Induksi Poliploidi Kentang Hitam (Solenostemon Rotundifolius (Poir)

J. K. Morton) Aksesi Sangian Secara In Vitro

In Vitro Polyploid Induction of Solenostemon rotundifolius (Poir) J. K. Morton

In Sangian Accesion

Mely Wardah Hayati1, Prasetyorini2, Witjaksono3

1,2
Program Studi Biologi FMIPA Universitas Pakuan
3
Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia, Cibinong Bogor

ABSTRAK

Kentang hitam (Solenostemon rotundifolius (Poir) J. K. Morton) adalah tanaman

herba yang berpotensi tinggi untuk dikembangkan, sebab umbi kentang hitam mengandung
karbohidrat yang dapat digunakan sebagai sumber karbohidrat alternatif pengganti beras.
Tujuan penelitian ini adalah untuk mendapatkan tanaman poliploid pada kentang hitam
aksesi “Sangian” dengan induksi oryzalin dan waktu perendaman yang dilakukan secara in
vitro. Penelitian telah dilaksanakan dari bulan Februari sampai Agustus 2012 di
Laboratorium Biak Jaringan dan Sel Tumbuhan, Bidang Botani, Pusat Penelitian Biologi,
LIPI, Cibinong, Bogor. Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan
Rancangan Acak Kelompok (RAK) pola faktorial dengan dua faktor yaitu, konsentrasi
oryzalin (0, 3, 6, 15 µM) dan waktu perendaman (8, 24 jam). Media yang digunakan
adalah media MD cair dengan bagian buku batang sebagai bahan tanam, dilakukan 6 kali
ulangan tiap perlakuan. Hasil penelitian menunjukkan perlakuan induksi poliploid
menggunakan inokulum buku batang dari pertumbuhan tunas aksilar kentang hitam aksesi
“Sangian” efektif untuk induksi poliploid pada kombinasi perlakuan oryzalin dan waktu
perendaman yang diuji, dengan peningkatan ploidi dari diploid (2n=2x) menjadi tetraploid
(2n=4x) sebesar 16.5 % dan mixoploid (2n=2x+4x; 3x+4x) sebesar 28.4 %.

Kata Kunci: Solenostemon rotundifolius, oryzalin, poliploid

Pendahuluan penghasil karbohidrat yang dapat

Indonesia merupakan salah satu
negara dengan konsumsi beras tertinggi di
dunia. Pilihan masyarakat Indonesia pada
tanaman padi sebagai sumber karbohidrat
utama mudah dipahami, karena padi telah
lama dibudidayakan dan mudah disimpan.
Ketergantungan padi sebagai sumber
karbohidrat utama pada masyarakat
Indonesia membahayakan ketahanan
pangan nasional, sehingga perlu mencari
sumber karbohidrat alternatif. Saat ini
pemanfaatan berbagai sumber karbohidrat
non-beras masih kurang optimal, padahal
banyak alternatif bahan makanan
dikembangkan dalam pertanian, salah
satunya adalah kentang hitam
(Leksonowati dan Witjaksono, 2009a).
Kentang hitam (Solenostemon
rotundifolius (Poir) J. K. Morton) adalah
tanaman herba yang berpotensi tinggi
untuk dikembangkan, sebab umbi kentang
hitam mengandung karbohidrat yang
dapat digunakan sebagai karbohidrat
alternatif pengganti beras. Kentang hitam
di Indonesia hanya dikenal di daerah
pulau Jawa, Bali, dan Madura. Umbi yang
dihasilkan kentang hitam berukuran kecil
dan berwarna coklat muda, coklat tua
hingga hitam. Biasanya kentang hitam

