LAPORAN KEGIATAN PPDH

ROTASI DIAGNOSA LABORATORIK

MIKROBIOLOGI DAN IMUNOLOGI VETERINER

Oleh:
Khairul Ummam, S.KH
NIM. 190130100111050

PENDIDIKAN PROFESI DOKTER HEWAN

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2019

i
 LEMBAR PENGESAHAN

LAPORAN KEGIATAN PPDH

ROTASI DIAGNOSA LABORATORIK
MIKROBIOLOGI DAN IMUNOLOGI VETERINER
FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN
UNIVERSITAS BRAWIJAYA

Malang, 4-22 November 2019

Oleh:

Khairul Ummam, S.KH

NIM. 190130100111050

Menyetujui,

Komisi Penguji

Pembimbing I Pembimbing II

drh. Indah Amalia Amri, M.Si drh. Sruti Listra Adrenalin, M. Sc

NIP. 19870925 201903 2 011 NIP. 19920402 201903 2 029
Mengetahui,
Penguji I Penguji II Penguji III

drh. Dahliatul Qosimah, M.Kes drh. Fidi Nur Aini E.P.D., M.Si. drh. Gegana Wimaldy A.
NIP. 19820127 201504 2 001 NIP. 201405880327 2 001 NIP. 19950224 201903 1 008

Dekan Fakultas Kedokteran Hewan

Universitas Brawijaya

Dr. Ir. Sudarminto Setyo Yuwono, M.App.Sc

NIP. 19631216 198803 1 002

ii
 KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan semesta alam Allah SWT yang
telah memberikan rahmat dan hidayah-Nya serta junjungan Nabi besar Muhammad
SAW, sehingga penulis dapat menyelesaikan laporan kegiatan PPDH Rotasi
Mikrobiologi yang dilaksanakan di Fakultas Kedokteran Hewan Universitas
Brawijaya. Dalam menyelesaikan penulisan laporan ini, penulis mengucapkan
terima kasih kepada banyak pihak yang telah membantu.
Pada kesempatan ini, penulis mengucapkan terima kasih kepada:
1. Dr. Ir. Sudarminto Setyo Yuwono, M.App.Sc selaku Dekan Fakultas
Kedokteran Hewan Universitas Brawijaya Malang.
2. drh. Wawid Purwatiningsih, M.Si selaku koordinator PPDH FKH UB.
3. drh. Indah Amalia Amri selaku pembimbing PPDH Rotasi Mikrobiologi dan
Virologi di FKH UB yang telah banyak memberikan arahan dan masukan
kepada penulis.
4. drh. Sruti Listra Adrenalin, M.Sc selaku penguji ujian PPDH Rotasi
Mikrobiologi dan Virologi di FKH UB.
5. drh. Dahliatul Qosimah, drh. Fidi Nur Aini E.P.D, M.Si dan drh. Gegana
Wimaldy Airlangga selaku Dosen Laboratorium Mikrobiologi Fakultas
Kedokteran Hewan Universitas Brawijaya atas bimbingan, arahan, dorongan
semangat dan fasilitas yang diberikan kepada penulis.
6. Keluarga tercinta yang selalu memberi kasih sayang, dukungan dan doa
sehingga penulis dapat menyelesaikan laporan ini.
7. Teman kelompok 6 PPDH Gelombang IV atas semangat dan dukungannya.
8. Semua pihak yang telah membantu dalam menyelesaikan penulisan laporan ini
yang tidak dapat disebut satu persatu.
Akhir kata, penulis berharap semoga Tuhan Yang Maha Esa membalas
segala kebaikan yang telah diberikan kepada penulis dan laporan ini dapat
memberikan manfaat serta menambah pengetahuan tidak hanya bagi penulis tetapi
juga bagi pembaca. Amin.

Malang, 10 November 2019

Penulis

iii
 DAFTAR ISI
Bagian 1 : Bakteri
Halaman
HALAMAN JUDUL .............................................................................................. i
LEMBAR PENGESAHAN ................................................................................. ii
KATA PENGANTAR ......................................................................................... iii
DAFTAR ISI ......................................................................................................... iv
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... viii
DAFTAR TABEL ................................................................................................ ix
BAB I. PENDAHULUAN ......................................................................................1
1.1 Latar Belakang .......................................................................................1
1.2 Rumusan Masalah ..................................................................................2
1.3 Tujuan ...................................................................................................2
1.4 Manfaat .................................................................................................2
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA ...........................................................................4
2.1 Mastitis ...................................................................................................4
2.2 Etiologi Mastitis .....................................................................................5
2.3 Gejala Klinis Mastitis.............................................................................5
2.4 Diagnosa Mastitis ...................................................................................6
2.5. Pemeriksaan Mikrobiologi ....................................................................6
2.5.1 Media BHI-A ................................................................................7
2.5.2 Media MSA ...................................................................................7
2.5.3 Media BAP ....................................................................................7
2.5.4 Media MHA ..................................................................................8
2.6 Pengendalian, Pencegahan dan Pengobatan Mastitis .............................8
BAB III. MATERI DAN METODE ...................................................................10
3.1 Waktu dan Tempat Pelaksanaan Kegiatan ...........................................10
3.2 Alat dan Bahan .....................................................................................10
3.3 Prosedur Kerja ......................................................................................10
3.3.1 Pembuatan Media BHI-A............................................................10
3.3.2 Pembuatan Media BAP ............................................................... 10
3.3.3 Pembuatan Media MSA .............................................................. 11
3.3.4 Pembuatan Media MHA ............................................................. 11
3.3.5 Isolasi dan Identifikasi ................................................................ 11
3.3.6 Uji Sensitifitas Antibiotik ...........................................................12
3.4 Kerangka Alur Pengujian .....................................................................14
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................15
4.1 Hasil Pengamatan .................................................................................15
4.2 Hasil Pemeriksaan CMT .....................................................................16
4.3 Hasil Pemeriksaan Laboratorium ........................................................17
4.3.1 Hasil Isolasi Bakteri Pada Media BHI-A ...................................17

iv
 4.3.2 Hasil Isolasi Bakteri Pada Media MSA ......................................18
4.3.3 Hasil Isolasi Bakteri Pada Media BAP .......................................19
4.4 Uji Sensitifitas Antibiotik ....................................................................21
BAB V. PENUTUP ............................................................................................... 25
5.1 Kesimpulan ..........................................................................................25
5.2 Saran .....................................................................................................25
DAFTAR PUSTAKA ..........................................................................................26

Bagian 2 : Virus
Halaman
DAFTAR ISI .......................................................................................................... v
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... viii
DAFTAR TABEL ................................................................................................ ix
BAB I. PENDAHULUAN ....................................................................................30
1.1 Latar Belakang .....................................................................................30
1.2 Rumusan Masalah ................................................................................30
1.3 Tujuan .................................................................................................30
1.4 Manfaat ............................................................................................... 31
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA .........................................................................32
2.1 Telur Ayam Berembrio .......................................................................32
2.2 Penyakit Pada Ayam ............................................................................33
2.2.1 NewCastle Disease ......................................................................33
2.2.2 Avian Influenza (AI)....................................................................35
2.2.3 Infectious Bronchitis (IB)............................................................35
2.3 Inokulasi Virus dengan TAB ............................................................... 37
2.4 Virus .....................................................................................................37
2.5 Uji Hemaglutinasi (HA) dan Uji Hemaglutiasai Inhibition (HI).........38
BAB III. MATERI DAN METODE ...................................................................40
3.1 Waktu dan Tempat Pelaksanaan Kegiatan ...........................................40
3.2 Alat dan Bahan .....................................................................................40
3.3 Prosedur Kerja ......................................................................................40
3.3.1 Pembuatan suspense sampel untuk isolasi virus pada TAB .......40
3.3.2 Uji Hemaglutinasi (HA).............................................................. 41
3.3.3 Uji Hemaglutinasi Inhibition (HI) ..............................................42
3.4 Kerangka Alur Pengujian .....................................................................43
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................44
4.1 Hasi ......................................................................................................44
4.1.1 Sinyalmen ....................................................................................44
4.1.2 Anamnesa ....................................................................................44
4.1.3 Pemeriksaan organ saat nekropsi ................................................44
4.1.4 Diagnosa tentatif .........................................................................45

v
 4.1.5 Inokulasi virus pada TAB ...........................................................45
4.1.6 Uji Hemaglutinasi (HA).............................................................. 46
4.1.7 Uji Hemaglutinasi Inhibition (HI) ..............................................47
BAB V. PENUTUP ............................................................................................... 49
5.1 Kesimpulan ..........................................................................................49
5.2 Saran .....................................................................................................49
DAFTAR PUSTAKA ..........................................................................................50

vi
vii
 DAFTAR GAMBAR

Bagian 1 : Bakteri
Gambar Halaman
4.1 Kondisi Ambing Mastitis .............................................................................. 14

4.2 Hasil Pemeriksaan CMT dengan reagen ..........................................................15

4.3 Hasil Pemeriksaan CMT dengan Deterjen ......................................................16

4.4 Hasil pengamatan isolasi pada media BHI-A ..................................................... 16

4.5 Hasil pewarnaan gram pada media BHI-A .....................................................17

4.6 Hasil pengamatan isolasi pada media MSA ....................................................18

4.7 Hasil pewarnaan gram pada media MSA ........................................................19

4.8 Hasil Katalase...................................................................................................19

4.9 Hasil pengamatan isolasi pada media BAP ......................................................20

4.10 Hasil pewarnaan gram pada media BAP .......................................................20

4.11 Hasil Uji Sensitivitas Antibiotik ....................................................................22

Bagian 2 : Virus
Gambar Halaman
4.1 Ayam Broiler ...................................................................................................44

4.2 Sampel Organ yang di koleksi ........................................................................45

4.3 Gambaran makroskopis embrio yang sudah mati ........................................... 46

4.4 Hasil uji HA tidak terjadi aglutinasi ............................................................... 47

4.5 Hasil 4HA unit ................................................................................................ 47

4.6 Hasil Uji HI .....................................................................................................48

viii
 DAFTAR TABEL

Bagian 1 : Bakteri
Tabel Halaman
4.1 Hasil Pemeriksaan Laboratorium ................................................................... 20

4.2 Uji Sensitifitas Antibiotik ................................................................................22

Bagian 2 : Virus
Tabel Halaman
3.4 Kerangka Alur Pengujian .............................................................................. 43

ix
 BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Indonesia merupakan negara yang memiliki sumber daya alam berlimpah,
dengan kondisi geografis yang sangat mendukung untuk pertumbuhan hewan
ternak seperti sapi perah. Luas lahan pertanian yang dapat dimanfaatkan untuk
tanaman rumput seluas 18.820 juta Ha (Mulyani dan Las, 2008). Lahan seluas itu
dapat mencukupi kebutuhan pakan untuk sapi perah.
Produksi yang mencirikan sapi perah yaitu susu. Susu merupakan bahan pangan
yang sempurna dan mempunyai nilai gizi tinggi karena mempunyai kandungan
nutrisi yang lengkap antara lain lemak, protein, laktosa, vitamin, mineral, dan
enzim, pH mendekati netral dan kandungan airnya tinggi, oleh karena itu susu
sangat mudah mengalami kerusakan akibat pencemaran mikroba (Frank, 2001
dalam Handayani dan Maya. 2010). Kebutuhan susu sebagai sumber protein hewani
cenderung mengalami peningkatan dari tahun ke tahun, disebabkan kesadaran
masyarakat akan pentingnya penyediaan gizi yang baik semakin meningkat.
Penyediaan susu yang berkualitas memiliki arti yang penting di Indonesia
(Rombaut, 2005). Kualitas susu dari peternak sapi perah lokal secara umum juga
masih di bawah standar dimana hal tersebut berdampak pada rendahnya harga jual
ditingkat koperasi maupun industri pengolahan susu (Utami et al., 2014; Usmiati
dan Abubakar, 2009).
Salah satu faktor penghambat dalam peningkatan produksi susu dan merupakan
masalah umum dalam usaha peternakan sapi perah adalah penyakit. Penyakit yang
sering menyerang sapi perah saat memproduksi susu atau laktasi ialah radang
ambing (Hidayat dkk., 2002). Penyakit radang ambing atau yang dikenal dengan
mastitis merupakan kasus yang sering dijumpai pada sapi perah dan dapat
disebabkan oleh bermacam-macam penyebab (Blood dan Henderson, 2007).
Mastitis merupakan infeksi yang dapat bersifat akut maupun subakut. Munculnya
radang ini ditandai oleh kenaikan sel somatik di dalam air susu, perubahan fisik
maupun susunan air susu dan disertai atau tanpa disertai perubahan patologis pada
kelenjar ambing. Mastitis pada sapi perah merupakan salah satu penyakit yang
sangat merugikan karena banyak sapi yang diculling, menurunkan kualitas dan

1
produksi susu. Penurunan produksi susu bisa mencapai 15% hingga 30% per-sapi
per-laktasi, sehingga menjadi permasalahan besar dalam industri sapi perah
(Subronto, 2003).
Mastitis dapat dibedakan menjadi dua yaitu mastitis klinis dan subklinis.
Kejadian mastitis subklinis dapat mencapai 90% dan disertai penurunan produksi
susu hingga 30% (Taylor dan Field, 2004), sedangkan 2-3% merupakan kasus
mastitis klinis. Mastitis klinis dapat dilihat secara kasat mata, seperti susu yang
abnormal dengan adanya lendir dan penggumpalan susu, puting terasa panas,
bengkak dan sensitif saat dilakukan pemerahan. Mastitis subklinis merupakan 2
kasus yang paling banyak dan sering terjadi pada peternakan sapi perah dan paling
banyak menimbulkan kerugian karena tidak menunjukkan gejala apapun pada sapi.
Kejadian mastitis subklinis yang tidak segera ditangani akan berlanjut menjadi
mastitis klinis (Sudarwanto, 1999).
Staphylococcus aureus dan Streptococcus agalactiae merupakan 2 bakteri
utama penyebab mastitis pada sapi perah (Purnomo dkk., 2006). Beberapa hasil
penelitian diketahui bahwa S. aureus dan S.agalactiae yang mempunyai
hemaglutinin sehingga kemampuan adesi pada sel epitel ambing jauh lebih besar
dari pada yang tidak mempunyai hemaglutinin (Abrar, 2009). Mastitis yang
disebabkan oleh S.aureus dapat terjadi secara klinis namun seringkali terjadi secara
subklinis dan menahun (Bannerman dan Wall, 2005). Deteksi keberadaan
Staphylococcus aureus sebagai penyebab mastitis merupakan hal yang penting
karena menjadi faktor utama dalam penangan kasus mastitis (Purnomo dkk, 2006).

1.2 Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang di atas, dapat dirumuskan permasalahan sebagai
berikut:
1. Bagaimana cara mendiagnosis mastitis secara mikrobiologi?
2. Apa saja bakteri yang ditemukan uji penyebab mastitis?
3. Bagaimana sensitifitas antibiotic terhadap bekteri penyebab mastitis?

2
1.3 Tujuan
Berdasarkan rumusan masalah, tujuan dari pemeriksaan ini yaitu:
1. Untuk mengetahui cara mendiagnosis mastitis secara mikrobiologi.
2. Untuk mengetahui hasil diagnosis mastitis dengan uji CMT dan identifikasi
bakteri.
3. Untuk mengetahui sensitifitas antibiotik terhadap bekteri penyebab mastitis.

1.4 Manfaat
Manfaat dari pemeriksaan ini adalah Mahasiswa PPDH (Pendidikan Profesi
Dokter Hewan) dapat menambah kemampuan dan ketrampilan terkait pemeriksaan
mikrobiologi pada susu sapi perah dan mendapatkan pengetahuan tambahan
mengenai cara pembiakan bakteri dan identifikasi bateri di laboratorium.
Keseluruhan pengetahuan ini dibutuhkan untuk menunjang kemampuan
mendiagnosa penyakit sebagai calon dokter hewan.

