PENGARUH KONSENTRASI DAUN SINGKON DAN PEPAYA DALAM

LARUTAN EKSTRAK TERHADAP NILAI ABSORBANSI DAN KADAR

KLOROFIL MENGGUNAKANA ALAT SPEKTROFOTOMETER VIS

Wulidatu Qurrotu A’yun1, Diyah Ayu Dwi Lestari2, Hisyam Jauhar Athif3

1
Jurusan Fisika, Fakultas Sains dan Teknologi, Maulana Malik Ibrahim Malang
Jl. Gajayana No. 50 Malang 65144

ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh konsentrasi terhadap absorbansi dan kadar klorofil pada
daun singkong dan daun pepaya dengan menggunakan spektrofotometer visible dengan cairan alkohol sebagai
pengekstrak. Sampel daun dihancurkan dan diextract dengan menggunakan cairan alkohol dengan perbandingan
1.25 gram daun dan 25 ml alkohol. Selanjutnya, ekstrak diukur absorbansinya pada dua panjang gelombang berbeda
yaitu 633 nm dan 645 nm menggunakan spektrofotometer visible. Kadar klorofil dihitung menggunakan rumus
absorbansi klorofil a dan klorofil b, serta dibandingkan antara daun singkong dan daun pepaya. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa hubungan antara konsentrasi dengan absorbansi dan kadar klorofil ialah berbanding lurus dan
kadar klorofil pada daun singkong lebih tinggi dibandingkan dengan daun pepaya. Penelitian ini dapat memberikan
informasi penting mengenai perbedaan kadar klorofil pada kedua jenis daun dan memberikan wawasan baru dalam
bidang fisiologi tanaman.

Keywords: Uji Klorofil, Spektrofotometer Visible, Daun Pepaya, Daun Singkong.

ABSTRACT
This research aims to determine the effect of concentration on absorbance and chlorophyll content in
cassava leaves and papaya leaves using a visible spectrophotometer with alcohol as the extracting solvent. Leaf
samples were crushed and extracted using alcohol with a ratio of 1.25 grams of leaf to 25 ml of alcohol.
Subsequently, the extract was measured for absorbance at two different wavelengths, 633 nm and 645 nm, using a
visible spectrophotometer. The chlorophyll content was calculated using the absorbance formula for chlorophyll a
and chlorophyll b, and compared between cassava leaves and papaya leaves. The results of the study showed that
there is a direct relationship between concentration and absorbance, and the chlorophyll content in cassava leaves
is higher compared to papaya leaves. This research provides important information about the difference in
chlorophyll content between the two types of leaves and offers new insights in the field of plant physiology.

Keywords: Chlorophyll Test, Visible Spectrophotometer, Papaya Leaves, Cassava Leaves.

Pendahuluan
Dalam kehidupan sehari-hari sering
didasarkan pada pengujian laboratorium.
Tanpa adanya uji laboratorium maka data
yang di dapat kurang akurat, apabila data
kurang akurat akan berdampak pada sistem
perdagangan, kesehatan dan lingkungan.
Data yang akurat sangat diperlukan agar
dapat diakui kompetensinya secara global.
Salah satu uji untuk menghasilkan data
akurat menggunakan analisa kuantitatif
dengan spektrofotometer.
Teori
Spektrofotometri adalah ilmu yang
mempelajari tentang metode-metode untuk
menghasilkan dan menganalisis spektrum.
Jenis spektrometer antara lain adalah
spektrometer sinar tampak, spektrometer
ultra-ungu, spektrometer infra- merah,
spektrometer resonansi magnet inti,
spektrometer serapan, spektrometer massa,
dan spektrometer fluoresensi.
Spektofotometer dapat digunakan untuk
absorbansi, transmitasi, serta kadar dari daun,
bunga, buah dan lainnya. Contohnya yaitu