1
dikonsumsi sebagai sayuran, direbus atau
sebagai campuran sajian sebagai
pengganti kentang (Solanum tuberosum).
Kentang hitam merupakan tanaman
pangan yang mempunyai kandungan
karbohidrat yang tinggi, khususnya pati.
Menurut Jansen (1996), dalam industri
farmasi, pati yang dihasilkan kentang
hitam dapat dipakai sebagai bahan
penyatu atau pemencar.
Tanaman yang berasal dari Afrika
Barat ini resisten terhadap penyakit,
terutama fungi, tetapi sangat peka
terhadap nematoda. Keragaman genetik
tanaman ini diperkirakan sempit karena
selain tidak ditemukan meliar di daerah
aslinya, juga diperbanyak secara vegetatif.
Kurang optimalnya pemanfaatan sumber
karbohidrat non-beras seperti kentang
hitam sejalan dengan kurangnya penelitian
dan pengembangan komoditas tersebut.
Padahal, potensi genetik komoditas
tersebut mungkin masih dapat
ditingkatkan dengan pemuliaan tanaman,
misalnya dengan pemuliaan mutasi atau
teknik manipulasi yang lain, seperti
poliploidisasi. Poliploidi adalah kondisi
pada suatu organisme yang memiliki set
kromosom (genom) lebih dari sepasang.
Organisme yang memiliki keadaan
demikian disebut sebagai organisme
poliploid. Usaha-usaha yang dilakukan
orang untuk menghasilkan organisme
poliploid disebut sebagai poliploidisasi
(Suryo, 2007).
Tanaman poliploid (triploid atau
tetraploid) diketahui mempunyai sosok,
ukuran buah, umbi atau bunga yang lebih
besar (Suryo, 2007). Manipulasi jumlah
ploidi (kromosom) telah dimanfaatkan
dalam pemuliaan tanaman, seperti
gandum (hexaploid 2n=6x), kentang
(tetraploid 2n=4x), pisang (triploid 2n=3x;
tetraploid 2n=4x), jambu biji seedless
(triploid 2n=3x), mangga (tetraploid
2n=4x), dan semangka seedless (2n=3x).
Menurut Suryo (2005), di negara-negara
industri maju seperti Jepang, Amerika,
Taiwan, dan Australia, penyediaan benih
2
semangka seedless atau triploid (2n=3x)
merupakan suatu usaha yang dapat
memberikan keuntungan besar. Penelitian
mengenai kentang hitam masih belum
terlalu banyak, namun teknik
poliploidisasi dapat dilakukan dengan
efisien melalui teknik kultur jaringan atau
teknik in vitro. Teknik regenerasi kentang
hitam melalui kultur jaringan pun telah
dilakukan (Prematilake, 2005;
Leksonowati, 2009b).
Kentang hitam memiliki jumlah
kromosom diploid, 2n = 2x = 64, 84
(Nkansah, 2004). Jumlah ploidi kentang
hitam kemungkinan dapat ditingkatkan
melalui penambahan oryzalin pada media
kultur in vitro. Oryzalin adalah suatu
herbisida yang dapat menghalangi
pembentukan benang spindel pada waktu
mitosis (Cox, 2001)). Penggunaan
senyawa oryzalin dengan konsentrasi
tertentu telah banyak dilakukan untuk
mendapatkan tanaman tetrtaploid, seperti
pada pisang (Van Duren et al., 1996),
bawang merah (Suminah et al., 2002;
Grzebelus and Adamus, 2004), yacon
(Viehmannova et al., 2009), dan lain-lain.
Metode Penelitian
Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian telah dilaksanakan dari
bulan Februari sampai dengan Agustus
2012, bertempat di Laboratorium Biak
Jaringan dan Sel Tumbuhan, Bidang
Botani, Pusat Penelitian Biologi, Lembaga
Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI),
Cibinong Science Centre (CSC), Bogor.
Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan dalam
penelitian ini adalah Laminar Air Flow
Cabinet (LAFC), microwave, Partec
CyFlow®, autoklaf gas, botol kultur, alat
diseksi (pinset, scalpel), petri dish,
erlenmayer, shaker, gelas ukur,
handsprayer, lampu Bunsen, timbangan
digital, timbangan analitik, hot plate
magenetic stirrer, pH meter, mikro pipet,
rak kultur, mikroskop. Bahan eksplan
diambil dari inokulum biak kentang hitam
aksesi “Sangian” yang berumur 4 minggu
koleksi Laboratorium Biak Jaringan dan
Sel Tumbuhan, LIPI, Cibinong. Bahan-
bahan yang digunakan adalah media MS
sebagai media dasar, aquades, alkohol
70%, larutan teepol, NaOH, sitokinin
(BA, TDZ), auksin (NAA), gelrite,
senyawa oryzalin 1,5, 3, 6, dan 15 µM.
Metode Penelitian
Bahan Tanam
Bahan tanam yang digunakan yaitu,
bagian buku batang yang diambil dari
tunas kentang hitam in vitro aksesi
“Sangian”. Media yang dipakai adalah
media MD cair (tanpa gelrite). Media
merupakan formulasi media MS yang
dimodifikasi dengan komposisi sebagai
berikut (mg/l): NH4NO3 1650, KNO3
1900, CaCl2.2H2O 440, MgSO4.7H2O
370, KH2PO4 170, hara mikro, Fe-
NaEDTA 37, Vit.MS (Glycine 4,
Pyridoxine 1, Thiamin 0,2, Nicotinic Acid
