020).
Gambar 3. 2 Interpretasi hasil media MR-VP (Cappucino & Welsh, 2020).
c. Simmon Citrate Agar (SCA)

Penanaman koloni bakteri pada media SCA dilakukan dengan cara mengambil
biakan bakteri menggunakan ose bulat secara aseptis lalu dilakukan penanaman
19
bakteri menggunakan metode streak pada bagian slant. Kemudian media diinkubasi
pada suhu 37oC selama 24-48 jam. Interpretasi hasil dari media SCA yaitu terbentuk
koloni dipermukaan dengan media berubah warna menjadi biru (positif) dan tidak
terbentuk koloni dengan media tetap berwarna hijau (negatif) (Cappucino & Welsh,
2020).
Gambar 3. 3 Interpretasi hasil media SCA (Cappucino & Welsh, 2020).
d. Urease
Penanaman koloni bakteri dimedia Urease dilakukan dengan cara mengambil
biakan bakteri dengan ose bulat secara aseptis, dicelupkan pada media Urease dan
dihomogenkan. Kemudian media diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam.
Interpretasi hasil dari media urease yaitu terjadi perubahan warna menjadi merah
muda (positif) dan tidak terjadi perubahan warna (negatif) (Cappucino & Welsh,
2020).
Gambar 3. 4 Interpretasi hasil media Urease (Cappucino & Welsh, 2020).
Sedangkan untuk bakteri gram positif dapat dilanjutkan uji biokimia dengan uji katalase
dan uji koagulase. Uji katalase dilakukan dengan cara :
1. Disiapkan object glass, kemudian diambil biakan koloni dari media secara aseptis
dan diletakkan pada object glass.
2. Ditambahkan H2O2 pada koloni bakteri yang berada pada object glass.
3. Diamati dan dilakukan interpretasi hasil. Terbentuk gelembung-gelembung gas jika
positif (Staphylococcus sp.) dan tidak terbentuk gelembung-gelembung gas jika
negatif (Streptococcus sp.).
20
Uji koagulase dilakukan dengan cara :
1. Disiapkan object glass, kemudian diambil biakan koloni dari media secara aseptis
dan diletakkan pada object glass.
2. Ditambahkan plasma darah pada koloni bakteri yang berada pada object glass.
3. Diamati dan dilakukan interpretasi hasil. Terbentuk endapan jika positif
(Staphylococcus aureus) dan tidak terbentuk endapan jika negatif (spesies
Staphylococcus lain).
Setelah koloni bakteri sudah diidentifikasi dan diketahui spesiesnya, dilakukan uji
sensitifitas antibiotik. Uji sensitivitas antibiotik merupakan tes yang digunakan untuk
menguji kepekaan suatu bakteri terhadap suatu antibiotik, dengan tujuan untuk mengetahui
efektifitas dari suatu antibiotik (Khusuma dkk, 2019). Uji sensitivitas antibiotik dilakukan
dengan cara :
1. Disiapkan media MHA yang sudah padat.dan disc antibiotik yang akan digunakan.
2. Dilakukan pengenceran Mc Farlan 0,5 secara aseptis dari biakan cair bakteri murni
untuk diinokulasikan ke media MHA.
3. Dilakukan streak plate method biakan bakteri murni secara merata pada plate.
4. Diletakkan disc antibiotik yang digunakan dengan diberi jarak antar disc agar supaya
jika terbentuk zona hambat tidak akan bertumpuk.
5. Diinkubasi dengan inkubator pada suhu 37oC selama 24 jam.
6. Diamati dan dilakukan interpretasi hasil.
21
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil
4.1.1. Sinyalemen dan Anamnesa
Sampel A dan B
Hewan : Ayam layer
Ras : Hy-line brown
Umur : 2 tahun
Warna : Coklat
Alamat : Peternakan Bina Ternak (jl. Tamanu Diharjo, Bunder, Ampeldento,
Kecamatan Karang Ploso, Malang).
a b
Gambar 4. 1 Gambar (a) dan (b) merupakan Ayam layer yang dilakukan koleksi swab trakea
(Dokumentasi Pribadi, 2021).
Ayam layer (Gambar 4.1) (a) terlihat lemas, nafsu makan menurun, produksi telur
menurun, dan dengan gejala klinis adanya leleran yang keluar dari hidung, dan adanya
kebengkakan unilateral pada sinus orbitalis. Sedangkan Ayam layer (b) terlihat lemah, nafsu
makan menurun, produksi telur menurun, mengalami diare sehari sebelum dilakukan
pengambilan sampel dengan konsistensi feses cair berwarna putih.
Ayam yang bergejala sakit sudah dipisah kandang dengan ayam yang sehat. Peternak
belum memberikan obat ke ayam yang bergejala sakit tersebut dikarenakan ayam yang sakit
hanya berjumlah satu dan sudah dipisahkan kandangnya, dan ayam tersebut akan diafkirkan.
Pakan dan minum yang diberikan sehari hari adalah konsentrat yang diberikan 2 kali sehari
dan air minum dari sumur yang diberi cairan clorin. Riwayat vaksin dari ayam yaitu sebulan
yang lalu ayam diberikan vaksin AI, ND, dan IB yang diberikan dengan dicampurkan air
minum.
22
Sampel B
Hewan : Ayam Broiler
Ras : Cobb500 slow feather
Umur : 4 hari
Warna : kuning
Alamat : Peternakan kecamatan Dau
Gambar 4. 2 DOC Ayam broiler yang dilakukan koleksi sampel dengan cara swab trakea
(Dokumentasi Pribadi, 2021).
DOC Ayam broiler (Gambar 4.2) terlihat lemas dan mengalami penurunan nafsu
makan, DOC tampak stress juga tampak mengantuk. DOC Ayam yang bergejala sakit belum
memberikan terapi pengobatan. Riwayat penyakit yang sering terjadi dipeternakan ini yaitu
gumboro atau IBD. Kematian yang terjadi dikandang selama beberapa tahun terakhir ini
kurang dari 1% atau sekitar 250 ekor ayam dari populasi berjumlah 25.000 ekor. Riwayat
vaksin dari DOC Ayam broiler yaitu sudah dilakukan vaksinasi pada umur 1 hari oleh pabrik
yang memproduksi DOC.
4.1.2 Isolasi dan Identifikasi Bakteri
Bakteri yang ditemukan pada saluran pernafasan dapat dilakukan dengan cara
screening melalui tahap isolasi. Sampel bakteri yang akan dilakukan identifikasi terlebih
dahulu dilakukan isolasi untuk menumbuhkan dan memperkaya bakteri. Menurut Puspitasari
(2012), Proses isolasi mikroba adalah memisahkan mikroba satu dengan mikroba lain yang
berasal dari campuran berbagai mikroba untuk dapat mempelajari sifat biakan, morfologi,
dan sifat mikroba lainnya.
Media awal yang digunakan untuk pertumbuhan bakteri yang akan dilakukan
identifikasi yaitu media Brain Hearth Infusion Broth (BHIB). Media BHIB merupakan jenis
media diperkaya (Enriched medium) yang digunakan untuk menumbuhkan dan
menyuburkan berbagai bakteri (Murwani, 2015). Bakteri yang sudah tumbuh di media BHIB
diinokulasikan ke media Nutrient Agar Plate (NAP) yang merupakan media umum untuk
23
melihat koloni bakteri yang tumbuh dan dilakukan pewarnaan gram. Hasil dari isolasi pada
media NAP terlihat perubahan pada media menjadi lebih keruh yang menandakan adanya
pertumbuhan koloni pada media NAP.
Koloni yang tumbuh pada media NAP akan didapatkan representatif koloni tumbuh
dan dapat dibedakan morfologinya. Menurut Holderman (2017), Identifikasi bakteri
dilakukan dengan cara mengamati morfologi meliputi bentuk koloni bakteri, warna koloni,
tepi koloni, dan elevasi koloni bakteri yang kemudian dilanjutkan dengan pewarnaan gram
yang bertujuan untuk mengetahui golongan bakteri. Setelah didapatkan identifikasi
morfologi dari media NAP, bakteri terisolasi dapat digunakan untuk pengujian selanjutnya
dengan media diferensial-selektif. Hasil inokulasi bakteri pada media NAP dapat dilihat
pada tabel 4.1.
a b c
Gambar 4. 3 Hasil streak plate method Nutrient Agar setelah dilakukan inkubasi, (a) Sampel
Trakea A, (b) Sampel Trakea B, dan (c) Sampel Trakea C (Dokumentasi Pribadi,
2021).
Tabel 4. 1 Morfologi koloni pada media NAP.

NAP A NAP B NAP C
Koloni I Koloni II Koloni III Koloni IV
Bentuk Circular Round Circular Circular
Tepi Entire Entire Entire Entire
Permukaan smooth Smooth Smooth smooth
Transparansi Opaque Opaque Opaque Opaque
Konsistensi Moist Mucoid Mucoid Moist
Warna/pigmen Grayish and Gray to deep Pale white Grayish and
White golden yellow White
Sudut elevasi Low convex Raiced Raiced Low convex
Isolat murni yang didapatkan kemudian dilakukan identifikasi morfologi bakteri

secara mikroskopik dengan pewarnaan gram. Prinsip dari pewarnaan gram adalah
kemampuan dinding sel dalam mengikat zat warna dasar (kristal violet) setelah pencucian
alkohol 70%, keadaan ini berhubungan dengan komposisi senyawa penyusun dinding sel.
Pada bakteri gram positif dinding sel bakteri mengandung peptidoglikan lebih banyak
24
dibandingkan dengan bakteri gram negatif dan bakteri negatif memiliki struktur dinding sel
dengan kandungan lipid yang tinggi (Fitrah, 2011).
a b
c d
Gambar 4. 4 Hasil pewarnaan gram dari (a) koloni 1 sampel A, (b) koloni II sampel A, (c) koloni
III sampel B, dan (d) koloni IV sampel C (Dokumentasi Pribadi, 2021).
Hasil pewarnaan gram dari inokulasi bakteri yang diambil dari koloni yang tumbuh di
media NAP (Gambar 4.4) didapatkan hasil koloni bakteri 1 pada sampel A pada pewarnaan
gram memiliki bentuk basil dan tergolong dalam bakteri gram negatif dikarenakan koloni
berwarna merah, koloni bakteri II pada sampel A pada pewarnaan gram memiliki bentuk
coccus dan tergolong dalam bakteri gram positif dikarenakan koloni berwarna ungu, koloni
bakteri III pada sampel B pada pewarnaan gram memiliki bentuk coccobasil dan tergolong
dalam bakteri gram negatif dikarenakan koloni berwarna merah, serta koloni bakteri IV pada
sampel C pada pewarnaan gram memiliki bentuk basil dan tergolong dalam bakteri gram
negatif dikarenakan koloni berwarna merah.
Koloni bakteri yang sudah tumbuh dimedia NAP dan dilakukan identifikasi dengan
pewarnaan gram untuk melihat jenis bakteri gram negatif atau positif dilanjutkan dengan
penanaman ke media selektif-diferensial untuk mengetahui sifat bakteri. Media selektif-
diferensial yang kami gunakan untuk mengidentifikasi lebih lanjut dan mengetahui sifat
bakteri diantaranya adalah :
a. Mac Conkey Agar (MCA)
Media MacConkey Agar (MCA) adalah media yang digunakan untuk
mengisolasi dan membedakan anggota Enterobacteriaceae berdasarkan
kemampuannya memfermentasi laktosa. Media MCA merupakan media selektif-
25
diferensial yang mengandung laktosa, garam empedu, neutral red, dan kristal violet.
Garam empedu dan kristal violet berfungsi untuk menghambat pertumbuhan bakteri
gram positif. Pewarna neutral red merupakan indikator pH pada media MCA.
Akumulasi asam dari fermentasi laktosa dapat mengubah pewarna menjadi merah.
Pada bakteri yang dapat memfermentasi laktosa berubah warna menjadi merah pada
agar MCA, sedangkan bakteri yang tidak dapat memfermentasi laktosa berwarna
transparan atau tidak berwarna (Laboffe, 2011).
a b c
Gambar 4. 5 Hasil Streak Plate Method koloni bakteri pada media MCA setelah diinkubasi, (a)
media MCA yang ditumbuhi koloni bakteri dari sampel A, (b) media MCA yang
ditumbuhi koloni bakteri dari sampel B, dan (c) media MCA yang ditumbuhi
koloni bakteri dari sampel C (Dokumentasi Pribadi, 2021).
Interpretasi hasil (Gambar 4.5) pada sampel A terdapat bakteri yang dapat
memfermentasi laktosa dan bakteri yang tidak dapat memfermentasi laktosa. Pada
hasil uji sampel B menunjukkan bahwa bakteri tidak dapat memfermentasi laktosa.
Sedangkan pada sampel C mendapatkan hasil bahwa bakteri dapat memfermentasi
laktosa. Menurut Laboffe et al. (2011), kelompok lactose fermenter seperti
Escherichia coli dan Escherichia aerogenes yang dapat menghasilkan warna merah
muda. Dan bakteri yang tidak dapat memfermentasi laktosa seperti Shigella sonnei
dan Proteus mirabilis yang menghasilkan koloni berwarna transparan atau tidak
berwarna.
b. Mannitol Salt Agar (MSA)

Media Mannitol Salt Agar (MSA) merupakan media selektif yang digunakan
untuk mengisolasi dan diferensiasi dari bakteri Staphylococcus yang bersifat
patogen, terutama bakteri Staphylococcus aureus. Media MSA mengandung
karbohidrat mannitol, 7,5% sodium klorida (NaCl), dan indikator pH phenol red.
Kandungan NaCl menjadikan media ini bersifat selektif untuk Staphylococcus sp
karena banyak bakteri yang tidak dapat bertahan hidup di tingkat salinitas ini
(Leboffe, 2011).
26
a b c
Gambar 4. 6 Hasil Streak Plate Method koloni bakteri pada media MSA setelah diinkubasi,
(a) media MSA yang ditumbuhi koloni bakteri dari sampel A, (b) media MSA
yang ditumbuhi koloni bakteri dari sampel B, dan (c) media MSA yang
ditumbuhi koloni bakteri dari sampel C (Dokumentasi Pribadi, 2021).
Interpretasi hasil koloni bakteri yang ditumbuh pada media MSA (Gambar
4.6) adalah pada plate sampel A tumbuh koloni bakteri yang mengubah warna pada
media MSA menjadi kekuning- kuningan, sedangkan pada plate sampel B dan Plate
sampel C tumbuh koloni bakteri namun tidak mengubah warna media. Hal ini
menunjukkan bahwa koloni bakteri yang ada di plate sampel A dapat memfermentasi
manitol sehingga merubah warna media dari merah menjadi kuning, sedangkan
untuk plate sampel B dan plate sampel C koloni bakteri tidak memfermentasi
mannitol sehingga tidak terjadi perubahan warna pada MSA. Menurut Leboffe
(2011) spesies Staphylococcus patogen yang dapat memfermentasi mannitol dan
memproduksi asam yang akan mengubah indikator pH menjadi kuning, sedangkan
untuk spesies Staphylococcus non patogen dapat tumbuh akan tetapi tidak mengubah
warna.
c. Eosin Methylene Blue Agar (EMBA)
Media Eosin Methylene Blue Agar (EMBA) merupakan media selektif yang
digunakan untuk mengisolasi bakteri koliform. Media EMBA mengandung pepton,
laktosa, sukrosa, dan pewarna eosin dan methylene blue. Gula menyediakan substrat
yang difermentasi untuk mendorong pertumbuhan bakteri koliform. Pewarna eosin
dan methylene blue dapat menghambat pertumbuhan bakteri gram positif dan dalam
kondisi asam juga memproduksi warna ungu tua yang biasanya disertai dengan hijau
metalik sebagai indikator fermentasi laktosa atau sukrosa yang khas dari bakteri
koliform. Jumlah produksi asam yang sedikit (tipe Enterobacter aerogenosa dan
fermentor laktosa lambat) menghasilkan warna merah muda dari hasil pertumbuhan.
Sedangkan untuk bakteri yang tidak memfermentasi akan tumbuh dengan warna asli
mereka atau seperti warna media Leboffe (2011).
27
a b c
Gambar 4. 7 Hasil Streak Plate Method koloni bakteri pada media EMBA setelah diinkubasi,
(a) media EMBA yang ditumbuhi koloni bakteri dari sampel A, (b) media EMBA
yang ditumbuhi koloni bakteri dari sampel B, dan (c) media EMBA yang
ditumbuhi koloni bakteri dari sampel C (Dokumentasi Pribadi, 2021).
Interpretasi hasil dari media EMBA yaitu adanya pertumbuhan koloni bakteri
berwarna hijau metalik pada media EMBA (Gambar 4.7) sampel A dan C yang
diindikasi yaitu bakteri Escherichia coli karena dapat memfermentasi laktosa yang
mengakibatkan peningkatan kadar asam dalam media. Kadar asam yang tinggi dapat
mengendapkan methylen blue dalam media EMBA (Cheeptham, 2012 dan Lindquist,
2004).
d. Blood Agar Plate (BAP)
Media BAP merupakan media enrichment yang digunakan untuk
menumbuhkan beberapa jenis bakteri yang sulit ditumbuhkan di media umum. Media
ini juga digunakan untuk membedakan bakteri berdasarkan karakteristik
hemolitiknya, terutama dalam genus Streptococcus, Enterococcus, dan Aerococcus.
Beberapa spesies kokus Gram-positif menghasilkan eksotoksin yang disebut
hemolisin, yang mampu menghancurkan sel darah merah (eritrosit) dan hemoglobin.
Media BAP atau yang biasa disebut Agar Darah Domba karena mengandung 5%
darah domba dalam basis Tryptic Soy Agar, memungkinkan diferensiasi bakteri
berdasarkan kemampuannya untuk hemolisis sel darah merah (Leboffe and Pierce,
2011).
28
Gambar 4. 8 Hasil Streak Plate Method koloni bakteri pada media BAP setelah diinkubasi,
(a) media BAP yang ditumbuhi koloni bakteri dari sampel A, (b) media BAP
yang ditumbuhi koloni bakteri dari sampel B, dan (c) media BAP yang ditumbuhi
koloni bakteri dari sampel C.
Interpretasi hasil dari media BAP (Gambar 4.8) ini adalah pada pengujian
sampel dan B membentuk β-hemolisin (hemolisa seluruh), sedangkan untuk sampel
C membentuk α-hemolisin (hemolisa parsial). Menurut Khusnan dkk (2008),
terdapat tiga jenis utama hemolisis yaitu α-hemolisin, β-hemolisin, dan γ-hemolisin.
α-hemolisin akan membentuk zona terang disekitar koloni, β-hemolisin akan
membentuk zona agak gelap di sekitar koloni, dan yang menghasilkan γ-hemolisin
tidak membentuk zona hemolisis di sekitar koloni
Uji lanjutan biokimiawi perlu dilakukan untuk mengetahui lebih lanjut dari jenis
bakteri. Dimana uji biokimiawi adalah uji yang dilakukan untuk mengetahui sifat-sifat
fisiologis dari koloni bakteri hasil isolasi, dan biokimia bakteri berkaitan dengan proses
metabolisme dari sel bakteri. Sifat fisiologis bakteri perlu diketahui untuk melakukan
identifikasi bakteri karena sifat morfologis dari bakteri dapat tampak serupa bahkan tidak
dikenal sehingga dengan melakukan uji biokimiawi terhadap koloni bakteri yang dapat
mengetahui sifat daan menentukan spesies bakteri (Pakpahan dkk, 2013). Uji biokimiawi
untuk bakteri gram negatif yang dilakukan antara lain :
Tabel 4. 2 Hasil Uji Biokimia bakteri gram positif.
Uji Biokimia Koloni 1 Sampel A Koloni III Sampel B
Triple Sugar Iron Acid, gas + Alkali, H2S+
Methyl Red + +
Voges-Proskauer - -
Citrate - +
Urease - +
a. Triple Sugar Iron Agar (TSIA)

