LAPORAN KEGIATAN PPDH

ROTASI DIAGNOSA LABORATORIK

MIKROBIOLOGI DAN IMUNOLOGI VETERINER

Oleh:
Dinda Tri Cleopatra, S.KH
NIM. 190130100111003

PENDIDIKAN PROFESI DOKTER HEWAN

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2019

i
 LEMBAR PENGESAHAN

LAPORAN KEGIATAN PPDH

ROTASI DIAGNOSA LABORATORIK
MIKROBIOLOGI DAN IMUNOLOGI VETERINER

Malang, 7-25 Oktober 2019

Oleh:
Dinda Tri Cleopatra, S.KH
NIM. 190130100111003

Menyetujui,
Komisi Penguji

Pembimbing I Pembimbing II

drh. Dahliatul Qosimah, M.Kes drh. Indah Amalia Amri, M.Si

NIP. 198201272015042001 NIP. 19870925201932011

Penguji I Penguji II Penguji III

drh. Fidi Nur Aini EPD, M.Si drh. Sruti Listra Adrenalin, M.Sc drh. Gegana Wimaldy Airlanga
NIK. 2014058803272001 NIP. 199204022019032029 NIP. 199502242019031008

Mengetahui,
Dekan Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Brawijaya

Dr. Ir. Sudarminto Setyo Yuwono, M.App.Sc

NIP. 19631216 198803 1 002

ii
 KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan semesta alam Allah SWT
yang telah memberikan rahmat dan hidayah-Nya serta junjungan Nabi besar
Muhammad SAW, sehingga penulis dapat menyelesaikan laporan kegiatan PPDH
Rotasi Mikrobiologi yang dilaksanakan di Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Brawijaya. Dalam menyelesaikan penulisan laporan ini, penulis
mengucapkan terima kasih kepada banyak pihak yang telah membantu.
Pada kesempatan ini, penulis mengucapkan terima kasih kepada:
1. Dr. Ir. Sudarminto Setyo Yuwono, M.App.Sc selaku Dekan Fakultas
Kedokteran Hewan Universitas Brawijaya Malang.
2. drh. Wawid Purwatiningsih, M.Si selaku koordinator PPDH FKH UB.
3. drh. Indah Amalia Amri, M.Si dan drh. Sruti Listra Adrenalin selaku
pembimbing PPDH Rotasi Mikrobiologi dan Virologi di FKH UB yang telah
banyak memberikan arahan dan masukan kepada penulis.
4. drh. Fidi Nur Aini EPD, M.Si dan drh. Gegana Wimaldy Airlangga selaku
penguji ujian PPDH Rotasi Mikrobiologi dan Virologi di FKH UB.
5. drh. Dahliatul Qosimah selaku Dosen Laboratorium Mikrobiologi Fakultas
Kedokteran Hewan Universitas Brawijaya atas bimbingan, arahan, dorongan
semangat dan fasilitas yang diberikan kepada penulis.
6. Keluarga tercinta yang selalu memberi kasih sayang, dukungan dan doa
sehingga penulis dapat menyelesaikan laporan ini.
7. Teman kelompok 4 PPDH Gelombang VI (Klepon) atas semangat dan
dukungannya.
8. Semua pihak yang telah membantu dalam menyelesaikan penulisan laporan
ini yang tidak dapat disebut satu persatu.
Akhir kata, penulis berharap semoga Tuhan Yang Maha Esa membalas
segala kebaikan yang telah diberikan kepada penulis dan laporan ini dapat
memberikan manfaat serta menambah pengetahuan tidak hanya bagi penulis
tetapi juga bagi pembaca. Amin.

Malang, 17 Oktober 2019

Penulis

iii
 DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL .............................................................................................. i
LEMBAR PENGESAHAN ................................................................................. ii
KATA PENGANTAR ......................................................................................... iii
DAFTAR ISI ......................................................................................................... iv
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ vi
DAFTAR TABEL .............................................................................................. vii
BAB I. PENDAHULUAN ...................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang .......................................................................................1
1.2 Rumusan Masalah .................................................................................. 2
1.3 Tujuan ................................................................................................... 2
1.4 Manfaat ................................................................................................. 2
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA...........................................................................4
2.1 Susu Segar .............................................................................................. 4
2.2 Mastitis ................................................................................................... 4
2.3 Bakteri Pada Susu Mastitis.....................................................................5
2.4 Faktor Penyebab Mastitis ....................................................................... 6
2.5. Pemeriksaan Mikrobiologi .................................................................... 7
2.5.1 Media NA ...................................................................................... 8
2.5.2 Media MSA ................................................................................... 8
2.5.3 Media BAP ....................................................................................8
2.5.4 Media EMBA ................................................................................ 9
2.6 Diagnosa Mastitis ................................................................................... 9
2.7 Pengobatan dan Pencegahan Mastitis ................................................. 10
BAB III. MATERI DAN METODE ................................................................... 11
3.1 Waktu dan Tempat Pelaksanaan Kegiatan ........................................... 11
3.2 Alat dan Bahan ..................................................................................... 11
3.3 Prosedur Kerja...................................................................................... 11
3.3.1 Pembuatan Media NA ................................................................. 11
3.3.2 Pembuatan Media MSA .............................................................. 11
3.3.3 Pembuatan Media BAP ............................................................... 12
3.3.4 Pembuatan Media EMBA ........................................................... 12
3.3.5 Pembuatan Media MHA ............................................................. 12
3.3.6 Isolasi dan Identifikasi ................................................................ 13
3.3.7 Uji Sensitifitas Antibiotik ........................................................... 14
3.4 Kerangka Alur Pengujian ..................................................................... 15
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................ 16
4.1 Hasil Pengamatan ................................................................................. 16
4.2 Hasil Pemeriksaan CMT ..................................................................... 16
4.3 Hasil Pemeriksaan Laboratorium ........................................................ 17

iv
 4.3.1 Hasil Isolasi Bakteri Pada Media NA ......................................... 17
4.3.2 Hasil Isolasi Bakteri Pada Media MSA ...................................... 18
4.3.3 Hasil Isolasi Bakteri Pada Media BAP ....................................... 20
4.3.4 Hasil Isolasi Bakteri Pada Media EMBA ................................... 21
4.4 Uji Sensitifitas Antibiotik .................................................................... 23
BAB V. PENUTUP ............................................................................................... 26
5.1 Kesimpulan .......................................................................................... 26
5.2 Saran..................................................................................................... 26
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 27

v
 DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman
3.1 Diagram alur pengujian sampel mastitis ....................................................... 16

4.1 Kondisi Ambing Mastitis ................................................................................. 17

4.2 Hasil Pemeriksaan CMT dengan reagen CMT ............................................... 18

4.3 Hasil Pemeriksaan CMT dengan reagen Deterjen............................................... 18

4.4 Hasil pengamatan isolasi pada media NA ....................................................... 19

4.5 Hasil pengamatan isolasi pada media MSA .................................................... 20

4.6 Hasil pengamatan isolasi pada media BAP...................................................... 21

4.7 Hasil pengamatan isolasi pada media EMBA .................................................. 22

4.8 Hasil Uji Katalase ............................................................................................ 23

vi
 DAFTAR TABEL

Tabel Halaman
4.1 Hasil Pemeriksaan Laboratorium ................................................................... 22