3
 BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Mastitis
Mastitis adalah suatu peradangan pada internal ambing (Sudarwanto, 2009).
Istilah mastitis berasal dari kata ”mastos” yang artinya kelenjar ambing dan ”itis”
untuk inflamasi (Swartz, 2006). Penyakit ini dapat terjadi pada semua jenis
mamalia dan dapat disebabkan oleh berbagai jenis bakteri, fungi, alga atau
mikoplasma (Anri, 2008). Bakteri yang sering menyebabkan mastitis adalah
Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Staphylococcus aureus,
Staphylococcus spp., Klebsiella pneumoniae, dan Escericia coli.
Proses mastitis hampir selalu dimulai dengan masuknya mikroorganisme ke
dalam kelenjar susu melalui lubang puting (sfingter puting). Sfingter putting
berfungsi melindungi dari infeksi kuman. Ambing pada dasarnya sudah dilengkapi
perangkat pertahanan sehingga susu tetap steril. Perangkat pertahanan tersebut
antara lain perangkat pertahanan mekanis, seluler dan perangkat pertahanan yang
tidak tersifat (non spesifik) (Sudarwanto, 2009).
Terjadinya mastitis menyebabkan kenaikan sel somatik di dalam susu. Winata
(2011) menyatakan bahwa sel somatik merupakan kumpulan sel yang terdiri dari
sel epitel, sel neutrofil, eosinofil, limfosit, eritrosit, sel plasma dan kolostrum
korpuskel. Keberadaan sel somatik dalam susu dapat dijadikan indikator dalam
penilaian kuantitas dan kualitas susu.
Mastitis berdasarkan gejalanya dibedakan menjadi dua bentuk yaitu mastitis
klinis dan subklinis (Subronto, 2003). Mastitis klinis ditandai dengan gejala panas,
sakit, merah, pembengkakan dan penurunan fungsi pada ambing. Mastitis subklinis
terjadi tanpa disertai gejala klinis baik pada susu maupun ambingnya (Sudarwanto,
1999). Umumnya mastitis subklinis akan berlanjut menjadi mastitis kronis yang
kadang-kadang didahului oleh munculnya mastitis akut maupun subakut yang dapat
menimbulkan terbentuknya jaringan ikat pada ambing (Holtenius dkk., 2003).
Mastitis subklinis dianggap lebih berbahaya karena tidak menimbulkan gejala
dan dapat menimbulkan kerugian yang sangat tinggi. Mastitis subklinis
menyebabkan penurunan produksi susu mencapai 15%. Kerugian lain disebabkan
peningkatan biaya produksi untuk pengobatan, terkadang sapi yang terkena mastitis

4
subklinis juga harus dikeluarkan dari peternakan lebih awal karena biaya
pemeliharaan yang lebih tinggi dari produksinya (Rahayu, 2009).
2.2 Etiologi Mastitis
Penyebab mastitis sangat kompleks dan beragam, baik yang bersifat infeksi
maupun non infeksi. Mastitis yang bersifat infeksi disebabkan oleh bakteri yang
terdapat dalam lingkungan dimana bakteri tersebut dapat menginfeksi kelenjar
susu. Berbagai jenis bakteri telah diketahui sebagai agen penyebab mastitis
diantaranya E.coli, Enterobacter aerogenes, Pseudomonas aeroginosa, beberapa
bakteri strain Streptococcus dan Staphylococcus dan dalam keadaan tertentu
dijumpai pula Mycoplasma sp., Nocardia asteroids dan Candida sp. (Anonim,
2012).
Staphylococcus aureus dan Streptococcus agalactiae merupakan dua bakteri
utama penyebab mastitis subklinis pada sapi perah di Indonesia (Wahyuni dkk.,
2005). Bakteri ini dikenal sebagai bakteri komensal yang dapat diisolasi dari
sebagian besar permukaan tubuh (Abrar dan Mahdi, 2009). Hasil penelitian isolasi
dan identifikasi karakteristik S. aureus diperoleh 32 sampel susu sapi perah yang
berasal dari Kaliurang, Bantul, Boyolali, dan Baturaden Jawa Tengah secara klinis
sehat ternyata mengandung S. aureus penyebab utama mastitis pada sapi perah
(Salasia dkk., 2005). Menurut Dirjen Peternakan dan Keswan (2012) Dalam
keadaan tertentu dijumpai pula penyebab mastitis oleh Mycoplasma sp. dan juga
candida sp.
2.3 Gejala Klinis Mastitis
Gejala mastitis klinis yang akut dapat dilihat atau diraba oleh panca indera
meliputi ternak lesu, tidak mau makan, terdapat tanda-tanda adanya peradangan
pada ambing (bengkak, panas, kemerahan, nyeri bila diraba dan perubahan fungsi)
serta perubahan pada susu (susu memancar tidak normal, bening, kental,
menggumpal, warna berubah menjadi kuning, kecoklatan, kehijauan, kemerahan
atau ada bercak-bercak merah). Gejala mastitis klinis yang kronis terlihat ternak
tampak sehat, ambing teraba keras, mengeriput dan puting peot. Mastitis subklinis
merupakan peradangan pada ambing tanpa ditemukan gejala klinis pada ambing
dan air susu. Ternak terlihat sehat, nafsu makan biasa dan suhu tubuh normal. Tetapi
melalui pemeriksaan lebih lanjut akan didapatkan jumlah sel somatik meningkat,

5
ditemukan kuman-kuman penyebab penyakit, susu menjadi pecah, butiran-butiran
halus atau gumpalan (Hidayat, 2008)
2.4 Diagnosa Mastitis
Diagnosis mastitis klinis ditentukan berdasarkan gejala klinis seperti
pembengkakan ambing yang disertai dengan peningkatan suhu tubuh, ambing
terasa panas, frekuensi napas meningkat serta hewan tidak mau makan. Salah satu
indikator mastitis akut dapat menggunakan kadar haptoglobin dan serum amyloid
sedangkan mastitis subklinis dengan peningkatan jumlah sel somatis (Pyorala et al.,
2011).
Diagnosis mastitis subklinis dapat dilakukan dengan menggunakan reagen IPB-
1 atau CMT. Prinsip dari pengujian tersebut adalah penghitungan jumlah sel
somatis secara tidak langsung dengan indikator reaksi penggumpalan atau
membentuk gel akibat jumlah sel somatis yang tinggi. Jumlah sel somatik dapat
dihitung secara langsung dengan metode Breed atau menggunakan alat Fosomatik
atau Coulter Counter dengan melihat sel radang dalam susu (Moroni et al., 2005).
Sedangkan menurut Foley (1972) Mastitis klinis dapat didiagnosa dengan
melihat adanya peradangan pada ambing dan puting serta adanya perubahan warna
dari susu yang dihasilkan. Deteksi mastitis subklinis dilakukan melalui perhitungan
jumlah sel somatic dalam susu. Sel somatik dapat dihitung dengan menggunakan
metode Breed yaitu dengan menghitung secara langsung jumlah sel somatik. Secara
tidak langsung sel somatik dapat dihitung berdasarkan pada intensitas reaksi,
metode yang sering dipakai antara lain Aulendorfer Mastitis Probe (AMP),
California Mastitis Test (CMT), Milk Quality Test (MQT), Michinghan Mastitis
Test (MMT), Whitside Test (WTS).
2.5 Pemeriksaan Mikrobiologi
Pemeriksaan mikrobiologi yang dilakukan pada sampel susu mastitis
menggunakan media pembiakan bakteri. Pembiakan dipelukan untuk mempelajari
sifat bakteri untuk dapat mengidentifikasi, determinasi, atau diferensiasi jenis-jenis
yang ditemukan. Untuk menciptakan keadaan lingkungan yang tepat secara
artifisial sebagai pengganti keadaan di alam tidak mudah, sehingga seringkali sifat-
sifat bakteri dapat berubah jika telah lama hidup dalam medium artifisial. Bakteri-
bakteri tertentu membutuhkan faktor-faktor tumbuh tambahan yang disebut vitamin

6
bakteri, dalam jumlah sedikit sekali untuk sintesis metabolik esensial (Halasa,
2007).
2.5.1 Media Brain Heart Infusion Agar (BHI-A)
Sabouraud Brain Heart Infusion Agar digunakan dalam prosedur kualitatif untuk
penanaman dermatofita dan jamur patogen dan nonpatogenik lainnya dari spesimen
klinis dan nonklinis. Media diberikan selektif dengan penambahan agen
antimikroba.
Kandungan BHIA terdiri dari Peptone dan intisari jantung otak adalah sumber
asam amino, nitrogen, belerang, karbon, dan bahan pelacak. Dekstrosa adalah
sumber energi untuk metabolisme mikroorganisme. Sodium chlorid menyediakan
elektrolit esensial. Disodium fosfat menyangga media untuk mempertahankan pH.
Darah domba defibrinasi ditambahkan untuk memasok nutrisi yang menginduksi
pertumbuhan spesies dimorfik pada fase ragi (Becton, 2009).
2.5.2 Media Mannitol Salt Agar (MSA)
Media Mannitol Salt Agar (MSA) merupakan media selektif dan media
diferensial. Penanaman dilakukan dengan cara satu usa biakan diambil dari media
pepton, dan diusapkan pada media MSA, kemudian diinkubasi pada 37oC selama
24 jam. Staphylococcus sp. pada media mannitol salt agar (MSA) menunjukkan
pertumbuhan koloni berwarna putih kekuningan dikelilingi zona kuning karena
kemampuan memfermentasi mannitol (Dewi, 2013).
Bakteri yang tidak mampu memfermentasi mannitol tampak zona berwarna
merah atau merah muda. Zona kuning menunjukkan adanya sel koloni dan
fermentasi mannitol. Bakteri yang tumbuh di media MSA akan menghasilkan asam
yang dapat menyebabkan perubahan phenol red pada agar yang berubah dari merah
menjadi berwarna kuning (Dewi, 2013).
2.5.3 Media Blood Agar Plate (BAP)
Media Blood Agar Plate (BAP) merupakan media padat dan media diferensial.
Media diferensial adalah media yang ditambah zat kimia tertentu sehingga suatu
mikroorganisme membentuk pertumbuhan untuk mengklasifikasikan suatu
kelompok jenis bakteri. Media Blood Agar Plate (BAP) membedakan bakteri
hemolitik dan nonhemolitik, yaitu berdasarkan kemampuan mereka untuk
melisiskan sel-sel darah merah (Brown et al., 2015).

7
 Komposisi Media Blood Agar Plate (BAP), yaitu mengandung trypton 15 gram,
soy peptone 5 gram, sodium khloride 5 gram, lithium khloride 10 gram, magnesium
sulphate 3,8 gram, dan agar 15 gram. Ada tiga jenis hemolysis, yaitu alfa hemolisis,
beta hemolisis, dan gamma hemolisis. Alfa hemolisis mengacu pada lisis
parsial/lisis sebagian dari sel darah merah dan hemoglobin. Hal ini menghasilkan
perubahan warna disekitar menjadi abu-abu kehijauan. Beta hemolisis merupakan
lisis lengkap sel darah merah dan hemoglobin. Gamma hemolysis, yaitu tidak
terjadi hemolisis dimana tidak ada perubahan warna dalam media (Brown et al.,
2015).
2.5.4 Media Mueller Hinton Agar (MHA)
Media MHA merupakan standar uji sensitivitas antibiotic yang
direkomendasikan oleh CLSI (Clinical and Laboratory Standar Institute). Media
agar ini juga telah terbukti memberikan hasil yang baik. Media ini mengandung
sulfonamide, trimethoprim, dan inhibitor tetrasiklin yang rendah serta memberikan
pertumbuhan bakteri pathogen (Pincus, 2011)
Berdasarkan penelitian (Ayu et al, 2014) yang menggunakan media MHA untuk
uji sensitivitas menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan yang bermakna antara
sensitivitas bakteri Pseudomonas aeruginosa penyebab infeksi nosocomial
terhadap Kloramfenikol dan Ciprofloksasin dan paten.
2.6 Pengendalian, Pencegahan dan Pengobatan Mastitis
Pengendalian penyakit ini dapat dilakukan dengan mencegah terjadinya infeksi
terutama yang ditimbulkan oleh kesalahan manajemen dan higienitas pemerahan
yang tidak standar. Pemeriksaan secara rutin perlu dilakukan untuk mengetahui
kemungkinan adanya mastitis subklinis sebagai langkah awal aga tidak menjadi
lebih parah (Anonim, 2012).
Kebersihan kandang sapi dan manajemen peternakan yang baik merupakan
upaya pencegahan yang efektif untuk mencegah mastitis. Tingkat kemiringan
kandang juga merupakan hal yang perlu diperhatikan. Tingkat kemiringan 2%
menghindari genangan air terutama urin yang banyak membawa bibit penyakit.
Jarak antara sapi juga perlu diperhatikan, hal ini dikarenakan semakin pendek jarak
antara sapi maka penularan akan semakin besar. Pedet yang menyusui langsung dari
puting induk juga merupakan faktor penular mastits yang harus diperhatikan. Pedet

8
ini dapat menularkan penyakit mastitis dari induk yang terinfeksi ke induk yang
sehat, pedet yang mulutnya kotor juga dapat menyebabkan infeksi pada puting sapi
sehingga dapat menyebabkan mastitis (Subronto, 2003).
Proses pemerahan juga harus diperhatikan, baik peralatan maupun pemerah
sendiri. Setelah selesai pemerahan juga harus diingat bahwa sapi harus segera
didipping. Dipping merupakan proses pencucian puting sapi perah oleh larutan
tertentu yang dilakukan setelah pemerahan, hal ini penting dilakukan dalam rangka
untuk mengendalikan penyakit mastitis (Anonim, 2012). Kebiasan dipping dan
memberikan pakan setelah sapi selesai diperah juga dapat mengurangi insiden
terjadinya mastitis karena sapi tidak langsung berbaring sehingga lubang putingnya
yang sedang terbuka lebar setelah pemerahan tidak dimasuki oleh mikroorganisme
yang dapat menyebabkan mastitis (Subronto, 2003).
Terapi antibiotik untuk mastitis didasarkan pada penyebab dari penyakit
(Anonim, 2012), namun terapi seperti ini memakan waktu yang lama.
Glukokortikoid dan Oksitetrasiklin dapat membantu pada kasus mastitis yang
disebabkan oleh koliform. Isoflupredone juga telah dilaporkan dapat mengurangi
pembengkakan pada ambing namun obat ini tidak terdistribusi dengan baik pada
ambing tetapi pada beberapa kasus tidak ada pengobatan yang efisien sehingga
sebaiknya sapi dipotong (Anonim, 2012). Biasanya pengobatan mastitis dilakukan
dengan antibiotik secara intramammae, tetapi karena kontrol terhadap pemakaian
antibiotik ini sulit dilakukan dan juga tidak sesuai dengan keamanan konsumen
terhadap produk susu maka pemakaian antibiotik dihindarkan (Nurdin dan Mihrani,
2004). Sedangkan menurut Dirjen Peternakan dan Keswan (2012) Pengobatan
dapat dilakukan dengan pemberian antibiotik yang sesuai dengan bakteri yang
menginfeksi, dan disarankan dilakukan uji sensitivitas terhadap bakteri sebelum
melakukan pengobatan agar dilakukan pengobatan yang optimal.

9
 BAB III MATERI DAN METODE

3.1 Waktu dan Tempat Pelaksanaan

Pemeriksaan dilakukan pada tanggal 4 November – 22 November 2019 di
Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Brawijaya.

3.2 Alat dan Bahan Penelitian

3.2.1 Alat Penelitian
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah, petridisk, bunsen, korek api,
ose, tabung reaksi steril, spuit 1 mL, sentrifus, mikroskop, autoclave dan coolbox
untuk menyimpan sampel susu selama perjalanan serta paddle untuk uji CMT.
3.2.2 Bahan Penelitian
Sampel susu mastitis diambil dari sapi Friesian Holstein di peternakan di daerah
Pujon dan Karangploso. Bahan yang digunakan untuk isolasi bakteri adalah media
Blood Agar Plate (BAP), media Mannitol Salt Agar (MSA), media Brain Heart
Infusion Agar (BHI-A), Mueller Hinton Agar (MHA), larutan H2O2, serta darah
kambing, reagen CMT (cairan pencuci piring), antibiotik disk.

3.3 Prosedur Kerja

3.3.1 Pembuatan Media BHI-A
Brain Heart Infusion Agar (BHI-A) adalah salah satu contoh media yang sering
digunakan untuk menumbuhkan dan mengembangbiakkan bakteri. Media BHI-A
dibuat dengan mencampurakan 2 gram media dalam 100 ml akuades, kemudian
dipanaskan di penangas air sambil diaduk hingga larut sempurna. Media yang larut
dituangkan dalam cawan petri steril kemudian disterilkan dalam autoclave dengan
suhu 121oC selama 15 menit. Media ini dapat digunakan pada sebagian besar
bakteri.

3.3.2 Pembuatan Media BAP

Media Blood Agar Plate (BAP) merupakan media diferensial bakteri. Blood
Agar Plate (BAP) membedakan bakteri hemolitik dan nonhemolitik berdasarkan
kemampuan mereka untuk melisiskan sel-sel darah merah. Metode pembuatan
media BAP yaitu dengan menimbang bubuk Blood Agar sesuai dengan petunjuk

10
pabrik dan ditambahkan dengan akuades kemudian dipanaskan di penangas air
sambil diaduk hingga larut sempurna. Disumbat mulut tabung dengan kapas
kemudian disterilkan ke dalam autoklaf pada suhu 121℃ selama 15 menit. Setelah
keluar dari autoklaf dibiarkan dingin selama 45 menit atau hangat kemudian
ditambahkan darah kambing 5% lalu dituang pada cawan petri dan dibiarkan media
hingga menjadi dingin lalu disimpan di lemari es.
3.3.3 Pembuatan Media MSA
Media MSA termasuk media selektif yang digunakan untuk mengisolasi bakteri
Staphylococcus sp. Metode pembuatan media MSA yaitu dengan menimbang
bubuk Mannitol salt sesuai dengan petunjuk pabrik dan ditambahkan dengan
akuades kemudian dipanaskan di penangas air sambil diaduk hingga larut
sempurna. Disumbat mulut tabung dengan kapas kemudian disterilkan ke dalam
autoklaf padasuhu 121℃ selama 15 menit. Setelah keluar dari autoklaf dibiarkan
dituang pada cawan petri dan dibiarkan media hingga menjadi dingin lalu disimpan
di lemari es.
3.3.4 Pembuatan Media MHA
Media MHA adalah media yang digunakan untuk uji sensitifitas antibiotik.
Metode pembuatan media MHA yaitu dengan menimbang bubuk MHA sesuai
dengan petunjuk pabrik dan ditambahkan dengan akuades kemudian dipanaskan di
penangas air sambil diaduk hingga larut sempurna. Disumbat mulut tabung dengan
kapas kemudian disterilkan ke dalam autoklaf padasuhu 121℃ selama 15 menit.
Setelah keluar dari autoklaf dibiarkan dituang pada cawan petri dan dibiarkan media
hingga menjadi dingin lalu disimpan di lemari es.
3.3.5 Isolasi dan Identifikasi
Isolasi atau penanaman bakteri yang digunakan untuk sampel susu adalah
sebagai berikut.
1. Sampel susu diambil dengan ose steril.
2. Penanaman bakteri dilakukan pada media BHI-A, MSA, BAP, MHA.
3. Penanaman sampel pada media dilakukan dengan cara streak menggunakan
ose yang sebelumnya sudah dibakar diatas api Bunsen.
4. Memberi label pada setiap media yang telah di streak
5. Media diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam.