Pengujian Triple Sugar Iron Agar (TSIA) digunakan untuk membedakan
bakteri golongan enterobakter dan untuk membedakan bakteri tersebut dengan
29
bakteri gram negatif lainnya seperti Pseudomonas. TSIA merupakan media
diperkaya yang dirancang untuk membedakan bakteri dengan fermentasi glukosa,
fermentasi laktosa, fermentasi sukrosa, dan reduksi sulfur. Phenol red digunakan
sebagai indikator pH dan besi dalam besi sulfat merupakan hydrogen indikator
sulfida. Terdapat 2 bagian pada media TSIA yaitu slant dan butt (Leboffe and Pierce,
2011).
a b
Gambar 4. 9 Hasil inokulasi koloni bakteri pada media TSIA, (a) koloni I sampel A dan (b)
koloni III sampel B (Dokumentasi Pribadi, 2021).
Interpretasi hasil dari pengujian TSIA (Gambar 4.9) yaitu pada koloni I
sampel A didapatkan hasil terjadi fermentasi laktosa atau sukrosa sehingga terbentuk
kondisi asam pada slant dan butt serta terbentuk gas, dimana beberapa bakteri yang
dapat menyebabkan reaksi ini adalah Escherichia sp, Klebsiella sp, dan Enterobacter
sp. Sedangkan interpretasi hasil dari koloni II sampel B yaitu terjadi fermentasi
glukosa dan terbentuk H2S, dengan beberapa bakteri yang dapat menyebabkan reaksi
ini adalah Salmonella sp, Proteus sp, dan Citrobacter sp (Cappucino and Welsh,
2020; Rahman, 2016). Interpretasi hasil dari media TSIA dapat dilihat lebih lanjut
pada Gambar 4.10.
Gambar 4. 10 Hasil dan interpretasi hasil dari media TSIA (Leboffe and Pierce, 2011).
30
b. Methyl Red (MR)
Pengujian Methyl Red (MR) digunakan untuk membedakan bakteri golongan
enterobakter. Pengujian ini dapat mengidentifikasi kemampuan bakteri untuk
menghasilkan produk akhir asam yang stabil dengan cara memfermentasi asam
campuran glukosa. Media MR mengandung pepton, glukosa, dan buffer fosfat. Uji
MR dirancang untuk mendeteksi organisme yang mampu memfermentasi asam
campuran yang dapat menahan buffer fosfat pada media dan menurunkan pH. Methyl
red pada media MR digunakan sebagai indikator pewarnaan setelah dilakukan
inkubasi, akan berwarna merah pada pH 4,4 dan berwarna kuning pada pH 6,2
(Leboffe and Pierce, 2011).
a b
Gambar 4. 11 Hasil inokulasi koloni bakteri pada media MR, (a) koloni I sampel A dan (b)
koloni III sampel B (Dokumentasi Pribadi, 2021).
Interpetasi hasil dari pengujian MR (Gambar 4.11) yaitu pada koloni I sampel
A dan koloni III sampel B menunjukkan hasil positif yang ditunjukkan adanya
perubahan warna pada media menjadi merah, sehingga menunjukkan bahwa bakteri
dapat memfermentasi asam campuran sehingga dapat menahan buffer fosfat dan
menurunkan pH. Beberapa bakteri yang menunjukkan hasil positif pada uji MR
adalah Eschericia coli, Proteus mirabilis, dan Enterobacter aerogenes (Cappucino
and Welsh, 2020; Rahman, 2016).
c. Voges-Proskauer (VP)
Pengujian Voges-Proskauer (VP) digunakan untuk membedakan antara famili
enterobakter dengan bakteri batang gram negatif lainnya. Pengujian ini dapat
mengidentifikasi bakteri yang mampu menghasilkan aseton dari degradasi glukosa
selama fermentasi 2,3-butanediol. Media VP mengandung pepton, glukosa, dan
buffer fosfat. Penambahan reagen VP kedalam media setelah proses inkubasi dapat
mengoksidasi asetonin (jika ada) menjadi diasetil, yang nantinya akan bereaksi
dengan inti guanidine dari pepton dan akan menghasilkan warna merah atau dapat
31
disebut hasil positif. Tidak adanya perubahan warna atau terbentuk warna tembaga
setelah penambahan reagen VP disebut hasil negatif (Leboffe and Pierce, 2011).
Gambar 4. 12 Hasil inokulasi koloni bakteri pada media VP, (a) koloni I sampel A
dan (b) koloni III sampel B (Dokumentasi Pribadi, 2021).
Interpetasi hasil dari pengujian VP (Gambar 4.12) yaitu pada koloni I sampel
A dan koloni III sampel B menunjukkan hasil negatif dimana tidak terjadi perubahan
warna pada media setelah diinkubasi dan diberikan reagen VP. Hasil negatif yang
didapatkan menunjukkan bahwa bakteri tidak dapat memproduksi asetonin.
Beberapa bakteri yang menunjukkan hasil positif pada uji VP adalah Eschericia coli,
Proteus sp, Salmonella sp, dan Shigella sp (Cappucino and Welsh, 2020; Leboffe &
Pierce, 2010).
d. Simmon Citrate Agar (SCA)
Media Simmons Citrate Agar (SCA) dapat digunakan untuk mendiferensiasi
bakteri Enterobacteriaceae berdasarkan pemanfaatan sitrat sebagai satu-satunya
sumber karbon. Pengujian SCA digunakan untuk menguji kemampuan organisme
untuk memanfaatkan sitrat sebagai sumber energi. Bakteri yang dapat tumbuh pada
media ini menghasilkan enzim citrate-permease yang mampu mengubah sitrat
menjadi piruvat. Piruvat kemudian dapat memasuki siklus metabolisme organisme
untuk produksi energi. Adanya sodium karbonat akan mengubah indikator
bromthymol blue dari berwarna hijau menjadi warna biru (Cappucino and Welsh,
2020).
Gambar 4. 13 Hasil inokulasi koloni bakteri pada media SCA, (a) koloni I sampel A
32
Interpretasi hasil dari pengujian SCA (Gambar 4.13) yaitu pada koloni I
sampel A medapatkan hasil negatif yang ditunjukkan dengan tidak adanya perubahan
warna pada media. Sedangkan pada koloni III sampel A mendapatkan hasil positif
yang ditunjukkan dengan adanya perubahan warna media menjadi warna biru, hal ini
menandakan bahwa bakteri mampu menggunakan sitrat sebagai satu-satunya sumber
karbon dan energi. Menurut Sayuti dkk (2017), adanya pertumbuhan bakteri
merupakan indikasi pemanfaatan sitrat dalam metabolit siklus Krebs. Ketika bakteri
memetabolisme sitrat, garam amonium dipecah menjadi amonia, yang meningkatkan
alkalinitas. Pergeseran pH mengubah indikator biru bromtimol dalam medium dari
hijau menjadi biru di atas pH 7,6.
Beberapa bakteri yang dapat menghasilkan hasil positif dalam uji citrate
diantaranya Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae, Salmonella
typhimurium, Proteus vulgaris, dan Pseudomonas aeruginosa. Beberapa bakteri
yang menghasilkan hasil negatif adalah Escherichia coli dan Shigella sp (Rahman,
2016).
e. Urease Test
Pengujian urease dapat digunakan untuk membedakan bakteri berdasarkan
kemampuannya dalam menghidrolisis urea menggunakan enzim urease. Bakteri
patogen saluran kemih dari genus Proteus dapat dibedakan dari bakteri enterik
lainnya melalui aktivitas urease yang cepat. Urea merupakan produk dari
dekarboksilasi asam amino tertentu. Hal ini dapat dihidrolisis menjadi ammonia dan
karbon dioksida oleh bakteri yang mengandung enzim urease. Urea agar
diformulasikan untuk membedakan bakteri yang menhasilkan positif urease cepat,
positif urease lambat, dan negatif urease. Banyak bakteri enterik (dan beberapa
lainnya) yang memiliki kemampuan untuk melakukan metabolisme urea, akan tetapi
hanya Proteus, Morganella, dan Providencia yang menghasilkan positif urease cepat
(Leboffe and Pierce, 2011).
Media urease mengandung urea, pepton, potassium fosfat, glukosa, phenol red
yang merupakan indikator, dan agar pepton dan glukosa yang merupakan nutrisi
esensial bagi bakteri. Hidrolisis urea menjadi ammonia oleh bakteri yang
menghasilkan positif urease akan mengatasi buffer pada media dan mengubah warna
media dari kuning-oranye menjadi merah muda (Leboffe and Pierce, 2011).
33
Gambar 4. 14 Hasil inokulasi koloni bakteri pada media Urease, (a) koloni I sampel A
Interpretasi hasil dari pengujian urease (Gambar 4.14) yaitu pada koloni I
sampel A medapatkan hasil positif yang ditunjukkan dengan adanya perubahan
warna merah muda pada media, dimana bakteri dapat Hidrolisis urea oleh ammonia
akan mengalahkan buffer dan merubah warnanya dari kuning-oranye menjadi merah
muda. Sedangkan pada koloni III sampel B medapatkan hasil negatif, yang ditandai
dengan tidak ada perubahan warna pada media. Contoh bakteri yang dapat
menghasilkan hasil positif dalam urease test adalah Klebsiella sp, Proteus sp dan
Micrococcus sp. Bakteri seperti Escherichia sp dan Salmonella sp menunjukkan hasil
negatif pada uji urease (Cappucino and Welsh, 2020; Leboffe and Pierce, 2010).
Interpretasi hasil dari media TSIA dapat dilihat lebih lanjut pada gambar 4.15.
Gambar 4. 15 Hasil dan interpretasi hasil dari media Urease (Leboffe and Pierce, 2011).
Sedangkan uji biokimiawi yang dilakukan untuk koloni bakteri gram positif yaitu
antara lain :
a. Uji Katalase
Uji katalase berguna dalam mengidentifikasi kelompok bakteri tertentu. Uji
katalase pada bakteri bentuk kokus digunakan untuk membedakan Staphylococcus dan
Streptococcus. Kelompok Streptococcus memberi reaksi negatif pada uji katalase,
sedangkan Staphylococcus memberikan reaksi positif (Hajar dkk, 2018).
34
Gambar 4. 16 Hasil uji katalase pada koloni bakteri II sampel A (Dokumentasi Pribadi,
2021).
Hasil pengujian katalase pada koloni bakteri II sampel A (Gambar 4.16)

didapatkan hasil positif, yang ditandai dengan adanya gelembung gas (O2) yang
terbentuk. Gelembung gas (O2) diproduksi oleh bakteri karena menghasilkan enzim
katalase sehingga mampu menghidrolisis hydrogen peroksida (H2O2) menjadi air
(H2O) dan gelembung gas (O2) (Hajar dkk, 2018).
b. Uji Koagulase
Uji koagulase merupakan uji yang digunakan untuk mengetahui ada tidaknya
enzim koagulase yang dihasilkan oleh Staphylococcus sp. Reaksi positif pada uji
koagulase ditunjukkan dengan adanya gumpalan seperti gel dalam tabung, dan reaksi
negatif apabila tidak terdapat gumpalan menyerupai gel pada tabung (Hayati dkk,
2019).
Gambar 4. 17 Hasil uji koagulasi pada koloni bakteri II sampel A (Dokumentasi Pribadi,
2021).
Hasil pengujian katalase pada koloni bakteri II sampel A (Gambar 4.17)