*Corresponding author.
E-Mail: diyahayu2803@gmail.com
daun papaya dari tanaman papaya dan daun
singkong.
Tanaman pepaya (Carica Papaya L)
banyak tumbuh di daerah tropis Indonesia
yang bisa dimanfaatkan dari buah dan
daunnya. Klorofil diistilahkan sebagai
pewarna hijau alami yang ada pada berbagai
macam tumbuhan, susunannya terdapat di
dalam kloroplas. Ada 2 jenis klorofil alami
(seperti klorofil-a dan klorofil-b). Klorofil
biasanya selalu menyatu dengan pigmen
lainnya yang berdasarkan dari kelompok
karotenoid.
Daun singkong merupakan bahan pangan
yang murah, mudah ditanam, dan mudah
didapat oleh masyarkat indonesia. Daun
singkong dapat dimanfaatkan sebagai obat
antara lain untuk anti kanker, mencegah
konstipasi dan anemia, serta meningkatkan
daya tahan tubuh (Yuriyani, 2016). Pada
penelitian Setiari dan Nurchayati (2009)
kandungan klorofil total daun singkong
sebesar 27,4467 mg/g dan merupakan
tanaman dengan kandungan klorofil tertinggi
diantara kemangi, kangkung. cincau, bayam,
pegagan, singkong, dan papaya. Pada
penelitian Sekali et al. (2020) kandungan
klorofil pada ekstrak daun singkong sebesar
3,83%, sedangkan pada penelitian Hutabarat
et al. (2021) sebesar 12,10%. Kandungan
klorofil pada ekstrak daun singkong yang
tinggi tersebut memiliki potensi sebagai
pewarna hijau alami. spa man
Sayur-sayuran terutama yang berwarna
hijau mengandung banyak klorofil. Di dalam
tanaman, klorofil terdapat dalam bentuk
ikatan yang kompleks dengan molekul
protein dan lemak. Warna sayur- sayuran
terutama disebabkan oleh kandungan zat
warna didalamnya yang disebut pigmen dan
terdiri dari klorofil, karotenoid dan grup
flavonoid yang terdiri dari antosianin,
antoxantin dan tannin. Klorofil adalah
senyawa ester dan larut di dalam solvent
organik. Ekstraksinya dilakukan dengan
menggunakan pelarut organik polar,
khususnya acetone dan alcohol.
Analisis kandungan klorofil pada daun
singkong dan pepaya dilakukan untuk
mendapatkan informasi penting mengenai
perbedaan kadar klorofil pada kedua jenis
daun dan memberikan wawasan baru dalam
bidang fisiologi tanaman.
Analisisis kandungan klorofil pada
umumnya dilakukan dengan mengekstrak
daun menggunakan pelarut kemudian
kandungan klorofil ditentukan dengan
spektrofotometer visible. spektrofotomet
Metode
1. Pengumpulan Sampel
Sampel yang digunakan dalam
penelitian ini adalah dua jenis daun, yaitu
daun singkong dan daun pepaya. Sampel
didapatkan dari pohon-pohon di sekitar
rumah praktikan yaitu di desa Brangkal
Kabupaten Bojonegoro.
2. Persiapan Alat dan Bahan
Alat yang akan digunakan dalam
penelitian ini adalah spektrofotometer
visible, gelas ukur kaca, gelas beaker,
corong kaca, mortar dan alu, pipet
volume, batang pengaduk, gunting,
timbangan analitik dan kuvet. Bahan yang
akan digunakan dalam penelitian ini
adalah dua sampel daun, yaitu daun
singkong dan daun pepaya, tisu, kertas
saring, aquades, dan alkohol.
3. Pembuatan Sampel Uji
Disiapkan sampel daun dengan
dipotong daun menjadi bagian kecil, tanpa
disertai tangkai dan tulang daun. Setiap
sampel ditimbang dengan berat 1,25 gram.
Kemudian sampel daun dimasukkan ke
dalam mortar dan dihaluskan dengan cara
digerus menggunakan alu. Lalu sampel
yang telah digerus dimasukkan ke gelas
ukur yang telah diisi dengan alkohol
sebanyak 25 ml dimana kemudian
dilarutkan dan disaring menggunakan
kertas saring hingga didapatkan minimal
sebanyak 12,5 ml untuk 4 variasi
konsentrasi (5%, 10%, 15% dan 20%)
untuk setiap sampel daun, dimana setiap
 5% konsentrasi, ekstrak daun sebanyak
1,25 ml. Setelah selesai, semua sampel ini
yakni 4 variasi sampel untuk daun pepaya
dan 4 variasi sampel untuk daun singkong
didiamkan selama kurang lebih 24 jam.
4. Pengujian Absorbsi Sampel
Dihidupkan spektrofotometer visible
dan ditunggu selama 15 menit untuk
dipanaskan. Sembari menunggu,
disiapkan aquades sebagai larutan blok
atau larutan kalibrasi. Kemudian
disiapkan 3 kuvet, di mana kuvet 1 diisi
aquades, kuvet 2 diisi sampel daun
singkong menggunakan pipet dari 2
variasi dan kemudian dilakukan
pengukuran dengan terlebih dahulu
menempatkan sampel pada alat dan
mengatur nilai panjang gelombangnya
menggunakan tombol yang ada di
spektrofotometer visible, disini digunakan
2 panjang gelombang yakni 𝜆 = 645
untuk pengukuran pertama nm dan 𝜆 =
663 nm pada pengukuran kedua lalu
dilanjutkan dengan mengganti 2 variasi
konsentrasi dengan 2 variasi konsentrasi
yang lainnya dan kemudian dengan
rangkaian langkah yang sama dilakukan
pengukuran untuk daun pepaya. Nilai
absorbansi yang muncul pada layar dicatat
pada laporan sementara dan untuk
mengetahui nilai absorbansi pada sampel
lainnya dilakuakn penarikan pada tuas
yang terletak pada spektrofotometer-vis.
5. Analisis Data