0,5), Myo-Inositol, sukrosa 30.000, BA 5,
NAA 0,1, TDZ 0,01 mg/l 1 (Leksonowati
dan Witjaksono, 2011).
Rancangan Percobaan
Penelitian ini menggunakan metode
eksperimental dengan Rancangan Acak
Kelompok (RAK) pola faktorial dengan
dua factor, yaitu, konsentrasi oryzalin dan
waktu perendaman. Konsentrasi oryzalin
yang diberikan adalah 0, 3, 6, dan 15 µM,
dengan lama waktu perendaman 8 dan 24
jam.
Pelaksanaan Percobaan
Sebelum memulai percobaan,
dilakukan subkultur biak kentang hitam
aksesi “Sangian” koleksi laboratorium
untuk bahan tanam perlakuan. Dibuat
media MD cair (tanpa gelrite) sesuai
kebutuhan, setelah di autoklaf media
dimasukkan ke dalam 12 botol erlenmyer
(dalam LAFC) yang masing-masing berisi
3
75 ml media dan diberi perlakuan
oryzalin. Kemudian, batang kentang hitam
yang dibuang bagian daunnya direndam
dalam erlenmayer masing-masing
perlakuan oryzalin dan disimpan dalam
shaker sesuai perlakuan waktu. Buku
batang yang telah diberi perlakuan
dipotong-potong dengan ukuran 1-1,5 cm
dan ditanam dalam media B atau MS0
dengan jumlah inokulum masing-masing 5
tunas tiap botol, dibuat 6 ulangan tiap
perlakuan. Biak dipelihara di dalam ruang
kultur dengan suhu 27o C, intensitas
cahaya sekitar 261-352 lux selama 16 jam
per hari. Setelah tunas berumur 6 minggu
diambil bagian daunnya untuk analisis
ploidi menggunakan flowcytometer.
Pengamatan pertumbuhan biak inokulum
dilakukan pada minggu keenam setelah
tanam dengan peubah survival hidup,
tinggi tunas, jumlah buku, dan jumlah
daun.
Analisis Menggunakan Flowcytometer
Hasil analisis flowcytometer dapat
dilihat pada layar komputer dengan
menampilkan bentuk histogram. Menurut
Thao (2002), penggunaan flowcytometer
dalam menganalisis tingkat ploidi suatu
tanaman telah terbukti lebih akurat dan
cepat daripada metode konvensional,
seperti penghitungan kromosom atau
pengukuran stomata. Analisis sitologi
dilakukan dengan mengambil bagian daun
dari nomor yang diduga ploidinya berubah
dan dibandingkan dengan kontrol.
Analisis sitologi diamati menggunakan
teknik flowcytometer dengan alat Partec
CyFlow® (Partec, 2010) untuk melihat
perubahan kromosom inokulum. Alat dan
bahan yang dibutuhkan dalam reparasi
sampel yang akan dianalisis adalah petri
dish kecil, pipet, silet, saringan, tube kecil,
rak tube, alat flowcytometer, daun yang
akan diamati ploidinya, cairan Staining
Solution, dan Nuclei Extraction Buffer.
Langkah kerja yang dilakukan yaitu, daun
dipotong ukuran ½ x ½ cm, simpan dalam
cawan petri kecil, beri 250 µM buffer,
kemudian cacah hingga halus, saring dan
masukkan dalam tube, tambahkan 2 ml
Staining Solution, lalu diamkan selama ±
30-60 menit di tempat gelap, kemudian
tube dimasukkan ke dalam alat
flowcytometer selama ± 5 menit. Hasilnya
akan ditampilkan dalam layar komputer
melalui software flomax.
Analisis Data
Data yang terkumpul dianalisis
dengan Analysis of Variance (ANOVA)
dan pengolahan data secara statistik
dilakukan dengan menggunakan uji F
pada taraf α=5% menggunakan program
SAS system 9.0. Jika hasil menunjukkan
perbedaan yata dilanjutkan dengan uji
Duncan.
Hasil Dan Pembahasan
Pertumbuhan Inokulum
Pada setiap perlakuan terdapat
kompetisi survival hidup inokulum yang
berbeda-beda. Secara umum, perlakuan
kombinasi antara beberapa konsentrasi
oryzalin dengan waktu perendaman
menunjukkan pengaruh yang nyata. Saat
minggu pertama pengamatan, semua
inokulum yang ditanam dalam media
regenerasi (media B) 100 % hidup, lalu
pada minggu kedua mulai muncul sedikit
warna coklat kehitaman di bagian
potongan tangkai daun dan membentuk
struktur seperti kalus. Saat 6 MST, rata-
rata persentase viabilitas hidup kontrol
adalah 100 %, dalam waktu perendaman 8
jam konsentrasi 3 µM rata-rata yang hidup
sebanyak 80 %, konsentrasi 6 µM
sebanyak 52 % dan konsentrasi 15 µM
sebanyak 20 %. Sedangkan, waktu
perendaman 24 jam pada konsentrasi 3
µM rata-rata persentase yang hidup
sebanyak 47 %, konsentrasi 6 µM 40 %,
dan konsentrasi 15 µM 20 %. Hasil
tersebut menjelaskan bahwa semakin
tinggi konsentrasi oryzalin dan semakin
lama waktu perendaman maka semakin
4
menurun survival hidup inokulum
8
24
a b c d
Gambar 1. Pertumbuhan tanaman kentang hitam aksesi
“Sangian” dengan konsentrasi oryzalin
kontrol (a), 3 µM (b), 6 µM (c), dan 15 µM
(d), dengan waktu perendaman 8 jam dan