didapatkan hasil negative atau bakteri tidak memiliki enzim koagulase. Enzim
koagulase ini merupakan protein ekstraseluler yang dihasilkan oleh Staphylococcus
aureus yang dapat menggumpalkan plasma. Penggumpalan plasma terjadi
dikarenakan terdapat protein yang menyerupai enzim yang bila ditambahkan oksalat
atau sitrat dapat menyebabkan penggumpalan. Faktor serum bereaksi dengan
koagulase untuk membentuk esterase, aktivitas penggumpalan, dan mengaktivasi
protrombin menjadi trombin. Trombin akan membentuk fibrin yang berpengaruh
terhadap terjadinya penggumpalan plasma (Hayati dkk, 2019).
35
Koloni bakteri yang sudah diidentifikasi dan diketahui pasti jenis dari bakteri tersebut
selanjutnya dilakukan uji sensitivitas antibiotik. Dimana uji sensitivitas antibiotik
merupakan tes yang digunakan untuk menguji kepekaan suatu bakteri terhadap suatu
antibiotik, dengan tujuan untuk mengetahui efektifitas dari suatu antibiotik (Khusuma dkk,
2019). Hasil dari uji sensitivtas antibiotik menggunakan media MHA dan disc antibiotik dan
dilakukan dengan metode Disc Diffusion Test dapat dilihat pada Gambar 4.18 Dan pada
Tabel 4.3.
Gambar 4. 18 Hasil uji sensitifitas antibiotik pada : (a) bakteri E coli, (b) bakteri
Staphylococcus aureus, dan (c) bakteri Proteus sp. (Dokumentasi Pribadi, 2021).
Tabel 4. 3 Hasil uji sensitivitas bakteri.
Bakteri Antibiotik
Amphicillin Ciprofloxacin Gentamicin Eritromycin Penicillin
E coli Resisten 18 mm 15 mm - -
(Intermediet) (Sensitif)
Staphylococcus - Resisten 18 mm Resisten 19 mm
aureus (Sensitif) (Resisten)
Proteus sp. Resisten Resisten Resisten - -
Hasil dari uji sensitivitas antibiotik pada bakteri Escherichia coli didapatkan hasil
resisten terhadap antibiotik Amphicillin, intermediet terhadap Ciprofloxacin, dan sensitif
terhadap Gentamicin. Hasil dari uji sensitivitas antibiotik pada bakteri Staphylococcus
aureus didapatkan hasil resisten terhadap antibiotik Ciprofloxacin, Eritromycin, dan
Penicillin, serta sensitive terhadap Gentamicin. Dan hasil dari uji sensitivitas antibiotik pada
bakteri Proteus sp Didapatkan hasil resisten terhadap antibiotik Amphicillin, Ciprofloxacin,
dan Gentamicin. Resistensi merupakan suatu keadaan berkurangnya pengaruh obat anti
infeksi terhadap bakteri atau secara alamiah bakteri tidak sensitif oleh perlakuan antibiotik.
Mekanisme resistensi bakteri dapat melalui berbagai cara seperti penginaktifkan obat,
36
perubahan target atau struktur enzim, penurunan akumulasi obat oleh sel, adanya variasi
jalur metabolic maupun peningkatan konsentrasi metabolik (Nugroho dkk, 2005).
Bakteri Escherichia coli pada ayam umumnya dikenal sebagai bakteri normal didalam
saluran pencernaan. Patogenesis dari bakteri pada ayam ini seringkali dikaitkan sebagai
infeksi sekunder yang memperburuk kondisi inang setelah adanya infeksi primer oleh agen
penyakit lain. Resistensi E coli terhadap antibiotik ampicillin yang ditunjukkan dengan tidak
terbentuk zona hambat karena amphicillin tidak mampu menghambat pertumbuhan bakteri,
yang mana dapat disebabkan oleh kemampuan bakteri menghasilkan enzim b-lactamase
yang disandi oleh gen dalam plasmid faktor R. Mekanisme resistensi terhadap ampicillin
berhubungan dengan permeabilitas membran, termasuk terjadinya mutase membran terluar
yang umumnya disandi secara kromosomal sehingga lebih stabil dibandingkan dengan sifat
resistensi yang disandi oleh gen pada plasmid (Krisnaningsih dkk, 2005). Uji sensitifitas
antibiotik bakteri E coli terhadap antibiotik gentamicin menunjukkan hasil terbentuk zona
hambat 15 mm atau bersifat sensitif, hal ini disebabkan karena mekanisme kerjanya mampu
menghambat sintesis protein yang dimulai dari perlekatan aminoglikosida pada reseptor
protein spesifik subunit 30s pada ribosom bakteri. Gentamicin merupakan antibiotik
golongan aminoglikosida yang bersifat bakterisida (dapat membunuh bakteri), dimana
antibiotik ini tidak diserap melalui saluran pencernaan sehingga harus diberikan secara
parenteral untuk infeksi sistemik (Nurfadhilah, 2019). Uji sensitifitas antibiotik bakteri E
coli terhadap antibiotik ciprofloxacin menunjukkan hasil terbentuk zona hambat 18 mm atau
bersifat intermediet, hal ini disebabkan karena ciprofloxacin mampu menghambat replikasi
DNA dengan cara berikatan pada enzim gyrase DNA. Ciprofoxacin merupakan golongan
fluorokuinolon menyekat sintesis DNA bakteri dengan menghambat topoisomerase II (DNA
girase) dan topoimerase IV bkateri. Inkubasi DNA girase mencegah relaksasi DNA
supercoiled positif yang diperlukan untuk transkripsi dan replikasi normal. Inhibisi
topoisemerase IV mengganggu pemisahan kromosom DNA pasca replikasi ke dalam
masing-masing sel anak selama pembelahan sel (Nurfadhilah, 2019).
Resistensi Staphylococcus aureus terhadap antibiotik penicillin yang ditunjukkan
dengan terbentuk zona hambat 19mm yang termasuk kategori resisten, disebabkan karena
golongan ini dapat menghambat Protein Pengikat Penisilin (PBP) yang merupakan enzim
dalam membran plasma sel bakteri yang secara normal terlibat dalam penambahan asam
amino yang berikatan silang dengan peptidoglikan dinding sel bakteri. Resistensi terhadap
penisilin juga dapat muncul akibat bakteri ini memiliki sistem transfor membran luar (outer
membrane) yang terbatas, yang mencegah penisilin mencapai membran sitoplasma yang
merupakan lokasi dari PBP. Selain itu, resistensi ini juga dapat diakibatkan oleh S. aureus
37
yang memiliki kemampuan dalam memproduksi enzim beta-laktamase dan dapat
menghidrolisis ikatan pada cincin beta-laktam molekul penisilin sehingga mengakibatkan
inaktivasi pada kedua antibiotik ini. Hal ini mengakibatkan terapi antibiotik golongan beta-
laktam menjadi tidak responsif karena penggunaan antibiotik yang tidak rasional (Sanu dkk,
2015). Uji sensitifitas antibiotik bakteri Staphylococcus aureus terhadap antibiotik
gentamicin menunjukkan hasil terbentuk zona hambat 18 mm atau bersifat sensitif.
Gentamisin bekerja dengan berikatan pada subunit ribosom 30S yang mengakibatkan
ketidaksesuaian kodon dengan antikodon sehingga terjadi kegagalan pembentukan protein.
Mekanisme resistensi bakteri terhadap golongan aminoglikosida dapat berupa perubahan
reseptor yaitu protein spesifik pada subunit 30S ribosom bakteri yang merupakan bagian
sasaran antibiotik dan produksi enzim penginaktivasi aminoglikosida (Wijiati dkk, 2021).
Uji sensitifitas antibiotik bakteri Staphylococcus aureus terhadap antibiotik eritromycin dan
ciprofloxacin menunjukkan hasil tidak terbentuk zona hambat atau bersifat resisten.
Antibiotik eritromycin dan ciprofloxacin bekerja dengan menghambat sintesa protein dari
bakteri (Wijiati dkk, 2021).
Resistensi bakteri Proteus sp terhadap antibiotik ampicillin, ciprofloxacin, dan
gentamycin memiliki hasil resisten, yang ditunjukkan dengan tidak terbentuk zona hambat
karena tidak mampu menghambat pertumbuhan bakteri. Uji Sensitivity-Resistensi test
antibiotik antara lain pada antibiotik eritromisin memiliki resistensi yang tinggi terhadap
bakteri Proteus mirabilis yaitu sebanyak 100% (Yohanna Eclesia, 2017).
4.2 Pembahasan
Hasil dari isolasi dan indentifikasi bakteri yang didapatkan dari sampel yang dikoleksi,
diketahui koloni bakteri I sampel A merupakan bakteri Escherichia coli, koloni bakteri II
sampel A merupakan bakteri Staphylococcus aureus, koloni bakteri III sampel B merupakan
bakteri Proteus sp, dan kolono bakteri IV sampel C merupakan bakteri Escherichia coli.
4.2.1 Escherichia coli
Hasil penanaman koloni bakteri I sampel A yang dikoleksi dari swab trakea Ayam layer
dan koloni bakteri IV sampel C yang dikoleksi dari swab trakea DOC Ayam broiler yang
dilakukan isolasi dan identifikasi pada media enrichment atau diperkaya, media diferensial-
selektif, dan media biokimia didapatkan hasil koloni bakteri Escherichia coli.
Escherichia coli tergolong dalam bakteri Gram Negatif, berbentuk batang yang tidak
membentuk spora, tidak tahan asam dan ukurannya 2-3 x 0,6 µm. Bakteri ini dapat ditemukan
pada berbagai infeksi pada hewan dan merupakan agen primer atau sekunder dari infeksi
tersebut. Berdasarkan penyakit yang ditimbulkannya, dapat digolongkan menjadi dua
kelompok. Pertama, E. coli yang bersifat oportunistik, artinya dapat menyebabkan penyakit
38
dalam keadaan tertentu, misalnya kekurangan makanan atau mengikuti penyakit lain. Kedua,
bersifat enteropatogenik/ enterotoksigenik, E. coli yang mempunyai antigen perlekatan dan
memproduksi enterotoksin sehingga dapat menimbulkan penyakit. Faktor virulensi E. coli
dipengaruhi oleh ketahanannya terhadap pagositosis, kemampuan perlekatan terhadap epitel sel
pernafasan dan ketahanannya terhadap daya bunuh oleh serum. E. coli yang patogen ini
mempunyai struktur dinding sel yang disebut “pili”, yang tidak ditemukan pada serotipe yang
tidak patogen, dan “pili” inilah yang berperan dalam kolonisasi (Tarmudji, 2003).
Dalam kondisi normal E. coli terdapat di dalam saluran pencernaan ayam. Sekitar 10-15
persen dari seluruh E. coli yang ditemukan di dalam usus ayam yang sehat tergolong serotipe
patogen. Bagian usus yang paling banyak mengandung kuman tersebut adalah jejunum, ileum
dan sekum. Jenis E. coli yang terdapat di dalam usus tidak selalu sama dengan jenis
yang ditemukan pada jaringan lain. Sebagai agen penyakit sekunder, E. coli sering mengikuti
penyakit lain, misalnya pada berbagai penyakit pernafasan dan pencernaan yang menyerang
ayam. Kenyataan di lapangan, timbulnya kasus kolibasilosis, terutama akibat pengaruh
imunosupresif dari Gumboro (ayam pedaging lebih dominan dibanding petelur) dan sebagai
penyakit ikutan pada Chronic Respiratory Disease (CRD), Infectious Coryza (Snot), Swollen
Head Syndrome (SHS), Infectious Laryngo Tracheitis (ILT) dan koksidiosis (Tarmudji, 2003).
Pada swab trakea sampel A dan swab trakea sampel C yang kami lakukan isolasi dan
identifikasi bakteri, didapatkan koloni bakteri Escherichia coli pada saluran pernafasan.
Adanya Escherichia coli pada saluran pernafasan dapat terjadi karena E coli dapat menjadi agen
penyakit sekunder atau sering mengikuti penyakit lain pada saluran pernafasan seperti penyakir
CRD dan Coryza. Debu dalam kandang ayam menurut Tarmudji (2013), mengandung 105-106
bakteri E coli/gram dan bakteri ini akan tahan lama, apabila debu yang mengandung E coli
terhirup oleh ayam maka dapat menyebabkan juga infeksi saluran pernafasan.
4.2.2 Staphylococcus aureus
Bakteri Staphylococcus aureus bersifat non-motil, nonspora, anaerob fakultatif, katalase
positif dan oksidase negatif. Staphylococcus aureus tumbuh pada suhu 6,5-46º C dan pada pH
4,2-9,3. Koloni tumbuh dalam waktu 24 jam dengan diameter mencapai 4 mm. Koloni pada
perbenihan padat berbentuk bundar, halus, menonjol dan berkilau. Staphylococcus aureus
mudah tumbuh pada banyak pembenihan bakteri. Berbagai tingkat hemolisis dihasilkan oleh S.
aureus dan kadang-kadang oleh spesies bakteri lain. Staphylococcus aureus menghasilkan tujuh
tipe enterotoksin, yaitu: A, B, C, C1, C2, D dan E. Faktor virulensi S. aureus yang
dapat menyebabkan infeksi meliputi: 1. Protein permukaan yang mempromosikan kolonisasi
dalam jaringan hospes (protein A, adesin, hemaglutinin, glikoprotein, fibrionectin), 2. Invasin
membantu bakteri menyebar dalam jaringan (leukocidin, kinase, hyaluronidase), 3. Faktor
39
permukaan yang menghalangi fagositosis (kapsul, protein A), 4. Faktor biokimia yang
meningkatkan ketahanan bakteri di dalam fagosit (carotenoid, produksi katalase), 5. Reaksi
imunologis (protein A, coagulase, clotting factor), 6. Toksin perusak membran (hemolysin,
leukotoxin, leukocidin) dan 7. Eksotoksin dalam jaringan menimbulkan kerusakan dan gejala
penyakit (SEA-G, TSST, ET) (Dewi, 2013).
Staphylococcus aureus merupakan bakteri flora normal akan tetapu dapat menjadi bakteri
yang sering menimbulkan penyakit dengan hasil koagulase positif produksi koagelasi dianggap
sama dengan memiliki potensi menjadi pathogen invasive (Hamtini dan Ira, 2017).
Staphylococcus aureus yang merupakan flora normal pada kulit, membran mukosa dan saluran
pernapasan atas dapat menjadi oportunistik yang akan menjadi patogen bila jumlahnya melebihi
jumlah normalnya (>110 CFU/ml). Staphylococcus aureus yang berkembang semakin banyak
dapat turun ke saluran pernapasan bawah melalui udara (inhalasi) dan dapat berubah menjadi
patogenik dan menyebabkan infeksi saluran nafas (Rondhianto dkk, 2016).
Pada swab trakea sampel A yang kami lakukan isolasi dan identifikasi bakteri, juga
didapatkan koloni bakteri Staphylococcus aureus pada saluran pernafasan. Adanya
Staphylococcus aureus pada saluran pernafasan dapat terjadi karena Staphyloccoccus aureus
merupakan flora normal pada saluran pernafasan atas dan dapat menjadi oportunistik yang akan
menjadi pathogen bila jumlahnya melebihi batas normal.
4.2.3 Proteus sp
Proteus sp adalah bakteri Gram negatif dan mempunyai bentuk batang. Bakteri
Proteus sp mempunyai enzim azoreduktase yang terletak pada intraseluler karena terdapat
pada dinding membran dan di dalam sitoplasma sel. Genus Proteus sp. termasuk ke dalam
golongan Enterobacteriace famili Proteae. Saat ini, genus Proteus terdiri dari lima spesies
yakni P. mirabilis, P. vulgaris, P. penneri, P. hauseri dan P. myxofaciens, serta tiga spesies
dari genus Proteus yang tidak disebutkan namanya. Proteus adalah bakteri dimorfik, yang
dalam media cair bersifat motil, batang pendek berflagel peritrik (panjang 1,0 hingga 2,0 m
dengan 6-10 flagela). Proteus sp. merupakan bakteri flora normal pathogen opportunistic
pada sistem pencernaan unggas, sering terjadi pada hewan yang mengalami penurunan sistem
imun atau individu dengan penyakit sehingga mudah terinfeksi (Rozalski dkk., 2012).
Sebenarnya Proteus mirabilis merupakan flora normal dari saluran cerna. Bakteri ini
dapat juga ditemukan bebas di air atau tanah. Jika bakteri ini memasuki saluran kencing, luka
terbuka, atau paru-paru akan menjadi bersifat pathogen. Proteus sering juga terdapat dalam
daging busuk dan sampah serta feses hewan, juga bisa ditemukan di tanah kebun atau pada
tanaman (Khairani, 2019).
40
BAB V PENUTUP
5.1 Kesimpulan
Berdasarkan dari anamnesa, sinyalemen, gejala klinis, dan pemeriksaan mikrobiologi
pada ayam yang diduga mengalami gangguan saluran pernafasan, dimana pada pemeriksaan
mikrobiologi sampel yang digunakan yaitu swab trakea ayam didapatkan koloni bakteri
Escherichia coli, Staphylococcus aureus, dan Proteus sp.
5.2 Saran
Perlu diperhatikan lagi mengenai sterilitas di tempat melakukan uji untuk
meminimalisir terjadinya kontaminasi dari bakteri yang lain. Hal tersebut dilakukan untuk
menghindari hasil yang bias.
41
DAFTAR PUSTAKA
Istini. 2020. Pemanfaatan Plastik Polipropilen Standing Pouch Sebagai Salah Satu Kemasan
Sterilisasi Peralatan Laboratorium. Indonesian Journal of Laboratory 2(3) : 41-46.
Iekram, A. M. (2018). IDENTIFIKASI Mycoplasma sp PADA AYAM BROILER SUSPECT

CHRONIC RESPIRATORY DISEASE DENGAN UJI AGLUTINASI DAN ISOLASI
BAKTERI DI BALAI BESAR VETERINER MAROS. Makassar: FK Universitas
Hasanuddin.
Leboffe, MJ., Pierce, BE. 2011. A Photographic Atlas for the Microbiology Laboratory 4th Edition.
United Stated of America
Syah, Insan Sunan Kurniawan. 2015. Penentuan Tingkatan Jaminan Sterilisasi Alat pada Autoklaf
dengan Indikator Biologi Spore Strip. Jurnal Farmaka 14(1) : 59-69.
Cappucino, J. G. & Welsh, C., 2020. Microbiology: A Laboratory Manual 12th Edition
Global Edition. 12th ed. England: Pearson.
Murwani, S., 2015. Dasar - Dasar Mikrobiologi Veteriner. 1st ed. Malang: Universitas
Brawijaya.
Puspitasari, F, D., Maya, S., dan Nengah, D, K., Isolasi dan Karakteristik Bakteri Aerob Proteolitik
dari Tangki Septik. Jurnal Sains dan Seni ITS 1(1) : 1-4.
Pakpahan, M., Ekowati, C.N., dan K. Handayani. 2013. Karakterisasi Fisiologi Dan
Pertumbuhan Isolat Bakteri Bacillus Thuringiensis Dari Tanah Naungan Di
Lingkungan Universitas Lampung. Lembaga Penelitian Universitas
Lampung.
Sayuti, I., Nusril,dan I. H. B. Butar. 2017. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Limbah Minyak Bumi
Dari Perairan Pelabuhan Sungai Duku Kota Pekanbaru Sebagai Rancangan Modul
Pembelajaran Biologi Sma. Jurnal Online Mahasiswa (JOM) Bidang Keguruan dan Ilmu
Pendidikan, 1-15.
Rahman, S. B., 2016. Comparative Study of Complement Protein Activity of Blood Serum
against Shigella flexneri in Urban and Slum population of Bangladesh. Dhaka:
BRAC University.
Tarmudji. 2003. Kolibasilosis pada Ayam : Etiologi, Patologi dan Pengendaliannya. WARTAZOA
13(2).
42
Dewi, A, K., 2013. Isolasi, Identifikasi, dan Uji Sensitivitas Staphylococcus aureus Terhadap Susu
Kambing dari Sampel Susu Kambing Peranakan Ettawa (PE) Penderita Mastitis di
Wilayah Girimulyo, Kulonprogo, Yogyakarta. Jurnal Sain Veteriner 31(2).
Hajar, S., Helmi, T, Z., Darmawi, Al Azhar, Fakhurrazi, dan Azhar. 2018. Isolasi dan Identifikasi
Bakteri Staphylococcus aureus pada Vagina Sapi Aceh. Jurnal Ilmiah Mahasiswa
Veteriner 2(3).
Hajar, L, N., Wiwiek, T., Ratih, N, P., Sri, C., Maya, N, Y., dan Prima, A, W., 2019. Isolasi dan
Identifikasi Staphylococcus aureus pada Susu Kambing Peranakan Etawa Penderita
Mastitis Subklinis di Kelurahan Kalipuro, Banyuwangi. Jurnal Medik Veteriner 2(2).
Rozalski, A. et al., 2012. Proteus Sp. – An Opportunistic Bacterial Pathogen – Classification,