11
6. Identifikasi morfologi bakteri dengan pewarnaan Gram
- Tiap koloni terpisah yang tumbuh pada masing masing media diambil
dengan ose steril kemudian dilakukan pewarnaan Gram.
- Koloni diletakkan pada object glass yang sudah ditambahkan aquades dan
dihomogenkan.
- Object glass difiksasi diatas api hingga kering.
- Object glass kemudian ditetesi dengan Kristal violet dan didiamkan selama
2 menit.
- Kristal violet dibilas dengan air mengalir dan diteteskan lugol dan
didiamkan selama 1 menit.
- Lugol dibilas dengan air mengalir, lalu diteteskan aseton alkohol pada
object glass, bilas dengan air mengalir.
- Safranin diteteskan pada object glass dan didiamkan 1 menit, kemudian
dibilas dengan air mengalir.
- Hasil diamati dengan mikroskop, di catat bentuk, struktur dan warna dari
bakteri
7. Setelah indentifikasi dengan pewarnaan Gram dilakukan uji katalase dengan
mengambil koloni terpisah dari media MSA dan BAP
8. Meletakkan koloni yang terambil pada objek glass yang telah diteteskan H2O2
9. Mengaamati adanya Staphylococcus sp. ditandai dengan munculnya
gelembung gas, sedangkan Streptococcus sp tidak terbentuk gelembung gas.
3.3.6 Uji Sensitifitas Antibiotik
Uji sensitifitas antibiotic dilakukan dengan cara menginokulasi koloni bakteri
dari media BHI-A ke media BHIB lalu diinkubasi selama 24 jam dengan suhu 37oC.
Langkah selanjutnya diivortex sampai homogen. Pada tabung lain ditambahkan 1
ml PBS dan ditambahkan suspensi bakteri yang telah homogen ke dalam tabung
yang telah berisi PBS. Lalu dibandingkan dengan Mc Farland 0,5 ( 1 x 107 sel/ml ).
Setelah kekeruhannya sama dengan Mc Farland 0,5 ( 1 x 107 sel/ml ) maka
diswabkan dengan cotton swab ke media MHA. Pada media MHA lalu ditempelkan
disc antibiotik (Ciprofloxacin 5µg, Gentamicin 10µg, Cefadroxil 30µg, Penicilin
10µg, Bacitracin 10µg) dan selanjutnya diinkubasi 24 jam dengan suhu 37oC.
Diamati zona hambat yang terbentuk.

12
 3.4 Kerangka Alur Pengujian

Anamnesa

Pemeriksaan Gejala Klinis

Pengambilan Sampel Susu

Isolasi dan Identifikasi Sampel Susu

Uji CMT Media BHI-A (Inkubasi

37oC 24 jam)

Uji Katalase

Media MSA (Inkubasi Media BAP (Inkubasi Media MHA (Inkubasi

37oC 24 jam) 37oC 24 jam) 37oC 24 jam)

Pewarnaan Gram

Uji Sensitifitas

Media BHIB (Inkubasi

37oC 24 jam)

Mc Farland 0,5 (1 x 107 sel/ml)

Media MHA (Inkubasi

37oC 24 jam)

Analisa Hasil

Gambar 3.1 Diagram alur pengujian sampel mastitis

13
 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Pengamatan

Sampel susu mastitis dalam pengujian ini adalah sapi perah Fresian Holstein
(FH) betina yang berusia 4 tahun yang berasal dari peternakan di daerah Karang
ploso sebanyak 1 sampel dan sapi FH berusia 6 tahun dari peternakan di daerah
Pujon sebanyak 2 sampel. Sampel susu yang berasal dari pujon organoleptic susu
menunjukkan sampel susu berwarna lebih putih jika dibanding sampel susu dari
karangploso, konsistensinya normal, untuk baunya juga sediki berbau asam. Untuk
gejala klinis tidak begitu Nampak, ambing dan puting terlihat normal (Gambar 4.1)
namun, terjadi penurunan produksi susu dari 10 liter/hari menjadi ±4 liter/hari oleh
sebab itu di suspect mastitis suklinis. Keadaan sapi yang diambil dari Karang ploso,
dalam keadaan ambing yang agak bengkak dapat terlihat pada putting, sebelumnya
sudah pernah diberi terapi antibiotic Untuk organoleptik susu didapati warna susu
yang agak kekuningan, konsistensinya normal, baunya sedikit asam.

A B

Gambar 4.1. Ambing Sapi Pujon dan Karangploso. Sampel susu 1 (a), Sampel
susu 2 (b) didapatkan dari pujon. Sampel susu 3 (c) didapatkan dari Karangploso
4.2 Hasil Pemeriksaan CMT
Sampel susu yang telah didapatkan dilakukan uji CMT (California Mastitis
Test). Menurut Andriani (2010), Uji CMT akan memberikan informasi sapi yang

14
mengalami mastitis melalui penggumpalan pada susu yang diberikan reagen.
Dilakukan uji CMT dengan reagen CMT dan detergent. Pengujian CMT dengan
reagen CMT dilakukan dengan cara mereaksikan susu dengan reagen CMT yang
mengandung arylsulfonate di dalam paddel. Kemudian campuran tersebut
digoyang-goyang membentuk lingkaran horizontal. Reaksi ini ditandai dengan ada
tidaknya perubahan pada kekentalan susu. Sampel susu pujon dan karangploso
menunjukkan hasil (+++) yang berarti perubahan berupa penggumpalan seperti gel
yang kental (Gambar 4.3).

A B C

Gambar 4.2 Hasil Pemeriksaan CMT Menggunakan reagen CMT.

Terdapat gumpalan pada sampel susu 1 (a) sampel susu 2 (b) dan sampel susu
3 (c) (Dokumentasi pribadi).

Pemeriksaan juga dilakukan dengan menggunakan reagen deterjen dengan

perbandingan 1:1. Hasil positif menunjukkan adanya penggumpalan pada susu,
sedangkan hasil negatif tidak terdapat gumpalan. Pada sampel susu sapi kelompok
kami menujukkan hasil positif (+++). Deterjen ini mengandung Arylsulfonate yang
dapat menyebabkan rusaknya membran sel dan inti sel, melalui ikatan yang
dibentuk melalui sisi hidrofobik deterjen dengan protein dan lemak pada membran,
membentuk senyawa “lipid protein-deterjen komplek”. Senyawa tersebut dapat
terbentuk karena protein dan lipid memiliki ujung hidrofilik dan hidrofobik,
demikian juga dengan deterjen, sehingga dapat membentuk suatu ikatan kimia.
Rusaknya membran sel menyebabkan keluarnya DNA dari inti sel kemudian
deterjen akan mendenaturasi histon yang mengikat DNA menyebabkan viskositas
susu meningkat sehingga susu akan menjadi lebih kental (Xia, 2006)

15
 Gambar 4.3 Hasil pemeriksaan sampel dengan deterjen pada semua sampel
(Dokumentasi Pribadi, 2019)
4.3 Hasil Pemeriksaan Laboratorium
Sampel susu dilakukan pemeriksaan mikrobiologi dengan melakukan
isolasi dan identifikasi pada media BHI-A (Brain Heart Infusion Agar), BAP
(Blood Agar Plate), MSA (Mannitol Salt Agar), yang diinkubasi pada suhu 37o C
selama 24 jam untuk mendapatkan koloni terpisa
4.3.1 Isolasi dan Indentifikasi Pada Media BHI-A (Brain Heart Infusion Agar)
Hasil penanaman pada media Brain Heart Infusion Agar (BHI-A)
menunjukkan pertumbuhan koloni bakteri bulat, dengan ukuran bervariasi,
berwarna putih susu dengan tepian yang smooth (Gambar 4.4). Hasil pewarnaan
gram koloni bakteri menunjukkan adanya koloni bakteri coccus gram positif
(Gambar 4.5). Media BHI-A digunakan untuk pertumbuhan mayoritas dari
mikroorganisme yang tidak selektif dalam artian mikroorganisme heterotrof. Media
ini merupakan media sederhana

A B C
Gambar 4.4 Pertumbuhan bakteri di media BHI-A. Seluruh koloni
bakteri tampak bulat, dengan ukuran bervariasi, berwarna putih susu.
Sampel susu 1 (a), sampel susu 2 (b) dan sampel susu 3 (c) (Dokumentasi
Pribadi, 2019)

16
 A B C

Gambar 4.5 Hasil pewarnaan gram bakteri pada media BHI-A. Seluruh
koloni bakteri berbentuk coccus gram positif. Sampel susu 1 (a), sampel
susu 2 (b) dan sampel susu 3 (c) (Dokumentasi Pribadi, 2019)

4.3.2 Isolasi dan Indentifikasi Pada Media MSA (Mannitol Salt Agar)
Hasil penanaman pada media MSA (Mannitol Salt Agar) menunjukkan
pertumbuhan koloni bakteri dengan ukuran kecil, berwarna putih kekuningan serta
media mengalami perubahan warna menjadi kuning namun hanya sedikit (Gambar
4.6). Hasil pewarnaan Gram koloni bakteri menunjukkan adanya koloni bakteri
coccus gram positif (Gambar 4.7). Berdasarkan hasil yang sudah didapat pada
media MSA bakteri yang ditemukan adalah Staphylococcus.
Uji mannitol salt agar (MSA), merupakan uji yang dilakukan untuk
mengetahui kemampuan memfermentasi mannitol pada Staphylococcus sp. Media
MSA termasuk media selektif dan diferensial Hasil biakan dari media MSA yaitu
bahwa sampel susu 1, 2, dan 3 terlihat zona berwarna kekuningan pada koloni
bakteri, terjadi karena bakteri tersebut memfermentasikan manitol. Setelah
dilakukan pewarnaan gram sampel susu 1 dan 2 didapatkan hasil yaitu bakteri
berbentuk coccus dan gram positif. Sedangkan pada sampel susu 3 didapatkan hasil
yaitu terdapat bakteri berbentuk basil gram negative dan terdapat bakteri coccus
yang jumlahnya sedikit. Pada sampel susu 3 koloni bakteri mucoid. Selain itu MSA
mengandung manitol dan indikator pH phenol red yang membuat media ini menjadi
media diferensial (Toelle dan Viktor, 2014).

17
 A B C

Gambar 4.6 Pertumbuhan bakteri di media MSA. Seluruh koloni bakteri tampak
kekuningan. Sampel susu 1 (a), sampel susu 2 (b) dan sampel susu 3 (c)
(Dokumentasi pribadi, 2019)

A B C

Gambar 4.7 Pertumbuhan bakteri di media MSA. Seluruh koloni bakteri

berbentuk coccus gram positif. Sampel susu 1 (a), sampel susu 2 (b) dan sampel
susu 3 (c) (Dokumentasi pribadi, 2019)

Media manitol salt agar (MSA) dapat digunakan sebagai media selektif
untuk membedakan S. aureus dari Staphylococcus lainnya dengan ditandai adanya
fermentasi manitol pada MSA yang akan terlihat sebgaai pertumbuhan koloni
berwarna kuning dikelilingi zona kuning keemasan. Koloni S. aureu pada media
MSA berbentuk bundar, halus, konveks dan berwarna kuning (Sari, 2003).
Uji katalase merupakan uji yang digunakan untuk membedakan spesies
Staphylococcus sp dan Streptococcus sp. Hasil uji katalase dari media MSA
didapatkan hasil positif ditandai dengan terbentuknya gelembung gas setelah
dihomogenkan (Gambar 4.8). Hal ini menunjukkan bakteri yang terdapat dalam
susu sapi perah mastitis adalah bakteri Staphylococcus aureus.

18
 Gambar 4.8 Hasil uji katalase positif. Hasil uji katalase dari koloni
yang tumbuh pada media MSA menunjukkan terbentuknya gelembung
gas pada semua sampel (Dokumentasi pribadi, 2019)

4.3.3 Isolasi dan Indentifikasi Pada Media BAP (Blood Agar Plate)
Hasil penanaman pada media BAP (Blood Agar Plate) menunjukkan Pada
sampel susu 1, 2, dan 3 pada media BAP koloni bakteri berwarna kuning dan
menghemolisa media BAP (Gambar 4.9). Setelah dilakukan pewarnaan gram
didapatkan hasil bakteri berbentuk coccus dan gram positif. Sedangkan pada sampel
susu 3 koloni bakteri berwarna abu abu dan hemolisa. Setelah dilakukan pewarnaan
gram didaptkan bakteri basil gram negative dan coccus positif (Gambar 4.10). Dan
didapat kan hasil hemolisa pada susu mastitis 1, 2, dan 3 yaitu α hemolisa.
Media BAP merupakan media diperkaya atau media yang ditambah zat
tertentu yang merupakan nutrisi spesifik untuk jenis mikroba tertentu. Pada media
ini darah kambing 5% ditambahkan ke media tidak hanya berguna sebagai media
pertumbuhan namun memungkinkan diagnosis organisme berdasarkan pola
hemolitik. Prinsipnya yaitu beberapa spesies bakteri gram positif memproduksi
eksotoksin disebut hemolisin yang bisa merusak eritrosit dan haemoglobin
(Egwuatu dkk, 2014).
Jenis-jenis hemolisis ada tiga yaitu: Beta hemolisis atau hemolisis total,
adalah terjadi lisis pada seluruh sel darah merah. Tampak sebuah zona yang jelas,
transparansi dan mengelilingi koloni; Alpha hemolisis atau hemolisis sebagian yang
memproduksi warna hijau dalam media sekitar koloni; dan Gamma hemolisis atau
non hemolisis, menunjukkan tidak terjadinya hemolisis dan tidak ada reaksi pada
media di sekitar koloni (Egwuatu dkk, 2014).

19
 B

A C

Gambar 4.9 Pertumbuhan bakteri di media BAP. Seluruh koloni bakteri

tampak kekuningan, pada sampel 3 koloni berwarna abu abu. Sampel susu 1
(a), sampel susu 2 (b) dan sampel susu 3 (c) (Sumber: Dokumentasi pribadi)

A B C
Gambar 4.10 Hasil pewarnaan gram pada media BAP. Seluruh koloni
bakteri berbentuk coccus gram positif, pada sampel 3 berbentuk basil positif.
Sampel susu 1 (a), sampel susu 2 (b) dan sampel susu 3 (c) (Dokumentasi
pribadi, 2019)
Berdasarkan pemeriksaan yang telah dilakukan dengan menggunakan
berbagi media mendapatkan hasil seperti ditunjukkan pada tabel 4.1 :
Sampel
Media BHIA Media BAP Media MSA Uji Katalase
susu
Koloni
Koloni
Koloni Bentuk: Circular
Bentuk: Circular
Bentuk: Circular Ukuran: Small &
Ukuran: Small &
Ukuran: Small pinpoint
pinpoint
Transparansi: Opaque Transparansi: Opaque
Transparansi: Opaque +
Sampel 1 Warna : Kuning Warna : Kuning
Warna : Kuning &
Hemolisa: α (parsial) Memfermentasi (gelembung)
putih
Pewarnaan Gram manitol
Pewarnaan Gram
Bakteri coccus, Pewarnaan Gram
Bakteri coccus,
berwarna ungu, gram Bakteri coccus,
berwarna ungu, gram
positif berwarna ungu, gram
positif
positif
Koloni Koloni
Koloni
Bentuk: Circular Bentuk: Circular +
Sampel 2 Bentuk: Circular
Ukuran: Small & Ukuran: Small & (gelembung)
Ukuran: Small
pinpoint pinpoint
Transparansi: Opaque
Transparansi: Opaque Transparansi: Opaque

20
 Warna : Kuning Warna : Putih Warna : Kuning
Pewarnaan Gram kekuningan Memfermentasi
Bakteri coccus, Hemolisa: α (parsial) manitol
berwarna ungu, gram Pewarnaan Gram Pewarnaan Gram
positif Bakteri coccus, Bakteri coccus,
berwarna ungu, gram berwarna ungu, gram
positif positif
Koloni Koloni
Koloni
Bentuk: Circular Bentuk: Circular
Bentuk: Circular
Ukuran: Small & Ukuran:
Ukuran: Small
pinpoint Transparansi: Opaque
Transparansi: Opaque
Transparansi: Opaque Warna : Kuning +
Sampel 3 Warna : Abu-abu
Warna : Putih Memfermentasi
Hemolisa: α (parsial) (gelembung)
kekuningan manitol
Pewarnaan Gram
Pewarnaan Gram Pewarnaan Gram
Bakteri coccus & basil,
Bakteri coccus, Bakteri coccus & basil,
keduanya berwarna
berwarna ungu, gram keduanya berwarna
merah & gram negatif
positif merah & gram negatif

Hasil dari pemeriksaan susu mastitis dapat diidentifikasi infeksi oleh

Staphylococcus aureus. Infeksi Staphylococcus aureus terjadi saat kondisi putting
dalam keadaan terbuka dan Staphylococcus aureus masuk melalui streak canal.
Staphylococcus aureus menempel pada dinding sel epitel kelenjar mamae,
membentuk koloni dan berkembang kemudian mengakibatkan infeksi.
Staphylococcus aureus sebanyak 102 CFU/ ml mampu menimbulkan terjadinya
mastitis pada ternak dan paling banyak dilaporkan sebagai penyebab mastitis
subklinis pada sapi (Suwito dan Indarjulianto, 2013).
4.4 Uji Sensitifitas Antibiotik
Hasil dari uji sensitifitas antibiotik menunjukkan bahwa bakteri penyebab
mastitis resisten terhadap antibiotik penicillin dan bacitracin karena tidak
membentuk zona hambat. Antibiotik Ciprofloxacin menunjukkan zona hambat
sebesar 28 mm. Pada antibiotik Gentamicin zona hambatnya sebesar 20 mm, dan
pada antibiotik Bacitracin zona hambatnya sebesar 11 mm (Tabel 4.2).