24 jam dalam media regenerasi pada 6
MST.
(Gambar 1).
Saat minggu pertama, inokulum yang
dipotong bagian tangkai daunnya
membentuk struktur seperti kalus
berwarna coklat, lalu muncul tunas yang
tumbuh menjadi planlet. Rata-rata tinggi
tanaman saat 6 MST pada kontrol sebesar
2,37 cm. Dalam waktu perendaman 8 jam
rata-rata tinggi tanaman tidak berbeda
nyata dalam perlakuan oryzalin, nilai rata-
rata terendah terdapat pada konsentrasi
oryzalin 15 µM sebesar 0,88 cm. Pada
waktu perendaman 24 jam perlakuan
oryzalin tidak terlalu berpengaruh nyata
terhadap tinggi tanaman. Kombinasi
perlakuan konsentrasi oryzalin dan
lamanya waktu perendaman juga tidak
berbeda nyata terhadap rata-rata jumlah
buku dan tunas. Rata-rata jumlah buku
yang dihasilkan dari semua perlakuan
adalah 5 buku dengan 2 jumlah tunas.
Jumlah Ploidi
Inokulum ruas buku yang telah
tumbuh menjadi tanaman kentang hitam
in vitro (umur 6 minggu) kemudian
dianalisis menggunakan alat
flowcytometer. Bagian dari tanaman yang
 diambil untuk dianalisis adalah daun Ramulu et al., (1991)
dengan sampel acak dari tiap perlakuan. mengemukakan bahwa senyawa oryzalin
Setelah dianalisis ternyata hasilnya dapat menginduksi tingkat ploidi
menunjukkan terdapat peningkatan ploidi kromosom dan memperluas variasi
tanaman kentang hitam aksesi “Sangian” genetik tanaman. Normalnya, ketika sel
pada perlakuan konsentrasi oryzalin 3, 6, membelah, molekul protein yang disebut
dan 15 µM dengan waktu perendaman 8 tubulin akan berhubungan satu sama lain
dan 24 jam. membentuk mirkotubul dengan serabut
yang panjang, hal tersebut terjadi secara
Tabel. Hasil analisis ploidi kentang hitam aksesi terus-menerus selama pembelahan sel.
“Sangian” menggunakan flowcytometer. Namun, jika saat proses pembelahan sel
diberikan oryzalin, maka senyawa tersebut
Perlakuan Hasil Analisis Flowcytometer
Tabel 6. Hasil analisis
JTA ploidi kentang hitam aksesi akan menghalangi dan mengganggu kerja
WP KO“Sangian” menggunakan
2x 2x+4xflowcytometer.
3x+4x 4x tubulin sehingga serabut-serabut
mikrotubul tidak akan terbentuk.
Kontrol 8 8 - - -
Secara keseluruhan, tanaman kentang
8 3 18 9 5 - 4 hitam aksesi “Sangian” yang terbukti
6 21 12 6 1 3 memiliki kromosom tetraploid atau
mixoploid penampakan morfologinya
15 3 - 3 - -
berbeda dengan tanaman kentang hitam
24 3 17 13 2 - 2 normal yang memiliki jumlah kromosom
6 8 3 2 - 3 diploid. Pangkal daun melebar dengan
pertulangan daun yang tidak jelas. Bentuk
15 6 - 5 - 1
daun bergelombang, tebal, dan warna
Total Ploidi 81 45 23 1 13 hijau yang lebih tua, sebagian memiliki
Ket: WP=waktu perendaman; KO=konsentrasi oryzalin; daun yang berlekatan dalam satu tangkai.
JTA=jumlah tanaman yang dianalisis; 2x=diploid; Pertumbuhannya pun tidak normal, seperti
2x+4x=mixoploid;3x+4x=mixoploid;4x=tetraploid dari satu tunas aksilar bisa muncul dua
atau tiga tunas baru lagi yang batangnya
Berdasarkan Tabel di atas, dapat menempel satu sama lain. Ada pula dari
dilihat bahwa pengaruh pemberian satu inokulum hanya tumbuh satu tunas
beberapa konsentrasi oryzalin dalam dan dari tunas tersebut tumbuh dua atau
menginduksi ploidi kentang hitam aksesi tiga tunas lagi dengan ploidi berbeda.
“Sangian” menghasilkan peningkatan Saat pengamatan terdapat beberapa
ploidi dari diploid (2n=2x) menjadi inokulum yang hidup muncul dua atau
mixoploid diploid-tetraploid (2n=2x+4x), tiga tunas yang dari penampakan
mixoploid triploid-tetraploid (2n=3x+4x), morfologinya terlihat berbeda, seperti
dan tetraploid (2n=4x). Secara tinggi tunas, ukuran daun, bentuk daun,
keseluruhan, hasil analisis menunjukkan dan warna daun. Contohnya, seperti pada
bahwa hampir seluruh tanaman yang inokulum perlakuan oryzalin dengan
diberi perlakuan oryzalin memiliki jumlah konsentrasi 3 µM tumbuh tiga tunas pada
kromosom tetraploid dan mixoploid. tunas aksilarnya, dua diantaranya
Menurut Yamets and Blume (2008), berpenampakan tidak normal,
penggunaan oryzalin pada makhluk hidup Kemungkinan sel yang tumbuh pada
khususnya pada tanaman dapat ketiga tunas tersebut bervariasi jumlah
menghalangi pembentukan benang spindel kromosomnya. Setelah dilakukan analisis
pada saat proses mitosis sehingga sel-sel menggunakan flowcytometer ternyata
baru yang terbentuk jumlah kromosomnya hasilnya adalah ketiga tunas tersebut
akan berlipat ganda. memang memiliki jumlah kromosom atau