Swarming Growth, Clinical Significance And Virulence Factors. Folia Biologica et
Oecologica, Volume 8, pp. 1-17.
Khairani, Nanni. 2019. Identifikasi Bakteri Proteus mirabilis pada Infeksi Saluran Kemih (ISK)
yang Menderita Penyakit Ginjal Kronik di RSUP H Adam Malik Medan. Medan :
Politeknik Kesehatan KEMENKES RI Medan.
Rondhianto, Dini, K., Ayu, K, V., 2016. Batuk Efektif dan Napas Dalam untuk Menurunkan
Kolonisasi Staphylococcus aureus dalam Sekret Pasien Pasca Operasi dengan Anastesi
Umum di RSD Dr. Soebandi Jember. NurseLine Journal 1(1).
Hamtini, Ira, N., 2017. Isolasi dan Identifikasi Staphylococcus sp dari Udara di Ruangan Ber-AC
Gedung Analis Kesehatan. Jurnal Medikes 5(2).
Beberapa Jenis Unggas . Jurnal Ilmiah Fillia Cendekia Vol. 6 No. 1, 54-58.
Untari, T. (2003). Isolasi dan identifikasi Bakteri dari ayam broiler yang menunjukkan gejala
penyakit respirasi. J. Sain Vet Vol XXI No 1.
Cheeptham N. 2012. Eosin Methylene blue agar. Thompson Rivers University, Canada. http://www.
microbelibrary.org/library/laboratory-test/2871-eosinmethylene-blue diakses pada
tanggal 31 januari 2014 19:44.
Lindquist J. 2004. Differential Media: Eosin Methylene Blue Agar (Levine's Formulation).
Department of Bacteriology. U.W-Madison. http://www.jlindquist.net/generalmicro/
dfemb.html.
43
Rahayu, S, A., 2017. Uji Cemaran Air Minum Masyarakat Sekitar Margahayu Raya Bandung
dengan Identifikasi Bakteri Escherichia coli. IJPST : 53-54.
Safitri R., Sinta S. 2010. Medium Analisis Mikroorganisme, CVTrans Info Medika; Jakarta.
Suhartati R., Sulistiani, Ai N. 2018. Pemanfaatan Serbuk Kacang Kedelai (Glycine max) Sebagai
Bahan Pembuatan Media Manitol Salt Agar (MSA) Untuk Pertumbuhan Bakteri
Staphylococcus. Prosiding Seminar Nasional dan Diseminasi Penelitian Kesehatan
STIKes Bakti Tunas Husada Tasikmalaya.
Pudjiatmoko, dkk. 2014. Manual Penyakit Unggas. Subdit Pengamatan Penyakit Hewan Direktorat
Kesehatan Hewan Direktorat Jenderal Peternakan dan Kesehatan Hewan Kementerian
Pertanian.
Nugroho, W, S., dan Michael, H, W., 2005. Uji sensitivitas Bakteri Escherichia coli Isolat Asam
Ayam yang Bereaksi Positif pada Media Congo Red Terhadap Preparat Amphisilin,
Streptomisin, dan Enrofloxacin. Jurnal Sain Veteriner vol 1.
Krisnaningsih, M, M., Widya, A., dan M Haryadi, W., 2005. Uji Sensitivitas Isolat Eschericia coli
Patogen pada Ayam Terhadap Beberapa Jenis Antibiotik. Jurnal Sain Veteriner vol 1.
Nurfadhilah. 2019. Identifikasi dan Uji Sensitifitas Antibiotik Terhadap Bakteri Coliform yang
Terdapat pada Mie Basah di Pasar Peunayong Kota Banda Aceh. Banda Aceh : Fakultas
Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri Ar-Raniry Darussalam Banda Aceh.
Sanu, E, M., Maxs, U, E, S., dan Elisabet T., 2015. Uji Sensitivitas Antibiotik Terhadap
Staphylococcus aureus yang Diisolasi dari Luka Kulit Anjing di Desa Merbaun,
Kecamatan Amarisi Barat Kabupaten Kupang. Jurnal Kajian Veteriner 3(2) : 175-189.
Wijiati, A, M., Usamah, A., dan Aulia, A, M., Pola Resistensi Staphylococcus Koagulase Positif
yang Diisolasi dari Burung Lovebird Terhadap Beberapa Antibiotik. ARSHI Veterinary
Letters 5(1) : 15-16.
44
“UJI HEMAGLUTINASI (HA TEST) DAN UJI HAMBATAN HEMAGLUTINASI (HI

TEST), DAN RAPID SERUM AGGLUTINATION (RSA)”
Oleh :

MALANG
2021
i
LEMBAR PENGESAHAN
“UJI HEMAGLUTINASI (HA TEST) DAN UJI HAMBATAN HEMAGLUTINASI (HI

TEST), ROSE BENGAL TEST (RBT), DAN RAPID SERUM AGGLUTINATION (RSA)”
Oleh :
Menyetujui,
Komisi Penguji

NIP. 19870925 201903 2 011 NIP. 19950224 201903 1 008
Mengetahui,

NIP. 19851116 201803 1 001
ii
KATA PENGANTAR
yang membangun.
Tim Penulis
iii
DAFTAR ISI
LEMBAR PENGESAHAN .................................................................................................................ii

KATA PENGANTAR ........................................................................................................................iii
DAFTAR ISI ....................................................................................................................................... iv
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................................................... vi
BAB I PENDAHULUAN .................................................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ........................................................................................................................... 1
1.2 Rumusan Masalah ...................................................................................................................... 2
1.3 Tujuan......................................................................................................................................... 2
1.4 Manfaat ....................................................................................................................................... 2
BAB II TINJAUAN PUSTAKA.......................................................................................................... 3
2.1 Teknik Pengambilan Sampel dan Pembuatan Sampel ............................................................... 3
2.2 Uji Hemagglutination Assay (HA) dan Uji Hemaglutination Inhibition (HI) ........................... 3
2.3 Rose Bengal Test (RBT) ............................................................................................................ 4
2.4 Rapid Serum Aglutination (RSA) .............................................................................................. 5
2.4.1 Rapid Salmonella pullorum ................................................................................................. 5
2.4.2 Rapid Mycoplasma gallisepticum........................................................................................ 5
BAB III METODOLOGI ..................................................................................................................... 6
3.1 Tempat dan Waktu Pelaksanaan................................................................................................. 6
3.2 Peserta Kegiatan PPDH .............................................................................................................. 6
3.3 Alat dan Bahan ........................................................................................................................... 7
3.4 Metode Pemeriksaan .................................................................................................................. 7
3.4.1 Uji HA dan HI ..................................................................................................................... 7
3.4.2 Rose Bengal Test (RBT) ...................................................................................................... 8
3.4.3 Rapid Serum Agglutination (RSA) ...................................................................................... 9
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................................................... 10
4.1 Hasil.......................................................................................................................................... 10
4.1.1 Uji Hemagglutination Assay (HA) .................................................................................... 10
4.1.2 Uji Hemagglutination Inhibition (HI) ................................................................................ 10
4.1.3 Uji Rose Bengal Test (RBT).............................................................................................. 11
4.1.4 Uji Rapid Serum Agglutionation (RSA)............................................................................ 11
4.2 Pembahasan .............................................................................................................................. 12
4.2.1 Uji Hemagglutination Assay (HA) .................................................................................... 12
4.2.2 Uji Hemagglutination Inhibition (HI) ................................................................................ 12
iv
4.2.3 Uji Rose Bengal Test (RBT).............................................................................................. 13
4.2.4 Uji Rapid Serum Agglutination (RSA).............................................................................. 14
4.3. Penyakit Avian Influenza (AI) ................................................................................................ 15
4.3.1. Morfologi .......................................................................................................................... 15
4.3.2. Cara Penularan .................................................................................................................. 15
4.3.3. Gejala Klinis ..................................................................................................................... 16
4.3.4. Siklus Hidup dan Mekanisme Infeksi ............................................................................... 16
4.4. Peyakit New Castle Diseases (ND) ......................................................................................... 18
4.4.1. Morfologi dan Sifat........................................................................................................... 18
4.4.2. Cara Penularan .................................................................................................................. 18
4.4.3. Gejala Klinis ..................................................................................................................... 19
BAB V PENUTUP............................................................................................................................. 21
5.1 Kesimpulan............................................................................................................................... 21
5.2 Saran ......................................................................................................................................... 21
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................................................ 22
v
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
4. 1 Hasil uji Hemagglutination Assay (HA) AI dan ND .................................................................. 10
4. 2 Hasil Uji Hemagglutination Inhibition (HI) AI dan ND ............................................................ 10
4. 3 Hasil Uji Rose Bengal Test (RBT) dengan menggunakan serum ............................................... 11
4. 4 Hasil Uji Rapid Serum Agglutination (RSA) Pullorum). ........................................................... 11
4. 5 Hasil Uji Hasil Uji Rapid Serum Agglutination (RSA) Mycoplasma). ...................................... 12
4. 6 Gambaran virus AI. ..................................................................................................................... 15
4. 7 Gambaran skematis struktur Virus ND ....................................................................................... 18
4. 8 Gejala klinis pada ayam ND ....................................................................................................... 19
vi
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Ayam petelur merupakan komoditas peternakan yang banyak diminati di Indonesia
(Kurniawan et al., 2013). Pada daerah endemis penyakit unggas, dapat menghambat dan
menjadi penyebab hancurnya peternakan dan industri perunggasan (Murwani, 2015). Beberapa
penyakit yang masih banyak ditemukan di Indonesia diantaranya Newcastle Disease (ND),
Infectious Lanringotracheitis (ILT), Chronic Respiratory Disease (CRD), Avian Influenza (AI),
Infectious Bronchitis (IB), Infectious Bursal Disease (IBD), coryza, dan pullorum (Isikhnas,
2014).
Pemeriksaan serologi dapat diuji berdasarkan reaksi antigen dan antibodi. Uji serologi
yang sederhana dan cepat dapat digunakan uji rapid test. Rapid test pada pengujian kami
menggunakan Rose Bengal Test (RBT) dan Rapid Serum Agglutination (RSA). Menurut Dwi
et al (2018) Rose Bengal Test (RBT) merupakan Rapid Test yang sering digunakan untuk
mendeteksi adanya antibodi terhadap antigen Brucella sp. dengan cara mencampur serum darah
ternak yang diduga terinfeksi dengan antigen Brucella sp. RBT merupakan uji serologis yang
mudah dikerjakan. Uji ini akan membentuk reaksi antara antigen Brucella sp. terhadap serum
darah yang mengandung antibodi Brucella sp.
Pengujian RSA untuk mendiagnosis adanya penyakit Chronic Respiratory Disease
(CRD) pada ayam akibat Mycoplasma gallinarum menggunakan antigen Mycoplasma
gallinarum dan untuk mendiagnosis adanya penyakit pullorum pada ayam akibat Salmonella
pullorum menggunakan antigen Salmonella pullorum. Uji ini mudah dilakukan karena aglutinin
yang terjadi dapat dilihat dalam waktu 2 menit setelah pencampuran antigen-antibodi, tetapi
hasilnya tidak spesifik (Iekram, 2018). Untuk lebih spesifik dapat digunakan uji
Haemagglutination (HA), Haemagglutination Inhibition (HI), dan Enzyme-linked
Immunosorbent Assay (ELISA) (Iekram, 2018). Keseluruhan uji dilakukan menggunakan
serum darah untuk mendeteksi titer antigen (Uji HA), titer antibodi (Uji HI) menggunakan
antigen Avian Influenza (AI). Untuk mengetahui adanya antigen, maka dapat dideteksi antibodi
terhadap antigen. Antibodi tersebut dapat berasal dari respon vaksinasi, atau pun respon alami
yang terjadi, sehingga penting sekali untuk menguji atau mengukur titer antibodi (Murwani,
2015).
Menurut Syukron (2013) prinsip dari uji HA adalah jumlah tertinggi aglutinasi sel darah
merah, dan HI adalah hambatan aglutinasi sel darah merah oleh virus akibat terikatnya virus
tersebut oleh antibodi spesifik. Oleh karena itu uji HA dan HI hanya bisa digunakan untuk virus
yang mengagglutinasi sel darah merah, metode kerja uji HA dan HI adalah pengenceran
bertingkat serum sampel hingga pengenceran terbesar yang masih sanggup mengaglutinasi atau
1
menghambat aglutinasi oleh antigen, sehingga dapat diketahui nilai titer antibodi dari serum
sampel.
1.2 Rumusan Masalah

Adapun rumusan masalah pada kegiatan Koasistensi Rotasi Diagnosa Laboratorik
Mikrobiologi ini antara lain :
1.2.1 Bagaimana metode pengujian virus dan bakteri pada sampel serum dengan
menggunakan uji HA, HI, RBT, dan RSA?
1.2.2 Bagaimana hasil dan interpretasi dari profil antigen dan antibodi isolat serum pada uji
HA, HI, RBT, dan RSA?
1.3 Tujuan
Tujuan dari kegiatan Koasistensi Rotasi Diagnosa Laboratorik Mikrobiologi ini antara lain :
1.3.1 Mengetahui metode pengujian virus dan bakteri pada sampel serum dengan
menggunakan uji HA, HI, RBT, dan RSA.
1.3.2 Mengetahui hasil dan interpretasi dari profil antigen dan antibodi isolat serum pada uji
HA, HI, RBT, dan RSA.
1.4 Manfaat
Manfaat yang didapatkan dari kegiatan Koasistensi Rotasi Diagnosa Laboratorik
Mikrobiologi ini adalah mahasiswa mengetahui dan memahami cara mengoleksi dan menguji
sampel hewan yang terindikasi mengalami infeksi virus maupun bakteri dilapangan.
2
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Teknik Pengambilan Sampel dan Pembuatan Sampel
Pengambilan darah pada ayam layer dapat diambil pada vena brachialis, vena jugularis,
vena metatarsal, dan intracardia (Owen, 2011). Ayam dihandling dengan tepat, bulu-bulu pada
bagiana vena yang akan diambil darahnya dicabut. Setelah itu oleskan alkohol 70% dengan
kapas steril pada area yang akan diambil darah, lalu diambil darah menggunakan spuit 3 ml.
Darah yang sudah diambil kemudian dimasukkan dalam tabung EDTA untuk mendapatkan
RBC atau eritrosit, dan serum didapatkan setelah darah dimasukkan dalam vacutainer merah
dan disentrifuse sehingga endapan dan cairannya terpisah.
Uji HA dan HI menggunakan eritrosit 1% dengan melakukan pencucian darah 100%
melalui sentrifugator dengan perbandingan darah dan PBS yaitu 1 : 3. Darah disentrifuse selama
10 menit dengan kecepatan 2000 rpm dan dibuang supernatannya. Dilakukan pengulangan
pencucian sampai 3 kali dan diambil platelet 100%. Setelah itu dibuat kosentrasi Red Blood
Cell (RBC) menjadi 1% dengan cara melakukan pengenceran 10% dari hasil RBC 100%
sejumlah 1,5 ml ditambah PBS dengan perbandingan 1:9. Dilanjutkan pengenceran 1% dengan
menambah 1 bagian RBC 10% dan 9 bagian PBS dengan rumus :
V1 x M1 = V2 x M2
Keterangan : V= Volume; M= Konsentrasi
2.2 Uji Hemagglutination Assay (HA) dan Uji Hemaglutination Inhibition (HI)
Uji Hemaglutination Assay (HA) merupakan salah satu metode yang digunakan untuk
mengetahui kadar antibodi dalam serum melalui ikatan yang terjadi antara antibodi-antigen
(Elfidasari et al., 2013). Prinsip dari uji HA adalah apabila terdapat reaksi ikatan antara antigen
dan RBC maka akan terjadi Aglutinasi, tujuan dari uji HA yaitu untuk mengetahui suatu virus
yang mempunyai kemampuan mengaglutinasi eritrosit atau untuk mengetahui titer antigen dari
RBC dengan mengamati dasar sumuran paling akhir yang menunjukan adanya hemaglutinasi
(Nugraha, 2021).
Uji HA dilakukan dengan menggunakan microplate v. Reagen yang digunakan
diantaranya adalah Phosphate Buffer Saline (PBS), antigen AI (H5N1), dan RBC 1%. Larutan
PBS dimasukkan kedalam sumuran microplate sebanyak 25 µl sampai sumur ke 12, lalu
dilakukan pengenceran antigen AI 25 µl sampai sumuran ke 11, selanjutnya tambahkan RBC
1% sebanyak 25 µl pada setiap sumuran hingga sumuran ke 12. Komponen tersebut dicampur
dan diinkubasi selama 40 menit pada suhu ruang. Hasil penilaian kontrol pada sumuran ke 12
akan terjadi endapan pada dasar sumuran, hemaglutinasi menunjukkan adanya antigen virus
dengan konsentrasi yang cukup untuk menggaglutinasi sel darah merah. Titer antigen
3
ditentukan oleh pengenceran tertinggi dari antigen yang mampu mengaglutinasi sel darah
merah unggas secara keseluruhan (Irawan, 2020).
Prinsip dari uji Hemaglutination Inhibition (HI) adalah hambatan aglutinasi sel darah
merah oleh virus akibat terikatnya virus oleh antibodi spesifik. Oleh karena itu, uji HI hanya
bisa digunakan untuk virus yang mengaglutinasi sel darah merah atau RBC (Syukron et al.,
2013). Pengujian HI dilakukan dengan antigen standar berupa 4 HA unit hasil dari uji HA
(Kencana et al., 2014). Pengujian HI merupakan metode yang relatif murah dan sederhana
untuk mengukur antibodi haemaglutinin spesifik pada serum yang sudah divaksinasi. Hasil uji
HI positif ditandai dengan adanya endapan pada dasar microplate, tidak ada aglutinasi
(OIE,2012). Antibodi yang mencukupi dalam serum darah ayam, mampu membentuk kompleks
dengan virion yang dapat menyebabkan haemaglutinasi terhambat dan eritrosit akan terlihat
mengendap di dasar sumuran microplate. Bila jumlah antibodi tidak mencukupi maka eritrosit
akan diaglutinasikan oleh virus dan akan terlihat adanya aglutinasi pada dasar sumuran
microplate.
Uji HI dilakukan dengan melakukan pengenceran antigen dengan PBS dengan
perbandingan hasil dari titer pengujian HA. Microplate v diisi PBS 25 µl pada sumuran 1-12.
Dilakukan pengenceran serum antibodi pada sumuran 1-11. Ditambah 25 µl antigen pada pada
sumuran 1-11. Lalu diinkubasi selama 40 menit. Ditambag RBC 1% sebanyak 25 µl pada
sumuran 1-12. Diinkubasi selama 40 menit dan dibaca hasilnya.
2.3 Rose Bengal Test (RBT)

Brucellosis pada sapi merupakan penyakit menular yang sering disebabkan oleh bakteri
Brucella abortus. Brucellosis dapat menyebabkan keguguran pada hewan usia kebuntingan 6-9
bulan, dan menular ke manusia serta menimbulkan gejala klinis seperti sakit kepala, demam
intermitten, myalgia, dan gangguan pencernaan. Uji RBT merupakan rapid test yang berfungsi
untuk mendeteksi adanya antibody Brucella dalam serum. Apabila sapi terinfeksi Brucella, maka tubuh
akan menghasilkan antibodi yang berfungsi untuk melawan adanya infeksi. Hasil positif pada uji RBT
ditandai dengan aglutinasi yang tampak seperti butiran pasir berwarna merah muda. Aglutinasi terjadi
Ketika ikatan antara Antigen RBT dengan antibody berada dalam serum. Adanya ikatan tersebut ditandai
dengan terbentuk gumpalan-gumpalan pada serum (Wilujeng dkk, 2020).
Prosedur pengerjaan uji RBT disesuaikan dengan standar yang berlaku di PUSVETMA.
Standar penentuan nilai pada uji RBT terdiri dari dua kategori penilaian, yaitu hasil negatif (-),
apabila tidak tejadi aglutinasi dan warna serum tetap homogen yakni ungu kemerahan, dan hasil
positif (+) ditunjukkan dengan terbentuknya aglutinasi berupa bentukan seperti pasir. Hasil uji
positif pada metode RBT dibagi menjadi tiga kategori yakni, apabila terbentuk aglutinasi halus
dan tepi dikelilingi dengan partikel halus yang membentuk garis putus-putus, maka dianggap
4
positif satu (+). Apabila aglutinasi terlihat seperti butiran pasir dan membentuk partikel
aglutinasi dengan tepi pinggiran lebar, maka nilainya adalah positif dua (++). Nilai positif tiga
(+++) didapat ketika terjadi aglutinasi yang sempurna, kasar, dan batas sangat jelas (Wilujeng
dkk, 2020).
2.4 Rapid Serum Aglutination (RSA)