21
Tabel 4.2 Hasil Uji Sensitifitas Antibiotik
Antibiotik Diameter Zona Keterangan
Hambat
Ciprofloxacin (5µg) 28 mm Sensitif
Gentamicin (10µg) 20 mm Sensitif
Cefadroxil (30µg) - Resisten
Penicillin (10 U) - Resisten
Bacitracin (10 U) 11 mm Resisten

Uji ini menggunakan pengukuran sensitifitas antibiotik dengan metode

paper disk yang berisi agen antimikroba pada media yang telah ditanami mikroba
dan akan berdifusi pada media agar (Gambar 4.12). Daerah jernih disekitar paper
disk merupakan hambatan mikroba oleh antibiotik pada permukaan agar. Metode
Kirby-Bauer merupakan cara untuk menentukan sensitifitas antibiotik untuk
bakteri. Sensitifitas suatu bakteri terhadap antibiotik ditentukan oleh diameter zona
hambat terbentuk. Semakin besar diameternya maka semakin terhambat
pertumbuhannya (Todar, 2008).

Zona Hambat

Gambar 4.12 Hasil uji sensitifitas antibiotik mastitis (Dokumentasi Pribadi)

Dari hasil uji didapatkan zona hambat sebesar 28 mm yang berarti
ciprofloxacin sensitif terhadap bakteri penyebab mastitis yaitu Staphylococcus
aureus. Hasil uji ini sesuai dengan Drug Information Portal (2008) yang
menyatakan bahwa Ciprofloxacin merupakan agen antimikroba yang dapat

22
mengobati beberapa infeksi yang disebabkan oleh E. coli, Klebsiella pneumoniae,
S. saprophyticus, Streptococcus pneumoniae, S. aureus dan Salmonella typhi.
Todar (2008) mengatakan bahwa Ciprofloxacin merupakan antibiotik kelas
fluoroquinolones dan diperoleh secara sintetis. Ciprofloxacin efektif melawan
bakteri Gram negatif dan Gram positif dengan cara menghambat proses replikasi
Deoksiribosa Nucleat Acid (DNA / Asam nukleat deoksiribosa).
Dari hasil uji didapatkan zona hambat sebesar 20 mm yang berarti
Gentamisin sensitive terhadap bakteri penyebab mastitis yaitu Staphylococcus
aureus Gentamisin merupakan antibiotika golongan aminoglikosida. Mekanisme
kerja gentamisin adalah dengan mengikat secara ineversibel sub unit ribosom 30s
dari kuman, yaitu dengan menghambat sintesis protein dan menyebabkan kesalahan
translokasi kode genetik. Gentamisin bersifat bakterisidal. Gentamisin efektif
terhadap berbagai strain kuman Gram negatif termasuk Spesies Brucella,
alymmatobaterium, ompulobacter, Citrobacter, Escherichia, Enterobacter,
Klebsiella, Proteus, Providencia, Pseudomonas, Serratia, Vibrio dan Yersinia.
Terhadap mikroorganisme Gram positif, gentamisin juga efektif terutama terhadap
Staphylococcus aureus dan Listeria monocytogenes (Hardjasaputra, 2002).
Dari hasil uji didapatkan zona hambat sebesar 11 mm pada disk Cefadroxil
yang berarti bacitrasin sensitif terhadap bakteri penyebab mastitis yaitu
Staphylococcus aureus bacitrasin adalah obat antibiotik dengan spektrum luas.
Cefadroxil bisa dimanfaatkan untuk mengatasi beberapa jenis bakteri. Cefadroxil
obat yang bekerja dengan menghambat pembentukan protein yang membentuk
dinding sel bakteri. Obat ini akan merusak ikatan yang menahan dinding sel bakteri
untuk membunuh bakteri-bakteri penyebab penyakit. Mekanisme kerja tersebut
menjadikan cefadroxil obat yang memiliki spektrum luas untuk membunuh
berbagai macam bakteri, baik bakteri gram positif maupun gram negative
(Hardjasaputra, 2002).
Hasil uji senstifitas antibiotic ini menunjukkan bahwa bakteri penyebab
mastitis ini resisten terhadapa antibiotic Penicillin dan Cafalosparin dimana tidak
menunjukkan zona hambat. Mekanisme resistensi bakteri terhadap antibiotik
diantaranya melalui mekanisme mikroorganisme menghasilkan enzim dan merusak
obat yang aktif, mikroorganisme merubah permeabilitasnya terhadap obat,

23
mikroorganisme mengubah struktur target untuk obat, mikroorganisme
mengembangkan jalur metabolisme baru menghindari jalur yang biasa dihambat
oleh obat, dan mikroorganisme mengembangkan enzim baru yang masih dapat
melakukan fungsi metaboliknya tapi sedikit dipengaruhi oleh obat (Jawetz, et al.,
2001).

24
 BAB V PENUTUP

5.1 Kesimpulan
Berdasarkan anamnesa dan hasil pemeriksaan yang dilakukan, dapat
disimpulkan bahwa sampel susu sapi perah yang diperoleh dari peternakan Pujon
dan Karangploso menujukkan haisl positif mengandung bakteri Staphylococcus
aureus sebagai penyebab mastitis pada sapi. Hal ini ditunjukkan dengan uji CMT
yang menghasilkan gumpalan seperti gel dan pada pemeriksaan mikrobiologi
dengan isolasi bakteri pada beberapa media pertumbuhan bakteri yang meliputi
BHI-A, MSA, BAP, MHA. Hal ini juga didukung oleh hasil positif pada uji
katalase. Mastitis pada sapi ini tergolong mastitis klinis karena menunjukkan
gejala klinis. Untuk uji sensitifitas antiobiotik, antibiotic yang resisten terhadapa
bakteri penyebab mastitis adalah Gentamicin, Ciprofloxacin dan Bacitracin.
Sedangkan Penicillin dan Cefadroxil sensitif terhadap bakteri penyebab mastitis
yaitu Staphylococcus.

5.2 Saran
Pengujian sebaiknya dilakukan dalam kondisi yang lebih aseptis sehingga
tidak terjadi kontaminasi bakteri lain pada media.

25
 DAFTAR PUSTAKA

Abrar, Mahdi. 2009. Peranan hemaglutinin Escherichia coli dalam proses adhesi.
Jurnal Kedokteran Hewan. 3(1):194-198.
Adriani. 2010. Penggunaan somatik cell count (SCC), jumlah bakteri dan
California mastitis test (CMT) untuk deteksi mastitis pada kambing. Jurnal
Ilmiah Ilmu-Ilmu Peternakan. 13(5): 229-234.
Anri, A. 2008. Manual on Mastitis Control. The Project for Improvement of
Countermeasures on the Productive Diseases on dairy Cattle in Indonesia.
Jica Indonesia Office, Jakarta.
Anonim. 2012. Manual Penyakit Hewan Mamalia. Subdit Pengamatan Penyakit
Hewan .Jakarta.
Bannerman, D. D. dan R. J. Wall. 2005. A Novel Strategy for the Prevention of
Staphylococcus aureus-Induced Mastitis in Dairy Cows. Information
Systems for Biotechnology News Report. Virginia Tech University. USA.
1 - 4.
Becton, Dickinson and Company. 2009. Manual of Microbiological Culture Media.
Second Edition.
Brown, Wilson DJ, Gonzales RN, Hertl JA, Schulte H, Bennet G, Schukken YH.
2015. Effect of Pathogen – Specific Clinical Mastitis on Milk Yield in
Dairy Cows. Journal Dairy Sci. 2015. 87(10):3358-74.
Dewi, A.K. 2013. Isolasi, Identifikasi dan Uji Sensitivitas Staphylococcus aureus
terhadap Amoxicillin dari Sampel Susu Kambing Peranakan Ettawa (PE)
Penderita Mastitis di Wilayah Girimulyo, Kulonprogo, Yogyakarta. Jurnal
Sains Veteriner. 31(2):0126-0421.
Direktorat Jenderal Peternakan dan Kesehatan Hewan. 2011. Rencana Strategis
Direktorat Jenderal Peternakan dan Kesehatan Hewan Tahun 2010-2014.
Kementerian Pertanian. Republik Indonesia.
Foley CR, Bath LD, Dickinson NF, Tucker AH. 1972. Dairy Cattle: Principles,
Practices, Problems, Profits. Philadelphia: Lea & Febiger.
Frank J.F. 2001. Milk and Dairy Products. Dalam Doyle M.P., Food Microbiology:
Fundamentals and Frontiers. Edisi k-2. Washington DC: sam Press.

26
Handayani KS dan Maya P. 2010. Kesehatan Ambing dan Higien Pemerahan di
Peternakan Sapi Perah Desa Pasir Buncir Kecamatan Caringin. Jurnal
Penyuluhan Peternakan. Vol. 5 (1).
Halasa, T., Huijps, K., O., Hogeveen, H., 2007. Economic effects of bovine 457
mastitis and mastitis management: A review. Veterinary Quarterly 29, 18-
31.
Hardjasaputra P, Budipornoto G, Sembiring, & Kamil I., 2002, Data Obat di
Indonesia Edisi 10, Grafidian Medipress, Jakarta
Hidayat. A, dkk. 2002. Buku Petunjuk Teknologi Sapi Perah Si Indonesia :
Kesehatan Pemerahan. Dairy Technologi Improvement Project. PT.
Sonysugema Presindo. Bandung.
Hidayat A, 2008. Buku Petunjuk Praktis untuk Peternak Sapi Perah tentang,
Manajemen Kesehatan Pemerahan. Dinas Peternakan Propinsi Jawa Barat.
Holtenius, K., S. Agenäs, C. Delavaud dan Y. Chilliard. 2003. Effects of feeding
intensity during the dry period: 2. Metabolic and hormonal responses. J.
Dairy Sci. 86:883-891.
Jawetz E, Melnick JL, Adelberg EA. 2008. Medical Microbiology. 25th ed. Mc
Graw Hill, New York.
Moroni P, Pison G, Ruffo, Boetter PJ. 2005. Risk factors for intramammary
infections and relationship with somatic cell counts in Italian dairy goats.
Prev Vet Med. 69:163-173.
Mulyani A, Las I. 2008. Potensi sumber daya lahan dan optimalisasi
pengembangan komoditas penghasil bioenergi di Indonesia. Jurnal Litbang
Per 27 (1). 31-41.
Nurdin E. dan Mihrani, 2006, Pengaruh pemberian bunga matahari dan bioplus
terhadap produksi susu dan efisiensi ransum sapi perah freis Holland
penderita mastitis, Jurnal Agrisistem 2 (2).
Purnomo A, Hartatik, Khusnan, Salasia SIO, Soegiyono. 2006. Isolasi dan
karakterisasi Staphylococcus aureus asal susu kambing Peranakan
Ettawa. Media Kedokteran Hewan 22:142-147.

27
Pyorala S, Hovinen M, Simojoki H, Fitzpatrick J, Eckersall PD, Orro T. 2011. Acute
phase proteins in milk in naturally acquired bovine mastitis caused by
different pathogens. Vet Record. 168:535-540.
Rahayu, I.D. 2009. Kerugian ekonomi mastitis subklinis pada sapi perah. Fakutas
Pertanian Jurusan Peternakan. Universitas Muhammadiyah Malang.
Salasia O.I.S., Wibowo H.M., Khusnan, 2005, Karakterisasi Fenotipe Isolat
Staphylococcus aureus Dari Sampel Susu Sapi Perah Mastitis Subklinis.
Bagian Patologi Klinik, Fakultas Kedokteran Hewan UGM, Jurnal Sain
Veteriner. Vol. 23 No. 2, Yogyakarta.
Sari RW. 2003. Pengaruh pemberian gerusan saun sirih hitam, gerusan daun sirih
jawa dan oksitetrasiklin secara topical terhadap lama dan waktu
kesembuhan luka infeksi Staphylococcus aureus pada tikus putih. Skripsi.
Surabaya:Universitas Airlangga
Subronto. 2003. Ilmu Penyakit Ternak I. Edisi Kedua. Gadjah Mada University
Press. Yogyakarta.
Sudarwanto M. 1999. Mastitis subklinis dan cara diagnosa.(Makalah) Institut
Pertanian Bogor, Bogor.
Sudarwanto, M. 2009. Mastitis dan kerugian ekonomi yang disebabkannya.
Makalah pada TOT JICA The 3rd. Oktober 2009, Cikole-Lembang,
Bandung Barat.
Suwito, W. dan S. Indarjulianto. 2013. Staphylococcus aureus Penyebab Mastitis
pada Kambing Peranakan Etawah: Epidemiologi, Sifat Klinis,
Patogenesis, Diagnosis dan Pengendalian. Wartazoa. 23(1): 1-7.
Swartz, H.A. 2006. Mastitis in The Ewe.
http://www.case.ageworld.com/cAw.LUmast.html. Diakses 10 November
2019.
Taylor ER, dan G.T. Field. 2004. Scientific Farm Animal Production an
Introduction to Animal Science. Ed ke-8. USA: Person Prentice Hall.
Usmiati, S. dan Abubakar. 2009. Teknologi Pengolahan Susu. Balai Besar
Penelitian dan Pengembangan Pascapanen Pertanian. Bogor

28
Utami, K.B., L.E. Radiati dan P. Surjowardojo. 2014. Kajian kualitas susu sapi
perah PFH (studi kasus pada anggota Koperasi Agro Niaga di Kecamatan
Jabung Kabupaten Malang). Jurnal- Jurnal Ilmu Peternakan. 24(2): 58-66.
Wahyuni A.E.T.H., Wibawan I.W.T., Wibowo M.H, 2005, Karakterisasi
hemaglutinin streptococcus agalactiae dan staphylococcus aureus
penyebab mastitis subklinis pada sapi perah. Jurnal Sain Veteteriner Vol.
23 No. 2, Bagian Mikrobiologi FKH-UGM, Yogyakarta.
Winata F. 2011. Hubungan antara penggunaan metode Breed dengan uji mastitis
IPB-1 untuk diagnosa mastitis subklinis. Bogor: Fakultas Kedokteran
Hewan, Institut Pertanian Bogor.
Xia, Steophen S. 2006. The rheology of gel formed during the California Mastitis
Test. The University of Waikato.

29
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Virus adalah mikroorganisme terkecil yang tidak memiliki sel dan hanya
mempunyai kode genetik saja. Virus hidup sebagai parasit obligat yang
menginfeksi sel inang. Diluar sel organisme, virus hidup sebagai layaknya benda
mati tanpa tanda-tanda kehidupan. Tetapi bergitu menginfeksi sel, virus akan
berubah menjadi makhluk hidup terkecil yang ganas, yang dapat membunuh sel
inang dan menyebabkan penyakit. Karena itu virus di sebut sebagai patogen. Yaitu
mikroorganisme penyebab penyakit (Carter, 2007).
Kata virus di ambil dari latin virulae yang artinya menular atau Virion yang
berarti racun. Kedua kata ini sama-sama merujuk pada sifat dasar virus yang mudah
menular dari satu sel ke sel yang lain serta bersifat racun karena dapat
menghancurkan sel yang di tularinya. Sebagai organisme aseluler, struktur virus
lebih sederhana dari mikroorganisme bersel satu lainnya. Karena Virus tidak
memiliki inti sel, sitoplasma, ataupun membran sel. Virus berupa partikel (molekul)
disebut virion. Tubuh virus yang berupa kristal atau partikel ini lebih menunjukkan
ciri mineral daripada ciri kehidupan. Oleh karena itu ada anggapan bahwa virus
bukan makhluk hidup (Wagner, 2008).
1.2 Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang tersebut, rumusan masalah pada laporan ini adalah:

1. Bagaimana cara mendiagnosa penyakit infeksi virus secara laboratorik?

2. Bagaimana cara interpretasi hasil uji HA-HI?

1.3 Tujuan

Berdasarkan latar belakang tersebut, tujuan dari pelaksanaan kegiatan ini adalah:

1. Mengetahui cara mendiagnosa penyakit infeksi virus secara laboratorik.

2. Mengetahui cara interpretasi hasil uji HA-HI.

30
1.4 Manfaat

Manfaat dari pemeriksaan ini adalah Mahasiswa PPDH (Pendidikan Profesi

Dokter Hewan) dapat menambah kemampuan dan ketrampilan terkait pemeriksaan
virologi dan mendapatkan pengetahuan tambahan mengenai cara penanaman virus
pada TAB dan uji HA-HI di laboratorium. Keseluruhan pengetahuan ini dibutuhkan
untuk menunjang kemampuan mendiagnosa penyakit sebagai calon dokter hewan.