5
ploidi yang berbeda, tunas pertama
tetraploid (2n=4x), tunas kedua mixoploid
(2n=2x+4x), dan tunas ketiga diploid
(2n=2x). Adanya perbedaan ploidi pada
beberapa tunas aksilar dikarenakan pada
bagian tersebut terdapat sel meristem yang
sel-selnya dapat bermitosis terus-menerus.
Tanaman memiliki jumlah sel yang sangat
banyak, kemungkinan sel yang terkena
oryzalin saat perendaman memang besar,
namun karena sifat sel meristem yang
terus membelah bisa jadi tunas yang
tumbuh dari inokulum tersebut memang
tunas yang terpapar oryzalin atau tunas
yang tidak terkena oryzalin. Selain itu,
kemungkinan dikarenakan individu yang
diamati masih merupakan generasi atau
hasil subkultur pertama dari perlakuan,
sehingga pertumbuhan morfologi dan
ploidinya masih belum terlihat signifikan
dan stabil. Selain itu juga dikarenakan
adanya variasi genetik di setiap individu.
Diperlukan 3 sampai 5 kali subkultur
ulang agar dapat diketahui plodi tanaman
yang stabil.
Hal ini sesuai dengan penelitian
Suminah et al., (2002) yang menyebutkan
bahwa telah terjadi variasi bentuk, ukuran,
dan jumlah kromosom pada Allium
ascalonicum L. akibat pemberian kolkisin
1 %. Kolkisin dan oryzalin merupakan
senyawa kimia yang dapat menghalangi
pembentukan benang spindle pada waktu
mitosis sehingga sel-sel baru yang
terbentuk jumlah kromosomnya berlipat
ganda (Yamets and Blume, 2008).
Namun, dalam beberapa penelitian
menyebutkan bahwa penggunaan oryzalin
sebagai senyawa penggandaan kromosom
pada sebagian jenis tanaman efektifitasnya
lebih baik. Seperti yang dijelaskan oleh
Ramulu (1991) bahwa oryzalin terbukti
6
lebih efisien sebagai senyawa pengganda
kromosom daripada APM (amiprophos-
methyl) dan kolkisin yang memiliki
kandungan racun lebih besar. Hal tersebut
diperkuat oleh Pintos (2007), yang
menyebutkan bahwa penggunaan oryzalin
untuk menghasilkan double haploid pada
Quercus suber L. melalui kultur anter
hasilnya lebih efektif dalam penggandaan
kromosom daripada APM dan kolkisin.
Histogram Hasil Analisis
Flowcytometer
Dari Gambar 2-a, hasil analisis
flowcytometer pada tanaman kentang
hitam kontrol menunjukkan kromosom
diploid (2n=2x) yang berarti memiliki dua
set kromosom. Hal tersebut sesuai dengan
Prematilake (2005) yang menyebutkan
bahwa tanaman kentang hitam memiliki
kromosom dengan jumlah set diploid
(2n=2x=64). Pada umumnya, makhluk
hidup memiliki sel tubuh (sel somatik)
normal dengan inti sel memiliki dua set
kromosom. Namun, sejumlah organisme,
banyak diantaranya tumbuhan, pada tahap
yang sama memiliki jumlah set kromosom
lebih dari dua, individu dengan keadaan
tersebut dinamakan individu poliploid,
contohnya kentang (tetraploid, 2n=4x),
gandum roti (heksaploid, 2n=6x), dan tebu
(oktaploid, 2n=8x). Penampakan
morfologi tanaman kentang hitam aksesi
“Sangian” tanpa perlakuan tumbuh normal
dengan warna hijau, dua daun yang
berhadapan pada tiap buku batangnya
(folia opposita), daun berbentuk bulat
telur (ovatus), ujung dan pangkal daun
tumpul (obtusus) dengan tepi bergerigi
(serratus).
 File: KB 6 Date: 24-09-2012 Time: 14:50:32 Particles: 1085 Acq.-Time: 67 s partec CyFlow