2.4.1 Rapid Salmonella pullorum
Penyakit Pullorum adalah penyakit menular pada ayam yang memiliki ciri gejala
klinis berupa berak kapur yang diakibatkan oleh salmonella pullorum. Salmonella pullorum
termasuk dalam keluarga bakteri enterobacteriae, bersifat gram negatif, tidak bergerak,
berbentuk batang, fakultatif aerob dan tidak berspora, dan mampu bertahan di tanah hingga
satu tahun (Pudjiatmoko, 2014). Pengujian aglutinasi mencampurkan serum dengan antigen
dilakukan pada object glass dengan perbandingan 1:1 masing-masing sebanyak 20 µl
menggunakan mikropipet, selanjutnya diaduk sehingga serum dan antigen Salmonella
pullorum tercampur secara merata kemudian diamkan selama 2 menit. Apabila dalam waktu
kurang lebih 2 menit setelah diaduk terjadi reaksi aglutinasi, maka serum tersebut tercatat
sebagai sampel positif pullorum dan apabila tidak terjadi reaksi aglutinasi maka serum
tersebut tercatat sebagai sampel negatif pullorum (Nugroho, et al., 2021).
2.4.2 Rapid Mycoplasma gallisepticum

Mycoplasma gallisepticum (MG) merupakan bakteri penyebab penyakit pernapasan
kronis pada ayam yang sering disebut sebagai chronic respiratory disease (CRD) yang
ditandai dengan adanya nasal discharge, kebengkakan muka, batuk, dan terdengarnya suara
sewaktu bernafas. Mycoplasma gallisepticum dari famili Mycoplasmataceae dan Ordo
Mycoplasmatales, bersifat gram negatif, berbentuk kokoid dan pleomorfik (Pudjiatmoko,
2014). Teknik uji aglutinasi cepat dilakukan menurut panduan dari OIE Manual 2000 dimana
uji RSA dilakukan dengan cara mencampurkan serum yang akan diuji dengan antigen
Mycoplasma gallisepticum strain S6 yang diwarnai dengan kristal violet. Sebanyak 20 µl
serum ayam diletakkan pada object glass dengan mikropipet. Kemudian antigen dan serum
dicampur sehingga merata. Pembacaan reaksi aglutinasi dilakukan 2 menit setelah
pencampuran. Adanya penggumpalan antara antigen dan serum menunjukkan bahwa serum
tersebut mengandung antibodi terhadap antigen spesifik Mycoplasma gallisepticum dan
didiagnosa sebagai sampel positif (Diyantoro dan Shelly, 2017).
5
BAB III METODOLOGI
3.1 Tempat dan Waktu Pelaksanaan
Pelaksanaan kegiatan Koasistensi Pendidikan Profesi Dokter Hewan (PPDH) Rotasi
Diagnosa Laboratorik Mikrobiologi yang dimulai pada tanggal 1-12 November 2021 yang
bertempat di Laboratorium Mikrobiologi dan Imunologi Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan
3.2 Peserta Kegiatan PPDH

Peserta yang mengikuti kegiatan Koasistensi PPDH Rotasi Diagnostik Laboratorik di
Laboratorium Mikrobiologi dan Imunologi Veteriner FKH UB adalah :
Nama : Firdaus Ignatius Luhung
NIM : 210130100111021
E-mail : luhung@student.ub.ac.id
No. Hp : 087850563986
Nama : Islah Asyraf Diari

NIM : 210130100111040
E-mail : islahasyrafdvm@student.ub.ac.id
No. Hp : 083834358188
Nama : Aida Muslimatun Al Azizah

NIM : 210130100111066
E-mail : aaidamuslimatun@student.ub.ac.id
No. Hp : 085601386268
Nama : Miranda Eka Putri Wibowo

NIM : 210130100111068
E-mail : mirandaekapw@student.ub.ac.id
No. Hp : 081615957507
Nama : Aprilia Anggraeni

NIM : 210130100111093
E-mail : apriliappdh@student.ub.ac.id
No. Hp : 082245450213
6
Dibawah bimbingan drh. Indah Amalia Amri, M.Si.
3.3 Alat dan Bahan

Alat yang digunakan pada uji HA HI antara lain microplate V, micropipet, yellow tip,
tabung falcon, sentrifugator, alumunium foil, tabung vacutainer, tabung Eppendorf, dan spuit.
Bahan yang digunakan pada uji HA HI ini antara lain serum ayam, Phosphate Buffered Saline
(PBS), antigen ND, antigen AI, dan eritrosit ayam 1%.
Alat yang digunakan pada Rose Bengal Test (RBT) antara lain micropipet, yellow tip,
dan object glass. Bahan yang digunakan pada Rose Bengal Test (RBT) serum positif RBT,
serum negatif RBT, dan antigen Brucella abortus.
Alat yang digunakan pada Rapid Serum Agglutination (RSA) antara lain micropipet,
yellow tip, dan object glass. Bahan yang digunakan pada Rapid Serum Agglutination (RSA)
antara lain serum koleksi dari lapangan, serum positif Salmonella pullorum, serum positif
Mycoplasma gallisepticum, antigen Mycoplasma, dan antigen Pullorum.
3.4 Metode Pemeriksaan

3.4.1 Uji HA dan HI
3.4.1.1 Pembuatan Eritrosit 1%
Berikut ini merupakan Langkah dari pembuatan eritrosit 1% :
1. Mengambil sampel darah dari vena brachialis ayam dan dimasukkan dalam tabung
EDTA.
2. Disentrifus dengan kecepatan 2000rpm selama 10 menit.
3. Dilakukan pencucian eritrosit dengan perbandingan 1:3, yaitu satu bagian eritrosit
dengan 3 bagian PBS dan disentrifugasi lagi dengan kecepatan 2000rpm selama
10 menit.
4. Dibuang buffy coat dan supernatant.
5. Dilakukan Langkah pencucian eritrosit sebanyak 3 kali.
6. Dilakukan pengenceran eritrosit dari 100% ke 1% dengan menggunakan PBS.
3.4.1.2 Uji HA
Berikut ini merupakan Langkah dari uji Hemaglutination Assay :
1. Mengisi sumuran 1-12 microplate V dengan 25 μl PBS dengan menggunakan
micropipet.
2. Mengisi sumuran nomor 1 dengan antigen sebanyak 25 μl dan dilakukan
pengenceran berseri hingga sumuran nomor 11. Dari sumuran nomor 11 diambil
25 μl dan dibuang.
7
3. Diinkubaasi dalam suhu ruang selama 30 menit dengan microplate V ditutup
menggunakan alumunium foil.
4. Mengisi eritrosit 1% sebanyak 25 μl kedalam sumuran 1-12 dan diinkubasi dalam
suhu ruang selama 30 menit dengan microplate V ditutup menggunakan
alumunium foil. Sumuran 12 sebagai kontrol negatf yang hanya berisi PBS dan
eritosit 1% sehingga tidak terjadi reaksi aglutinasi.
5. Melakukan pembacaan hasil.
3.4.1.3 Uji 4HA Unit
Uji 4HA Unit dilakukan setelah medapatkan hasil titer antigen dari uji HA dengan
menggunakan rumus : pengenceran = titer antigen (HA) / 22.
Sebagai contoh dari uji HA medapatkan titer antigen 25, sehingga dilakukan
pengenceran 25/22 = 23 atau 8 HA Unit. Untuk mendapatkan 4HA Unit maka dilakukan
pengenceran dengan perbandingan 1:7 yaitu 1 bagian serum dengan 7 bagian PBS.
Pengenceran dibuat untuk 12 sumuran, dengan perhitungan 12 x 25 μl = 300μl dengan
dilakukan perngenceran dengan perbandingan 1:7.
3.4.1.4 Uji HI
Berikut ini merupakan Langkah dari uji Hemaglutionation Inhibition :
1. Mengisi sumuran 1-12 microplate V dengan 25 μl PBS dengan menggunakan
micropipet.
2. Mengisi sumuran nomor 1 dengan serum sebanyak 25 μl dan dilakukan
pengenceran berseri hingga sumuran nomor 11. Dari sumuran nomor 11 diambil
25 μl dan dibuang.
3. Mengisi semua sumuran microplate V dengan antigen yang sudah diencerkan
sebanyak 25 μl.
4. Diinkubasi dalam suhu ruang selama 30 menit dengan microplate V ditutup
menggunakan alumunium foil.
5. Mengisi eritrosit 1% sebanyak 25 μl kedalam sumuran 1-12 dan diinkubasi dalam
suhu ruang selama 30 menit dengan microplate V ditutup menggunakan
alumunium foil. Sumuran 12 sebagai kontrol negatf yang hanya berisi PBS,
antigen dan eritosit 1% sehingga terjadi reaksi aglutinasi.
6. Melakukan pembacaan hasil.
3.4.2 Rose Bengal Test (RBT)

Berikut ini merupakan Langkah dari uji Rose Bengal Test :
1. Menyiapkan object glass yang bersih dan sudah diberi label.
8
2. Meneteskan 25 μl serum positif dan negatif RBT pada masing masing object glass.
3. Ditambahkan 25 μl antigen RBT (reagen RBT) kedalam masing masing serum dan
dihomogenkan.
4. Didiamkan selalam 2 menit dan dilakukan interpretasi hasil.
3.4.3 Rapid Serum Agglutination (RSA)

3.4.3.1 Salmonella pullorum
Berikut ini merupakan Langkah kerja dari uji Rapid Serum Agglutionation (RSA)
Pullorum :
2. Meneteskan 25 μl antigen Pullorum pada masing masing object glass.
3. Ditambahkan 25 μl serum koleksi lapangan dan serum positif Pullorum (sebagai
kontrol positif) kedalam masing masing antigen Pullorum dan dihomogenkan.
3.4.3.2 Mycoplasma gallisepticum
Berikut ini merupakan Langkah dari uji Rapid Serum Agglutionation (RSA)
Mycoplasma:
2. Meneteskan 25 μl serum koleksi lapangan dan serum positif Mycoplasma (sebagai
kontrol positif) pada masing masing object glass.
3. Ditambahkan 25 μl antigen Mycoplasma kedalam masing masing serum dan
dihomogenkan.
9
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil
4.1.1 Uji Hemagglutination Assay (HA)
Gambar 4. 1 Hasil uji Hemagglutination Assay (HA) AI dan ND pada serum ayam layer (a) dan DOC
ayam broiler (b), hasil positif ditunjukkan pada sampel bahwa adanya aglutinasi eritrosit
pada dasar microplate (Dokumentasi Pribadi, 2021).
Uji HA menunjukkan hasil positif ditandai dengan adanya hemaglutinasi Gambar

4.1). Hemaglutinasi terjadi karena pada sampel mengandung virus yang mampu
mengaglutinasi eritrosit seperti pada virus Avian Influenza (AI) dan Newcastle Disease (ND).
Pada sampel yang diberikan antigen AI terjadi aglutinasi eritrosit hingga sumuran 25 dan pada
sampel yang diberikan antigen ND terjadi aglutinasi eritrosit hingga sumuran 27.
Setelah dilakukan uji HA, dilakukan pengenceran 4HA unit pada sampel AI dengan
25 27
cara 22 = 23 atau 8 HA unit. Dan pada sampel ND dengan cara = 25 atau 32 HA unit. Untuk
22
mendapat pengenceran antigen 4 HA unit maka 1 bagian virus ditambah dengan 7 bagian PBS
pada sampel AI dan 1 bagian virus ditambah dengan 31 bagian PBS pada sampel ND.
Pengenceran dibuat untuk 12 sumuran.
4.1.2 Uji Hemagglutination Inhibition (HI)
Gambar 4. 2 Hasil Uji Hemagglutination Inhibition (HI) AI dan ND pada serum (a) Ayam layer dan
(b) DOC Ayam broiler, hasil positif ditunjukkan pada sampel bahwa adanya endapan eritrosit
pada dasar microplate (Dokumentasi Pribadi, 2021).
10
Hasil pemeriksaan pada Gambar 4.2 menunjukkan adanya hasil uji positif pada Ayam
layer (a) ditunjukkan adanya endapan eritrosit hingga sumuran 23 untuk AI dan ND. Pada DOC
Ayam broiler menunjukan hasil positif dengan ditunjukkan adanya endapan eritrosit hingga
sumuran 24 untuk AI dan 25 untuk ND. Pada pengujian HI hasil dinyatakan positif menghambat
aglutinasi eritrosit, jika setelah inkubasi terdapat endapan eritrosit berbentuk titik di tengah
sumuran mikroplet sedangkan untuk uji HI dikatkan Negatif bila tidak terjadi hambatan
hemaglutinasi, reaksi tersebut disebabkan tidak adanya antibodi pada serum.
4.1.3 Uji Rose Bengal Test (RBT)
Gambar 4. 3 Hasil Uji Rose Bengal Test (RBT) dengan menggunakan serum (Dokumentasi Pribadi,
2021).
Dalam pengujian Rose Bengal Test (RBT) menggunakan sampel serum kontrol positif
(+) dan serum kontrol negatif (-). Hasil dari pengujian RBT (Gambar 4.3) dengan hasil positif
(+) ditandai dengan adanya reaksi aglutinasi dan negatif (-) ditandai dengan dengan tidak
adanya reaksi aglutinasi.
4.1.4 Uji Rapid Serum Agglutionation (RSA)

a b
Gambar 4. 4 Hasil Uji Rapid Serum Agglutination (RSA) Pullorum pada serum (a) Ayam
layer dan serum (b) DOC Ayam broiler (Dokumentasi Pribadi, 2021).
Dalam pengujian Rapid Serum Agglutination (RSA) Pullorum menggunakan

3 sampel, yaitu sampel serum Ayam layer (dari peternakan Bina Ternak) dan DOC
serum Ayam broiler (dari peternakan daerah Dieng), lalu terdapat serum control positif
(+) Pullorum. Hasil dari sampel serum ayam yang diuji (Gambar 4.4) menunjukkan
11
hasil negatif Pullorum untuk sampel Ayam layer (a) dan sampel DOC Ayam broiler
(b), ditandai dengan tidak adanya reaksi aglutinasi.
a b
Gambar 4. 5 Hasil Uji Hasil Uji Rapid Serum Agglutination (RSA) Mycoplasma pada
serum (a) Ayam layer dan serum (b) DOC Ayam broiler (Dokumentasi
Pribadi, 2021).
Dalam pengujian Rapid Serum Agglutination (RSA) Mycoplasma

menggunakan 3 sampel, yaitu serum Ayam layer (dari peternakan Bina Ternak) dan
serum DOC Ayam broiler (dari peternakan daerah Dieng), lalu terdapat 1 serum
kontrol positif (+) Mycoplasma. Hasil dari sampel serum ayam yang diuji (Gambar
4.5) menunjukkan hasil negatif Mycoplasma gallisepticum untuk sampel Ayam layer
(a) dan sampel DOC Ayam broiler (b), ditandai dengan tidak adanya reaksi aglutinasi.
4.2 Pembahasan
4.2.1 Uji Hemagglutination Assay (HA)
Uji Hemaglutination Assay (HA) merupakan salah satu metode yang digunakan untuk
mengetahui kadar antibodi dalam serum melalui ikatan yang terjadi antara antibodi-antigen
(Elfidasari et al., 2013). Prinsip dari uji HA adalah apabila terdapat reaksi ikatan antara
antigen dan RBC maka akan terjadi Aglutinasi. Tujuan dari uji HA yaitu untuk mengetahui
suatu virus yang mempunyai kemampuan mengaglutinasi eritrosit atau untuk mengetahui titer
antigen dari RBC atau sel darah merah dengan mengamati dasar sumuran paling akhir yang
menunjukan adanya hemaglutinasi (Nugraha, 2021).
Titer HA pada serum yang diberikan antigen AI menunjukkan hasil 25 dan pada serum
yang diberikan antigen ND menunjukkan hasil 27, hal tersebut dapat dikatakan rendah.
Menurut Wibowo et al. (2012), Uji HA digunakan untuk menghitung kandungan virus yang
telah mati (tidak infektif) dan yang masih hidup (infektif). Berdasar hasil penelitian
menunjukkan bahwa titer HA virus cukup tinggi sebesar lebih dari 28. Untuk dapat
mengalgutinasi sempurna diperlukan sekitar 107 virus.
4.2.2 Uji Hemagglutination Inhibition (HI)
Prinsip uji HI adalah hambatan aglutinasi RBC (Red Blood Cell) oleh virus akibat
terikatnya virus tersebut dengan antibodi spesifik. Oleh karena itu uji HI hanya bisa digunakan
untuk virus yang mengaglutinasi RBC. Virus ND dan AI mempunyai sifat yang dapat
12
mengaglutinasi sel darah merah. Proses hemaglutinasi ini terjadi akibat aktivitas hemaglutinin
yang terdapat pada amplop virus tersebut. Aktivitas hemaglutinasi berlangsung maksimal
selama satu jam karena dipengaruhi oleh kerja enzim neuraminidase yang merusak ikatan
pada reseptor eritrosit dengan hemaglutinin dari virus paramyxoviridae. Pengamatan nilai titer
antibodi dari serum sampel berdasarkan hasil pengenceran terbesar yang masih sanggup
menghambat aglutinasi eritrosit oleh antigen (Perdana, 2016).
Titer HI pada serum Ayam layer (a) menunjukkan hasil 23 untuk AI dan 23 untuk ND
dan untuk Titer HI pada serum DOC Ayam broiler (b) menunjukkn hasi 24 untuk AI dan 25
untuk ND. Variasi ini dipengaruhi oleh beberapa kondisi seperti kesehatan ayam, jumlah virus
yang menginfeksi dan perbedaan waktu infeksi. Sampel serum Ayam layer (a) memiliki
antibodi yang kurang protektif yaitu 23 sementara menurut OIE antibodi yang protektif
terhadapa AI adalah 24. Antibodi yang terbentuk 23 kemungkinan terbentuk oleh vaksin, hal
ini disebabkan karena masih adanya rangsangan antigen vaksin dalam membentuk respons
imun, tetapi berada di ambang batas titer protektif 24 sehingga membutuhkan vaksin ulang
untuk merangsang kembali respon imun terhadap AI dan ND (Yuniati, Suartha, & Bonar,
2017) .
Sementara sampel serum DOC Ayam broiler (b) yang mendapat program vaksinasi
AI awal di bawah umur dua minggu memperlihatkan efektivitas vaksinasi yang kurang baik.
Menurut Indriani (2015) hal ini disebabkan keberadaan titer antibodi maternal yang cukup
tinggi dan dapat mempengaruhi respon imun vaksinasi berikutnya, sehingga tidak
memberikan respon titer antibodi yang optimal. Maternal antibodi tinggi pada DOC dapat
memberikan dampak menetralisir imunogen vaksin. Walaupun antibodi yang terbentuk 24
tetapi nilai ini berada di bawah ambang batas titer protektif AI dan ND sehingga di butuhkan
vaksin ulang (booster) untuk merangsang kembali respond imun (Yuniati, Suartha, & Bonar,
2017) .
4.2.3 Uji Rose Bengal Test (RBT)

