JIAN REN, XIAOXU WU, CE SONG, YU LIANG, WENZHENG GAO & YONG WANG*
ABSTRAK
Eksplan pucuk bawang merah galur Z-018 digunakan sebagai bahan percobaan. Pengaruh colchicine dan pendimethalin terhadap induksi bawang merah
poliploid dipelajari secara in vitro dengan konsentrasi dan waktu perlakuan yang berbeda. Perlakuan dengan 250 mol/ L colchicine selama 4 hari
menyebabkan varian rate 42,22% dan angka kematian 36,67%, sedangkan pengobatan dengan 30 mol/ L pendimethalin selama 6 hari menyebabkan varian
rate 41,11% dan mortalitas 24,44% . Identifikasi sitologi selanjutnya menunjukkan bahwa tanaman tetraploid berhasil diinduksi oleh kedua mutagen tersebut.
Dibandingkan dengan tanaman diploid, tanaman tetraploid menunjukkan pertumbuhan yang lebih lambat, daun lebih tebal, batang dan akar, aparatus
stomata lebih besar dan peningkatan jumlah kloroplas. Selain itu, tanaman tetraploid yang diperoleh memiliki daun berbentuk tabung yang lebih tebal,
jumlah anakan yang berkurang, umbi yang lebih besar dan hasil produk yang meningkat. Ini memberikan dasar untuk penelitian masa depan tentang
sumber daya plasma nutfah bawang merah anakan.
Kata kunci: Kolkisin; sumber daya plasma nutfah; pendimethalin; induksi poliploid; bawang bombay
ABSTRAK
Ujung pucuk bawang merah dengan tetesan Z-018 digunakan sebagai bahan percobaan. Pengaruh colchisin dan dimetalin terhadap induksi poliploid
bawang merah dipelajari secara in vitro dengan konsentrasi dan waktu perlakuan yang berbeda. Perlakuan dengan 250 mol/ L colchysin selama 4 hari
menghasilkan tingkat varians 42,22% dan angka kematian 36,67%, sedangkan pengobatan dengan 30 mol/ L dimetalin selama 6 hari menghasilkan tingkat
varians sebesar 41,11% dan mortalitas tingkat 24,44%. Identifikasi sitologi lebih lanjut menunjukkan bahwa tanaman tetraploid telah berhasil diinduksi oleh
kedua mutagen tersebut. Dibandingkan dengan tanaman diploid, tanaman tetraploid menunjukkan pertumbuhan lebih lambat, daun lebih tebal, batang dan
akar, aparatus stomata lebih besar dan peningkatan jumlah kloroplas. Selain itu, tanaman tetraploid yang diperoleh memiliki tabung daun yang lebih tebal,
jumlah celaga yang berkurang, bawang yang lebih besar dan hasil yang meningkat. Studi ini menyediakan sumber daya dasar untuk penelitian plasma
nutfah bawang merah di masa depan.
Kata kunci: Aruhan poliploid; bawang bercelaga; kolkisin; pendimethalin; sumber germplasma
PENGANTAR
dan peningkatan resistensi penyakit (Callaway 2000).
Bawang merah (Allium cepa L. var. aggregatum G. Don) merupakan salah Pemuliaan poliploid dapat meningkatkan ketahanan tanaman dan
satu varian bawang merah (Allium cepa), dengan karakteristik warna meningkatkan kualitas dan hasil produk tanaman dan dengan demikian
kuningan, lama penyimpanan, tahan dingin, dan siklus pertumbuhan merupakan cara penting untuk menciptakan plasma nutfah tanaman baru.
pendek (Zhai et al. 2013). Biasanya ditanam dengan kubis Cina di daerah Kolkisin merupakan mutagen kimia yang banyak digunakan dalam
lintang tinggi untuk meningkatkan penggunaan lahan (Xu et al. 2016). induksi poliploid hewan dan tumbuhan (Kermani et al.