4.2 Uji Sensitifitas Antibiotik ................................................................................ 23

vii
 BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Susu merupakan hasil produksi dari hewan yang sangat bergizi, terutama
susu yang berasal dari sapi perah, maka tidak salah jika banyak orang yang
mengkonsumsi susu. Tingkat pemenuhan susu secara kuantitas masih sangat
rendah terbukti dengan tingkat produksi dalam negeri pada tahun 2009 sebesar
827,2 ton/tahun dan memerlukan impor sebesar 173.305,30 ton/tahun (Direktorat
Jenderal Peternakan dan Kesehatan Hewan, 2011). Susu merupakan bahan pangan
yang sempurna dan mempunyai nilai gizi tinggi karena mempunyai kandungan
nutrisi yang lengkap antara lain lemak, protein, laktosa, vitamin, mineral, dan
enzim, pH mendekati netral dan kandungan airnya tinggi. Oleh karena itu, susu
sangat mudah mengalami kerusakan akibat pencemaran mikroba (Handayani,
2010).
Salah satu penyebab rendahnya produksi dan kualitas susu sapi perah dari
aspek kesehatan adalah adanya penyakit mastitis. Mastitis adalah peradangan
jaringan interna ambing. Secara garis besar, mastitis terbagi dua, yakni mastitis
klinis dengan gejala klinis yang terlihat jelas dan mastitis subklinis dengan gejala
yang tidak terlihat. Mastitis dapat terjadi pada berbagai jenis hewan dan secara
ekonomis memiliki dampak merugikan kepada peternak sapi perah. Hal ini
disebabkan kasus mastitis subklinis sering tidak disadari oleh peternak yang
melihat sapi dalam keadaan sehat, tetapi terjadi penurunan produksi susu
(Subronto, 2003).
Agen penyebab penyakit mastitis, antara lain: lain Streptococcus
agalactiae, S. disgalactiae, S. uberis, S. zooepidermicus, Staphylococcus aureus,
Escherichia coli, Enterobacter aerogenes dan Pseudomonas aeruginosa. Yeast
dan fungi juga sering menginfeksi ambing (Samad, 2008). Pencegahan mastitis
dapat dilakukan dengan teat dipping setelah pemerahan menggunakan bahan
bakterisida komersial seperti iodine, chlorhexidine, dan chlorine. Larutan chlor
dan iodine dapat menurunkan populasi infeksi ambing yang disebabkan oleh
bakteri. Selama ini pengobatan terhadap mastitis dilakukan dengan penggunaan
antibiotik, terutama penicillin. Penggunaan antibiotik sejenis dalam waktu yang

1
lama berdampak negatif, menyebabkan resistensi bakteri dan residu dalam air
susu yang membahayakan konsumen. Kerugian kasus mastitis antara lain:
kehilangan produksi susu, kualitas dan kuantitas susu berkurang, banyak sapi
yang diculling. Penurunan produksi susu per kuartir bisa mencapai 30% atau 15%
sapi per laktasi, sehingga menjadi permasalahan besar dalam industri sapi perah
(Sori et al., 2005).
Dengan adanya kasus mastitis yang dapat terjadi di sebuah peternakan,
mendasari kegiatan koasistensi Pendidikan Profesi Dokter Hewan (PPDH) yang
dilakukan oleh mahasiswa FKH UB di laboratorium mibrobiologi FKH UB untuk
mempelajari penyakit tersebut dengan mengetahui agen bakteri penyebabnya,
sehingga mahasiswa mampu untuk mengetahui gejala klinis, penyebab terjadinya
penyakit dan mampu mendiagnosa penyakit mastitis beserta agen bakteri
penyebabnya.

1.2 Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang di atas, dapat dirumuskan permasalahan
sebagai berikut:
1. Bagaimana cara mendiagnosis mastitis secara mikrobiologi?
2. Bagaimana hasil diagnosis mastitis dengan uji CMT dan identifikasi bakteri?
3. Bagaimana sensitifitas antibiotic terhadap bekteri penyebab mastitis?

1.3 Tujuan
Berdasarkan rumusan masalah, tujuan dari pemeriksaan ini yaitu:
1. Untuk mengetahui cara mendiagnosis mastitis secara mikrobiologi.
2. Untuk mengetahui hasil diagnosis mastitis dengan uji CMT dan identifikasi
bakteri.
3. Untuk mengetahui sensitifitas antibiotik terhadap bekteri penyebab mastitis.

1.4 Manfaat
Manfaat dari pemeriksaan ini adalah Mahasiswa PPDH (Pendidikan
Profesi Dokter Hewan) dapat menambah kemampuan dan ketrampilan terkait
pemeriksaan mikrobiologi pada susu sapi perah dan mendapatkan pengetahuan

2
tambahan mengenai cara pembiakan bakteri dan identifikasi bateri di
laboratorium. Keseluruhan pengetahuan ini dibutuhkan untuk menunjang
kemampuan mendiagnosa penyakit sebagai calon dokter hewan.

3
 BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Susu Segar

Susu segar merupakan cairan dari kelenjar susu (mammary gland) yang
diperoleh dengan cara pemerahan sapi selama masa laktasi tanpa adanya
penambahan atau pengurangan komponen apapun pada cairan tersebut
(Hadiwiyoto, 1994). Susu merupakan sumber energi karena mengandung banyak
laktosa dan lemak, disebut juga sumber zat pembangun karena mengandung juga
banyak protein dan mineral serta berbagai bahan-bahan pembantu dalam proses
metabolisme seperti mineral dan vitamin. Secara kimiawi susu normal
mempunyai komposisi air (87,20%), lemak (3,70%), protein (3,50%), laktosa
(4,90%), dan mineral (0,07%) (Sanam et al.. 2014).
Susu segar merupakan bahan makanan yang bergizi tinggi karena di
dalam susu segar mengandung berbagai zat makanan yang lengkap dan seimbang
seperti protein, lemak, karbohidrat, mineral, dan vitamin yang sangat dibutuhkan
oleh tubuh manusia. Nilai gizi susu yang tinggi menyebabkan susu menjadi
medium yang sangat disukai oleh mikrooganisme yang mendorong pertumbuhan
dan perkembangan mikroba, sehingga dalam waktu yang sangat singkat susu
menjadi tidak layak dikonsumsi bila tidak ditangani secara tepat dan benar
(Chrisna, 2016).

2.2 Mastitis
Mastitis adalah penyakit yang merupakan masalah di seluruh dunia yang
mengakibatkan kerugian yang besar pada peternakan sapi perah akibat kualitas
susu yang buruk, penurunan produksi susu, peningkatan biaya obat dan pelayanan
dokter hewan, tingginya jumlah ternak yang diafkir sebelum waktunya dan
kadang terjadi kematian akibat penyakit tersebut (Kumar et al., 2010). Bakteri
yang sering menyebabkan mastitis adalah Streptococcus agalactiae,
Streptococcus dysgalactiae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus spp.,
Klebsiella pneumoniae, dan Escericia coli (Zalizar, 2010).
Manifestasi penyakit mastitis pada sapi perah bisa dibedakan menjadi
mastitis klinis dan mastitis sub klinis. Kasus mastitis klinis sering kali bermula

4
dari mastitis subklinis yang terjadi pada saat laktasi. Mastitis klinis selalu diikuti
tanda klinis, baik berupa pembengkakan ambing, rasa sakit, panas, serta
kemerahan bahkan sampai terjadi penurunan fungsi ambing. Sedangkan mastitis
subklinis gejalanya tidak Nampak. Mastitis subklinis dapat diketahui hanya
dengan melakukan uji laboratorium, karena tidak ada perubahan pada jaringan
ambing (Nurhayati dan Martindah, 2015).
Menurut Davidse (2003) 70 hingga 80 % kerugian yang diakibatkan oleh
mastitis terjadi karena mastitis subklinis. Produksi susu akan menurun 5-10% dari
normal dan komposisi susu akan rusak. Meskipun penurunan kualitas yang
rendah, jika terjadi terus menerus dapat menyebabkan kerugian yang lebih besar
dibandingkan mastitis klinis.