Uji Rose Bengal Test (RBT) adalah reaksi pengikatan antigen yang telah dilemahkan
dan diwarnai dengan antibodi dari serum. Pengikatan antigen permukaan dengan antibodi
menyebabkan terjadinya aglutinasi. Bila tidak terjadi aglutinasi, ini memiliki arti tidak ada
antibodi dalam serum. RBT ini bertindak sebagai skrining. Serum yang bereaksi positif pada
RBT kemudian dilanjutkan dengan uji Complement Fixation Test (CFT) yang bertujuan
mengetahui ada tidaknya antibodi dalam serum (Septyawati, 2013).
Interpretasi hasil dari Uji RBT dapat dibaca dalam waktu 2 menit, jika lebih dari 2
menit dapat menyebabkan hasil yang bersifat false positive. Hasil negatif dari Uji RBT
13
ditandai dengan tidak adanya aglutinasi atau campuran antigen dan serum tetap homogen dan
berwarna ungu kemerah-merahan. Apabila terjadi aglutinasi halus dan membentuk garis
terputus-putus dengan tepi dikelilingi partikel halus, dianggap positif 1 (+), jika aglutinasi
terlihat jelas dan cepat, membentuk partikel aglutinasi kasar dengan tepi pinggiran lebar,
adalah positif 2 (++), dan jika aglutinasi sempurna, cepat dan membentuk partikel lebih kasar,
positif 3 (+++) (Septyawati, 2013).
4.2.4 Uji Rapid Serum Agglutination (RSA)
Uji Rapid Serum Agglutination (RSA) Pullorum digunakan untuk medeteksi ada
bakteri Salmonella pullorum yang dilakukan dengan cara mencampur serum yang
akan diuji dengan antigen Salmonella pullorum. Pembacaan reaksi aglutinasi
dilakukan dua menit setelah pencampuran. Penggumpalan antara antigen dan serum
menunjukkan bahwa serum tersebut mengandung antibodi terhadap antigen spesifik
Salmonella pullorum dan dicatat sebagai sampel positif (Diyantoro dan Wulandari,
2017).
Hasil dari uji Hasil dari uji Rapid Serum Agglutination (RSA) Mycoplasma yang
kami lakukan dapat dilihat pada Gambar 4.5 dengan tidak adanya aglutinasi yang
menunjukkan hasil negatif Pullorum baik pada serum Ayam layer (a) dan serum DOC
Ayam broiler (b). Adanya antibodi didalam serum darah dapat terjadi akibat adanya
infeksi secara alami atau pemberian vaksinasi. Di Indonesia, kebanyakan peternakan
pembibitan ayam pedaging belum menerapkan program vaksinasi pullorum dan MG.
Oleh karena itu, adanya antibodi dalam tubuh DOC dapat merupakan hasil infeksi
alami secara vertikal pada peternakan perbibitan ayam pedaging atau pada saat di
tempat penetasan telur (Diyantoro dan Wulandari, 2017).
Pengujian Rapid Serum Agglutination (RSA) digunakan untuk mendiagnosis
adanya penyakit Chronic Respiratory Disease (CRD) pada ayam akibat Mycoplasma
gallinarum menggunakan antigen Mycoplasma gallinarum. Uji ini mudah dilakukan
karena aglutinasi yang terjadi dapat dilihat dalam waktu 2 menit setelah pencampuran
antigen dan antibodi, tetapi hasilnya tidak spesifik. Untuk lebih spesifik dapat
digunakan uji Haemagglutination (HA), Haemagglutination Inhibition (HI), dan
Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) (Iekram, 2018). Hasil dari uji Rapid
Serum Agglutination (RSA) Mycoplasma yang kami lakukan dapat dilihat pada
Gambar 4.5 dengan tidak adanya aglutinasi yang menunjukkan hasil negatif
Mycoplasma baik pada serum Ayam layer (a) dan serum DOC Ayam broiler (b).
14
4.3. Penyakit Avian Influenza (AI)
4.3.1. Morfologi
AI disebabkan oleh virus influenza yang tergolong family Orthomyxoviridae. Tidak
seperti kebanyakan virus, yang memiliki bentuk konsisten, virus influenza dapat berbentuk
bola bundar, berfilamen atau berbentuk diantara keduanya. Dalam strukturnya terdapat
banyak bentukan duri,tonjolan seperti paku pada seluruh permukaannya. Ada dua jenis
protein yang berbentuk seperti paku, batang dan segitiga. Protein ini disebut hemagglutinin
(HA), dan protein yang lain adalah enzim yang berbentuk persegi disebut neuraminidase.
Kedua protein ini terletak di permukaan virus influenza (Yesica, 2013).
a b
Gambar 4. 6 Gambaran virus AI, (a) Struktur virus AI beserta protein penyusun dan (b) gambaran
mikroskop electron virus AI (Pudjiatmoko, 2014).
Secara umum morfologi virus influenza (virion) yaitu virus ss-RNA yang tergolong
famili Orthomyxoviridae dengan bentuk bola dengan diameter 50-120 nm, atau berbentuk
benang dengan diameter 20 nm dan panjang virion 200-300 nm. Permukaannya berasal dari
senyawa lipoprotein dengan tempelan nukleokapsid. Ukuran nukleoprotein ini berbeda pada
setiap loop dalam kisaran panjang 50-130 nm dan diameter 9-15 nm. Virus influenza
mempunyai delapan segmen yang terdiri dari gen hemaglutinin (HA), neuraminidase (NA),
nukleoprotein (NP), matriks (M), polymerase A (PA), polymerase B1 (PB1), dan polymerase
B2 (PB2). Virus ini memiliki amplop dan memiliki genom ss RNA bersegmen sehingga
dapat terjadi genetik reassortment (Yesica, 2013). Virus Avian Influenza dibedakan menjadi
3 tipe antigenik berbeda yaitu tipe A yang ditemukan di unggas, manusia, bai, kuda, dan
mamalia lain (cerpelai, anjing laut dan paus) dan tipe B dan C hanya ditemukan di manusia
(Pudjiatmoko, 2014).
4.3.2. Cara Penularan
Penularan virus AI dapat terjadi melalui kontak langsung antara unggas sakit dengan
unggas yang peka. Unggas yang terinfeksi virus AI mengeluarkan virus dari saluran
pernafasan, konjungtiva dan feses. Penularan dapat juga terjadi secara tidak langsung
misalnya melalui udara yang tercemar material atau debu yang mengandung virus AI
(aerosol), makanan atau minuman, alat atau perlengkapan peternakan, kandang, pakaian,
15
kendaraan, peti telur, eggtray,burung, mamalia, dan insekta yang mengandung virus AI
(Yesica, 2013). Masa inkubasi dari virus AI bevariasi dari beberapa jam hingga tiga hari
pada individual unggas terinfeksi atau sampai 14 hari didalam flok (Pudjiatmoko, 2014).
4.3.3. Gejala Klinis
Bentuk akut (HPAI) ditandai dengan adanya proses penyakit yang cepat disertai
mortalitas tinggi, gangguan produksi telur (berhenti atau menurun secara drastis), gangguan
pernapasan (batuk, bersin, ngorok), lakrimasi (leleran dari mata) berlebihan, sinusitis, edema
di daerah kepala dan muka, pendarahan jaringan subkutan yang diikuti sianosis pada kulit
(terutama di daerah kaki, kepala, dan pial), diare dan gangguan saraf. Pada kasus tertentu,
penyakit ini dapat berlangsung sangat cepat, unggas dapat mati mendadak tanpa didahului
gejala tertentu dan dapat mencapai 100% (Yesica, 2013).
Bentuk ringan (LPAI) yaitu bentuk avirulen terjadi, tidak diikuti infeksi sekunder.
Pada bentuk ini akan terlihat adanya penurunan atau produksi telur terhenti, gangguan
pernapasan, anoreksia, depresi, sinusitis dan mortaliltas yang endah tetapi cenderung
meningkat. Jika terdapat infeksi sekunder oleh bakteri atau unggas dalam keadaan stress
akibat lingkungan maka gejala klinis yang timbul dapat menjadi parah. Infeksi dengan
tingkat keganasan LPAI pada unggas liar tidak menimbulkan gejala klinis atau penyakit
timbul bersifat ringan (Yesica, 2013).
4.3.4. Siklus Hidup dan Mekanisme Infeksi
Setelah sialic acid mengikatkan diri pada membran permukaan reseptor, virus masuk
ke dalam sel melalui mediasi endositosis reseptor. Endosome dengan pH yang rendah
menginduksi penyesuaian pergantian HA, menghasilkan fusi membran antara amplop virus
dan membran endosomal. Tanpa endosome, saluran proton M2 merubah pH inti viral
menjadi rendah, menghasilkan penguraian dari M1 dari RNP yang berperan utama untuk
pelepasan dari RNP menuju sitoplasma.Kemudian RNP dibawa menuju nukleus,
kemungkinan sinyal inti local pada protein yang tersusun oleh komplek RNP (Horimoto dan
Kawaoka, 2001). Mekanisme transkripsi RNA yaitu sebagai berikut, enam dari delapan
segmen RNA dirubah menjadi mRNA di dalam monocistronic manner dan dirubah menjadi
HA, NA, NP, PB1, PB2 dan PA, yang paling menonjol adalah dua segmen RNA masing-
masing ditranskripsikan menjadi dua mRNA melalui pembelahan. Untuk masing-masing
gen M dan NS, mRNA ini dirubah menjadi kerangka yang berbeda, secara berurutan menjadi
protein M1 dan M2, protein NS1 dan NS2. Proses ini digunakan untuk meningkatkan
konsentrasi pemicu NP bebas dari perubahan sintesis mRNA menjadi sintesis cRNA dan
vRNA. Sintesis terbaru dari vRNA diselubungi dengan NP dalam nukleus, dimana fungsinya
sebagai tempat untuk transkripsi yang kedua dari mRNA virus (Yesica, 2013).
16
Infeksi selanjutnya, perubahan menghasilkan M1, HA dan NA. HA dan NA
mengalami pelapisan di dalam retikulum endoplasmik, proses selanjutnya di dalam aparatus
golgi, kemudian dibawa menuju permukaan sel, dimana selanjutnya menyatu dengan
membran sel. Inti lokal dari protein M1 dan NS2 menjadi bahan utama untuk migrasi dari
RNP keluar dari nukleus untuk disatukan dalam partikel progeny viral di dalam sitoplasma.
RNP-M1 kompleks berinteraksi dengan protein M1 yang diasosiasikan dengan membran
plasma, dan keluar menuju membran sel, kemudian menutup diri tanpa membran
bertahtakan kedua HA dan NA. (Yesica, 2013)
Setelah sialic acid mengikatkan diri pada membran permukaan reseptor, virus masuk
ke dalam sel melalui mediasi endositosis reseptor. Endosome dengan pH yang rendah
menginduksi penyesuaian pergantian HA, menghasilkan fusi membran antara amplop virus
dan membran endosomal. Tanpa endosome, saluran proton M2 merubah pH inti viral
menjadi rendah, menghasilkan penguraian dari M1 dari RNP yang berperan utama untuk
pelepasan dari RNP menuju sitoplasma.Kemudian RNP dibawa menuju nukleus,
kemungkinan sinyal inti local pada protein yang tersusun oleh komplek RNP (Horimoto dan
Kawaoka, 2001). Mekanisme transkripsi RNA yaitu sebagai berikut, enam dari delapan
segmen RNA dirubah menjadi mRNA di dalam monocistronic manner dan dirubah menjadi
HA, NA, NP, PB1, PB2 dan PA, yang paling menonjol adalah dua segmen RNA masing-
masing ditranskripsikan menjadi dua mRNA melalui pembelahan. Untuk masing-masing
gen M dan NS, mRNA ini dirubah menjadi kerangka yang berbeda, secara berurutan menjadi
protein M1 dan M2, protein NS1 dan NS2. Proses ini digunakan untuk meningkatkan
konsentrasi pemicu NP bebas dari perubahan sintesis mRNA menjadi sintesis cRNA dan
vRNA. Sintesis terbaru dari vRNA diselubungi dengan NP dalam nukleus, dimana fungsinya
sebagai tempat untuk transkripsi yang kedua dari mRNA virus
Infeksi selanjutnya, perubahan menghasilkan M1, HA dan NA. HA dan NA
mengalami pelapisan di dalam retikulum endoplasmik, proses selanjutnya di dalam aparatus
golgi, kemudian dibawa menuju permukaan sel, dimana selanjutnya menyatu dengan
membran sel. Inti lokal dari protein M1 dan NS2 menjadi bahan utama untuk migrasi dari
RNP keluar dari nukleus untuk disatukan dalam partikel progeny viral di dalam sitoplasma.
RNP-M1 kompleks berinteraksi dengan protein M1 yang diasosiasikan dengan membran
plasma, dan keluar menuju membran sel, kemudian menutup diri tanpa membran
bertahtakan kedua HA dan NA. (Yesica, 2013)
17
4.4. Peyakit New Castle Diseases (ND)
4.4.1. Morfologi dan Sifat
Newcasle Disease (ND) adalah penyakit menular akut yang menyerang ayam dan
uanggas lain dengan gejala gangguan pernafasan, pencernaan dan syaraf yang disertai
mortalitas yang sangat tinggi. ND disebabkan oleh virus golongan Paramyxovirus, termasuk
virus ss-RNA yang memiliki ukuran 150-250 milimikron dengan bentuk bervariasi namun
umumnya berbentuk spherik. Virus ND memiiki amplop dan kapsid berbentuk heliks yang
simetris. Virus ND peka terhadap panas, cepat mati pada suhu di atas 50°C, tetapi tahan 1
mingggu pada suhu 37°C, 2 bulan pada suhu 22°C-28°C dan berbulan-bulan pada karkas
beku. Virus tahan pada perubahan pH 2 - pH 10, tetapi peka terhadap sinar ultra violet dan
sinar matahari (Pudjiatmoko, 2014).
Gambar 4. 7 Gambaran skematis struktur Virus ND (Pudjiatmoko, 2014).
Penyebab ND adalah virus yang tergolong Paramyxovirus, termasuk virus ss-RNA

dengan ukuran 150-250 milimikron, berbentuk variasi tetapu umumnya berbentuk spheric.
Virus ND memiliki amplop dan kapsid berbentuk heliks yang simetris. Virus ND atau Avian
Paramyxovirus serotype 1 (APMV-1) termasuk genus Avulavirus, family paramyxoviridae,
ordo mononegavirales. Virus RNA dengan total panjang genome sekitar 15,2kb menyandi
6 protein penting yaitu nucleocapsid (N), phosphoprotein (P), matrix (M), fusion (F),
hemagglutinin-neuramidase (HN), dan RNA-dependent RNA polymerase (L). 2 protein
penting pada virus ND yakni protein HF yang melekat dan mengikat pada reseptor pada
bagian luar membrane sel inang dan protein F untuk fusi antara amplop virus dengan
membrane sel inang (Pudjiatmoko, 2014).
4.4.2. Cara Penularan
Penularan dari satu tempat ke tempat lain melalui alat transportasi, pekerja kendang,
burung dan hewan lain, debu kendang, angin, serangga, makanan dan karung makanan
tercemar. Penularan penyakit ini juga dapat terjadi melalui transportasi dari karkas ayam
yang tertular virus ND dan ayama dalam masa inkubasi (masa inkubasi antara 2-15 hari atau
rata-rata 6 hari). Penularan ND dari satu hewan ke hewan lainnya melalui kontak dengan
18
ehwan sakit, sekresi, ekskresi dan hewan sakit serta bangkai penderita tetelo. Jalana
penularan virus dari pencernaan dan pernafasan (Pudjiatmoko, 2014).
4.4.3. Gejala Klinis
Penyakit ditandai dengan hilangnya nafsu makan, diare yang kadang disertai darah,
lesu, sesak nafas, megap-megap, ngorok, bersin, batuk, paralysis partialis atau komplit dan
sekali-sekali tortikolis. Produksi telur turun atau terhenti sama sekali. Warna balung dan pial
cyanosis. Angka kematian 80 - 100% (Pudjiatmoko, 2014).
Gambar 4. 8 Gejala klinis pada ayam : (a) tortikolis, (b) pembengkakan dan hemoragi pada
daerah mata, dan (c) pembengkakan oada kelopak mata (Pudjiatmoko, 2014).