Data hasil pengukuran absorbansi tiap
sampel digunakan untuk menentukan
kadar klorofilnya yang kemudian
digunakan untuk melakukan analisis
pengaruh konsentrasi ekstrak sampel
terhadap nilai absorbansi dan klorofil.
Untuk menentukan kadar klorofil tiap
sampel, digunakan rumus absorbansi
klorofil a dan b seperti berikut:
Klorofil A : (12,7 × 𝑂𝐷663) − (2,69 ×
𝑂𝐷645 ) …………………….....…….. (1)
Klorofil B : (22,9 × 𝑂𝐷645 ) − (4,68 ×
𝑂𝐷663) ……………....………………(2)
Total Klorofil : (20,2 × 𝑂𝐷645 ) +
(2,69 × 𝑂𝐷663 ) …………………… (3)
Hasil Dan Pembahasan
Klorofil merupakan pigmen pada tanaman
berwarna hijau yang memiliki peran penting
pada proses fotosintesis. Klorofil dapat larut
dalam metanol, etanol, aseton, alkohol,
kloroform dan bensol, tetapi klorofil tidak
larut dalam air (Ajiningrum P.S, 2018).
Teknik spektrofotometer merupakan
sebuah teknik untuk pemisahan klorofil a dan
klorofil b dan pigmen-pigmen lainnya. Sifat
fisik klorofil adalah menerima dan atau
memantulkan cahaya dengan gelombang
yang berlainan. Klorofil banyak menyerap
sinar dengan panjang gelombang antara 400-
700 nm, terutama sinar merah dan biru (Adi
Prastyo, Kurniawan dan Ainun Nikmati
Laily, 2015).
Klorofil a dan klorofil b terdapat pada
sebagian besar tumbuhan khususnya
tumbuhan tingkat tinggi (Fajar Ahmad dkk,
2014). Klorofil yang berperan dalam reaksi
perubahan energi radiasi matahari menjadi
energi kimia serta menyerap dan mengangkut
energi ke pusat reaksi molekul adalah
klorofil asedangkan klorofil b berperan
sebagai penyerap energi matahari yang
diteruskan ke klorofil a (Mashud. N. dan
Farida Octavia, 2015). Klorofil adalah
pigmen yang menyerap sinar radiasi
elektromagnetik pada spektrum kasat mata
(visibel) seperti sinar matahari (Kimball.
J.W., 1983) dan (Nur Eka Putri, 2019)
Spektrofotometer adalah alat yang digunakan
untuk mengukur kandungan klorofil
(Sumenda Lusiana dkk, 2011).
Berdasarkan hasil analisis kadar klorofil
pada ekstraksi daun singkong dan daun
pepaya dengan pelarut alkohol diperoleh nilai
OD dan kadar klorofil sebagaimana
tercantum pada Tabel 1 dan 2.
Tabel 1 merupakan data absorbansi dari 2
bahan menggunakan spektrofotometer- vis
dengan variasi daun singkong dan daun
pepaya dengan masing-masing terdapat 4
variasi konsentrasi mulai dari 5% hingga
20% dengan selisih setiap variasi 5%. Dari
tabel data percobaan yang ada dapat dilihat
bahwa semakin tinggi nilai konsentrasi
ekstrak, semakin tinggi pula nilai absorbansi
yang terukur, baik untuk panjang gelombang
645 nm maupuan 663 nm, kecuali pada daun
singkong dengan konsentrasi 15% pada
panjang gelombang 645 nm yang nilainya
menurun, dimana hal ini dapat disebabkan
oleh human error yang kurang teliti pada saat
proses pengukuran sehingga sampel
terkontaminasi yang kemudian menjadikan
hasil yang kurang sesuai. Namun, dengan
sebagian besar hasil yang didapatkan, berarti
bahwa konsentrasi berbanding lurus dengan
absorbansi. Perlu diketahui bahwa nilai
absorbansi di penelitian ini bernilai di atas 0
dan di bawah 3, yang mana berarti bahwa
telah sesuai dimana hal ini dipengarhuhi oleh
perbandingan alkohol dengan konsentrasi
yang telah tepat, tidak terlalu kental.
Untuk klorofil a dan b pada kedua daun
tampak dihasilkan nilai yang sangat
bervariasi untuk semua sampel dengan nilai
yang juga meningkat seiring dengan
meningkatnya nilai absorbansi kecuali untuk
klorofil b pada daun singkong pada
konsentrasi 15%. Hal ini disebabkan karena
nilai absorbansi yang menurun pada panjang
gelombang 645 nm yang telah dijelaskan di
Table 1. Nilai OD atau Nilai Absorbansi dan Kadar Klorofil pada Daun Singkong dan Daun
Pepaya.
atas. Hal yang sama juga terjadi pada nilai
klorofil total.
Adapun ketika ditinjau perbandingan
antara daun singkong dan daun pepaya, daun
singkong memiliki nilai kadar klorofil yang
cenderung lebih besar daripada daun pepaya.
Perbedaan kadar klorofil ini dapat terjadi
karena faktor genetik, lingkungan dimana
tanaman tumbuh, usia tumbuhan, fase
pertumbuhan dan lain sebagainya, seperti
yang dikemukakan oleh Taiz dan Zeiger
(2010).
Menurut Dwidjoseputro (1980) pada
semua tumbuhan hijau terdapat Klorofil a
dan klorofil b dengan perbandingan 3:1 pada
tumbuhan tinggi. Hal ini terjadi pada
sebagian besar hasil penelitian yang telah
dilakukan. Kondisi pertumbuhan dan faktor
lingkungan bisa mempengaruhi perbandingan
jumlah Klorofil a dan klorofil b (Gross,
1991).
Berdasarkan hasil dari nilai OD pada
setiap sampel menunjukkan bahwa daun
singkong dan daun pepaya pada saat
dilarutkan benar-benar dalam keadaan sangat
cair sehingga menghasilkan nilai absorbansi
di bawah 3. Apabila nilai absorbansinya di
atas 3 maka sudah dapat dipastikan
bahwasanya sampel yang dilarutkan masih
terdapat kekentalan didalamnya.