100

a
2n=2x
80

a1 60
a1

counts
40

20

0
0 200 400 600 800 1000
FL1 -

File: M8 3 N50 Date: 20-09-2012 Time: 15:19:52 Particles: 3658 Acq.-Time: 232 s partec CyFlow

100

b
2n=4x
80

a1 60
a1
counts

40

20

0
0 200 400 600 800 1000
FL1 -

File: M24 15 180 Date: 24-09-2012 Time: 14:54:41 Particles: 3986 Acq.-Time: 146 s partec CyFlow

100

c
2n=2x+4x
80

a1 60
a1
counts

40

20

0
0 200 400 600 800 1000
FL1 -

File: M24 3 139 Date: 21-09-2012 Time: 14:50:52 Particles: 7192 Acq.-Time: 282 s partec CyFlow

100

d 2n=3x+4x
80

a1 60
a1
counts

40

20

0
0 200 400 600 800 1000
FL1 -

Gambar 2. Morfologi tunas kentang hitam aksesi “Sangian” dan tingkat ploidinya sesuai analisis
flowcytometer. a) bentuk tunas dengan ploidi 2n=2x; b) bentuk tunas dengan ploidi
2n=4x; c) bentuk tunas dengan ploidi 2n=2x+4x; d) bentuk tunas dengan ploidi
2n=3x+4x. Diploid pada channel 200.