31
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Telur Ayam Berembrio

Telur ayam berembrio telah lama merupakan system yang telah digunakan
secara luas untuk isolasi, perkembangan dan karaterisasi avian virus serta untuk
memproduksi vaksin virus. Embrio dan membrane pendukungnya menyediakan
keragaman tipe sel yang dibutuhkan untuk kultur berbagai tipe virus yang
berbeda. Keberhasilan dalam mengisolasi dan mengembangkan virus tergantung
pada beberapa kondisi yaitu : rute inokulasi, umur embrio, temperature inkubasi,
waktu inkubasi setelah inokulasi, volume dan pengenceran dari inoculum yang
digunakan, status imun dari kelompok dimana telur ayam berada.
Telur ayam berembrio memiliki kepekaan terhadap sifatnya sebagai media
perkembangan virus dengan metode yang paling sederhana dan dapat digunakan
untuk isolasi virus (Dharmayanti dkk, 2005). Isolasi menggunakan telur ayam
berembrio (TAB) dengan umur 9 sampai 11 hari dan dilakukan inokulasi pada
cairan allantois (Tarmudji dan Mulyadi, 2006). Penggunaan telur ayam berembrio
(TAB) sebaiknya menggunakan telur yang berasal dari kelompok yang bebas dari
specific pathogen free flock (SPFF). Telur SPFF merupakan telur yang berasal dari
induk yang sehat, tidak pernah di vaksin dan tidak pernah tertular penyakit
(Merchnat and Packer, 2004).
Virus dapat di biakkan dalam media kultur jaringan atau dalam telur berembrio
dengan kondisi lingkungan yang dikendalikan (Jawetz, 1996). Virus akan
melakukan replikasi menggunakan komponen makromolekular untuk mengambil
energi sel hospes sehingga fungsi sel hospes terganggu (Radji, 2010). Telur
berembrio seperti telur ayam berembrio (TAB) telah lama digunakan sebagai media
isolasi virus. Metode pengujian in ovo merupakan salah satu media penumbuh
berbagai macam virus yang memiliki keunggulan dibandingkan pengujian in vitro
dengan menggunakan kultur sel karena tidak membutuhkan media dan kondisi
laboratorium yang sulit (Murtini dkk., 2006).

32
2.2 Penyakit pada Ayam
2.2.1 NewCastle Disease
Newcastle Disease (ND) adalah penyakit yang sangat menular, dengan
angka kematian yang tinggi, disebabkan oleh virus genus Paramyxovirus dengan
family Paramyxiviridae. Nama lain ND adalah tetelo, Pseudovogopets, sampar
ayam, Rhaniket, Pneumoencephalitis dan Tontaor furrens. Newcastle Disease
dipandang sebagai salah satu penyakit penting di bidang perunggasan. Kejadian
wabah penyakit ND seringkali terjadi pada kelompok ayam yang tidak memiliki
kekebalan atau pada kelompok yang memiliki kekebalan rendah akibat terlambat
divaksinasi atau karena kegagalan program vaksinasi. Penyakit ND menyebabkan
gangguan yang sangat berat pada sistem pernafasan, syaraf dan pencernaan pada
ayam. Kerugian yang ditimbulkan oleh penyakit ND antara lain berupa kematian
ayam, penurunan produksi telur pada ayam petelur, gangguan pertumbuhan dan
penurunan berat badan pada ayam pedaging (Tabbu, 2000).
Penyakit ND disebabkan oleh Avian Paramyxovirus type-1 (APMV-1).
Virus penyebab penyakit tetelo termasuk dalam ordo Mononegavirales yang
mempunyai tiga famili virus, yaitu: Bornaviridae, Filoviridae, dan
Paramyxoviridae. Famili Paramyxoviridae memiliki dua subfamili yaitu
Paramyxovirinae dan Pneumovirinae. Genom virus tetelo merupakan Single-
stranded RNA (ssRNA) dan berpolarisasi negatif yang terdiri dari 15.186
nukleotida. Virus tetelo termasuk dalam genus Avulavirus memiliki viral envelope
dengan diameter 100-500 nm dan berbentuk pleomorfik (Fournier et al., 2012).
Berdasarkan atas virulensinya, virus ND (VND) dikelompokkan menjadi
tiga patotype yaitu: lentogenik adalah strain virus yang kurang virulen, mesogenik
merupakan strain virus dengan virulensi sedang, dan velogenik adalah strain virus
ganas. Strain velogenik dibedakan lagi menjadi bentuk neurotrofik dengan gejala
gangguan saraf dan kelainan pada sistem pernafasan, dan bentuk viserotrofik yang
ditandai dengan kelainan pada sistem pencernaan. Kerugian akibat penyakit ND
disebabkan karena angka kesakitan (morbiditas) maupun angka kematian
(mortalitas) pada ternak unggas yang sangat tinggi. Mortalitas maupun morbiditas
dapat mencapai 50-100% akibat infeksi VND strain velogenik terutama pada

33
kelompok ayam yang peka, 50% pada strain mesogenik, dan 30% pada infeksi virus
strain velogenik (Kencana et al., 2012).
Masa inkubasi dan gejala klinis penyakit ND pada ayam bervariasi,
tergantung pada strain virus dan status kebal ayam saat terinfeksi. Kondisi infeksi
virus strain lentogenik, penyakit bersifat subklinis, atau ditandai dengan gangguan
respirasi yang bersifat ringan seperti bersin dan keluar leleran dari hidung. Infeksi
virus strain mesogenik bersifat akut ditandai dengan gangguan respirasi dan
kelainan saraf. Gejala klinis pada ayam ditandai dengan penurunan nafsu makan,
jengger dan pial sianosis, pembengkakan di daerah kepala, bersin, batuk, ngorok,
dan diare putih kehijauan. Infeksi virus strain velogenik bersifat fatal, seringkali
diikuti dengan angka kematian yang tinggi. Gejala tersebut sangat bervariasi,
diawali dengan konjungtivitis, diare serta dikuti dengan gejala saraf seperti tremor,
tortikolis, atau kelumpuhan pada leher dan sayap (Kencana et al., 2012).
Berdasarkan gejala klinis yang ditimbulkan pada ayam, ND dapat
dikelompokkan menjadi 5 patotipe yaitu viscerotropic velogenic, neurotropic
velogenic, mesogenic, lentogenic dan asymptomatic enteric. Viscerotropic
velogenic merupakan suatu bentuk ND yang sangat patogen dimana lesi pendarahan
pada sistem pencernaan sering terlihat pada bentuk ini. Neurotropic velogenic
adalah bentuk ND yang menyebabkan mortalitas yang tinggi dan biasanya diikuti
dengan gangguan sistem respirasi dan syaraf. Newcatle disease bentuk mesogenic
menunjukkan gejala klinis gangguan sistem pernafasan tetapi gangguan sistem
syaraf tidak selalu terlihat dan mortalitas yang rendah, sedangkan asymptomatic
enteric merupakan suatu bentuk infeksi subklinik pada sistem pencernaan. Virus
ND strain avirulent (lentogenik dan mesogenik) digunakan sebagai vaksin hidup
untuk meningkatkan pengendalian penyakit ND pada ayam tetapi pemilihan jenis
vaksin tergantung pada kondisi penyakitnya. Vaksin inaktif juga digunakan dalam
pengendalian penyakit ND. Patogenitas yang ditimbulkan virus ND dapat
ditentukan oleh beberapa faktor diantaranya virulensi virus ND dan inang
(Herwajuli, 2011).
Penularan VND dapat terjadi secara langsung antar ayam dalam satu
kelompok ternak tertular. Sumber virus biasanya berasal dari ekskreta ayam
terinfeksi baik melalui pakan, air minum, lendir, feses, maupun udara yang tercemar

34
virus, peralatan, dan pekerja kandang. Patogenisitas VND dipengaruhi oleh galur
virus, rute infeksi, umur ayam, lingkungan, dan status kebal ayam saat terinfeksi
virus. Selama sakit, ayam mengeluarkan virus dalam jumlah besar melalui feses
(Tabbu, 2012).
2.2.2 Avian Influenza (AI)
Avian Influenza atau Flu Burung merupakan penyakit pada unggas yang
disebabkan oleh virus, yaitu Orthomyxoviridae tipe A, subtipe H5N1. Materi
genetik virus AI adalah singgle stranded ribonucleic acid (ss RNA) , berpolaritas
negatif, terpisah dalam delapan segmen dan mempunyai amplop. Pembagian
subtipe virus avia influenza A berdasarkan atas antigen permukaan yang disebut
hemaglutinin (HA) dan neuramidase (NA). Dua protein permukaan yakni HA dan
NA disamping ikut mementukan patogenitas dan kekebalan virus influenza, kedua
protein tersebut juga sangat mudah bermutasi (Damayanti, 2004).
Gejala penyakit flu burung sangat bervariasi dan tergantung pada spesies
unggas yang terinfeksi. Masa inkubasi virus ini terhadap unggas berkisar antara
beberapa jam sampai 3 hari kadang 7 hari tergantung ada dosis virus, rute kontak
dan spesies unggas yang diserang. Sedangkan pada manusia 1-3 hari , Masa infeksi
1 hari sebelum sampai 3-5 hari sesudah timbul gejala. Pada anak sampai 21 hari.
Avian influenza pada unggas dapat ditemukan dalam dua bentuk, yaiu bentuk
ringan dan bentuk akut (highly pathogenic avian influenza, HPAI) (He´naux, 2011).
Gejala itik/unggas terserang flu burung antara lain :
 leher terputar
 kejang – kejang
 sulit berdiri
 nafsu makan kurang
 mata keputihan.
 Untuk itik petelur, produksi telurnya tiba-tiba menurun (Kelemahan,
cangkang telur lembek).
 Pendarahan meluas atau bintik-bintik sering dijumpai pada mukosa trakea,
proventrikulus, usus, lapisan lemak, otot dada dan kaki
 Tingkat Kematian yang tinggi mendekati 100% dalam 2 hari hingga 1
minggu

35
 Penularan avian influenza dapat terjadi melalui kontak langsung antara
unggas sakit dengan unggas yang peka. Ayam yang terinfeksi mengeluarkan virus
dari saluran pernapasan, konjungtiva dan feses. Satu tetesan sekresi dari burung
yang terinfeksi mengandung virus yang dapat membunuh 1 juta burung. Penularan
dapat juga terjadi secara tidak langsung, misalnya melalui udara yang tercemar oleh
material/debu yang mengandung virus influenza (aerosol); makanan/minuman,
alat/perlengkapan peternakan, kandang, kurungan ayam, pakaian, kendaraan, peti
telur (egg trays), burung; mamalia dan insekta yang mengandung atau tercemar
virus influenza. Sehubungan dengan cara penularan tersebut, maka virus influenza
dapat disebarkan dengan mudah ke berbagai daerah oleh orang atau
alat/perlengkapan dan kendaraan yang dipakai untuk memasarkan produk ternak
unggas.
Sumber penularan virus influenza pada unggas adalah spesies unggas
peliharaan lain, burung peliharaan, burung liar, dan hewan lain. Para ahli
melaporkan adanya penularan virus tersebut dari itik ke ayam. Sumber infeksi avian
invluenza dapat berasal dari burung liar, terutama unggas air yang berpindah-
pindah. Penularan virus avian invluenza secara vertikal (melalui telur) masih
dipertanyakan, walaupun virus tersebut dapat diisolasi dari kerabang dan bagian
dalam telur unggas yang terinfeksi oleh virus avian influenza (Yamada, 2012).
2.2.3 Infectious Bronchitis (IB)
Infectious bronchitis (IB) merupakan salah satu penyakit yang disebabkan oleh
infectious bronchitis virus (IBV) yang menyerang ayam pada semua umur. Wabah
IBV telah menyebar di berbagai penjuru dunia, dan memiliki banyak serotipe.
Adanya penyakit IB dalam suatu peternakan dapat menimbulkan kerugian ekonomi
yang besar, akibat penurunan produksi telur, berkurangnya bobot ayam dan
produksi telur yang tidak optimal. Pada kasus IBV pada ayam petelur mortalitasnya
adalah rendah, namun IBV sangat menular (Ignjatovic and Sapats, 2000; OIE,
2013).
Dilaporkan bahwa, transmisi IBV sangat cepat terutama pada ayam dalam satu
kandang (Sjaak et al., 2010). Unggas yang terinfeksi dapat menularkan IBV sampai
muncul gejala klinis dalam waktu 48 jam. Infeksi IBV dapat menjadi persisten
dalam berbagai organ sampai ≥ 163 hari. Pada periode tersebut, IBV dapat

36
menyebar melalui eksresi nasal dan feses (Cavanagh and Naqi, 2003). Penyebaran
IBV dapat terjadi secara horizontal melalui udara, kontak antara ayam, atau secara
mekanik melewati pakan, air minum dan alat kandang yang terkontaminasi feses
dan ekresi nasal unggas terinfeksi. Infeksi dapat diketahui setelah 14 hari
pascainfeksi, yang ditandai dengan meningkatnya titer antibodi (Ignjatovic and
Sapats, 2000; OIE, 2013).
IBV di Indonesia terdiri dari 4 kelompok serotipe, yaitu kelompok serotipe yang
memiliki kedekatan dengan Massachussets (Mass), kelompok serotipe yang dekat
dengan Connecticut (Conn) dan dua serotipe yang memiliki hubungan dekat dengan
galur IBV dari Australia (Darminto et al., 1995) Sampel seka tonsil yang diduga
mengandung IBV isolat lapang di Yogyakarta pernah diidentifikasi dengan metode
RT-PCR. Hasil amplifikasi sampel menunjukkan produk pita cDNA 600 bp yang
mirip dengan virus varian 4-91 (700 bp), namun berbeda dengan IBV galur-galur
Masachussetts dengan panjang pita cDNA 1720 bp (Untari dkk., 2003).
2.3 Inokulasi Virus dengan TAB
Inokulasi pada ruang chorioalantois biasanya digunakan embrio ayam dengan
umur 10-12 hari. Virus yang diinokulasikan pada ruang chorioalantois ini antara
lain, virus Newcastle Disease, Avian Influenza, Infectious Bronchitis (Nayak,
2012). Beberapa penyakit ayam yang lain juga mampu menyebabkan kematian
embrio ayam. Telur ayam berembrio yang diinfeksi oleh virus Avian influenza
menyebabkan kematian embrio yang berlangsung 18-24 jam pasca inokulasi
(Wiyono et al., 2004). Menurut Cavanagh and Gelb (2008), embrio ayam dapat
bertahan sampai 90% terhadap infeksi virus IB sampai 19 hari pasca inokulasi. Pada
telur ayam berembrio yang diinokulasi oleh virus ILT, embrio ayam mengalami
kematian 2-12 hari pasca inokulasi (Garcia and Guy, 2008). Kematian juga dialami
oleh embrio ayam terhadap infeksi virus IBD yaitu 3-5 hari pasca inokulasi
(Eterradossi and Saif, 2008). Inokulasi virus pada ruang allantois menghasilkan
virus pada cairan allantois. Virus yang ada kemudian dapat dipanen dengan
mengambil cairan allantois (Mahy and Hillar, 1996).
2.4 Virus
Kata virus berasal dari bahasa latin yang memiliki arti racun dan substansi
berbisa. Virus adalah suatu partikel yang mengandung bahan genetik berupa DNA

37
dan RNA yang diselubungi oleh protein yang disebut kapsid dan pada beberapa
virus juga ada komponen lain, misalnya lemak. Satuan dasaar virus disebut virion.
Virus tidak dapat hidup di alam secara bebas, melainkan harus berada di dalam sel
makhluk hidup lainnya (Irianto, 2006).Virus dianggap berbeda dari agen infeksius
lainnya karena ukurannya yang sangat kecil, melakukan multiplikasi yang secara
absolut membutuhkan sel hospes hidup, sebagai parasit obligat intraseluler. Virus
memiliki genome yang terkomposisi dari DNA atau RNA dan terbungkus dalam
selubung protein yang disebut dengan capsid. Satu unit partikel virus yang terdiri
atas genome dan capsid, disebut dengan virion (Murwani, 2015). Terdapat empat
tipe genome yang terkandung dalam virion, yakni double-stranded DNA, single-
stranded DNA, double-stranded RNA, dan single-stranded RNA. Virus selalu
membutuhkan sel hospes hidup sebagai tempat bereplikasi dikarenakan dalam sel
hidup terdapat building-blocks seperti asam amino dan nukleotida, adanya ribosom
sebagai tempat sintesis protein dan adanya energi dari ATP, yang ketiga hal tersebut
mutlak dibutuhkan virus untuk dapat bereplikasi (Carter dan Saunders, 2007).
2.5 Uji Hemaglutinasi (HA) dan Uji Hemaglutination Inhibition (HI)
Identifikasi virus dapat dilakukan dengan berbagai uji, di antaranya uji
hemaglutinasi dan hemaglutinasi inhibisi. Hemaglutinasi adalah terbentuknya
agregat sel eritrosit oleh partikel hemaglutinin virus. Hal ini dapat terjadi karena
ikatan antara protein luar virus hemaglutinin dengan reseptor permukaan eritrosit
(Burleson et al., 1992). Prinsip metodenya adalah mencampurkan satu sampai dua
tetes virus dengan suspensi eritrosit. Hemaglutinasi biasanya akan tampak dalam
waktu satu menit pada uji cepat (Merchant and Packer, 2004).
Penentuan kuantifikasi antibodi dan identifikasi virus dapat dilakukan dengan
uji hemaglutinasi inhibisi (HI). Uji ini memiliki prinsip mengukur level antibodi
dengan cara dilusi yang dapat mencegah hemaglutinasi eritrosit oleh virus (Mahy
and Hillar, 1996). Komponen dasar uji HI adalah antigen HA, serum yang didilusi
dan konsentrasinya menurun, dan suspensi eritrosit. Hasil uji HI dipengaruhi oleh
banyak faktor, diantaranya konsentrasi antigen HA yang digunakan, konsentrasi
suspensi eritrosit, waktu antara mencampur serum, antigen, penambahan eritrosit,
serta suhu saat pencampuran (Purchase et al., 2008). Faktor lain yang dapat

38
berpengaruh adalah kontaminasi bahan kimia, enzim bakteri, dan toksin (Merchant
and Packer, 2004).