Pemuliaan vegetatif bawang merah anakan terutama melalui umbi anakan 2003; Kunitake dkk. 1998; Nigel dkk. 2007). Banyak penelitian telah
(Zhang 2013). Beberapa dari mereka mungkin dibaut dan berbunga tetapi menunjukkan bahwa afinitas colchicine untuk tubulin tumbuhan jauh lebih
sulit untuk digunakan (Liu et al. 2011). Fenotip keturunan bawang merah rendah daripada tubulin hewan. Oleh karena itu, konsentrasi tinggi
anakan mirip dengan tanaman lithophytic, sehingga sulit untuk menyeleksi colchicine untuk penggandaan kromosom sel tanaman diperlukan,
sifat-sifat yang baik. Oleh karena itu, inovasi sumber daya plasma nutfah menyebabkan toksisitas yang lebih besar pada bahan tanaman (Morejohn
bawang merah anakan sangat terbatas. et al. 1987). Selain colchicine (Liu et al. 2010), herbisida mutagen seperti
pendimethalin semakin banyak mendapat perhatian dan jenis herbisida ini
Poliploidi adalah adanya lebih dari dua set kromosom di atas tingkat telah berhasil digunakan untuk mendapatkan poliploid pada bawang putih
diploid dalam inti sel suatu organisme (Comai 2005; Leitch & Bennett (Zhou et al. 2009), P. tomentosa × P. bolleana (Huang et al. 2002) dan
1997). Sel poliploid secara signifikan lebih besar dari nenek moyang diploid Zantedeschia aethiopica (Zhang et al. 2008).
mereka (Beaulieu et al. 2008) dan tanaman poliploid biasanya memiliki
organ yang lebih besar (bunga dan daun), intensifikasi warna, dedaunan
lebih tebal dan lebih kaku Bawang merah giling memiliki karakteristik tahan dingin, masa
pertumbuhan pendek (80-90 hari) dan daya adaptasi yang kuat
Machine Translated by Google
2618
terhadap kondisi lingkungan yang berbeda dan nilai gizinya terhitung. Jika kloroplas di stomata tumpang tindih atau adhesi
bahkan lebih tinggi daripada bawang merah biasa (Jin et al. tidak mudah dihitung, mereka tidak akan dihitung.
2013; Zhao et al. 2015). Bawang merah dapat ditanam di daerah Setiap percobaan diulang tiga kali.
lintang tinggi di mana bawang merah biasa tidak dapat tumbuh.
Namun belum banyak diteliti karena luas tanamnya yang kecil
PENENTUAN NOMOR KROMOSOM
dan inovasi sumber daya plasma nutfahnya masih kurang.
Jumlah kromosom ditentukan di bawah mikroskop OLYMPUS
Dalam penelitian ini, kami berhasil menginduksi tanaman
menurut metode preparasi kromosom ujung akar (Zhang & Dai
bawang merah beranak tetraploid dengan memperlakukan
2007).
eksplan pucuk dengan colchicine dan pendimethalin secara in
vitro dan memperoleh sumber daya plasma nutfah bawang
merah yang sangat baik melalui karakterisasi hortikultura. SITOMETRI ALIRAN
Sistem pemilahan sitometrik aliran empat warna laser ganda
otomatis FACSAria digunakan untuk menentukan kandungan
BAHAN DAN METODE
relatif DNA dalam daun. Saluran FL2 digunakan untuk
Galur bawang merah giling Z-018 digunakan sebagai bahan mendeteksi intensitas fluoresensi. Data dianalisis dengan
percobaan, yang disediakan oleh Laboratorium Kunci Biologi perangkat lunak acak Cell Qest ProTM dan dibuat grafik melalui
dan Peningkatan Genetik Tanaman Hortikultura, Kementerian perangkat lunak Summit v4.0 (Endang & Yosuke 2003).
Pertanian, Universitas Pertanian Timur Laut.
Setelah dikupas kulitnya dan dibilas dengan air keran, 1/3
CIRI-CIRI HORTIKULTURAL DARI KETURUNAN
bagian atas umbi dibuang dan diinkubasi pada suhu 70°C
selama 10 menit. Eksplan selanjutnya direndam dalam larutan Tanaman tetraploid yang diperoleh ditransplantasikan ke
NaClO 10% selama 10 menit, dicuci dengan air steril sebanyak mangkuk vegetarian pada tahun 2012 dan ditempatkan di rumah
empat kali dan dikeringkan di atas kertas saring steril. Ujung kaca dan umbi dewasa dipanen pada tahun yang sama. Umbi
0,15-0,3 mm kemudian dipotong dengan pinset dan jarum dari jalur yang berbeda diberi nomor dan ditanam dalam tiga
anatomi dalam kondisi steril dan diinokulasi pada media MS tahun berikutnya. Galur-galur dengan sifat unggul disaring
yang dilengkapi dengan 0,1 mg/L 2-IP dan 0,1 mg/L NAA. berdasarkan karakter agronomi seperti warna daun, kekasaran
Kondisi kultur yang kondusif untuk pemuaian bohlam digunakan daun, serbuk lilin dan ukuran umbi.