7
 a1
Pada Gambar 2-b, dapat dilihat
morfologi tanaman tetraploid (2n=4x)
yang berbeda dari kontrol, yaitu bentuk
daun yang bergelombang, aneh dan lebih
tebal dengan warna hijau yang lebih tua.
Hal serupa pun dikemukakan oleh
Kermani et al., (2003) yang menyatakan
bahwa penggandaan kromosom pada
tanaman mawar ditandai dengan adanya
peningkatan ketebalan daun dengan warna
hijau yang lebih gelap. Hasil penelitian
Lehrer et al., (2008) juga menunjukkan
beberapa tanaman tetraploid Berberis
thunbergii var. Atropurpurea memiliki
struktur dan bentuk daun yang abnormal
setelah diinduksi menggunakan oryzalin
dan kolkisin. Hasil analisis flowcytometer
tanaman tetraploid menunjukkan peak
392.35 dengan koefisiean keragaman 5.77
%. Menurut Suryo (2007) dan Crowder
(2006) biasanya tanaman poliploid
memiliki penampakan morfologi seperti
bagian batang, daun, dan akar yang lebih
besar daripada tanaman diploid, hal itu
dikarenakan jumlah kromosom yang lebih
banyak.
Tetraploid adalah salah satu tipe
kromosom euploidi yang memiliki empat
set kromosom homolog. Tetraploid pada
tumbuhan dibedakan menjadi dua macam,
yaitu tumbuhan autotetraploid dan
allotetraploid. Autotetraploid ialah
tumbuhan tetraploid yang diperoleh
melalui penggandaan jumlah
kromosomnya dengan cara memberi
perlakuan dengan menggunakan senyawa
tertentu (seperti oryzalin dan kolkisin).
Kolkisin dan oryzalin memiliki
mekanisme kerja yang sama dalam
mencegah terbentuknya benang-benang
spindel. Menurut Bhattacharyya (2008),
diketahui bahwa mekanisme kerja kolkisin
adalah mencegah terbentuknya benang-
benang mikrotubuli dari gelendong inti
(benang-benang spindel), sehingga
pemisahan kromosom yang menandai
perpindahan dari tahap metafase ke
anafase tidak berlangsung dan
menyebabkan penggandaan kromosom
8
a1
tanpa penggandaan dinding sel. Dengan
demikian, tumbuhan autotetraploid adalah
sama dengan tumbuhan diploid asalnya,
hanya saja jumlah kromosomnya
dilipatgandakan. Sedangkan, allotetraploid
merupakan tumbuhan tetraploid yang
diperoleh melalui persilangan antar
spesies atau genus. Hibrida F1 yang
diperoleh disebut interspesifik hibrid yang
sangat steril, artinya tidak menghasilkan
buah dan biji. Sterilisasi ini disebabkan
karena hibrid F1 memiliki kromosom-
kromosom yang berlainan, yang berasal
dari kedua induknya (parental) yang
berbeda. Akan tetapi, dengan
melipatgandakan jumlah kromosomnya,
maka hibrid F1 tersebut menjadi fertil
(subur) dan tumbuhan allotetraploid
merupakan spesies baru yang sebelumnya
tidak dikenal (Suryo,2007).
Berdasarkan Gambar 2-c, dapat
dilihat histogram hasil analisis
flowcytometer menunjukkan tanaman
kentang hitam dengan jumlah kromosom
mixoploid diploid-tetraploid (2n=2x+4x).
Hasil analisis menunjukkan peak 217.14
dan 422,19 dengan koefisien keragaman
5.42 % dan 4.78 %. Umumnya, dari hasil
pengamatan tanaman kentang hitam
dengan kromosom mixoploid memiliki
struktur morfologi yang lebih kecil
daripada tanaman kontrol. Daunnya tebal
dan bergelombang dengan percabangan
tidak normal. Hasil penelitian
Wongpiyasatid et al., (2003) menyebutkan
bahwa induksi poliploidi pada tanaman
Gossypium arboreum masih terdiri dari
tanaman dengan jumlah yang kromosom
berbeda. Menurut Kehr (2001), pemberian
kolkisin atau oryzalin pada tanaman
mengakibatkan banyaknya sel yang
bersifat chimera. Chimera adalah keadaan
sel yang memiliki dua atau lebih susunan
genetiknya, hal tersebut dapat terjadi
karena mutasi gen atau kromosom. Jumlah
kromosom mixoploid triploid-tetraploid
(2n=3x+4x) (Gambar 2-d) hanya
ditemukan pada satu tunas yang dianalisis
saja yaitu, pada kombinasi konsentrasi
oryzalin 6 µM dengan waktu perendaman
8 jam. Hasil analisis menunjukkan peak
299.57 dan 455.48 dengan koefisien
keragaman 6.91 % dan 3.88 %. Jika
dilihat dari morfologi tunasnya, tanaman
dengan ploidi mixoploid triploid-
tetraploid memiliki penampakan tunas
yang sama dengan tanaman mixoploid
diploid-tetraploid, yang membedakan
hanya jumlah kromosomnya.
Simpulan Dan Saran
Simpulan
Penggunaan inokulum buku batang
dari pertumbuhan tunas kentang hitam
aksesi “Sangian” untuk induksi poliploid
efektif pada kombinasi perlakuan oryzalin
dan waktu perendaman yang diuji, yaitu
konsentrasi oryzalin 3, 6, dan 15 µM
dengan waktu perendaman 8 dan 24 jam.
Persentase tunas tetraploid (2n=4x) yang
muncul sebesar 16.5 % dan tunas
mixoploid (2n=2x+4x; 3x+4x) sebesar
28.4 %.
Saran
Tunas tetraploid dan mixoploid perlu
diperbanyak dan diaklimatisasi serta