2.3 Bakteri Pada Susu Mastitis

Menurut Furowicz et al., (2008), bakteri yang paling sering diisolasi dari
susu mastitis adalah Staphylococcus spp., Enterobactericeae, Streptococcus spp,
Bacillus cereus, dan Pseudomonas aeruginosa. Strain Staphylococcus yang
memiliki koagulase negatif ditemukan dari kasus mastitis klinis dan subklinis
pada sapi perah di beberapa negara. Streptococcus agalactiae adalah strain yang
palig patogen dan sangat virulen diantara semua strain streptococcus yang
menyebabkan mastitis, tidak hanya pada sapi. S agalactiae juga dilaporkan sangat
kontagius. Diantara Enterobacteriae, E. coli adalah strain yang paling sering
ditemukan pada susu mastitis.
Bakteri S. aureus merupakan bakteri gram positif dan berbentuk kokus.
Bakteri tersebut terbentuk menyerupai bola dengan garis tengah ± 1 µm tersusun
dalam kelompok-kelompok tidak teratur (menyerupai buah anggur), dapat pula
tersusun empat-empat (tetrad), membentuk rantai (3-4 sel), berpasangan atau satu-
satu (Dewi, 2013). S. aureus bersifat non-motil, nonspora, anaerob fakultatif,
katalase positif dan oksidase negatif, koagulasi positif dan tumbuh pada suhu 6.5
sampai 46oC dan pada pH 4.2 sampai 9.3 (Paryati, 2002).
Infeksi oleh S. aureus ditandai dengan kerusakan jaringan yang disertai
abses. Staphylococcus aureus membuat tiga macam metabolit, yaitu yang bersifat
nontoksin, eksotoksin, dan enterotoksin. Metabolit nontoksin antara lain adalah

5
antigen permukaan, koagulase, hialuronidase, fibrinolisin, gelatinosa, protease,
lipase, tributirinase, fosfatase, dan katalase. Staphylococcus aureus dapat
menimbulkan penyakit melalui kemampuannya tersebar luas dalam jaringan dan
melalui pembentukan berbagai zat ekstraseluler. Berbagai zat yang berperan
sebagai faktor virulensi dapat berupa protein, termasuk enzim dan toksin .
Streptococcus adalah salah satu genus dari bakteri nonmotil yang mengandung sel
gram positif, berbentuk buat, oval dan membentuk rantai pendek, panjang atau
berpasangan, bakteri ini tidak membentuk spora, bakteri ini dapat ditemukan di
bagian mulut, usus manusia dan hewan (Andre Tjie Wijaya, 2014). Bakteri
Streptococcus agalactiae memiliki karakteristik antara lain ukuran koloni yang
sangat kecil (pin point), transparan, α- atau γ- hemolisis pada agar darah domba
5%, bentuk sel bulat, gram positif (biru-ungu), uji katalase dengan H2O2 3%
negatif, uji oxidase negatif (Lundberg, 2015).
Escherichia coli merupakan bakteri Gram negatif berbentuk batang
pendek yang memiliki panjang sekitar 2 µm, diameter 0,7 µm, lebar 0,4-0,7µm
dan bersifat anaerob fakultatif. E. coli membentuk koloni yang bundar, cembung,
dan halus dengan tepi yang nyata. Telah ada peningkatan kasus dalam insiden E.
coli mastitis sejak tahun 1960 dan itu diterima sebagai penyebab paling umum
dari mastitis fatal (Menzies, 1992). Berbeda dengan strain enteropatogenik dan
bakteremia, yang disebabkan oleh jumlah serotipe E. coli yang relatif rendah,
isolat dari mastitis sapi termasuk dalam sejumlah besar serotype E.coli. Serotipe
E. coli dalam susu mastitik mirip dengan isolat feses.. Infeksi E. coli mengacu
pada ekspresi klinisnya. Di lapangan, tanda-tanda ini diperingkat dari yang ringan,
sedang, dan parah, dan hewan yang resisten tidak peka (Sudarwanto, 2006).

2.4 Faktor Penyebab Mastitis

Pada sapi perah, kejadian mastitis lebih sering disebabkan oleh infeksi
bakteri dibandingkan oleh agen penyebab lainnya seperti cendawan atau kapang
(Karimuribo et al., 2008). Mastitis yang disebabkan oleh cendawan atau kapang
disebut mastitis mikotik, biasanya bersifat kronis dan gejala klinisnya sulit diamati
karena tidak berbeda dengan mastitis bakterial (Martindah et al., 2009). Kasus
mastits mikotik ini sulit diketahui karena umumnya bergejala subklinis dan onset

6
penyakitnya bersifat kronis. Kegagalan pengobatan mastitis dengan antibiotika,
mengindikasikan adanya mastitis mikotik. Antibiotika diketahui sebagai
perangsang tumbuhnya cendawan didalam kelenjar ambing karena tidak ada
pesaing bakterial, akibatnya menginfeksi kelenjar ambing (Ahmad, 2011).
Kejadian mastitis subklinis yang terjadi pada masa kering mencapai 63%
(Pantoja et al., 2009). Masa kering yaitu dua minggu setelah penghentian
pemerahan dan dua minggu menjelang waktu beranak.infeksi yang terjadi pada
periode tersebut akan terus berlangsung selama masa laktasi. Salah satu factor
predisposisi mastitis subklinis dari segi host/ternak sapi adalah kondisi dan bentuk
ambing. Kasus mastitis pada ambing yang menggantung lebih tinggi jika
dibandingkan dengan kasus mastitis pada ambing yang tidak menggantung (Sori
et al., 2005). Ambing yang sangat menggantung atau ambing dengan lubang
putting terlalu lebar akan mudah terinfeksi (Akers et al., 2006). Pada ambing yang
menggantung, kemungkinan kontak dengan agen pathogen lebih tinggi sehingga
mikroorganisme mudah melekat dan masuk ke dalam ambing (Subronto, 2003).
Faktor lingkungan dan manajemen kandang serta pakan pun
mempengaruhi kejadian mastitis subklinis. Kebersihan lingkungan yang jelek
maka kejadian mastitis akan meningkat. Studi yang telah dilakukan di India,
menunjukkan bahwa factor-faktor seperti jumlah ternak, kondisi iklim daerah
peternakan, variasi dalam praktik sosial budaya, pemasaran susu, tingkat
pendidikan peternak, system pemberian pakan dan manajemen/pengelolaan
pemeliharaan merupakan faktor-faktor penting yang mempengaruhi kejadian
mastitis subklinis (Joshi and Gokhale, 2006).

2.5 Pemeriksaan Mikrobiologi

Pemeriksaan mikrobiologi yang dilakukan pada sampel susu mastitis
menggunakan media pembiakan bakteri. Pembiakan dipelukan untuk mempelajari
sifat bakteri untuk dapat mengidentifikasi, determinasi, atau diferensiasi jenis-
jenis yang ditemukan. Untuk menciptakan keadaan lingkungan yang tepat secara
artifisial sebagai pengganti keadaan di alam tidak mudah, sehingga seringkali
sifat-sifat bakteri dapat berubah jika telah lama hidup dalam medium artifisial.
Bakteri-bakteri tertentu membutuhkan faktor-faktor tumbuh tambahan yang

7
disebut vitamin bakteri, dalam jumlah sedikit sekali untuk sintesis metabolik
esensial (Halasa, 2007).
2.5.1 Media Nutrient Agar (NA)
Nutrient Agar (NA) merupakan suatu media yang berbentuk padat, yang
merupakan perpaduan antara bahan alamiah dan senyawa-senyawa kimia.
Nutrient Agar (NA) merupakan suatu media yang mengandung sumber nitrogen
dalam jumlah cukup yang dapat digunakan untuk budidaya bakteri dan untuk
penghitungan mikroorganisme dalam air, limbah, kotoran dan bahan lainnya.
Komposisi Nutrient Agar (NA) terdiri dari ekstrak daging sapi 3 gram, peptone 5
gram dan agar 15 gram. Formula ini tergolong relatif simpel untuk menyediakan
nutrisi-nutrisi yang dibutuhkan oleh sejumlah besar mikroorganisme (Dewi,
2013).
2.5.2 Media Mannitol Salt Agar (MSA)
Media Mannitol Salt Agar (MSA) merupakan media selektif dan media
diferensial. Penanaman dilakukan dengan cara satu usa biakan diambil dari media
pepton, dan diusapkan pada media MSA, kemudian diinkubasi pada 37oC selama
24 jam. Staphylococcus sp. pada media mannitol salt agar (MSA) menunjukkan
pertumbuhan koloni berwarna putih kekuningan dikelilingi zona kuning karena
kemampuan memfermentasi mannitol (Dewi, 2013).
Bakteri yang tidak mampu memfermentasi mannitol tampak zona
berwarna merah atau merah muda. Zona kuning menunjukkan adanya sel koloni
dan fermentasi mannitol. Bakteri yang tumbuh di media MSA akan menghasilkan
asam yang dapat menyebabkan perubahan phenol red pada agar yang berubah dari
merah menjadi berwarna kuning (Dewi, 2013).
2.5.3 Media Blood Agar Plate (BAP)
Media Blood Agar Plate (BAP) merupakan media padat dan media
diferensial. Media diferensial adalah media yang ditambah zat kimia tertentu
sehingga suatu mikroorganisme membentuk pertumbuhan untuk
mengklasifikasikan suatu kelompok jenis bakteri. Media Blood Agar Plate (BAP)
membedakan bakteri hemolitik dan nonhemolitik, yaitu berdasarkan kemampuan
mereka untuk melisiskan sel-sel darah merah (Brown et al., 2015).