sebagai berikut: suhu 25±1°C, intensitas cahaya 2000 lux dan
fotoperiode 13 jam/hari. PENGOLAHAN DATA
2619
Perlakuan Konsentrasi Durasi Angka Kematian Kematian (%) Varian Kecepatan (%)
(ÿmol/L) (d)
CK 0 4 90 0 0 0 0
Setiap kelompok diperlakukan dengan 30 baris. Perlakuan diulang sebanyak tiga kali, dan digunakan uji jarak Duncan. Huruf kecil menunjukkan perbedaan nyata
pada taraf 0,05
2620
Perlakuan diulang sebanyak tiga kali, dan digunakan uji jarak Duncan. Huruf kecil menunjukkan perbedaan nyata pada taraf
0,05
175,86% dari diploid. Kepadatan stomata berkurang menjadi diploid, menunjukkan bahwa ini adalah sifat penting dari tanaman
50,41% dari diploid. Analisis statistik menunjukkan bahwa panjang, varian dan dapat digunakan untuk membedakan tanaman varian
lebar, luas sel penjaga, jumlah kloroplas dalam sel penjaga dan dari diploid. Kami memperoleh 121 tanaman poliploid yang
kerapatan stomata tanaman varian semuanya berbeda nyata dicurigai dari 401 tanaman varian dengan membandingkan sel
dengan tanaman lain. stomata dan sel yang dijaga. Di antara mereka, 57 diinduksi oleh
colchicine, tingkat mutasi 38,26% dan 64 diinduksi oleh
pendimethalin, tingkat mutasi 25,40%, menunjukkan bahwa
meskipun tingkat mematikan pendimethalin rendah, tingkat positif
palsu juga tinggi.
Ploidi Panjang sel penjaga Lebar sel penjaga Area sel penjaga jumlah stomata nomor
(ÿm) (ÿm) (ÿm2 ) (20 × 40) kloroplas
Diploid 41,41 ± 1,05b 32,76 ± 1,88b 1189,55 ± 0,39b 8.93 ± 0.59a 5,54 ± 0,60b
Varian 61,42 ± 1,25a 41,84 ± 1,41a 2355,75 ± 0,32a 4.75 ± 0.62b 11,36 ± 0,61a
Perlakuan diulang sebanyak tiga kali, dan digunakan uji jarak Duncan. Huruf kecil menunjukkan perbedaan nyata pada taraf 0,05
Machine Translated by Google
2621
GAMBAR 3. Perbandingan jumlah kromosom ujung akar diploid dan variannya. (A) diploid
2n=2x=16, (B) tetraploid 2n=4×=32 dan (C) oktoploid 2n=8×=64
SEBUAH B
C D
kandungan relatif DNA tetraploid yang dicurigai adalah sekitar 100. ANALISIS FENOTIPIK KETURUNAN
TANAMAN POLIPLOID
Beberapa sampel memiliki tiga puncak kandungan relatif DNA sekitar
50 dan 100, dengan rasio diploid 1 banding 2, menunjukkan bahwa Setelah tiga tahun berturut-turut penanaman dan pengamatan, kami
mereka adalah chimera. menemukan bahwa sebagian besar tanaman tetraploid (85) menjadi
Hasil ini konsisten dengan yang diperoleh mirip dengan tanaman diploid. Hanya tujuh baris (tr-1, tr 5, tr-7, tr-17,
dari metode pelat pengepresan. Berdasarkan hasil metode penekan tr-31, tr-42 dan tr-73) yang masih berbeda dengan garis asli Z-018.
kromosom dan flow cytometry, chimera pada tanaman poliploid Tr-1, tr-5, tr-7 dan tr-17 diinduksi dengan colchicine dan ketiga bahan
menyumbang proporsi yang besar. Selain itu, proporsi sel poliploid lainnya diinduksi dengan pendimethalin. Garis-garis ini menunjukkan
dalam chimera menurun seiring pertumbuhan tanaman, dan beberapa potensi pertumbuhan yang jauh lebih kuat daripada Z-018. Secara
chimera yang mengandung sel poliploid bahkan dikembalikan ke khusus, mereka telah meningkatkan tinggi tanaman dan panjang
diploid pada tahap pertumbuhan akhir. Oleh karena itu, untuk daun dan daun berbentuk tabung lebih tebal dan cauloid. Meskipun
mendapatkan lebih banyak tanaman poliploid, chimera harus jumlah anakan per tanaman berkurang, bobot umbi tunggal
dipisahkan pada waktunya. bertambah, dengan bobot maksimum 9,17 g, yang merupakan ciri-
Jaringan chimeric dapat dikultur dan dibedakan menjadi tunas ciri tanaman poliploid dan fenotipe keturunan poliploidnya.
adventif, dari mana tanaman poliploid stabil dapat dipisahkan dan
dimurnikan (Burge et al. 2002).