ditumbuhkan di lapang, sehingga
pertumbuhan dan ukuran umbi dapat
diketahui.
Ucapan Terima Kasih
Terima kasih kepada seluruh staf
peneliti dan teknisi Laboratorium Biak
Jaringan & Sel Tumbuhan dan
Laboratorium Genetika Tanaman yang
telah banyak membantu dalam
menyelesaikan penelitian ini.
Daftar Pustaka
Bhattacharyya, B., Panda, D., Gupta, S.,
Banerjee, M. 2008. Anti-Mitotic
Activity of Colchicine and The
Structural Basis for Its Interaction with
9
Tubulin. Med Res Rev Vol. 28 (1).
Hal: 155-83.
Cox, C. 2001. Oryzalin: Herbicide
Factsheet. Journal of Pesticide Reform
Vol 1. No. 4.Hal: 16.
Grzebelus, E. and A. Adamus. 2004.
Effect of Antimitotic Agents on
Development and Genome Doubling of
Gynogenic Onion (Allium cepa L.)
Embryos. Plant Sci. 167(3). Hal: 569-
574.
Jansen, P.C.M. 1996. Plectranthus
rotundifolius (Poiret) Sprengel. In:
Flach M & Rumawas F (eds.) Plant
Yielding non-seed Carbohydrates.
PROSEA 9: 156-159.
Kehr. A. 2001. Tetraploidy Convension:
An Easy and Effective Method od
Colchicine Treatment.
http://members.tripod.com/h_syiacus/te
traploidy.
Kermani, M.J., V. Sarasan, A.V. Roberts,
K. Yokoya, J. Wentworth and V.K.
Sieber. 2003. Oryzalin-Induced
Chromosome Doubling In Rosa and Its
Effect On Plant Morphology and
Pollen Viability. Theoretical and
Applied Genetics Vol. 107 No. 7 Hal:
1195-1200.
Lehrer, J.M., Mark, H.B., Jessica, D.L.
2008. Induction of Tetraploidy In
Meristematically Active Seeds of
Japanese Barberry (Berberis
thunbergii var. atropurpurea) Through
Exposure to Colchicine and Oryzalin.
Journal Scientia Horticulturae 119: 67-
71.
Leksonowati, A. dan Witjaksono. 2009a.
Pengaruh Perlakuan Oryzalin
Terhadap Kentang Hitam (Coleus
tuberosus Benth.) In Vitro. Laporan
Teknik, Pusat Penelitian Biologi-LIPI.
Leksonowati, A. dan Witjaksono. 2009b.
Aklimatisasi Bibit Kentang Hitam
(Coleus tuberosus Benth.) Hasil
Induksi Mutasi dengan Iradiasi Serta
Morfologinya di Lapangan. Laporan
Teknik, Pusat Penelitian Biologi-LIPI.
Leksonowati, A dan Witjaksono. 2011.
Morfogenesis pada Daun, Tangkai
Daun, dan Ruas Batang Kentang
Hitam (Solenostemon rotundifolius
(Poir) J. K. Morton) Secara In Vitro.
Berkala Penelitian Hayati Vol. 16 No.
2 Hal: 161-167. Pusat Penelitian
Biologi-LIPI.
Nkansah, G.O., 2004. Solenostemon
rotundifolius (Poir.) J.K.Morton In:
Grubben, G.J.H. & Denton, O.A.
(Editors). PROTA 2:
Vegetables/Légumes. PROTA,
Wageningen, Netherlands.
PARTEC. 2010. CyFlow Space
Instrument Operating Manual. Partec
GmbH Germany. 30 hal.
Pintos, B., Manzanera, J.A., Bueno, M.A.
2007. Antimitotic Agents Increase the
Production of Doubled-Haploid
Embryos from Cork Anther Culture. J
Plant Physiol 164: 1595-604.
Prematilake D. P. 2005. Inducing Genetic
Variation of Innala (Solanostemon
rotundifolius) Via In Vitro Callus
Culture. J Natn Sci Foundation Sri
Lanka 33. Hal:123-131.
Ramulu, S.K., Verhoeven H.A., Dijkhuis,
P. 1991. Mitotic Blocking,
Microtnucleation, and Chromosome
Doubling by Oryzalin, Amiprophos-
Methyl, and Colchicine In Potato.
Protoplasma 160: 65-73.
Suminah, Sutarno, Ahmad Dwi Setyawan.
2002. Induksi Poliploidi Bawang
Merah (Allium ascalonicum L.) dengan
Pemberian Kolkisin. Biodiversitas Vol.
3, No. 1. Hal: 174-180.
10
Suryo. 2007. Sitogenetika. Yogyakarta:
Gadjah Mada University Press. Hal:
217-220.
Thao, N.T.P, Kenji U., Ikuo M., Yukio,
O., and Hiroshi, O. 2003. Induction of
Tetraploids In Ornamental Alocasia
Through Colchicine and Oryzalin
Treatments. Laboratory of Horticultural
Science, Faculty of Agriculture,
Kyushu University, Japan. Plant Cell,
Tissue and Organ Culture Vol.72 No.1.
Cox, C. 2001. Oryzalin: Herbicide
Factsheet. Journal of Pesticide Reform
Vol 1. No. 4.Hal: 16.
Van Duren, M., R. Morpurgo, J. Doleze,
and R. Afza. 1996. Induction and
Verification of Autotetraploids in
Diploid Banana (Musa acuminata) by
In Vitro Techniques. Euphytica 88.
Hal: 25-34.
Viehmannova, I., E.F. Cusimamani, M.
Bechyne, M. Vyvadilova, and M.
Greplova. 2009. In Vitro Induction of
Polyploidy in Yacon (Smallanthus
sonchifolius). Plant Cell, Tissue and
Organ Culture 97(1). Hal: 21-25.
Wongpiyasatid A., Praparat, H., and
Ngamchuen, R. 2003. Preliminary Test
of Polyploidy Induction in Cotton
(Gossypium arboreum) Using
Colchicine Treatment. Kasetsart
University, Bangkok, Thailand.
Yemets, A. I. and Blume, Y. B. 2008.
Progress in Plant Polyploidization
Based on Antimicrotubular Drugs. The
Open Horticulture Journal Vol. 1, 15-
20.