Sampel Konsentrasi Absorbansi Kadar Klorofil

pada Daun 𝜆 = 645 𝜆 = 663 a b
nm nm
Daun Pepaya 5% 0,015 0,042 0,493 0,146
10% 0,051 0,126 1,463 0,578
15% 0,091 0,232 2,701 0,998
20% 0,117 0,303 3.533 1,261
Daun Singkong 5% 0,025 0,059 0,682 0,296
10% 0,088 0,201 2,315 1,074
15% 0,083 0,212 2,469 0,909
20% 0,125 0,323 3,766 1,351
 Table 2. Total Klorofil Pada Daun Singkong Dan Daun Pepaya
Sampel Konsentrasi pada Absorbansi Total Klrorofil
Daun 𝜆 = 645 nm 𝜆 = 663 nm
Daun Pepaya 5% 0,015 0,042 0,415
10% 0,051 0,126 1,369
15% 0,091 0,232 2,462
20% 0,117 0,303 3,178
Daun Singkong 5% 0,025 0,059 0,663
10% 0,088 0,201 2,318
15% 0,083 0,212 2,246
20% 0,125 0,323 3,394
Kesimpulan Saran
Berdasarkan hasil penelitian, dapat Beberapa saran yang dapat diberikan
disimpulkan bahwa: ialah:

1. Spektrofotometer visible dapat 1. Memilih dengan tepat zat pengekstrak

digunakan untuk mengukur kadar
klorofil pada daun dengan akurasi
yang tinggi ditandai dengan terjadinya
kestabilan nilai yang tampil pada layar
spektrofotometer-vis.
2. Konsentrasi ekstrak mempengaruhi
absorbansi dan otomatis
mempengaruhi pula nilai klorofil,
dimana memiliki hubungan
berbanding lurus, yakni ketika
konsentrasi tinggi maka nilai
absorbansi akan tinggi yang mana
secara otomatis nilai klorofil juga
tinggi.
3. Kadar klorofil pada daun singkong
lebih tinggi dibandingkan dengan daun
pepaya akibat pengaruh dari berbagai
faktor seperti yang telah dijelaskan di
atas.
untuk ekstraksi sekaligus menentukan
perbandingan campuran zat dengan
berat sampel secara tepat.
2. Mempelajari hal-hal yang
berhubungan dengan penelitian yang
dilakukan, seperti proses pembuatan
ekstraksi dan penggunaan alat
spektrofotometer-vis.
3. Teliti dalam melakukan pengukuran
dan ekstraksi agar sampel tidak
terkontaminasi dan data yang
didapatkan akurat.
Ucapan Terimakasih
Penulis berterima kasih kepada asisten
laboratorium praktikum Eksperimen Fisika II
kelas B alat Spektrofotometer Visible,
Hisyam Jauhar Athif, yang telah membantu
selama penelitian dari awal sampai akhir dan
juga kepala laboratorium, Ibu Nurun
Nayiroh.