39
 BAB III

MATERI DAN METODE

3.1 Waktu dan Tempat Pelaksanaan Kegiatan

Pemeriksaan dilakukan pada tanggal 4 November – 22 November 2019 di
Laboratorium Mikrobiologi dan Imunologi Fakultas Kedokteran Hewan, dan
Laboratorium Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas
Brawijaya.
3.2 Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam pemeriksaan ini anatar lain: tabung reaksi, rak
tabung reaksi, mikropipet, mikroplate tipe V, yellow tip, spuit, cawan petri, paku
pelubang telur, selotip kertas, inkubator, candling set, gunting, scalpel, sentrifudge,
dan mortar. Bahan yang digunakan dalam pemeriksaan ini adalah: NaCl, PBS,
antibiotik penstrep, paraffin, eritrosit ayam 1%, telur ayam berembrio, organ yang
diindikasikan terkena infeksi virus (otak, trachea, limpa, hepar, sekum,
proventrikulus, duodenum, pulmo), antigen AI, antigen ND, serum positif
3.3 Prosedur Kerja
3.3.1 Isolasi Virus Pada TAB
A. Pembuatan suspensi sampel untuk isolasi virus pada TAB
1. Masing-masing sampel organ dibuat suspensi dengan konsentrasi 10% yaitu
1 gram organ dalam PBS 9 ml. Organ digerus menggunakan mortar.
2. PBS 9 ml dimasukkan pada gerusan organ.
3. Suspensi disentrifuse dengan kecepatan 2000 rpm selama 15 menit (Radji,
2015).
B. Inokulasi pada TAB
1. Telur ayam berembrio yang digunakan berumur 8-11 hari dengan syarat
specific pathogen free (SPF).
2. Candling TAB, embrio dalam keadaan hidup dengan ciri tampak pembuluh
darah yang jelas dan adanya pergerakkan pada embrio. (Radji,2015).
3. Suspensi organ yang didapat dicampur dengan antibiotic penstrep 1 %.
Suspensi diambil sebanyak 0,1-0,2 ml dengan menggunakan spuit.
4. Suspensi diinjeksikan kedalam TAB pada cairan chorioallantois.

40
 5. TAB diinkubasi selama 5 hari dengan suhu 37 o C.
6. TAB diamati dengan candler setiap hari. Jika TAB mati dapat dimasukkan
kedalam lemari es
7. Setelah 5 hari TAB dibuka dan dilanjutkan uji Hemaglutinasi (HA) (Radji,
2015).
C. Panen Cairan Allantois
1. TAB dibuka dengan digunting pada bagian rongga udara.
2. Dibuka selaput chorioalantois
3. Cairan allantois diambil menggunakan mikropipet
4. Cairan allantois dimasukkan kedalam mikrotube dan diberi tanda (Radji,
2015).
3.3.2 Uji Hemaglutinasi (HA Test)
Uji Hemaglutinasi digunakan untuk mendeteksi virus yang memiliki
hemaglutinin. Adanya hemaglutinin akan dapat mengaglutinasi eritrosit dari
beberapa spesiaes, seperti unggas, mamalia maupun manusia. Kemampuan
mengaglutinasi eritrosit ini disebabkan karena virus mempunyai hemaglutinin. Uji
HA dapat digunakan untuk mengetahui titer antigen (Radji, 2015).
Langkah Uji Hemglutinasi:
1. Mengisi lubang mikroplate 25µl dengan NaCl dari lubang 1 sampai 12 .
2. Menambahkan cairan allantois pada lubang pertama 25µl kemudian
dilakukan pengenceran dari lubang 1 sampai 10.
3. Sisa antigen atau cairan allantois sebanyak 25µl dibuang pada lubang ke-
10.
4. Lubang 11 diberikan antigen ND positif sebagai kontrol positif
5. Semua lubang mikroplate 1 sampai 12 diisi dengan eritrosit ayam 1%
sebanyak 25µl.
6. Dihomogenkan dengan cara digoyang dengan arah goyangan membentuk
angka 8.
7. Diinkubasi pada suhu kamar selama 30 menit
8. Amati lubang mikroplate apakah terjadi hemaglutinasi atau tidak.

41
3.3.3 Uji Hemaglutination Inhibition (HI Test)
Langkah Uji Hemglutination Inhibition
1. Mengisi lubang mikroplate 25µl dengan NaCl dari lubang 1 sampai 12 .
2. Menambahkan serum pada lubang pertama 25µl kemudian dilakukan
pengenceran dari lubang 1 sampai 10 serum ayam.
3. Sisa serum sebanyak 25µl dibuang pada lubang ke-10.
4. Lubang ke 11 diberi serum ND positif 25µl sebagai kontrol.
5. Lubang ke 12 tidak ditambahkan serum.
6. Menambahkan antigen ayam 4HA unit sebanyak 25µl pada lubang 1 sampai
12.
7. Diinkubasi pada suhu ruang selama 30 menit.
8. Semua lubang mikroplate 1 sampai 12 diisi dengan eritrosit ayam 1%
sebanyak 25µl.
9. Diinkubasi selama 30 menit pada suhu ruangan
10. Pembacaan titer HI (Radji, 2015).

42
 3.4 Kerangka Alur Pengujian

Ayam

Pengambilan
Anamnesa darah

Dibuat serum
Perubahan makroskopis

Diagnosa tentaif

Dinekropsi

Koleksi organ

Dibuat suspensi organ + penstrep

Inokulasi Koleksi cairan

Uji HA Uji HI
pada tab allantois

Uji HI

43
 BAB IV
Hasil dan Pembahasan

4.1 Hasil
4.1.1 Sinyalmen
Didapatkan ayam kampung dengan jenis kelamin jantan dengan umur 70 hari
dan berat badan 1,4 kg. Lokasi Pengambilan hewan dipasar Blimbing, Malang.
Dilakukan Nekropsi pada tanggal Senin, 4 November 2019

Gambar 4.1. Ayam Broiler (Dokumentasi Pribadi, 2019)

4.1.2 Anamnesa
Berdasarkan anamnesa didapat informasi bahwa ayam menunjukkan gejala
ayam tidak mau makan, diare cair kecoklatan, lemah lesu dan menyendiri. Pemilik
ayam menyatakan bahwa di peternakannya juga banyak ayam yang diare. Diare ini
sudah berlangsung selama 3 hari dengan ciri feses berwarna coklat muda dengan
kosistensi cair. Belum ada obat obatan atau vaksinasi pada ayam kampong tersebut.
Namun ayam langsung di jual oleh pemiliknya.
4.1.3 Pemeriksaan Organ Saat Nekropsi
Sebelum pemeriksaan organ di lakukan nekropsi. Nekropsi dilakukan dengan
euthanasia dengan cara emboli udara pada bagian foramen magnum. Setelah
dilakukan nekropsi didapatkan beberapa gambaran organ yang tampak secara
makroskopis:

44
 a b

c
Gambar 4.2 a. terlihat hemoragi pada organ duodenum b. terlihat hemoragi pada
organ caecum c. terlihat nodul hitam dan hemoragi pada organ pulmo
(Dokumentasi Pribadi, 2019)
4.1.4 Diagnosa Tentatif
Berdasarkan hasil anamnesa dan pengamatan dari gejala klinis yang ada, maka
diagnosa banding yang diperoleh yaitu Avian Influenza, Newcasttle Diseases
Collibactilosi dan Chronic Respiratory Disease (CRD).
4.1.5 Inokulasi Virus Pada TAB
Telur ayam berembrio di candling terlebih dahulu untuk mengetahui apakah
embrio masih hidup atau sudah mati, menentukan usia dan mengetahui posisi
kantung hawa, pembuluh darah dan lokasi embrio. Penanaman virus dilakukan pada
telur usia 9-10 hari karena pada waktu tersebut ruang allantois berkembang
sempurna sehingga virus dapat tumbuh optimal. Indikasi bahwa embrio tersebut
masih hidup adalah adanya gerakan embrio di dalam telur (embrio akan menjauhi
sinar), dan adanya pembuluh darah.
Kemudian bagian rongga hawa embrio diberi tanda pada cangkang telur untuk
dilubangi. Kemudian TAB diinjeksi dengan suspense organ trakea yang sudah

dicampurkan dengan antibiotic penstrep. Penyuntikan dilakukan dengan sudut 45o

agar tidak mengenai embrio. Injeksi dilakukan ke dalam cairan corioalantois untuk
membuat daerah aman sehingga lingkungan internal embrio tidak terganggu dan
agar virus mudah menyebar dan melekat pada sel yang mempunyai reseptor yang
cocok dengan virus. Lubang ditutup dengan menggunakan parafin untuk
mengembalikan kondisi dalam telur yang steril, agar terhindar dari kontaminasi
lingkungan luar. Setelah itu TAB diinkubasi pada suhu 37oC dan diamati sampai 3
hari. Setelah hari ke-4 TAB dibuka untuk mengambil cairan allantois untuk

45
melakukan uji HA, lalu TAB dituangkan pada cawan petri untuk melihat kelainan
pada embrio.

Gambar 4.3 Gambaran makroskopis embrio yang sudah mati yang telah di
injeksi serum duodenum (Dokumentasi Pribadi, 2019)
Gambar makroskopis embrio yang telah mati, tidak terlihat hemoragi atau
kelainan lain. Hal ini menunjukkan bahwa embrio tidak terinfeksi penyakit viral
terhadap antigen yang telah di inokulasikan. Menurut penelitian Wibowo et al.
(2006), virus Avian influenza juga dapat menyebabkan perubahan pada telur ayam
berembrio umur 9-11 hari, secara makroskopis embrio teramati kerdil, hemoragi di
seluruh bagian tubuh, dan kerontokan bulu embrio. Kekerdilan juga dapat terjadi
pada embrio ayam yang diinfeksi oleh virus IB dan ILT (Cavanagh and Gelb, 2008;
Garcia and Guy, 2008). Embrio ayam yang diinfeksi oleh virus IBD lesi
makroskopis yang teramati berupa edema pada bagian abdomen, kongesti dan
hemoragi pada kulit (Eterradossi and Saif, 2008).
4.1.6 Uji Hemaglutinasi (HA)
Cangkang TAB dibuka kemudian cairan allantois diambil menggunakan
mikropipet. Cairan allantois yang sudah dikoleksi dari TAB kemudian dijadikan
sampel untuk uji HA. Hasil uji HA menunjukkan negatif dengan ditandai tidak
adanya aglutinasi eritrosit yang terbentuk pada microplate ketika dimiringkan
seperti pada Gambar 4.4. Uji HA bertujuan untuk mengetahui suatu virus yang
mempunyai kemampuan mengaglutinasi eritrosit atau untuk mengetahui titer virus
dengan mengamati dasar sumuran paling akhir yang menunjukan adanya agregat,
tanda adanya hemaglutinasi positif. Hasil uji HA dikatakan negatif jika tidak terlihat
adanya aktivitas hemaglutinasi pada setiap lubang pengenceran (Ernawati, 2013).

46
Hasil negatif false dapat dikarenakan beberapa faktor, diantaranya sampel berasal
dari ayam yang sudah di vaksin ataupun dikarenakan kesalahan saat pelaksanaan
uji. Hal ini di dukung oleh hasil uji laboratorium kelompok pencernaan menemukan
bakteri E.coli dan serum ayam tersebut positif terhadap Mycroplasma galisepticum
melalui rapid test.

Gambar 4.4 Hasil uji HA tidak terjadi aglutinasi pada organ duodenum
(Dokumentasi Pribadi, 2019)

4.1.7 Uji Hemaglutinasi Inhibition (HI)

Setelah dilakukan uji HA didapati hasilnya negatif karena antigen yang
berasal dari suspensi organ duodenum dan yang lainnya tidak dapat berikatan
dengan eritrosit sehingga tidak mampu mengaglutinasi. Pengujian tetap
dilanjutkan pada uji HI terhadap serum dari ayam tersebut untuk memastikan
apakah ayam tersebut memiliki antibodi terhadap virus ND atau AI yang dapat
menghambat terjadinya aglutinasi pada eritrosit. Karena semua suspensi organ
tidak mengandung antigen ND/AI maka antigen yang dipakai antigen dari
Puskesma untuk Uji HI. Sebelum itu antigen harus diencerkan sesuai standar 4
HA unit. Uji HA dilakukan dengan sampel antigen positif ND dan AI untuk
mengetahui titer antigennya

Gambar 4.5 Hasil 4 HA unit (Dokumentasi Pribadi, 2019)

Dari hasil 4 HA unit didapatkan hasil titer antigen ND 27 dan AI sebanyak

28. Setelah di ketahui titernya dilakukan pengenceran dengan cara :

Titer antigen ND : 27 : 22 = 25

= 64

47
Titer antigen AI : 28 : 22 = 26

= 128

Jadi untuk memperoleh antigen ND 4HAU dilakukan pengenceran 1 bagian dari

antigen ND yang tersedia dibanding 7 bagian NaCl. Sedangkan pada antigen AI
4HAU dilakukan pengenceran 1 bagian dari antigen AI dibandingkan 127 bagian
NaCl.
Uji HI yang dilakukan menggunakan antiserum yang spesifik virus ND dan
AI, sehingga dapat dijadikan dasar penentuan diagnosa kausatif. Prinsip uji HI
adalah hambatan aglutinasi sel darah merah oleh virus akibat terikatnya virus
tersebut dengan antibody spesifik. Uji HI dapat digunakan untuk menentukan titer
antibodi dalam serum yang menjadi dasar untuk penentuan tingkat kekebalan dari
suatu hewan atau populasi serta dapat juga digunakan untuk menentukan jenis
antigen yang terdapat dalam suatu sampel berdasarkan ada atau tidaknya reaksi
terhadap antiserum spesifik yang digunakan. Oleh karena itu uji HI hanya bisa
digunakan untuk virus yang mengaglutinasi sel darah merah (syukron, 2013).
Menurut Kencana (2012) virus family Paramyxoviridae yang merupakan virus
penyebab penyakit ND mempunyai sifat yang dapat mengaglutinasi sel darah
merah unggas. Proses hemaglutinasi ini terjadi akibat aktivitas hemaglutinin yang
terdapat pada amplop virus tersebut. Aktivitas hemaglutinasi berlangsung maksimal
satu jam, karena dipengaruhi oleh kerja enzim neuraminidase yang merusak ikatan
pada reseptor eritrosit dengan hemaglutinin dari virus Paramyxoviridae.
Pengamatan nilai titer antibody dari serum sampel berdasarkan hasil pengenceran
terbesar yang masih sanggup menghambat aglutinasi eritrosit oleh antigen.
Hasil dari pemeriksaan uji HI (Gambar 4.6) menunjukkan bahwa tidak
adanya hambatan aglutinasi, sehingga dapat disimpulkan hasil yang diperoleh
adalah negative.

Gambar 4.6 Hasil Uji HI negatif pada serum ayam (Dokumentasi Pribadi, 2019)

48
 BAB V

PENUTUP

5.1 KESIMPULAN

Berdasarkan hasil suspensi organ duodenum ayam yang mengalami perubahan

patlogi hemoragi yang dinokulasi virus pada telur ayam berembrio (TAB)
kemudian dilanjutkan dengan uji HA dan uji HI, dapat disimpulkan bahwa :
1. Dari uji HA didapatkan hasil negatif yang diketahui didalam suspensi organ
tidak terdapat andigen ND yang dapat melakukan hemaglutinasi.
2. Dari uji HI didapatkan hasil negatif terhadap antigen ND mauoun AI, yang
berarti tidak terdapat antibody spesifik terhadap ND/AI
3. Pada hasil laboratorik yang sudah dilakukan melalui inokulasi TAB, uji HA,
dan uji HI menujukan bahwa ayam yang didapatkan di pasar Blimbing,
Malang menunjukan tidak adanya penyakit viral yang menginfeksi ayam
tersebut.

5.2 SARAN

TAB yang digunakan bisa datang tepat waktu dengan umur yang sesuai.
Meningkatkan ketelitian sehingga meminimalkan kemungkinan kesalahan pada
pengerjaan prosedur dari inokulasi TAB sampai uji HA dan HI.