8
 Komposisi Media Blood Agar Plate (BAP), yaitu mengandung trypton 15
gram, soy peptone 5 gram, sodium khloride 5 gram, lithium khloride 10 gram,
magnesium sulphate 3,8 gram, dan agar 15 gram. Ada tiga jenis hemolysis, yaitu
alfa hemolisis, beta hemolisis, dan gamma hemolisis. Alfa hemolisis mengacu
pada lisis parsial/lisis sebagian dari sel darah merah dan hemoglobin. Hal ini
menghasilkan perubahan warna disekitar menjadi abu-abu kehijauan. Beta
hemolisis merupakan lisis lengkap sel darah merah dan hemoglobin. Gamma
hemolysis, yaitu tidak terjadi hemolisis dimana tidak ada perubahan warna dalam
media (Brown et al., 2015).
2.5.4 Media Eosin Methylene Blue Agar (EMBA)
EMBA adalah media yang digunakan untuk mengetahui ada atau tidaknya
bakteri coliform di dalam suatu sample. Media Eosin Methylene Blue Agar ini
mempunyai keistimewaan mengandung laktosa dan berfungsi untuk membedakan
mikroba yangmemfermentasikan laktosa seperti S. aureus, P. aerugenosa , dan
Salmonella . Mikroba yang memfermentasi laktosa menghasilkan koloni dengan
inti berwarna gelap dengan kilap logam. Komposisi dari EMBA secara umum
terdiri dari sumber nutrisi atau zat makanan dan komposisi media pertumbuhan
yang meliputi Peptone 10 g/L, Lactose 10 g/L, Dipotassium hydrogen phosphate 2
g/L, Eosin 0.4 g/L, Methylene blue 0.065 g/L, Agar 15.0 g/L (Merta,2013).

2.6 Diagnosa Mastitis

Diagnosis mastitis klinis ditentukan berdasarkan gejala klinis seperti
pembengkakan ambing yang disertai dengan peningkatan suhu tubuh, ambing
terasa panas, frekuensi napas meningkat serta hewan tidak mau makan. Salah satu
indikator mastitis akut dapat menggunakan kadar haptoglobin dan serum amyloid
sedangkan mastitis subklinis dengan peningkatan jumlah sel somatis (Pyorala et
al., 2011).
Diagnosis mastitis subklinis dapat dilakukan dengan menggunakan reagen
IPB-1 atau CMT. Prinsip dari pengujian tersebut adalah penghitungan jumlah sel
somatis secara tidak langsung dengan indikator reaksi penggumpalan atau
membentuk gel akibat jumlah sel somatis yang tinggi. Jumlah sel somatik dapat
dihitung secara langsung dengan metode Breed atau menggunakan alat Fosomatik
atau Coulter Counter dengan melihat sel radang dalam susu (Moroni et al., 2005).

9
2.7 Pengobatan dan Pencegahan Mastitis
Mastitis klinis yang tidak segera ditangani akan memberikan prognosis
dubius sampai infausta. Pengobatan mastitis klinis dapat diberikan dengan
antibiotika long acting intra muscular. Antibiotika golongan Oksitetrasiklin,
Tetrasiklin, Gentamisin, Ampisilin dan Eritromisin masih sensitif untuk
pengobatan mastitis (Purnomo et al., 2006). Pengobatan mastitis akan lebih
optimal apabila dikombinasikan antara pemberian antibiotika secara intra
mammae dan antibiotika long acting intra muscular serta diberikan multivitamin
(Contreras et al, 2003). Pemberian preparat kortison sebagai anti radang pada
hewan yang sedang laktasi sebaiknya dihindari karena akan menyebabkan
produksi susu terhenti. Sedangkan pemberian multivitamin dengan kandungan
unsur selenium (Se) yang tinggi mampu mengurangi terjadinya mastitis sub klinis
pada kambing (Sanchez et al., 2007).
Pengobatan mastitis subklinis pada prinsipnya sama dengan mastitis klinis
dan selama pengobatan, susu tidak boleh dikonsumsi karena residu antibiotika
dalam susu dapat membahayakan konsumen. Prognosis mastitis subklinis
biasanya akan sembuh kecuali ada infeksi sekunder yang dapat menyebabkan
kematian. (Contreras et al, 2003). Pencegahan mastitis klinis di Indonesia
dilakukan dengan penanganan infeksi intramammary berdasarkan gejala klinis
yang tampak. Namun sampai saat ini, pengendalian mastitis subklinis masih
relatif kurang karena pada umumnya peternak belum begitu paham mengenal
mastitis subklinis karena tanpa ada gejala-gejala klinis. Beberapa upaya
pencegahan mastitis subklinis diantaranya adalah (1) monitoring jumlah sel
somatik untuk mengetahui kasus mastitis subklinis secara dini; (2) mencelup
putting (teat dipping) dengan menggunakan antiseptik setelah pemerahan
(Rahayu, 2007); (3) dipping peralatan pemerahan; (4) desinfeksi kandang
(Sudarwanto et al., 2006).

10
 BAB III MATERI DAN METODE

3.1 Waktu dan Tempat Pelaksanaan

Pemeriksaan dilakukan pada tanggal 7 Oktober – 11 Oktober 2019 di
Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Brawijaya.

3.2 Alat dan Bahan Penelitian

3.2.1 Alat Penelitian
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah, petridisk, bunsen, korek api,
ose, tabung reaksi steril, spuit 1 mL, sentrifus, mikroskop, autoclave dan coolbox
untuk menyimpan sampel susu selama perjalanan serta paddle untuk uji CMT.
3.2.2 Bahan Penelitian
Sampel susu mastitis diambil dari sapi Friesian Holstein di peternakan
“SMK Peternakan” Dau, Sengkaling. Bahan yang digunakan untuk isolasi bakteri
adalah media Nutrient Agar (NA), Blood Agar Plate (BAP), media Mannitol Salt
Agar (MSA), media Eosin Methylene Blue Agar (EMBA), Mueller Hinton Agar
(MHA), larutan H2O2, serta darah kambing, reagen CMT (cairan pencuci piring
dan IPB-1), antibiotik disk.

3.3 Prosedur Kerja

3.3.1 Pembuatan Media NA
Nutrient Agar (NA) adalah salah satu contoh media yang sering digunakan
untuk menumbuhkan dan mengembangbiakkan bakteri. Media NA dibuat dengan
mencampurakan 2 gram media dalam 100 ml akuades, kemudian dipanaskan di
penangas air sambil diaduk hingga larut sempurna. Media yang larut dituangkan
dalam cawan petri steril kemudian disterilkan dalam autoclave dengan suhu 121oC
selama 15 menit. Media ini dapat digunakan pada sebagian besar bakteri.

3.3.2 Pembuatan Media BAP

Media Blood Agar Plate (BAP) merupakan media diferensial bakteri.
Blood Agar Plate (BAP) membedakan bakteri hemolitik dan nonhemolitik
berdasarkan kemampuan mereka untuk melisiskan sel-sel darah merah. Metode
pembuatan media BAP yaitu dengan menimbang bubuk Blood Agar sesuai

11
dengan petunjuk pabrik dan ditambahkan dengan akuades kemudian dipanaskan
di penangas air sambil diaduk hingga larut sempurna. Disumbat mulut tabung
dengan kapas kemudian disterilkan ke dalam autoklaf pada suhu 121℃ selama 15
menit. Setelah keluar dari autoklaf dibiarkan dingin selama 45 menit atau hangat
kemudian ditambahkan darah kambing 5% lalu dituang pada cawan petri dan
dibiarkan media hingga menjadi dingin lalu disimpan di lemari es.