Referensi
1. Abdilah, F & Ahmad, A. 2014. Pegujian
Daya Antioksidan dan Sifat Toksisitas
Ekstrak Co(II) Turunan Universitas
 Hasanuddin. Makasar.
https://core.ac.uk/download/pdf/2549
607 5.pdf Klorofil. Jurusan Kimia
FMIPA
2. Ajiningrum, P.S. 2018. Kadar Total
Pigmen Klorofil Tanaman Avicennia
marina Pada Tingkat Perkembangan
Daun yang Berbeda. Sigma 11(2):
52-59; September 2018. N: 1412 -
1840. e- ISSN: 2621-9093.
3. Dasgupta P, Chakraborty P, Bala NN.
2013. Averrhoa carambola: an
update review Edisi November 2017.
p. 244-251 3. Int J Pharma Res 2:54-
63.
4. Dwidjoseputro, D. 1980. Pengantar
Fisiologi Tumbuhan. Jakarta:
Gramedia.
5. Fajar, Ahmad, Ratna Ibrahim, dan Eko
Nurcahaya Dewi. 2014. Stabilitas
Ekstrak Kasar Pigmen Klorofil, Beta
Karoten, dan Caulerpin Alga Hijau
(Caulerpa racemosa) pada Suhu
Penyimpanan yang Berbeda. Jurnal
Pengolahan dan Bioteknologi Hasil
Perikanan. Vol 3(1)
6. Gross J. 1991. Pigments in Vegetables
Chlorophylls and Carotenoids. New
York: Van Nostrand Reinhold.
7. Hendriyani, I. S, Nurchayati. Y, & Setiari.
N. 2018. Kandungan klorofil dan
karotenoid Kacang Tunggak (Vigna
unguiculata (L.) Walp.) pada umur
tanaman yang berbeda. Jurnal
Biologi Tropika. 1(2), 38-43.
https://ejournal2.undip.ac.id/index.ph
p/jbt/article/view/3818.
8. Limantara, L, Koehler P, Wilhelm B,
Porra, R, J & Scheer H. 2006.
Photostability of Bacteriochlorophyll
a and Derivatives, Potential
Sensitizer for Photodynamic Therapy.
J. Photochem Photobiol. 770-780
https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ab
s/1 0.1562/2005-09-07-RA-676.
9. Lusia, S, Henny, L, R & Feky R, M. 2011.
Analisis Kandungan Klorofil Daun
Mangga (Mangifera indica L.) pada
Tingkat Perkembangan Daun yang
Berbeda. Jurnal Bioslogos. 1(1), 20-
24.
https://ejournal.unsrat.ac.id/index.php
/bi oslogos/article/view/372.
10. Mashud, N. dan Farida Octavia. 2015.
Karakteristik Fisiologi Daun Aren
Varietas Akel Toumung. Jurnal B.
Palma. Vol.16(1)
11. Marjenah dan N.P. Putri. 2017. Pengaruh
Elevasi Terhadap Produksi Buah
Ketapang (Terminalia catappa Linn.)
Sebagai Bahan Baku Pembuatan
Biodiesel. Jurnal Hutan Tropis
Volume 5 No. 3.
12. Nio S, A & Yunio, B. 2011. Konsentrasi
Klorofil Daun sebagai Indikator
Kekurangan Air Pada Tanaman.
Jurnal Ilmiah Sains FMIPA
Universitas Sam Ratulangi Manado.
11(2), 166-173.
https://ejournal.unsrat.ac.id/index.php
/JI S/article/view/202/153.
13. Prastyo, Adi., Kurniawan, dan Ainun
Nikmati Laily. 2015. Uji Konsentrasi
Klorofil Daun Temu Mangga
(Curcuma mangga Val.), Temulawak
(Curcuma xanthorrhiza), dan Temu
Hitam (Curcuma aeruginosa) dengan
Tipe Kertas saring yang berbeda
menggunakan spektrofotometer.
Seminar Nasional Konservasi dan
Pemanfaatan Sumber Daya Alam
Pendidikan Biologi, Pendidikan
Geografi, Pendidikan Sains, PKLH
FKIP UNS.
14. Priadi D. Cahyani Y. 2011.
Keanekaragaman varietas belimbing
manis (Averrhoa carambola L.) di
Kebun Plasma Nutfah Tumbuhan dan
Hewan Cibinong. Berk Penel Hayati
5A:73-77.
15. Putri, Nur Eka. 2019. Analisis
Kandungan Klorofil Dan Senyawa
Antosianin Daun Pucuk Merah
(Syzygium oleana) Berdasarkan
Tingkat Perkembangan Daun Yang
Berbeda. Fakultas Tarbiyah Dan
Keguruan. Universitas Islam Negeri
Raden Intan Lampung. Skripsi.
16. Ruhiyat, D. 2004. Sistem Lahan
Kalimantan Timur. Laboratorium
 Ilmu Tanah. Fakultas Kehutanan
Universitas Mulawarman. Samarinda.
17. Sumenda, Lusiana, dkk. 2011. Analisis
Kandungan Klorofil Daun Mangga
(Mangifera indica L.) pada Tingkat
Perkembangan Daun yang Berbeda.
Jurnal Bios Logos, 1(1). 18.
18. Sunardi, Kartika Sari. 2012. Pengaruh
Konsentrasi Larutan Ekstrak daun
Lidah Mertua Terhadap Absorbansi
dan Transmitansi Pada Lapisan
Tipis. Seminar Nasional Fisika 2012.
19. Taiz, L., & Zeiger, E. 2010. Plant
Physiology (5th ed.). Sunderland,
MA: Sinauer Associates.
LAMPIRAN
20. Yang, H., Li, J., Yang, J., Wang, H., Zou,
J., & He, J. 2014. Effects of nitrogen
application rate and leaf age on the
distribution pattern of leaf SPAD
readings in the rice canopy. PloS one.
9(2), 1-11.
https://journals.plos.org/plosone/articl
e?i d=10.1371/journal.pone.0088421.
21. Yelni G, Nio S, A, Parluhutan S. 2016.
Konsentrasi Klorofil pada Beberapa
Varietas Tanaman Puring (Codiaeum
varigatum L.). Jurnal MIPA Unsrat
Online.
https://ejournal.unsrat.ac.id/index.php
/jm 5(2), uo/article/view/12964.