Protein HN berperan dalam tahap penempelan virus ND pada reseptor sel inang atau
induk semang yang mengandung sialic acid. Molekul sialic acid ini merupakan glycoprotein
dan glycolipid. Penempelan virus ND dilakukan dengan penyatuan virus dan membran sel
yang diperantarai oleh protein F. Virus RNA kemudian dilepaskan dalam sitoplasma dan
terjadi replikasi. Envelope virus masuk ke dalam sel melalui 2 jalan utama yaitu pertama,
penyatuan secara langsung antara envelope virus dengan membran plasma dan kedua,
diperantarai oleh reseptor endositosis. Penetrasi virus melalui reseptor endositosis
tergantung pada kondisi pHnya. Pada paramyxoviruses, proses penyatuan membran virus
dengan membran plasma inang atau induk semang tidak tergantung pH. Walaupun demikian,
hasil penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa penyatuan virus ND dengan sel mampu
meningkatkan pH. Hasil tersebut mengindikasikan bahwa penetrasi virus ND pada sel inang
melalui reseptor endositosis juga dipengaruhi oleh kondisi pH (Hewajuli dan Dharmayanti,
2011).
Kepekaan sel terhadap virus ND yang tidak virulen dipengaruhi oleh beberapa faktor.
Sel tersebut harus mempunyai reseptor yang cocok sehingga virus dapat melakukan
penempelan dan masuk ke dalam sel. Selain itu, sel tersebut juga harus memiliki tripsin yang
menyerupai protease dimana enzim ini berperan dalam pemecahan protein F0 menjadi F1
dan F2. Penyebaran reseptor sel pada ayam yang peka terhadap virus ND bentuk tidak
virulen bersifat terbatas dan hanya ditemukan pada saluran pencernaan dan saluran
19
pernafasan bagian atas. Sedangkan virus bentuk virulen tidak selalu memerlukan enzim
protease dan replikasi virus biasanya terjadi di sebagian besar jaringan induk semang.
Replikasi virus yang terjadi di limfosit menghasilkan suatu respon imun dan produksi
antigen virus yang cukup dibutuhkan untuk meningkatkan efektivitas sistem imun. Di dalam
saluran pencernaan terdapat faktor-faktor nonspesifik yang mempengaruhi replikasi virus
ND. Enzim protease dan pH yang bervariasi mempunyai pengaruh dalam proses penempelan
virus pada reseptor sel. Dimana keberadaan tripsin pada beberapa bagian saluran pencernaan
dapat mengaktifkan virus ND bentuk tidak virulen setelah virus tersebut dilepaskan dari sel
yang kekurangan enzim protease. Virus dapat diisolasi dari esophagus, tembolok dan trakea
setelah 24 jam pascainokulasi virus melalui mulut pada ayam umur 3 minggu. Tetapi jumlah
virus yang ditemukan pada organ tersebut lebih sedikit jika dibandingkan dengan organ
proventrikulus. Virus juga tidak dapat di isolasi dari organ pencernaan lain dan darah.
Meskipun demikian, virus dapat dideteksi pada jejunum, ileum dan caecum pada 6 hari
setelah diinfeksi virus melalui tembolok, virus juga dapat ditemukan dalam darah pada 4
hari pascainfeksi. Antigen virus ND dideteksi pada sebagian besar sel epitel saluran
pencernaan serta limfosit dan makrofag ditemukan pada lamina propia beberapa jaringan.
Hasil penelitian di atas memperlihatkan bahwa tempat awal replikasi virus ND terutama
terjadi di saluran pencernaan bagian atas yaitu esophagus, tembolok dan proventrikulus
apabila virus ND diinfeksikan melalui mulut, sedangkan replikasi virus ND pada saluran
pencernaan bagian bawah yaitu duodenum, jejunum, ileum dan caecum kemungkinan terjadi
sebagai akibat viremia (Hewajuli dan Dharmayanti, 2011).
20
BAB V PENUTUP
5.1 Kesimpulan
Pengujian Hemagglutination Assay (HA) yang dilakukan mendapatkan titer sebesar 23
atau 8 HA unit untuk AI dan 25 atau 32 HA unit untuk ND, dimana hasil dari nilai pengenceran
4HA unit tersebut dilanjutkan kedalam pengujian Hemagglutination Inhibition (HI) untuk
mengetahui titer antibodi. Hasil dari uji HI didapatkan titer antibodi 23 untuk AI dan ND untuk
sampel serum Ayam layer yang menunjukkan bahwa sampel yang digunakan memiliki titer
antibodi rendah dan diperlukan vaksin booster, sedangkan untuk DOC Ayam broiler
mendapatkan titer antibodi 24 untuk AI dan 25 untuk ND, dimana sampel serum memiliki titer
antibodi rendah dikarenakan antibodi AI dan ND belum terbentuk pada DOC Ayam broiler. Uji
Rapid Serum Agglutination (RSA) pullorum dan mycoplasma pada sampel ayam memiliki hasil
negatif atau tidak terjadi reaksi aglutinasi.
5.2 Saran
Lebih diperhatikan lagi dalam melakukan pengambilan sampel agar, penyimpanan, dan
pengujian sehingga hasil yang didapatkan lebih akurat dan maksimal, serta lebih diperhatikan
lagi metode atau Teknik yang dilakukan dalam pengujian sampel sehingga hasil yang
didapatkan tidak bias.
21
DAFTAR PUSTAKA
Diyantoro, dan S. Wulandari. 2017. Deteksi Antibodi Salmonella pullorum dan Mycoplasma
gallisepticum pada Anak Ayam (Doc) Pedaging Beberapa Perusahaan yang Dijual Di
Kabupaten Lamongan. Agroveteriner, 5(2): 152-157.
Dwi WK, Tyasningsih W, Praja RN. 2018. Deteksi Antibodi Brucella pada Sapi Perah di Kecamatan
Purwoharjo Kabupaten Banyuwangi dengan Metode Rose Bengal Test (RBT). Jurnal Medik
Veteriner. Vol.1 No.3 : 142-147
Elfidasari, D., Puspitasari, R.L., Frisa, A., 2014. Deteksi Antibodi Akibat Paparan Virus AI Subtipe
H5N1 pada Unggas Air Domestik di Sekitar Cagar Alam Pulau Dua. Jurnal Al-Azhar
Indonesia Seri Sains Dan Teknologi.
Hewajuli, D. A., dan N. L. P. I Dharmayanti. 2011. Patogenesitas Virus Newcastle Disease pada
Ayam. WARTAZOA 21(2): 72-80
Iekram, Andi. 2018. Identifikasi Mycoplasma sp pada Ayam Broiler Suspect Chronic Respiratory
Disease dengan Uji Aglutinasi dan Isolasi Bakteri di Balai Besar Veteriner Maros.
Makassar: Universitas Hasanudin.
Irawan, Endhi. 2020. Deteksi Avian Influenza (AI) dengan Uji HA/HI dan Rapid Test pada Unggas
yang akan Dilalulintaskan dari Jawa Timur. Surabaya: Universitas Wijaya Kusuma.
Isikhnas. 2014. Manual Penyakit Unggas. Jakarta: Direktorat Kesehatan Hewan
Kartini D., Susan M. N., Fachriyan H. P. 2017. Deteksi Brucellosis pada Babi secara Serologis dan
Molekuler di Rumah Potong Hewan Kapuk, Jakarta dan Ciroyom, Bandung. ACTA
VETERINARIA INDONESIANA P-ISSN 2337-3202.
Kencana GAY, Suartha IN, Paramita NMAS, Handayani AN. 2016. Vaksin Kombinasi Newcastle
Disease dengan Avian Influenza Memicu Imunitas Protektif pada Ayam Petelur terhadap
Penyakit Tetelo dan Flu Burung. Jurnal Veteriner 17(2): 257-264.
Kurniawan MFT, Darmawan DP, Astiti NS. 2013. Strategi Pengembangan Agribisnis Peternakan
Ayam Petelur Di Kabupaten Tabanan. Jurnal Manajemen Agribisnis 1(2): 54-66.
Murwani, S., 2015. Dasar - Dasar Mikrobiologi Veteriner. 1st ed. Malang: Universitas Brawijaya
Nugraha, R. 2021. Deteksi Virus Avian Influenza dengan Uji HI pada Sampel Darah Ayam di Balai
Karantina Pertanian Kelas 1 Jambi. Karya Tulis Ilmiah: Fakultas Peternakan Universitas
Jambi.
22
Owen, Jennifer. 2011. Collecting, Processing, and Storing Avian Blood: A Review. J. Field Ornithol.
82(4):339–354.
Pudjiatmoko. 2014. Manual Penyakit Unggas. Jakarta: Direktorat Kesehatan Hewan
Perdana, Z. (2016). Deteksi Antibodi Virus Newcastle Disease Pada Ayam Buras Di desa Gayaman
Kecamatan Mojoanyar Kecamatan Mojoanyar Kabupaten Mojokerto Dengan Uji HI. Unair
respiratory.
Septyawati R., Nyoman S. D., Nyoman S. 2013. Serodeteksi Brucella abortus pada Sapi Bali di
Timor Leste. Indonesia Medicus Veterinus 2013 2(5): 504 – 514.
Wilujeng, E., Suwarno, R. N. Praja, I. S. Hamid, M. N. Yunita, dan P. A. Wibawati. 2020. Serodeteksi
Brucellosis dengan Metode Rose Bengal Test dan Complement Fixation Test pada Sapi
Perah di Banyuwangi. Jurnal Medik Veteriner, 3(2): 188-195
Wibowo A.A, Susanti R, Ulum F. 2012. Isolasi dan Identifikasi Virus Avian Influenza Subtipe H5N1
Di Peternakan Tradisional Kecamatan Gunungpati Semarang. Biosaintifika 4 (2) (2012).
Yesica, R. (2013). DETEKSI ANTIBODI AVIAN INFLUENZA (SUBTIPE H5) DENGAN UJI HI
(Hemagglutination Inhibition) PADA SERUM MERPATI (Columba livia) YANG DIAMBIL
DARI PASAR BANJARAN KOTA KEDIRI. Surabaya: Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Airlangga.
Yuniati, G. A., Suartha, N., & Bonar, D. R. (2017). Respons Imun Ayam Petelur Pascavaksinasi
Newcastle Disease dan Egg Drop Syndrome. Sains Veteriner, 1-10.
23
MAKALAH KEGIATAN PPDH
“PENYAKIT JEMBRANA”
Oleh :

MALANG
2021
LEMBAR PENGESAHAN
MAKALAH KEGIATAN PPDH
“PENYAKIT JEMBRANA”
Oleh :
Menyetujui,
Komisi Penguji