Machine Translated by Google
2622
GAMBAR 5. Perbandingan fenotip umbi tunggal pada galur diploid dan tetraploid. (a)
garis diploid Z-018 dan (bh) garis tetraploid tr-1, tr-3, tr-5, tr-17, tr-31, tr-42 dan tr-73
GAMBAR 6. Perbandingan perbedaan antara galur Z-018 dan galur tetraploid. (a) tinggi
tanaman, (b) panjang daun berbentuk tabung, (c) batang daun berbentuk tabung, (d) lebar umbi, (e) jumlah
anakan, (f) lebar umbi, (g) tinggi umbi dan (h) berat umbi
Machine Translated by Google
2623
tidak terkait dengan jenis penginduksi (Gambar 5 & 6). Karena Huang, Q., Zhang, Z. & Kang, X. 2002. 2n serbuk sari P. tomentosa
total hasil bawang merah beranak ditentukan oleh jumlah * P. bolleana diinduksi oleh empat agen antimikrotubulus. Jurnal
anakan dan berat umbi tunggal, yang berkorelasi negatif, Universitas Kehutanan Beijing 24(1): 12-15.
Jin, X., Zhou, X., Liu, S., Liu, S. & Wu, F. 2013. Marka ISSR dari 48
tanaman dengan enam atau tujuh anakan biasanya
anakan bawang merah (Allium cepa var. aggregatum) keragaman
menghasilkan hasil yang lebih baik. Meskipun jumlah anakan
genetik plasma nutfah dan analisis sifat agronominya. Sayuran
tanaman poliploid yang diperoleh berkurang, namun hasilnya
Cina 1(1x): 27-34.
justru meningkat. Kermani, MJ, Sarasan, V., Roberts, AV, Yokoya, K., Wentworth, J.
& Sieber, VK 2003. Penggandaan kromosom yang diinduksi
Oryzalin di Rosa dan pengaruhnya terhadap morfologi tanaman
KESIMPULAN
dan viabilitas serbuk sari. Genetika Teoretis dan Terapan 107(7):
Pada penelitian ini dipelajari pengaruh colchicine dan 1195-1200.
Kunitake, H., Nakashima, T., Mori, K. & Tanaka, M. 1998.
pendimethalin terhadap induksi bawang merah poliploid secara
in vitro dengan konsentrasi dan waktu perlakuan yang berbeda. Efek somaklonal dan kromosom dari genotipe, ploidi dan durasi
Hasil penelitian menunjukkan bahwa bawang merah lebih kultur di Asparagus officinalis L. Euphytica
102(3): 309-316.
sensitif terhadap pendimethalin dibandingkan colchicine.
Leitch, IJ & Bennett, MD 1997. Poliploidi pada angiospermae.
Perbedaan antara mereka dalam varian tidak signifikan, tetapi Tren Ilmu Tumbuhan 2: 470-476.
perbedaan mortalitas signifikan. Mempertimbangkan tingkat Liu, W., Ning, S., Cui, C., Xu, Q. & Ma, Y. 2011. Pengaruh
mutasi dan tingkat kematian, pendimethalin tidak diragukan lagi pengobatan giberelin pada pertumbuhan dan perkembangan
merupakan penginduksi yang cocok untuk menggantikan bawang merah. Jurnal Universitas Pertanian Timur Laut (7):
kolkisin sepenuhnya. Identifikasi sitologi selanjutnya 83-86.
menunjukkan bahwa tanaman tetraploid berhasil diinduksi oleh Liu, X., Wang, D., Yang, W. & Zhang, J. 2010. Induksi poliploidi
hibrida aigeiros-luece Populus oleh colchicine.
kedua mutagen tersebut. Dibandingkan dengan tanaman
Jurnal Ilmu Pertanian Anhui 38 (20): 10532-10534.
diploid, tanaman tetraploid menunjukkan pertumbuhan yang
Morejohn, LC, Bureau, TE, Molè-Bajer, J., Bajer, AS & Fosket, DE
lebih lambat, daun lebih tebal, batang dan akar, aparatus
1987. Oryzalin, herbisida dinitroanilin, mengikat tubulin tanaman
stomata lebih besar dan peningkatan jumlah kloroplas. Selain dan menghambat polimerisasi mikrotubulus in vitro. Planta
itu, tanaman tetraploid yang diperoleh memiliki daun berbentuk 172(2): 252-264.