3.3.3 Pembuatan Media MSA

Media MSA termasuk media selektif yang digunakan untuk mengisolasi
bakteri Staphylococcus sp. Metode pembuatan media MSA yaitu dengan
menimbang bubuk Mannitol salt sesuai dengan petunjuk pabrik dan ditambahkan
dengan akuades kemudian dipanaskan di penangas air sambil diaduk hingga larut
sempurna. Disumbat mulut tabung dengan kapas kemudian disterilkan ke dalam
autoklaf padasuhu 121℃ selama 15 menit. Setelah keluar dari autoklaf dibiarkan
dituang pada cawan petri dan dibiarkan media hingga menjadi dingin lalu
disimpan di lemari es.

3.3.4 Pembuatan Media EMBA

EMB agar adalah media isolasi untuk membedakan
bakteri Enterobacteriaceae. Metode pembuatan media EMBA yaitu dengan
menimbang bubuk Eosin Methylene Blue sesuai dengan petunjuk pabrik dan
ditambahkan dengan akuades kemudian dipanaskan di penangas air sambil diaduk
hingga larut sempurna. Disumbat mulut tabung dengan kapas kemudian
disterilkan ke dalam autoklaf padasuhu 121℃ selama 15 menit. Setelah keluar
dari autoklaf dibiarkan dituang pada cawan petri dan dibiarkan media hingga
menjadi dingin lalu disimpan di lemari es.

3.3.5 Pembuatan Media MHA

Media MHA adalah media yang digunakan untuk uji sensitifitas antibiotik.
Metode pembuatan media MHA yaitu dengan menimbang bubuk MHA sesuai
dengan petunjuk pabrik dan ditambahkan dengan akuades kemudian dipanaskan
di penangas air sambil diaduk hingga larut sempurna. Disumbat mulut tabung

12
dengan kapas kemudian disterilkan ke dalam autoklaf padasuhu 121℃ selama 15
menit. Setelah keluar dari autoklaf dibiarkan dituang pada cawan petri dan
dibiarkan media hingga menjadi dingin lalu disimpan di lemari es.

3.3.6 Isolasi dan Identifikasi

Isolasi atau penanaman bakteri yang digunakan untuk sampel susu adalah
sebagai berikut.
1. Sampel susu diambil dengan ose steril.
2. Penanaman bakteri dilakukan pada media NA, MSA, BAP, EMBA.
3. Penanaman sampel pada media dilakukan dengan cara streak menggunakan
ose yang sebelumnya sudah dibakar diatas api Bunsen.
4. Memberi label pada setiap media yang telah di streak
5. Media diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam.
6. Identifikasi morfologi bakteri dengan pewarnaan Gram
- Tiap koloni terpisah yang tumbuh pada masing masing media diambil
dengan ose steril kemudian dilakukan pewarnaan Gram.
- Koloni diletakkan pada object glass yang sudah ditambahkan aquades dan
dihomogenkan.
- Object glass difiksasi diatas api hingga kering.
- Object glass kemudian ditetesi dengan Kristal violet dan didiamkan selama
2 menit.
- Kristal violet dibilas dengan air mengalir dan diteteskan lugol dan
didiamkan selama 1 menit.
- Lugol dibilas dengan air mengalir, lalu diteteskan aseton alkohol pada
object glass, bilas dengan air mengalir.
- Safranin diteteskan pada object glass dan didiamkan 1 menit, kemudian
dibilas dengan air mengalir.
- Hasil diamati dengan mikroskop, di catat bentuk, struktur dan warna dari
bakteri
7. Setelah indentifikasi dengan pewarnaan Gram dilakukan uji katalase dengan
mengambil koloni terpisah dari media MSA dan BAP

13
8. Meletakkan koloni yang terambil pada objek glass yang telah diteteskan
H2 O2
9. Mengaamati adanya Staphylococcus sp. ditandai dengan munculnya
gelembung gas, sedangkan Streptococcus sp tidak terbentuk gelembung gas.

3.3.7 Uji Sensitifitas Antibiotik

Uji sensitifitas antibiotic dilakukan dengan cara menginokulasi koloni bakteri
dari media EMBA ke media BHIB lalu diinkubasi selama 24 jam dengan suhu
37oC. Langkah selanjutnya diivortex sampai homogen. Pada tabung lain
ditambahkan 1 ml PBS dan ditambahkan suspensi bakteri yang telah homogen ke
dalam tabung yang telah berisi PBS. Lalu dibandingkan dengan Mc Farland 0,5 (
1 x 107 sel/ml ). Setelah kekeruhannya sama dengan Mc Farland 0,5 ( 1 x 107
sel/ml ) maka diswabkan dengan cotton swab ke media MHA. Pada media MHA
lalu ditempelkan disc antibiotic (Ciprofloxacin, Gentamicin, Cefadroxil, Penicilin,
Bacitracin) dan selanjutnya diinkubasi 24 jam dengan suhu 37oC. Diamati zona
hambat yang terbentuk.

14
 3.4 Kerangka Alur Pengujian

Anamnesa

Pemeriksaan Gejala Klinis

Pengambilan Sampel Susu

Isolasi dan Identifikasi Sampel Susu

Uji CMT

Media NA (Inkubasi
37oC 24 jam )

Media MSA (Inkubasi Media BAP (Inkubasi Media EMBA

37oC 24 jam ) 37oC 24 jam ) (Inkubasi 37oC 24 jam )

Uji Katalase Pewarnaan Gram

Uji Sensitifitas

Media BHIB (Inkubasi

37oC 24 jam )

Mc Farland 0,5 (1 x 107 sel/ml)

Media MHA (Inkubasi

37oC 24 jam )

Analisa Hasil

Gambar 3.1 Diagram alur pengujian sampel mastitis

15
 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Pengamatan

Sampel susu mastitis dalam pengujian ini diambil dari sapi perah Fresian
Holstein (FH) betina yang berusia 5 tahun yang berasal dari Peternakan SMK
Pertanian Pembangunan Wiyata Bakti Snakma Sengkaling.

Gambar 4.1 Kondisi ambing sapi mastitis (Dokumentasi Pribadi)

Sapi yang diambil sampel susu nya adalah sapi dengan ambing bengkak (Gambar
4.1). Sebelumnya pernah diterapi dengan antibiotic berupa Flumax,
Oxytetracycline, Penstrep. Temuan klinis pada susu yaitu berwarna kemerahan
dan agak bau.

4.2 Hasil Pemeriksaan CMT

Sampel susu yang telah didapatkan dilakukan uji CMT (California

Mastitis Test). Menurut Andriani (2010), Uji CMT akan memberikan informasi
sapi yang mengalami mastitis melalui penggumpalan pada susu yang diberikan
reagen. Dilakukan uji CMT dengan reagen CMT dan detergent. Pengujian CMT
dengan reagen CMT dilakukan dengan cara mereaksikan susu dengan reagen
CMT yang mengandung arylsulfonate di dalam paddel. Kemudian campuran
tersebut digoyang-goyang membentuk lingkaran horizontal. Reaksi ini ditandai
dengan ada tidaknya perubahan pada kekentalan susu. Pada sampel susu
menunjukkan hasil (++++) yang berarti perubahan berupa penggumpalan seperti
gel yang kental (Gambar 4.2a).

16
 a b

Gambar 4.2 Hasil Pemeriksaan CMT. (a) Menggunakan reagen CMT,

(b) Menggunakan reagen detergen (Dokumentasi pribadi).

Pemeriksaan juga dilakukan dengan menggunakan reagen deterjen dengan

perbandingan 1:1. Hasil positif menunjukkan adanya penggumpalan pada susu,
sedangkan hasil negatif tidak terdapat gumpalan. Pada sampel susu sapi kelompok
kami menujukkan hasil positif (++++) (Gambar 4.2b). Deterjen ini mengandung
Arylsulfonate yang dapat menyebabkan rusaknya membran sel dan inti sel,
melalui ikatan yang dibentuk melalui sisi hidrofobik deterjen dengan protein dan
lemak pada membran, membentuk senyawa “lipid protein-deterjen komplek”.
Senyawa tersebut dapat terbentuk karena protein dan lipid memiliki ujung
hidrofilik dan hidrofobik, demikian juga dengan deterjen, sehingga dapat
membentuk suatu ikatan kimia. Rusaknya membran sel menyebabkan keluarnya
DNA dari inti sel kemudian deterjen akan mendenaturasi histon yang mengikat
DNA menyebabkan viskositas susu meningkat sehingga susu akan menjadi lebih
kental (Xia, 2006)

4.3 Hasil Pemeriksaan Laboratorium

Sampel susu dilakukan pemeriksaan mikrobiologi dengan melakukan
isolasi dan identifikasi pada media NA (Nutrient Agar), BAP (Blood Agar Plate),
MSA (Mannitol Salt Agar), EMBA (Eosin Methylene Blue Agar) yang diinkubasi
pada suhu 37o C selama 24 jam untuk mendapatkan koloni terpisah.