49
 DAFTAR PUSTAKA

Burleson, F.G., Thomas, M.C. and Danny, L.W. 1992. Virology, a laboratory
manual. Academic Press, London, United Kingdom.
Carter, J. dan V. Saunder. 2007. Virology: Principles and Applications. West
Sussex: John Willey & Sons Ltd.
Cavanagh and Gelb. 2008. Infectious BronchitisIn: Disease of Poultry. Saif, Y.M.
Blackwell Publishing. Iowa.
Cavanagh, D. and Naqi, S. A. 2003. Infectious bronchitis, dalam Diseases of
Poultry 11th edition, diedit oleh Saif, Y. M. Iowa : Blackwell Publishing
Company: 101-113.
Damayanti et al. 2004. Gambaran klinis dan patologis pada ayam yang terserang
flu burung sangat patogenik (HPAI) di beberapa peternakan di Jawa Timur
dan Jawa Barat . JITV Vol. 9 No 2 Th. 2004.
Dharmayanti, I., Asmara, W., Artama, W.T., Indriani, R., Darminto. 2005.
Hubungan Kekerabatan Virus IB Isolat Lapang Indonesia. J Bioteknologi
Pertanian, 10,15- 23.
Darminto. 1995. Diagnosis, epidemiology and control two major avian viral
respiratory diseases in Indonesia: infectious bronchitis and newcastle
diseases. PhD Thesis. Departement of Biomedical and Tropical Veterinery
Science, James Cook University of North Queensland, Australia.
Eterradossi and Saif, Y.M. 2008. Infectious Bursal Disease In: Disease of Poultry.
Saif, Y.M. Blackwell Publishing. Iowa.
Fournier, P., Wilden, H., Schirmacher, V. 2011. Importance of Retinoic Acid-
Inducible Gene I And of Receptor for Type I Interferon for Cellular
Resistance to Infection By Newcastle Disease Virus. International Journal
of Oncology, 40: 287-298,
Garcia and Guy. 2008. Laringotracheitis In: Disease of Poultry. Saif, Y.M.
Blackwell Publishing. Iowa, USA.

50
He´naux and Samuel. 2011. Avian Influenza Shedding Patterns In Waterfowl:
Implications For Surveillance, Environmental Transmission, And Disease
Spread. Journal Of Wildlife Diseases Vol. 47, No. 3, July 2011.
Ignjatovic, J. and Sapats, S. 2000. Avian infectious bronchitis virus. Rev. sci. tech.
off. Int. Epiz. 19: 493-508. www.ncbi.nlm.nih.gov. Diakses tanggal 20
November 2019.
Irianto, K., 2006. Mikrobiologi Menguak Dunia Mikroorganisme, jilid 1. Yrama
Widya. Bandung.
Kencana, G. A. Y., Kardena, I. M., Mahardika, I. G. N. K. 2012. Peneguhan
Diagnosis Penyakit Newcastle Disease Lapang Pada Ayam Buras di Bali
Menggunakan Teknik Rt-Pcr. Jurnal Kedokteran Hewan Udayana. 6 (1),
pp: 28-31.
Mahy, B.W.J. and Hillar, O.K. 1996. Virology methods manual. Academic Press,
London, United Kingdom.
Merchant and Packer. 2004. Veterinary Bacteriology and Virology. USA: Iowa
State University Press.
Murtini, S., Murwani, R., Satrija, F., Malole. 2006. Penetapan Rute Dan Dosis
Inokulasi Pada Telur Ayam Berembrio Sebagai Media Uji Khasiat Ekstrak
Benalu Teh (Scurrula Oortiana). Semarang: Departemen Ilmu Penyakit
Hewan Dan Kesehatan, Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian
Bogor.
Murwani, S., D. Qosimah, A. Noviatri. 2012. Penuntun Praktikum Imunnologi.
Program Kedokteran Hewan. Universitas Brawijaya.
Office International Des Epizooties (OIE). 2013. Avian infectious bronchitis. www.
OIE.int. Diakses 20 November 2019.
Purchase, H.G., Lawrence, H.A, Charles, H.D. and James, E.P. 2008. A laboratory
manual for the isolation and identification of avian pathogens. Third
edition. Kendall/Hunt Publishing Company. Iowa, USA.
Radji, M. 2010. Imunologi Dan Virologi. Jakarta: PT Isfi Penerbitan.
Radji, Dr. Maksum. 2015. Edisi Revisi: Imunologi dan Virologi Cetakan Ke dua.
Isfi Penerbitan. Jakarta Barat.

51
Sjaak, De Wit., Cook, J. K. A. and van der Heijden, H. M. J. F. 2010. Infectious
bronchitis virus in Asia, Africa, Australia and Latin America – History,
current situation and control measures. Workshop: Infectious Bronchitis
(IB) in the Brazilian Poultry Industry. 12: 97-106.
Tabbu, C. R. 2000. Penyakit Ayam dan Penanggulangannya. Penyakit Bakterial,
Mikal, dan Viral. Volume 1. Kanisius. Yogyakarta.
Tarmudji dan Mulyadi. 2006. Kegagalan Vaksinasi IB Pada Ayam. Tabloid Sinar
Tani. Balivet Bogor.
Untari, Sardjono dan Darjono. 2003. Identifikasi virus infectious bronchitis yang
diisolasi dari Jogjakarta dengan reverse transkriptase polymerase chain
reaction gen pepomer S1. J. Sain Vet. XXI (2).
Wagner, 2008, Basic Virology, Blackwell Publishing, Australia.
Wibowo, M.H., Asmara, W. dan Tabbu, C.R. 2006. Isolasi dan Identifikasi
Serologis Virus Avian Influenza dari Sampel Unggas yang Diperoleh di D.I.
Yogyakarta dan Jawa Tengah. J. Sain Vet. 24: 77-83.
Wiyono, A., Indriani, R., Dharmayanti, N.L.P.I., Damayanti, R., Parede, L.,
Syafriati, T. dan Darminto. 2004. Isolasi dan Karakterisasi Virus Highly
Pathogenic Avian Influenza Subtipe H5 dari Ayam Asal Wabah di
Indonesia. JITV. 9: 61-71.
Yamada et al. 2012. Adaptation of a Duck Influenza A Virus in Quail. J. Virol.
86(3):1411.

52
LAMPIRAN

1. Apa itu bakteri L form?

- Beberapa genus bakteri dapat kehilangan dinding selnya dan membesar
sehingga tidak beraturan bentuknya, disebut L-form (nama diambil dari
Lister Institute London, di mana bentuk tersebut ditemukan). L-form dapat
terbentuk secara spontan, atau sebagai respon terhadap antimikroba yang
menghambat pembentukan sel (misalnya penicilin), atau terhadap lisozim
yang dapat merusak dinding sel.

2. Bagaimana prinsip kerja dari Laminar Air Flow?

- Prinsip Laminar Air Flow adalah dengan mengalirkan udara pada ruangan
ke dalam LAF yang merupakan meja steril untuk melakukan kegiatan
inokulasi atau penanaman suatu mikroorganisme di dalam suatu media.
Melalui dua filter, yaitu pre-filter dan HPEA (High Effeciency Particulate
Air Filter). Kabinet LAF juga dilengkapi dengan Ultraviolet, yang berfungsi
untuk menghilangkan pengotor serta mikroorganisme yang tidak diinginkan.
Kecepatan aliran udara dari Laminar adalah 0.3 – 0.5 m/s. Tujuannya untuk
melindungi produk dari kontaminasi yang berasal dari ruang laboratorium.

3. Apaperbedaan media enriched dengan enrichment?

- Enrichment medium merupakan nutrisi dan lingkungan media yang hanya
mendukung pertumbuhan bakteri yang diinginkan, pertumbuhan bakteri
yang diinginkan meningkat tetapi tidak untuk bakteri yang tidak diinginkan
(medium selektif yang diperkaya). Sedangkan enriched medium merupakan
media umum yang diperkaya untuk menumbuhkan bakteri yang sulit
tumbuh.

4. Bagaimana sensitifitas dan spesifisitas rapid test?

- Setiap rapid test memiliki nilai sensitivitas dan spesifisitas tertentu,
umumnya rapid test mengunggulkan sensitivitas yang tinggi untuk
mengeluarkan hasil dengan cepat namun spesifisitas tidak begitu tinggi.

5. Berapa lama spinchter akan terbuka?

- Spinchter puting sapi akan terbuka selama kurang lebih 120-240 menit
setelah pemerahan.

6. Kenapa susu harus diperah/dikeluarkan dari ambing sapi?

- Jika susu tidak dikeluarkan maka akan terjadi penggumpalan, menyumbat
kelenjar susu dan susu yang keluar sedikit sampai akhirnya berhenti
produksi.

53
7. Kenapa kita harus au interpretasi hasil?
- Agar kita dapat mengetahui karakteristik bakteri dan dapat mengidentifikasi
bakteri, sehingga kita bisa menentukan pemeriksaan lanjutan yang tepat dan
menentukan terapi yang tepat.

8. Apa itu APEC?

- Avian Pathogenic Eschericia coli (APEC) merupakan bakteri penyebab
kolibasilosis pada ayam, kalkun, dan unggas lainnya. Strain APEC
dilaporkan telah diisolasi dari koliseptisemia dan kasus selulitis pada burung
puyuh Jepang. Strain APEC merupakan strain Escherichia coli yang
memproduksi verotoxins (vt) atau shigatoxins (stx).

9. Apa saja organ limfoid?

- Organ yang terlibat dalam sintesis/ produksi sel imun, yaitu kelenjar timus
dan susmsum tulang. Jaringan limfoid primer berfungsi sebagai tempat
diferensiasi limfosit yang berasal dari jaringan myeloid. Terdapat dua
jaringan limfoid primer, yaitu kelenjar thymus yang merupakan diferensiasi
limfosit T dan sumsum tulang yang merupakan diferensiasi limfosit B. Pada
aves, limfosit B berdiferensiasi dalam bursa fabricius. Jaringan limfoid
primer mengandung banyak sel-sel limfoid diantara sedikit sel makrofag
dalam anyaman sel stelat yang berfungsi sebagai stroma dan jarang
ditemukan serabut retikuler. Jaringan limfoid sekunder berfungsi sebagai
tempat menampung sel-sel limfosit yang telah mengalami diferensiasi dalam
jaringan sentral menjadi sel-sel yang imunokompeten yang berfungsi sebagai
komponen imunitas tubuh, organ tersebut yaitu limfa, tonsil, limfonodul dan
jatingan limfoid mukolasl (MALT).

10. Apa itu sel T naif dan sel null?

- Null cell merupakan limfosit yang tidak memiliki karakter sel T dan sel B
serta cluster of differentiation atau antibodi permukaan namun mempunyai
peranan dalam proses pemusnahan sel yang dilakukan oleh antibodi.
- Sel T naif adalah sel T yang telah didiferensiakan dalam sumsum tulang, dan
berhasil enjalani proses seleksi di timus.

54
 LAPORAN KEGIATAN PPDH
ROTASI DIAGNOSA LABORATORIK
MIKROBIOLOGI DAN IMUNOLOGI VETERINER
RESUME JURNAL
“BLACKLEG’’

Oleh:
Khairul Ummam, S.KH
NIM. 190130100111050

PENDIDIKAN PROFESI DOKTER HEWAN

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2019

55
 BLACKLEG

“ Blackleg in cattle: A case report of fetal

infection and a literature review”

ABSTRAK

Clostridium chauvoei menyebabkan blackleg pada ternak. Penyakit ini telah

dilaporkan di seluruh dunia, dan meskipun dapat dicegah dengan vaksinasi,
kasus sporadis dan wabah sesekali masih terjadi. Kami menggambarkan kasus
blackleg pada sapi Gyr 2 tahun yang bunting dengan penularan dalam rahim ke
janin. Sapi terlihat memiliki lesi hitam dan mikroskopis khas dari blackleg
termasuk necrohemorrhagic yang menyebar luas, myositis skeletal, myocardial,
dan pericarditis fibrinous. Rahimnya mengandung janin yang baru dan sangat
emisematosa dengan otot rangka dan lesi miokard yang mirip seperti bendungan.
Histopatologi dari jaringan janin mengungkapkan banyak bakteri basil gram
positif, dengan spora sub-terminal, di berbagai jaringan. Bakteri basil ini
diidentifikasi sebagai C. chauvoei dengan menggunakan imunohistokimia. Kultur
anaerob dan tes antibodi fluoresen yang dilakukan pada otot rangka dari sapi dan
janin positif untuk C. chauvoei, mengkonfirmasikan diagnosis blackleg. Blackleg
adalah infeksi endogen, dan terjadi ketika sapi menelan spora pada saat makan
makanan di padang rumput atau silase yang terkontaminasi. Spora C. chauvoei
telah ditemukan tidak hanya di saluran pencernaan tetapi juga limpa dan hati
hewan sehat. Bakteri yang berkecambah bersifat histotoksik, menghasilkan
nekrosis lokal yang parah dan akhirnya toksemia yang mematikan. Blackleg ini,
bagaimanapun, belum dikonfirmasi secara eksperimental dan juga gagal
menjelaskan beberapa kasus penyakit. Diagnosis dugaan blackleg didasarkan
pada temuan klinis, gross, dan histologis. Konfirmasi diagnostik mengharuskan
deteksi C. chauvoei dengan kultur, PCR, atau metode deteksi imun.

Kata Kunci: Blackleg; cattle; Clostridium chauvoei; emphysema; fetus; myocarditis;

myositis

56
 PEMBAHASAN

1. ETIOLOGI
Blackleg adalah penyakit bakteri menular dari domba dan sapi, yang
disebabkan oleh bakteri Clostridium chauvoei. Clostridium chauvoei ditemukan pada
1887 dan kemudian dinamai setelah seorang dokter hewan Perancis, JBA
CHAUVEAU. Clostridium chauvoei merupakan batang gram-positif, anaerobik,
dan spora yang ditemukan di dalam tanah, tinja, dan saluran pencernaan banyak
hewan terutama dalam bentuk spora yang sangat tahan terhadap faktor
lingkungan dan disinfektan. Taksonomi dari Clostridium chauvoei dapat dilihat
pada tabel 1 yaitu:

Kingdom Bakteri
Filum Firmicutes
Class Clostridia
Order Clostridiales
Family Clostridiaceae
Genus Clostridium
Spesies Clostridium chauvoei
Tabel 1 Taksonomi Clostridium chauvoei
Blackleg disebabkan oleh spora yang berbentuk batang, bakteri gas yang
diproduksi Clostridum chauvoei. Spora dari bakteri ini dapat hidup di tanah selama
bertahun-tahun. Spora bakteri dimakan dalam makanan atau tanah yang
terkontaminasi. Spora kemudain masuk kealiran darah dan menetap diberbagai
organ dan otot. Genom C. chauvoei yang relatif kecil dibandingkan dengan spesies
Clostridium lainnya, seperti C. difficile yaitu 4,2 juta pasangan basa, mencerminkan
adaptasinya terhadap kisaran inang terbatas (termasuk sapi, caprine dan ovine),
di mana C. chauvoei dapat mereplikasi dan menyebabkan penyakit (Tagesu, 2019).
2. EPIDEMIOLOGI
Blackleg adalah penyakit endemik baik di negara maju maupun negara
berkembang dan merupakan penyebab kerugian bagi peternak, terutama
menyerang sapi dan domba. Sebagian besar kasus blackleg terjadi setelah
penggalian tanah, atau selama curah hujan tahunan yang sangat tinggi yang dapat

57
mengekspos dan mengaktifkan spora laten. Selain itu juga, penyakit ini bersifat
enzootic di daerah dengan riwayat banjir. Ternak berusia antara 6 hingga 24 bulan,
dalam kondisi sehat, sebagian besar terpengaruh. Tanda-tanda klinis dari bentuk
hyperacute dari penyakit ini biasanya tidak teramati karena kematian mendadak.
Bentuk akut dari penyakit ini sering dilaporkan dengan pembengkakan dan
krepitasi otot yang terkena (Press, 2014).
3. FAKTOR VIRULENSI
Berdasarkan kasus diatas, kondisi sapi tidak bias berdiri dan satu satunya
hewan dari kawanan yang terkena. Infeksi Clostridium chauvoei terjadi ketika
menelan spora pada saat makan makanan di padang rumput atau silase yang
terkontaminasi. Spora C. chauvoei telah ditemukan tidak hanya di saluran
pencernaan tetapi juga limpa dan hati hewan sehat. Karena C. chauvoei tampaknya
hadir dalam jaringan dalam keadaan tidak aktif sebelum penyakit black terjadi,
setidaknya pada sapi juga disebut sebagai infeksi klostridial "endogen," berbeda
dengan edema ganas yang dianggap infeksi eksogen, karena patogen memperoleh
akses ke jaringan melalui mukosa atau kulit pecah dan langsung menyebabkan
penyakit klinis (Constable, 2017). Menurut Abreu (2017), spora C. chauvoei hadir di
padang rumput yang terkontaminasi dicerna dan menjalani satu atau lebih siklus
replikasi di usus sebelum diserap melalui mukosa usus ke aliran darah dan / atau
diekskresikan dalam feses. Setelah diserap, spora didistribusikan ke beberapa
jaringan, termasuk otot rangka dan jantung. Setelah spora C. chauvoei mencapai
otot, mereka difagositosis oleh makrofag resident, dan dapat bertahan hidup
dalam sitoplasma sel-sel tersebut dalam jangka waktu yang lama tanpa
mempengaruhi inang. Tetapi ketika kondisi anaerob dibuat di daerah di mana
spora hadir, paling sering terkait dengan trauma dan perdarahan dan nekrosis
yang terkait, spora laten itu berkecambah, berkembang biak, dan melepaskan
racun yang menghasilkan manifestasi klinis dan lesi blackleg. Suatu penyakit yang
dihasilkan ketika spora atau bentuk vegetatif dari satu atau lebih spesies
klostridial, termasuk C. chauvoei, masuk ke jaringan subkutan dan / atau otot
melalui luka kulit atau mukosa. Patogenisitas kompleks C. chauvoei membutuhkan
berbagai faktor virulensi termasuk racun yang kuat, tetapi juga enzim dan organel
yang memungkinkan bakteri untuk mencapai jaringan otot.