tabung lebih tebal, jumlah anakan menurun, umbi lebih besar Nigel, ARU, Jennie, H. & Therese, M. 2007. Generasi dan
dan hasil produk meningkat. Variasi ploidi merupakan metode karakterisasi autotetraploid yang diinduksi colchicine Lavandula
yang sangat berguna untuk inovasi sumber daya plasma nutfah angustifolia. Euphytica 156: 257-266.
tanaman pemuliaan vegetatif. Penggunaan sistem regenerasi Xu, L., Yang, F., Wu, X., Ding, R., Lu, Y. & Hou, B. 2016. Pengaruh
tumpangsari dengan bawang merah atau bawang putih pada
frekuensi tinggi bawang merah untuk membuat tanaman
hasil dan kualitas kubis Cina. Hortikultura Utara (14): 6-10.
poliploid tidak hanya menyediakan sumber daya plasma nutfah
Zhai, Y., Ma, R., Cheng, Y. & Wu, H. 2013. Kemajuan penelitian
yang lebih kaya untuk pemuliaan bawang merah, tetapi juga
tentang keragaman genetik sumber daya plasma nutfah Allium
memiliki tingkat induksi yang tinggi, dan tingkat chimera yang rendah sampai batas tertentu.
cepa L. Jurnal Pertanian 3(6): 61-63.
Zhang, D. 2013. Sejarah sayuran anakan bawang merah. Sayuran
UCAPAN TERIMA KASIH Cina 10: 26-26.
Zhang, W. & Dai, Z. 2007. Percobaan preparasi dan pengamatan
Pekerjaan ini didukung oleh sistem inovasi kolaboratif teknologi
spesimen mitosis ujung akar bawang merah. Bimbingan
industri sayuran Provinsi Heilongjiang (HNWSCTX201701). Percobaan Genetika. Beijing: Pers Pendidikan Tinggi.
Baik Jian Ren dan Xiaoxu Wu memberikan kontribusi yang Zhang, X., Hong-Zhi, WU, Zhou, D. & Zheng, S. 2008. Pengaruh
sama untuk pekerjaan ini dan harus dianggap sebagai penulis konsentrasi herbisida-oryzalin baru dan durasi waktu pada
pertama. menginduksi poliploidi Zantedeschia aethiopica berwarna. Jurnal
Universitas Pertanian Yunnan 23(6): 806-810.
REFERENSI
Zhao, J., Lagu, S., Han, Y., Zhao, C., Zhang, X. & Zhang, Y. 2015.
Beaulieu, JM, Leitch, IJ, Patel, S., Pendharkar, A. & Knight, CA Analisis perbandingan kualitas nutrisi antara Allium cepa L. var.
2008. Ukuran genom adalah prediktor kuat ukuran sel dan agrogatum Don. dan Allium cepa L. Journal of Northwest A & F
kepadatan stomata pada angiospermae. Ahli Fitologi Baru University 43: 107-110.
179(4): 975-986. Zhou, X., Cheng, Z. & Meng, H. 2009. Pengaruh pendimethalin pada
Burge, GK, Morgan, ER & Seelye, JF 2002. Peluang untuk pemuliaan penggandaan kromosom bawang putih in vitro. Acta Botanica
tanaman chimeral sintetis: Dulu dan masa depan. Jaringan Sel Boreali-Occidentalia Sinica 29(12): 2571-2575.
Tumbuhan & Kultur Organ 70(1): 13-21.
Callaway, DJ & Callaway, MB 2000. Pembibitan Hias
Tanaman. Portland: Pers Kayu. Jian Ren, Xiaoxu Wu, Ce Song, Yu Liang, Wenzheng Gao &
Comai, L. 2005. Kelebihan dan Kekurangan Poliploid. Ulasan Alam Yong Wang*
Genetika 6(11): 836-846. Sekolah Tinggi Arsitektur Hortikultura dan Lansekap
Endang, S. & Yosuke, T. 2003. Penentuan kadar ploidi bawang Universitas Pertanian Timur Laut
merah dan bawang bombay tandan Jepang secara flow cytometry. Harbin 150030
Ilmu Pertanian 10(1): 9-15. Cina
Machine Translated by Google
2624
Jian Ren, Xiaoxu Wu, Ce Song, Yu Liang, Wenzheng Gao & *Penulis yang sesuai; email: yongwang@neau.edu.cn
Yong Wang*
Laboratorium Kunci Biologi dan Perbaikan Genetik Diterima: 20 Februari 2018
Tanaman Hortikultura (Wilayah Timur Laut) Diterima: 29 Juni 2018
Kementrian Pertanian
Universitas Pertanian Timur Laut
Harbin 150030
Cina