4.3.1 Isolasi dan Indentifikasi Pada Media NA (Nutrient Agar)

Hasil penanaman pada media Nutrient Agar (NA) menunjukkan
pertumbuhan koloni bakteri bulat, dengan ukuran bervariasi, berwarna putih susu
dengan tepian yang smooth (Gambar 4.3a). Hasil pewarnaan gram koloni bakteri

17
menunjukkan adanya koloni bakteri coccus gram positif dan koloni basil gram
negatif (Gambar 4.3b). Media NA digunakan untuk pertumbuhan mayoritas dari
mikroorganisme yang tidak selektif dalam artian mikroorganisme heterotrof.
Media ini merupakan media sederhana yang dibuat dari ekstrak beef pepton dan
agar.

A B

Gambar 4.3 Hasil pengamatan isolasi pada media NA.

(A) Hasil isolasi menunjukkan adanya pertumbuhan koloni bakteri
berwarna putih susu (B) bakteri berbentuk coccus Gram positif dan basil
Gram negatif dengan pemeriksaan mikroskop perbesaran 1000x.
(Sumber: Dokumentasi pribadi)

4.3.2 Isolasi dan Indentifikasi Pada Media MSA (Mannitol Salt Agar)
Hasil penanaman pada media MSA (Mannitol Salt Agar) menunjukkan
pertumbuhan koloni bakteri dengan ukuran kecil, berwarna putih kekuningan serta
media mengalami perubahan warna menjadi kuning namun hanya sedikit (Gambar
4.4a). Hasil pewarnaan Gram koloni bakteri menunjukkan adanya koloni bakteri
coccus gram positif (Gambar 4.4b). Berdasarkan hasil yang sudah didapat pada
media MSA bakteri yang ditemukan adalah Staphylococcus.
Uji mannitol salt agar (MSA), merupakan uji yang dilakukan untuk
mengetahui kemampuan memfermentasi mannitol pada Staphylococcus sp. Media
MSA termasuk media selektif dan diferensial. Hasil positif ditunjukkan perubahan
warna pada medium dari warna merah menjadi kuning karena adanya fenol acid
dan hasil negatif tidak ada perubahan warna. Media ini mengandung garam
natrium klorida 7,5% sehingga media ini menjadi media selektif. Karena sebagian
besar bakteri idak dapat tumbuh pada konsentrasi garam 7,5% kecuali

18
Staphylococcus. Selain itu MSA mengandung manitol dan indikator pH phenol
red yang membuat media ini menjadi media diferensial (Toelle dan Viktor, 2014).

A B

Gambar 4.4 Hasil pengamatan isolasi pada media MSA.

(A) Hasil isolasi menunjukkan adanya pertumbuhan koloni bakteri
berwarna putih kekuningan dan media mengalami perubahan warna
kuning namun sedikit (B) Bakteri berbentuk coccus Gram positif dengan
pemeriksaan mikroskop perbesaran 1000x. (Sumber: Dokumentasi
pribadi)
Media manitol salt agar (MSA ) dapat digunakan sebagai media selektif
untuk membedakan S. aureus dari Staphylococcus lainnya dengan ditandai adanya
fermentasi manitol pada MSA yang akan terlihat sebgaai pertumbuhan koloni
berwarna kuning dikelilingi zona kuning keemasan. Koloni S. aureu pada media
MSA berbentuk bundar, halus, konveks dan berwarna kuning (Sari, 2003).
Uji katalase merupakan uji yang digunakan untuk membedakan spesies
Staphylococcus sp dan Streptococcus sp. Hasil uji katalase dari media MSA
didapatkan hasil positif ditandai dengan terbentuknya gelembung gas setelah
dihomogenkan (Gambar 4.5). Hal ini menunjukkan bakteri yang terdapat dalam
susu sapi perah mastitis adalah bakteri Staphylococcus aureus

Gambar 4.5 Hasil uji katalase positif. Hasil uji katalase dari koloni
yang tumbuh pada media MSA menunjukkan terbentuknya gelembung
gas (Sumber: Dokumentasi pribadi)

19
4.3.3 Isolasi dan Indentifikasi Pada Media BAP (Blood Agar Plate)
Hasil penanaman pada media BAP (Blood Agar Plate) menunjukkan
pertumbuhan koloni bakteri bulat, berwarna putih susu dengan tepian yang
smooth dan tidak ada hemolisa (Gambar 4.6a). Hasil pewarnaan gram koloni
bakteri menunjukkan adanya koloni bakteri coccus gram positif dan koloni basil,
gram negatif (Gambar 4.6b). Dari hasil tersebut dapat di nyatakan bahwa bakteri
yang kemungkinan tumbuh di media BAP adalah Staphylococcus aureus yaitu
bakteri gram positif dengan gamma hemolisa.
Media BAP merupakan media diperkaya atau media yang ditambah zat
tertentu yang merupakan nutrisi spesifik untuk jenis mikroba tertentu. Pada media
ini darah kambing 5% ditambahkan ke media tidak hanya berguna sebagai media
pertumbuhan namun memungkinkan diagnosis organisme berdasarkan pola
hemolitik. Prinsipnya yaitu beberapa spesies bakteri gram positif memproduksi
eksotoksin disebut hemolisin yang bisa merusak eritrosit dan haemoglobin
(Egwuatu dkk, 2014).
Jenis-jenis hemolisis ada tiga yaitu: Beta hemolisis atau hemolisis total,
adalah terjadi lisis pada seluruh sel darah merah. Tampak sebuah zona yang jelas,
transparansi dan mengelilingi koloni; Alpha hemolisis atau hemolisis sebagian
yang memproduksi warna hijau dalam media sekitar koloni; dan Gamma
hemolisis atau non hemolisis, menunjukkan tidak terjadinya hemolisis dan tidak
ada reaksi pada media di sekitar koloni (Egwuatu dkk, 2014).

Gambar 4.6 Hasil pengamatan isolasi pada media BAP.

(A) Hasil isolasi menunjukkan adanya pertumbuhan koloni bakteri
berwarna putih dan tidak mengalami hemolisa (B) Bakteri berbentuk
coccus Gram positifdengan pemeriksaan mikroskop perbesaran 1000x.
(Sumber: Dokumentasi pribadi)

20
 Hasil uji katalase dari media BAP didapatkan hasil positif ditandai dengan
terbentuknya gelembung gas setelah dihomogenkan (Gambar 4.7). Hal ini
menunjukkan bakteri yang terdapat dalam susu sapi perah mastitis adalah bakteri
Staphylococcus aureus

Gambar 4.7 Hasil uji katalase positif. Hasil uji katalase dari koloni
yang tumbuh pada media MSA menunjukkan terbentuknya gelembung
gas (Sumber: Dokumentasi pribadi)

4.3.4 Isolasi dan Indentifikasi Pada Media EMBA (Eosin Methylene Blue
Agar)
Hasil penanaman pada media EMBA (Eosin Methylene Blue Agar)
menunjukkan pertumbuhan koloni bakteri berwarna hijau metalik dengan tepian
yang smooth (Gambar 4.8a). Hasil pewarnaan gram koloni bakteri menunjukkan
adanya koloni bakteri basil, gram negatif (Gambar 4.8b). Berdasarkan hasil yang
sudah didapat pada media EMBA bakteri yang ditemukan adalah E. Coli.
Media EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar) adalah media selektif dan
media diferensial, media ini selektif untuk menumbuhkan bakteri gram negatif
dan pada umumnya digunakan untuk isolasi dan diferensiasi bakteri non fecal
coliform dan fecal coliform. Bakteri gram negatif yang memfermentasi laktosa
(umumnya bakteri usus) dapat menghasilkan asam, dalam kondisi asam akan
menghasilkan warna kompleks berwarna ungu gelap atau warna hijau metalik.
Warna hijau metalik ini merupakan indikator dari bakteri yang dapat memfermtasi
laktosa dengan kuat.