NIP. 19870925 201903 2 011 NIP. 19950224 201903 1 008
Mengetahui,

NIP. 19851116 201803 1 001
ii
KATA PENGANTAR
yang membangun.
Tim Penulis
iii
DAFTAR ISI
Halaman
LEMBAR PENGESAHAN ...............................................................................................................ii
KATA PENGANTAR .......................................................................................................................iii
DAFTAR ISI ...................................................................................................................................... iv
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................................................... v
A. Etiologi ............................................................................................................................................ 1
B. Epidemiologi ................................................................................................................................... 1
C. Transmisi ......................................................................................................................................... 2
D. Patogenesis ...................................................................................................................................... 2
E. Gejala Klinis .................................................................................................................................... 4
F. Patologi ............................................................................................................................................ 4
G. Diagnosa .......................................................................................................................................... 6
H. Pencegahan, Kontrol, dan Pengobatan ............................................................................................ 7
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................................................... 8
iv
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1. 1 Struktur skematik virus jembrana ................................................................................................. 1
1. 2. Siklus hidup lentivirus di dalam sebuah target cell...................................................................... 3
1. 3. Keringat darah yang keluar dari sapi penderita Penyakit Jembrana ............................................ 4
v
A. Etiologi
Penyakit jembrana disebabkan oleh retrovirus. Virus ini berbentuk pleomorf,
beramplop dengan materi genetik tersusun atas single stranded Ribonucleic Acid (ss-RNA),
berukuran 80-120 nm. Virus ini memiliki enzim reverse transcriptase, berkembang biak dalam
sel dan keluar sel melalui proses budding. Virus jembrana memiliki 4 protein utama (p26,
p16, p100 dan p38-42-45). Ptotein p26 bereaksi silang dengan protein dari Bovine
Immunodefiency Virus (BIV). Virus jembrana ini selain memiliki hubungan antigenic dengan
BIV, juga berhubungan dengan Human Immunodeficiency Virus (HIV), Simian
Immunodeficiency Virus (SIV), Feline Immunodeficiency Virus (FIV), Maedi Visna Virus
(MVV), Caprine Arthritis Encephalitis Virus (CAEV), dan Equine Infectious Anemia Virus
(EIAV) (Pudjiatmoko, 2014).
Gambar 1. 1 Struktur skematik virus jembrana (Pudjiatmoko, 2014).
Penyakit jembrana merupakan penyakit yang tidak bersifat zoonosis, sehingga tidak
dapat menular dari hewan ke manusia maupun sebaliknya. Host utama dari penyakit ini adalah
sapi bali (Bos javanicus). Bovine lentivirus diketahui dapat bereplikasi dengan mudah dan
konsisten hanya pada sapi bali. Infeksi eksperimental pada sapi hasil persilangan (Bos
indicus dan Bos taurus) diketahui hanya menghasilkan infeksi ringan atau subklinis. Penyakit
Jembrana bersifat akut dan terjadi setelah periode inkubasi pendek yang terjadi selama 5-12
hari dengan rata-rata kejadian selama 7 hari. Kematian ternak akibat Jembrana terjadi pada 1
atau 2 minggu setelah infeksi (Indirawati, 2014).
B. Epidemiologi
Sifat alami virus jembrana yaitu peka terhadap kloroform dan eter serta tahan terhadap
sodium deosikolat (1:1000). Virus jembrana bisa diinaktif oleh formalin serta peka terhadap
pH yang ekstrim (3 dan 12). Virus segera mengalami denaturasi jika dipanaskan pasa suhu
22-25oC selama 15 menit. Virus jembrana dapat tumbuh pada hewan percobaan dan in vitro
pada biakan sel. Virus dapat tumbuh pada TAB melalui berbagai rute melalui allantois,
korioalantoism selaput kuning telur, dan intravena serta kematian embrio terjadi setelah hari
1
ke 4-7. Spesies yang rentan terhadap virus jembrana hanyalah sapi bali dengan umur sapi yang
paling peka adalah lebih dari 1 tahun (6 bulan – 6 tahun). Kejadian penyakit jembrana
cenderung bersifat endemik tersebar di seluruh kabupaten di Bali, dimana kejadian paling
tinggi terjadi di kabupaten Jembrana dan Tabanan sedangkan kejadian paling rendah terjadi
di kabupaten Bangil (Pudjiatmoko, 2014).
Penyakit jembrana belum pernah dilaporkan di luar negeri, penyakit ini adalah asli
dari indonesia, di indonesia penyakit ini dilaporkan mewabah di desa sangkar agung,
kecamatan negara, kabupaten jembrana pada desember 1965, kemudian dalam waktu 8 bulan
penyakit ini menyebar dengan cepat ke beberapa kabupaten di bali. Penyakit yang sama juga
terjadi di desa Rama Dewa, Kecamatan seputih raman, kabupaten lampung pada bulan mei
1976 yang kemudian disebut penyakit Rama Dewa. Selanjutnya juga terjadi di banyuwangi,
jawa timur pada bulan November 1978. Dalam tahun 1978-1988 kejadian di bali bersifat
endemik tersebar di 26 kecamatan, kecuali kecamatan Nusa panida lembongan dan ceningan
bebas penyakit jembrana. Kasus paling banyak terjadi di kabupaten buleleng, Tabanan dan
jembrana dan sejak tahun 1989-1995 tidak ada laporan penyakit ini di Bali. Sapi yang sembuh
memiliki antibodi protektif yang berlangung lama atau sebagian besar sapi yang peka telah
dijual untuk dipotong. Kejadian penyakit selanjutnya dilaporkan pula di provinsi lain seperti
kasus wabah yang terjadi di sumatera barat (1992) dan kalimantan (1993) serta secara
serologis penyakit telah tersebar hampir di seluruh indonesia, seperti Sumatera, Jawa,
Kalimantan, Madura, Sulawesi Selatan, NTT dan Timor Timur dan Lombok negatif antibodi.
C. Transmisi
Penularan terjadi secara horisontal yaitu kontak langsung antara sapi sakit dengan
yang sehat dan tidak terjadi secara vertikal, oleh karena dari hewan karier melahirkan pedet
yang normal. Pada stadium akut titer virus PENYAKIT JEMBRANA dalam plasma darah
adalah tinggi (108,0ID50/ml) dan sapi yang sembuh dari penyakit akut sangat potensial sebagai
sumber infeksi karena terjadi viremia yang persisten dan berlangsung selama 60 hari dan titer
virus 101,0ID 50/ml. Telah diduga sebelumnya bahwa penyakit Jembrana merupakan insect
born disease, yaitu penularan penyakit lewat vektor insekta, seperti Culicoides sp dan nyamuk.
Tabanus rubidus memiliki potensi sebagai penular virus PENYAKIT JEMBRANA di
lapangan secara mekanis (Indriawati, 2013).
D. Patogenesis
Menurut Direktorat Jendral Hewan (2015), penyakit jembrana adalah penyakit yang
menyerang sistim kekebalan tubuh, maka patogenesis penyakit dimulai dari masuknya agen
penyakit, masa inkubasi yang ditandai oleh upaya virus memperbanyak diri dalam sel target,
gejala klinis dan mati atau kesembuhan. Masa inkubasi berkisar antara 4-7 hari yang diikuti
2
dengan munculnya demam hingga mencapai 41°- 42°C yang berlangsung hingga 5 -12 hari
(rata-rata 7 hari).
Pada masa demam akan terjadi penurunan limposit terutama sel limposit B dan
trombosit. Akibat penurunan trombosit maka terjadi perdarahan dihampir semua organ tubuh
dan bahkan dikulit yang luka akibat gigitan serangga pengisap darah potensial seperti Tabanus
sp. Sebaliknya penurunan sel limposit B yang merupakan sel dalam sistim kekebalan tubuh
akan menyebabkan berkembangnya bakteria pada organ tubuh yang berhubungan dengan
udara luar seperti paru-paru, ginjal dan saluran pencernaan. Infeksi sekuder ini menyebabkan
terjadinya pneumonitis, nephritis dan enteritis. Akibat peradangan ginjal tersebut maka ureum
tidak bisa dibuang dalam urin dan 7 kembali masuk dalam peredaran darah. Kadar ureum
yang tinggi (uremia) menyebabkan sel epitel menjadi rapuh dan menyebakan erosi pada
selaput lidah dan mukosa mulut. Pada umumnya kematian akibat penyakit Jembrana
disebabkan oleh kadar uremia yang sangat tinggi dalam darah.
Siklus hidup VPJ tergolong sangat unik dibandingkan dengan virus lainnya. Mula-
mula VPJ memasuki target cells dengan menempelkan dirinya di permukaan sel melalui
reseptor, kemudian melepas kulitnya di dalam sitoplasma dan memasukan gennya yang
disebut cDNA (proviral DNA) kedalam inti sel yang selanjutnya menyatu (berintegrasi)
dengan gen sapi. Pada saat hewan sembuh, siklus hidup VPJ sudah berhenti, gen VPJ tetap
berada di dalam target cells dan status hewan yang sembuh menjadi karier (Gambar 1). Pada
suatu keadaan tubuh hewan karier tidak sehat dan kekebalan humoral mulai menurun, diduga
bahwa cDNA tersebut dapat berubah menjadi virus baru yang aktif dan dapat menginfeksi
hewan peka di sekitarnya. Hal ini di duga kuat bisa menerangkan mengapa penyakit Jembrana
bisa menyebar ke beberapa wilayah.
Gambar 1. 2. Siklus hidup lentivirus di dalam sebuah target cell (Direktorat Jendral, 2015).
3
E. Gejala Klinis
Gejala klinis penyakit Jembrana bersifat konsisten baik pada kasus alami maupun
infeksi buatan, yaitu terjadi demam, depresi, anoreksia dan pembesaran kelenjar limfe
(limfadenopati). Periode inkubasi pada kasus alami sangat sulit ditentukan namun pada kasus
infeksi buatan dapat diketahui yaitu antara 2-7 hari.Ternak yang terserang ditandai dengan
demam tinggi (39,5-42°C) kemudian turun ke suhu normal dan menjadi sub normal saat
menjelang kematian. Demam mulai timbul pada hari ke 3-7, diikuti dengan konstipasi yang
berlanjut dengan diare encer berdarah serta ternak tampak kurus dan bulu kusam. Kelenjar
limfe superfisial (prescapularis, prefemoralis dan parotid) membesar. Pada infeksi percobaan,
kelenjar limfe mengalami pembesaran sangat hebat terjadi pada hari ke 5-7. Selaput lendir
mulut mengalami erosi. Erosi ini dapat ditemukan pada permukaan dorsal lidah, bibir bawah,
gusi, bantalan gigi dan perdarahan bentuk garis dapat ditemukan pada basis lidah. Akibat erosi
selaput lendir tersebut akan merangsang keluarnya air liur berlebihan (hipersalivasi)
(Pudjiatmoko, 2014).
Erosi juga ditemukan pada selaput lendir vagina. Disamping itu konjungtiva meradang
(conjunctival vaso injection) kadang-kadang terdapat klot darah disudut mata depan dan
diikuti dengan keluarnya sekresi air mata (lakrimasi). Pada beberapa kasus juga ditemukan
keringat darah (blood sweating) atau hemohidrosis, dan dilaporkan ada 93 % kasus keringat
darah dari semua kasus yang diamati. Keringat darah ini dapat diamati di daerah punggung,
flank, daerah perut, kaki dan scrotum. Keringat darah ini terjadi akibat gigitan insek penghisap
darah. Ternak yang bunting ditandai dengan keguguran. Dilaporkan 49% ternak bunting yang
terserang penyakit Jembrana diakhiri dengan keguguran yang terjadi pada semua masa
kebuntingan (Pudjiatmoko, 2014).
Gambar 1. 3. Keringat darah yang keluar dari sapi penderita Penyakit Jembrana (Pudjiatmoko, 2014).
F. Patologi
Perubahan patologi yang terlihat pada sapi bali yang terkena penyakit jembrana
meliputi kantong empedu membesar, hati dan limpa bengkak, jantung bengkak dan adanya
4
pengerasan makanan pada lambung omasum disertai adanya pengelupasan epitel omasum.
Pengamatan yang dilakukan pada hewan yang dibedah bangkai saat penyidikan menunjukkan
perubahan patologi sebai berikut; limfoglandula bengkak disertai dengan edema dan
hemoraghi, paru paru mengalami atelektasis, cairan asites berwarna kekuningan dalam rongga
perut, perdarahan titik pada miokardium pada bagian apex jantung, limpa bengkak dan rapuh
dengan bidang sayatan basah, kantong empedu membesar, hati bengkak dan rapuh degan
bidang sayatan basah, cairan edema pada selaput ginjal, infestasi cacing pada lambung,
perdarahan serta ulkus pada omasum dan abomasum, serta perdarahan sekum. (Nasution,
Hutago, & Purba, 2017)
Pengamatan Histopatologi yang terlihat Perubahan histopatologis jaringan kulit dan
hewan yang menunjukkan gejala “blood sweating” atau keringat darah yaitu ditandai dengan
kongesti dan kapiler yang cukup hebat terutama disekitar sebaceus dan kelenjar keringat.
Perdarahan juga ditemukan pada epidermis dan antara serabut otot. Pembuluh darah limfe
mengalami dilatasi. Sel endotel kapiler dan pembuluh limfe membengkak dan kongesti, inti
sel tampak besar dan bersifat vesikular. Pada kasus yang hebat ditemukan ulser kecil pada
kulit, dikelilingi oleh berbagai tipe sel radang. Pada dasar ulser ditemukan fibrin dan sel
debris. Akumulasi sel mononuklear dan sel plasma dapat diamati di sekitar arteri kecil di
dalam jaringan subkutaneus dan dermis.
Selaput lendir, septum nasi dan turbinatus pada sistem pernafasan tampak hipermis,
kadang-kadang hemoragik atau nekrotik dan erosi. Lamina propria dari membran mukosa
diinfiltrasi oleh netrofil dan sel-sel mononuklear. Selain itu terjadi pula trombi dan lekostasis
dalam pembuluh darah. Trakhea mengalami kongesti, erosi epitel, edema dan infiltrasi
berbagai jenis sel radang. Pada bronchi, perubahannya sama seperti pada trakhea. Pada paru
perubahannya sangat spesifik yaitu terjadi pneumonia interstitial. Sel septa mengalami
hipertrofi dan hiperplasia. Beberapa sel terlihat terlepas dan mengisi lumen alveoli. Sering
kali ditemukan badan inklusi baik pada kasus alami maupun buatan, masing-masing 86.6 dan
89,5%. Sel raksasa (giant cell) kadang-kadang dapat juga diamati. Septa alveoli juga
diinfiltrasi oleh sel limforetikuler dan sel plasma. Di dalam kapiler dinding alveoli sel endotel
membesar dan proliferasi menyebabkan trombosis yang kemudian disebut endoteliosis.
Namun belakangan ini telah dilakukan pemeriksaan dengan mikroskop elektron ternyata
bahwa sel mononuklear yang tampak menyumbat lumen kapiler adalah makrofag
intravaskuler
Esofagus, rumen, retikilum, dan omasum mengalami balooning degeneration dan
vakuolisasi sel epitelial dari membran mukosa. Di dalam lamina propria terjadi kongesti,
edema, hipertrofi, hiperplasia sel endotelial, sedangkan sel radang tidak ditemukan. Lamina
5
propria dari abomasum diinfiltrasi oleh limfosit, sel plasma dan beberapa netrofil. Sel
endotelial pembuluh darah juga mengalami hipertrofi dan hyperplasia
Limpa mengalami hiperplasia sel limforetikuler dan kerusakan limfositik atau
nekrosis di dalam limpa. Terjadi kongesti dan perdarahan. Sel limforetikuler di dalam pusat
germinal dari folikel limfoid mengalami proliferasi. Sel endotelial di lapisan sinus kortex dan
medula hipertrofi, hiperplasia dan deskuamasi serta mengisi lumen dari sinus. Juga terdapat
makrofag, sel limfoid besar dan sel plasma di dalam sinus. Kapsul limfoid periarterial disusun
oleh sel abnormal besar dan cordnya diinfiltrasi oleh sejumlah sel limfoid. Hemosiderosis, sel
sinsitial dan badan-badan inklusi sering juga ditemukan.
Patologi klinis dari ternak yang mengalami penyakit jembrana yaitu ditandai dengan
leukopenia dan trombositopenia yang constant kemudian diikuti dengan limfositosis. Selama
fase akut terjadi limfosit abnormal. Beberapa tipe sel ditemukan pada preparat ulas darah yaitu
sel dengan inti dan sitoplasma yang besar, limfosit medium berinti ganda, mitosis limfosit, sel
plasma dan limfosit besar dan medium dengan sitoplasma yang mengalami vakoulisasi berisi
inti eosinofilik. Pada sapi yang diinfeksi buatan juga menimbulkan gambaran leukopenia.
Perubahan lain yang dapat terjadi dan telah ditemukan yaitu terjadi anemia normokromik,
sedikit trombositopenia dan uremia. Total protein plasma menurun terutama pada stadium
akhir penyakit. Level fibrinogen dan kreatinin darah tidak mengalami perubahan nyata dan
level nitrogen urea darah tinggi (150mg/dl) (Pudjiatmoko, 2014).
G. Diagnosa
Penyakit Jembrana didiagnosa berdasarkan data epidemiologi, gejala klinis, patologis,
hematologis dan serologis. Genom RNA virus jembrana dalam jaringan yang telah diblok
dengan parafin dapat dideteksi dengan teknik in situ hybridization. Pengujian antibodi dapat
dideteksi dengan enzime linked immunosorbent assay (ELISA). Pada sapi yang terinfeksi,
antibodi tidak dapat dideteksi sampai 11-33 minggu pasca infeksi dan tetap dapat dideteksi
sampai dengan 59 minggu pasca infeksi. Teknik yang lebih spesifik seperti Western
immunoblotting yang dapat mendeteksi protein 26K virus Jembrana dalam serum. Protein ini
secara konstan dapat dideteksi pada minggu ke-6 pasca infeksi. Hal ini sesuai dengan
munculnya plasmasitosis dan meningkatnya jumlah IgG. Sampai saat ini, deteksi penyakit
jembrana dilakukan menggunakan uji serologis. Namun tidak seperti uji lentiviral pada
umumnya, diagnosis baru dapat ditegakkan sebelum tahap penyakit klinis menjadi kronis,
diagnosis penyakit jembrana tidak dapat ditegakkan jika belum mencapai 5-15 minggu setelah
timbulnya gejala klinis (Indriawati, 2013).
Diagnosa banding dari penyakit jembrana dengan gejala klinis dan patologis yang
sangat mirip antara lain Malignant Catarrhal Fever (MCF), Rinderpest, Bpvine Viral
6
Diarrhea-Mucosadisease (BVD-MD), Penyakit mulut dan kuku (PMK), Bovine Emphemerak
Fever (BEF), dan penyakit bacterial seperti Septicaemia Epizootica (SE) atau penyakit parasit
darah seperti Surra (Pudjiatmoko, 2014).
H. Pencegahan, Kontrol, dan Pengobatan
Setiap kasus pada penyakit jembrana harus segera dilaporkan kepada Dinas
Peternakan setempat atau instansi berwenang (BPPV/BBV) yang tembusannya dikirim
kepada Direktorat Kesehatan Hewan untuk segera diambil tindakan.
Tindakan yang paling efektif untuk pencegahan dan control penyakit Jembrana adalah
dengan melakukan vaksinasi. Telah berhasil diproduksi vaksin penyakit jembrana dari plasma
dan limpa. Dengan menggunakan inaktivasi Triton X-100 dengan kosentrasi 1% (v/v) dalam
incomplete Freund Adjuvant (IFA) dan dilakukan vaksinasi sebanyak 3 kali ternyata
memberikan respon kebal setelah ditantang dengan virus PENYAKIT JEMBRANA 102x
ID50, satu bulan setelah vaksinasi terakhir. Telah dibandingkan pula penggunaan IFA dan
Quil-A, keduanya dapat meningkatkan respon imun, akan tetapi Quil-A memberikan respon
imun sedikit lebih rendah dan pada IFA, dan juga memberikan reaksi terhadap virus tantang
Iebih tinggi. Kemudian, untuk hewan yang sakit dapat dipotong di bawah pengawasan dokter
hewan atau petugas berwenang (Pudjiatmoko, 2014).
7
DAFTAR PUSTAKA
Direktorat Keseharan Hewan. 2015. Pedoman Pengendalian dan Penanggulangan Penyakit
Jembrana. Jakarta: Kementrian Pertanian.
Indirawati, dkk. 2013. Deteksi Virus Penyakit Jembrana pada Sapi Bali Menggunakan Penanda
Molekuler Gen env SU*. Berita Biologi 12(2) - Agustus 2013
Isikhnas. 2014. Penyakit Jembrana. Jakarta: Direktorat Kesehatan Hewan.
Kementrian Pertanian. (2014). Manual Penyakit Hewan Mamalia. Jakarta: Subdit Pengamatan
Penyakit Hewan
Nasution, S. S., Hutago, N. M., & Purba, J. R. (2017). Investigasi Outbreak Penyakit Jembrana di
Kabupaten Padang Lawas, Provinsi Sumatera Utara Tahun 2017. Oral Presentation (AEVI-
22), 461.
Pudjiatmoko. 2014. Manual Penyakit Unggas. Jakarta: Direktorat Kesehatan Hewan

Laporan Akhir Rotasi Mikrobiologi - Kelompok Saluran Pernafasan

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Laporan Akhir Rotasi Mikrobiologi - Kelompok Saluran Pernafasan

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

LAPORAN KEGIATAN PPDH

ROTASI DIAGNOSA LABORATORIK MIKROBIOLOGI

“ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI SALURAN PERNAFASAN PADA UNGGAS”

PROGRAM PENDIDIKAN PROFESI DOKTER HEWAN

“ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI SALURAN PERNAFASAN PADA UNGGAS”

Malang, 1-12 November 2021

drh. Indah Amalia Amri, M.Si drh. Gegana Wimaldy Airlangga

drh. Nofan Rickyawan, M.Sc

Malang, 12 November 2021

1.2 Rumusan Masalah

Gambar 2. 1 Saluran Pernafasan Unggas.

2.2 Teknik Pengambilan Sampel

2.3 Media Isolasi dan Identifikasi Bakteri

2.3.1 Media Brain Heart Infusion Broth (BHIB)

2.3.3 Media Mc Conkey Agar (MCA)

2.3.4 Media Blood Agar Plate (BAP)

2.3.5 Media Chocolate Agar

2.3.6 Media Mannitol salt Agar (MSA)

Gambar 2. 4 Interpretasi hasil media MSA (Leboffe & Burton, 2011).

Gambar 2. 5 Interpretasi hasil media EMBA (Leboffe & Burton, 2011).

2.3.8 Media Triple Sugar Iron Agar (TSIA)

Gambar 2. 6 Interpretasi hasil media TSIA (Leboffe & Burton, 2011).

2.3.10 Media Urease

2.3.11 Media Methyl-Red (MR)

2.3.12 Media Voges-Proskauer (VP)

2.3.13 Media Mueller Hinton Agar (MHA)

2.5 Penyakit Bakterial pada Saluran Pernafasan Unggas

Agen penyebab CRD pada unggas adalah Mycoplasma gallisepticum..Mycoplasma

Identifikasi penyakitnya dengan fenomena satelit pada pemupukan bersama

3.2 Peserta Kegiatan PPDH

Nama : Islah Asyraf Diari

Nama : Aida Muslimatun Al Azizah

Nama : Miranda Eka Putri Wibowo

Nama : Aprilia Anggraeni

3.3.2 Alat dan Bahan

3.4 Sterikisasi Alat

3.5 Metode Pemeriksaan

3.5.2 Pembuatan Media

3.5.3 Isolasi dan Identifikasi Bakteri

Gambar 3. 2 Interpretasi hasil media MR-VP (Cappucino & Welsh, 2020).

c. Simmon Citrate Agar (SCA)

Gambar 3. 3 Interpretasi hasil media SCA (Cappucino & Welsh, 2020).

Gambar 3. 4 Interpretasi hasil media Urease (Cappucino & Welsh, 2020).

Tabel 4. 1 Morfologi koloni pada media NAP.

Isolat murni yang didapatkan kemudian dilakukan identifikasi morfologi bakteri

b. Mannitol Salt Agar (MSA)

a. Triple Sugar Iron Agar (TSIA)

Hasil pengujian katalase pada koloni bakteri II sampel A (Gambar 4.16)

Hasil pengujian katalase pada koloni bakteri II sampel A (Gambar 4.17)

Tabel 4. 3 Hasil uji sensitivitas bakteri.

Iekram, A. M. (2018). IDENTIFIKASI Mycoplasma sp PADA AYAM BROILER SUSPECT

Rozalski, A. et al., 2012. Proteus Sp. – An Opportunistic Bacterial Pathogen – Classification,

“UJI HEMAGLUTINASI (HA TEST) DAN UJI HAMBATAN HEMAGLUTINASI (HI

PROGRAM PENDIDIKAN PROFESI DOKTER HEWAN

“UJI HEMAGLUTINASI (HA TEST) DAN UJI HAMBATAN HEMAGLUTINASI (HI

Malang, 1-12 November 2021

drh. Indah Amalia Amri, M.Si drh. Gegana Wimaldy Airlangga

drh. Nofan Rickyawan, M.Sc

Malang, 12 November 2021

LEMBAR PENGESAHAN .................................................................................................................ii

1.2 Rumusan Masalah

2.3 Rose Bengal Test (RBT)

2.4 Rapid Serum Aglutination (RSA)