58
Gambar 1. Patogenesis Blackleg (1) Spora Clostridium chauvoei awalnya dicerna
dari tanah yang terkontaminasi (2) dan diserap melintasi mukosa usus ke dalam
aliran darah. (3) Spora kemudian menyebar ke beberapa jaringan, terutama otot
rangka, di mana mereka menjadi tidak aktif. (4) Kemudian, lingkungan oksigen
rendah dibuat di otot rangka, sering dari cedera akut, mendukung perkecambahan
spora. Bakteri menghasilkan eksotoksin kuat yang menyebabkan nekrosis lokal
dan peradangan. (5) Akhirnya, bakteri dan racun yang berkembang biak
memasuki aliran darah yang menyebabkan eksotoksemia dan akhirnya kematian
(Abreu, 2017).
4. GEJALA KLINIS
Menurut jurnal diatas Blackleg biasanya merupakan penyakit akut atau
subakut, dengan banyak hewan mati mendadak atau jarang bertahan lebih dari 36
jam setelah timbulnya penyakit klinis. Kadang-kadang kasus kronis dapat terjadi.
Dalam kasus-kasus di mana tanda-tanda klinis diamati, mereka termasuk satu
atau lebih dari yang berikut: lethargy, anorexia, keengganan untuk bergerak,
lameness, dan recumbency. Ketika otot-otot superfisial terkena, pembengkakan
dan krepitus tampak jelas. Sedangkan menurut Constable (2017) Jika hewan itu
diamati sebelum mati ada kepincangan parah, biasanya dengan pembengkakan
yang jelas pada bagian atas kaki yang terkena. Pada pemeriksaan lebih dekat,
hewan tersebut akan mengalami depresi berat, mengalami anoreksia total dan
stasis ruminal, dan memiliki suhu tinggi (41 ° C; 106 ° F) dan denyut nadi (100
hingga 120 / menit). Pyrexia tidak ada pada semua kasus. Pada tahap awal,
pembengkakan terasa panas dan nyeri saat disentuh tetapi segera menjadi dingin

59
dan tidak nyeri, dan edema serta emfisema dapat dirasakan. Kulit berubah warna
dan segera menjadi kering dan pecah-pecah (Quin, 2011).
5. DIAGNOSA
Sejarah penyakit dan gejala-gejalanya mungkin sangat menunjukkan blackleg
tetapi diagnosis akhir harus bergantung pada pemilihan organisme penyebab.
Dalam kasus khas blackleg pada sapi, diagnosis pasti dapat dibuat pada tanda-
tanda klinis dan temuan nekropsi. Namun, dalam banyak kasus diagnosis
mungkin diragukan karena mungkin bingung dengan infeksi clostridia akut
lainnya dengan serangan pencahayaan dan dengan antraks meskipun pada yang
terakhir lesi limpa yang khas biasanya hadir dalam menegakkan diagnosis.
Biasanya terjadi kepincangan, depresi, kehilangan nafsu makan, dan
pembengkakan yang terasa nyeri pada tungkai yang berderak saat ditekan dapat
mengindikasikan blackleg (Santos, 2019). Nantinya kulit yang membengkak akan
menjadi dingin, kering, dan kasar. Di daerah-daerah di mana blackleg diketahui
sebagai masalah, ia harus dicurigai dalam kasus kematian mendadak.
Pemeriksaan post mortem biasanya mengungkapkan, di suatu tempat di dalam
tubuh suatu area otot kering berwarna merah gelap dikonfirmasi oleh dokter
hewan, lebih disukai dengan pemeriksaan laboratorium jaringan dari hewan yang
terkena. Diagnosis dugaan dapat dibuat oleh legiun kasar yang khas dan dengan
mendemonstrasikan banyak basil tunggal atau, mungkin, pasangan berpasangan
dengan ujung bulat dan telinga spora sesekali, tetapi tidak pada ujung spora
sesekali dekat tetapi tidak pada ujung sel. Seperti tipikal clostridia, spora
diameternya agak lebih besar daripada bacillus tempat lesi itu harus dibedakan
dari infeksi clostridia otot lainnya terutama L. Septicum. Oleh karena itu, diagnosis
harus dikonfirmasikan dengan kultur penggunaan teknik pewarnaan imunologis
tertentu (Tagesu, 2019).
Menurut Abreu 2017 Meskipun diagnosis dugaan blackleg biasanya
didasarkan pada sejarah klinis, tanda-tanda, dan perubahan histologis, diagnosis
akhir membutuhkan deteksi C. chauvoei pada jaringan yang terkena. Ini dapat
dicapai dengan kultur, PCR, dan / atau metode deteksi imun, termasuk FAT dan
IHC.

60
 6. DIFFERENSIAL DIAGNOSA
Dalam menegakkan diagnosis ketika sejumlah hewan ditemukan mati dalam
suatu kelompok yang tidak diawasi dengan ketat dan dekomposisi postmortem
sangat canggih sehingga sedikit informasi yang dapat diperoleh, seseorang harus
bergantung pada pengetahuan seseorang tentang kejadian penyakit lokal, musim
tahun, usia kelompok yang terkena dampak, dan kondisi padang rumput, dan
pada inspeksi dekat terhadap lingkungan di mana hewan telah dipelihara.
Pengamatan yang lebih sering harus dilakukan sehingga hewan yang sakit atau
mayat baru akan tersedia untuk diperiksa (Radotits, 2017).
 Edema maligna — dalam kasus khas blackleg pada sapi, diagnosis pasti
dapat dibuat pada tanda-tanda klinis dan temuan nekropsi. Identifikasi
pasti Clostridium chauvoei adalah dengan pewarnaan antibodi fluorescent.
Diagnosis pada temuan postmortem bruto dari penyebab lain myositides
clostridial berbahaya dan dapat mengakibatkan rekomendasi yang tidak
tepat untuk kontrol
 Antraks
 Hemoglobinuria basilaris
 Penyebab lain kematian mendadak yang tidak terduga (Radotits, 2017)
Sedangkan menurut Abreu 2017 Diagnosis diferensial utama untuk blackleg
adalah gangren gas, juga dikenal sebagai edema ganas, selulitis clostridial dan
kadang-kadang juga myositis, terkait dengan kontaminasi luka. Penyakit ini dapat
dihasilkan oleh satu atau lebih dari beberapa spesies clostridial, termasuk C.
septicum, C. chauvoei, C. perfringens, C. sordellii, dan C. novyi. Lesi mikroskopis kasar
edema blackleg dan ganas bisa sulit dibedakan ketika penyakit ini terbatas pada
otot rangka, terutama dalam kasus di mana luka tidak mudah terlihat.
PEMERIKSAAN LABORATORIUM
Menurut case report Diagnosis blackleg ditetapkan berdasarkan temuan
kotor dan histologis, ditambah dengan hasil kultur anaerob, FAT, dan IHC.
Sejumlah kecil C. septicum terdeteksi oleh IHC pada jaringan. Ini adalah blackleg
postmortem yang tumbuh cepat dan umum yang ada di usus banyak sapi normal
dan menyerang jaringan segera setelah, atau kadang-kadang sebelum kematian.
Ini adalah penjelasan yang paling mungkin untuk keberadaan C. septicum dalam
jaringan sapi dan janin. Kesimpulan ini didukung oleh fakta bahwa kultur dan

61
FAT negatif untuk mikroorganisme ini, sedangkan C. chauvoei terdeteksi pada
jaringan diinduk dan janin dengan semua teknik yang digunakan. (Bagge, 2009)
mengusulkan penggunaan reaksi rantai polimerase langsung (PCR)
menggunakan kertas saring umum sebagai alternatif untuk mengumpulkan,
menyimpan, dan mengirim bahan ke laboratorium untuk diagnosis blackleg;
sensitivitas dan spesifisitas pendekatan ini adalah 100%. Selain itu, C. chauvoei
sensitif terhadap oksigen, dan cenderung ditumbuhi dengan mudah oleh
mikroorganisme lain dalam sampel (Estel, 2015).
Tes laboratorium mikrobiologi klinis rutin mungkin salah
mengidentifikasi C. septicum, bukan C. chauvoei (Frey, 2013). Sulit untuk
membedakan antara C. chauvoei dan C. septicum karena kesamaan morfologis dan
biokimia. Berdasarkan analisis urutan 16S rDNA, C. chauvoei dan C. septicum telah
diidentifikasi sebagai spesies yang terkait erat dengan tingkat kesamaan yang
tinggi (99,3%). THOMAS et al., (2017) juga menunjukkan keterkaitan yang tinggi
(74%) antara C. chauvoei dan C. septicum dengan analisis filogenomik. Perlu dicatat
bahwa C. septicum adalah mikroorganisme yang mampu memicu edema ganas,
infeksi eksogen yang sangat mematikan (Halm, 2010).
Metode diagnostik lebih lanjut untuk identifikasi dan diferensiasi C.
chauvoei dan C. septicum termasuk tes imunofluoresensi, immune histochemistry, dan
teknologi MALDI-TOF MS. Tes molekuler seperti PCR konvensional pada gen 16S
rRNA, area spacer 16S dan 23S rDNA, dan gen flagelin dan multiplex real-time
PCR juga telah digunakan sebagai metode diagnostik (Garofolo, 2011). Uji ELISA
berbasis flagelin rekombinan dikembangkan untuk mendeteksi C. chauvoei dan
dapat mendeteksi hingga 10 4 CFU / mL C. chauvoei, selain spesifisitasnya yang
tinggi (USHARANI et al., 2015).
7. PENCEGAHAN DAN PENGOBATAN
Berdasarkan case report diatas setelah ditemukan di pagi hari tidak dapat
berdiri. Sapi adalah satu-satunya hewan yang terpengaruh dalam kawanan, yang
terdiri dari sejumlah hewan yang tidak dilaporkan vaksinasi terhadap penyakit
clostridial. Menurut Araujo et al., (2010), sapi harus divaksinasi pada usia empat
bulan, diikuti dengan dosis penguat satu bulan kemudian, dan kemudian setiap
tahun diulang. Untuk pengendalian penyakit, penting untuk menyoroti bahwa

62
bangkai hewan yang menderita blackleg harus dibakar untuk menahan
kontaminasi padang rumput.
Beberapa penulis menganggap bahwa penggunaan strain asli dapat
meningkatkan persiapan vaksin komersial, dengan meningkatkan respon imun
sapi (ORTIZ-ORTEGA et al., 2012). Potensi mencegah insiden blackleg adalah
faktor pembatas untuk tindakan pencegahan dan pengendalian. Selain itu,
program vaksinasi dapat membantu mengendalikan terjadinya blackleg dan
dengan demikian mengurangi kontaminasi lingkungan dengan spora C. chauvoei,
terutama di daerah berisiko tinggi. Langkah-langkah alternatif untuk mencegah
dan mengendalikan blackleg dapat fokus pada praktik manajemen padang
rumput tertentu, seperti drainase padang rumput buatan. Faktanya, sebuah
penelitian baru-baru ini menunjukkan bahwa kasus-kasus blackleg biasanya
terjadi di dalam area geografis dengan permeabilitas air yang buruk (WOLF et al.,
2017).

63
 KESIMPULAN

Blackleg disebabkan oleh spora yang berbentuk batang, bakteri gas yang
diproduksi Clostridum chauvoei. Spora dari bakteri ini dapat hidup di tanah selama
bertahun-tahun. Blackleg adalah penyakit endemik baik di negara maju maupun
negara berkembang dan merupakan penyebab kerugian bagi peternak, terutama
menyerang sapi dan domba. Sebagian besar kasus blackleg terjadi setelah
penggalian tanah, atau selama curah hujan tahunan yang sangat tinggi yang dapat
mengekspos dan mengaktifkan spora laten. Selain itu juga, penyakit ini bersifat
enzootic di daerah dengan riwayat banjir. Ternak berusia antara 6 hingga 24 bulan,
dalam kondisi sehat, sebagian besar terpengaruh. Tanda-tanda klinis dari bentuk
hyperacute dari penyakit ini biasanya tidak teramati karena kematian mendadak.
Bentuk akut dari penyakit ini sering dilaporkan dengan pembengkakan dan
krepitasi otot yang terkena. Dalam kasus khas blackleg pada sapi, diagnosis pasti
dapat dibuat pada tanda-tanda klinis dan temuan nekropsi. Namun, dalam
banyak kasus diagnosis mungkin diragukan karena mungkin bingung dengan
infeksi clostridia akut lainnya dengan serangan pencahayaan dan dengan antraks
meskipun pada yang terakhir lesi limpa yang khas biasanya hadir dalam
menegakkan diagnosis. Biasanya terjadi kepincangan, depresi, kehilangan nafsu
makan, dan pembengkakan yang terasa nyeri pada tungkai yang berderak saat
ditekan dapat mengindikasikan blackleg. Pencegahan pada blackleg sapi harus
divaksinasi pada usia empat bulan, diikuti dengan dosis penguat satu bulan
kemudian, dan kemudian setiap tahun diulang.

64
 REFERENSI

Abreu C.C., Edwards E.E., Edwards J.F., Gibbons P.M., Leal de Araújo J., Rech R.R.
& Uzal F.A. 2017. Blackleg in cattle: a case report of fetal infection and a literature
review. J. Vet. Diagn. Invest. 29(5):612-621.
Araujo, R.F. et al. 2010. Vaccination protocol and bacterial strain affect the serological
response of beef calves against blackleg. Pesquisa Veterinária Brasileira, v.30,
p.554–558.
Bagge E, Lewerin SS, Johansson KE. 2009. Detection and identification by PCR of
Clostridium chauvoei in clinical isolates, bovine faeces and substrates from biogas
plant. Acta Vet Scand; 51:8.
Constable, PD,. 2017. Veterinary medicine: a textbook of the diseases of cattle, horses,
sheep pigs, and goats. (11 th edn), W.B. Saunders, Philadelphia, USA, pp.
2156.
Estel, Rosangela Ziech. Et al,. 2018. Blackleg in cattle: current understanding and future
research needs. Ciência Rural, Santa Maria, v.48:05, e20170939.
F.A. Uzal, P. Hugenholtz, L.L. Blackall, S. Petray, S. Moss, R.A. Assis, et al., 2012.
PCR detection of Clostridium chauvoei in pure cultures and in formalin-fixed,
paraffin-embedded tissues. Vet. Microbiol. 91. 239e248.
Frey J, Falquet L . 2015. Patho-genetika Clostridium chauvoei. Res Microbiol 166 (4):
384-392.
G. Garofolo, D. Galante, L. Serrecchia, D. Buonavoglia, A. Fasanella. 2011.
Development of a real time PCR taqman assay based on the TPI gene for
simultaneous identification of Clostridium chauvoei and Clostridium septicum. J.
Microbiol. Methods 84. 307e311.
Halm, A., Wagner, M., Köfer, J., Hein, I., 2010. Novel real-time PCR assay for
simultaneous detection and differentiation of Clostridium chauvoei and
Clostridium septicum in clostridial myonecrosis. J. Clin. Microbiol. 48, 1093–
1098.
Jayaramaiah, U., Singh, N., Thankappan, S., Mohanty, A.K., Chaudhuri, P., Singh,
V.P., Nagaleekar, V.K., 2016. Proteomic analysis and identification of cell
surface-associat- ed proteins of Clostridium chauvoei. Anaerobe 39, 77–83.

65
Ortiz-Ortega, D. et al. 2012. Isolation and typing of Clostridium spp. 16S rRNA from
soil samples obtained in areas with sudden mortality history in Colombia. Global
Advanced Research Journal of Microbiology, v.1, p.33–40.
Pires, P.S. et al. 2017. Intracellular survival of Clostridium chauvoei in bovine
macrophages. Veterinary Microbiology, v.199, p.1–7.
Quinn PJ, Markey BK, Leonard FC, Hartigan P, Fanning S, et al. 2011. Veterinary
Microbiology and Microbial Disease, second ed., Ames, Iowa, USA.
Radostits OM, Gay CC, Hinchcliff KW, Constable PD. 2007. Veterinary medicine: a
textbook of the diseases of cattle, horses, sheep, pigs, and goats. (10 th edn), W.B.
Saunders, Philadelphia, USA, pp. 2156.
Santos, B. et al. 2019. Clostridial diseases diagnosed in cattle from the South of Rio Grande
do Sul, Brazil. A forty-year survey (1978-2018) and a brief review of the literature.
Brazilian Jurnal of Veterinary Research.
Thomas, P. et al. 2017. First report of two complete Clostridium chauvoei genome
sequences and detailed in silico genome analysis. Infection, Genetics and
Evolution, v.54, p.287– 298.
Togesu, Tolera. et al. 2019. Review on Blackleg in Cattle. School of Veterinary
Medicine, Jimma University, Ethiopia.
Usharani, J. et al. 2015. Development of a recombinant flagellin based ELISA for the
detection of Clostridium chauvoei. Anaerobe, v.33, p.48–54.
Wolf, R. et al. 2017. Spatial-temporal cluster analysis of fatal Clostridium chauvoei cases
among cattle in Styria, Austria between 1986 and 2013. Preventive Veterinary
Medicine, V.138, p.134–138.

66