21
 Gambar 4.8 Hasil pengamatan isolasi pada media EMBA.
(A) Hasil isolasi menunjukkan adanya pertumbuhan koloni bakteri
berwarna hijau metalik (B) Bakteri berbentuk basil Gram negatif dengan
pemeriksaan mikroskop perbesaran 1000x. (Sumber: Dokumentasi
pribadi)

Berdasarkan pemeriksaan yang telah dilakukan dengan menggunakan

berbagi media mendapatkan hasil seperti ditunjukkan pada tabel 4.1.
Tabel 4.1 Hasil Pemeriksaan Laboratorium
Media Permbuhan Koloni Pewarnaan Gram
NA Koloni putih Coccus Gram (+) dan Basil Gram (-)
MSA Koloni kuning Coccus Gram (+)
BAP Gamma Hemolis Coccus Gram (+)
EMBA Hijau metalik Basil Gram (-)

Infeksi Staphylococcus aureus dan E. coli terjadi saat kondisi putting

dalam keadaan terbuka dan Staphylococcus aureus masuk melalui streak canal.
Staphylococcus aureus menempel pada dinding sel epitel kelenjar mamae,
membentuk koloni dan berkembang kemudian mengakibatkan infeksi.
2
Staphylococcus aureus sebanyak 10 CFU/ ml mampu menimbulkan terjadinya
mastitis pada ternak dan paling banyak dilaporkan sebagai penyebab mastitis
subklinis pada sapi (Suwito dan Indarjulianto, 2013).

22
4.4 Uji Sensitifitas Antibiotik
Hasil dari uji sensitifitas antibiotik menunjukkan bahwa bakteri penyebab
mastitis resisten terhadap antibiotik penicillin dan bacitracin karena tidak
membentuk zona hambat. Antibiotik Ciprofloxacin menunjukkan zona hambat
sebesar 25 mm. Pada antibiotik Gentamicin zona hambatnya sebesar 15 mm, dan
pada antibiotik Cefadroxil zona hambatnya sebesar 15 mm (Tabel 4.2).
Tabel 4.2 Hasil Uji Sensitifitas Antibiotik
Antibiotik Zona Hambat Keterangan
Ciprofloxacin (5µg) 25 mm Sensitif
Gentamicin (10µg) 15 mm Sensitif
Cefadroxil (30µg) 15 mm Sensitif
Penicillin (10 U) - Resisten
Bacitracin (10 U) - Resisten

Uji ini menggunakan pengukuran sensitifitas antibiotik dengan metode

paper disk yang berisi agen antimikroba pada media yang telah ditanami mikroba
dan akan berdifusi pada media agar (Gambar 4.9). Daerah jernih disekitar paper
diskmerupakan hambatan mikroba oleh antibiotik pada permukaan agar. Metode
Kirby-Bauer merupakan cara untuk menentukan sensitifitas antibiotik untuk
bakteri. Sensitifitas suatu bakteri terhadap antibiotik ditentukan oleh diameter
zona hambat terbentuk. Semakin besar diameternya maka semakin terhambat
pertumbuhannya (Todar, 2008).

Gambar 4.9 Hasil uji sensitifitas antibiotik mastitis (Dokumentasi Pribadi)

23
 Dari hasil uji didapatkan zona hambat sebesar 25 mm yang berarti
ciprofloxacin sensitif terhadap bakteri penyebab mastitis yaitu E.coli. Hasil uji ini
sesuai dengan Drug Information Portal (2008) yang menyatakan bahwa
Ciprofloxacin merupakan agen antimikroba yang dapat mengobati beberapa
infeksi yang disebabkan oleh E. coli, Klebsiella pneumoniae, S. saprophyticus,
Streptococcus pneumoniae, S. aureus dan Salmonella typhi. Todar (2008)
mengatakan bahwa Ciprofloxacin merupakan antibiotik kelas fluoroquinolones
dan diperoleh secara sintetis. Ciprofloxacin efektif melawan bakteri Gram negatif
dan Gram positif dengan cara menghambat proses replikasi Deoksiribosa Nucleat
Acid (DNA / Asam nukleat deoksiribosa).
Dari hasil uji didapatkan zona hambat sebesar 15 mm yang berarti
Gentamisin sensitif terhadap bakteri penyebab mastitis yaitu E.coli. Gentamisin
merupakan antibiotika golongan aminoglikosida. Mekanisme kerja gentamisin
adalah dengan mengikat secara ineversibel sub unit ribosom 30s dari kuman, yaitu
dengan menghambat sintesis protein dan menyebabkan kesalahan translokasi kode
genetik. Gentamisin bersifat bakterisidal. Gentamisin efektif terhadap berbagai
strain kuman Gram negatif termasuk Spesies Brucella, alymmatobaterium,
ompulobacter, Citrobacter, Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Proteus,
Providencia, Pseudomonas, Serratia, Vibrio dan Yersinia. Terhadap
mikroorganisme Gram positif, gentamisin juga efektif terutama terhadap
Staphylococcus aureus dan Listeria monocytogenes (Hardjasaputra, 2002).
Dari hasil uji didapatkan zona hambat sebesar 15 mm pada disk
Cefadroxil yang berarti Cefadroxil sensitif terhadap bakteri penyebab mastitis
yaitu E.coli. Cefadroxil adalah obat antibiotik dengan spektrum luas. Cefadroxil
bisa dimanfaatkan untuk mengatasi beberapa jenis bakteri. Cefadroxil obat yang
bekerja dengan menghambat pembentukan protein yang membentuk dinding sel
bakteri. Obat ini akan merusak ikatan yang menahan dinding sel bakteri untuk
membunuh bakteri-bakteri penyebab penyakit. Mekanisme kerja tersebut
menjadikan cefadroxil obat yang memiliki spektrum luas untuk membunuh
berbagai macam bakteri, baik bakteri gram positif maupun gram negative
(Hardjasaputra, 2002).

24
 Hasil uji senstifitas antibiotic ini menunjukkan bahwa bakteri penyebab
mastitis ini resisten terhadapa antibiotic Penicillin dan Bacitracin dimana tidak
menunjukkan zona hambat.Mekanisme resistensi bakteri terhadap antibiotik
diantaranya melalui mekanisme mikroorganisme menghasilkan enzim dan
merusak obat yang aktif, mikroorganisme merubah permeabilitasnya terhadap
obat, mikroorganisme mengubah struktur target untuk obat, mikroorganisme
mengembangkan jalur metabolisme baru menghindari jalur yang biasa dihambat
oleh obat, dan mikroorganisme mengembangkan enzim baru yang masih dapat
melakukan fungsi metaboliknya tapi sedikit dipengaruhi oleh obat (Jawetz, et al.,
2001).

25
 BAB V PENUTUP

4.5 Kesimpulan
Berdasarkan anamnesa dan hasil pemeriksaan yang dilakukan, dapat
disimpulkan bahwa sampel susu sapi perah yang diperoleh dari peternakan
“SMK Pertanian SNAKMA” Dau, Sengkaling menujukkan haisl positif
mengandung bakteri Staphylococcus aureus dan E. coli sebagai penyebab
mastitis pada sapi. Hal ini ditunjukkan dengan uji CMT yang menghasilkan
gumpalan seperti gel dan pada pemeriksaan mikrobiologi dengan isolasi bakteri
pada beberapa media pertumbuhan bakteri yang meliputi NA, MSA, BAP,
EMBA. Hal ini juga didukung oleh hasil positif pada uji katalase. Mastitis pada
sapi ini tergolong mastitis klinis karena menunjukkan gejala klinis. Untuk uji
sensitifitas antiobiotik, antibiotic yang resisten terhadapa bakteri penyebab
mastitis adalah Penicilin dan Bacitracin. Sedangkan Ciprofloxacin, Cefadroxil
dan Gentamicin sensitif terhadap bakteri penyebab mastitis yaitu E. coli dan
Staphylococcus.

4.6 Saran
Pengujian sebaiknya dilakukan dalam kondisi yang lebih aseptis sehingga
tidak terjadi kontaminasi bakteri lain pada media.

26
 DAFTAR PUSTAKA

Ahmad RZ,. 2011. Mastitis mikotik di Indonesia. Dalam: Prasetyo LH, Damayanti
R, Iskandar. Prosiding Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan
Veteriner. Bogor (Indonesia); Puslitbangnak.

Akers RM, Capuco AV, Keys. 2006. Mammary histology and alveolar cell
differentiation during late gestation and early lactation in mammary
tissue of beef and dairy heifers. Livest Sci. 105:44-49.

Amran, M.U. 2013. Produksi dan karakteristik fisik susu sapi perah dengan
pemanfaatan bahan baku local berupa umbi jalar sebagai pakan
alternatif. Skripsi. Jurusan produksi ternak. Fakultas peternakan.
Universitas Hasanuddin. Makasar.

Brown, Wilson DJ, Gonzales RN, Hertl JA, Schulte H, Bennet G, Schukken YH.
2015. Effect of Pathogen – Specific Clinical Mastitis on Milk Yield in
Dairy Cows. Journal Dairy Sci. 2015. 87(10):3358-74.

Contreras A, Luengo C, Sanchez A, Corrales JC. 2003. The role of intramamary

pathogens in dairy goats. Livest Prod Sci. 79:273-283.

Davidse, Elton. 2003. Prevention and treatment of mastitis in dairy cows with
bacteriocins produced by Enterococcus faecalis. Thesis Master of
Science, University of Stellenbosch.

Dewi, A.K. 2013. Isolasi, Identifikasi dan Uji Sensitivitas Staphylococcus aureus
terhadap Amoxicillin dari Sampel Susu Kambing Peranakan Ettawa (PE)
Penderita Mastitis di Wilayah Girimulyo, Kulonprogo, Yogyakarta.
Jurnal Sains Veteriner. 31(2):0126-0421.

Direktorat Jenderal Peternakan dan Kesehatan Hewan. 2011. Rencana Strategis

Direktorat Jenderal Peternakan dan Kesehatan Hewan Tahun 2010-
2014. Kementerian Pertanian. Republik Indonesia.

Furowicz, Danuta Czernomysy ; Karakulska Jolanta ; Silecka, Anna. 2008.

Etiologicalagents Of Mastitis In Dairy Cows On A Farm In The West
Pomeranian Region . Acta Sci. Pol Zootechnica : Sczin

27
Handayani KS dan Maya P. 2010. Kesehatan Ambing dan Higien Pemerahan di
Peternakan Sapi Perah Desa Pasir Buncir Kecamatan Caringin. Jurnal
Penyuluhan Peternakan. Vol. 5 (1).

Halasa, T., Huijps, K., O., Hogeveen, H., 2007. Economic effects of bovine 457
mastitis and mastitis management: A review. Veterinary Quarterly 29, 18-
31.

Hardjasaputra P, Budipornoto G, Sembiring, & Kamil I., 2002, Data Obat di

Indonesia Edisi 10, Grafidian Medipress, Jakarta

Jawetz E, Melnick JL, Adelberg EA. 2008. Medical Microbiology. 25th ed. Mc
Graw Hill, New York.

Karimuribo ED, Fitzpatrick JL, Swai ES, Bell C. 2008. Prevalence of subclinical
mastitis and associated risk factors in smallholder dairy cows in Tanzania.
Vet Rec. 163:16-21.

Kumar, R., B. R. Yaav, and R.S Singh. 2010. Genetic determinants of antibiotic
resistanc in Staphylococcus aureus isolates from milk of mastitic
crossbred cattle. Curr. Microbial. 60:379.

Lundberg, A. 2015. Mastitis in Dairy Cows: Genotypes, Spread, and Infection

Outcome of Three Important Udder Pathogens [Thesis]. Swedish
University of Agricultural Sciences, Uppsala.

Martindah E, Sani Y, Noor SM. 2009. Penyakit endemis pada sapu perah dan
penanggulangannya. Dalam: Santosa KA, Diwyanto K. penyunting.
Profil usaha peternakan sapi perah di Indonesia. Jakarta: LIPI Press

Menzies F.D., Bryson D.G., McCallion T., Matthews D.I., A study of mortality
among suckler and dairy cows in Northern Ireland in 1992, Vet. Rec. 137
(1995) 531–536.

Merta, dkk. 2013. Penuntun Praktikum Pembuatan Media dan Reagensia.

Denpasar : Kementerian Kesehatan republik Indonesia Politeknik
Kesehatan Denpasar Jurusan Analis Kesehatan

Moroni P, Pison G, Ruffo, Boetter PJ. 2005. Risk factors for intramammary
infections and relationship with somatic cell counts in Italian dairy goats.
Prev Vet Med. 69:163-173.

Nurhayati, I.S., Martindah, E. 2015. Pengendalian mastitis subklinis melalui

pemberian antibiotic saat periode kering pada sapi perah. WARTAZOA.
25. 65-74

28
Pantoja JCF, Hulland C, Ruegg PI. 2009. Dynamics of somatic cell counts and
intramammary infections across the dry period. Prev Vet Med. 90:43

Paryati SPY. 2002. Pathogenesis mastitis subklinis pada sapi perah yang
disebabkan oleh Staphylococcus aureus. Bogor: IPB

Purnomo A, Hartatik, Khusnan, Salasia SIO, Soegiyono. 2006. Isolasi dan

karakterisasi Staphylococcus aureus asal susu kambing Peranakan
Ettawa. Media Kedokteran Hewan 22:142-147.

Pyorala S, Hovinen M, Simojoki H, Fitzpatrick J, Eckersall PD, Orro T. 2011.

Acute phase proteins in milk in naturally acquired bovine mastitis caused
by different pathogens. Vet Record. 168:535-540.

Rahayu ID. 2007. The sensitivity of staphylococcus aureus as mastitis pathogen

bacteriae into teat dipping antiseptic in dairy cows. J Protein. 14:31-36

Samad MA. 2008. Animal husbandry and veterinary science. Vol. II.
Mymensingh (Bangladesh): Bangladesh Agricultural University.

Sari RW. 2003. Pengaruh pemberian gerusan saun sirih hitam, gerusan daun
sirih jawa dan oksitetrasiklin secara topical terhadap lama dan waktu
kesembuhan luka infeksi Staphylococcus aureus pada tikus putih. Skripsi.
Surabaya:Universitas Airlangga

Sanchez J, Montes P, Jimenez A, Andres S. 2007. Prevention of clinical mastitis

with barium selenate in dairy goats from a selenium deficient area. J
Dairy Sci. 90:23502354.

Sudarwanto, M., H. Latif dan M. Noordin. 2006. The Relationship of The Somatic
Cell Counting to Sub-Clinical Mastitis and to Improve Milk Quality. 1st
International AAVS Scientific Conference. Jakarta.

Suwito, W. dan S. Indarjulianto. 2013. Staphylococcus aureus Penyebab Mastitis

pada Kambing Peranakan Etawah: Epidemiologi, Sifat Klinis,
Patogenesis, Diagnosis dan Pengendalian. Wartazoa. 23(1): 1-7.

Todar K. 2005. Staphylococcus aureus. Madison (USA) : University of Wiscosin

Madison Departement of Bacteriology.

Utami, K.B., L.E. Radiati dan P. Surjowardojo. 2014. Kajian kualitas susu sapi
perah PFH (studi kasus pada anggota Koperasi Agro Niaga di Kecamatan
Jabung Kabupaten Malang). Jurnal- Jurnal Ilmu Peternakan. 24(2): 58-
66.

29
Xia, Steophen S. 2006. The rheology of gel formed during the California Mastitis
Test. The University of Waikato.

Zalizar, Lili., Sujono. Dian, I. Yovi, A.S. 2017. Kasus Mastitis Sub Klinis Pada
Sapi Perah Laktasi Di Kecamatan Pujon Kabupaten Malang. Jurnal
Ilmu-Ilmu Peternakan 28 (1): 35 – 41.

30